Faculdade de Medicina da Universidade do Porto Servio de Fisiologia

Aula Terico-Prtica

FISIOLOGIA DAS MEMBRANAS CELULARES

Texto de Apoio
Dr. Tiago Henriques Coelho Prof. Doutor Adelino Leite Moreira Porto, Ano Lectivo 2001 / 02

NDICE:
1. Organizao Estrutural da Membrana ................................................................................................. Pg. 3 2. Transporte Membranar ........................................................................................................................... Pg. 5 2.1 Difuso .......................................................................................................................................... Pg. 5 2.2 Osmose .......................................................................................................................................... Pg. 8 2.1 Transporte Mediado por Protenas .......................................................................................... Pg. 10 2.1 Endocitose e Exocitose ............................................................................................................... Pg. 15 2.1 Transporte epitelial .................................................................................................................... Pg. 15 3. Equilbrio inico ...................................................................................................................................... Pg. 16 4. Potencial de repouso ............................................................................................................................... Pg. 17 5. Actividade elctrica da membrana ........................................................................................................ Pg. 19 5.1 Potenciais gradativos .................................................................................................................. Pg.20 5.2 Potencial de aco ...................................................................................................................... Pg. 21 5.3 Propagao dos potenciais de membrana ................................................................................ Pg. 25 5.4 Cronaxia e Reobase .................................................................................................................... Pg. 28

BIBLIOGRAFIA:
1. Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson JD, editors. Molecular Biology of the Ceil. New York: Garland, 1994:477-549 2. Berne RM, Levy MN, editors. Physiology. St Louis: Mosby, 1998:3-42. 3. Beme RM, Levy MN, editors. Principies of Physiology. St Louis: Mosby, 2000:4-38. 4. Guyton AO, Hall JE, editors. Textbook of Medical Physiology. Philadelphia: Saunders, 2000:4066. 5. Murray RK, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW, editors. Harper's Biochemestry. Connecticut: Appieton & Lange, 1993:467-485. 6. Schauff C., Moffett D., Moffett S, editors. Human Physiology. Dubuque: Wn C Brown Publisber, 1993:137-186. 7. Vander A, Sherman J, Luciano D, editors. Human Physiology. Boston: Me Graw Hill, 1998:112140; 178-192.

3 1. ORGANIZAO ESTRUTURAL DA MEMBRANA

A membrana celular uma camada com apenas 7,5 a 10 nm de espessura, constituda por lpidos intercalados com protenas que define os limites de cada clula. Funciona como uma barreira de permeabilidade que permite clula manter um meio qumico apropriado para os seus processos metablicos, regular o volume citoplasmtico e transferir informao sob a forma de sinais qumicos e elctricos. As membranas que revestem os vrios organelos (ncleo, mitocndria, retculo endoplasmtico, lisossomas e aparelho de Golgi) permitem a compartimentalizao funcional da clula, com possibilidade de limitar processos bioqumicas a certos locais.

Figura 1 Modelo do Mosaico Fludo: Bicamada fosfolipdica (A), Colesterol (B), Protenas intrnsecas (C) e extrnsecas (D), glicoprotenas (E), Glicolipdos (F) e Glicoclice (G).

Apesar das particularidades individuais, todas as membranas biolgicas so formadas por uma dupla camada fosfolpidica e por protenas unidas por ligaes covalentes e que se comportam segundo o Modelo , Mosaico Fludo (figura 1). A maioria dos lpidos e das protenas movem-se livremente no plano da membrana. Em alguns casos, h restrio deste movimento de forma a permitir clula a realizao de algumas funes em partes selectivas da sua membrana. o caso da sequestrao de receptores de acetilcolina ao nvel da placa motora das clulas musculares esquelticas. Os principais lpidos presentes na membrana celular so os fosfolpidos, o colesterol e os glicolpidos. A sua distribuio pelas duas camadas assimtrica, o que pode reflectir as diferentes funes das duas superfcies da membrana. Os fosfolpidos so molculas antipticas e dispem-se em bicamada com a poro hidrfoba no polar (caudas de cidos gordos) dirigida para o centro da membrana e com a poro hidroflica polar (cabea com terminal fosfato) direccionada para o exterior ou interior da clula. Os fosfolpidos mais abundantes so os fosfolpidos ligados colina (fosfatidilcolina e esfingomielina) e os aminofosfolpidos (fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina). O fosfatidilglicerol, o fosfatidilinositol e a cardiolipina so tambm importantes mas esto presentes em menores quantidades. Os fosfolpidos que a constituem podem-se mover rapidamente na sua monocamada por difuso lateral, rotao e flexo. Os movimentos de flip- flop entre as duas camadas so um fenmeno raro. O colesterol interpe-se na bicamada fosfolipdica com o seu ncleo esteride disposto paralelamente s cadeias de cidos gordos. Actua no sentido de reduzir a fluidez membranar a temperaturas fisiolgicas ou de a

