Este encarte é parte integrante da Revista Biodiesel nº 47.

Não pode ser vendido separadamente. Número 14 • Julho 2010

Assuntos Impacto da adição de biodiesel ao óleo diesel durante a estocagem:

um enfoque microbiológico e controle
técnicos FÁTIMA M. BENTO1; FRANCIELLE BÜCKER 1; NAIARA SANTESTEVAN 1; EDUARDO H. S. CAVALCANTI 2; ADRIANE ZIMMER 1;
CHRISTINE GAYLARDE; FLÁVIO CAMARGO 3;
1 UFRGS- Departamento de Microbiologia , Parasitologia e ImunoIogia CBS, Porto Alegre, Rio Grande do Sul. e-mail: fatima.bento@
Nesta edição de número 14 ufrgs.br
2 Instituto Nacional de Tecnologia - Divisão de Corrosão e Degradação, Rio de Janeiro, Rio de Janeiro
temos um importante artigo 3 UFRGS - Departamento de Solos, Porto Alegre, Rio Grande do Sul

gênio e da umidade, verifica-se A baixa estabilidade ao ar-

sobre o impacto da adição de
Introdução
biodiesel ao óleo diesel durante a
O biodiesel, não obstante
as suas inúmeras vantagens téc-
estocagem.
nicas e estratégicas, que o cre-
denciam como um sucedâneo
Nele , poderemos acompanhar
natural para o diesel de petróleo,
é um combustível extremamen-
um enfoque microbiológico sobre
te instável, notadamente quando
exposto a ação da umidade e
o assunto, elucidando diversas
do oxigênio do ar. A sua eleva-
da susceptibilidade à oxidação,
questões importantes que
que tem como subprodutos pri-
mários a formação de peróxidos
afetam o sistema de distribuição
e ácidos, é retratada como um
dos principais gargalos limitan-
do biodiesel.
tes para a sua plena aceitação
face as alterações observadas
em muitas de suas característi-
que tanto a interferência da luz,
do calor, como o contato com
metais, aceleram sobremaneira
o estabelecimento de proces-
sos degradativos de natureza
abiótica, também denominados
de processos de envelhecimen-
to, acima relatados. Observa-se
com efeito a elevação da cor-
rosividade do biodiesel, bem
como nas fases mais avançadas
dos processos oxidativos a for-
mação de polímeros solúveis
e insolúveis, sob a forma de
depósitos e borras, que geram
entupimentos e perdas. Com
efeito, é comum a adoção pelo
mercado do termo vida de pra-
teleira do biodiesel, que retrata
mazenamento do biodiesel é
particularmente reportada para
tipos de biodiesel ricos em ca-
deias carbônicas com predo-
minância de compostos insatu-
rados, como as presentes no
biodiesel metílico de soja, que
domina o mercado brasileiro.
Os processos de natureza degra-
dativa acima mencionados, afli-
gem notadamente empresas
produtoras, comercializadoras e
distribuidoras de combustíveis,
e exigem atenção analítica re-
dobrada, monitoramento con-
tínuo e adoção de medidas
mitigadoras, como a utilização
de aditivos antioxidantes (Caval-
canti et al, 2009). As condições

índice cas físico-químicas essenciais

Impacto da adição de
biodiesel ao óleo diesel
durante a estocagem:
um enfoque microbiológico
e controle
1 dissolvida ou de emulsões na
O papel da produtividade no
aumento do valor bruto da pro-
dução de soja no mato grosso
de 1975 a 2007
6 gotículas, que culminam com a
Incorporação de novas áreas
ao cultivo do dendê na bahia
e seu impacto sobre o valor
da produção, 1988 - 2007
8
REVISTA BIODIESEL
para garantir o seu uso pleno
o período em que o biodiesel
estocado permanece aderente a
úmidas e quentes, que prevale-
cem em boa parte do território
(Lutterbach et al, 2007). A ação sua especificação estabelecida brasileiro, bem como a sua ex-
da umidade também promo- pela ANP (ANP, 2008). posição a climas temperados e
ve alterações no perfil de qua-
lidade do biodiesel, induzindo
não só o aparecimento de água
massa de biodiesel estocado por
longos períodos. Teores eleva-
dos de água dissolvida geram o
surgimento crescente de micro-
presença indesejável de uma ter-
ceira fase de água livre no fundo
de tanques, condição essa ex-
tremamente atrativa para a pro-
liferação de microorganismos.
Simultaneamente a ação do oxi-
CADERNO TÉCNICO
1

