Traduzido do Inglês para o Português - www.onlinedoctranslator.

com

Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125

Listas de conteúdos disponíveis emScienceDirect

Scientia Horticulturae
Página inicial do jornal:www.elsevier.com/locate/scihorti

Trabalho de Pesquisa

O efeito da nutrição com magnésio na resposta antioxidante de mudas de

cafeeiro sob estresse térmico
Dayane Meireles da Silva⁎, Kamila Rezende Dázio de Souza, Lissa Vasconcellos Vilas Boas, Yara
Santos Alves, José Donizeti Alves
Setor de Fisiologia Vegetal, Departamento de Biologia, Universidade Federal de Lavras, Campus Universitário, Caixa Postal 3037, CEP 37200-000, Lavras, Minas Gerais, Brasil

INFORMAÇÕES DO ARTIGO ABSTRATO

Palavras-chave: As altas temperaturas já são uma realidade atual. Se não for dada atenção necessária à nutrição das plantas, incluindo nutrição de magnésio, grandes perdas na produtividade podem

peróxido de hidrogênio ocorrer quando as plantas são submetidas a combinações desses estresses de calor e nutrientes. Assim, o objetivo do nosso trabalho foi investigar a importância da nutrição adequada de
estresse oxidativo do ciclo magnésio para uma resposta antioxidante eficaz em mudas de cafeeiro submetidas ao estresse térmico. Assim, com seis meses Coffea arábicaAs mudas de L. foram transferidas para
ascorbato-glutationa
recipientes plásticos contendo soluções nutritivas com diferentes concentrações de magnésio (Mg) e cultivadas em duas temperaturas diferentes (25 ou 35 °C). Folhas e raízes totalmente

expandidas foram avaliadas no início do tratamento e após 10, 20 e 30 dias para as concentrações de magnésio, peróxido de hidrogênio, prolina, ascorbato, malondialdeído, proteína e

aminoácidos, bem como as atividades das enzimas superóxido dismutase , catalase, ascorbato peroxidase, monodesidroascorbato redutase, dehidroascorbato redutase e glutationa

redutase. As variáveis analisadas foram alteradas principalmente pela combinação de tensões. A deficiência de Mg e o estresse térmico causaram um aumento na concentração de

peróxido de hidrogênio que foi acompanhado por um aumento no metabolismo antioxidante e por maior produção de prolina e ascorbato. No entanto, o metabolismo antioxidante e os

osmoprotetores foram insuficientes para remover o excesso de EROs, resultando em aumento da peroxidação lipídica e degradação de proteínas. Quando submetidas ao estresse calórico,

mudas de cafeeiro sob nutrição adequada de Mg apresentaram menor produção de peróxido de hidrogênio e, consequentemente, baixa peroxidação lipídica e desnaturação de proteínas

em comparação com mudas deficientes em Mg. Portanto, a nutrição adequada de Mg é essencial para minimizar os danos oxidativos causados pelo estresse térmico em mudas de

cafeeiro. resultando em aumento da peroxidação lipídica e degradação de proteínas. Quando submetidas ao estresse calórico, mudas de cafeeiro sob nutrição adequada de Mg

apresentaram menor produção de peróxido de hidrogênio e, consequentemente, baixa peroxidação lipídica e desnaturação de proteínas em comparação com mudas deficientes em Mg.

Portanto, a nutrição adequada de Mg é essencial para minimizar os danos oxidativos causados pelo estresse térmico em mudas de cafeeiro. resultando em aumento da peroxidação

lipídica e degradação de proteínas. Quando submetidas ao estresse calórico, mudas de cafeeiro sob nutrição adequada de Mg apresentaram menor produção de peróxido de hidrogênio e,

consequentemente, baixa peroxidação lipídica e desnaturação de proteínas em comparação com mudas deficientes em Mg. Portanto, a nutrição adequada de Mg é essencial para minimizar

os danos oxidativos causados pelo estresse térmico em mudas de cafeeiro.

1. Introdução Como as EROs são produtos inevitáveis do metabolismo das plantas, em

O estresse por calor tem se tornado uma preocupação crescente devido aos
danos causados à produtividade de muitas culturas.Luo et al., 2008). O aumento
da temperatura desencadeia impactos em diversos processos fisiológicos e
metabólicos, como o não particionamento de carboidratos para as raízes e
conseqüente dano ao crescimento radicular.Du e Tachibana, 1994). A deficiência
de magnésio é outro estresse que também causa essa redução na translocação de
carboidratos da fonte para o sumidouro.Cakmak e Yazici, 2010; Da Silva et al.,
2014). Nesta condição, os cloroplastos são expostos a energia de excitação
excessiva, desencadeando uma alta produção de espécies reativas de oxigênio.
(ROS), como o radical superóxido (O− 2), peróxido de hidrogênio (H2O2),
radical hidroxila (OH−) e oxigênio singlete (1 2O) (Marutani et al.,
2012).
condições normais, a produção e a remoção de EROs são bem equilibradas.
Mittler, 2002). No entanto, sob condições de estresse, a produção de ROS pode
superar os mecanismos de remoção, desencadeando o estresse oxidativo.Gill e
Tuteja, 2010; Marutani et al., 2012). Isso se deve à alta toxicidade das EROs, que
são altamente citotóxicas e podem reagir com diversas biomoléculas, como
lipídios, proteínas e ácidos nucléicos, causando peroxidação lipídica, desnaturação
de proteínas e mutações no DNA, respectivamente.Quiles e Lopez, 2004).
As membranas são o principal alvo de lesão (Candan e Tarhan, 2003), uma vez
que as ROS podem reagir com ácidos graxos insaturados, desencadeando a
peroxidação lipídica nas membranas plasmáticas e nas membranas das organelas
(Karabal et al., 2003). A peroxidação da membrana plasmática causa
extravasamento do conteúdo celular, rápida dessecação e morte celular.

Abreviaturas:Mg, magnésio; ROS, espécies reativas de oxigênio; SOD, superóxido dismutase; CAT, catalase; APX, ascorbato peroxidase; MDHAR, monodesidroascorbato redutase;
DHAR, desidroascorbato redutase; GR, glutationa redutase; MDA, malondialdeído
⁎Autor correspondente.

Endereço de e-mail:dayanemeireles@yahoo.com.br (DM Silva),krdazio@hotmail.com (KRDd Souza),lissavilasboas92@outlook.com (LV Vilas Boas),

yara.ufla@yahoo.com.br (YS Alves),jdalves@dbi.ufla.br (JD Alves).

http://dx.doi.org/10.1016/j.scienta.2017.04.029
Recebido em 17 de janeiro de 2017; Recebido em formulário revisado em 27 de março de 2017; Aceito em 26 de abril de 2017
Disponível on-line em 12 de junho de 2017
0304-4238/ © 2017 Elsevier BV Todos os direitos reservados.
DMd Silva et al. Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125

tabela 1
Concentrações de peróxido de hidrogênio e prolina em folhas e raízes deCoffea arábicaL. mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e temperatura. Letras maiúsculas comparam os
efeitos da deficiência de magnésio em cada temperatura e tempo de amostragem, e letras minúsculas comparam os efeitos da elevação da temperatura em cada condição de Mg e em cada tempo de
amostragem. Letras diferentes indicam diferenças significativas com probabilidade de 0,05 de acordo com o teste de Scott-Knott.

H2 O 2 H2O2 Prolina Prolina

Folhas Raízes Folhas Raízes

T. (°C) Dias Tratar. (μmol g−1FW) (μgg−1DW)

25 0 Controle de Mg 12,7 ± 0,4 Aa 2,9 ± 0,1 Aa 1,1 ± 0,1 Aa 0,4 ± 0,0 Aa
10 16,8 ± 0,3 Ab 2,8 ± 0,1 Aa 1,0 ± 0,1 Bb 0,5 ± 0,0 Ab
20 16,3 ± 0,3 Bb 2,8 ± 0,1 Bb 1,2 ± 0,1 Bb 0,6 ± 0,0 Bb
30 16,3 ±0,3 Bb 3,1 ± 0,1 Bb 1,2 ± 0,1 Bb 0,7 ± 0,0 Bb
0 Deficiente em Mg 12,7 ± 0,4 Aa 2,9 ± 0,1 Aa 1,1 ± 0,1 Aa 0,4 ± 0,0 Aa
10 17,4 ± 0,7 Ab 3,5 ± 0,3 Aa 1,5 ± 0,1 Ab 0,6 ± 0,0 Ab
20 21,6 ± 0,1 Ab 4,2 ± 0,1 Ab 1,7 ± 0,2 Ab 0,9 ± 0,0 Ab
30 30,6 ± 2,0 Ab 4,6 ± 0,1 Ab 1,6 ± 0,1 Ab 0,9 ± 0,0 Ab

