400 Tortora, Funke & Case
Patologia, infecção e doença
OBJETIVO DO APRENDIZADO
14-1 Identificar as contribuições de Paul Ehrlich e Alexander Fleming à
quimioterapia.
Patologia é o estudo científico das doenças (do grego pathos = so-
frimento; logos = ciência). O primeiro objeto de estudo da patologia
é a causa, ou etiologia, de uma doença. Em segundo lugar, ela lida
com a patogênese, que é a maneira como uma doença se desenvol-
ve. Por fim, a patologia analisa as mudanças estruturais e funcionais
decorrentes da doença e seus efeitos finais no organismo.
Embora os termos doença e infecção sejam eventualmente usa-
dos como sinônimos, eles apresentam diferenças em seus signifi-
cados. Infecção é a invasão ou colonização do corpo por micro-
-organismos patogênicos; a doença ocorre quando uma infecção
resulta em qualquer mudança no estado de saúde do hospedeiro.
A doença é um estado anormal no qual parte ou todo o organismo
não se apresenta propriamente ajustado ou é incapaz de desenvol-
ver suas funções normais. Uma infecção pode existir na ausência
de doença detectável. Por exemplo, o organismo pode ser infec-
tado pelo vírus que causa a Aids, porém sem que haja qualquer
sintoma de doença.
A presença de um tipo particular de micro-organismo em uma
parte do corpo onde ele normalmente não é encontrado também é
chamada de infecção, podendo acarretar no surgimento de doença.
Por exemplo, embora enormes quantidades de E. coli normalmente
estejam presentes no intestino saudável, sua infecção no trato uri-
nário em geral leva à doença.
Poucos micro-organismos são patogênicos. De fato, a presença
de alguns micro-organismos é até mesmo benéfica para o hospe-
deiro. Portanto, antes de discutirmos o papel dos micróbios no de-
senvolvimento de doenças, examinemos as relações entre os micro-
-organismos e o organismo humano saudável.
TESTE SEU CONHECIMENTO
3 Quais são os objetivos da patologia? 14-1
(a) Bactérias (esferas MEV (b) Bactérias na superfície
alaranjadas) na superfície 2 µm do estômago
do epitélio nasal
Figura 14.1 Representantes da microbiota normal em diferentes regiões do corpo.
P Qual o número de células da microbiota normal?
Microbiota normal
OBJETIVOS DO APRENDIZADO
14-2 Definir microbiota normal e transiente.
14-3 Comparar comensalismo, mutualismo e parasitismo e dar
exemplos de cada relação.
14-4 Contrastar as microbiotas normal e transiente com os
micro-organismos oportunistas.
Os animais, incluindo os seres humanos, geralmente são livres de
micro-organismos quando no útero materno. Ao nascimento, no
entanto, populações microbianas normais e características come-
çam a se estabelecer. Imediatamente antes de a mulher dar a luz,
lactobacilos em sua vagina se multiplicam rapidamente. O primei-
ro contato entre o recém-nascido e os micro-organismos em geral
ocorre com esses lactobacilos, que se tornam os micro-organismos
predominantes no intestino do bebê. Com a respiração e o início da
alimentação, mais micro-organismos são introduzidos no corpo do
recém-nascido a partir do meio ambiente. Após o nascimento, E.
coli e outras bactérias provenientes de alimentos começam a habitar
o intestino. Esses micro-organismos permanecerão nesse sítio para
o resto da vida do indivíduo e, em resposta a condições ambientais
anormais, podem aumentar ou diminuir seu número e contribuir
para o surgimento de doenças.
Muitos outros micro-organismos normalmente inócuos tam-
bém se estabelecem em outras partes do corpo saudável de um
indivíduo adulto e em sua superfície. O corpo humano possui,
tipicamente, 1 × 1013 células próprias. No entanto, contém um nú-
mero estimado de 1 × 1014 células bacterianas (ou 10 vezes mais
células bacterianas do que células humanas). Isso nos dá uma
ideia da abundância de micro-organismos que normalmente re-
sidem no corpo humano. Os micro-organismos que estabelecem
uma residência mais ou menos permanente (colonizam), mas não
geram doença em condições normais, são membros da micro-
biota normal, ou flora normal, do corpo (Figura 14.1). Outros,
denominados microbiota transiente, podem estar presentes por
vários dias, semanas ou mesmo meses, e depois desaparecem. Os
micro-organismos não são encontrados em todo o corpo huma-
MEV (c) Bactérias no intestino grosso MEV
2 µm 2 µm

