ARTIGO DE REVISO

Eletroforese de protenas sricas: interpretao e correlao clnica

Seric proteins electrophoresis: clinical interpretation and correlation
Roberta Oliveira de Paula e Silva1; Aline de Freitas Lopes2; Rosa Malena Delbone de Faria3

RESUMO
1 Mdica Generalista, Mestranda em Patologia Geral pela Faculdade de Medicina da Universidade Federal de Minas Gerais 2 Mdica Generalista 3 Hematologista. Prof de Patologia Clnica do Departamento de Propedutica Complementar da Faculdade de Medicina da UFMG

A Eletroforese de Protenas Sricas (EPS) um mtodo simples, que permite separar protenas do plasma humano em fraes. Sua interpretao traz informaes teis ao mdico. Assim, ela importante para a investigao e diagnstico de diversas doenas. O exame consiste em aplicar a amostra do soro em um meio slido e submet-la a um potencial eltrico. As protenas percorrem distncias diferentes, formando bandas denominadas: albumina, alfa-1-globulina, alfa-2-globulina, betaglobulina e gamaglobulina. Essas bandas so, em seguida, quantificadas. Observa-se diminuio da concentrao de albumina em situaes que promovam sua perda, baixa ingesta protica ou elevado catabolismo. As fraes alfaglobulinas apresentam nveis aumentados em processos inflamatrios, infecciosos e imunes. O aumento da betaglobulina observado em situaes de perturbao do metabolismo lipdico ou na anemia ferropriva. A ausncia ou diminuio da bandagama indica imunodeficincias congnitas ou adquiridas. O seu aumento sugere elevao policlonal das imunoglobulinas associado s condies inflamatrias, neoplsicas ou infecciosas, alm da elevao monoclonal observada no mieloma mltiplo e em outras desordens linfoproliferativas, como a macroglobulinemia de Waldenstrm. O conhecimento dos principais componentes de cada banda eletrofortica facilita o raciocnio clnico e auxilia na identificao de padres eletroforticos, caractersticos de algumas doenas. Palavras-chave: Eletroforese; Eletroforese das Protenas Sanguneas; Protenas Sanguneas/anlise. ABSTRACT Seric proteins electrophoresis (SPE) is a simple method that allows the separation of the human plasma proteins in fractions. Its interpretation gives useful information to the physician, which makes it an important tool for several diseases investigation and diagnosis. The exam consists in applying the serum sample into a solid medium and put it under an electrical potential. The proteins run different distances, forming bands named: albumin, alpha-1-globulin, alpha-2-globulin, beta globulin and gamma globulin. These bands are then quantified. It is noted a reduction of the albumin concentration in situations that promote its lost, low protein ingestion or high catabolism. The Alpha globulin fractions present increased levels in inflammatory, infectious and immune processes. The increase of beta globulin may be noted in situations of the lipid metabolism disorder or in the iron deficiency anaemia. The absence or reduction of the band-gamma indicates congenital or acquired immunodeficiency, while the increase suggests immunoglobulin polyclonal elevation related to inflammatory , neoplasic or infectious conditions, besides the monoclonal elevation typically noted in the multiple myeloma and other linfoproliferative disorders, such as Waldenstrm s macroglobulinemia. The knowledge of each electrophoretic band main components makes easy the clinical reasoning and helps in the identification of electrophoretic patterns that characterize given diseases. Key words: Electrophoresis; Blood Proteins Electrophoresis; Blood Proteins /analysis.

Faculdade de Medicina Departamento de Propedutica Complementar Universidade Federal de Minas Gerais Av. Alfredo Balena, n190, CEP: 30310-100 Belo Horizonte, Minas Gerais. Endereo para correspondncia: Roberta Oliveira de Paula e Silva Rua Costa Monteiro, 568/202 Sagrada Famlia Belo Horizonte/MG CEP: 31030480 e-mail:betaops@gmail.com

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INTRODUO
As protenas so macromolculas compostas por aminocidos, com ligaes covalentes entre si, podem ser polares ou apolares, de acordo com o pH, devido distribuio eltrica resultante das ligaes covalentes ou inicas de seus grupos estruturais. A EPS um mtodo laboratorial simples para separar as protenas presentes no plasma humano em fraes, de acordo com suas respectivas cargas eltricas. Trata-se do teste de triagem mais utilizado para investigao de anormalidades proticas presentes no sangue.1-3 importante que o mdico esteja apto a interpret-la, uma vez que informaes teis podem ser inferidas com base no seu resultado, trazendo valiosos subsdios para a investigao diagnstica.4 Existe, atualmente, elevado nmero de protenas identificadas no soro, que diferem entre si estruturalmente e participam em vrios processos fisiolgicos, tais como anticorpos, carreadores de molculas e ons, enzimas, inibidores enzimticos, fatores da coagulao, entre outras funes. A anlise das propores de suas fraes tem considervel valor na abordagem de desordens agudas e crnicas, fornecendo informaes clinicamente teis. Alm disso, a EPS pode ser uma ferramenta importante para monitorar pacientes por longos perodos, quando existem alteraes especficas nos nveis de determinadas protenas, como no mieloma mltiplo, sndrome nefrtica e cirrose, por exemplo (Figura 1).1-3
Albumina Alfa 2 Globulina Haptoglobina Macroglobulina Ceruplasmina

