Código: IT XX

PH LABORATÓRIO AMBIENTAL
Revisão: 00

INSTRUÇÃO DE TRABALHO Emissão: xx

Determinação de Fósforo por Espectrometria

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Nome Função Assinatura Data

Elaborado por: Ana Cleide Santos

Análise crítica: Nathielly Martins Zomiote

Aprovação: Ana Cleide Santos

1. Objetivo

Descrever a metodologia para determinação do elemento fósforo (P) em produtos ou

subprodutos de origem animal, vegetal, mineral, rações e concentrados.

2. Aplicação

Aplicável aos produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal, mineral, rações e

concentrados recebidos no laboratório PH ambiental.

3. Referências Normativas e/ou Bibliográficas

- BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de

Defesa Agropecuária. Compêndio Brasileiro de Alimentação Animal, Edição
Vigente.

- BRASIL. Portaria n° 108, de 4 de setembro de 1991. Aprova os Métodos Analíticos

para controle de alimentos para uso animal. Diário Oficial da União, Brasília, DF,
17 set. 1991. Seção I, p.19813.

4. Termos e Definições

FOR Formulário
IT Instrução de Trabalho

5. Descrição da Instrução de Trabalho

5.1. Material

5.1.1. Equipamentos

- Balança analítica;
- Espectrofotômetro UV-Vis;
- Estufa de secagem;
- Forno mufla;
- Placa aquecedora.

5.1.2. Vidrarias e outros materiais

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- Balões volumétricos;
- Bastões de vidro;
- Cadinho de porcelana ou quartzo;
- Dessecador;
- Erlenmeyer 125mL ou becker graduado de 150mL;
- Funil analítico;
- Papel de filtro qualitativo ou quantitativo filtração média;
- Pipetas volumétricas e graduadas ou pipetador automático;
- Proveta;
- Vidro relógio.

5.1.3. Reagentes e Soluções

- Ácido clorídrico P.A.;

- Ácido nítrico P.A.;
- Ácido sulfúrico P.A.;
- Fosfato de potássio monobásico (KH2PO4) P.A.;
- Metavanadato de amônio P.A.;
- Molibdato de amônio P.A.;
- Padrão de fósforo de 1000 ppm (mg/L).

Fazer o registro de abertura e avaliação de reagentes P.A e soluções de pronto uso no

FOR xx – Controle de Utilização de Reagentes P.A e Soluções de Pronto Uso e
registro de todas as soluções preparadas relacionadas nesta IT no FOR xx – Controle
do preparo de soluções. Para controle de padrões, utilizar o FOR GQ 404 –
Avaliação e controle de materiais de referencia. Para o registro da análise, deve
ser utilizado o FOR ALA 476 – Ficha de análise – Conformidade.

5.1.3.1. Preparo de Soluções

a) Solução padrão de fósforo (1000 ppm)

- Pesar exatamente 4,3940 g de KH2PO4 (Fosfato de potássio monobásico) P.A.

previamente seco em estufa a 105ºC por duas horas;
- Solubilizar e transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL;
- Adicionar aproximadamente 500 mL de água destilada e 10 mL de H2SO4 10 N.
- Completar o volume;

Nota 1: Pode ser utilizada uma solução pronta de 1000 ppm (mg/L), com laudo de
análise ou certificado de referência.

b) Solução reagente de ácido sulfúrico 10N

- Transferir cuidadosamente cerca de 266 mL de H2SO4 P.A. para balão volumétrico

de 1000mL, contendo aproximadamente 700 mL de água destilada;
- Esfriar e completar o volume.
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c) Solução reagente de metavanadato de amônio 0,25%

- Pesar 2,5 g de metavanadato de amônio P.A. e solubilizar em 500 mL de água

destilada fervente;
- Esfriar e adicionar lentamente com agitação, 350 mL de HNO3 P.A;
- Transferir para balão volumétrico de 1000 mL, esfriar e completar o volume com
água destilada deionizada. Estocar em frasco âmbar.

d) Solução reagente de molibdato de amônio 5%

- Pesar 50 g de molibdato de amônio P.A. e solubilizar em 500 mL de água destilada

quente (60º a 70ºC aproximadamente);
- Esfriar e transferir para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume. Estocar
em frasco âmbar.

Nota 2: As soluções (a até d) citadas possuem validade por 1 ano, a partir da data
do preparo.

e) Reagente misto

- Juntar 1 parte de solução de metavanadato de amônio com 1 parte da solução de

molibdato de amônio e homogeneizar. Preparar momentos antes da utilização. Não
armazenar para uso posterior.

5.2. Descrição da metodologia

5.2.1. Preparo da curva de calibração:

- Preparar uma solução intermediária de 80 ppm, pipetando 8 mL da solução de

1000 ppm e completando para 100 mL;
- A partir da solução de 80 ppm, preparar os pontos 2, 4, 6, 8, 12 e 16 ppm para a
curva, pipetando respectivamente 2,5; 5; 7,5; 10; 15 e 20 mL da solução. Adicionar
20 mL do reagente misto e completar para 100 mL;
- Registrar o preparo da curva no FOR ALA 478 – Registro do Preparo de Curvas
Analíticas. Uma nova curva deve ser preparada pelo menos quatro vezes ao ano,
ou quando o analista julgar necessário.
- As soluções da curva possuem validade por 3 meses, a partir da data do preparo.