35 0 Controle de Mg 12,7 ± 0,4 Aa 2,9 ± 0,1 Aa 1,1 ± 0,1 Aa 0,4 ± 0,0 Aa

10 19,3 ± 0,3 Ba 3,2 ± 0,1 Ba 4,3 ± 0,2 Ba 1,2 ± 0,0 Ba
20 24,3 ± 0,6 Ba 3,9 ± 0,1 Ba 3,5 ± 0,2 Ba 1,4 ± 0,0 Ba
30 28,9 ± 1,3 Ba 3,9 ± 0,1 Ba 4,9 ± 0,2 Ba 3,4 ± 0,0 Ba
0 Deficiente em Mg 12,7 ± 0,4 Aa 2,9 ± 0,1 Aa 1,1 ± 0,1 Aa 0,4 ± 0,0 Aa
10 30,4 ± 1,5 Aa 4,1 ± 0,6 Aa 5,5 ± 0,5 Aa 1,4 ± 0,0 Aa
20 31,6 ± 1,7 Aa 5,2 ± 0,1 Aa 4,7 ± 0,2 Aa 2,2 ± 0,1 Aa
30 36,6 ± 1,5 Aa 5,8 ± 0,2 Aa 6,6 ± 0,3 Aa 4,1 ± 0,3 Aa

T.: temperatura; Tratar: tratamento; DW: peso seco; FW: peso fresco.

Figura 1.Atividade da superóxido dismutase (SOD) em folhas (A) e raízes (B) de

Coffea arábicaL. mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e
diferentes temperaturas. Letras maiúsculas comparam os efeitos da deficiência de
magnésio em cada temperatura e tempo de amostragem, e letras minúsculas
comparam os efeitos da elevação da temperatura em cada condição de Mg e em
cada tempo de amostragem. Letras diferentes indicam diferenças significativas com
probabilidade de 0,05 de acordo com o teste de Scott-Knott. As barras mostram o
erro padrão de cinco réplicas.

Considerando que a peroxidação da membrana intracelular pode afetar a
atividade respiratória mitocondrial, deterioração do pigmento e perda da
capacidade de fixação de carbono nos cloroplastos.Foyer e Noctor, 2000).
Para neutralizar os efeitos do calor no metabolismo celular, as
plantas respondem sintetizando e acumulando osmoprotetores. Os
osmoprotetores são moléculas pequenas e eletricamente neutras que
estabilizam proteínas e membranas contra os efeitos desnaturantes do
calor.Rivero et al., 2014). A prolina é um osmoprotetor responsável pela
estabilização de proteínas, membranas e estruturas subcelulares e é
envolvidos na remoção de espécies reativas de oxigênio (Kumar et al., 2012).
Além dos osmoprotetores, para proteger as células dos danos oxidativos, as
plantas desenvolveram diferentes sistemas de defesa antioxidantes para
minimizar os danos celulares das EROs. O sistema antioxidante enzimático inclui a
superóxido dismutase (SOD), que catalisa a dismutação
de O2−para H2O2e O2. H2O2é convertido em H2O e O2pela ação
de catalase (CAT), várias peroxidases e enzimas do ciclo
ascorbateglutationa. Este ciclo é caracterizado por uma série de
reações redox acopladas envolvendo ascorbato peroxidase (APX),

116
DMd Silva et al.
monodesidroascorbato redutase (MDHAR), dehidroascorbato redutase
(DHAR), glutationa redutase (GR) e ascorbato (Candan e Tarhan, 2003).
As altas temperaturas já são uma realidade atual. Se não for dada atenção
necessária à nutrição das plantas, incluindo nutrição de magnésio, grandes perdas
na produtividade podem ocorrer quando as plantas são submetidas à combinação
de estresses de calor e nutrientes. Os cultivos de café têm sido implementados
principalmente nas fronteiras agrícolas do Brasil (Tomaz et al., 2003), onde os
solos são ácidos, com baixa capacidade de troca catiônica e pobres em magnésio (
Cakmak e Yazici, 2010 Gransee e Führs, 2013). Assim, o objetivo do nosso trabalho
foi investigar a importância da nutrição adequada de magnésio para uma resposta
antioxidante eficiente em mudas de cafeeiro submetidas ao estresse térmico.
2. Materiais e métodos
2.1. Cultura de plantas e tratamentos com Mg
Coffea arábicaMudas de L. da cultivar Catuaí 144 foram cultivadas por
seis meses em sacos de polipropileno de 500 mL preenchidos com subsolo e
esterco bovino na proporção 2:1, suplementado com 0,25 mg/L de cloreto
de potássio e 2,5 mg/L de superfosfato na proporção proporção de 1:10 (
Guimarães et al., 2002). Após seleção quanto à uniformidade de tamanho e
vigor, as mudas com seis meses de idade foram transferidas para
recipientes plásticos de 40 L (19 × 43 × 66 − HxWxL) contendo solução
nutritiva (Hoagland e Arnon 1950). Cada recipiente continha 20 mudas. O
experimento foi conduzido em uma câmara de crescimento com uma
densidade de fluxo de fótons fotossintético de aproximadamente 250 μmol
m−2s−1e uma umidade relativa de 50% e 60% durante os períodos claros e
escuros, respectivamente.
As plantas foram aclimatadas por 6 dias quando as seguintes soluções com
117
Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125
Figura 2.Atividade da catalase (CAT) em folhas (A) e raízes (B) deCoffea
arábicaL. mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e
diferentes temperaturas. Letras maiúsculas comparam os efeitos da
deficiência de magnésio em cada temperatura e tempo de amostragem, e
letras minúsculas comparam os efeitos da elevação da temperatura em
cada condição de Mg e em cada tempo de amostragem. Letras diferentes
indicam diferenças significativas com probabilidade de 0,05 de acordo com
o teste de Scott-Knott. As barras mostram o erro padrão de cinco réplicas.
foram usadas concentrações crescentes: ¼ de concentração por 2 dias, ½ de
concentração por 2 dias e força total por 2 dias. Após seis dias de
aclimatação, as plantas foram submetidas a quatro tratamentos: a) solução
nutritiva completa com a concentração original de Mg (1 mmol.L−1de MgSO4)
e temperatura ambiente de 25°C (Controle Mg 25°C); b) solução nutritiva
com exclusão de Mg (0 mmol.L−1de MgSO4) a 25°C (deficiente em Mg 25°C);
c) solução nutritiva completa com a concentração original de Mg (1 mmol.L−1
de MgSO4) e temperatura ambiente de 35°C (Controle Mg 35°C) e d) solução
nutritiva com exclusão de Mg (0 mmol.L−1de MgSO4) a 35°C (35°C deficiente
em Mg). O volume da solução nutritiva foi reposto diariamente com água
deionizada. O pH da solução também foi ajustado diariamente para 5,5 ± 0,5
com solução de NaOH ou HCLs (1 mol L−1). As soluções foram substituídas
semanalmente. Todas as mudas foram mantidas sob aeração constante
durante todo o período experimental. A temperatura no ambiente radicular
durante todo o período experimental foi 3 °C inferior à do ambiente foliar; e
a temperatura noturna foi 5°C abaixo da temperatura diurna, tanto no
ambiente foliar quanto no ambiente radicular.
O delineamento foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 2 × 2
com dois tratamentos (com e sem Mg) e duas temperaturas (25 °C ou 35 °C),
com cinco repetições. Aos 0, 10, 20 e 30 dias após a imposição dos
tratamentos, foram coletadas folhas totalmente expandidas do terceiro e
quarto pares e o sistema radicular de cinco plantas. Em seguida, o material
vegetal foi condicionado em nitrogênio líquido e armazenado em
− 80 °C para análise do peso fresco ou colocado em estufa a 65 °C sob
circulação forçada até peso constante para análise do peso seco.
2.2. Análise estatística
As variáveis foram analisadas quanto à normalidade pelo teste de Shapiro Wilk
DMd Silva et al.
(pág.≥0,05). As variáveis que se enquadraram na faixa de normalidade
foram submetidas à análise de variância utilizando o sistema estatístico
SISVAR 4.3 (Sistema de Análise de Variância para Dados Balanceados) (
Ferreira, 2011), onde as médias entre os tratamentos foram comparadas
pelo teste de Scott-Knott a 0,05 de probabilidade. As variáveis que não se
enquadraram na distribuição normal foram transformadas pelo método
Box-Cox e submetidas à análise de variância, e as médias comparadas pelo
teste de Scott-Knott a 0,05 de probabilidade. As variáveis não paramétricas
foram analisadas pelo método de Kruskal-Wallis a 0,05 de probabilidade. As
correlações de Pearson foram realizadas entre as variáveis usando o
programa estatístico Action Stat (Equipe Estatcamp, 2014).
2.3. Conteúdo de peróxido de hidrogênio
H2O2foi determinado de acordoVelikova et ai. (2000). Duzentos
miligramas de tecido (peso fresco) foram macerados em nitrogênio líquido,
adicionados à polivinilpolipirrolidona (PVPP) e homogeneizados em 1500 μL
de ácido tricloroacético (TCA) 0,1% (m/v). O homogenato foi centrifugado a
12.000gpor 15 minutos a 4°C. O H2O2foi determinado medindo a
absorbância a 390 nm em um meio de reação contendo 45 μL de extrato, 45
μL de um tampão de fosfato de potássio 10 mM (pH 7,0) e 90 μL de iodeto
de potássio 1 M.
2.4. Conteúdo de prolina
A extração e quantificação da prolina foram realizadas de acordo com o
método deBates et ai. (1973). A extração foi realizada por maceração de 100
mg de material seco com ácido sulfosalicílico a 3%. Os extratos foram
agitados à temperatura ambiente por 60 min e depois filtrados com papel
de filtro. Alíquotas do filtrado reagiram com 2 mL de ninidrina ácida e 2 mL
de ácido acético glacial em um tubo de ensaio por 1 h a 100 °C,
118
Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125
Fig. 3.Atividade da ascorbato peroxidase (APX) em folhas (A) e raízes (B) deCoffea
arábicaL. mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e diferentes
temperaturas. Letras maiúsculas comparam os efeitos da deficiência de magnésio
em cada temperatura e tempo de amostragem, e letras minúsculas comparam os
efeitos da elevação da temperatura em cada condição de Mg e em cada tempo de
amostragem. Letras diferentes indicam diferenças significativas com probabilidade
de 0,05 de acordo com o teste de Scott-Knott. As barras mostram o erro padrão de
cinco réplicas.
após o que a reação foi terminada em banho de gelo. A quantificação
foi realizada com base na curva padrão com concentrações crescentes
e conhecidas de prolina.
2.5. Metabolismo antioxidante enzimático
A superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbato peroxidase
(APX), monodesidroascorbato redutase (MDHAR), desidroascorbato
redutase (DHAR) e glutationa redutase (GR) foram extraídas de acordo
com os métodos deBiemelt et ai. (1998). Quantidades de tecido de 0,2 g
(peso fresco) foram maceradas em nitrogênio líquido e PVPP e depois
homogeneizadas em 1,5 mL de tampão de extração contendo tampão
fosfato de potássio 400 mM (pH 7,8), EDTA 10 mM, ácido ascórbico 200
mM e água . O extrato foi centrifugado a 13.000gpor 10 min a 4°C, e o
sobrenadante foi coletado e armazenado a -20°C durante o período de
análise.
A atividade da SOD foi medida pela capacidade da enzima em inibir
a fotorredução do nitroazul tetrazólio (NBT) (Giannopolitis e Ries, 1977).
Alíquotas (10 μL) do extrato enzimático foram adicionadas ao meio de
incubação contendo 100 mM de fosfato de potássio (pH 7,8), 70 mM de
metionina, 10 mM de EDTA, água, 1 mM de NBT e 0,2 mM de
riboflavina. Os tubos contendo o meio de reação e 10 μL da amostra
foram iluminados por 7 min com uma lâmpada fluorescente de 20 W. O
mesmo meio de reação sem amostra foi iluminado como controle. Uma
unidade de SOD pode inibir 50% da fotorredução de NBT nas condições
de ensaio.
A CAT foi avaliada de acordo com os métodos deMengutay et ai. (2013).
Alíquotas do extrato enzimático foram adicionadas ao meio de incubação
contendo 50 mM de tampão fosfato de potássio (pH 7,6), 0,1 mM de ácido
etilenodiamino tetraacético dissódico (Na2EDTA), água e peróxido de
hidrogênio 200 mM e incubados a 30 °C. A atividade enzimática foi
DMd Silva et al. Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125

