Quim. Nova, Vol. 35, No.

9, 1782-1786, 2012

ATIVIDADE HIDROLÍTICA DE LIPASES BACTERIANAS EM ÓLEOS VEGETAIS DA AMAZÔNIA

Artigo

André Luis Willerding*, Francisco Geraldo Mello da Rocha Carvalho Neto, Auricélia Matos da Gama e Cláudia Regina
Ferreira Carioca
Coordenação de Bioquímica e Biologia Molecular, Centro de Biotecnologia da Amazônia, Av. Gov. Danilo Areosa, 690,
69075-351 Manaus - AM, Brasil
Luiz Antonio de Oliveira
Laboratório de Microbiologia do Solo, Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, CP 478, 69011-970 Manaus - AM, Brasil

Recebido em 8/2/12; aceito em 7/5/12; publicado na web em 10/8/12

Os dados apresentados descrevem o desenvolvimento de um processo enzimático em óleos vegetais. Seis lipases bacterianas foram testadas
quanto à sua capacidade de hidrolisar. Para cada ensaio de lipase, o método p-NPP foi aplicado para obter atividades enzimáticas máximas.
A lipase da Burkholderia cepacia (lipase B-10) foi a mais eficaz no óleo de buriti, liberando 4840 µmol p-NP mL-1. A lipase da Klebsiella
variicola (lipase B-22) foi superior no óleo de maracujá, liberando 4140 µmol p-NP mL-1 e também no óleo de palma babaçu, liberando
2934 µmol p-NP mL-1. A pesquisa no bioprocessamento de óleos visa agregar valor a essa matéria-prima regional.

Keywords: lipase; enzymatic hydrolysis; Amazonian oils.

INTRODUÇÃO de alimentos. A partir da polpa do fruto, os óleos ricos em ácidos oleicos