frios, que predominam no sul do
Brasil, tendem a acirrar o estabe-
lecimento de condições capazes
de introduzir alterações significa-
tivas nas características originais
de fábrica do produto. Caso não
sejam tomadas medidas preven-
tivas e de controle, como as re-
comendadas na norma brasilei-
ra ABNT NBR 15552 (ABNT, 2008),
é possível que um biodiesel “OK
posto-fábrica”, ou seja, reconhe-
cido como em conformidade
com a especificação brasileira,
torne-se inadequado para adição
ao diesel e inapropriado para uso
(Cavalcanti, 2009).
Medidas para prevenção e tra-
tamento da contaminação microbia-
na: Para evitar o desenvolvimen-
to de populações microbianas
deteriogênicas no combustível
durante o armazenamento são
indicados procedimentos físicos
e químicos que são fundamen-
tais para a qualidade final do
produto. Os tanques de arma-
zenamento que apresentam
contaminação microbiana são
identificados pela presença de
uma fase aquosa e uma fase
oleosa, cujo monitoramento
deve ser feito de forma espe-
cífica e separadamente (Bento
& Gaylarde, 2001; Klinkspon,
2009). Na presença das duas
fases, deve-se inspecionar a
interface óleo - água, a fim de
REVISTA BIODIESEL
As alterações de qualidade
do biodiesel e misturas ao longo
do tempo de estocagem não se
restringem apenas ao estabele-
cimento de processos abióticos,
como a oxidação, absorção de
água, formação de emulsões e
de depósitos acima relatados. O
aparecimento de uma fase de
água livre é geralmente acom-
panhado pelo estabelecimento
de processos de contaminação
por microrganismos no fundo
de reservatórios e tanques. Se-
gundo Passman (2005), é na
presença de água, que os micro-
organismos encontram as con-
dições ideais para seu desen-
volvimento, comprometendo a
qualidade final do combustível.
Historicamente, a contaminação
microbiana durante o armaze-
namento sem controle tem sido
percebida como um problema
agudo em óleo diesel. Com a
introdução de biodiesel tem-se
verificado uma maior suscetibili-
dade da nova mistura (diesel e
biodiesel), devido a um aumen-
to na geração de sedimentos
biológicos (Bento et al., 2006;
Mariano et al., 2008; Siegert,
se detectar a presença de se-
dimentos, indicativa do cresci-
mento microbiano nesta região.
Os procedimentos de limpeza
e drenagens regulares são me-
didas físicas que impedem o
acúmulo da água formada nos
lastros e constituem-se em uma
forma estratégica no controle da
infecção microbiana (Passman,
2005; Siegert, 2009; Klinkspon,
2009). Em alguns tipos de for-
mato de tanque, torna-se im-
possível a drenagem em certos
pontos, além da infecção micro-
biana se difundir de um tanque
para outro com a passagem de
um combustível sem contami-
nação, através de mangueiras,
ou filtros, que tenham sido uti-
lizados para um combustível
2
2009; Klinkspon, 2009; Bucker et
al., 2010). Esta percepção reflete
o impacto dramático e inequívo-
co dos entupimentos de filtros,
por bio-sedimentos, e da inci-
dência de corrosão influenciada
por microorganismos presentes
nos tanques (bio-corrosão), duas
consequências importantes que
geralmente aparecem quando o
processo de contaminação mi-
crobiana está instalado. Outras
consequências como a redução
na estabilidade química ou o
aumento da corrosividade do
combustível geralmente ocor-
rem concomitantemente (Hill &
Hill,2008). Vários fatores contri-
buem, pois tradicionalmente os
técnicos em microbiologia, têm
pouco acesso a literatura que
apresenta detalhamentos sobre
a biodeterioração do produto,
além do que muitas caracterís-
ticas são similares ao processo
deteriogênico de natureza não
biológica. Neste sentido, a pu-
blicação pela ASTM em 2003
do Manual de Combustíveis e
Microbiologia de Combustíveis-
Fundamentos, Diagnóstico e
Controle da Contaminação por
contaminado. A preservação
do combustível também pode
ocorrer através da aplicação de
compostos químicos (biocidas)
que impedem e controlam o
desenvolvimento de populações
microbianas deteriogênicas. Os
biocidas ou antimicrobianos
compreendem produtos com
largo espectro de componentes
de estruturas químicas diversas
(compostos inorgânicos e orgâ-
nicos). Com relação ao procedi-
mento de aplicação pode-se ci-
tar o tratamento contínuo (mais
frequente, com concentrações
baixas) e o tratamento de cho-
que (com concentrações altas)
pouco frequente, aplicados a
intervalos pré-determinados. As
exigências de um biocida para o
Frederick Passman tem como
objetivo apresentar a um publi-
co bem diverso, uma visão ge-
ral sobre a biodeterioração que
ocorre em combustíveis armaze-
nados por todo o mundo. Com
algumas exceções, as especifica-
ções do sistema e programas de
monitoramento não facilitam a
detecção da biodeterioração. Em
1991, Hartmam e seus colegas
no Instituto de Pesquisa Biológi-
ca em Israel, apresentaram um
programa de computador custo-
mizado para pessoas responsá-
veis pelo sistema de estocagem
de combustível, salientando
que através da coleta regular de
dados que deveriam melhorar
o entendimento do processo
de biodeterioração. Mas várias
questões permanecem e geram
um debate filosófico: Quais são
os números de microorganismos
que representam uma significan-
te contaminação microbiana? A
integridade do produto é afeta-
da? Apenas a drenagem dos tan-
ques pode evitar a geração de
sedimentos biológicos? Os cus-
tos de biodeterioração justificam
os custos de monitoramento?
uso durante o armazenamento
de combustíveis incluem: am-
plo espectro de ação (atividade
contra fungos, bactérias aeró-
bias e anaeróbias); capacidade
de manter o seu efeito inibidor
em presença de outras substân-
cias no meio em condições de
operação semelhantes; não ser
corrosivo ao sistema; apresentar
propriedades de biodegradabi-
lidade; coeficiente de partição
que garanta ação nas fases ole-
osa e aquosa e ter baixo custo
(Passman, 2003; Siegert, 2009;
Hill & Hill, 2008; Klinkspon, 2009)
. Recomenda-se um ensaio pré-
vio, preferencialmente nas con-
dições reais de operação, ou em
laboratório, com a determinação
de concentração ótima, assim
CADERNO TÉCNICO