no, mas estão localizados em certas regiões, como mostrado na
Tabela 14.1, página 402.
Muitos fatores determinam a distribuição e a composição da
microbiota normal. Entre eles estão nutrientes, fatores físicos e
químicos, defesas do organismo hospedeiro e fatores mecânicos.
Os micróbios variam de acordo com os tipos de nutrientes que eles
podem utilizar como fonte de energia. Consequentemente, esses
micróbios colonizam apenas os sítios do corpo que podem supri-
-los com os nutrientes apropriados. Esses nutrientes podem ser
derivados de produtos celulares secretados ou excretados, subs-
tâncias em fluidos corpóreos, células mortas e alimentos no trato
gastrintestinal.
Vários fatores físicos e químicos influenciam o crescimento dos
micro-organismos e, assim, a composição e o crescimento da flora
normal. Entre esses fatores estão o pH, a presença de oxigênio e
dióxido de carbono, a salinidade e a luz solar.
Será visto nos Capítulos 16 e 17 que o corpo humano possui cer-
tas defesas contra os micróbios. Essas defesas incluem uma varieda-
de de moléculas e células ativadas que matam micróbios, inibem seu
crescimento, impedem sua adesão às superfícies das células do hos-
pedeiro e neutralizam toxinas produzidas pelos micróbios. Embora
essas defesas sejam extremante importantes contra os patógenos, seu
papel na determinação e na regulação da microbiota normal ainda
não está claro.
Certas regiões do corpo estão sujeitas a forças mecânicas que
podem afetar a colonização pela microbiota normal. Por exemplo, a
ação de mastigação dos dentes e a movimentação da língua podem
desalojar micro-organismos adsorvidos aos dentes e às superfícies
mucosas. No trato gastrintestinal, o fluxo de saliva e secreções diges-
tivas e os vários movimentos musculares da garganta, do esôfago, do
estômago e dos intestinos podem remover micróbios desalojados. A
ação de descarga da urina também pode remover micróbios soltos
no trato urinário. No sistema respiratório, o muco prende micróbios,
que são então propelidos em direção à garganta pelo movimento ci-
liar das células desse sítio para posterior eliminação.
As condições existentes em um determinado sítio do corpo
humano variam de pessoa para pessoa. Entre os fatores que tam-
bém afetam a microbiota normal estão idade, estado nutricional,
dieta, estado de saúde, existência de deficiências, hospitalização,
estado emocional, estresse, clima, localização geográfica, condi-
ções de higiene pessoal, condições socioeconômicas, ocupação e
estilo de vida.
A microbiota normal principal em diferentes regiões do corpo
e algumas das características distintivas de cada região estão lista-
das na Tabela 14.1. A microbiota normal também é discutida mais
especificamente na Parte Quatro deste livro.
Animais sem microbiota podem ser obtidos e mantidos em con-
dições laboratoriais. A maioria dos mamíferos livres de germes usados
em pesquisa é obtida por sua criação em ambientes estéreis. Por um
lado, pesquisas com animais livres de germes mostram que a presença
de micróbios não é absolutamente necessária à vida animal. Por ou-
tro lado, as mesmas pesquisas mostram que animais livres de germes
apresentam sistema imune subdesenvolvido e são extremamente sus-
cetíveis a infecções e doenças severas. Animais livres de germes tam-
bém requerem mais calorias e vitaminas em sua alimentação do que
animais normais.
Microbiologia 401
Relações entre a microbiota normal
e o hospedeiro
Uma vez estabelecida, a microbiota normal pode beneficiar o hos-
pedeiro ao impedir o crescimento de micro-organismos potencial-
mente perigosos. Esse fenômeno é conhecido como antagonismo
microbiano, ou exclusão competitiva. O antagonismo micro-
biano envolve a competição entre micróbios. Uma consequência
dessa competição é o fato de que a microbiota normal protege o
hospedeiro contra a colonização por micróbios potencialmente
patogênicos ao competir com eles por nutrientes, produzir subs-
tâncias prejudiciais aos micróbios invasores e afetar condições
como o pH e a disponibilidade de oxigênio. Quando o equilíbrio
entre a microbiota normal e os micróbios patogênicos é alterado,
o resultado pode ser o surgimento de doenças. Por exemplo, a mi-
crobiota bacteriana normal da vagina de uma mulher adulta man-
tém o pH local em torno de 4. A presença da microbiota normal
inibe o crescimento excessivo da levedura Candida albicans, que
pode crescer quando o balanço entre a flora normal e os patógenos
é alterado e o pH modificado. Se a população bacteriana é elimi-
nada por antibióticos, pelo uso excessivo de ducha higiênica ou
desodorantes, o pH da vagina é revertido até a neutralidade, con-
dição em que a C. albicans floresce e se torna o micro-organismo
predominante nesse local. Essa condição pode levar a uma forma
de vaginite (infecção vaginal).
Outro exemplo de antagonismo microbiano ocorre no intesti-
no grosso. Células de E. coli produzem bacteriocinas, proteínas que
inibem o crescimento de outras bactérias da mesma espécie ou pro-
ximamente relacionadas, como as bactérias patogênicas Salmonella
e Shigella. Uma bactéria que produz uma determinada bacteriocina
não é afetada por ela, mas pode ser eliminada por outras. As bacte-
riocinas são usadas na microbiologia médica para auxiliar na iden-
tificação de diferentes cepas de bactérias. Essa identificação ajuda a
determinar se um surto severo de doença infecciosa é causado por
uma ou mais cepas de bactérias.
Um exemplo final envolve a bactéria Clostridium difficile, tam-
bém presente no intestino grosso. A microbiota normal do intestino
grosso inibe de maneira eficiente o crescimento de C. difficile, possi-
velmente tornando os receptores do hospedeiro indisponíveis para a
bactéria, competindo por nutrientes, ou produzindo bacteriocinas.
Entretanto, se a microbiota normal é eliminada (pelo uso de antibió-
ticos, p. ex.), C. difficile pode se tornar um problema. Esse micróbio
é responsável por quase todas as infecções gastrintestinais que se
seguem à antibioticoterapia, gerando desde diarreias leves até colites
(inflamação do colo) severas ou mesmo fatais.
A relação entre a microbiota normal e o hospedeiro é chama-
da de simbiose, uma relação entre dois organismos na qual pelo
menos um é dependente do outro (Figura 14.2). Na relação simbi-
ótica denominada comensalismo, um dos organismos se beneficia
enquanto o outro não é afetado de forma alguma. Muitos micro-
-organismos que fazem parte de nossa microbiota normal são co-
mensais, incluindo as corinebactérias, que habitam a superfície dos
olhos, e certas micobactérias saprofíticas, que habitam os ouvidos
e a genitália externa. Essas bactérias vivem em secreções e células
descamadas e não trazem nenhum benefício ou prejuízo aparente
para o hospedeiro.
402 Tortora, Funke & Case