ELETROFORESE
Todas as molculas de protenas so formadas por uma cadeia de aminocidos, unidos entre si por ligaes pepitdicas. Os aminocidos, por sua vez, possuem uma estrutura em comum, contendo um grupo amino e um grupo carboxil e o chamado grupamento lateral. Este ltimo a estrutura que fornece identidade ao aminocido. A combinao de diferentes aminocidos, bem como a quantidade de aminocidos presentes em uma molcula de protena, confere a ela peso e carga eltrica distinta.1 A eletroforese uma tcnica de separao de protenas utilizando-se de foras eletroforticas e eletroendosmticas presentes no sistema. As fraes separadas so visibilizadas a partir de corante sensvel a protenas. Os resultados devem ser sempre expressos sob forma percentual e de concentrao das diversas fraes e em forma grfica. A amostra de soro humano, rica em protenas, aplicada sobre um meio composto de acetato de celulose ou gel de agarose e, em seguida, sofre a ao de um potencial eltrico gerado por um plo positivo (anodo) e outro negativo (catodo). Esse potencial provoca a migrao das protenas em direo ao anodo e, de acordo com o peso molecular e carga eltrica deste, elas percorrem distncias distintas, gerando diferentes bandas, representadas por albumina e as globulinas alfa, beta e gama. Em seguida, realizada a revelao das fraes proticas corando-se as bandas, o que gera o aspecto visto na Figura 2. 1,3,5,6

Imunoglobulina

1

2

 IgG

IgD Antitripsina TBG Alfafetoprotena Alfa 1 Glicoprotena cida

IgM IgA Transferrina Beta-lipoprotena C3

Figura 1 - Algumas das principais protenas encotradas em cada banda eletrofortica

Figura 2 - Corrida eletrofortica normal

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As fraes so quantificadas por densitometria ou eluio, gerando um grfico (Figura 3) no qual as bandas podem ser comparadas, possibilitando melhor evidncia de alguma anormalidade.1,3,5,6
ob l G inas l u

 

Al ina m u b 1 2


1

2

Figura 3 - Grfico de corrida eletrofortica normal

 

Cirrose Heptica

ALBUMINA
a protena mais abundante no plasma e corresponde a cerca de 60% da concentrao total de protenas.1 sintetizada exclusivamente no fgado e possui funes importantes no organismo, como transporte de diversas substncias e manuteno da presso onctica.1 Trata-se de uma das menores molculas proticas e, em conseqncia disso, tende a se perder na urina sempre que ocorre dano aos glomrulos renais.4 A hipoalbuminemia uma condio altamente inespecfica e acompanha inmeras doenas.4 Na EPS, pode se apresentar com um pico menor, significando queda em sua concentrao srica. Esse fato est relacionado a fatores comuns a diversas situaes, como sntese prejudicada (cirrose heptica e hepatite viral), aumento do catabolismo (infeco bacteriana grave, neoplasias malignas, insuficincia cardaca congestiva, doenas inflamatrias e infecciosas crnicas), ingesta protica inadequada (desnutrio protica) e perdas (por meio dos glomrulos renais e intestinos).1,2 Os menores nveis de albumina srica esto presentes na sndrome nefrtica ou acompanhando as enteropatias perdedoras de protenas2 (Figura 4). Outro aspecto relevante em relao ao estudo da albumina o fato de que, em raras situaes, pode-se encontrar mais de um tipo dessa protena no soro humano, porm sem gerar manifestao clnica. Esse evento se reflete na EPS como um aumento na largura da faixa correspondente ou at mesmo na formao de duas faixas distintas.1,2 118
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2

Enteropatia Perdedora

Figura 4 - Perfil eletrofortico de entidades clnicas em que h reduo da frao albumina. (A: albumina; 1: alfa-1-globulina; 2: alfa-2-globulina; : betaglobulina e : gamaglobulina)