A produção mundial de óleos vegetais passou de 70 milhões de
toneladas em 1997 para 95 milhões de toneladas em 2001.1 Em 2010, o
consumo mundial de óleos vegetais aumentou 27% em 10 anos,
atingindo 121 toneladas devido à demanda dos setores de alimentos e
combustíveis. Os dendezeiros desempenham um papel importante na
economia global, produzindo mais de 30 milhões de toneladas de
petróleo por ano.2
Na Amazônia, existem inúmeras espécies cujos produtos podem
contribuir para atender à demanda de sementes, frutas, nozes e seus
óleos oleaginosos.3,4 Nesse contexto, a Amazônia parece um recurso
promissor e fonte de oportunidade econômica que pode encontrar um
equilíbrio entre desenvolvimento regional e conservação ambiental por
bioindústrias.5
However, No entanto, apesar dessa situação privilegiada em relação
à sua biodiversidade, os recursos florestais da região geralmente são
vendidos apenas como matéria-prima, com pouco ou nenhum valor
agregado.6 Assim, o uso de espécies nativas e seus produtos na (bio)
industrialização representa uma oportunidade de negócio que
certamente terá um efeito multiplicador na economia regional. O
processamento de óleos vegetais por tecnologia enzimática é uma
ferramenta biotecnológica para o potencial desenvolvimento econômico
e sustentável da região. Atualmente, a conversão de gorduras e óleos em
produtos de alto valor agregado, como monoacilglicerídeos,
diacilglicerídeos e ácidos graxos livres produzidos por catálise de
lipase, tem sido de grande interesse industrial.7
Apesar de seu crescente uso pelas indústrias cosmética e
farmacêutica, os óleos da Amazônia permanecem pouco explorados
comercialmente.8,9 Entre os mais atraentes comercialmente, estão as
gorduras e óleos obtidos de Theobroma cacao (cacau), Virola
surinamensis (ucuuba), Copaifera multijuga ( copaíba) e Carapa
guianensis (andiroba) .10 Outras palmeiras, como o babaçu (Orbignya
phalerata) e o buriti (Mauritia flexuosa), destacam-se como fontes
potenciais de beta-caroteno, ácidos graxos e monoglicerídeos. Mas,
apesar dessa diversidade e potencial, a grande maioria dessas espécies
não foi explorada extensivamente.2
O óleo de buriti é uma fonte importante de vitaminas, proteínas e
energia e tem grande utilidade na região.6 O fruto do buriti pode produzir
dois tipos de óleo com uso potencial nas indústrias química e
*e-mail: andre.cba@suframa.gov.br
são extraídos, enquanto as sementes são ricas em ácido láurico. O óleo
de polpa é considerado uma das principais fontes de ca-roteno (pró-
vitamina A) na natureza.11,12 Essa característica faz com que esse óleo
seja útil para a fabricação de filtro solar.13,14
O caju (Anacardium occidental) é nativo do Brasil, mas a Índia é o
maior produtor mundial de castanha de caju e óleo de castanha,
responsável por 90% da produção. No Brasil, a produção do petróleo
ocorre nas regiões Norte e Nordeste. A castanha de caju possui uma
casca com óleo viscoso contendo uma resina cáustica. A noz é o
principal produto, rico em óleo. O óleo possui uma ampla gama de
aplicações industriais e pode ser usado em fungicidas, inseticidas,
germicidas, reveladores fotográficos, antioxidantes, abrasivos, pós de
fricção, entre muitos outros. Além disso, o óleo possui propriedades
antissépticas e vermífugas.15
O maracujá (Passiflora edulis) é uma planta tropical com ampla
distribuição geográfica. Atualmente, o Brasil é o principal produtor
mundial de maracujá. O óleo é extraído da semente, com um rendimento
de 25% e possui substâncias relaxantes com um aroma que reduz a
ansiedade, melhora o sono e reduz o estresse e a fadiga em geral. O óleo
tem uma aplicação muito ampla em cosméticos, cremes, xampus,
loções, óleos, sabonetes e pode ser usado tanto nas indústrias de
alimentos quanto em alimentos para animais.3
O babaçu é a palmeira nativa do norte do Brasil e possui sementes
ou grãos múltiplos do qual o óleo é extraído. A extração das sementes
produz 65 a 68% de óleo branco a levemente amarelado. Essa cor