Nota 3: Alternativamente, pode-se preparar diretamente a solução de 80 ppm:

dissolver 0,350 g de KH2PO4 em 300 mL de água destilada, adicionar 10 mL de ácido
sulfúrico 10N e completar para 1000 mL.

5.2.2. Extração e digestão da amostra:

a) Via seca
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- Pesar em cadinho de porcelana cerca de 0,50 a 5,00g da amostra (de acordo com
a concentração de fósforo esperada), anotar o peso no FOR ALA 476 – Ficha de
análise – Conformidade.
- Levar em seguida à chapa aquecedora para desidratação e carbonização, ou uma
noite (em torno de 12 horas) na estufa 105ºC;
- Em seguida levar à mufla em temperatura entre 500 a 550ºC por no mínimo 3
horas, até obter cinzas branca, registrando no FOR SGQ 055 – Controle
temperatura X tempo. Prolongar se necessário, até eliminar toda a matéria
orgânica.
- Esfria-se em dessecador até a temperatura ambiente;
- Adicionar 10 mL de uma mistura de ácido clorídrico p.a e 5 mL ácido nítrico p.a, ou
10 mL de acido clorídrico 50% (1+1);
- Aquecer em chapa aquecedora por no mínimo 10 minutos, esfriar e filtrar
quantitativamente para balão volumétrico de 100 mL, completando o volume com
água destilada/deionizada;
- Proceder às diluições convenientes de acordo com a curva padrão pré-
estabelecida.

b) Via úmida

- Pesa-se em béquer de vidro de 150 mL cerca de 0,50 a 5,00g da amostra (de

acordo com a concentração de fósforo esperada) anotar o peso na ficha de
análise;
- Adicionar 10 mL de ácido clorídrico p.a e 5 mL ácido nítrico p.a, levar para chapa
aquecedora e ferver até o desprendimento de fumos amarelos, após observar o
momento que a amostra fique com volume reduzido e não desprenda vapores
amarelados, assim caracterizando completa eliminação de toda a matéria orgânica
da amostra;
- Retirar da chapa aquecedora e esfriar;
- Filtrar em papel de filtro, filtração média ou qualitativa em balão volumétrico de 100
mL;
- Fazer as diluições de acordo com a concentração do elemento na amostra, de
forma que fique dentro da faixa de trabalho estabelecido em relação à curva
padrão;

5.2.3. Determinação da concentração de fósforo na amostra:

- Pipetar volumetricamente para balão de 100 mL alíquotas da solução estoque, de

maneira que a leitura esteja dentro da faixa de trabalho da curva analítica
previamente construída.
- Adicionar 4mL de ácido sulfúrico 10N e 20mL do reagente misto;
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- Completar o volume com água destilada, homogeneizar e aguardar de 5 a 10

minutos antes de fazer a leitura;
- Paralelamente, preparar um branco contendo os mesmos volumes de ácido
sulfúrico 10N, reagente misto e água destilada/deionizada.
- Determinar a absorbância ou transmitância em espectrofotômetro a 420nm,
zerando o instrumento com um branco;
- Comparar a absorbância ou transmitância com a curva padrão previamente
elaborada, ou usar equação de regressão.
- A cada uso do equipamento, preparar o ponto 8 ppm, realizar uma leitura e anotar
no FOR SGQ 451 – Coleta de dados para monitoramento de carta de controle.

5.3. Cálculos e expressão de resultados

Fósforo % = L x S x D x 100
PxA

Onde: L = Leitura da amostra em mg/L

D = Fator de diluição
S = Volume da solução estoque
P = Peso da amostra em miligrama
A = Volume da alíquota utilizada

Ou:
%Fósforo = L x 100
[ ]F

Nota 4: %PO4 = P% x FATOR DE CONVERSÃO

Onde: L = [x] da equação de regressão

[ ]F = concentração final da solução lida em relação à diluição

A equação da reta é definida por: y = ax + b

Equação de regressão: X = y – a
b
Onde:
y = leitura em absorbância
a = coeficiente angular
b = coeficiente linear
X = concentração

6. Controle de Registros

FOR SGQ 055 – Controle temperatura X tempo

FOR SGQ 056 – Controle do preparo de soluções
FOR SGQ 182 – Controle de Utilização de Reagentes P.A e Soluções de Pronto Uso.
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FOR SGQ 404 – Avaliação e controle de materiais de referência

FOR SGQ 451 – Coleta de Dados para Monitoramento de Carta de Controle
FOR ALA 476 – Ficha de Análise – Conformidade
FOR ALA 478 – Registro do Preparo de Curvas Analíticas

7. Controle das Alterações

Item
Descrição da alteração
alterado

Anexos

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