ALFA-1 GLOBULINAS
Esse grupo constitudo por um conjunto de vrias protenas, entre as quais a alfa-1-antitripsina, protrombina, transcortina, globulina ligadora de tiroxina e alfa-fetoprotena. Em geral, h aumento dessa frao em processos inflamatrios, infecciosos e imunes, de forma inespecfica.1,2,6 A alfa-1-antitripsina corresponde a 90% do pico normal de alfa-1-globulina. Essa protena codificada por dois alelos co-dominantes denominados M (mais comum) e Z. A homozigose ZZ gera nveis insuficientes de alfa-1-antitripsina e est relacionada ao surgimento de enfisema panlobular grave, bem como uma forma rapidamente progressiva de cirrose, ambos de incio ainda na primeira infncia (Figura 5). Assim,

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a EPS adequado mtodo de triagem perante a suspeita de deficincia grave dessa protena. Diante da ausncia da banda alfa-1 ou pico diminudo, necessrio completar a propedutica com testes mais especficos.1,2



bina seja rapidamente removido da circulao.1,2 Aps quadro de hemlise intravascular, no qual h importante gasto dessa protena, os nveis sricos normais s so atingidos em torno de uma semana. A diminuio de seus nveis ou a ausncia de haptoglobina (fenmeno presente em algumas populaes) repercute formando uma banda mais clara na EPS.2 A alfa-2-macroglobulina uma das maiores protenas globulnicas presentes no plasma e sua concentrao eleva-se em torno de 10 vezes ou mais na sndrome nefrtica, quando so perdidas as outras protenas de peso molecular mais baixo. Nessa situao, pode atingir nvel srico igual ou maior que a albumina, conforme a Figura 7.
 

Figura 5 - Perfil eletrofortico da deficincia de alfa-1 antitripsina

ALFA-2 GLOBULINAS
A banda alfa-2 constituda por um grupo variado de protenas, entre elas a haptoglobina, a alfa-2-macroglobulina, a ceruloplasmina, a eritropoetina e a colinesterase. Da mesma forma que as alfa-1-globulinas, as protenas pertencentes a essa banda tambm se comportam como protenas de fase aguda, aumentando sua concentrao na presena de infeco, em processos inflamatrios e imunes1,2,6 (Figura 6). A alfa-2-macroglobulina e a haptoglobina correspondem maior parte dessa banda.1,2 A haptoglobina migra mais lentamente em

 

 

1

2

Sndrome Nefrtica

Figura 7 - Perfil eletrofortico da sndrome nefrtica

BETAGLOBULINAS
Compostas por um grupo heterogneo de protenas, das quais as principais so: beta-lipoprotenas, transferrina e componente C3 do complemento. A transferrina possui o mais rpido padro eletrofortico das betaglobulinas e apresenta-se aumentada na anemia ferropriva, na gravidez e no uso de anovulatrios.1,2 O C3, por sua vez, o componente com mais lenta migrao e sua queda est relacionada s doenas glomerulares.2 A ictercia obstrutiva, o hipotireoidismo, alguns casos de Diabetes mellitus e ateromatose podem apresentar excesso de colesterol srico e, conseqentemente, aumento das beta-lipoprotenas. A diminuio dessa frao rara e, em geral, utilizada como elemento de valor prognstico, principalmente, nos processos de evoluo crnica.7
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Figura 6 - Perfil eletrofortico das protenas de fase aguda

comparao com a alfa-2-macroglobulina e tem funo de se ligar hemoglobina circulante, permitindo que o complexo haptoglobina-hemoglo-

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GAMAGLOBULINAS
Frao constituda por imunoglobulinas (Igs) que so os anticorpos produzidos pelos plasmcitos, quando estimulados por antgenos ou devido desordem clonal maligna dessas clulas. H diferentes classes de Igs, sendo que todas so formadas por duas cadeias pesadas (G, A, M, D e E) e duas cadeias leves (kappa ou lambda), como mostra Figura 8.

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IgG IgA IgM

Figura 9 - Relao das imunoglobulinas com o padro eletrofortico de protenas sricas

PRINCIPAIS PADRES ELETROFORTICOS DA FRAO GAMA

Pico policlonal - representa resposta imunolgica simultnea de diversos clones plasmocitrios a determinado estmulo antignico, seja inflamatrio, imune ou infeccioso, tais como tuberculose, esquistossomose, calazar, sarcoidose, linfogranuloma venreo, sfilis, artrite reumatide, lpus eritomatoso sistmico e politransfuso de componentes sanguneos, entre outros. Este padro aparece como aumento difuso da frao gama, representado pela presena de uma curva de base larga, demonstrando a produo de todas as classes de imunoglobulinas1,2 (Figura10).