Fig. 4.Concentração de ascorbato nas folhas (A) e raízes (B) deCoffea arábica
L. mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e diferentes
temperaturas. Letras maiúsculas comparam os efeitos da deficiência de
magnésio em cada temperatura e tempo de amostragem, e letras
minúsculas comparam os efeitos da elevação da temperatura em cada
condição de Mg e em cada tempo de amostragem. Letras diferentes
indicam diferenças significativas com probabilidade de 0,05 de acordo com
o teste de Scott-Knott. As barras mostram o erro padrão de cinco réplicas.

mesa 2
Monodesidroascorbato redutase, dehidroascorbato redutase e glutationa redutase em folhas e raízes deCoffea arábicaL. mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e diferentes
temperaturas. Letras maiúsculas comparam os efeitos da deficiência de magnésio em cada temperatura e tempo de amostragem, e letras minúsculas comparam os efeitos da elevação da temperatura
em cada condição de Mg e em cada tempo de amostragem. Letras diferentes indicam diferenças significativas com probabilidade de 0,05 de acordo com o teste de Scott-Knott.

MDHAR MDHAR DHAR DHAR GR GR

folhas raízes folhas raízes folhas raízes

T. (°C) Dias Tratar. (μmol AsA min−1mg de proteína−1 (ηmol NADPH min−1mg de proteína−1
25 0 Controle de Mg ) 18,4 ± 0,4 Aa 66,7 ± 1,4 Aa 0,1 ± 0,0 Aa 0,2 ± 0,0 Aa ) 71,5 ± 10,2Aa 121,8 ± 3,7 Aa
10 25,9 ± 0,3 Bb 61,6 ± 0,4 Bb 0,1 ± 0,0 Bb 0,1 ± 0,0 Bb 48,9 ± 3,8 Bb 146,9 ± 10,0 Bb
20 21,4 ± 0,0 Bb 79,2 ± 2,2 Bb 0,1 ± 0,0 Bb 0,1 ± 0,0 Bb 59,7 ± 4,5 Bb 136,3 ± 13,2 Bb
30 29,2 ± 0,9 Bb 76,5 ± 0,8 Bb 0,1 ± 0,0 Bb 0,2 ± 0,0 Bb 42,9 ± 3,4 Bb 111,6 ± 5,1 Bb
0 Deficiente em Mg 18,4 ± 0,4 Aa 66,7 ± 1,4 Aa 0,1 ± 0,0 Aa 0,2 ± 0,0 Aa 71,5 ± 10,2Aa 121,8 ± 3,7 Aa
10 40,2 ± 0,8 Ab 93,9 ± 1,7 Ab 0,1 ± 0,0 Ab 0,2 ± 0,0 Ab 97,1 ± 4,3 Aa 293,7 ± 0,6 Aa
20 49,2 ± 0,9 Aa 93,2 ± 3,3 Ab 0,1 ± 0,0 Ab 0,2 ± 0,0 Ab 83,9 ± 1,8 Ab 263,0 ± 23,6 Ab
30 50,7 ± 0,2 Ab 100,3 ± 4,3 Ab 0,2 ± 0,0 Ab 0,3 ± 0,0 Ab 93,2 ± 1,9 Ab 169,7 ± 5,7 Ab

35 0 Controle de Mg 18,4 ± 0,4 Aa 66,7 ± 1,4 Aa 0,1 ± 0,0 Aa 0,2 ± 0,0 Aa 71,5 ± 10,2Aa 121,8 ± 3,7 Aa
10 49,2 ± 1,0 Aa 148,4 ± 2,2 Ba 0,1 ± 0,0 Aa 0,3 ± 0,0 Ba 85,9 ± 5,1 Aa 186,9 ± 15,6 Ba
20 39,7 ± 1,3 Ba 150,5 ± 0,9 Ba 0,2 ± 0,0 Ba 0,4 ± 0,0 Ba 112,9 ± 6,6 Ba 227,8 ± 4,5 Ba
30 45,5 ± 2,1 Ba 116,2 ± 0,3 Ba 0,3 ± 0,0 Ba 0,4 ± 0,0 Ba 105,9 ± 2,4 Ba 360,1 ± 6,9 Ba
0 Deficiente em Mg 18,4 ± 0,4 Aa 66,7 ± 1,4 Aa 0,1 ± 0,0 Aa 0,2 ± 0,0 Aa 71,5 ± 10,2Aa 121,8 ± 3,7 Aa
10 50,2 ± 1,2 Aa 172,2 ± 1,7 Aa 0,1 ± 0,0 Aa 0,3 ± 0,0 Aa 90,3 ± 4,2 Aa 268,1 ± 5,6 Aa
20 48,4 ± 1,7 Aa 174,1 ± 1,0 Aa 0,3 ± 0,0 Aa 0,4 ± 0,0 Aa 173,6 ± 7,3 Aa 413,8 ± 9,6 Aa
30 59,5 ± 0,1 Aa 179,7 ± 1,4 Aa 0,4 ± 0,0 Aa 0,6 ± 0,0 Aa 166,7 ± 9,5 Aa 405,8 ± 17,4 Aa