como da natureza do compo-
nente ativo mais apropriado.
Segundo Scott (2000), uma das
falhas que podem ocorrer, por
exemplo, em programas de mo-
nitoramento da biocorrosão é a
medida incorreta dos biocidas.
Geralmente, são adicionados
no sistema automaticamente,
conforme rotinas programadas,
segundo dosagens informa-
das pelo fabricante. Entretanto,
poucos são os detalhes sobre a
quantidade de biocida efetivo
recebido, ou uma medida de
seu efeito residual no sistema.
Outro aspecto a ser considera-
do, é a falha em correlacionar
as doses de biocida com con-
tagens microbianas e taxas de
corrosão. Os números micro-
bianos no sistema devem ser
analisados antes, durante e por
períodos frequentes depois da
ação do biocida. Assim como
as taxas de corrosão de cupons
metálicos deveriam ser acompa-
nhados durante o tratamento
com o biocida.
A utilização de agentes quí-
micos no controle da contami-
nação microbiana em tanques
de estocagem de combustíveis
ainda se constitui em uma alter-
nativa pouca conhecida e com
muitas dúvidas a serem esclare-
cidas para o setor do petróleo.
Dentre elas, qual o biocida indi-
cado, quais as concentrações a
serem utilizadas, qual a fase a
se tratar (fase oleosa, interface
ou a fase aquosa), qual o tem-
po de preservação do combus-
tível pelo biocida, como realizar
o descarte da fase aquosa dos
tanques de óleo diesel com bio-
diesel tratado com biocida. Por
se tratar de um produto biocida
é preciso que esteja licenciado
junto ao órgão ambiental com-
petente pela indústria produtora.
Uma das maiores preocupações
de quem armazena o combustí-
vel esta em manter a qualidade
final do produto. Se a adição de
REVISTA BIODIESEL
um preservante químico traz esta
garantia, outra preocupação do
setor tem sido como liberar um
combustível tratado com biocida
no ambiente de forma segura. A
orientação dos produtores des-
tes compostos químicos, para o
caso da água de lastro do tanque
é a de se diluir em água e em
alguns casos realizar a desativa-
ção com outros compostos (sais
inorgânicos). Algumas empresas
garantem que se o biocida é cor-
retamente utilizado, juntamente
com o combustível ele deveria
ser transformado em produtos
de combustão pelo motor (Sie-
gert, 2009). A utilização de bio-
cidas sintetizados especialmente
para o uso em combustíveis e
biocombustíveis tem sido reco-
mendada nos Estados Unidos e
Europa (Passman, 2003; Siegert,
2009). No Brasil, poucos traba-
lhos na literatura abordam estu-
dos com biocidas no controle da
contaminação microbiana com
combustíveis. Carecemos de es-
tudos sistemáticos sobre os efei-
tos, a ação antimicrobiana com
microorganismos deteriogêni-
cos e principalmente estudos de
validação de produtos biocidas,
bem como do impacto decor-
rente do descarte inapropriado
no ambiente. Neste sentido, o
objetivo do presente trabalho
foi apresentar os resultados preli-
minares de estudos conduzidos
no âmbito dos projetos associa-
dos ao estabelecimento de pro-
cessos microbianos no biodiesel
estocado, ora desenvolvido pe-
las equipes integrantes da Rede
Brasileira de Estudos e Projetos
sobre Estabilidade, Armazena-
mento e Problemas Associados
(REDE ARMAZBIODI), iniciativa
financiada com recursos do MCT
e da FINEP, liderada pelo Institu-
to Nacional de Tecnologia. Neste
