Resumo:

A hemólise valvular e a trombose são complicações comuns associadas às válvulas

cardíacas estenóticas (estreita). Este estudo tem como objetivo determinar em que
medida a hemodinâmica induz esses eventos traumáticos. A tensão de cisalhamento
viscoso a jusante de uma válvula bioprotética gravemente calcificada foi avaliada
através de medições in vitro de velocimetria de imagem de partículas 2D. A resposta
da membrana das células sanguíneas às tensões medidas foi quantificada usando
simulações computacionais de imersão em 3D. Observou-se que o nível de tensão de
cisalhamento na camada limite do fluxo de jato formado a jusante do orifício da
válvula atingiu um máximo de 1000-1700 dyn / cm2, que estava além dos valores
limiares relatados para a ativação plaquetária e dentro da faixa dos limiares relatados
para danos aos glóbulos vermelhos. Simulações computacionais demonstraram que as
tensões resultantes na superfície da membrana de hemácias provavelmente não
causariam rutura instantânea, mas provavelmente causariam falha plástica na
membrana. As tensões resultantes na superfície plaquetária também foram calculadas
e o dano potencial foi discutido. Neste artigo, concluiu-se que, embora o trauma
trombótico induzido por cisalhamento seja muito provável nas válvulas cardíacas
estenóticas, a hemólise instantânea é improvável e o dano induzido por cisalhamento
nas hemácias é principalmente sub-hemolítico.

Palavras-chave - Hemólise e trombose valvular, induzida por fluxo, dano às células

sanguíneas, velocimetria de imagem de partículas, método de imersão em 3D.

Introdução:

A hemólise e a trombose são complicações comuns das próteses valvulares aórticas

cardíacas que resultam em morbimortalidade significativa. Essas condições também
foram relatadas na doença valvular aórtica nativa.

Ao contrário das válvulas protéticas, em que essas complicações podem ser iniciadas
pela exposição da corrente sanguínea a superfícies estranhas, o mecanismo
predominante de ativação plaquetária e danos aos glóbulos vermelhos (RBC) nas
válvulas estenóticas nativas pode ser mediado por altas forças de cisalhamento
produzidas pelo fluxo.

As válvulas estenóticas geralmente têm um orifício muito pequeno, através do qual

um forte fluxo de jato passa durante a sístole. A velocidade do jato é tipicamente
muito maior que o fluxo sanguíneo fisiológico através de válvulas aórticas não
calcificadas. O aumento local na velocidade do fluxo, aumenta significativamente o
gradiente de velocidade e, por sua vez, o nível de tensão de cisalhamento dentro do
campo de fluxo. Até que ponto as forças hidrodinâmicas de cisalhamento podem
danificar os glóbulos vermelhos e ativar plaquetas é de grande importância clínica, pois
determina a necessidade potencial de cuidados preventivos, como tratamento
antiplaquetário / anticoagulante em pacientes com estenose aórtica nativa grave.

Foi demonstrado que a verdadeira força de cisalhamento experimentada por células

sanguíneas individuais é determinada principalmente por tensão de cisalhamento
viscosa em vez de Reynolds (no caso de geração de turbulência) . As elevadas tensões
de cisalhamento viscoso (SSs) experimentadas pelas membranas das células
sanguíneas resultam em eventos traumáticos. Os SSs podem ser medidos in vitro via
velocimetria por imagem de partículas (PIV), que se tornou uma técnica amplamente
utilizada na avaliação dinâmica de fluidos de próteses nas últimas décadas. A principal
vantagem desse método, em comparação com outras técnicas, como a anemometria
com Doppler a laser, é a medição da velocidade em campo inteiro de um plano
selecionado com resolução espacial adequada. A maioria das investigações sobre o PIV
foi realizada em válvulas mecânicas.

Embora essa técnica tenha sido aplicada a válvulas simuladas calcificadas, a avaliação
do campo de fluxo de uma bioprótese calcificada real explantada (fora do corpo) de
um paciente, conforme examinado neste estudo, ainda não foi abordada.