depende da temperatura devido à alta concentração de ácido láurico
(C12: 0). O óleo tem muitas aplicações, incluindo na indústria
cosmética, alimentos, sabão, sabão de coco, detergentes e lubrificantes.
O mercado de óleo de babaçu está enfrentando uma crise devido à
concorrência do óleo de palma da Ásia. O óleo de babaçu tem a maior
taxa de saponificação, baixo valor de iodo e índice de refração,
tornando-o adequado para a preparação de pomadas cremosas.11
O processamento de óleos e gorduras é predominantemente baseado
em processos químicos convencionais.16 Embora essas mudanças
possam ser facilmente alcançadas por métodos químicos, elas
apresentam algumas desvantagens, como o uso de altas temperaturas, a
formação de subprodutos durante a reação e a necessidade para
operações adicionais para purificar o produto final, bem como para altas
pressões e não especificidade dos catalisadores.3
Entre as diferentes tecnologias de óleo, a hidrólise visa a produção
de ácidos graxos livres (AGL), glicerídeos parciais e glicerol.
Vol. 35, No. 9 Hydrolytic activity of bacterial lipases in amazonian vegetable oils
A hidrólise enzimática (catalisada pelas lipases E.C. 3.1.1.3) tem
algumas vantagens sobre os processos químicos convencionais, porque
as reações enzimáticas exigem temperaturas mais baixas, o que impede
a degradação dos produtos e reduz os custos de energia. Além disso, as
enzimas são biodegradáveis e, consequentemente, são menos poluentes
que os catalisadores químicos.17 Normalmente, o rendimento da
hidrólise excede 97% e a mistura final deve ser destilada para remover
os subprodutos formados durante a reação.18
Os ácidos graxos e seus derivados são matérias-primas essenciais
obtidas a partir de gorduras animais e óleos vegetais. 19 A hidrólise
enzimática vem ganhando terreno como uma alternativa aos processos
físicos e químicos. Geralmente, as enzimas lipolíticas são caracterizadas
por sua capacidade de catalisar uma ampla gama de reações de interesse
para as indústrias alimentícia, farmacêutica, química e outras. Com essa
versatilidade, também é possível a especificidade do substrato
envolvendo lipases de várias fontes.10
Neste artigo, avaliamos o desempenho hidrolítico de 6 lipases para
a produção de AGL. Além disso, foi realizada otimização preliminar
para determinar os parâmetros ótimos de processamento para a hidrólise
enzimática.
EXPERIMENTAL
Produção microbiana e determinação das atividades de lipase
O material biológico fazia parte da Coleção de Microbiologia
do Solo do INPA. As cepas bacterianas testadas quanto à atividade
da lipase foram selecionadas após a triagem por Willerding et al. 20
Um conjunto de 181 isolados bacterianos foi testado em um meio
de cultura como indutor. Desse total, 75 isolados bacterianos (41%)
apresentaram produção de lipase. Assim, foram utilizadas 6 cepas
produtoras de lipase originalmente isoladas.
Determinação da composição de ácidos graxos
As amostras de óleo vegetal foram doadas por Crodamazon (buriti),
Cupuama (maracujá), UFAM / LAPEC - combustível de laboratório
(babaçu) e por meio de doações privadas para o óleo de caju de Roraima,
Brasil. Todos os óleos foram extraídos da polpa do fruto ou noz por
extração mecânica. O rendimento da extração não foi informado. Para
cada óleo não hidrolisado, os ácidos graxos foram convertidos após a
hidrólise em ésteres metílicos de ácidos graxos (FAME) .21 Suas
composições foram determinadas por cromatografia em fase gasosa
(GC) (Shimadzu, modelo GCMS-QP-2010) em uma coluna DB-Wax
(Agilent ), a uma temperatura inicial de 60 ºC, 25 ° C min-1 e
temperatura final de 230 ° C. A temperatura do injetor era de 250 ºC e
a temperatura do detector era de 250 ºC. Os ácidos graxos foram
identificados pela comparação dos tempos de retenção dos componentes
presentes em cada amostra com os tempos de retenção dos componentes
presentes no padrão FAME Mix C4-C24 (Sigma).
Atividade enzimática
Foi preparado um meio de cultura líquido contendo óleo para
indução da produção de lipase (pH 8,0): óleo (2,0%), Tween 80 (1%),
