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Moléculas 2012, 17, 8742-8752; doi:10.3390/moléculas17088742

ACESSO LIVRE

moléculas
ISSN 1420-3049
www.mdpi.com/journal/molecules
Artigo

Extração por cavitação com pressão negativa de quatro vincas principais

Alcalóides das folhas de Catharanthus roseus

Fansong Mu 1,2,3,†, Liuqing Yang 1,2,3,†, Wei Wang 1,2,3, Meng Luo 1,2,3,4,*, Yujie Fu 1,2,3,
Xiaorui Guo 1,2,3
e Yuangang Zu 1,2,3,*

1
Centro de Pesquisa de Engenharia de Biopreparação Florestal, Ministério da Educação, Northeast
Forestry University, Harbin 150040, China Key Laboratory of Forest
2
Plant Ecology, Ministério da Educação, Northeast Forestry University, Harbin 150040, China State Engineering
Laboratory of Bio-Resource
3
Eco-Utilization , Harbin 150040, China Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co. Ltd., Taizhou 318000, China
4

† Estes autores contribuíram igualmente para este trabalho.

* Autores aos quais a correspondência deverá ser endereçada; E-mails: wslm_5555@yahoo.com.cn (ML); zygorl@vip.hl.cn (YZ);
Tel.: +86-451-8219-1517 (ML); Fax: +86-451-8219-2082 (ML).

Recebido: 15 de maio de 2012; na forma revisada: 11 de julho de 2012 / Aceito: 13 de julho de 2012 /
Publicado: 25 de julho de 2012

Resumo: No presente estudo, um método aprimorado denominado extração por cavitação com pressão negativa
(NPCE) seguido de cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa (RP-HPLC) foi desenvolvido para a
extração e quantificação de vindolina (VDL), catarantina (CTR) , vincristina (VCR) e vinblastina (VLB) de folhas de
Catharanthus roseus . O método otimizado empregou partículas de malha 60, etanol 80%, pressão negativa de
-0,075 MPa, proporção sólido-líquido de 1:20, 30 min de extração e três ciclos de extração. Sob estas condições
otimizadas, os rendimentos de extração de VDL, CTR, VCR e VLB são 0,5783, 0,2843, 0,018 e 0,126 mg/g DW,
respectivamente. Esses rendimentos de extração são equivalentes aos do conhecido método de extração
ultrassônica e superiores aos rendimentos da extração por maceração e extração por refluxo por aquecimento.
Nossos resultados sugerem que o NPCE-RP-HPLC representa uma excelente alternativa para a extração e
quantificação de alcalóides da vinca para aplicações em escala piloto e industrial.

Palavras-chave: Catharanthus roseus; alcalóides da vinca; extração por cavitação com pressão negativa
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Moléculas 2012, 17 8743

1. Introdução

Catharanthus roseus (L.) G. Don (pervinca de Madagascar) é uma planta produtora de alcalóide indol terpenóide (TIA)
que pertence à família Apocynaceae. Esta planta tem sido historicamente usada para tratar uma ampla variedade de doenças.
A pesquisa mostra que Catharanthus roseus (C. roseus) contém mais de 130 compostos, e muitos dos quais apresentam
citotoxicidade [1,2]. Poucas espécies foram tão estudadas como C. roseus e tornou-se uma espécie modelo para o estudo do
metabolismo secundário em plantas.
O interesse nesta espécie surge do seu papel terapêutico como fonte dos alcalóides anticancerígenos vinblastina (VLB) e
vincristina (VCR) [3,4]. VLB e VCR são alcalóides antitumorais bisindol; suas moléculas precursoras monoméricas são
vindolina (VDL) e catarantina (CTR) (Figura 1). A vinblastina e a vincristina têm estruturas químicas muito semelhantes, mas
os seus efeitos no corpo não são os mesmos.
A vinblastina foi introduzida em 1960 e é usada para tratar tipos específicos de câncer, incluindo doença de Hodgkin, câncer
de mama, câncer testicular e câncer de pulmão de células não pequenas. A vincristina é uma forma oxidada de vinblastina e
foi introduzida em 1963. A vincristina é usada no tratamento de doenças agudas.

leucemia linfoblástica (LLA) e proporcionou um avanço significativo no sucesso do tratamento da LLA em crianças. Quando a
vincristina é adicionada ao regime de tratamento para crianças que sofrem de LLA, a taxa de sobrevivência chega a oitenta
por cento [6]. A atividade anticâncer desses alcalóides é atribuída à sua capacidade de romper os microtúbulos, causando a
dissolução dos fusos mitóticos e a parada da metáfase nas células em divisão [7,8].