Tabela 14.1 Representantes da microbiota normal por região do corpo

Região Principais componentes Comentários

Pele Propionibacterium, Staphylococcus, Corynebacterium, Micrococcus,
Acinetobacter, Brevibacterium, Pityrosporum (fungo), Candida (fun-
go), Malassezia (fungo)
■ A maioria dos micróbios em contato direto com a pele não se
torna residente devido a secreções de glândulas de óleos e
suor, que possuem propriedades antimicrobianas.
■ A queratina é uma barreira resistente, e o baixo pH da pele
inibe muitos micróbios.
■ A pele também apresenta um conteúdo relativamente baixo
de umidade.

Olhos (conjuntiva) Staphylococcus epidermidis, S. aureus, difteroides, Propionibacterium, ■ A conjuntiva, uma continuação da pele ou membrana muco-
Corynebacterium, estreptococos, Micrococcus sa, contém basicamente a mesma microbiota encontrada na
pele.
■ As lágrimas e o ato de piscar também eliminam alguns mi-
cróbios ou impedem que outros colonizem.
Nariz e garganta
(sistema
respiratório Olhos (conjuntiva)
superior)
Boca

Pele

Intestino grosso

Sistemas reprodutivo
e urinário (uretra
inferior em ambos os
sexos e vagina nas
mulheres)