peptona (0,3%), extrato de levedura (0,2%), KH2PO4 (0,2%) , MgSO4
(0,1%) e CaCl2 (0,1%) com culturas incubadas a 30 ° C, 72 h e 120 rpm.
Após a fermentação, o meio foi coletado e centrifugado a 4 ° C a
12.000 rpm por 30 min para obter o extrato enzimático bruto, utilizado
para determinar a atividade da lipase no p-nitrofenilpalmitato (p-NPP /
Sigma®). Uma solução de p-NPP (2,5 mmol) em tampão acetato de
sódio (pH 8,0, 50 mM) foi então preparada. Uma alíquota de 950 mL
desta solução foi adicionada a outra alíquota de 50 mL da solução do
extrato bruto de cada isolado, seguida de reação a 37 ºC por 15 min,
com leitura de absorvância a 410 ηm comparada com a do padrão curva
para para-nitrofenol (p-NP).
1783
Uma unidade de atividade (U) foi definida como a quantidade de enzima
que liberou 1 µmol de p-NP mL-1 nas condições do teste, que foi
realizado em triplicado. Esta etapa serviu para selecionar cada enzima
em relação à sua afinidade para cada óleo testado. Posteriormente,
aplicamos um planejamento fatorial padrão para o processo de
hidrólise.22,23
Delineamento experimental
Com o objetivo de maximizar o processo de hidrólise, a estratégia
envolve o uso de um Projeto Composto Central Rotacional (DCCR)
para obter os valores ótimos da variável significativa considerando as 3
variáveis: temperatura (° C), enzima (% em comparação ao óleo) e
proporção de tampão de óleo (Tris-HCl 0,1 M, pH 8,0) (Tabela 1). O
progresso da reação foi monitorado por 3 h de reação.
Tabela 1. Variáveis de entrada e seus níveis usando a Metodologia de superfície de resposta
Variáveis -1.68 -1 0 1 1.68
Temperatura (ºC) 31.6 35 40 45 48.4
Enzima (%) 1 2 3 4 5
Óleo: Tampão 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5
O estudo foi conduzido de forma a permitir a avaliação da
combinação de variáveis de entrada estatisticamente significantes para
resposta.24 Utilizamos a mesma unidade de atividade enzimática para
cada extrato testado, determinando a variável resposta ou a liberação
𝑁𝑥28.2𝑥𝑣
independente de ácido graxo%𝐹𝐹𝐴 = , onde: N - normalidade
𝑚
da solução real de hidróxido de potássio, V - volume de KOH, solução
gasta em titulação (mL), m - massa da amostra de óleo utilizada nos
testes (g). O cálculo da% de ácido graxo livre foi realizado de acordo
com o AOCS.25
Os resultados foram avaliados por análise de variância (ANOVA) e
gráfico de barras (Pareto Graph). Devido à alta variabilidade inerente
aos bioprocessos envolvendo enzimas e microorganismos, os
parâmetros foram considerados significativos com valor de p menor que
10% .3,26
Determinação de espécies bacterianas
Os isolados bacterianos foram identificados com base na
sequenciação parcial de 16S rRNA. Os iniciadores usados para as
bactérias foram o Primer 1F (GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-5'-3 ')
e o Primer 2R (CGGTGTGTACAAGGCCCGGGAGAGG 5'-3') para a
amplificação de PCR. A reação de amplificação foi baseada em
Sambrook27, com algumas modificações para aumentar a eficiência da
amplificação, de acordo com o seguinte protocolo: tampão de reação
(Tris-HCl 50 mM, pH 8,0, NaCl 50 mM, Triton X 100 a 2,5%), dNTPs
( 200 mM cada), MgCl2 0,2 mM, 0,25 mM de cada iniciador, amostra
de DNA de 0,8 ng / uL e polimerase de DNA Taq 0,02 U. A
amplificação foi realizada em um termociclador Eppendorf® -
Mastercycler Gradient Model e o programa básico consistiu em 30
ciclos (desnaturação inicial a 94 ° C por 3 min; desnaturação
subsequente a 94 ° C por 30 s, recozimento a 60 ° C por 30 s , extensão
a 72 ° C por 2 min e 10 min para extensão final). Após a PCR, o produto
da reação foi purificado com um kit GFX PCR® (Invitrogen®) e
sequenciado em uma unidade MegaBACE® da Universidade Federal do
Amazonas (UFAM).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Determinação da composição de ácidos graxos
Os ácidos graxos do óleo não hidrolisado foram convertidos após a
hidrólise em ésteres metílicos de ácidos graxos (FAME) cuja
composição é mostrada na Tabela 2.
1784 Willerding et al. Quim. Nova