Figura 1. Estrutura química da vindolina (VDL) e catarantina (CTR), vincristina (VCR), vinblastina (VLB).

N
H

Ó N Ó Ó

OH Ó
Ó
Ó Ó

Vindolina Catarantina
OH OH

N N

N N
N N
H H
Ó Ó

Ó Ó

Ó N Ó Ó N Ó

OH OH
Ó
Ó Ó Ó Ó Ó Ó

Vincristina Vinblastina
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Moléculas 2012, 17 8744

Por existirem em pequenas quantidades (0,01–0,1 mg/g DW) na planta, a extração de VLB e VCR e seus precursores da
planta tem sido um método importante em escala industrial. Na tentativa de melhorar a produção de alcalóides valiosos, como
VDL, CTR, VCR e VLB, vários estudos sobre C. roseus relataram o isolamento de alcalóides da vinca por cromatografia de
partição centrífuga, extração supercrítica de CO2, extração assistida por ultrassom e extração assistida por micro-ondas [ 9–
13]. No entanto, estes métodos não são adequados para produção em escala industrial devido aos elevados custos do
equipamento e ao baixo rendimento de material. Portanto, encontrar métodos de alta eficiência, baixo custo e ecologicamente
corretos para a extração de alcalóides da vinca para produção em escala piloto, bem como para produção em escala industrial,
é de grande importância.

Nos últimos anos, um novo método de extração denominado extração por cavitação com pressão negativa (NPCE)
aumentou em popularidade; O NPCE é mais eficiente em temperaturas e intensidades constantes mais baixas do que as
tecnologias de extração clássicas, como extração por maceração, extração por refluxo de calor e extração assistida por
ultrassom. Desde que foi desenvolvida pela primeira vez em 2009, a técnica NPCE tem sido amplamente utilizada na extração
de vários compostos bioativos de ervas chinesas [14–20]. Até agora nenhum relatório foi publicado sobre o uso de NPCE para
extração de alcalóides. Neste estudo, NPCE seguido de detecção por RP-HPLC é proposto para a extração e quantificação de
quatro principais alcalóides de vinca (VDL, CTR, VCR e VLB) de folhas de C. roseus . Este estudo avaliou os efeitos do
tamanho das partículas, concentração de solvente, bem como variáveis operacionais do NCPE, incluindo pressão negativa,
proporção sólido-líquido, tempo de extração e ciclos nos rendimentos de extração dos quatro principais alcalóides da vinca.
Este trabalho pode fornecer dados valiosos para aplicações em escala piloto e industrial.

2. Resultados e Discussão

2.1. Efeito do tamanho das partículas e da concentração de etanol

O tamanho das partículas do material vegetal e a concentração do solvente têm um grande impacto nos rendimentos de
extração. Isto ocorre porque as paredes das células vegetais são quebradas e a acessibilidade aos compostos bioativos é
aumentada para o solvente de extração. Como mostrado na Figura 2A, o rendimento dos alcalóides alvo aumentou
significativamente quando o tamanho das partículas diminuiu de 20 para 60 mesh. No entanto, quando o tamanho das
partículas variou de 60 a 100 mesh, os rendimentos de extração diminuíram ligeiramente. O fato de partículas menores
resultarem em uma extração mais eficiente não é surpreendente. À medida que as partículas ficam menores, o caminho de
difusão torna-se mais curto; conseqüentemente, a resistência à difusão intrapartícula seria reduzida. Partículas menores
possuem maior área superficial, o que faria com que as partículas tivessem mais contato com o solvente. Assim, uma redução
na resistência à transferência de massa pode facilitar a extração de compostos bioativos. No entanto, as partículas mais
pequenas (malha 60-100) podem permanecer na superfície do solvente durante a extracção, limitando a sua exposição à
cavitação e resultando em rendimentos de extracção mais baixos.
Portanto, um tamanho de partícula de malha 60 foi selecionado e utilizado nos testes seguintes.
Para aumentar a eficiência da extração e diminuir o tempo de extração, a concentração do solvente de extração foi
otimizada. É bem sabido que o aumento da concentração de etanol induz uma redução na constante dielétrica da solução de
extração e melhora a solubilidade dos compostos bioativos. Uma faixa de concentrações de etanol (65%, 70%, 75%, 80%,
85%) foi comparada. Como pode ser visto na Figura 2B, os rendimentos de extração aumentaram até a concentração de
etanol atingir 80%,
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Moléculas 2012, 17 8745

com apenas um ligeiro aumento adicional entre 80% e 85% de etanol. Portanto, levando em consideração tanto
o rendimento da extração quanto a praticidade, o etanol 80% foi selecionado para os experimentos seguintes.

