Código: IT xx

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INSTRUÇÃO DE TRABALHO Emissão:xx

Determinação de Fibra Bruta Página: 1 de 6

Nome Função Assinatura Data

Elaborado por: Ana Cleide Santos

Análise crítica: Nathielly Martins Zomiote

Aprovação: Ana Cleide Santos

1. Objetivo

Definir e padronizar o procedimento para a determinação de fibra bruta em alimentos

para animais e seus ingredientes. A fibra bruta consiste no resíduo insolúvel composto
principalmente de celulose, lignina e pentosanas obtido após a digestão da amostra
em ácido e base diluídos.

2. Aplicação

Produtos ou subprodutos de origem vegetal, rações e concentrados recebidos pelo

laboratório PH ambiental.

3. Referências Normativas e/ou Bibliográficas

- AOCS Standard Procedure - Ba 6a-05, Crude Fiber Analysis in Feeds by Filter

BagTechnique, Reapproved 2009.

- BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de

Defesa Agropecuária. Compêndio Brasileiro de Alimentação Animal, 2013.

- BRASIL. Portaria n° 108, de 4 de setembro de 1991. Aprova os Métodos Analíticos

para controle de alimentos para uso animal. Diário Oficial da União, Brasília, DF,
17 set. 1991. Seção I.

4. Termos e Definições

FOR Formulário
IT Instrução de Trabalho

5. Descrição da Instrução de Trabalho

5.1. Materiais/Equipamentos

- Balança analítica
- Cadinho de porcelana para alta temperatura
- Dessecador contendo agente dessecante (sílica gel ou cloreto de cálcio anidros)
- Determinador de fibra bruta
- Estufa de secagem
- Forno Mufla
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- Pinça para cadinho tipo tenaz

- Sachê para análise de fibra bruta

5.2. Reagentes e/ou Soluções

- Acetona P.A;
- Álcool Etílico P.A;
- Ácido Sulfúrico P.A. (d = 1,84 g/mL);
- Hidróxido de sódio P.A;
- Solução de Ácido Sulfúrico 1,25% (0,255N);
- Solução de Hidróxido de Sódio 1,25% (0,313N);
- Solução antiespumante (álcool amílico, Tween, silicone);
- Papel indicador de pH universal 0-14.

5.2.1 Preparo e padronização da Solução de Ácido Sulfúrico 1,25% (0,255N)

- Medir 7,00 mL de ácido sulfúrico P.A. e transferir para balão de volumétrico de

1000 mL contendo aproximadamente 500 mL de água fria. Esfriar, completar o
volume e homogeneizar. Esta solução deve ser armazenada em temperatura
ambiente pelo prazo máximo de 6 meses.

- Pesar 0,1325 g de carbonato de sódio previamente dessecado a 200 ºC por pelo

menos 1 hora; dissolver em aproximadamente 50 mL de água destilada. Adicionar
algumas gotas de alaranjado de metila. Titular com a solução de ácido sulfúrico
1,25% (0,255 N) até viragem para a coloração laranja-avermelhado.

- Cálculo da normalidade corrigida (o valor obtido deve ser de 0,255 ± 0,01):

NcH2SO4 = 2 x m carbonato de sódio pesada

0,106 x V H2SO4
Onde:
NcH2SO4= Normalidade corrigida do ácido sulfúrico (0,255N ± 0,01N)
m = massa do carbonato de sódio pesada (g)
V = volume gasto de ácido sulfúrico (mL)

5.2.2 Preparo e padronização da Solução de Hidróxido de Sódio 1,25% (0,313N)

- Preparo: Pesar exatamente 12,50 g de hidróxido de sódio P.A. em béquer,

solubilizar com água e transferir quantitativamente para balão de 1000 mL. Esfriar,
completar o volume e homogeneizar. Esta solução deve ser armazenada em
temperatura ambiente pelo prazo máximo de 6 meses.