O dano das células sanguíneas induzido pelo fluxo é um processo de múltiplas escalas
na natureza. As forças viscosas fluidas na macroescala transmitem forças anormais na
membrana celular na microescala. No caso das hemácias, um aumento nas tensões
resultantes além dos limiares da membrana pode causar rutura imediata (lise
instantânea) ou deformação permanente e subsequentemente fragmentação celular.

Da mesma forma, um aumento na deformação induzida por cisalhamento da

membrana plaquetária além de um limiar suportável pode levar a alterações
morfológicas e consequentemente ativação. Mais especificamente, a reorganização
induzida por cisalhamento e o alongamento da componente do citoesqueleto, bem
como a redistribuição e agrupamento de moléculas recetoras na superfície
plaquetária, promovem a ativação plaquetária.

Para examinar os efeitos da hemodinâmica na membrana das células sanguíneas, a

simulação computacional da deformação das células em suspensão no fluxo de
cisalhamento, por meio da modelação de interação fluido-sólido, pode ser
efetivamente empregada.

Variações espaço-temporais detalhadas de diferentes parâmetros importantes da

membrana, como energia de deformação e tensões principais, que são
experimentalmente difíceis de capturar, podem ser obtidas por modelação numérica.

As simulações computacionais da dinâmica das células sanguíneas através de métodos

de imersão nos limites nos últimos anos reproduziram com sucesso essa dinâmica. Eles
exploraram ainda mais os efeitos de diferentes parâmetros, por exemplo,
deformabilidade celular e interação célula-célula, e subsequentemente descobriram
comportamentos mais complexos como vacilar / respirar e balançar / pisar em tanques
de glóbulos vermelhos, etc. O foco desses estudos tem sido predominantemente a
deformação e dinâmica celular. No entanto, os modelos computacionais empregados
podem ser utilizados para calcular as tensões na superfície celular, a fim de analisar o
potencial de fenómenos traumáticos induzidos por cisalhamento.

Este estudo tem como objetivo realizar uma análise do dano das células sanguíneas
induzido por fluxo nas válvulas aórticas estenóticas através de medições in vitro do
ambiente de força de cisalhamento da válvula na macroescala e, posteriormente,
simulações em computador da mecânica correspondente à resposta da membrana das
células sanguíneas na microescala.

Como tal, é realizada uma avaliação abrangente da tensão de cisalhamento viscoso a

jusante de uma bioprótese severamente calcificada explantada de um paciente usando
medições 2D de PIV em alta resolução. As respostas mecânicas de um RBC e uma
plaqueta às SS medidas são então determinadas pelo cálculo das tensões resultantes
da membrana por meio de simulações computacionais em limites imersos em 3D de
alta fidelidade. Os estudos em múltiplas escalas surgiram recentemente no campo de
danos às células sanguíneas induzidas por cisalhamento.

Exemplos: a simulação baseada em partículas da alteração morfológica plaquetária

durante a ativação induzida pelo cisalhamento precoce, a simulação dinâmica da
partícula da hemólise em válvulas cardíacas mecânicas, a simulação da trombogénese
via acoplamento de um modelo de fluxo contínuo com um modelo estocástico de Potts
celular discreto e a modelação da dinâmica de partículas dissipativas da deformação
de RBC induzida por fluxo.

O presente estudo tem como objetivo complementar essas investigações, fornecendo

novas ideias sobre o ambiente de força mecânica das válvulas cardíacas estenóticas e
os efeitos traumáticos resultantes nas células sanguíneas, integrando medidas in vitro
e microescala em escala macro de simulações computacionais.

Material e Métodos:

Duplicador de Pulso

Uma bioprótese PERIMOUNT degenerada de 21 mm de Carpentier-Edwards

explantada de um paciente com estenose aórtica grave foi obtida na Edwards
Lifesciences, Inc. A calcificação estava presente em todos os folhetos com uma lágrima
muito pequena, menor que 0,5 mm, em um dos folhetos (Figs. 1a, 1b). A bioprótese foi
testada à temperatura ambiente em um sistema duplicador de pulso personalizado
(ViVitro Systems, Inc., Victoria, Canadá). Uma representação esquemática do modelo
de fluxo pulsátil é mostrada na Fig. 1c. A válvula é posicionada assimetricamente em
relação às medições de vazão.