trabalho analisa-se a efetividade
de quatro biocidas em controlar
e eliminar fungos deteriogêni-
cos em diesel e biodiesel.
3
Material e Métodos
Biocidas: Foram conduzidos
experimentos para determinar a
efetividade de quatro antimicro-
bianos indicados para uso em
combustíveis sobre fungos dete-
riogênicos isolados de óleo die-
sel (Bento et al., 2005) Aspergillus
fumigatus e Candida silvicola,
e as de biodiesel Paecilomyces
sp. e Rhodotorula sp. (Bucker et
al., 2010): Biocida A (5-cloro-2-
metil-4-isotiazolin4-ona e 2-me-
til-4 isotiazolin-4-ona), Biocida
B (4,4-methylene-bis-5-methyl-
oxazolidine e isotiazolinonas),
Biocida C (2,2’ - (1-methyltrime-
thylenedioxy) bis - (4-methyl-1, 3,
2-dioxaborinane);2,2’ - oxybis (4,
4, 6 - trimethyl-1, 3, 2-dioxaborina-
ne) e Biocida D (sodium dime-
thyldithiocarbamante).
Concentração Mínima Ini-
bitória e Biocida (CMI e CMB):
A determinação da concentração
mínima inibitória (CMI) do bioci-
da foi realizada através do méto-
do de diluição em caldo de cul-
tura. Uma solução de 2000ppm
foi preparada e em frascos este-
rilizados, com capacidade para
15mL, adicionou-se 4mL de caldo
malte e 4mL da solução-estoque
do biocida de 2000ppm. Foram
realizadas diluições sucessivas
em caldo malte, obtendo-se as
concentrações de 1000ppm;
500ppm; 250ppm; 125ppm;
62,5ppm; 31,2ppm; 15,6ppm;
6,4ppm; 3,2ppm; 1,6ppm e 0ppp
(controle). Os ensaios foram
realizados em triplicata e após
realizada as diluições, foram adi-
cionados 107 esporos ou células.
mL-1. Os tubos foram incubados
a 28°C, e a observação do cres-
cimento após 48 horas e 7 dias
para filamentosos e leveduras
respectivamente. A determina-
ção da CMI foi realizada através
da inibição do crescimento dos
fungos nas diferentes concentra-
ções do biocida pela observação
visual. A partir do tubo, em que
houve a inibição do crescimento
(CMI), retirou-se uma alíquota de
50µL, que foi inoculada em pla-
cas de 96 poços de poliestireno
(150µL de caldo malte). Uma alí-
quota de 50µL dos tubos com as
concentrações de biocida supe-
riores a mínima inibitória também
foi retirada e inoculada. As placas
foram incubadas a 28°C, durante
10 dias. A concentração mínima
biocida (CMB) foi determinada
através da ausência absoluta de
crescimento dos fungos nas dife-
rentes concentrações do biocida
testadas.
Avaliação do biocida em
misturas de diesel e biodiesel:
A partir dos resultados da CMI e
CMB foi avaliado a atividade an-
timicrobiana dos produtos com
combustível. Foram utilizados
amostras de biodiesel metílico
de soja de origem comercial em
consonância com a Especifica-
ção da ANP (ANP, 2008), bem
como de óleo diesel metropo-
litano, com um teor máximo
de enxofre de 500 ppm (S 500).
Foram preparados frascos com 4
mL de diesel puro B0 (100% de
óleo diesel metropolitano), de
biodiesel metílico de soja puro
B100 (100% biodiesel metílico de
soja), bem como das misturas:
B2 (2% biodiesel e 98% diesel) e
B5 (5% biodiesel e 95% diesel).
Amostras de 4 mL de solução
com meio mineral M1 (Bucker et
al, 2010) na concentração final de
0, 10, 50, 100, 200 e 400 ppm do
biocida Biocida A e, 0, 100, 300
e 500 ppm do Biocida B foram
também preparadas. Cada trata-
mento foi realizado em triplicata
e a cada frasco foi adicionado o
inóculo dos fungos. Os tempos