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aumentar face a descidas de temperatura, funcionando como um 'tampo de fluidez'. Contribui para o grau de permeabilidade da bicamada fosfolipdica dos :fludos corporais. Enquanto que a bicamada lipdica determina a estrutura bsica das membranas biolgicas, as protenas so responsveis pela maioria das funes da membrana celular. As protenas membranares dividem-se, com base na fora de interaco com os fosfolpidos, em intrnsecas e extrnsecas. As protenas extrnsecas ou perifricas ligam-se s superfcies interna ou externa por foras electrostticas e podem ser removidas por procedimentos qumicos fracos (ex.: alteraes na composio inica do meio). As protenas intrnsecas ou integrais interactuam com os lpidos membranares por ligaes hidrfobas e s detergentes potentes ou solventes orgnicos as removem. Os seus domnios hidrfobos tm uma estrutura secundria -helicoidal e os domnios hidrofilicos estendem-se para o citoplasma ou para o fludo extracelular. Tal como os lpidos, muitas protenas podem difundir-se rapidamente no plano da membrana. As protenas membranares podem classificar-se, funcionalmente, em seis categorias. Os Receptores esto envolvidos na converso de sinais qumicos extracelulares em respostas intracelulares (ex.: receptor da acetilcolina). As Protenas de Reconhecimento funcionam como marcadores, permitindo que o sistema imune distinga as clulas normais de clulas cancergenas e clulas do prprio de clulas estranhas (ex.: antignios de histocompatibilidade MHC). As Protenas de Transporte conferem permeabilidade a solutos polares especficos e a ies. Algumas funcionam tambm como receptores que respondem a alteraes na permeabilidade dos solutos (ex.: bomba de sdio e potssio, canal de sdio). As Protenas de Juno permitem a adeso entre clulas adjacentes ou matriz extracelular (ex.: integrinas). No caso das junes do hiato, permitem tambm a comunicao entre o citoplasma das clulas. As Enzimas catalisam reaces especficas de substratos no fludo intra e extracelular (ex.: Acetilcolinesterase). A ancoragem ao Citosqueleto permite que o citosqueleto altere a forma da clula e que certas protenas fiquem restritas a certos locais (ex.: Anquirina).

Na+ K+ Ca2+ Mg2+ ClHCO3Fosfatos SO4Glicose Aminocidos

Fludo Intracelular 142 mEq/L 4 mEq/L 2,4 mEq/L 1,2 mEq/L 103 mEq/L 28 mEq/L 4 mEqL 1 mEq/L 90 mg/dL 30 mg/dL 10 Eq/L 140 mEq/L 0,0001mEq/L 58 mEq/L 4 mEq/L 10 mEq/L 75 mEqL 2 mEq/L 0-20 mg/dL 200 mg/dL (?) Colesterol Fosfolpidos Lpidos neutros P02 PC02 PH Protenas

2-95 g/dL 20 mmHg 50 mmHg 7,0 16 g/dL

0,5 g/dL 35 mmHg 46 mmHg 7,4 2 g/dL

Figura 2 - Composio inica dos fludos intra e extracelulares.