T.: temperatura; Tratar: tratamento.

determinado pela diminuição da absorbância a 240 nm a cada 15 s por 3
min, monitorada pelo consumo de peróxido de hidrogênio. O coeficiente de
extinção molar utilizado foi de 36 mM−1cm−1.
A atividade de APX foi determinada pelo monitoramento da taxa de oxidação
do ascorbato a 290 nm a cada 15 s por 3 min. Alíquotas de extrato enzimático
foram adicionadas a um tampão de incubação consistindo de tampão fosfato de
potássio 100 mM (pH 6,0), ácido ascórbico 10 mM, água e 10 mM
peróxido de hidrogênio (Nakano e Asada, 1981). O coeficiente de
extinção molar foi de 2,8 mM−1cm−1.
A monodesidroascorbato redutase (MDHAR) foi testada de acordo
com um método seguindo o deHossain et ai. (1984). Cada mistura
reaccional continha tampão de cloridrato de tris (Tris-HCl) 100 mM (pH
7,6), ácido ascórbico 10 mM, dinucleótido de nicotinamida adenina
(NADH) 4 mM e água. A reação foi seguida pela medição da

119
DMd Silva et al.
diminuição da absorbância em 340 nm devido à oxidação do NADH.
O ensaio para a atividade da desidroascorbato redutase (DHAR) foi
realizado medindo o aumento da absorbância em 265 nm devido à
formação de ascorbato (Nakano e Asada, 1981). A mistura de incubação
continha fosfato de potássio 100 mM (pH 7,0), DHA 0,8 mM, EDTA 0,1
mM, água e glutationa reduzida 2,5 mM (GSH).
A atividade da glutationa redutase (GR) foi determinada pelo
monitoramento da taxa de oxidação do NADPH a 340 nm a cada 15 s por 3
min. Alíquotas de extrato enzimático foram adicionadas a um tampão de
incubação consistindo em tampão fosfato de potássio 100 mM (pH 7,8),
glutationa oxidada 10 mM, água e NADPH 5 mM (Cakmak et al., 1993).
2.6. Conteúdo de ascorbato
A concentração de ascorbato foi determinada conforme descrito por
Arakawa et ai. (1981). Cinquenta miligramas de tecido (peso fresco) foram
macerados em nitrogênio líquido, adicionados ao PVPP e homogeneizados
em 1500 μL de ácido tricloroacético (TCA) 5% (m/v). O homogenato foi então
centrifugado a 13.000gpor 15 minutos a 4°C. Alíquotas do sobrenadante
foram adicionadas ao meio de reação composto por 5% de TCA (m/v), 99,8%
de etanol (v/v), 0,4% de ácido fosfórico (H3PO4) em etanol (v/v), 0,5% de
batofenantrolina em etanol (m/v) e 0,03% de cloreto férrico (FeCl3) em etanol
(m/v). A mistura foi homogeneizada completamente e incubada a 30°C por
90 min. As leituras foram realizadas a 534 nm.
2.7. Peroxidação lipídica
A peroxidação lipídica foi determinada pela quantificação das espécies
reativas ao ácido tiobarbitúrico, conforme descrito porBuege e Aust (1978).
Duzentos miligramas de tecido (peso fresco) foram macerados em
120
Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125
Fig. 5.Concentração de malondialdeído nas folhas (A) e raízes (B) de Coffea
arábicaL. mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e
diferentes temperaturas. Letras maiúsculas comparam os efeitos da
deficiência de magnésio em cada temperatura e tempo de amostragem, e
letras minúsculas comparam os efeitos da elevação da temperatura em
cada condição de Mg e em cada tempo de amostragem. Letras diferentes
indicam diferenças significativas com probabilidade de 0,05 de acordo com
o teste de Scott-Knott. As barras mostram o erro padrão de cinco réplicas.
nitrogênio, adicionado ao PVPP (m/m) e homogeneizado em ácido
tricloroacético (TCA) 0,1% (m/v). O homogeneizado foi centrifugado a 10.000
gpor 10 minutos a 4°C. Alíquotas do sobrenadante foram adicionadas ao
meio de reação [0,5% de ácido tiobarbitúrico (TBA) (m/v) e 10% de TCA (m/v)]
e depois incubadas a 95°C por 30 min. A reação foi interrompida por
resfriamento rápido em gelo e as leituras foram determinadas em um
espectrofotômetro a 535 nm e 600 nm. O TBA forma complexos de cor
vermelha com aldeídos de baixo peso molecular, como o malondialdeído
(MDA), um subproduto do processo de peroxidação. A concentração do
complexo MDA/TBA foi calculada pela seguinte equação: [MDA] = (A535-UMA
600)/(ξ.b), ondeξ(o coeficiente de extinção)
= 1,56 × 10−5cm−1e b (o comprimento óptico) = 1.
2.8. Avaliação de proteínas e aminoácidos
A extração de proteínas e aminoácidos foi realizada de acordo com os
métodos deZanandrea et ai. (2009). Duzentos miligramas de tecido (peso
seco) foram homogeneizados em 5 mL de tampão fosfato de potássio 100
mM (pH 7,0) e então colocados em banho-maria por 30 min a 40°C. O
homogenato foi centrifugado a 5000 g por 10 min, após o que o
sobrenadante foi coletado. O processo foi repetido duas vezes e os
sobrenadantes foram combinados. A proteína foi quantificada conforme
descrito porBradford (1976). Os aminoácidos foram medidos usando
ninidrina de acordo com o método descrito porYemm et ai. (1955). Para
medições de aminoácidos, citrato 0,2 M (pH 5,0), 5% de ninidrina, 2% de
cianeto de potássio e 60% de etanol foram adicionados às amostras. As
reações foram analisadas em espectrofotômetro a 570 nm e os resultados
foram comparados com uma curva padrão de 0,1 μmol/mL de glicina.
DMd Silva et al.
3. Resultados
Tanto a deficiência de Mg quanto o estresse térmico resultaram em aumentos
na produção foliar e radicular de H2O2(tabela 1). Esse aumento teve início no 10º
dia nas plântulas deficientes em Mg expostas a 35 °C e no 20º dia naquelas a 25
°C. O aumento do H foliar2O2Produção (tabela 1) devido à exclusão de Mg e
estresse por calor sozinho foi de 88% e 78%, respectivamente. No tecido radicular,
o aumento na produção de peróxido de hidrogênio foi de 49% nas mudas
deficientes e de 24% nas mudas expostas à alta temperatura.tabela 1). Finalmente,
a combinação desses estresses resultou em níveis mais altos de peróxido de
hidrogênio do que os observados em cada estresse sozinho.
Os níveis de prolina também foram elevados por exclusão de Mg e calor (
tabela 1). Na última avaliação, somente a deficiência de Mg resultou em aumentos
na concentração de prolina de 37% nas folhas e 32% nas raízes. Além disso, o
aumento da temperatura de 25 para 35°C resultou em um aumento muito mais
proeminente na produção de prolina. Os aumentos nas concentrações de prolina
foram de 324% nas folhas e 385% nas raízes ao final do experimento. Além disso,
quando esses estresses foram combinados, os maiores aumentos na produção de
prolina foram observados.
Tanto a deficiência de Mg quanto a temperatura elevada de 25 a 35°C
resultaram em aumentos na atividade da superóxido dismutase (SOD).Figura 1).
No trigésimo dia, a deficiência de Mg desencadeou um aumento na atividade da
SOD de 22% nas folhas e 13% nas raízes. O calor, por sua vez, aumentou a
atividade dessa enzima em 66% nas folhas e em 171% nas raízes. A combinação de
deficiência de Mg e elevação de temperatura resultou em maior atividade da
superóxido dismutase, ainda maior do que a observada em cada um sozinho.
A atividade da catalase (CAT) foi elevada tanto pela deficiência de Mg quanto
pelo calor.Figura 2). Ao final do período experimental, as folhas e raízes das
plântulas sem Mg apresentaram aumentos na atividade da CAT de 119% e 109%,
respectivamente. Além disso, a elevação da temperatura desencadeou
121
Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125
Fig. 6.Concentração de proteína nas folhas (A) e raízes (B) deCoffea arábicaL.
mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e diferentes
temperaturas. Letras maiúsculas comparam os efeitos da deficiência de
magnésio em cada temperatura e tempo de amostragem, e letras
minúsculas comparam os efeitos da elevação da temperatura em cada
condição de Mg e em cada tempo de amostragem. Letras diferentes
indicam diferenças significativas com probabilidade de 0,05 de acordo com
o teste de Scott-Knott. As barras mostram o erro padrão de cinco réplicas.
aumentos de 21% e 149% na atividade da catalase nas folhas e raízes do café,
respectivamente. quando nós nos submetermosCoffea arábicaplântulas a combinações
de estresses, a atividade da CAT atingiu valores superiores aos encontrados em cada
estresse separadamente, tanto nas folhas quanto nas raízes.
Mudas de café submetidas a uma combinação de estresses (deficiência de
Mg/35 °C) apresentaram as maiores atividades de ascorbato peroxidase (APX;Fig.
3), que foram superiores aos observados em plântulas expostas a cada um desses
estresses isoladamente. Ao final do período experimental, a deficiência de Mg
resultou em aumentos na atividade de APX de 79% e 40% nas folhas e raízes,
respectivamente. O calor, por sua vez, resultou em um aumento na atividade de
APX de 38%, mas apenas nas folhas.
Folhas e raízes de plântulas deficientes em Mg apresentaram maiores
concentrações de ascorbato do que as folhas e raízes do tratamento
controle em ambas as temperaturas.Fig. 4). No entanto, esse aumento foi
observado a partir do décimo dia para mudas cultivadas a 25 °C e no 20º dia
para mudas cultivadas a 35 °C. No 30º dia, folhas de plântulas submetidas à
deficiência de magnésio e cultivadas a 25 ou 35 °C apresentaram 17% ou
11% mais ascorbato, respectivamente, do que folhas de plântulas do
tratamento controle.Fig. 4). Para as raízes, no trigésimo dia, esse aumento
foi de 11% para mudas cultivadas a 25°C e 63% para aquelas cultivadas a
35°C. Em relação à elevação da temperatura, houve redução da
concentração dessa molécula antioxidante nas folhas e aumento nas raízes
das plântulas deficientes em Mg.Fig. 4).
Tanto a deficiência de Mg quanto a elevação da temperatura de 25 para
35 °C resultaram em aumentos na atividade da monodesidroascorbato
redutase (MDHAR) (mesa 2). No trigésimo dia, a deficiência de Mg
desencadeou um aumento na atividade de MDHAR de 73% nas folhas e 31%
nas raízes. O calor, por sua vez, aumentou a atividade foliar dessa enzima
em 55% e nas raízes em 52%. A combinação de deficiência de Mg e elevação
de temperatura resultou em maiores valores de atividade de MDHAR, ainda
maiores do que os observados em cada estresse isolado.
DMd Silva et al. Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125