Tabela 3. Atividade hidrolítica (µmol p-NP .mL-1) de seis lipases que foram
O óleo de babaçu difere em sua composição química, com alto teor produzidas em fermentação submersa usando quatro óleos diferentes *
de ácidos graxos saturados (55% de ácido láurico C12: 0). Os outros
três óleos apresentaram maior porcentagem de ácidos graxos Óleo de Óleo de Óleo de Óleo de
Lipase
insaturados, 79% de ácido oleico (C18: 1) para óleo de buriti e 60% Buriti Maracujá Babaçu Caju
de ácido oleico para óleo de caju. O óleo de maracujá apresentou B-08 1777 (e) 1579 (f) 1660 (b) 2189 (c)
60% de ácido linoléico (C18: 2). Essas composições são B-10 4840 (a) 2149 (d) 1629 (bc) 1596 (d)
semelhantes às encontradas na literatura.
B-12 2730 (c) 3514 (b) 2909 (a) 2499 (a)
Tabela 2. Composição química dos ácidos graxos do óleo convertidos após B-16 2207 (d) 1815 (e) 1575 (c) 1494 (e)
hidrólise em ésteres metílicos de ácidos graxos (FAME)
B-17 2962 (b) 3017 (c) 2925 (a) 2482 (a)
Óleo de Óleo de Óleo de Óleo de B-22 2742 (c) 4140 (a) 2934 (a) 2326 (b)
FAME Estrutura
Buriti Maracujá Babaçu Caju
* Letras diferentes entre parênteses indicam diferenças estatisticamente
Caprylic C8:0 7.3±0.2 significativas (teste de Tukey p <0,05)
Capric C10:0 7.6±0.2
Lauric C12:0 55.0±0.9 As lipases das árvores (B-22, B-17 e B-12) foram mais eficazes no
Myristic C14:0 27.0±0.4 óleo babaçu (teste de Tukey; p <0,05), produzindo 2934, 2925 e 2909
µmol p-NP mL-1, respectivamente. A lipase B-22 foi superior no óleo
Palmitic C16:0 16.3±0.3 11.0±0.9 11.0±0.4 8.8±0.6
de maracujá liberando 4140 µmol p-NP mL-1. Essa lipase também foi
Arachidic C20:0 0.6± superior no óleo de babaçu (2934 µmol p-NP mL-1). É importante notar
Stearic C18:0 1.3±0.8 3.0±0.6 7.4±0.3 7.9±0.3 que existem diferenças na composição química entre esses dois e essa
Palmitoleic C16:1 0.4±0.1 0.4±0.1 enzima mostrou boa afinidade em óleos com ácidos graxos insaturados
(maracujá) e saturados (babaçu). A lipase B-10 foi a mais eficaz no óleo
Oleic C18:1 79.2±1.2 20.0±1.3 20.0±0,8 60.3±1.1
de buriti, liberando 4840 µmol p-NP mL-1. As lipases B-12 e B-17 foram
Linoleic C18:2 1.4±0.2 60.0±0.8 21.5±0.4 mais eficazes no óleo de castanha de caju, embora os resultados tenham
Linolenic C18:3 1.3±0.3 5.0±0.7 0.5±0.2 sido baixos para a hidrólise (2499 e 2482 µmol p-NP mL-1,
respectivamente).