Mutualismo é um tipo de simbiose que beneficia ambos os orga-

nismos. Por exemplo, o intestino grosso contém bactérias, como a E.
coli, que sintetizam vitamina K e algumas vitaminas do complexo B.
Essas vitaminas são absorvidas pelos vasos sanguíneos e distribuídas
para serem usadas pelas células do corpo. Em troca, o intestino grosso
SIMBIOSE provê nutrientes usados pelas bactérias, garantindo sua sobrevivência.
O recente interesse na importância das bactérias para a saúde
Mutualismo Parasi humana levou ao estudo dos probióticos. Probióticos (pro = para,
lismo Ambos os
tis
Um org mo
o m ensa mo an bios = vida) são culturas de micróbios vivos que devem ser aplicadas
C
orga
nis
o
organismos se ben ismo ou ingeridas para que exerçam um efeito benéfico. Os probióticos
Um neficia e eficia
tado se beneficiam prejuíz c
e
se b não é afe o ao om podem ser administrados juntamente com prebióticos, substâncias
o outro
outr químicas capazes de promover seletivamente o crescimento de bac-
térias benéficas. Diversos estudos têm mostrado que a ingestão de
bactérias do ácido lático (BALs) pode aliviar a diarreia e prevenir a
colonização por Salmonella enterica durante a antibioticoterapia. Se
Figura 14.2 Simbiose.
essas BALs colonizam o intestino grosso, o ácido lático e as bacterio-
P Que tipo de simbiose é melhor representada pela relação entre humanos cinas produzidas por elas podem inibir o crescimento de certos pa-
e E. coli? tógenos. Pesquisadores estão testando também o uso de BALs para
 Microbiologia 403

Tabela 14.1 Representantes da microbiota normal por região do corpo

Região Principais componentes Comentários

Nariz e garganta Staphylococcus aureus, S. epidermidis e difteroides aeróbicos no ■ Embora alguns membros da microbiota normal sejam poten-
(sistema nariz; S. epidermidis, S. aureus, difteroides, Streptococcus peneumo- ciais patógenos, sua habilidade em causar doença é reduzida
respiratório niae, Haemophilus e Neisseria na garganta. pelo antagonismo microbiano.
superior) ■ Secreções nasais matam ou inibem muitos micro-organis-
mos, enquanto o muco e os movimentos ciliares removem
muitos micróbios.

Boca Streptococcus, Lactobacillus, Actinomyces, Bacteroides, Veillonella,
Neisseria, Haemophilus, Fusobacterium, Treponema, Staphylococcus,
Corynebacterium e Candida (fungo).
■ Umidade abundante, calor e a presença constante de alimen-
tos fazem da boca um ambiente ideal que suporta uma vasta
e diversa população microbiana na língua, nas bochechas,
nos dentes e nas gengivas.
■ Entretanto, as mordidas, a mastigação, os movimentos da lín-
gua e o fluxo de saliva desalojam diversos micróbios. A saliva
contém várias substâncias antimicrobianas.

Intestino grosso Escherichia coli, Bacteroides, Fusobacterium, Lactobacillus,
Enterococcus, Bifidobacterium, Enterobacter, Citrobacter, Proteus,
Klebsiella, Candida (fungo)
■ O intestino grosso contém os maiores números de micro-or-
ganismos da microbiota residente no corpo, principalmente
em razão da disponibilidade de umidade e nutrientes.
■ O muco e a descamação periódica previnem que muitos
micro-organismos colonizem o revestimento do trato gastrin-
testinal. Além disso, a mucosa produz uma série de substân-
cias antimicrobianas.
■ A diarreia também acaba por eliminar parte da microbiota
normal.

Sistemas Staphylococcus, Micrococcus, Enterococcus, Lactobacillus, Bacteroides,
reprodutivo e difteroides aeróbicos, Pseudomonas, Klebsiella e Proteus na uretra;
urinário Lactobacilli, Streptococcus, Clostridium, Candida albicans (fungo) e
Trichomonas vaginalis (protozoário) na vagina.
■ A parte proximal da uretra em ambos os sexos contém uma
microbiota residente; a vagina possui uma população de micró-
bios ácido-tolerantes em virtude da natureza de suas secreções.
■ O muco e a descamação periódica previnem que muitos
micro-organismos colonizem o revestimento do trato genitu-
rinário; o fluxo de urina remove micróbios mecanicamente.
Além disso, o pH da urina e a ureias são antimicrobianos.
■ Cílios e muco expelem micróbios da cervice uterina para a
vagina, e a acidez da vagina inibe ou mata muitos micróbios.

