Biotecnologia Animal

Luiz Lehmann Coutinho

Laboratório de Biotecnologia
ESALQ – USP
llcoutinho@usp.br
 Introdução

• Qual é o objetivo da produção animal?

• Produzir alimentos com eficiência e a
qualidade.
O que poderia ser feito ?
O que poderia ser feito ?
O que poderia ser feito ?
O que poderia ser feito ?
Importância do Melhoramento
Genético

Linhagem Dieta Peso (g) com 42 dias

2001 2001 2.672
2001 1957 2.126
1957 2001 578
1957 1957 539
Efeito da linhagem e dieta
Efeito da dieta
Efeito da Genética
 Conclusão parcial
• Qual a principal ferramenta para melhorar a
produção animal?
• Melhoramento genético
– 1) O melhoramento genético é de grande
importância para a produção.
– 2) O melhoramento genético sempre contribui
para o aumento da eficiência da produção
Quais características genéticas devem
ser melhoradas?

• Conversão alimentar
• Eficiência do crescimento
• Eficiência reprodutiva
• Sanidade
• Qualidade da carne
O que o a Angelina Joli e o
frango têm em comum?
Princípios
Expressão Gênica
 Sequenciamento de genoma
• Qual o custo para sequenciar o genoma de
uma pessoa?
Sequenciamento
 Diferenças vs. Semelhanças
• Entre espécies próximas?
• Entre indivíduos de uma mesma espécie?
Observações após o sequenciamento
de vários genomas
• Video anemia falciforme
 A diferença no DNA pode
explicar o fenótipo? Como?
 Conclusões parciais
• Indivíduos de uma mesma espécie são
muito parecidos (99,9%).
• As diferenças na sequencia de DNA são
pequenas (0.1%)
• Quanto é 0.1% de 3 bilhões de bases?
– 3 milhões
• Uma diferença na sequencia de DNA pode
mudar o fenótipo
Como detectar uma mutação
genética?
Cromossomo 5

ATAAC GCGCAATCACACACA........CTGACTGATATGTA

TATTGCGCGTTAGTGTGTGT........GACTGACTATACAT

Cromossomo 5’

ATAAC GTGCAATCACACACACACACTGACTGATATGTA

TATTGCACGTTAGTGTGTGTGTGTGACTGACTATACAT
PCR
 PCR
• Vídeo
 Eletroforese
• Vídeo
 Polimorfismo:
Cromossomo 5

ATAAC GCGCAATCTGACTGATATGTA

TATTGCGCGTTAGACTGACTATACAT
Cromossomo 5’
ATAAC GTGCAATCTGACTGATATGTA

TATTGCACGTTAGACTGACTATACAT
 Estudo de caso: Identificação de
mutação associada com prolificidade
em suínos
 Identificar genes responsáveis pela
prolificidade em suínos.

• Estratégia: Genes Candidatos

– Análise de genes conhecidos com base em
informações de fisiologia (hormônio ou
receptores ligados a reprodução).
– Mutações observadas em outras espécies.
– Resultados observados em animais
transgênicos.
 Prolificidade em suínos
• Animais da raça Meishan chinesa tem um
maior número de leitões por leitegada.

• Investigação de genes ligados ao sistema

reprodutivo, por exemplo: ESR1

• Detecção do polimorfismo por PCR e digestão

com enzima de restrição.
1) Identificação da sequencia do gene.

2) Desenho de primers e amplificação do gene.