estipulados para o contato com
o biocida foram de 30 minutos,
1, 4, 6, 24, 48, 72 horas, 7 e 10
dias, e amostras de 50µL foram
retiradas e inoculadas em placas.
As placas com caldo malte e com
as alíquotas retiradas após cada
tempo de contato com o biocida,
foram incubadas á 28ºC. A res-
posta de cada microorganismo
CADERNO TÉCNICO
testado foi expressa com escores
que indicaram crescimento ou
não no meio de cultura, ou seja,
a presença de micélio para os
fungos filamentosos, e a turva-
ção do meio para as leveduras.
Resultados
A concentração mínima ini-
bitória (CMI) de um biocida cor-
responde a menor concentração
em que um agente antimicrobia-
no impede o crescimento visível
de um microorganismo no teste
de sensibilidade por diluição
em ágar ou caldo, enquanto a
concentração mínima biocida
(CMB) se refere à quantidade do
biocida que é capaz de erradicar
a população alvo. Na Tabela 1,
pode-se observar a comparação
entre as concentrações CMI e
CMB dos biocidas A, B e C. A de-
terminação da concentração mí-
nima biocida (CMB), assim como
a CMI revelou que nenhum dos
microorganismos avaliados foi
suscetível ao ingrediente ativo
presente no Biocida D, sendo
assim não foi considerado na
etapa seguinte. A avaliação da
CMI e CMB é apenas orientativa,
com a informação do espec-
tro possível de ação, porém é
conduzida em condições ideais
(meios de cultura e condições
assépticas). As concentrações
determinadas como inibitórias
REVISTA BIODIESEL
nesta condição, podem não
corresponder a concentração
necessária para controlar uma
determinada população nas con-
dições de um ambiente real, o
tanque. Na segunda etapa do
estudo, avaliou-se as concentra-
ções CMI e CMB em um sistema
modelo, com uma fase aquosa
e uma fase oleosa (Tabelas 2 e
3). Uma característica importante
do produto a ser considerada é o
coeficiente de partição, que é a
afinidade que o biocida tem pela
fase combustível e ou pela fase
água, sendo que esta proprie-
dade tem uma relação direta de
efetividade e tempo de preser-
vação (Gaylarde et al., 1999; Pas-
sman, 2003) . O Biocida A vem
sendo investigado com relação a
sua efetividade a baixas concen-
trações contra microorganismos
isolados de óleo diesel conta-
minado e os resultados obtidos
neste estudo corroboram com
os encontrados na literatura. Am-
plo espectro de atividade é uma
das características desejadas
de um antimicrobiano para uso
em tanques, pois é necessário
avaliar a efetividade do biocida
sobre outros microorganismos
deteriogênicos do sistema. Ben-
to & Gaylarde, (2001) em uma
avaliação em laboratório de dife-
rentes concentrações do biocida
isotiazolona, observaram que 1
e 10ppm de ingrediente ativo fo-
ram capazes de prevenir o cres-
cimento de microorganismos
em meio Bushnell-Hass e óleo
diesel, até 450 dias. No mesmo
estudo verificaram que a levedu-
ra Candida silvicola foi caracteri-
zada como um dos fungos mais
sensíveis as concentrações de 1
e 10 ppm (ou 60 e 600 ppm do
produto, respectivamente). No
entanto, os fungos Aspergillus
fumigatus e Hormoconis resinae
no trabalho desenvolvido por
Bento (2001), foram caracteriza-
dos como mais resistentes, suge-
rindo uma maior concentração
e tempo de contato do biocida
4
para a inviabilidade do esporo.
O Biocida B de uma forma ge-