A frequência cardíaca, a pressão arterial e o débito cardíaco foram utilizados como

parâmetros de controlo para o gerador de forma de onda que controla uma servo
bomba. Os parâmetros de entrada correspondem aos padrões ISO 5840 e FDA para o
teste de válvulas cardíacas: frequência cardíaca de 70 batimentos / min, duração
sistólica de 35% do período do ciclo, pressões atriais e aórticas médias de 10 e 100
mmHg e débito cardíaco de 5 L / min. Esses parâmetros foram mantidos constantes ao
longo das medições. Uma solução de glicerina recirculante em solução salina normal
foi usada como fluido analógico no sangue. O índice de refração do fluido foi ajustado
usando iodeto de sódio para corresponder ao da câmara de montagem da válvula e
para minimizar a distorção ótica.

A concentração aproximada de constituinte do fluido foi de 79% de iodeto de sódio,

20% de glicerina e 1% de solução salina normal de volume. O fluido analógico à
temperatura ambiente imitava a viscosidade do sangue a 37 ° C (0,0035 Ns / m2). A
aquisição dos dados foi realizada em 10 ciclos cardíacos consecutivos e o gradiente de
pressão transvalvular, volume regurgitante e área efetiva do orifício foram
determinados.

Velocimetria de Imagem de Partículas

Um sistema convencional de PIV 2D foi usado para obter medições de velocidade

planar a jusante da bioprótese.

A iluminação foi fornecida por um laser Nd: YAG de oscilador duplo (New Wave
Research SOLO II-30 Hz) e os lasers foram sincronizados usando um Sincronizador de
Pulso a Laser (TSI, modelo 610034). Partículas de vidro oco revestidas de prata (8 lm de
diâmetro, TSI, modelo 10089-SLVR) foram usadas para visualizar o fluxo. As imagens
foram gravadas com uma câmera CCD de correlação cruzada de 1600 9 1200 pixels de
resolução (Power View Plus 2MP,TSI, modelo 630057), capaz de capturar pares de
imagens PIV a 32 quadros / s. Uma medição de PIV de múltiplas grades foi empregada
para capturar a magnitude da tensão de cisalhamento dentro da camada limite do jato
da bioprótese estenótica (Fig. 1c). Para o nível 1 da grade, a câmera foi ajustada a uma
lente NIKKOR (50 mm f / 1.8D) e um filtro de interferência de banda estreita que foram
utilizados para reduzir os reflexos. Para capturar estruturas de fluxo detalhadas da
camada de cisalhamento viscoso logo acima da bioprótese, foram colocados anéis de
extensão entre a câmera e a lente (nível da grade 2). A resolução espacial para os
níveis de grade 1 e 2 foram 30,3 e 10,1 lm / pixel, respetivamente. As medições de
bloqueio de fase foram adquiridas acionando o sistema PIV do gerador de pulso que
aciona a bomba de pistão, em 26 instâncias de tempo regularmente espaçadas ao
longo de todo o ciclo cardíaco (860 ms). Todas as imagens foram correlacionadas em
uma grade recursiva de Nyquist usando uma sobreposição de 50% com uma janela de
interrogatório de passagem final de 16 x 16 pixels. O tamanho final do interrogatório
foi selecionado para ter um equilíbrio cuidadoso entre a maior resolução e a relação
sinal / ruído das correlações cruzadas. Os dados foram processados no software
INSIGHT 3GTM. A principal tensão de cisalhamento viscoso (denominada tensão de
cisalhamento a seguir, por simplicidade) foi calculada com base em um terço da
diferença entre as maiores e as menores tensões principais.

Figura 1

Modelo Computacional

O modelo computacional empregado neste trabalho estava dentro da estrutura do

método de fronteira imersa.