Fig. 7.Concentração de aminoácidos nas folhas (A) e raízes (B) deCoffea

arábicaL. mudas submetidas a diferentes concentrações de magnésio e
diferentes temperaturas. Letras maiúsculas comparam os efeitos da
deficiência de magnésio em cada temperatura e tempo de amostragem, e
letras minúsculas comparam os efeitos da elevação da temperatura em
cada condição de Mg e em cada tempo de amostragem. Letras diferentes
indicam diferenças significativas com probabilidade de 0,05 de acordo com
o teste de Scott-Knott. As barras mostram o erro padrão de cinco réplicas.

Ao final do período experimental, a combinação de deficiência de Mg e níveis de ácido (Fig. 7) a partir da terceira avaliação. No dia 30, esse aumento
calor resultou em maiores atividades da deidroascorbato redutase (DHAR), foi de 19% para folhas e 26% para raízes. O calor sozinho foi responsável por
tanto nas folhas quanto nas raízes.mesa 2). Essa elevação foi superior aumentos nas concentrações de aminoácidos de 43% para as folhas e 57%
mesmo à observada em plântulas submetidas a cada um desses estresses para as raízes. A combinação de deficiência de Mg e estresse térmico
isoladamente. Mudas deCoffea arábicasubmetidas à deficiência de Mg resultou na maior concentração de proteína no dia 30.
apresentaram um aumento na atividade DHAR de 173% no tecido foliar e
44% no tecido radicular. A exposição das mudas ao calor, por sua vez, levou
4. Discussão
a um aumento na atividade dessa enzima de 380% nas folhas e 92% nas
raízes ao final do experimento.
Um dos principais efeitos da deficiência de Mg e do estresse térmico é a
A combinação de deficiência de Mg e estresse térmico resultou nos
partição alterada de carboidratos. O aumento da concentração foliar de
maiores valores de atividade da glutationa redutase (GR) no dia 30.mesa 2).
fotoassimilados atua como um mecanismo de feedback negativo que inibe
No entanto, mesmo isoladamente, tanto a exclusão de Mg quanto o calor
enzimas nas etapas bioquímicas da fotossíntese.Hermans et al., 2004). A
desencadearam elevações na atividade do GR. Folhas e raízes de plântulas
interrupção do CO2A fixação, por sua vez, pode saturar a cadeia de
sem Mg apresentaram aumentos na atividade de GR de 117 e 52%,
transporte de elétrons devido ao acúmulo de NADPH.Hermans e
respectivamente, na última avaliação. A elevação da temperatura, por sua
Verbruggen, 2005; Da Silva et al., 2014). Altos níveis de equivalentes
vez, levou a um aumento da atividade da glutationa redutase de 147% no
redutores e componentes da cadeia de transporte de elétrons saturada
tecido foliar e 222% no tecido radicular aos 30 dias.
constituem condições favoráveis para a geração de ROS.Mittler, 2002).
Os níveis de malondialdeído (Fig. 5), um subproduto da peroxidação
Assim, o oxigênio aceita elétrons dos fotossistemas, gerando
lipídica, atingiu seus maiores valores devido à combinação de estresses
radical peróxido (O− 2), que, por sua vez, pode formar outras ROS como
(deficiência de Mg/35 °C) durante a segunda avaliação. No dia 30, folhas e
peróxido de hidrogênio (H2O2) e o radical hidroxila (OH−) através de uma
raízes de plântulas sem Mg a 25 °C apresentaram aumentos na produção de
série de reações (Gill e Tuteja, 2010). Além disso, o estresse térmico também
malondialdeído de 41% e 38%, respectivamente. A elevação da temperatura
causa o mau funcionamento do fotossistema II, o que reduz a eficiência do
de 25 a 35°C resultou em um aumento na peroxidação lipídica de 45% tanto
transporte de elétrons, aumentando assim a produção de ROS.Asthir, 2015).
nas folhas quanto nas raízes.
A combinação de deficiência de magnésio e calor resultou em níveis
As EROs são continuamente produzidas como subproduto de várias vias
mais baixos de proteína.Fig. 6), incluindo aqueles encontrados em cada uma
metabólicas localizadas em diferentes compartimentos celulares, como
dessas tensões isoladamente. Nas folhas, a deficiência de Mg e o calor
cloroplasto, mitocôndrias e peroxissomos.Sharma et al., 2012). Em condições
provocaram reduções de 31% e 10%, respectivamente, na concentração de
normais, as espécies reativas de oxigênio são efetivamente removidas por vários
proteína. Nas raízes, as reduções foram de 33% devido à deficiência de Mg e
mecanismos de defesa antioxidante. No entanto, sob condições de estresse, o
13% devido à elevação da temperatura de 25 para 35 °C.
equilíbrio entre a produção e a remoção de espécies reativas de oxigênio pode ser
Mudas deCoffea arábicasem Mg mostraram aumentos no amino
perturbado, desencadeando o estresse oxidativo.