- Padronização: Pesar aproximadamente 1,00 g ± 0,05 g de biftalato de potássio

P.A. (≥99,5%) previamente dessecado a 105ºC por pelo menos 1 hora; dissolver
em aproximadamente 75 mL de água destilada e adicionar algumas gotas de
fenolftaleína. Titular com a solução de hidróxido de sódio 1,25% até o
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aparecimento de coloração rósea persistente. A normalidade corrigida da solução

deve ser de 0,313 ± 0,005 N.

- Cálculo da normalidade corrigida:

Cálculo: NcNaOH = __mbiftalato de potássio____

0,2042 x V NaOH gasto
Onde:
NcNaOH = Normalidade corrigida do hidróxido de sódio
m = massa (g)
V = volume (mL)

A preparação das soluções deve ser registrada no FOR xx – Controle de preparo de

Soluções.

5.3. Procedimento Analítico

- Para os registros desta análise, deve ser utilizado o FOR xx - Ficha de Análise -
Conformidade.
- Anotar o código da amostra no sachê utilizando lápis 6B ou similar.
- Pesar o sachê vazio em balança analítica e anote o valor na ficha de análise.
- Dentro do sachê, pesar de 0,25 a 3,00g da amostra previamente homogeneizada e
anotar a massa na ficha de análise; a massa deve ser definida de acordo com o
teor de fibra bruta estimado. A amostra, antes da pesagem, deve ser
desengordurada e seca em estufa a 105ºC.
- Fechar o sachê.
- Realizar a hidratação das amostras colocando-as dentro de um béquer com água
destilada/deionizada/purificada. Homogeneizar os sachês com as mãos sem se
preocupar com a cor da água que sai dos saches, por no mínimo 30 minutos.
- Colocar os sachês contendo as amostras no suporte do equipamento para análise
de fibra bruta.
- Introduzir o suporte contendo os sachês com as amostras na câmara de digestão
do equipamento e verifique se a válvula frontal do equipamento está na posição
FECHA.
- Adicionar a solução de ácido sulfúrico 1,25 % (0,255 N) na câmara de digestão de
modo que as amostras fiquem totalmente mergulhadas nessa solução.
- Ligar a agitação e o aquecimento (100°C); certifique-se de que a água de
circulação para refrigeração da parte superior do equipamento está com fluxo
suficiente para que a refrigeração ocorra. Mantenha a refrigeração durante todo o
procedimento, inclusive nas lavagens com água.
- Quando a temperatura alcançar aproximadamente 97,5°C comece a contar o tempo
de 30 minutos para que a digestão ácida ocorra; o tempo pode ser programado no
próprio equipamento.
- Em seguida, desligar o aquecimento e a agitação. Escoar a solução. Para isso,
basta girar a válvula frontal do equipamento para a posição ABRE.
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- Após o escoamento, feche a válvula (posição FECHA) e acrescente água