Figura 2. Efeito de (A) tamanho de partícula, (B) concentração de etanol, (C) pressão negativa, (D) relação
sólido-líquido, (E) tempo e (F) número de ciclos nos rendimentos de VDL, CTR, Videocassete e VLB do NPCE.

(A) (B)
VCR VLB VCR VLB
VDL CTR VDL CTR
0,6 0,18 0,6 0,18

0,5 0,15 0,5 0,15

0,4 0,12 0,4 0,12

(mg/
(mg/

(mg/
0,3 0,09
(mg/

0,3 0,09

g)
g)

g)
g)

0,2 0,06 0,2 0,06

Rendimento
Rendimento
Rendimento
Rendimento

extração
extração
extração
extração

0,1 0,03

VCR
0,1 0,03

VLB
CTR
VDL
VCR
VLB
CTR
VDL

de
de
de

e
de

e
e
e

0 0 0 0

20 40 60 80 100 65% 70% 75% 80% 85%

Concentração de etanol
Tamanho de partícula (malha)

(C) (D)
VCR VLB VCR VLB
VDL CTR VDL CTR
0,6 0,18 0,6 0,18

0,5 0,15 0,5 0,15

0,4 0,12 0,4 0,12

(mg/
0,3 0,09
(mg/

(mg/
(mg/

0,3 0,09

g)
g)

g)
g)

0,2 0,06 0,2 0,06

Rendimento
Rendimento
Rendimento
Rendimento

extração
extração
extração
extração

0,1 0,03

VCR
0,1 0,03

VLB
CTR
VCR

VDL
VLB
CTR
VDL

de
de
de

e
de

e
e
e

0 0 0 0

-0,07 -0,075 -0,08 -0,085 -0,09 1:10 1:15 1:20 1:25 13h30

Proporção sólido para líquido

Pressão negativa (MPa)

(E) (F)
VCR VLB VCR VLB
VDL CTR VDL CTR
0,6 0,18 0,6 0,18

0,5 0,15 0,5 0,15

0,4 0,12 0,4 0,12

(mg/
(mg/

0,3 0,09
(mg/
(mg/

0,3 0,09
g)
g)

g)
g)

0,2 0,06 0,2 0,06

Rendimento
Rendimento

Rendimento
Rendimento

extração
extração

extração
extração

0,1 0,03
VCR
VCR

0,1 0,03
VLB
CTR
VLB
CTR

VDL
VDL

de
de

de
de

e
e

e
e

0 0 0 0
20 25 30 35 40 12345

Tempo (min) Ciclos

2.2. Efeito da pressão negativa e da relação sólido-líquido

Em nosso experimento, a pressão de extração foi ajustada regulando o fluxo de ar. O efeito de diferentes
pressões de extração nos rendimentos de extração de alcalóides da vinca é mostrado na Figura 2C.
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Moléculas 2012, 17 8746

Foi observado um efeito significativo da pressão de extração nos rendimentos de extração de alcalóides da vinca.
Os efeitos de agitação e cavitação do NPCE promovem a extração de compostos bioativos por meio da aceleração da
transferência de massa e da ruptura das células. Conforme mostrado na Figura 2D, uma pressão negativa de -0,075
MPa resultou no maior rendimento de alcalóides da vinca. O efeito de cavitação é afetado intermediáriamente pela
taxa de fluxo de ar em termos de pressão negativa e quantidade de bolhas de cavitação. Em primeiro lugar, aumenta
rapidamente com uma diminuição na taxa de fluxo de ar devido ao aumento da pressão negativa e depois diminui
rapidamente à medida que a falta de ar resulta numa diminuição no número de bolhas de cavitação.
Como resultado, -0,075 MPa foi utilizado para investigar os efeitos de outros parâmetros.
O efeito da proporção sólido-líquido nos rendimentos de extração dos quatro principais alcalóides da vinca foi
determinado por uma série de experimentos com diferentes proporções sólido-líquido (1:10, 1:15, 1:20, 1:25 e 1: 30, p/
v). Como é mostrado na Figura 2D, a eficiência de extração aumentou com o aumento das proporções sólido-líquido
até 1:20. Menos solvente de extração resulta na mistura insuficiente da amostra e do solvente.
Volumes mais elevados de solvente não melhoraram significativamente a eficiência da extração; a fase turbulenta
pode estar sujeita a restrição e destruição, resultando em efeitos de cavitação mais fracos. Considerando os
rendimentos de extração dos quatro principais alcalóides da vinca e o consumo de solvente, uma proporção ótima de
sólido para líquido de 1:20 foi utilizada nos testes seguintes.