3) Sequenciamento em diversos indivíduos para detecção de
polimorfimsos.
4. Detecção de SNP
5. Estudo do efeito do polimorfismo na prolificidade.
 Marcadores Genéticos em Uso
MARCADOR / TESTE OBSERVAÇÃO

Paternidade Uso não exclusivo

HAL Qualidade da carne – uso não exclusivo

ESR Tamanho de leitegada – uso exclusivo (PIC)

PRLR Tamanho de leitegada – uso exclusivo (PIC)

KIT Cor branca – uso exclusivo (PIC)

MC1R Cor vermelha / preta – uso exclusivo (PIC)

Fonte: PLASTOW (2000), citado por Freitas

 Marcadores Genéticos em Uso
MARCADOR / TESTE OBSERVAÇÃO

MC4R Crescimento e deposição de gordura – uso

exclusivo (PIC)
FUT1 Resistência à E. Coli F18 – uso exclusivo
(PIC / ITH suiça)
RN Qualidade da carne – teste exclusivo e não
exclusivo (breve)
AFABP, HFABP Gordura intramuscular – uso não exclusivo

IGF2 Composição da carcaça – uso exclusivo

(Seghers)
"Trade secret tests" Várias características

Fonte: PLASTOW (2000), citado por Freitas

Bovinos
Bovino com fenótipo de musculatura
dupla

Castelhano, E. C., 2000

Musculatura dupla em bovinos

McPherron et al., Nature e PNAS 1997

Clop, A., Marcq, F., Takeda, H., Pirottin, D., Tordoir, X., Bibe, B., Bouix, J., Caiment, F., Elsen,
JM., Eychenne, F., Larzul, C., Laville, E., Meish, F., Milenkovic, D., Tobin, J., Charlier, C.,
Georges, M.: A mutation creating a potential illegitimate microRNA target site in the
myostatin gene affects muscularity in sheep., Nat Genet 38:813-818, 2006.
Pubmed reference: 16751773.
Georges, 2007
Genoma bovino
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/
Testes de DNA para bovinos

•Tenderness •Calving ease

•Marbling •Docility
•Quality grade •Myostatin
•Yield grade •Coat color
•Fat thickness •Breed-specific
•Ribeye area horned/polled
•Heifer pregnancy rate •Multisire parentage
•Stayability (longevity) •BVD-PI diagnostic test
Novas tecnologias permitem testar milhares
de variações genéticas por animal
Seleção com base em todo o
genoma
Testes genéticos para animais
Genética
 Quais as vantagens do uso de
marcadores moleculares?
• Determinação direta do genótipo
• Características de baixa herdabilidade
• Características não determináveis nos dois
sexos
• Características difíceis ou caras para serem
determinadas
O que mais pode ser feito quando
um gene que influencia a
produção é identificado?
Produção in vitro do produto
gênico
Criação de animal
transgênico
 Microinjeção em
Pronúcleos
Vantagem
linhas transgênicas com
expressão correta.

 limitado à embriões
de 1 célula,
Desvantagens  difícil visualização do
pronúcleo,
 introdução de várias
cópias do transgene.
 Genes sendo transferidos
• Hormônio de Crescimento

• Proteína Anti-congelante

• Hormônio Liberador do Hormônio de

crescimento

• IGF-I
 Salmonideo transgênico

Promotor AFP + gene HC

Salmonideo Transgênico
Edição Gênica

Doudna and Charpentier, 2014

83
Bovino sem chifres
 A pesquisa na área de
biotecnologia:
• Identificação de genes de interesse
• Uso de informação genética no
melhoramento animal
• Produção in vitro de proteínas
• Regulação da expressão gênica
• Produção de transgênicos
 Principal limitação
• Identificação de genes de interesse
• Determinação e validação dos painéis de
SNP
 Resumo
• Importância da genética
• Indivíduos de uma mesma espécie são muito
parecidos
• Pequenas variações no DNA podem mudar o
fenótipo
• Vários genes podem estar envolvidos com a
variação do fenótipo
• Vantagens dos marcadores moleculares
• Genes importantes podem ser explorados de
diferentes maneiras
 Qual a diferença no DNA que
explica a diferença no fenótipo?

21 dias
A genética influencia qualidade
da carne?
Produção de um mutante em
camundongo: GDF-8

Deleção de GDF-8 (Miostatina) em camundongo

Fonte: McPherron et al, Nature 1997