122
DMd Silva et al.
(Gill e Tuteja, 2010). O distúrbio na homeostase celular devido à
superprodução de espécies reativas de oxigênio pode afetar muitas
funções celulares, danificando ácidos nucleicos, oxidando proteínas e
causando peroxidação de lipídios de membrana (Foyer e Noctor, 2005).
Assim, o acúmulo de EROs, que resulta de diversos estresses
ambientais, tem sido considerado a principal causa de perdas
significativas na produtividade de muitas culturas.Mittler, 2002).
Além do sistema antioxidante, outro mecanismo adaptativo chave
desenvolvido por muitas espécies de plantas quando submetidas a estresses
abióticos é o acúmulo de certos compostos orgânicos geralmente chamados de
osmólitos compatíveis.Asthir, 2015). Prolina, glicina betaína e açúcares solúveis
são alguns desses osmoprotetores e estão envolvidos na proteção e estabilização
de proteínas e membranas contra a ação oxidativa de espécies reativas de
oxigênio.Kumar et al., 2012). Embora os aumentos na produção de prolina sob
deficiência de Mg não tenham sido relatados anteriormente, nossos resultados (
tabela 1) apontam para a necessidade de estudos futuros, considerando os
diferentes papéis desempenhados pela prolina no metabolismo das plantas sob
condições de estresse.
O acúmulo de prolina é considerado um importante mecanismo
adaptativo de plantas submetidas à elevação de temperatura, pois é o
primeiro metabólito a participar diretamente do ajuste osmótico.Sakamoto e
Murata, 2002). Além disso, o aumento da produção de prolina, glicina
betaína e açúcares solúveis é fundamental para a proteção das estruturas
celulares contra danos causados pelo calor, mantendo a estabilidade da
membrana.Farooq et al., 2008). O aumento da produção de prolina também
está associado à elevação na biossíntese das xantofilas, que são pigmentos
responsáveis pela proteção contra os danos oxidativos desencadeados pelo
calor.Dobra et al., 2010). Em folhas de café, os níveis de prolina foram
correlacionados com H2O2(0,74), mostrando que o aumento na produção de
prolina é uma resposta aos níveis elevados dessa espécie reativa de
oxigênio.
Como o NADPH é essencial no processo de biossíntese de prolina,Lebre e
Agrião (1997)observaram que mesmo um pequeno aumento na biossíntese de
prolina tem um grande impacto no pool celular desse agente redutor. Assim, o
aumento da produção de prolina (tabela 1) sob deficiência de Mg e estresse
térmico também podem desempenhar um papel importante na prevenção da
formação de EROs pelo consumo excessivo de poder redutor. Além disso,Lebre e
Agrião (1997)sugeriram que a degradação da prolina após um período de estresse
pode ser responsável por fornecer equivalentes redutores para apoiar a geração
de ATP mitocondrial necessário para a recuperação pós-estresse.
No entanto, apesar da alta produção de prolina no dia 30, altos níveis de
H2O2ainda eram observados (tabela 1). Este peróxido de hidrogênio pode vir
tanto da fotorrespiração quanto da dismutação do radical superóxido pela
ação da superóxido dismutase. A ação da SOD é inerente a todos os
compartimentos subcelulares e fornece a primeira linha de defesa contra os
efeitos tóxicos dos altos níveis de ROS.Gill e Tuteja 2010). Além disso, por
removendo O
2, −SOD reduz o risco de produção de hidroxila
radical via reações de Haber-Weiss (Sharma et al., 2012).
Tanto a deficiência de Mg quanto o calor foram responsáveis por aumentar a
atividade da superóxido dismutase.Figura 1). No entanto, no trigésimo dia, o
aumento da atividade da SOD devido à elevação da temperatura foi maior do que
o desencadeado pela exclusão de Mg. A atividade da superóxido dismutase no
tecido foliar apresentou correlação de 0,83 com os níveis de peróxido de
hidrogênio, mostrando que o aumento da atividade da SOD está relacionado a
uma maior produção de H2O2, que deve então ser removido pela ação das
enzimas catalase e ascorbato peroxidase.
A catalase é uma das enzimas envolvidas no H2O2processo de remoção e
está localizado nos peroxissomos, citosol e mitocôndrias. No entanto, dentre
as enzimas envolvidas nesse processo, a CAT apresenta baixa afinidade pelo
H2O2, agindo preferencialmente sob alta H2O2concentrações (Gill e Tuteja,
2010). No presente estudo, folhas de mudas de cafeeiro submetidas a
ambos os estresses apresentaram altas concentrações de peróxido de
hidrogênio. Talvez aqueles altos níveis de H2O2poderia ser responsável pela
correlação de 0,73 entre H2O2e atividade da catalase. Além disso, a APX
também esteve envolvida na remoção de H2O2em folhas com correlação de
0,87. Por outro lado, concentrações mais baixas de H2O2e um
123
Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125
correlação não significativa entre os níveis desta espécie reativa de oxigênio
e a atividade da catalase foram observadas nas raízes. No entanto, uma
correlação de 0,63 entre H2O2concentração e atividade de APX, o que
sustenta que esta enzima tem maior afinidade pelo peróxido, atuando sob
baixa concentração de H2O2concentração (Sharma et al., 2012).
Menor atividade de CAT em plantas deCitrus reticulatasubmetidos à
deficiência de Mg pode ser reflexo de uma menor taxa de fotorrespiração,
uma vez que se observa uma redução na atividade da Rubisco.Tang et al.,
2012). Como resultado de uma redução na fotorrespiração, haveria menos
produção de H2O2, e sob tais condições a enzima mais eficaz na remoção
dessas EROs seria a ascorbato peroxidase, que possui maior afinidade pelo
peróxido de hidrogênio (Gill e Tuteja, 2010). Maior atividade de CAT em
Coffea arábicaplântulas submetidas ao estresse por calor pode ser explicada
por um aumento nas taxas de fotorrespiração, uma vez que H2O2A produção
por este processo é responsável pela maior parte do H2O2formado em
espécies C3 (Noctor et al., 2002).
A maior atividade de SOD, CAT e APX tem sido considerada um marcador
bioquímico adequado para a determinação de concentrações minerais
críticas e é considerada uma das primeiras respostas fisiológicas ao estresse
mineral em plantas.Blasco et al., 2015). A combinação de deficiência de Mg e
calor emCoffea arábicaplântulas resultaram em maiores atividades de SOD,
CAT e APX (Figs. 1, 2 e 3), bem como níveis mais elevados de prolina (tabela 1
), mostrando que o metabolismo antioxidante é ativo a fim de mitigar os
efeitos negativos da alta produção de EROs. No entanto, a concentração de
H2O2no trigésimo dia permaneceu alta (tabela 1), mostrando que, apesar da
resposta do sistema antioxidante, sua ação não foi suficiente para remover
o excesso de espécies reativas de oxigênio produzidas.
APX atua na conversão de H2O2em H2O enquanto oxida o ascorbato a
monodesidroascorbato (MDHA). O MDHA, por sua vez, precisa ser ainda
mais reduzido para manter os níveis de ascorbato para a atividade da
ascorbato peroxidase. A redução de monodesidroascorbato a ascorbato
pode ser realizada pela monodesidroascorbato redutase (MDHAR) através
do ciclo água-água ou pela ação da desidroascorbato redutase (DHAR) e
glutationa redutase (GR) através do ciclo ascorbato-glutationa. No ciclo
água-água, o MDHAR reduz o MDHA a ascorbato usando NADH
preferencialmente ao NADPH como doador de elétrons. No ciclo ascorbato-
glutationa, o MDHA é primeiro convertido em desidroascorbato (DHA) por
reações não enzimáticas; O DHA é então reduzido a ascorbato pela ação do
DHAR, que usa a glutationa como doador de elétrons. Então, a glutationa
oxidada deve então ser reduzida para manter a atividade da
desidroascorbato redutase. Essa redução é realizada pela glutationa
redutase e utiliza o NADPH como doador de elétrons.Sharma et al., 2012).
A glutationa redutase é uma enzima potencial no ciclo ascorbato-
glutationa e desempenha um papel essencial no sistema de defesa
antioxidante, mantendo o pool de glutationa reduzido. A glutationa
reduzida é essencial na regeneração do desidroascorbato pela enzima
desidroascorbato redutase.Gill e Tuteja, 2010). No processo de redução