2.3. Efeito do tempo de extração e do ciclo de extração

O tempo de extração adequado é necessário para uma eficiência ideal de extração e para garantir um equilíbrio de
distribuição de compostos bioativos entre o material vegetal e o solvente de extração. No presente estudo, a extração
foi realizada por 25, 30, 35, 40 ou 45 min e os resultados são mostrados na Figura 2E. É evidente que tempos de
extração mais longos maximizaram a eficiência de extração dos alcalóides da vinca no NPCE. O rendimento de
extração dos alcalóides da vinca aumentou dramaticamente com uma extensão do tempo de extração para 30 min.
Além de 30 min, o tempo de extração teve pouco impacto no rendimento da extração, indicando que as moléculas
alvo atingiram seu equilíbrio de distribuição em 30 min. Dado o aumento no rendimento de extração e o baixo consumo
de energia, 30 min foi selecionado como o tempo de extração apropriado e utilizado nos experimentos seguintes.

O efeito do número de ciclos de extração nos rendimentos de extração foi investigado usando 1, 2, 3, 4 ou 5 ciclos.
Geralmente, um aumento no número de ciclos de extração aumenta o rendimento da extração, permitindo maior
exposição do material ao solvente fresco e favorecendo o equilíbrio material-solvente.
Como mostrado na Figura 2F, os rendimentos de extração aumentaram significativamente quando o número de ciclos
de extração aumentou de 1 para 3. Após três ciclos, os rendimentos totais de extração de alcalóides da vinca foram
97,7, 98,9, 97,6, 96,8 e 98,7%. Assim, três ciclos de extração foram determinados como uma extração eficiente dos
compostos alvo.

2.4. Comparação de diferentes métodos de extração

Após otimização, o NPCE mostrou ser um método eficiente com altos rendimentos de extração (0,5783 mg/g para
VDL, 0,2843 mg/g para CTR, 0,018 mg/g para VCR e 0,126 mg/g para VLB). Determinamos que os parâmetros ideais
a serem empregados são: tamanho de partícula de malha 60, etanol a 80%, proporção sólido-líquido de 1:20 (p/v) e
extração de 30 min por três ciclos. O NPCE tem recebido atenção considerável pela extração de vários compostos
bioativos de ervas chinesas; para o melhor de nosso conhecimento,
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Moléculas 2012, 17 8747

NPCE de alcalóides da vinca não foi relatado. Como resultado, é necessário comparar a eficiência de extração do NPCE
com outros métodos de extração para extração de alcalóides da vinca.
Diferentes métodos (ME, HRE, USE e NPCE) foram realizados utilizando as condições otimizadas, e os resultados estão resumidos na Tabela 1.

Os maiores rendimentos de extração de alcalóides da vinca foram obtidos com NPCE. Os maiores rendimentos obtidos com NPCE exigiram menor

temperatura, menor dissipação de energia e menor custo em relação a ME, HRE e UAE. Os rendimentos de extração de alcalóides da vinca usando

NPCE por 30 min em temperatura ambiente e USE por 30 min a 45 °C são maiores do que aqueles usando ME por 12 h em temperatura ambiente e

HRE por 3 h a 80 °C. Uma comparação das condições de extração dos quatro métodos mostrou que foram necessários um tempo de extração mais

longo e um maior consumo de energia para ME e HRE. Além disso, a eficiência de extração de ME e HRE foi a mais baixa. A eficiência de extração

comparável do NPCE e dos Emirados Árabes Unidos foi resultado do efeito de cavitação. No entanto, os rendimentos de extração de alcalóides da

vinca obtidos pelo NPCE foram superiores aos obtidos pelos Emirados Árabes Unidos. Isto pode ser explicado da seguinte forma. Durante o NPCE, um

intenso efeito de cavitação é produzido por pequenas bolhas. Isto é seguido por um efeito de transferência de massa que inclui turbulência, vibração e

colisão entre o solvente de extração e a matriz. O efeito de cavitação NPCE é

mais eficiente que a cavitação acústica dos Emirados Árabes Unidos que ocorre durante o processo de extração. Além disso, a aplicação industrial da

cavitação ultrassônica é restrita pelo seu alto custo, pela poluição sonora e pela degradação de compostos termossensíveis em altas temperaturas.

