 Extração de Proteínas para análise proteômica

A extração de proteínas consiste em

métodos usados para obter todas as
proteínas para determinada análise, como
por exemplo, estudo de fármacos em células
tumorais para analisar a apoptose celular. E
para montar e preparar o extrato proteico, é
importante realizar algumas questões:
 Qual é o grau de purificação de interesse?

 Qual é a fonte de proteínas? É importante

saber a fonte de proteínas, pois dependendo do
material biológico pode haver alguns inibidores e
dificultando a análise.

 Qual é o grau de pureza e atividade

biológica desejados?

 Quais procedimentos de purificação

disponíveis e qual vou utilizar? Pode-se retirar
contaminantes que não são proteicos ou utilizar
técnicas para limpar a amostra retirando
contaminantes. Contaminantes são substâncias
que eu não quero no meu extrato proteico. Por
exemplo, polifenóis, carboidratos (grande
quantidade de carboidratos na amostra pode
prejudicar na extração e também na
eletroforese).

 Tecido, bactérias, intra ou extracelular?

Cada material biológico possui propriedades
distintas, isto é, a extração de proteínas de um
órgão é diferente de uma folha ou caule. Desta
forma, é importante ter conhecimento do material
e o tipo de procedimento utilizado.

 Quais são os equipamentos disponíveis?

 Principais etapas para preparar o extrato

proteico:
 Condições básicas de obtenção:
 Temperaturas baixas: para trabalhar com
proteínas é sempre em temperaturas baixas.
Existem proteínas termófilas (resistentes a
altas temperaturas), mas geralmente
possuem proteínas sensíveis a temperaturas
altas e suscetíveis a degradação.
 Temperatura de atividade biológica: a
temperatura ideal para a proteína realizar sua
atividade, é na faixa de temperatura do
organismo de origem (20o a 37o graus).