O método consistiu em três módulos principais: (i) o modelo para deformação da

membrana de uma célula sanguínea suspensa, que foi implementada usando um
método de elementos finitos (MEF). Dentro deste módulo, as forças resultantes devido
à deformação elástica da membrana foram computadas em uma malha Lagrangiana
triangular 3D que discretizou a superfície da célula. (ii) O modelo de fluido viscoso que
foi implementado através de um solucionador de fluxo de CFD baseado em projeção
de diferenças finitas. Este módulo calculou a velocidade do fluxo em uma grade
euleriana, levando em consideração as forças da membrana interpoladas. As
velocidades de fluxo projetadas nos nós lagrangianos foram então usadas para calcular
a deformação da célula. iii) O acoplamento bidirecional entre a dinâmica do fluxo e a
deformação da membrana, que foi implementada usando o método da fronteira
imersa. Este módulo interpolou as forças da malha Lagrangiana para a grade Euleriana
e as velocidades da grade de fluido para a malha da membrana. A progressão geral do
método de simulação numa etapa temporal envolve: (1) deslocamento dos nós
Lagrangianos pelo fluxo de fluido através da projeção de velocidades do fluido nos nós
da membrana por interpolação, (2) cálculo das forças elásticas induzidas pela
deformação das malha de membrana pela FEM, (3) projeção dessas forças na grade de
fluxo por interpolação e (4) eventualmente solução do domínio do fluido sob o efeito
de tais forças.

Configuração do problema

Como mostrado esquematicamente na Fig. 2, para avaliar o efeito das forças de

cisalhamento medidas experimentalmente em uma célula sanguínea, a célula foi
suspensa em um fluxo linear de cisalhamento entre duas placas paralelas. O domínio
do fluxo era uma caixa retangular periódica nas direções x e z, x sendo a direção do
fluxo, y a direção do gradiente de velocidade e z a direção da vorticidade. Aqui, H = 27
lm e L = 18 lm. A condição antiderrapante foi aplicada nas placas superior e inferior.
181, 180 e 120 pontos de malha foram empregados nas direções x, y e z,
respetivamente. A superfície do RBC e da plaqueta foram discretizadas usando 5120 e
1280 elementos triangulares, respetivamente. A independência das simulações
numéricas de Eulerian / Lagrangian os tamanhos da grade, bem como as dimensões do
canal, foram verificados separadamente.

Modelo para glóbulos e o MEF

O RBC foi modelado como uma cápsula elástica cheia de líquido em forma de repouso
bicôncavo com uma distância de ponta a ponta de 7,8 lm. O meio de suspensão
(plasma) e o citoplasma interior (rico em hemoglobina) foram considerados
incompressíveis e os fluidos newtonianos com viscosidades de 1,2 e 6,0 cP,
respetivamente.

A densidade de ambos os líquidos foi assumida como sendo igual à da água a 37ºC. A
diferença de densidade entre os fluidos interno / externo e os efeitos da gravidade
foram negligenciados, uma vez que nossa estimativa de forças viscosas vs.
flutuabilidade numa RBC sob altas taxas de cisalhamento produziu valores
significativamente maiores para as forças viscosas.

O modelo abrangeu as propriedades essenciais da membrana RBC, tais como,

resistência à deformação por cisalhamento, dilatação da área e flexão. Os dois
primeiros foram modelados usando a função de energia de deformação desenvolvida
por Skalak.
Figura 2

As principais tensões elásticas por unidade de comprimento foram expressas como:

e a tensão máxima de cisalhamento foi calculada a partir de tmax= ½(T2-T1). A

membrana celular foi discretizada usando elementos triangulares planos. No MEF,
assumiu-se que o deslocamento, m, variava linearmente dentro de cada elemento e foi
expresso em termos de funções de forma linear, que foram usadas para determinar o
tensor do gradiente de deformação e, subsequentemente, 1‫ גּ‬e 2‫גּ‬.

A força elástica resultante em cada nó foi então calculada aplicando o principal do

trabalho virtual (fe=……)

A formulação de Helfrich19 foi usada para a densidade da força de flexão na

membrana de RBC como fb=……, onde Eb é o módulo de flexão associado à média
curvatura j, c0 é a curvatura espontânea, jg é a curvatura gaussiana, DLB é o operador
Laplace – Beltrami en é o vetor unitário normal à superfície. Os valores de Eb e c0
foram considerados 7 *10^-12 dyn.cm e -2,09 respetivamente.