Portanto, esta investigação mostra que o NPCE é um método eficiente e econômico, adequado para a extração em escala industrial.

alcalóides de folhas de C. roseus .

Tabela 1. Comparação de ME, HRE, UAE e NPCE nos rendimentos de VDL, CTR, VCR e VLB de folhas de
C. roseus . Os dados são apresentados como médias ± DP (n = 3).

Rendimento (mg/g) MEU HRE USAR NPCE

VDL 0,5069±0,0242 0,5138±0,0253 0,5767±0,0280 0,5783±0,0278
CTR 0,2271±0,0112 0,2316±0,0115 0,2811±0,0134 0,2843±0,0132
VCR 0,0098 ± 0,0004 0,0116 ± 0,0005 0,0162 ± 0,0006 0,0181 ± 0,0007
VLB 0,0603 ± 0,0028 0,0982 ± 0,0041 0,1140 ± 0,0050 0,1263 ± 0,0058

3. Experimental

3.1. Material vegetal

Folhas de C. roseus (80% de teor de água) foram coletadas na Estufa da Universidade Florestal do Nordeste,
Heilongjiang, China, e identificadas pelo Professor Shao-Quan Nie do Laboratório Chave de Ecologia de Plantas Florestais,
Ministério da Educação, Universidade Florestal do Nordeste, Harbin , China. O material foi seco à sombra, pulverizado por
um desintegrador (HX-200A, Yongkang Hardware and Medical Instrument Plant, China) e depois peneirado em peneiras de
malha 20-100 (Harbin Ouerfu Filter Material Co., Ltd., China). O pó foi mantido a 4°C antes do uso.
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Moléculas 2012, 17 8748

3.2. Produtos Químicos e Reagentes

Os padrões de referência de VDL, CTR, VCR e VLB foram adquiridos da Shanghai Anticancer Phytochemistry Co., Ltd. O

metanol (Honeywell International Inc., Morristown, NJ, EUA) e o acetonitrilo (Dikma Technologies Inc., Pequim, China) utilizados
para HPLC eram de grau reagente para HPLC. A água deionizada foi filtrada usando um sistema de purificação de água Milli-Q
Ultrapure da Millipore (Billerica, MA, EUA). Outros reagentes eram todos produtos químicos de grau analítico disponíveis

comercialmente.

3.3. Procedimentos de Extração

3.3.1. Extração de Cavitação com Pressão Negativa (NPCE)

O aparelho (CN 2597047) utilizado no experimento NPCE foi fornecido pelo Centro de Pesquisa de Engenharia de Biopreparação
Florestal, Ministério da Educação, Universidade Florestal do Nordeste, Harbin, China. O modo de ação do NPCE é baseado na
formação contínua e no colapso de pequenas bolhas sob a ação do vácuo, que foi descrito em detalhes em nosso estudo anterior

[21–23].
No presente estudo, 25 g de folhas de C. roseus em pó foram transferidas para a câmara de extração com diferentes
concentrações de solvente de extração. Em seguida, uma bomba de vácuo foi conectada ao recipiente de extração através de um

condensador para gerar pressão negativa. A pressão foi monitorada ajustando a vazão de ar, que foi fornecida pela parte inferior
do dispositivo. O processo de extração foi realizado sob diferentes condições conforme descrito na seção Resultados. Após cada
extração, as soluções de extração foram combinadas e secas em evaporador rotativo (RE-52AA, Shanghai Huxi Instrument,

Shanghai, China) a 45 °C. Metanol de grau HPLC foi adicionado em um volume constante para preparar as amostras para análise
RP-HPLC. A eficiência de extração dos compostos em uma determinada amostra foi definida da seguinte forma:

Massa da solução de extração de compostos em

Rendimento de extração (mg/g DW) ÿ
Massa de material seco

3.3.2. Procedimentos Convencionais de Extração

Para a extração por maceração (ME), conforme determinado pelos experimentos preliminares otimizados, 25 g de pó de
folhas de C. roseus foram colocados em um béquer com 500 mL de solução aquosa de etanol a 80%.
O béquer foi colocado à temperatura ambiente por 12 horas, a solução de extração filtrada foi coletada e outros 500 mL de
etanol a 80% foram adicionados ao béquer por mais 12 horas para obter eficiência de extração ideal.

