1° ELABORACION DE LAMINAS HISTOLOGICAS: 4 videos

TÉCNICAS HISTOLOGICAS

1° OBTENCION DE MATERIAL

Se pueden obtener muestras bajo diversos

métodos: Biopsias, necropsias e improntas.

2° FIJACION

Propósito: Preservar el tejido en forma similar a su

estado vivo, frenar la actividad enzimática que
produce la degradación, evitar la difusión de papilar
hacia fuera o dentro de la célula

- Procedimiento:
- 1) La muestra de tejido se recorta para
Luego de la fijación hay que quitar el agua
- entrar en un portaobjetos
del fijador por DESHIDRATACIÓN
- 2) Sacamos la muestra del líquido fijador

3° INCLUSION (PARAFINA)

Se debe lavar el tejido para quitar exceso de fijador, se deshidrata y pasa

por el líquido intermediario que es miscible con la parafina. En la
Infiltración la muestra se coloca en parafina, de manera que se impregne
con ella. En la INCLUSION se forma bloques de parafina dentro de estos
bloques están las muestras a estudiar, dejar enfriar para adquirir dureza

Procedimiento:
1) En una estufa, agarramos la muestra y lo colocamos en la parafina
liquida.
2) El calor de la estufa a 59°C evapora el Xilol, mientras se mete la parafina.

Confección de un taco con parafina

1) Prendemos un mechero, alejamos

los solventes de inclusión

2) Calentamos un cuchillo, cortamos

la parafina

3) Adherimos a una madera,

dejamos en la heladera
 4° SECCION Y MONTAJE

Usaremos: Los portaobjetos, micrótomo de

rotación

Partes del micrótomo de rotación

1) Porta espécimen (ponemos la muestra que incluimos con parafina)

2) Porta navaja (cortes sistólicos) ayuda a regular en micras del

grosor del corte

Proceso de corte

1) Cada vez que bajamos la mano avanza con el corte (el micrótomo de rotación)

2) Observamos que el corte del tejido está rodeado de parafina, entonces comenzamos hacer los cortes para el portaobjetos

3) Usamos una cuchilla nueva, sacamos la cuchilla que utilizamos para desgastar

4) Trabamos el cuchillo nuevo, colocamos el número de grosor que queramos

5) Confeccione una tira de cortes

5° TINCION Y COLORACION

Desparafinizacion: Sacar la parafina con Xilol (son solubles)

▪ Los cortes los ponemos en la porta preparados

▪ Los cortes de parafina los metemos en el Xilol 1, donde sacas la

Hidratación: La muestra pasamos por alcohol
parafina y diafaniza, al sacar del Xilol 1 observamos (diafanizado)
100% donde quita el Xilol (5min), luego a
102%(5min) ▪ Cuando suela el timer (5min), pasamos a Xilol 2 (trabajamos una
campaña para no respirar solventes tóxicos)
▪ Alcohol 96% comienza a hidratar los cortes,
alcohol 70 % (5min)

o Luego de hidratar comienza la tinción con

hematoxilina (10 min)

o Luego de la tinción con Hematoxilina,

comenzamos la tinción con Eosina

Fin de la técnica histológica: colocación del cubre objetos

con el bálsamo sintético, con una gota de bálsamo
colocamos arriba con otro cubreobjetos lo apoyamos
5° TEJIDO CONJUNTIVO

Fibras del tejido conjuntivo:

 Colágenas: Las fibras colágenas son las más frecuentes del tejido
conectivo

 Elásticas: Está formado por haces paralelos de fibras elásticas gruesas

con fibroblastos entre ellas y fibras colágenas finas.
- Se encuentra en el ligamento amarillo de la columna vertebral y el
ligamento suspensorio del pene. Las membranas elásticas
fenestrada de algunos grandes vasos sanguíneos también están
formadas por tejido elástico, pero solamente contienen elastina.
 Son fuertes, flexibles y resisten a las fuerzas de tracción
 Se distribuyen al azar, ramificándose para formar redes.