ral foi eficiente na inviabilização
das células de leveduras e sobre
os esporos fúngicos, porém sua
eficiência esporicida ou biocida
foi observada após um maior pe-
ríodo de contato com os esporos
e células (quando se compara a
atuação de ambos biocidas na
concentração a 100 ppm.
Considerações Finais
A resolução brasileira estabe-
lece que todo o biodiesel produ-
zido no país apresente um Cer-
tificado de Qualidade emitido
pelo fabricante, com um prazo
máximo de validade de um mês,
a contar da data de certificação.
Passado este prazo devem ser
conduzidas novas análises de
densidade, conforme preconi-
zado no parágrafo terceiro do
artigo quarto da citada especi-
ficação, bem como determina-
ções de suas características mais
significativamente afetadas pelo
processo de envelhecimento,
tais como: o teor de água, o ín-
dice de acidez, a estabilidade à
oxidação a 110ºC. Não é consi-
derada dentro do cenário brasi-
leiro a participação microbiana,
como um dos contaminantes
potenciais de sistemas de arma-
zenamento. Desta forma, se faz
importante conhecer e elucidar
a participação microbiana (e sua
formas de controle mais efica-
zes) como uma das variáveis a
Tabela 1. Comparação entre as CMI e CMB dos Biocidas A, B e C sobre os
quatro microorganismos avaliados.
Biocida A
Microorganismo CMI CMB
Paecilomyces sp. 31,2 62,5
A. fumigatus 15,6 31,2
C. silvicola 125 250
Rhodotorula sp. 125 125
a
crescimento foi detectado em todas as concentrações avaliadas
b
não apresentou CMB
ser considerada e sua possível
introdução no conjunto de exi-
gências futuras da Resolução
Normativa Nº 7/2008 da Agên-
cia Nacional do Petróleo (ANP).
Destaca-se o potencial de ado-
ção de produtos biocidas, uma
vez superadas as limitações
de descarte que ainda interfe-
rem na adoção dessa medida
mitigadora dos processos de
contaminação microbiana. As
concentrações dos biocidas A e
B obtidas nos testes (condições
ideais) de CMI e CMB foram efe-
tivas no controle do crescimento
dos microrganismos testados.
Os resultados apresentados nes-
ta oportunidade são de apenas
quatro fungos, que são consi-
derados como deteriogênicos
de combustível diesel e biodie-
sel. Outros grupos microbianos
igualmente importantes, como
as bactérias aeróbias e anaeró-
bias (BRS-redutoras de sulfato)
que fazem parte do consórcio
de microrganismos com com-
petência de se estabelecer du-
rante o armazenamento, serão
apresentados em outro artigo.
É fundamental o conhecimen-
to da efetividade de diferentes
antimicrobianos que estão apa-
recendo no mercado, a luz da
diversidade microbiana brasilei-
ra, que dependendo da região
do país conta com condições
climáticas distintas e de praticas
de logística e estocagem dife-
renciadas.
Biocida B Biocida C
Concentração (ppm)
CMI CMB CMI CMB
250 500 7,8 7,8
125 250 15,6 7,8
125 250 + a
-b
62,5 125 + -
CADERNO TÉCNICO
 Tabela 2. Tempos de morte (em minutos) de C.silvicola, Rhodotorula sp., Tabela 3. Tempos de morte de C.silvicola, Rhodotorula sp., A.fumigatus e
A.fumigatus e Paecilomyces sp. diante das diferentes concentrações testa- Paecilomyces sp. diante das diferentes concentrações testadas do Biocida
das com o com o Biocida A em diferentes misturas de diesel/biodiesel B em diferentes misturas de diesel/biodiesel.