Para a extração por refluxo térmico (HRE), após experimentos preliminares de otimização, 25 g de folhas de C. roseus em
pó foram adicionados a um balão de fundo redondo com 500 mL de etanol a 80%. O fundo redondo

O frasco foi então colocado em banho-maria e ligado a um condensador na junta do frasco. O processo de extração foi
mantido duas vezes a 80 °C por 3 h para obter eficiência ideal de extração.
A extração assistida por ultrassom (EAU) foi realizada em banho ultrassônico (Kunshan Ultrasonic Instrument, Kunshan,
China) usando as condições otimizadas para NPCE à pressão normal. Resumidamente, 25 g de pó de folhas de C. roseus
foram adicionados a um balão triangular com 500 mL de etanol a 80%. O
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Moléculas 2012, 17 8749

a extração foi realizada em banho ultrassônico na frequência de 40 kHz com potência máxima de entrada de 250 W a 45
°C por 30 min. Três repetições foram realizadas para obter a melhor eficiência de extração.

3.4. Análise RP-HPLC

Neste estudo, um protocolo de separação e análise RP-HPLC é empregado para detectar os quatro alcalóides.
A absorbância UV é o método de escolha para sua detecção, e 220 nm foi o comprimento de onda utilizado. Os critérios
para identificação dos compostos foram estabelecidos com base em comparações do tempo de retenção e espectro de um
composto desconhecido com dados de padrões da biblioteca de HPLC [24].
A análise RP-HPLC foi realizada utilizando um sistema Jasco HPLC (Modelo 1580, Japão), que incluía uma bomba
PU-1580, um injetor manual 7725i e um detector UV-1575 conectado ao software do sistema de dados cromatográficos
CkChrom (versão 6.1). As separações foram realizadas em uma coluna HiQ sil C18W (4,6 mm x 250 mm).

A separação foi realizada por eluição isocrática utilizando solução A (metanol/acetonitrila = 4:1) e solução B (água/
dietilamina = 986:14; pH ajustado para 7,2 por H3PO4). A fase móvel consistiu de 620 mL de solução A e 380 mL de
solução B. A vazão foi fixada em 2,0 mL·minÿ1 e a

a eluição foi monitorada a 220 nm [25]. Os alcalóides alvo foram resolvidos o suficiente para proporcionar a separação da
linha de base em 25 min e os tempos de retenção de VDL, CTR, VCR e VLB foram 9,0, 11,9, 13,2 e 20,2 min,
respectivamente (Figura 3). Quatro principais alcalóides da vinca foram identificados comparando seus tempos de retenção
com soluções padrão (Tabela 2). Este método é sensível e preciso com boa reprodutibilidade. A validação da quantificação
foi realizada três vezes.

Figura 3. Traço RP-HPLC de um extrato de C. roseus monitorado a 220 nm.

VDL

CTR

Videocassete VLB

Tabela 2. Absorção UV e identidade dos picos no cromatograma.

Tempo de retenção (min) Máximos de pico Máximos de pico de identidade (nm) na literatura [24]
9,0 (nm) 213, 251, VDL 214, 254, 306
11,9 305 223, CTR 226, 282
13,2 283 220, 256, VCR 222, 256, 298
20,2 297 215, 265 VLB 214, 266
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Moléculas 2012, 17 8750

3.5. Análise Estatística

Todos os experimentos foram conduzidos em triplicata e os valores médios dos alcalóides da vinca extraídos foram
utilizados para análise estatística. O teste ANOVA unidirecional foi utilizado para calcular a significância das diferenças
na eficiência de extração dos alcalóides alvo. Os resultados da análise RP-HPLC são expressos como médias ± DP
(n = 3).