Atividade hidrolítica Análise estatística

A Tabela 3 mostra o grau de afinidade entre lipase e óleo através da
liberação de p-NP. As lipases possuem afinidade específica em relação
aos ésteres, variando de acordo com o comprimento da cadeia de ácidos
graxos e suas posições no triglicerídeo.28 Os resultados indicam essas
diferentes especificidades das lipases testadas.
Com base nos resultados divulgados pela atividade hidrolítica,
foi aplicado um padrão fatorial para quatro experimentos: óleo de
buriti x lipase B-10, óleo de maracujá x lipase B-22, óleo de babaçu
x lipase B-22 e óleo de caju x lipase B- 12 (tabela 4).

Tabela 4. Resultado da hidrólise enzimática para obter ácidos graxos livres (% de AGL) para ensaios de óleos x enzimas de acordo com a matriz experimental

Fatores FFA%
Óleo de buriti Óleo de maracujá Óleo de babaçu Óleo de caju
Óleo:
Ensaio (ºC) Enzima (%) X X X X
Tampão
Lipase B-10 Lipase B-22 Lipase B-22 Lipase B-12
T01 40º(0) 3% (0) 1:3 (0) 9 3 76 9
T02 35º (-1) 4% (1) 1:2 (-1) 12 5 73 10
T03 35º (-1) 2% (-1) 1:2 (-1) 11 4 56 12
T04 40º (0) 1% (-1.68) 1:3 (0) 11 5 77 15
T05 40º (0) 3% (0) 1:1 (-1.68) 13 3 49 15
T06 35º (-1) 2% (-1) 1:4 (1) 15 4 85 15
T07 45º (1) 4% (1) 1:4 (1) 12 6 84 16
T08 35º (-1) 4% (1) 1:4 (1) 11 5 84 15
T09 40º (0) 3% (0) 1:3 (0) 14 3 77 13
T10 31.6 (-1.68) 3% (0) 1:3 (0) 16 5 46 15
T11 45º (1) 4% (1) 1:2 (-1) 11 5 78 10
T12 40º (0) 3% (0) 1:5 (1.68) 12 3 88 15
T13 48.4º (1.68) 3% (0) 1:3 (0) 16 4 86 11
T14 45º (1) 2% (-1) 1:2 (-1) 13 5 78 12
T15 45º (1) 2% (-1) 1:4 (1) 15 3 85 10
T16 40º (0) 5% (1.68) 1:3 (0) 15 2 78 14
T17 40º (0) 3% (0) 1:3 (0) 14 4 77 9
Vol. 35, No. 9 Hydrolytic activity of bacterial lipases in amazonian vegetable oils 1785