destilada/deionizada/purificada para efetuar a primeira lavagem. Utilize quantidade
de água suficiente para manter as amostras totalmente mergulhadas. Para que o
processo seja mais rápido, a água pode ser previamente aquecida (temperatura de
ebulição).
- Ligue o aquecimento (100°C) e a agitação novamente.
- Quando a temperatura alcançar aproximadamente 97,5 °C, aguarde cerca de 5
minutos.
- Posteriormente, desligue o aquecimento e a agitação e escoe a água.
- Após o escoamento, feche a válvula e acrescente água
destilada/deionizada/purificada novamente para efetuar a segunda lavagem.
- Repita o procedimento de lavagem até que a água escoada apresente o mesmo pH
da água destilada/deionizada/purificada antes de ser adicionada ao equipamento. O
pH deve ser verificado utilizando indicador universal de pH 0-14.
- Com a válvula na posição FECHA, coloque a solução de hidróxido de sódio (1,25 %
(0,313 N) dentro do equipamento de modo que as amostras fiquem totalmente
mergulhadas nessa solução.
- Ligue novamente a agitação e o aquecimento (100°C). Em caso de formação
excessiva de espuma, adicione algumas gotas do agente antiespumante.
- Quando a temperatura alcançar aproximadamente 97,5 °C comece a contar o
tempo de 30 minutos para que a digestão básica ocorra.
- Após esse período, desligue o aquecimento e a agitação e escoe a solução.
- Repita o procedimento de lavagens com água destilada/deionizada/purificada.
Devem ser realizadas lavagens sucessivas até que o pH verificado seja o mesmo
da água antes de ser adicionada ao equipamento.
- Retire o suporte do equipamento e coloque os sachês contendo as amostras em
um béquer contendo álcool etílico P.A. (etanol P.A.). A quantidade de álcool deve
ser suficiente para que todos os sachês fiquem mergulhados. Agite, descarte o
álcool e repita esta operação.
- Na capela de exaustão, proceda a lavagem, da mesma forma, duas vezes com
acetona (P.A.).
- Ainda na capela, coloque os sachês sob papel absorvente ou similar e aguarde até
que estejam secos.
- Coloque os sachês em estufa à temperatura de 105ºC por no mínimo 6 horas.
- Após decorrido esse tempo, coloque os sachês em um dessecador e aguarde que
as amostras alcancem a temperatura ambiente. Efetue a pesagem do sachê
contendo a amostra seca e anote a massa na ficha de análise.
- Pesar os cadinhos vazios, devidamente numerados e também anotar as massas na
ficha de análise. Anotar o número do cadinho no formulário junto à massa. Seja
atencioso com a correspondência entre o número do cadinho e o número do sache.
- Levar as amostras para o forno mufla por no mínimo duas horas entre 550 e 600ºC.
- Desligar a mufla e aguardar que a temperatura esteja de abaixo de 150ºC para
retirar os cadinhos.
- Retire os cadinhos da mufla utilizando sempre luva e uma pinça tipo tenaz; coloque-
os diretamente em um dessecador e deixe esfriar até atingir a temperatura
ambiente.
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- Após o resfriamento, pese em balança analítica os cadinhos contendo as cinzas e

anote a massa na ficha de análise.

5.4 Determinação do Branco dos Sachês

Os dados referentes ao branco do sachê devem ser coletados no FOR xx - Controle

do Branco do Sachê para Fibra Bruta, entre eles: as cinzas do sachê que passou
pela digestão (D) e as cinzas do sachê sem a digestão (A). A correção do branco “C” é
o valor de D dividido por A. Além disso, calcular a média referente ao branco das
cinzas do sachê que passou pela digestão (B). Os dados devem ser obtidos no
mínimo uma vez por lote de sachês.

5.5. Cálculo e Expressão de Resultados

% Fibra Bruta (FB): {[SA – (SVxC)] - (PC+MM - PCd)} x 100

PA

% Fibra Bruta na Base Seca (FBbs): FB x 100

100-U

Onde,
C = Correção do branco, valor de D dividido por A (D = cinzas do sachê que passou
pela digestão e A = cinzas do sachê sem a digestão): dados coletados no FOR xx -
Controle do Branco do Sachê para Fibra Bruta;
SA = Peso do sachê contendo amostra após secagem na estufa
SV = Peso do sachê vazio
PC+MM = Peso do cadinho contendo a matéria mineral após incineração na mufla
PCd = Peso do cadinho vazio
PA = Peso da amostra
U = Umidade

Nota 1: O resultado pode ser expresso em % (percentagem) ou em g/kg (grama por

quilograma); ou ainda, quando solicitado, em % (percentagem) de fibra bruta na base
seca.

6. Controle de Registros

FOR xx – Controle de preparo de Soluções

FOR xx - Ficha de Análise – Conformidade
FOR xx - Controle do Branco do Sachê para Fibra Bruta

7. Controle das Alterações

Item
Descrição da alteração
alterado
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Anexos

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