4. Conclusões

O NPCE foi aplicado pela primeira vez na extração de VDL, CTR, VCR e VLB de folhas de C. roseus e comparado
com outros métodos de extração padrão. Sob os parâmetros ótimos, os rendimentos de extração de VDL, CTR, VCR
e VLB foram 0,5783, 0,2843, 0,018 e 0,126 mg/g DW, respectivamente. Estes rendimentos são comparáveis aos
obtidos pelo método bem conhecido dos Emirados Árabes Unidos e significativamente superiores aos obtidos por ME
e HRE. Os resultados indicaram que o NPCE oferece uma rota rápida, ecológica e direta para a produção de alcalóides
da vinca. Consequentemente, o NPCE-RP-HPLC aqui descrito representa uma excelente alternativa para a extração
e quantificação dos quatro principais alcalóides de C. roseus em aplicações em escala piloto e industrial.

Agradecimentos

Os autores agradecem o apoio financeiro dos Fundos de Pesquisa Fundamental para as Universidades Centrais
(DL12CA03, DL09BA30, DL09BB49, DL09BA23), Fundação de Ciências Naturais da Província de Heilongjiang
(C200933, C201117), Fundo de Ciência e Tecnologia de Heilongjiang (GZ11C016), Projeto para Professor Distinto No
exterior, Ministério da Educação da China (MS2010DBLY031) e Fundo Especial de Pesquisa Industrial Florestal para
o Bem-Estar Público da China (201204601).

Referências

1. Noble, RL A descoberta dos alcalóides da vinca-agentes quimioterápicos contra o câncer.

Bioquímica. Biol celular. 1990, 68, 1344–1351.
2. Zu, YG; Luo, M.; Mu, FS; Fu, YJ; Wang, L. Avanços em alcalóides em Catharanthus roseus
e suas atividades farmacológicas. Nat. Prod. Res. Dev. 2006, 18, 325–329.
3. Van der Heijden, R.; Jacobs, DI; Snoeijer, W.; Hallard, D.; Verpoorte, R. Os alcalóides Catharanthus:
farmacognosia e biotecnologia. Curr. Med. Química. 2004, 5, 607–628.
4. Sertel, S.; Zu, YG; Fu, YJ; Rebacz, B.; Kon-kimalla, B.; Plinkert, PK; Kramer, A.; Gertsch, J.; Efferth, T. Docking
molecular e farmacogenômica de alcalóides da vinca e seus precursores monoméricos, vindolina e
catarantina. Bioquímica. Farmacêutico. 2011, 81, 723–735.
5. Armstrong, JG; Dique, RW; Fouts, PJ Tratamento com sulfato de vinblastina da doença de hodgkin durante a
gravidez. Ciência 1964, 143, 703.
6.Evans, AE; Farber, S.; Morena, S.; Mariano, PJ Vincristina no tratamento da leucemia aguda em
crianças. Câncer 1963, 16, 1302–1306.
7. Jordânia, MA; Wilson, L. Microtúbulos como alvo para drogas anticâncer. Nat. Rev. Câncer 2004, 4,
253–265.
Machine Translated by Google