A plaqueta foi modelada como um elipsoide quase rígido, com uma distância de ponta
a ponta de 3,6 um e uma espessura de 1,1 um para evitar a sua deformação sob forças
de cisalhamento. Foi empregue uma constante de rigidez à flexão muito grande.
Solucionador de Fluxo e Rastreamento de Membrana

O movimento do fluido na escala de comprimento celular foi modelado pelas equações

de continuidade e de Stokes, como o número de Reynolds definido com base no raio
equivalente da RBC, a0 ¼ ð3V = 4pÞ1 = 3 (V = 94,1 lm3 sendo o volume da RBC), estava
na ordem 10^-2. As forças da membrana computadas foram adicionadas às equações
de Stokes como forças do corpo, usando as funções delta que desaparecem da
membrana celular.

Figura 3
Figura 4

As equações de governo foram resolvidas de forma adimensional. a0 foi usada como

escala de comprimento e a taxa de cisalhamento inverso c 1 como escala de tempo
para não-dimensionalização. O tempo adimensional foi então denotado por t*=ty®. A
membrana celular foi promovida advogando os nós Lagrangianos como dx/ dt=um,
onde x era a posição do nó, e a velocidade da membrana ,um, foi obtida pela
interpolação da velocidade local do fluido usando a função delta. As equações de
Stokes foram resolvidas numa grade retangular fixa. A equação do momento foi
dividida numa equação de advecção-difusão e numa equação de Poisson para a
pressão. O termo força-corpo foi retido na equação advecção-difusão. Os termos não
lineares foram tratados explicitamente usando um esquema de Adams-Bashforth de
segunda ordem, e os termos viscosos foram tratados semi implicitamente usando o
esquema de Crank-Nicholson de segunda ordem. As equações lineares resultantes
foram invertidas usando um esquema implícito de direção alternada para produzir um
campo de velocidade previsto. A equação de Poisson foi então resolvida para obter
pressão no próximo nível de tempo. Usando a nova pressão, o campo de velocidade foi
corrigido para satisfazer a condição de divergência livre.

Resultados:

Campo de velocidade de fluxo e ambiente de tensão de cisalhamento

A jusante da bioprótese degenerada

A Figura 3 mostra as formas de onda fisiológicas resultantes da pressão e fluxo da

bioprótese degenerada.

O gradiente de pressão médio foi de 61,2 ± 0,4 mmHg. A área efetiva do orifício
valvular e a fração de regurgitação foram de 0,67 cm2 e 5,6%, respetivamente. A
velocidade instantânea da bioprótese degenerada com base no nível de grade 1 é
mostrada na Fig. 4a para as três principais fases do ciclo cardíaco, tais como ,
aceleração, pico de fluxo e desaceleração. Na fase de aceleração, é observada uma
distribuição altamente axial da velocidade do fluxo somente na linha central da
bioprótese. As componentes da velocidade diminuíram abruptamente em relação à
forte central jato para a região de recirculação circundante. Os perfis de fluxo
mostraram claramente decaimento do jato à medida que o fluxo se movia a jusante da
bioprótese devido a efeitos viscosos. A Figura 4b mostra os resultados da tensão de
cisalhamento da medição ao nível da grade 2 imediatamente a jusante da bioprótese.
No pico do fluxo direto, ocorreu uma velocidade máxima de 4,9 m / s dentro do jato. A
tensão de cisalhamento na maior parte da camada limite do jato foi da ordem de 100
Pa (1000 dyn / cm2) e sua magnitude foi consistente com diferentes ciclos cardíacos.
Os níveis de tensão de cisalhamento dentro do jato e fora da camada limite do jato
eram muito mais baixos e da ordem de 100 dyn / cm2.

A Figura 5 demonstra o perfil instantâneo de tensão de cisalhamento 3 e 6 mm a

jusante da bioprótese. Observa-se que o pico de tensão de cisalhamento (na borda da
camada limite) atinge valores tão altos quanto 1000 e 1700 dyn / cm2, 6 e 3 mm a
jusante da válvula, respetivamente. Também é visto que dentro do jato (a menos de 1
mm da linha central do jato) e fora do jato (a mais de 1 mm da camada de
cisalhamento), a tensão de cisalhamento é de aproximadamente 100 e 200 dyn / cm2,
respetivamente.