da glutationa, o GR consome o excesso de poder redutor. Assim, além
de fazer parte do metabolismo antioxidante, o GR pode reduzir as
condições favoráveis para a produção de ERO consumindo o excesso
de poder redutor.
Níveis de ascorbato em folhas deCoffea arábicaforam correlacionados
com a atividade de APX (0,63), MDHAR (0,61) e GR (0,68). As raízes, por sua
vez, apresentaram correlações de 0,73, 0,71, 0,76 e 0,64 entre os níveis de
ascorbato e a atividade de APX, MDHAR, DHAR e GR, respectivamente. Como
o pool de ascorbato disponível para a ação da ascorbato peroxidase
depende da ação das enzimas MDHAR, DHAR e GR, é mais do que esperado
que a concentração dessa molécula antioxidante e a atividade dessas
enzimas apresentem comportamentos semelhantes. Essa ação conjunta de
moléculas e enzimas antioxidantes é fundamental na remoção de espécies
reativas de oxigênio. No entanto, quando a produção de ROS excede a
capacidade de remoção pelo sistema de metabolismo antioxidante, o
sistema não é capaz de fornecer proteção suficiente aos lipídios de
membrana, resultando em um aumento significativo nos níveis de
malondialdeído,Farhat et al., 2016).
DMd Silva et al.
A peroxidação da membrana compromete a função dos canais iônicos que são
inseridos na bicamada lipídica e garantem a seletividade da bicamada. Portanto, o
mau funcionamento dos canais iônicos tem como principal consequência o
comprometimento da permeabilidade através da membrana.Asthir, 2015). Assim,
o principal efeito da peroxidação lipídica é o dano à permeabilidade da
membrana. Além disso, é necessário enfatizar que as membranas possuem em
sua estrutura sensores sensíveis ao calor, que, por exemplo, auxiliam os vegetais
na ativação de seus mecanismos de defesa.Kumar et al., 2012). Portanto, o
comprometimento desses receptores pela peroxidação da bicamada lipídica pode
alterar a resposta da planta ao estresse. Assim, a estabilidade da membrana pode
ser considerada um importante parâmetro de tolerância das plântulas ao estresse,
principalmente ao calor.
Redução na concentração de proteína (Fig. 6) e o consequente aumento
nos níveis de aminoácidos (Fig. 7) devido à deficiência de Mg pode ser
explicado pela função do magnésio no processo de síntese proteica. Os
ribossomos são estruturas macromoleculares responsáveis pela
biossíntese de proteínas, e sua forma ativa requer a agregação de duas
subunidades; o uso de Mg é necessário para formar uma ponte entre eles (
Mathuis, 2009). Assim, a biossíntese de proteínas é fortemente reduzida sob
deficiência de Mg, levando a um aumento nas concentrações de
aminoácidos e seus precursores.Fischer et al., 1998). Em raízes de plântulas
de café, observou-se uma correlação de 0,78 entre Mg e níveis de proteína,
corroborando a hipótese de que a redução na concentração de Mg é
responsável pela redução na biossíntese de proteínas e consequente
aumento nos níveis de aminoácidos.
Por outro lado, o estresse térmico tem um efeito importante na inibição
da síntese de proteínas, bem como na desnaturação de proteínas.Howard,
2005). Acredita-se que a degradação de proteínas devido ao calor pode ser
acelerada pela estimulação da síntese de enzimas proteolíticas, que
catalisam a hidrólise das ligações peptídicas.Cooke et al., 1980). Além disso,
a diminuição do teor de proteína pode estar relacionada ao aumento na
produção de espécies reativas de oxigênio que visam componentes
celulares, como lipídios de membrana, ácidos nucléicos e proteínas.Gill e
Tuteja, 2010). Uma correlação de -0,83 entre os níveis de peróxido de
hidrogênio e a concentração de proteínas foi observada nas folhas do
cafeeiro, sugerindo o envolvimento de EROs na desnaturação de proteínas.
5. Conclusão
O estresse térmico é uma preocupação crescente na produção de muitas culturas
devido às atuais tendências de aquecimento global. A deficiência de Mg, por sua vez,
tornou-se uma deficiência nutricional importante nos solos agrícolas, principalmente no
caso do café brasileiro, uma vez que o cultivo do café tem sido implantado em fronteiras
agrícolas, onde os solos são ácidos, com baixa capacidade de troca catiônica e pobres em
magnésio . DentroCafé arábica,os efeitos da elevação da temperatura no metabolismo
antioxidante são mais pronunciados quando as plântulas são expostas simultaneamente
à deficiência de Mg. Quando submetidas ao estresse térmico, mudas de cafeeiro sob
nutrição adequada de Mg apresentaram menor produção de peróxido de hidrogênio e,
consequentemente, baixa peroxidação lipídica e desnaturação de proteínas do que
aquelas deficientes em Mg. Portanto, a nutrição adequada de Mg é essencial para
minimizar os danos oxidativos causados pelo estresse térmico em mudas de cafeeiro.
Agradecimentos
A pesquisa foi apoiada pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento
Científico e Tecnológico (CNPq), Coordenação de Aperfeiçoamento de
Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Amparo à Pesquisa do
Estado de Minas Gerais (FAPEMIG).
Referências
Arakawa, N., Tsutsumi, K., Sanceda, NG, Kurata, T., Inagaki, C., 1981. Uma rápida e
método sensível para a determinação de ácido ascórbico usando 4,7-difenil-1,10-
fenantrolina. Agrícola. Biol. Química 45 (5), 1289-1290.http://dx.doi.org/10.1080/
00021369.1981.10864697.
124
Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125
Asthir, B., 2015. Mecanismos de tolerância ao calor em plantas cultivadas. Biol. Planta 59 (4), 620-628.
http://dx.doi.org/10.1007/s10535-015-0539-5.
Bates, LS, Waldren, RP, Teare, ID, 1973. Determinação rápida de prolina livre para
estudos de estresse hídrico. Solo da Planta 39 (1), 205–2017.http://dx.doi.org/
10.1007/BF00018060.
Biemelt, S., Keetman, U., Albrecht, G., 1998. Reaeração após hipóxia ou anóxia
leva à ativação do sistema de defesa antioxidante em raízes de plântulas de trigo.
Plant Physiol. 116, 2651-2658.http://dx.doi.org/10.1104/pp.116.2.651. Blasco, B.,
Graham, NS, Broadley, MR, 2015. Resposta antioxidante e carboxilato
metabolismo emBrassica rapaexpostos a diferentes fontes externas de Zn, Ca e Mg.
J. Plant Physiol. 176, 16-24.http://dx.doi.org/10.1016/j.jplph.2014.07.029. Bradford,
MM, 1976. Um método rápido e sensível para a quantificação de microgramas
quantidades de proteína utilizando o princípio de ligação proteína-corante. Anal. Bioquímica. 72,
248-254.
Buege, JA, Aust, SD, 1978. Peroxidação lipídica microssomal. Métodos Enzimol. 52,
302–310.
Cakmak, I., Yazici, AM, 2010. Magnésio: um elemento esquecido na produção agrícola.
Melhores colheitas 94, 23-25.
Cakmak, I., Strbac, D., Marschner, H., 1993. Atividades de eliminação de peróxido de hidrogênio
enzimas na germinação de sementes de trigo. J. Exp. Robô. 44 (1), 127-132.http://dx.doi.org/
10.1093/jxb/44.1.127.
Candan, N., Tarhan, L., 2003. Relação entre teor de clorofila-carotenoide, anti-
atividades de enzimas oxidantes e níveis de peroxidação lipídica por Mg2+deficiência no
Mentha pulegiumfolhas. Plant Physiol. Bioch. 41 (1), 35–40.http://dx.doi.org/10. 1016/
S0981-9428(02)00006-2.
Cooke, RJ, Roberts, K., Davies, DD, 1980. Modelo para degradação de proteínas induzida por estresse
dentroLema menor.Plant Physiol. 66 (6), 1119-1122.http://dx.doi.org/10.1104/pp.66.
6.1119.
Da Silva, DM, Brandão, RI, Alves, JD, Santos, MO, Souza, KRD, Silveira, HRO,
2014. Impactos fisiológicos e bioquímicos da deficiência de magnésio em duas
cultivares de café. Planta Solo 382, 133–150.http://dx.doi.org/10.1007/
s11104-014-2150-5.
Dobra, J., Motyka, V., Dobrev, P., Malbeck, J., Prasil, IT, Haisel, D., Gaudinova, A.,
Havlova, M., Gubis, J., Vankova, R., 2010. Comparação das respostas hormonais ao
calor, seca e estresse combinado em plantas de tabaco com elevado teor de prolina.
J. Plant Physiol. 167 (16), 1360-1370.http://dx.doi.org/10.1016/j.jplph.2010.05.013. Du,
YD, Tachibana, S., 1994. Fotossíntese, translocação e meta-
bolismo em raízes de pepino mantidas em temperatura supra-ótima. J. Japão. Soc. Hort. Sci.