B0 B2 B5 B100 B0 B2 B5 B100
Concentração Concentração
C. silvicola C.silvicola
10ppm +a + + + 100ppm 2h a 2h 2h 24h
100ppm 15 min b
4h c
30min 30min
300ppm 30 min b 15min 15min 15min
300ppm 15 min 15 min 15 min 15min
500ppm 15 min 15 min 15 min 15 min
Rhodotorula sp.
10ppm + + + + 100ppm 24 horas 24 horas 24 horas 6 horas
100ppm 15 min 15 min 15 min 15 min 300ppm 15 min 15 min 15 min 15 min
300ppm 15 min 15 min 15 min 15 min 500ppm 15 min 15 min 15 min 15 min
A. fumigatus
10ppm 15min 1h 15 min 4h
Paecilomyces sp.

100ppm 15 min 15 min 15 min 15 min 100ppm 4 horas 4 horas 4 horas 15min
300ppm 15 min 15 min 15 min 15 min 300ppm 15 min 15 min 15 min 15 min
Paecilomyces sp.
500ppm 15 min 15 min 15 min 15 min
10ppm 15 min 48h 48h 48h
100ppm 30 min 15 min 15 min 15 min
a
minutos; b horas

300ppm 15 min 15 min 15 min 15 min

a
foi detectado crescimento em todos os tempos avaliados; b minutos; c horas
Bibliografia

ABNT NBR 15552. Norma “Ar-
mazenamento, Transporte, Abas-
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