Ficha Informativa: UFCD 1704

Desde que tenham as condições adequadas (comida, temperatura correta, etc.), os micróbios podem crescer muito
rapidamente. Dependendo da situação, isso pode ser bom para os humanos (levedura crescendo no mosto para fazer
cerveja) ou ruim (bactérias crescendo na garganta causando infecções na garganta). É importante ter conhecimento
do seu crescimento, para que possamos prever ou controlar o seu crescimento em condições específicas. Embora o
crescimento dos organismos muticeluares seja normalmente medido em termos do aumento no tamanho de um único
organismo, o crescimento microbiano é medido pelo aumento da população, seja medindo o aumento no número de
células ou o aumento na massa total.
Divisão Bacteriana
Bactérias e archaea se reproduzem apenas assexuadamente, enquanto os micróbios eucartióticos podem se envolver
na reprodução sexual ou assexuada. Bactérias e archaea envolvem-se mais comumente em um processo conhecido
como fissão binária , onde uma única célula se divide em duas células de tamanhos iguais. Outros processos menos
comuns podem incluir fissão múltipla , brotamento e produção de esporos .
O processo começa com o alongamento celular, que requer um alargamento cuidadoso da membrana celular e da
parede celular, além do aumento do volume celular. A célula começa a replicar seu DNA, preparando-se para ter duas
cópias de seu cromossomo, uma para cada célula recém-formada. A proteína FtsZ é essencial para a formação de
um septo, que inicialmente se manifesta como um anel no meio da célula alongada. Depois que os nucleóides são
segregados em cada extremidade da célula alongada, a formação do septo é concluída, dividindo a célula alongada
em duas células-filhas de tamanhos iguais. Todo o processo ou ciclo celular pode levar apenas 20 minutos para uma
cultura ativa da bactéria E. coli .
Curva de crescimento
Como as bactérias são fáceis de crescer em laboratório, seu crescimento tem sido extensivamente estudado. Foi
determinado que em um sistema fechado ou cultura em lote (sem adição de alimentos, sem remoção de resíduos)
as bactérias crescerão em um padrão previsível, resultando em uma curva de crescimento composta por quatro
fases distintas de crescimento: a fase lag, a exponencial ou logarítmica. fase, a fase estacionária e a fase de morte
ou declínio. Além disso, esta curva de crescimento pode produzir o tempo de geração de um organismo específico –
a quantidade de tempo que leva para a população duplicar.
Curva de crescimento bacteriano. Por Michał Komorniczak. Se você usar minhas imagens (originais ou modificadas)
em seu site ou em sua publicação, deverá me fornecer detalhes: Michał Komorniczak (Polônia) ou Michal Komorniczak
(Polônia). Para mais informações, escreva para meu endereço de e-mail: m.komorniczak.pl@gmail.com [ CC BY-SA
3.0 ], via Wikimedia Commons
Os detalhes associados a cada curva de crescimento (número de células, duração de cada fase, rapidez de
crescimento ou morte, quantidade total de tempo) variam de organismo para organismo ou mesmo com condições
diferentes para o mesmo organismo. Mas o padrão de quatro fases distintas de crescimento normalmente
permanecerá.
Fase de atraso
A fase de latência é um período de adaptação, onde as bactérias se adaptam às novas condições. A duração da fase
de latência pode variar consideravelmente, com base na diferença entre as condições e as condições de origem da
bactéria, bem como na condição das próprias células bacterianas. Células em crescimento ativo transferidas de um
tipo de meio para o mesmo tipo de meio, com as mesmas condições ambientais, terão o período de latência mais
curto. As células danificadas terão um longo período de latência, uma vez que devem reparar-se antes de poderem
iniciar a reprodução.
Normalmente, as células no período de latência estão sintetizando RNA, enzimas e metabólitos essenciais que podem
estar faltando em seu novo ambiente (como fatores de crescimento ou macromoléculas), bem como se ajustando às
mudanças ambientais, como mudanças de temperatura, pH ou disponibilidade de oxigênio. . Eles também podem
realizar qualquer reparo necessário nas células danificadas.
Fase Exponencial ou Log
Depois que as células acumulam tudo o que precisam para crescer, elas prosseguem para a divisão celular. A fase
exponencial ou logarítmica do crescimento é marcada por duplicações previsíveis da população, onde 1 célula se
torna 2 células, se torna 4, se torna 8, etc. As condições ideais para as células resultarão em um crescimento muito
rápido (e uma inclinação mais acentuada no curva de crescimento), enquanto condições abaixo das ideais resultarão
em crescimento mais lento. As células na fase exponencial de crescimento são as mais saudáveis e uniformes, o que
explica porque a maioria dos experimentos utiliza células desta fase.

Taxas de crescimento bacteriano.