 Reticulares: Está constituído por células

reticulares estrelladas con prolongaciones
que contactan con vecinas y núcleo oval con
cromatina laxa, fibras reticulares que forman
una red de fibras ramificadas y algunos
macrófagos.
 - Se encuentra en médula ósea, bazo, linfonodos, hígado y en el tejido
linfoide.
 Muy delicadas.
 Diametro entre 0.5 y 2nm
 Forman redes extensas
 Funcion de apoyo celular
 Deben teñirse con impregnaciones argenicas y PAS
 Son PAS positivas.
 En impregnación argentica son negras y el colageno aparece marron.

Células del tejido conjuntivo:

 Fibroblastos: Es la célula más abundante del tejido conectivo alargada
con prolongaciones finas y un núcleo grande, ovoide con cromatina fina
y nucléolo evidente
 Función de producir y mantener los componentes de la matriz
extracelular (fibras y sustancia fundamental).
 células cebadas: - Se hallan ampliamente distribuidas en todos los
tejidos, principalmente en la piel y en las superficies mucosas cerca de
los vasos sanguíneos y linfáticos.
 Se caracterizan por presentar el citoplasma llena de gránulos
basófilos que se tiñen metacromáticamente con azul de toluidina

 Mastocitos: Es una célula grande ovoidea con un núcleo esférico central

y un citoplasma con numerosos gránulos de tamaño variable que
presentan metacromasia con azul de toluidina por presentar heparina
(proteoglicano sulfatado). Los gránulos también contienen histamina y
un factor que atrae eosinófilos y neutrófilos.

 Macrófagos: Células grandes, redondeadas con su superficie irregular

por la presencia de pequeñas prolongaciones. El núcleo es excéntrico,
ovoide, más pequeño y de color más oscuro que el del fibroblasto y
suele presentar una escotadura por lo que parece un riñón. El
citoplasma es basófilo y presenta vacuolas y gránulos densos pequeños.
- Su función es la defensa del organismo por intermedio de la
fagocitosis.
  células plasmáticas: Células de forma ovalada o redondeada con un
citoplasma intensamente basófilo y un núcleo excéntrico con la
cromatina de disposición radiada como rueda de carreta.
- Derivan de los linfocitos B y producen inmunoglobulinas

 adipocitos: Son células grandes, esféricas con una gran gota de grasa
en su interior (adipocitos uniloculares), con el citoplasma y el núcleo
desplazados hacia la superficie externa.
- Están rodeadas externamente por la lámina externa equivalente a
una membrana basal.
- Su función es almacenar triglicéridos. Este adipocito es propio de la
grasa blanca.

 Células mesenquimáticas indiferenciadas: Son las que pueden dar lugar

a distintas líneas celulares como: fibroblastos, osteoblastos,
cementoblastos y ocasionalmente, odontoblastos como respuesta
biológica, ante determinadas situaciones clínicas.

TEJIDO CONECTIVO LAXO:

También se denomina tejido conectivo areolar. Tiene cantidades casi iguales
de células, fibras y sustancia fundamental. Las células principales son los
fibroblastos. Sin embargo, también hay células del sistema inmunitario.
- FUNCIONES DEL TEJIDO CONECTIVO LAXO
Varios fundones del tejido conectivo laxo fueron mencionados en las secciones
precedentes. A continuación, se enumeran en las más importantes.
I) Les confiere a los tejidos resistencia al estiramiento y a la compresión.
2) Constituye el soporte mecánico de las células y de los tejidos can los que
se relaciona.
3) Constituye una de las vías que utilizan las células para desplazarse.
4) Es la media por el que lIega los nutrientes a las células y por el que se
eliminan sus desechos.
5) Frente a ciertas agresiones, algunas de sus células intervienen en las
respuestas'"inmunol6gkas de defensa del organismo.
6) Muchos de sus componentes son imprescindibles para cicatrizar las heridas.
7) Es uno de los medios por el que, arriban a las células sustancias inductoras
procedentes de otras células.