Numa proximidade da camada de cisalhamento, esse valor aumenta até 300–500 dyn /
cm2.

Deformação das células sanguíneas e a célula resultante

Tensões de membrana

Para investigar os potenciais efeitos prejudiciais dos SSs medidos na membrana das
células sanguíneas, a configuração do fluxo computacional descrita na Fig. 2 foi
empregue em cinco taxas diferentes de cisalhamento correspondentes a SS = 100, 200,
300, 1000 e 1700 dyn / cm2, com base nos resultados de PIV mostrados na Fig. 5.

Deformação induzida por fluxo de RBC

A Figura 6 demonstra instantâneos representativos da amostra da deformação e

alongamento induzidos por fluxo de uma RBC sob SS = 1700 dyn / cm2. Observou-se
que o RBC começou a girar devido ao torque de cisalhamento até atingir uma
orientação semi estável (3–7 em relação ao eixo x). Simultaneamente, as forças de
cisalhamento alongaram a RBC até que sua forma de repouso bicôncava fosse
completamente perdida e transformada em um esferóide prolato alongado,
semelhante ao que era observado em experiências anteriores com taxas de
cisalhamento semelhantes. Em seguida, foi observado um comportamento semi
constante de pisar no tanque. O alongamento e o movimento rotativo da membrana
celular resultaram num aumento das tensões de membrana. Isso foi observado pelos
contornos da tensão máxima de cisalhamento da membrana de RBC, smax (força por
unidade de comprimento ao longo de 45º em relação à orientação do sistema do eixo
principal).

Além disso, as nossas simulações com diferentes orientações iniciais de RBC

confirmaram que o tempo de transitoriedade, que é basicamente uma escala de
tempo caraterística da resposta da membrana de RBC ao cisalhamento, era quase
insensível às condições iniciais. Nos dois casos de SS = 1000 e 1700 dyn / cm2 esse
valor correspondeu a aproximadamente 0,002 - 0,004s.

Figura 5
Figura 6
Figura 8. (a) Representação instantânea do movimento de rotação de uma plaqueta sob
SS=200 dyn / cm2 t*= 5.0, 9.8, 11.3, 12.6 e 17.3 da esquerda para a direita. Os contornos de T 1
((a) - linha superior) e máx ((a) - linha inferior) na superfície das plaquetas também são
mostrados. Variações temporais em max(T 1) (b) e max(máx) (c) na superfície de uma plaqueta
sob diferentes tensões de cisalhamento. A linha tracejada reta em (b) mostra a força de
ruturada membrana plaquetária relatada na literatura 29. (d) Distribuição de máx na superfície
das plaquetas em t* ~ 30 sob SS=100, 300, 1000 e 1700 dyn / cm 2 da esquerda para a direita.

Discussão:

Este estudo realizou uma análise de indução por cisalhamento danos às células sanguíneas nas
válvulas cardíacas estenóticas (quando a vávula se norma mais estreita que o normal). O
cisalhamento induzido por um ambiente severamente estenótico a bioprótese foi quantificada
na macro escala usando Medições de PIV; e a correspondente mecânica respostas da
membrana de um RBC e uma plaqueta foram simulados usando um número imerso de
fronteira método químico na microescala. Os resultados mostraram que a tensão de
cisalhamento no jato formado a jusante do válvula estenótica alcançou valores de 1000 a
1.700 dyn /cm2 . As simulações demonstraram ainda que o as principais tensões resultantes
nas hemácias e nas membranas plaquetárias sob SS tão altos atingiram valores da ordem de
0,1 e 1,0 dyn / cm, respetivamente. A tensão máxima de cisalhamento correspondente à
membrana foi observada na faixa de 0,025-0,09 dyn / cm para um hemograma completo e
0,005-0,025 dyn / cm para uma plaqueta.