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Os carbohidratos ligam-se predominantemente superfcie externa das protenas membranares e dos lpidos, formando as glicoprotenas e os glicolpidos, respectivamente. A camada resultante de carbohidratos na superfcie membranar externa constitui o glicoclice, que desempenha importantes funes. Alguns glicolpidos e glicoprotenas tm cido silico que confere uma carga negativa clula, permitindo-lhe repelir substncias carregadas negativamente; participa na adeso entre clulas e em reaces imunes e algumas funcionam como receptores para ligao de hormonas como o caso da insulina. A composio relativa de unia membrana celular cerca de 55% em protenas, 25 % em fosfolpidos, Yo em colesterol, 4% em outros lpidos e 3% em carbohidratos. A membrana celular possibilita diferentes nposies inicas entre os fludos intra e extracelular: elevada concentrao de sdio e cloreto no fludo racelular e de potssio e fosfatos no fludo intracelular (figura. 2).

2. MECANISMOS DE TRANSPORTE MEMBRANAR

As molculas lipofilicas sem carga podem atravessar a membrana pela bicamada fosfolipdica, como acontece com o oxignio ou com o dixido de carbono. As substncias hidrofilicas necessitam de protenas especiais para poderem transpor a membrana. So exemplo a glicose e os ies.

2.1. DIFUSO
Difuso o movimento espacial e aleatrio (movimento Browniano) de tomos, molculas ou partculas, determinado pela energia trmica da prpria partcula. A liberdade de movimentos mxima em meio gasoso, diminui em meio lquido e mnima em meio slido. As molculas de gua e de solutos em soluo colidem continuamente e, por isso, as suas trajectrias tornam-se imprevisveis. A difuso um processo espontneo que aumenta a desordem ou entropia. Deste modo, o estado de equilbrio de um sistema contendo molculas com movimento aleatrio aquele em que a desordem/entropia mxima, a energia livre mnima e os solutos esto uniformemente distribudos pelo sistema. Se existir um gradiente de concentrao no sistema, o movimento individual dos solutos causa um movimento orientado dos locais de maior concentrao para os de menor concentrao at ser atingido um estado de equilbrio em que a distribuio de soluto uniforme (figura. 3). Exemplificando: se colocarmos aucar granulado num copo com gua, numa primeira fase, a gua volta dos gros de auar dissolve-os mas estes permanecem no fundo do copo. Segue-se ento um grande fluxo (quantidade de partculas que atravessa uma superfcie por unidade de tempo) unidireccional de molculas em direco ao topo (onde a

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concentrao de aucar baixa) e um pequeno fluxo em direco oposta. O fluxo resultante a soma algbrica destes dois fluxos unidireccionais. medida que mais molculas se aproximam do topo, menor o gradiente. at que se atinge o estado de equilbrio em que as molculas de glicose se movem igualmente em todas as direces.

Figura 3 - Difuso. As molculas do soluto difundem-se (A) at atingirem um estado de equilbrio (B).

A Taxa de Difuso de uma substncia entre dois pontos no espao determinada pela velocidade individual das partculas, pelo gradiente de concentrao e pelas dimenses da via de difuso. A velocidade individual das partculas expressa pelo Coeficiente de Difuso que depende da temperatura (quanto maior a temperatura maior a velocidade das molculas) e da massa molecular (quanto menor a massa, maior a velocidade). As unidades so cm2/s. O Gradiente de Concentrao deve ser interpretado como urna fora qumica que conduz o sistema em direco ao seu estado de equilbrio. Deste modo, o movimento individual de partculas no afectado pelo gradiente de concentrao. As Dimenses da via de difuso incluem a rea de seco e a distncia. Quanto maior a rea de seco e menor a distncia a percorrer, maior o fluxo. No pulmo e no intestino, onde a difuso importante para a troca de substncias entre os meios interno e externo, a rea de difuso grande e a distncia a percorrer pequena. A relao de Einstein mostra que o tempo necessrio para a difuso aumenta com o quadrado da distncia a percorrer. Por exemplo, a glicose demora 3,5 segundos a atingir 90% do equilbrio de difuso num local que dista 1 m da fonte de glicose (como ocorre no sangue) mas levaria 11 anos a atingir a mesma concentrao num ponto a 10 cm da fonte. A difuso um meio de transporte rpido e eficaz para curtas distncias mas muito ineficaz para distncias com mais de alguns microns. Devido lentido da difuso para distncias macroscpicas, os organismos multicelulares desenvolveram sistemas circulatrios (ex: sangue, transporte axonal) que asseguram um movimento rpido de partculas para longas distncias. A difuso proporciona o movimento de partculas entre clulas e sangue. A Lei de Fick para a difuso defme quantitativamente as relaes entre estes trs factores. Postula que a quantidade de uma substncia difundida por unidade de tempo num dado momento, isto , o fluxo de difuso (J) proporcional ao coeficiente de difuso (D, cm2/s), rea disponvel de troca (A) e ao gradiente de concentrao (AC) e inversamente proporcional distncia a que ocorre a difuso (1) :

