CONTAGEM DE CÉLULAS E PLAQUEAMENTO (SEEDING)

Procedimento para contagem de células:

1. Adicionar 20 µL de células e 20 µl de azul de trypan em um microtubo.
Homogeneizar.
2. Adicionar cerca de 30 µl na câmara de Neubauer e realizar a contagem em
microscópio óptico.
3. A contagem deve ser realizada considerando os quadrados da diagonal. Soma-se a
quantidade células dos quatro quadrantes.
4. Do valor contado, deve-se multiplicar por 2 x 10 4 (para células) ou por 1 x 105 (para
parasitos).
5. Realizar o cálculo para plaqueamento de acordo com a quantidade de células por
poço que será utilizada. Considerar 200 µl por poço.

Plaqueamento
1. Antes de proceder ao plaqueamento, é necessário que calcular a quantidade célula
para atingir a concentração desejada. Ex.:
a. O experimento exige plaqueamento à concentração de 3 x 10 4 células/poço,
em 7 poços de 200 µl. A contagem de células na câmara de Neubauer foi de
99 células. Assim:
99 x (2 x 104) = 198 x 104 células por ml
198 x 104 ------------- 1000 µl
3 x 104 --------------- X
X = 15,15 µl x 7 (poços) = 106 µl de células

b. Serão 7 poços de 200 µl, totalizando um volume de 1400 µl. Assim, para
atingir a concentração desejada, será necessário:

1294 µl de meio completo e 106 µl de células

2. Deve-se adicionar os volumes de meio completo e células em um tubo Falcon de 15

ml (ou maior, se necessário).
3. Prossegue-se, então, com a adição de 200 µl do preparado em cada poço.