O trauma hemolítico de hemácias e a ativação plaquetária são ambos conhecidos por não
depender apenas do contato da célula com superfícies estranhas, mas também na tensão de
cisalhamento do fluxo magnitude. Danos no sangue induzidos por fluxo foram estudado em
diferentes sistemas de fluxo, por exemplo, cilindros concêntricos, viscosímetros de cone-e-
placa, placa paralela câmaras de fluxo e fluxos de jato injetados nas suspensões de RBC. Nestes
estudos, até que ponto de contato com superfícies estranhas afeta o trauma no sangue as
células permaneceram incertas. O limiar induzido por cisalhamento hemólise de hemácias e
ativação plaquetária medida nesses estudos abrangem uma ampla gama de níveis de 10 3 a 104
dyn / cm2 e de 102 a 103 dyn / cm2, respetivamente. Nos resultados destes estudos pode ser
unificado pelo conceito de tempo de exposição: quanto mais alto, menor o nível de limiar de
stress para os danos celulares.
A Tabela 1 mostra exemplos das faixas de limite relatadas e os tempos de exposição
correspondentes. Observa-se que valores limite até 40.000 dyn/cm 2 também foram relatados
para os danos nas hemácias nos tempos de exposição da ordem dos 10 -5.

Por outro lado, observou-se que plaquetas que foram brevemente pré-expostas a altos SSs são
ativadas sob baixos SSs fisiológicos se o tempo de exposição atingir o nível de 10 3s.
Independentemente do mecanismo dominante, as superfícies estrangeiras ou cisalhamento a
granel, um aumento na exposição temporal aumenta o dano da células sanguíneas devido ao
aumento da dispersão celular na primeira, e a resposta viscoplástica dependente do tempo da
membrana celular (após as tensões da membrana excederem o cisalhamento) na segunda.
Nesta perspetiva, um valor significativamente grande do limiar de tensão de cisalhamento
corresponde a um tempo de exposição muito pequeno e é atribuído à tração instantânea da
membrana de RBC.

Os resultados das medições de PIV demonstraram que os níveis de tensão de cisalhamento na

camada viscosa estavam além do limiar de ativação plaquetária e dentro da faixa de limiares
relatados para hemólise de hemácias. A estimativa do tempo de residência de uma célula
sanguínea na camada de cisalhamento (onde os SSs mais altos seriam exercidos na sua
membrana) a partir dos resultados de PIV por meio do rastreamento de partículas sem massa
imaginárias deu um valor na ordem de 10 -2-10-1s. Comparando esses dois valores com os dados
apresentados na Tabela 1, embora seja provável que ocorra uma complicação trombótica
devido à válvula estenótica, a ocorrência de trauma hemolítico de hemácias não é clara. Cabe
realçar que, uma vez que este estudo objetiva isolar os potenciais efeitos biofísicos do fluxo de
líquidos na trombogênese, os processos bioquímicos que desencadeiam a ativação
plaquetária, como liberação de trombina e ADP, não são levados em consideração e a ação
induzida pelo cisalhamento, alterações morfológicas são focadas na ativação plaquetária.

As simulações computacionais elucidaram a extensão em que o cisalhamento induz danos

numa célula sanguínea. A distribuição das principais tensões na RBC superfície demonstrou
que a ocorrência de hemólise instantânea era improvável, pois os valores calculados a ordem
de (0,01-0,1 dyn / cm) - eram duas ordens de magnitude menor que os valores relatados na
para rutura por tração da membrana de hemácias, que é de 10 a 20 dyn/cm. Embora a ruptura
instantânea da membrana na camada de cisalhamento do jato fosse improvável, a quebra
viscoplástica da membrana de hemácias espera-se que ocorra como a tensão máxima de
cisalhamento

obtidos em nossas simulações excederam o cisalhamento para falha plástica da membrana,