63 (2), 401-408.http://dx.doi.org/10.2503/jjshs.63.401.
Equipe Estatcamp, 2014. Software Action. Estatcamp- Consultoria em estatística e qua-
lidade, São Carlos – SP, Brasil.http://www.portalaction.com.br/.
Farhat, N., Elkhouni, A., Zorrig, W., Smaoui, A., Abdelly, C., Rabhi, M., 2016. Efeitos de
deficiência de magnésio na fotossíntese e partição de carboidratos. Acta Fisiol.
Plantar. 38, 145-155.http://dx.doi.org/10.1007/s11738-016-2165-z. Farooq, M.,
Basra, SMA, Wahid, A., Cheema, ZA, Cheema, MA, Khaliq, A., 2008.
Papel fisiológico da glicinebetaína aplicada exogenamente para melhorar a tolerância à
seca de arroz aromático de grão fino.Oryza sativaEU.). J. Agron. Crop Sci. 194 (5), 325-333.
http://dx.doi.org/10.1111/j.1439-037X.2008.00323.x.
Ferreira, DF, 2011. Sisvar: um sistema computacional de análise estatística. Ciênc. Agrotec. 35 (6),
1039-1042.http://dx.doi.org/10.1590/S1413-70542011000600001.
Fischer, ES, Lohaus, G., Heineke, D., Heldt, HW, 1998. A deficiência de magnésio resulta em
acúmulo de carboidratos e aminoácidos nas folhas fonte e dreno do espinafre. Fisiol.
Plantar. 102 (1), 16-20.http://dx.doi.org/10.1034/j.1399-3054.1998. 1020103.x.
Foyer, CH, Noctor, G., 2000. Processamento de oxigênio na fotossíntese: regulação e sinalização
nando. Novo Fitol. 146 (3), 359-388.http://dx.doi.org/10.1046/j.1469-8137.2000.
00667.x.
Giannopolitis, CN, Ries, SK, 1977. Superóxido dismutases: I. Ocorrência em
plantas. Plant Physiol. 59 (2), 309-314.http://dx.doi.org/10.1104/pp.59.2.309. Gill, SS, Tuteja,
N., 2010. Espécies reativas de oxigênio e maquinaria antioxidante em abióticos
tolerância ao estresse em plantas cultivadas. Plant Physiol. Bioquímica. 48 (12), 909-930.http://dx.
doi.org/10.1016/j.plaphy.2010.08.016.
Gransee, A., Führs, H., 2013. Mobilidade do magnésio em solos como desafio para solo e planta
análise, fertilização com magnésio e absorção de raízes em condições adversas de
crescimento. Solo da Planta 368 (1), 5–21.http://dx.doi.org/10.1007/s11104-012-1567-y.
Guimarães, RJ, Mendes, ANG, Souza, CAS, 2002. Cafeicultura. FAEPE/UFLA, Lavras. Hare, PD,
Cress, WA, 1997. Implicações metabólicas do acúmulo de prolina induzida por estresse
lação em plantas. Regul de crescimento de plantas. 21 (2), 79-102.http://dx.doi.org/10.1023/
A:1005703923347.
Hermans, C., Verbruggen, N., 2005. Caracterização fisiológica da deficiência de Mg em
Arabidopsis thaliana.J. Exp. Robô. 56 (418), 2153-2161.http://dx.doi.org/10.1093/jxb/
eri215.
Hermans, C., Johnson, GN, Strasser, RJ, Verbruggen, N., 2004. Características fisiológicas
caracterização da deficiência de magnésio em beterraba sacarina: aclimatação ao baixo teor de
magnésio afeta diferencialmente os fotossistemas I e II. Planta 220 (2), 344-355.http://dx.doi. org/
10.1007/s00425-004-1340-4.
Hoagland, D., Arnon, DI, 1950. O método de cultura de água para o cultivo de plantas sem
solo. Califórnia Agr. Exp. Stn. 42, 1-32.
Hossain, MA, Nakano, Y., Asada, K., 1984. Monodesidroascorbato redutase em espinafre
cloroplastos e sua participação na regeneração de ascorbato para eliminação de peróxido
de hidrogênio. Plant Cell Physiol. 25 (3), 385-395.http://dx.doi.org/10.1093/
oxfordjournals.pcp.a076726.
Howarth, CJ, 2005. Melhorias genéticas de tolerância à alta temperatura. Em: Ashraf,
M., Harris, PJC (Eds.), Abiotic Stresses: Plant Resistance Through Breeding and
Molecular Approaches. Howarth Press Inc, Nova York.
Karabal, E., Yücel, M., Öktem, HA, 2003. Respostas antioxidantes de tolerantes e sensíveis
DMd Silva et al.
cultivares de cevada à toxicidade do boro. Planta Sci. 164 (6), 925-933.http://dx.doi.org/10.
1016/S0168-9452(03)00067-0.
Kumar, RR, Goswami, S., Sharma, SK, Singh, K., Gadpayle, KA, Kumar, N., Rai, GK,
Singh, M., Rai, RD, 2012. A proteção contra o estresse térmico no trigo envolve a mudança na
estabilidade da membrana celular, enzimas antioxidantes, osmólito, H2O2e transcrição da proteína de
choque térmico. Int. J. Plant Physiol. Bioquímica. 4 (4), 83-91.http://dx.doi.org/10. 5897/IJPPB12.008.
Luo, Y., Li, WM, Wang, W., 2008. Trealose: protetor de enzimas antioxidantes ou re-
necrófago de espécies de oxigênio ativo sob estresse térmico? Environ. xp. Robô. 63
(1-3), 378-384.http://dx.doi.org/10.1016/j.envexpbot.2007.11.016.
Maathuis, FJM, 2009. Funções fisiológicas dos macronutrientes minerais. atual Opinião.
Planta Biol. 12 (3), 250-258.http://dx.doi.org/10.1016/j.pbi.2009.04.003. Marutani,
Y., Yamauchi, Y., Kimura, Y., Mizutani, M., Sugimoto, Y., 2012. Danos a
fotossistema II devido ao estresse térmico sem fluxo de elétrons impulsionado pela luz:
envolvimento da introdução aprimorada de poder redutor nas membranas dos tilacóides.
Planta 236 (2), 753-761.http://dx.doi.org/10.1007/s00425-012-1647-5.
Mengutay, M., Ceylan, Y., Kutman, UB, Cakmak, I., 2013. Nutrição adequada de magnésio
mitigar os efeitos adversos do estresse térmico no milho e no trigo. Planta Solo 368 (1), 57–
72.http://dx.doi.org/10.1007/s11104-013-1761-6.
Mittler, R., 2002. Estresse oxidativo, antioxidantes e tolerância ao estresse. Tendências Plant Sci. 7,
405-410.http://dx.doi.org/10.1016/S1360-1385(02)02312-9.
Nakano, Y., Asada, K., 1981. O peróxido de hidrogênio é eliminado por peróxidos específicos de ascorbato.
oxidase em cloroplastos de espinafre. Plant Cell Physiol. 22 (5), 867-880.http://dx.doi. org/
10.1093/oxfordjournals.pcp.a076232.
Noctor, G., Veljovic-Jovanovic, S., Driscoll, S., Novitskaya, L., Foyer, CH, 2002. Seca
e carga oxidativa nas folhas de plantas C3: um papel predominante para a
fotorrespiração? Ana Robô. 89, 841-850.http://dx.doi.org/10.1093/aob/mcf096.
Quiles, MJ, López, NI, 2004. Fotoinibição dos fotossistemas I e II induzida por ex-
postura à alta intensidade luminosa durante o crescimento de plantas de aveia efeitos sobre o cloroplástico
125
Scientia Horticulturae 224 (2017) 115–125
Complexo NADH desidrogenase. Planta Sci. 166, 815-823.http://dx.doi.org/10.1016/
j.plantsci.2003.11.025.
Rivero, RM, Mestre, TC, Mittler, R., Rubio, F., Garcia-Sanchez, F., Martinez, V., 2014.
O efeito combinado de salinidade e calor revela uma resposta fisiológica, bioquímica e
molecular específica em plantas de tomate. Ambiente da célula vegetal. 37 (5), 1059-1073.
http://dx.doi.org/10.1111/pce.12199.
Sakamoto, A., Murata, N., 2002. O papel da glicina betaína na proteção de plantas
do estresse: pistas de plantas transgênicas. Ambiente da célula vegetal. 25 (2), 163-171.
http://dx.doi.org/10.1046/j.0016-8025.2001.00790.x.
Sharma, P., Jha, AB, Dubey, RS, Pessarakli, M., 2012. Espécies reativas de oxigênio, oxi-
dano dativo e mecanismo de defesa antioxidante em plantas sob condições
estressantes. J. Bot. 1-26.http://dx.doi.org/10.1155/2012/217037.
Tang, N., Li, Y., Chen, LS, 2012. Comprometimento induzido por deficiência de magnésio de foto-
síntese em folhas de árvores frutíferas Citrus reticulata acompanhada de regulação positiva do
metabolismo antioxidante para evitar danos foto-oxidativos. J. Plant Nutr. Ciência do Solo. 75 (5),
784-793.
Tomaz, MA, Silva, SR, Sakiyama, NS, Martinez, HEP, 2003. Eficiência de absorção,
transições de cálcio, magnésio e enxofre por mudas enxertadasCoffea arábica.Rev.
Brás. Ciênc. Solo 27 (5), 885-892.http://dx.doi.org/10.1590/
S0100-06832003000500013.
Velikova, V., Yordanov, I., Edreva, A., 2000. Estresse oxidativo e alguns sistemas antioxidantes
em plantas de feijão tratadas com chuva ácida: papel protetor de poliaminas exógenas.
Plantar. Sci. 151 (1), 59-66.http://dx.doi.org/10.1016/S0168-9452(99)00197-1. Yemm, EW,
Cocking, EC, Ricketts, RE, 1955. A determinação de aminoácidos com
ninidrina. Analista 80, 209-214.http://dx.doi.org/10.1039/AN9558000209. Zanandrea,
I., Alves, JD, Deuner, S., Goulart, PFP, Henrique, PC, Silveira, NM, 2009.
Tolerância deSesbania virgataplantas a inundações. Aust. J. Bot. 57 (8), 661-669.http://
dx.doi.org/10.1071/BT09144.