Cadeira Leve

Cadeira Leve

Cadeira Pesada

Figura 8 - Estrutura esquemtica de imunoglobulina

A banda eletrofortica da frao gamaglobulnica composta pelas cinco maiores classes de Igs que, por ordem decrescente de concentrao no plasma, so IgG, IgA, IgM, IgD e IgE (Tabela 1, Figura 9). Apenas a IgG apresenta migrao por toda a banda da frao de gamaglobulinas. Assim, as alteraes nessa banda refletem o que ocorre com esta imunoglobulina.2 A IgA encontra-se na rea de juno com a frao betaglobulina. A IgM, por sua vez, migra na regio localizada entre IgA e IgG e detectada quando estimulada (infeces agudas).
Tabela 1 - Caractersticas das imunoglobulinas Tipo de Ig IgG Caractersticas Migrao por toda a frao gama Representa 73% das Igs normais Age contra antgenos bacterianos Migrao na juno das fraes beta e gama Representa 19% das Igs normais Proteo de mucosas e fluidos corporais Migrao na juno das fraes beta e gama Representa 5% das Igs normais Age na fase aguda de doenas infecciosas Funo desconhecida Reao de hipersensibilidade

Figura 10 - Esquema ilustrativo de pico policlonal

IgA

IgM

IgD IgE

Pico monoclonal - consiste no aumento homogneo e fusiforme da frao gama, que representa a produo por um nico clone plasmocitrio de um tipo especfico de imunoglobulina e, sendo essas molculas idnticas entre si, apresentam a mesma mobilidade eletrofortica, levando produo de uma curva de base estreita conhecida como pico monoclonal1,2 (Figura 11). A protena monoclonal geralmente gera um pico na frao gama, porm, este pode estar presente algumas vezes na frao beta, quando a imunoglobulina envolvida a IgA. Esse padro est associado s gamopatias monoclonais que constituem um grupo de desordens caracterizadas pela secreo de

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imunoglobulina monoclonal ou fragmento desta. No mieloma mltiplo, principal entidade entre as gamopatias monoclonais, fundamental a aplicao clnica da eletroforese de protenas sricas como parte dos critrios diagnsticos.1, 8-10

Figura 11 - Esquema ilustrativo de pico monoclonal

Hipogamaglobulinemia/ agamaglobulinemia consiste na reduo do nvel das gamaglobulinas, geralmente sem alterao pronunciada nas outras regies da globulina. Esta configurao sugestiva da variante de cadeia leve do mieloma mltiplo (cerca de 20% dos casos de mieloma, no qual o pico monoclonal se encontra na eletroforese urinria e no na srica, devido ao componente de cadeia leve exclusivo). Esse padro tambm est presente nas hipo ou agamaglobulinemias congnitas ou secundrias, em que h ausncia de um ou mais anticorpos especficos, que resulta em infeces freqentes algumas vezes fatais.11 (Figura 12).

bao direta ou indireta na sua sntese, quando h consumo dessa protena por diminuio da ingesta ou perda atravs de proteinria ou via enteral. As fraes alfaglobulinas apresentam-se com nveis aumentados em todos os processos inflamatrios, infecciosos e imunes.1,2 O aumento das betaglobulinas representa perturbao do metabolismo dos lipdeos ou dificuldade na excreo biliar, verificadas nas colestases. O aumento na taxa da betaglobulina encontrado, geralmente, nos casos de anemia ferropriva, por aumento da sntese de transferrina; e a queda dessa frao pode ter valor prognstico nos processos de evoluo crnica. A frao gamaglobulina apresenta taxas aumentadas todas as vezes que se verificar reao inflamatria, imune ou infecciosa, lembrando que tal aumento se d de forma policlonal. H tambm o aumento dessa frao de forma monoclonal presente em doenas linfoproliferativas, tais como o mieloma mltiplo. A hipogamaglobulinemia verificada em anomalias congnitas ou em processos patognicos que trazem a destruio do setor linfide.7 de grande importncia mdica conhecer e interpretar corretamente a EPS, uma vez que este exame facilita o diagnstico de diversas doenas, possui baixo custo e de fcil procedimento tcnico. Apesar de sua finalidade no ser identificar protenas especficas (uma vez que cada frao representa um conjunto de diversas protenas), a proposta o fornecimento dos componentes principais de cada frao protica para facilitar o raciocnio clnico e auxiliar no diagnstico de doenas que possuem padres eletroforticos caractersticos.

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Figura 12 - Esquema ilustrativo de hipoglobulinemia/ agamaglobulinemia

CONCLUSES
Para se conseguir interpretar bem o resultado de uma EPS, faz-se necessrio conhecer o significado de cada banda das fraes proticas.1 Assim, a albumina sofre alterao quando h pertur-

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