TCL mesenquimatoso
El tejido mesenquimal (también tejido mesenquimático), genéricamente
denominado mesénquima, es el tejido del organismo embrionario, de conjuntivo
laxo: con una abundante matriz extracelular, compuesta por fibras delgadas y
relativamente pocas células (aunque la celularidad es muy variable).
TCL mucoide
Se localiza alrededor de los vasos sanguíneos del cordón umbilical, cerca de
su inserción con la placa coriónica. Esta gelatina está compuesta por células
estrelladas o fusiformes, que se parecen a las células mesenquimales. Sus
extensiones, a menudo, contactan con las células adyacentes. Este tejido
presenta abundante ácido hialurónico, agua y escasas fibras de colágeno, poco
desarrolladas. También llamado tejido gelatinoso o gelatina de Wharton.

TCL aerolar
Es de los de más amplia distribución. Contiene tipos celulares como
fibroblastos, macrófagos, células plasmáticas, mastocitos y glóbulos blancos.
Se compone de fibras de colágena, elásticas y reticulares.
Se puede ver entre la piel y los músculos; en la médula ósea, así como
alrededor de los vasos sanguíneos y los nervios. Estas células de adipocitos
juntas forman el tejido adiposo o el tejido graso.

TCL adiposo
Se compone de un tipo celular llamado adipocira que almacenan triglicéridos.
- Se encuentra asociado al tejido areolar.
- Actúa como aislante para evitar la pérdida de calor. Es la principal
fuente de energía y brinda soporte y protección a diversos órganos.
TCL reticular
Es una variedad de tejido conjuntivo especializado que forma una malla
tridimensional estable, que otorga un soporte estructural a las células
migratorias de órganos relacionados directamente con los leucocitos de la
sangre como son el bazo (Fig.1), los ganglios linfáticos (Figs. 2 y 3) y la médula
ósea hematopoyética.
FIG. 1 FIG. 2

Las células reticulares, que corresponden a fibroblastos especializados, que

secretan las microfibrillas de colágeno III las que se asocian en manojos
formando las fibras reticulares. Estas se disponen formando una malla fibrilar
(Fig. 4) fina a lo largo de la cual se ubican las células reticulares, cuyos
procesos envuelven las fibras reticulares (Fig. 5) y a la escasa sustancia
fundamental. El sistema trabecular formado por la asociación de fibras y células
genera matriz con características de esponja en la cual células y fluídos
pueden desplazarse (Fig.6)
FIG. 3 FIG. 4
FIG. 5 FIG. 6

TCL elástico
Está formado por haces paralelos de fibras elásticas gruesas con fibroblastos
entre ellas y fibras colágenas finas. Se encuentra en el ligamento amarillo de la
columna vertebral y el ligamento suspensorio del pene.
-
  TEJIDO CONECTIVO DENSO
tiene menos células que el tejido conectivo laxo y al contrario de este último, su
MEC está densamente repleta de fibras colágenas. Según la disposición de las
fibras, existen dos subtipos de tejido conectivo denso: denso regular y denso
irregular.
FIBROBLASTO CELULAS SINOVIALES

FIBROSITO

TCD Regular
- Tiene las fibras de colágeno alineadas en paralelo. Esta disposición
proporciona al tejido una gran resistencia unidireccional a la tensión.
- Los mejores ejemplos de tejido conectivo denso regular son los
tendones y los ligamentos.
TCD Irregular:
- Tiene sus fibras colágenas entrelazadas al azar, formando una red
tridimensional que es resistente a la distensión en todas las direcciones.
- Suele localizarse en las cápsulas y paredes de los órganos, en la dermis
de la piel y en las glándulas.