prevenir infecções de feridas cirúrgicas causadas por Staphylococcus
aureus e infecções vaginais causadas por E. coli. Em um estudo da
Universidade de Stanford, nos Estados Unidos, a infecção por HIV
foi reduzida em mulheres tratadas com uma cepa geneticamente
modificada de BAL que produz a proteína CD4, a qual se liga ao HIV.
Em uma outra forma de simbiose, um organismo se beneficia da
extração de nutrientes, com prejuízo ao outro organismo; esta relação
é chamada de parasitismo. Muitas bactérias causadoras de doenças
são parasitas.
Micro-organismos oportunistas
Embora a categorização das relações simbióticas por tipo seja con-
veniente, lembre-se de que, sob certas condições, as relações podem
mudar. Por exemplo, em circunstâncias apropriadas, um organismo
mutualístico como a E. coli pode se tornar prejudicial. A E. coli geral-
mente é inofensiva enquanto permanece no intestino delgado de seu
hospedeiro; mas, ao acessar outras regiões do corpo, como o trato uri-
nário, pulmões, medula espinal ou feridas, ela pode causar infecções
urinárias, infecções pulmonares, meningites ou abscessos, respectiva-
mente. Micróbios como a E. coli são chamados de patógenos oportu-
nistas. Eles normalmente não causam doença quando presentes em
seu habitat normal em uma pessoa saudável. Entretanto, podem gerar
doença quando em diferentes ambientes. Por exemplo, micróbios que
penetram o corpo através da quebra da barreira da pele ou das mem-
branas mucosas podem causar infecções oportunísticas. Alternativa-
mente, se o hospedeiro se encontra enfraquecido ou comprometido
por uma infecção, micróbios que normalmente são inofensivos po-
dem causar doença. A Aids com frequência é acompanhada por uma
infecção oportunística comum, a pneumonia causada pelo organismo
oportunista Pneumocystis jirovecii (veja a Figura 24.20, página 698).
Essa infecção secundária pode se desenvolver em pacientes com Aids,
uma vez que seu sistema imune está suprimido. Antes da epidemia de
Aids, esse tipo de pneumonia era raro. Patógenos oportunistas pos-
suem outras características que contribuem para sua habilidade em
causar doença. Por exemplo, eles estão presentes dentro ou fora do
organismo, ou no meio ambiente, em números relativamente altos.
Alguns patógenos oportunistas podem ser encontrados em locais do
corpo, interna ou externamente, que são relativamente protegidos das
defesas do organismo, e algumas dessas regiões também não podem
ser alcançadas por antibióticos.
Além dos simbiontes habituais, muitas pessoas transportam
outros micro-organismos que geralmente são considerados como
404 Tortora, Funke & Case
patogênicos, mas que não causam doença nessas pessoas. Entre os
patógenos frequentemente carreados por pessoas saudáveis estão os
ecovírus (ou Echovirus, sendo echo de enteric citopathogenic human
orphan), que podem causar doenças intestinais, e os Adenovirus,
que podem causar doenças respiratórias. A Neisseria meningitidis,
que frequentemente reside de forma benigna no trato respiratório,
pode causar meningite, uma doença que leva à inflamação dos te-
cidos que recobrem a medula espinal e o cérebro. O Streptococcus
pneumoniae, um residente normal do nariz e da garganta, pode
causar um certo tipo de pneumonia.
Cooperação entre micro-organismos
Não é apenas a competição entre micróbios que pode causar
doença; a cooperação entre micróbios também pode ser um fator
importante na geração das doenças. Por exemplo, patógenos que
causam a doença periodontal e a gengivite possuem receptores que
não reconhecem os dentes em si, mas reconhecem os estreptococos
que colonizam os dentes.
TESTE SEU CONHECIMENTO
3 Como a microbiota normal difere da microbiota residente? 14-2
3 Dê vários exemplos de antagonismo microbiano. 14-3
3 Como os patógenos oportunistas causam infecções? 14-4
Etiologia das doenças infecciosas
OBJETIVO DO APRENDIZADO
14-5 Listar os postulados de Koch.
Algumas doenças, como a pólio, a doença de Lyme e a tubercu-
lose, possuem etiologia claramente definida. Outras doenças, no
entanto, possuem uma etiologia que ainda não é totalmente com-
preendida; por exemplo, a relação entre certos vírus e câncer. Para
algumas outras doenças, como a doença de Alzheimer, a etiolo-
gia é totalmente desconhecida. É claro, nem todas as doenças são