Moléculas 2012, 17 8751

8. Zu, YG; Fu, YJ; Luo, M.; Mu, FS Modificação da estrutura para derivados de toxicidade reduzida e
atividade anticancerígena da vimblastina (em chinês). Química. On-line 2004, 67, w027.
9.Renault, JH; Nuzillard, JM; Le Crouérour, G.; Thépenier, P.; Zèches-Hanrot, M.; Le Men-Olivier, L. Isolamento de
alcalóides indólicos de Catharanthus roseus por cromatografia de partição centrífuga no modo de refino de zona
de pH. J. Cromatogr. A 1999, 849, 421–431.
10. Choi, YH; Ei, KP; Kim, J. Extração de fluido supercrítico e análise de massa por cromatografia líquida-eletrospray
de vinblastina de Catharanthus roseus. Química. Farmacêutico. Touro. 2002, 50, 1294–1296.
11. Zu, YG; Luo, M.; Mu, FS; Fu, YJ Pesquisa sobre processo de extração assistida por ultrassom de vinblastina de
Catharanthus roseus. Queixo. Trad. Drogas Herbais 2007, 38, 1348–1349.
12.Verma, A.; Laakso, I.; Seppänen-Laakso, T.; Huhtikangas, A.; Riekkola, ML Um procedimento simplificado para
extração de alcalóide indol de Catharanthus roseus combinado com um processo de produção semi-sintético
para vinblastina. Moléculas 2007, 12, 1307–1315.
13. Mu, FS; Luo, M.; Fu, YJ; Tian, H.; Zu, YG Otimização do processo de extração de vimblastina assistida por micro-
ondas pelo método ortogonal. Química. Eng. 2008, 36, 62–65.
14.Li, SM; Fu, YJ; Zu, YG; Zu, BS; Wang, Y.; Efferth, T. Determinação de paclitaxel e seus análogos nas agulhas de
espécies Taxus usando extração por cavitação com pressão negativa seguida de HPLC-MS-MS. J. Setembro.
2009, 32, 3958–3966.
15.Zhang, DY; Zu, YG; Fu, YJ; Luo, M.; Gu, CB; Wang, W.; Yao, XH Extração por cavitação por pressão negativa e
atividade antioxidante de biochanina A e genisteína das folhas de Dalbergia odorifera T. Chen. Setembro Purif.
Tecnologia. 2011, 83, 91–99.
16. Zhao, BS; Fu, YJ; Wang, W.; Zu, YG; Gu, CB; Luo, M.; Efferth, T. Extração aprimorada de isoflavonóides de Radix
Astragali por pré-tratamento de incubação combinado com cavitação por pressão negativa e sua atividade
antioxidante. Inovar. Ciência Alimentar. Emergir. Tecnologia. 2011, 12, 577–585.
17.Dong, LL; Fu, YJ; Zu, YG; Li, J.; Li, XJ; Efferth, T. Processamento acelerado por cavitação com pressão negativa
para extração dos principais flavonóides bioativos de Radix Scutellariae. Química. Eng.
Processo. 2011, 50, 780–789.
18.Zhang, DY; Zu, YG; Fu, YJ; Luo, M.; Wang, W.; Gu, CB; Zhao, CJ; Jiao, J.; Efferth, T.
Pré-tratamento enzimático e extração por cavitação por pressão negativa de genisteína e
apigenina das raízes do feijão bóer [Cajanus cajan (L.) Millsp.] e avaliação da atividade antioxidante.
Colheita Ind. Prod. 2012, 37, 311–320.
19. Wang, W.; Li, N.; Luo, M.; Zu, Y.; Efferth, T. Atividade antibacteriana e atividade anticâncer do óleo essencial de
Rosmarinus officinalis L. em comparação com seus principais componentes. Moléculas 2012, 17, 2704–2713.

20.Liu, W.; Fu, YJ; Zu, YG; Kong, Y.; Zhang, L.; Zu, BS; Efferth, T. Extração por cavitação com pressão negativa para
a determinação de flavonóides em folhas de feijão bóer por cromatografia líquida-espectrometria de massa em
tandem. J. Cromatogr. A 2009, 1216, 3841–3850.
21.Zhang, DY; Zhang, S.; Zu, YG; Fu, YJ; Kong, Y.; Gao, Y.; Zhao, JT; Efferth, T. Extração por cavitação por pressão
negativa e atividade antioxidante de genisteína e genistina das raízes do feijão bóer [Cajanus cajan (L.) Millsp.].
Setembro Purif. Tecnologia. 2010, 74, 261–270.
22. Kong, Y.; Wei, ZF; Fu, YJ; Gu, CB; Zhao, CJ; Yao, XH; Efferth, T. Extração por cavitação com
pressão negativa de ácido cajaninstilbeno e pinostrobina de feijão bóer [Cajanus cajan (L.)
Millsp.] folhas e avaliação da atividade antioxidante. Química Alimentar. 2011, 128, 596–605.
Machine Translated by Google

Moléculas 2012, 17 8752

23. Dong, LL; Fu, YJ; Zu, YG; Luo, M.; Wang, W.; Li, XJ; Li, J. Aplicação de sistema de cavitação para
acelerar a hidrólise enzimática endógena de baicalina e wogonosídeo em Radix Scutellariae. Química
Alimentar. 2012, 131, 1422–1429.
24. Hisiger, S.; Jolicoeur, M. Análise de alcalóides de Catharanthus roseus por HPLC. Fitoquímico. Rev.
2007, 6, 207–234.
25. Luo, M.; Fu, YJ; Zu, YG; Shi, Q.; Mu, FS; Li, QY Determinação rápida de 4 alcalóides da vinca por cromatografia líquida de
alta eficiência em fase reversa. Queixo. J.Anal. Química. 2005, 33, 87–89.

Disponibilidade da amostra: Amostras de VDL, CTR, VCR, VLB estão disponíveis nos autores.

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