que é de 0,02-0,08 dyn/cm. Deve-se notar que, como o tempo de permanência de uma célula
sanguínea na camada de cisalhamento (0,01-0,1 s) foi uma ordem de magnitude maior que a
escala de tempo característica para a resposta das hemácias ao cisalhamento (0,002-0,004 s),
as hemácias fluindo para dentro a camada de cisalhamento realmente experimentaria valores
tão grandes de máx. Outra noção importante aqui é como o tempo de permanência se
compara ao tempo característico da resposta viscoplástica da membrana RBC t 0= 2p/0, onde
p é a viscosidade do fluxo plástico da membrana RBC e t 0 é o seu cisalhamento. Tomar t 0=
0.02-0.08 dyn/cm e p =0.001 -0. 002 dyn s/cm a 37 ° fornece um intervalo de t 0=0.025-0.2 s.
Como esse intervalo foi semelhante ao tempo estimado de permanência das células, inferiu-se
que é provável a deformação permanente da membrana RBC devido a falha plástica. Estudos
experimentais anteriores também demonstraram que forças de cisalhamento que não
produzem hemólise podem levar a alterações sub-hemolíticas permanentes nas propriedades
biofísicas/bioquímicas da membrana de hemácias, o que resulta em uma taxa reduzida de
sobrevivência de hemácias (um exemplo ilustrativo é a eliminação de hemácias deformadas no
baço) e, consequentemente, morbidades como anemia. Ao contrário do caso das RBCs, onde
muitos dados experimentais são encontrados descartando a força da membra, trabalhos
experimentais que forneçam dados semelhantes para as plaquetas são limitados. McGrath
relatou uma 0,2 dyn/cm para a resistência à rutura da membrana plaquetária. Os resultados
mostraram que a tensão criada na membrana plaquetária excedeu esse valor quando SS> 200
dyn/cm2, o que poderia ser uma indicação de lise plaquetária. É de notar também que o
intervalo em que a lise plaquetária ocorre é relatado como SS = 100–600 dyn/cm. Embora
tenha sido sugerido, as tensões resultantes induzidas por cisalhamento na membrana do
teletransporte podem levar à ativação, não existe na literatura um limiar para tensões de
membrana acima do qual tais fenômenos ocorram. Portanto, análises adicionais de nossos
resultados só são possíveis quando dados experimentais mais quantitativos sobre a relação
entre ativação plaquetária e tensões de membrana são adquiridos.

Uma das limitações do presente estudo foi usar medições 2D de PIV que negligenciam a
terceira componente da velocidade. Entretanto, como a velocidade axial do jato é de
magnitude tão grande, a terceira componente da velocidade é insignificante. Outra limitação
foi negligenciar os efeitos interações RBC – RBC em resposta ao ambiente de cisalhamento.
Uma experiência anterior demonstrou a insensibilidade do trauma hemolítico à hematócrito
sanguíneo e, portanto, a interação RBC – RBC. Por outro lado, um recente estudo de cálculo
computacional sobre interação emparelhada de hemácias em fluxo de cisalhamento mostrou
efeitos significativos na interação célula a célula na sua tensão da membrana. Portanto, muitas
simulações de células são necessárias para determinar os efeitos de a simplificação empregada
no presente trabalho. As interações celulares heterogêneas (plaquetas RBC) foram
negligenciados, considerando a redução significativamente menor densidade de plaquetas
comparada às hemácias, bem como como a noção de que o efeito de uma hemácia em
plaquetas é principalmente deslocando-o lateralmente no fluxo de cisalhamento do que gerar
tensão induzida por deformação em sua membrana. Também é importante observar que
nosso modelo computacional não inclui os termos inerciais, já que o número de Reynolds
definido com base no tamanho da célula fica na ordem de 0,01 para as SSs inferiores
consideradas. No entanto, nas SSs mais altas em consideração, aumentou para a ordem de 0,1,
cujo efeito pode se tornar importante. Sabe-se também que a membrana de hemácias /
plaquetas é carregada negativamente, o que afeta as interações célula-célula. Considerando
que o foco do presente estudo foram os efeitos hidrodinâmicos, essa propriedade não foi
levada em consideração.

Este estudo é único no sentido de que ele tenta conectar os dados experimentais sobre a
resistência ao cisalhamento e à rutura da membrana das células sanguíneas, ao dano das
células sanguíneas induzido pelo fluxo nas válvulas cardíacas estenóticas, empregando uma
abordagem em várias escalas que integra a medição experimental em escala macro e
simulação computacional em microescala. Os resultados do presente estudo demonstraram
uma probabilidade significativa de ativação plaquetária levando a trauma trombótico, além de
dano permanente sub-hemolítico nas hemácias devido a válvulas cardíacas estenóticas.