causadas por micro-organismos. A hemofilia, por exemplo, é uma
doença hereditária (genética); as osteoartrites e a cirrose são doenças
degenerativas. Existem ainda várias outras categorias de doenças,
mas discutiremos apenas as doenças infecciosas, ou seja, aquelas
causadas por micro-organismos. Para perceber como os microbio-
logistas determinam a etiologia de uma doença, discutiremos em
mais detalhe o trabalho de Robert Koch, introduzido no Capítulo
1 (páginas 9 a 11).
Postulados de Koch
Na revisão histórica da Microbiologia, apresentada no Capítulo 1,
discutimos brevemente os famosos postulados de Koch. Lembre-se
de que Koch foi um médico alemão que teve um papel importante
no estabelecimento da ideia de que os micro-organismos podem
causar doenças específicas. Em 1877, ele publicou alguns dos pri-
meiros artigos sobre antraz, ou carbúnculo, uma doença do gado
que também pode afetar os seres humanos. Koch demonstrou que
certas bactérias, hoje conhecidas como Bacillus anthracis, sempre
estiveram presentes no sangue de animais que tinham a doença e
não estavam presentes em animais saudáveis. Ele sabia que a mera
presença das bactérias não provava que elas haviam causado a
doença; as bactérias poderiam estar como resultado da doença. As-
sim, ali continuou suas experiências.
Ele obteve uma amostra de sangue de um animal doente e inje-
tou em um animal saudável. O segundo animal desenvolveu a mes-
ma doença e morreu. Ele repetiu esse procedimento várias vezes,
sempre obtendo os mesmos resultados. (Um critério-chave para a
validação de qualquer prova científica se baseia no fato de que os
resultados experimentais possam ser repetidos.) Koch também cul-
tivou o micro-organismo em fluidos fora do corpo do animal, de-
monstrando que a bactéria causaria a infecção mesmo após muitas
transferências de cultura.
Koch demonstrou que uma doença infecciosa específica (an-
traz) é causada por um micro-organismo (B. anthracis) que pode
ser isolado e cultivado em meios artificiais. Depois ele utilizou o
mesmo método para demonstrar que a bactéria Mycobacterium tu-
berculosis é o agente causador da tuberculose.
A pesquisa de Koch fornece um modelo básico de estudo da
etiologia de qualquer doença infecciosa. Hoje, nos referimos aos
requerimentos experimentais de Koch como postulados de Koch
(Figura 14.3). Eles podem ser resumidos da seguinte forma:
1. O mesmo patógeno deve estar presente em todos os casos da
doença.
2. O patógeno deve ser isolado do hospedeiro doente e cultivado
em cultura pura.
3. O patógeno obtido da cultura pura deve causar a doença quan-
do inoculado em um animal de laboratório suscetível e saudá-
vel.
4. O patógeno deve ser isolado do animal inoculado e deve ser,
necessariamente, o organismo original.
Exceções aos postulados de Koch
Embora os postulados de Koch sejam úteis para se determinar o
agente causador da maioria das doenças bacterianas, existem algu-
mas exceções para sua aplicação. Alguns micróbios, por exemplo,
apresentam requerimentos nutricionais únicos para seu cultivo. A
bactéria Treponema pallidum é conhecida por causar a sífilis, mas ce-
pas virulentas nunca foram cultivadas em meios artificiais. O agente
causador da lepra, o Mycobacterium leprae, também nunca foi cul-
tivado em meio artificial. Além disso, patógenos virais e riquétsias
não podem ser cultivados em meios artificiais, pois se multiplicam
apenas dentro de células.
A descoberta de micro-organismos que não podem ser cultiva-
dos em meios artificiais exigiu algumas modificações nos postula-
dos de Koch e o uso de métodos alternativos de cultivo e detecção
de certos micróbios. Por exemplo, quando pesquisadores procura-
vam pela causa microbiana da legionelose (doença do Legionário),
foram incapazes de isolar o micróbio diretamente de uma vítima
da doença. Em vez disso, usaram a estratégia alternativa de ino-
cular uma amostra de tecido pulmonar de uma vítima em cobaias
(porquinhos-da-índia). Essas cobaias desenvolverams sintomas se-
melhantes à pneumonia, típicos da doença, ao passo que cobaias
inoculadas com amostras de pessoas saudáveis não apresentaram
sintomas. Em seguida, amostras de tecido das cobaias doentes fo-
ram cultivadas em gemas de ovos embrionados de galinha, um mé-