Tabela 5. Análise de variância (ANOVA) do óleo de babaçu x Lipase B-22 para a variável resposta (% AGL)

Fonte DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Regressão 9 2023.73 2023.73 224.85 2.86 0.090
Linear 3 1700.90 1700.90 566.96 7.22 0.015
Quadrado 3 150.45 150.45 50.15 0.64 0.614
Interação 3 172.37 172.37 57.45 0.73 0.565
Erro Residual 7 550.03 550.03 78.57
Falta de ajuste 5 249.36 249.36 109.87 329.62 0.003
Erro puro 2 0.67 0.67 0.33
Total 16 2573.76

A Tabela 4 mostra a matriz do planejamento experimental gerada a

partir do planejamento fatorial completo, contendo variáveis de entrada
codificadas com pontos centrais da árvore. Os níveis e combinações das
variáveis testadas e análise estatística foram preparados pelo programa
de computação estatística SGPLUS®. Além disso, a análise dos
resultados das experiências foi realizada usando o software estatístico
Minitab® 16 para construir os gráficos da superfície de resposta e o
contorno.
A Tabela 4 mostra os resultados experimentais observados nas
reações de acordo com a matriz experimental mostrada na Tabela 1,
variando de 2 a 88% de AGL a partir das reações de hidrólise. Em
média, a experiência envolvendo o óleo de babaçu apresentou os
maiores (média = 75% de AGL) e o óleo de maracujá os menores (média
= 4% de AGL). Como o experimento foi realizado com um extrato
enzimático bruto, os valores são relativamente baixos em comparação
com os relatados na literatura, onde a liberação de ácidos graxos
geralmente excede 60%. Somente as reações envolvendo óleo de
Figure 1. Pareto graph showing the effects of different variables on the
babaçu mostraram bons resultados.
concentration of % FFA
Os fatores estudados e seus níveis contribuíram para a hidrólise do
óleo de babaçu pela lipase B-22. O ensaio T12 (40 ° C, 3%, 1: 5)
mostrou a melhor eficiência no processo de hidrólise (88% de AGL).
Para experimentos envolvendo outros óleos, é necessário revisar os
processos e determinar outros fatores ou seus respectivos níveis
estudados.
O delineamento fatorial para a hidrólise do óleo de babaçu com
lipase B-22 foi analisado por análise de variância (ANOVA). A Tabela
5 mostra a análise dos efeitos dos parâmetros de reação para a hidrólise.
Os efeitos de interação de três ou mais fatores foram descartados.29 A
ANOVA revelou que os principais efeitos A = T (ºC) e C = Óleo:
Tampão foram variáveis que influenciaram estatisticamente a liberação
da resposta de ácidos graxos (% de AGL). Isso é evidenciado pela
magnitude do valor P.
Para essas variáveis, o teste da hipótese nula é rejeitado porque os
valores estimados para o teste foram inferiores a 5% (p <0,05), ou seja,
os efeitos têm menor probabilidade de representar apenas 5% do ruído.
A variável B = enzima (%) não foi significativa e todas as interações
(AA, BB, CC, AB, AC, CB) também não foram significativas. Figura 2. Gráfico de contorno para% de concentração de AGL em função da
Utilizando parâmetros significativos da resposta, foi proposto um temperatura (ºC) x óleo: tampão para o teste de hidrólise com óleo de babaçu versus
modelo: (% de AGL = 76,1785 + 13,8057A + 17,3671C, onde A = T lipase B-22 (exibir gráficos usando unidades codificadas)
(ºC) e C = (Óleo: Tampão)). O modelo obtido descreve as relações entre
variáveis dentro da faixa estudada, o que pode ser confirmado pelo (Óleo: Tampão) para o teste com óleo de babaçu versus lipase B-22.
coeficiente de determinação (R²), cujo valor foi 0,9862, onde são
A análise dos gráficos de curvas de nível revela uma região ideal
explicados 98,62% dos resultados.
para a reação hidrolítica do óleo de babaçu. De acordo com a Figura 2,
De acordo com o teste F, o modelo pode ser considerado bom para
existe uma faixa de alta eficiência na hidrólise diretamente proporcional
prever a resposta, porque o valor de F obtido foi de 3,42, um pouco
ao aumento do óleo: tampão (que aumenta a presença de água no
maior que o valor tabulado, de 3,31, com significância de 10%.
sistema) e também ao aumento da temperatura na reação.
Essa significância é examinada na Figura 1 (Gráfico de Pareto), que
mostra a maior influência estatística na resposta de liberação de ácidos
graxos (% de AGL) pelas variáveis que são interceptadas pela linha Determinação de espécies bacterianas
vertical (limite de rejeição p <0,05). Portanto, fatores significativos
serão avaliados usando o Response Surface na tentativa de melhorar o A homologia do DNA é a técnica molecular adotada como método
processo de hidrólise do óleo de maracujá. de consenso para a determinação das espécies bacterianas, embora
A Figura 2 representa as linhas de contorno para conversão de também existam técnicas bioquímicas e moleculares para diferenciação
ácidos graxos livres à luz das variáveis significativas A = T (ºC) e C =
1786
Tabela 6. Identificação de cepas bacterianas com base no sequenciamento parcial do 16S ribossômico
Tensão Código oficial
B-08 INPA P-124
B-10 INPA P-108
B-12 INPA P-799
B-16 INPA P- 803
B-17 INPA P-798
B-22 INPA P-106
de espécies, como o perfil lipídico das membranas citoplasmáticas. O
objetivo foi mostrar a identificação genética das bactérias selecionadas.
Sequências de 16S rDNA, genes que codificam 16S rRNA, 27 foram
usadas para inferir relações filogenéticas, onde o critério é mais
utilizado para diferenciar espécies de bactérias. As lipases ocorrem
amplamente na biosfera, onde são encontradas em bactérias, fungos e
leveduras. Uma variedade de lipases de bactérias gram-positivas e
gram-negativas foram purificadas, caracterizadas bioquimicamente e
submetidas à sequenciação e clonagem de seus respectivos genes.
Assim, a identificação das bactérias selecionadas é crucial, pois com
essas informações é possível desenvolver iniciadores específicos para o
gene da lipase. A comparação de apenas seis bactérias selecionadas
mostrou que quatro pertencem ao tipo Burkholderia cepacia (B-10; B-
12; B-16 e B-17) enquanto uma não é identificável (Burkholderia sp B-
08), e outro era o tipo Klebsiella (B-22) Tabela 6.
CONCLUSÃO
O processo enzimático proposto não foi eficiente nos quatro testes,
mas mostrou-se satisfatório para o experimento com óleo de babaçu e
lipase B-22. Os melhores resultados foram obtidos com a reação
realizada a 40 ° C, 3% para enzimas e uma relação óleo: tampão de 1: 5,
produzindo 88% de conversão em ácidos graxos livres. O modelo obtido
descreve as relações entre variáveis dentro da faixa estudada, o que pode
ser confirmado pelo coeficiente de determinação (R² = 0,9862) na
explicação dos resultados. A enzima B-22 mostrou preferência por
substratos de cadeia curta a média. A afinidade dessa enzima com o óleo
de babaçu pode ser importante para a preparação de óleo para produção
de biodiesel no processo de hidroesterificação. Outra aplicação é para a
obtenção de ácido láurico, um insumo importante para o
desenvolvimento de medicamentos para estimular o sistema
imunológico ou anti-inflamatório. Para os outros casos, é necessária
uma revisão dos fatores e seus níveis, em um esforço para aumentar a
eficiência do processo. A pesquisa em bioprocessamento de óleos
vegetais visa proporcionar valor agregado para essa matéria-prima
regional.
RECONHECIMENTO
Agradecemos a Crodamazon, Cupuama e a Universidade
Federal do Amazonas (UFAM) pela doação das amostras de óleo.
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AB252073.1 Burkholderia cepacia 100%
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