Devido à previsibilidade do crescimento nesta fase, esta fase pode ser usada para calcular matematicamente o tempo
que leva para a população bacteriana dobrar de número, conhecido como tempo de geração ( g ) . Essas
informações são utilizadas por microbiologistas em pesquisa básica, bem como na indústria. Para determinar o tempo
de geração, o logaritmo natural do número de células pode ser traçado em função do tempo (onde as unidades podem
variar, dependendo da velocidade de crescimento da população específica), utilizando um gráfico semilogarítmico
para gerar uma linha com uma inclinação previsível.
A inclinação da linha é igual a 0,301/ g . Alternativamente, pode-se confiar na relação fixa entre o número inicial de
células no início da fase exponencial e o número de células após algum período de tempo, que pode ser expresso
por:
N=N02n(9.1)(9.1)�=�02�
ondeN�é a concentração celular final,N0�0é a concentração celular inicial, en�é o número de gerações que
ocorreram entre o período de tempo especificado.
O tempo de geração ( g ) pode ser representado por t/n , sendo t o período de tempo especificado em minutos, horas,
dias ou meses. Assim, se se conhecer a concentração celular no início da fase exponencial de crescimento e a
concentração celular após algum período de crescimento exponencial, o número de gerações pode ser calculado.
Então, usando a quantidade de tempo que o crescimento foi permitido ( t ), pode-se calcular g .
Fase Estacionária
Todas as coisas boas devem acabar (caso contrário, as bactérias seriam iguais à massa da Terra em 7 dias!). Em
algum momento a população bacteriana fica sem um nutriente/produto químico essencial ou seu crescimento é inibido
por seus próprios resíduos (é um recipiente fechado, lembra?) ou falta de espaço físico, fazendo com que as células
entrem na fase estacionária . Neste ponto, o número de novas células produzidas é igual ao número de células que
morrem ou o crescimento cessou totalmente, resultando num achatamento do crescimento na curva de crescimento.
Fisiologicamente, as células tornam-se bastante diferentes nesta fase, à medida que tentam adaptar-se às novas
condições de fome. As poucas células novas produzidas são menores em tamanho, com os bacilos adquirindo formato
quase esférico. A sua membrana plasmática torna-se menos fluida e permeável, com mais moléculas hidrofóbicas na
superfície que promovem a adesão e agregação celular. O nucleóide condensa e o DNA fica ligado às proteínas de
ligação ao DNA de células famintas (DPS) , para proteger o DNA de danos. As mudanças são projetadas para
permitir que a célula sobreviva por um longo período de tempo em condições adversas, enquanto espera que ocorram
condições mais ideais (como uma infusão de nutrientes). Essas mesmas estratégias são utilizadas por células em
ambientes oligotróficos ou com poucos nutrientes. Foi levantada a hipótese de que as células no mundo natural (ou
seja, fora do laboratório) normalmente existem por longos períodos de tempo em ambientes oligotróficos, com apenas
infusões esporádicas de nutrientes que as devolvem ao crescimento exponencial por períodos muito breves de tempo.
Durante a fase estacionária as células também são propensas a produzir metabólitos secundários , ou metabólitos
produzidos após crescimento ativo, como antibióticos. As células capazes de formar um endósporo ativarão os genes
necessários nesta fase, para iniciar o processo de esporulação.
Fase de morte ou declínio
Na última fase da curva de crescimento, a fase de morte ou declínio , o número de células viáveis diminui de forma
previsível (ou exponencial). A inclinação da encosta corresponde à rapidez com que as células estão perdendo
viabilidade. Pensa-se que as condições de cultura se deterioraram a tal ponto que as células ficam irreparavelmente
danificadas, uma vez que as células recolhidas nesta fase não apresentam crescimento quando transferidas para
meio fresco. É importante notar que se a turbidez de uma cultura estiver sendo medida como forma de determinar a
densidade celular, as medições podem não diminuir durante esta fase, uma vez que as células ainda podem estar
intactas.
Foi sugerido que as células consideradas mortas poderiam ser revividas sob condições específicas, uma condição
descrita como viável, mas não cultivável (VBNC) . Este estado pode ser importante para os patógenos, onde entram
num estado de metabolismo muito baixo e falta de divisão celular, apenas para retomar o crescimento mais tarde,
quando as condições melhoram.
Também foi demonstrado que a morte celular de 100% é improvável, para qualquer população de células, uma vez
que as células sofrem mutação para se adaptarem às suas condições ambientais, por mais severas que sejam. Muitas
vezes há um efeito de cauda observado, onde uma pequena população de células não pode ser morta. Além disso,
estas células podem beneficiar da morte das células companheiras, que fornecem nutrientes ao ambiente à medida
que lisam e libertam o seu conteúdo celular.
Palavras-chave
fissão binária, fissão múltipla, brotamento, esporos, ciclo celular, sistema fechado, cultura em lote, curva de
crescimento, fase lag, fase exponencial ou logarítmica, tempo de geração ( g ), N, N0, n , t , fase estacionária, ligação
ao DNA proteínas de células famintas (DPS), oligotróficas, metabólitos secundários, fase de morte ou declínio, viáveis,
mas não cultiváveis (VBNC).
Perguntas/Objetivos Essenciais
1. Como o crescimento é medido nas populações microbianas?
2. Como os eucariontes e as bactérias/arqueias diferem em seus métodos reprodutivos?
3. Quais são as etapas da fissão binária? O que está acontecendo em cada etapa?
4. Saiba como é a curva de crescimento de um organismo cultivado em sistema fechado. Conheça as várias
etapas e o que está ocorrendo em cada etapa, fisiologicamente. O que pode influenciar a fase de atraso?
Quais são as duas explicações diferentes para a perda celular na fase de morte ou senescência?
5. Entenda o tempo de geração e como ele pode ser determinado em um gráfico de número de células versus
tempo. Conheça a vantagem de traçar o log do número de células versus tempo em vez do número de
células versus tempo. Que fatores afetam o tempo de geração de um organismo?
6. Problema prático: Seis Staphylococcus aureus são inoculados em uma torta de creme pelas mãos de um
confeiteiro. O tempo de geração de S. aureus em torta de creme em temperatura ambiente é de 30 minutos.
a) Quantos S. aureus estão na torta após 4 horas em temperatura ambiente? b) Após 24 horas?