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J = D*A*C (moles/s)

Os mesmos princpios aplicam-se ao movimento de substncias atravs das membranas plasmticas com uma diferena: a substituio, na Lei de Fick, do coeficiente de difuso pelo Coeficiente de Permeabilidade membranar (P, cm2/s), uma vez que a espessura da membrana celular pode ser considerada uma constante: J = P*A*C Para a maioria dos solutos, os coeficientes de penneabilidade so cerca de um milho de vezes inferiores aos coeficientes de difuso. Uma vez que a permeabilidade uma propriedade da membrana, diferentes tipos de clulas tm diferentes constantes de permeabilidade para a mesma substncia.

O principal factor limitante da difuso atravs de uma membrana celular a lipossolubilidade da substncia a transportar (figura. 4). Molculas apolares como o oxignio, dixido de carbono, cidos gordos e hormonas esterides difundem rapidamente pela poro lipdica da membrana. Molculas polares de pequenas dimenses e sem carga, como a ureia e o glicerol, atravessam a bicamada lipdica rapidamente. Molculas polares ionizadas difundem muito lentamente ou no atravessam a membrana pela sua parte lipdica. les como o Na+, o K+, o Cl- e o Ca2+ difundem atravs da membrana plasmtica muito mais rapidamente do que seria previsvel pela sua reduzida lipossolubilidade, o que se explica pela presena de canais inicos. Estes canais apresentam selectividade inica, quer pelo dimetro quer pela carga. Molculas polares com carga, como os carbohidratos e os aminocidos, no podem atravessar a membrana celular por difuso simples. Fazem-no por intermdio de protenas transportadoras.

Figura 4 - Permeabilidade relativa da bicamada lipdica a diferentes classes de molculas: quanto mais pequena e lipossolvel for a molcula mais rapidamente se difunde pela bicwnada.

Apesar das molculas de gua serem polares, o seu pequeno tamanho (0,3 nm de dimetro), permite- lhes uma rpida difuso atravs das membranas celulares. A maioria das membranas plasmticas

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tem, no entanto, uma permeabilidade gua 10 vezes maior que uma membrana lipdica artificial. Esta constatao pode ser explicada pela presena das aquaporinas - protenas membranares que formam canais atravs dos quais se d a difuso da gua.

2.2. OSMOSE
Osmose o processo pelo qual a gua se move espontaneamente atravs de uma membrana semipermevel (i.e., permevel gua mas no aos solutos) das regies de maior concentrao de gua para as de menor concentrao (figura 5). As diferenas na concentrao de gua devem-se aos solutos nela dissolvidos. A adio de um soluto gua baixa a concentrao desta na soluo, comparativamente concentrao da gua pura, uma vez que cada molcula de soluto ocupa um espao previamente preenchido por uma molcula de gua. Deste modo, quanto maior a concentrao de soluto, menor a concentrao de gua. A Presso Osmtica de uma soluo define-se como a presso que necessario exercer para impedir a osmose de gua pura para a soluo quando estas esto separadas por uma membrana impermevel ao soluto (figura 6). Pode ser expressa em cm H20 ou em mmHg. A presso osmtica exercida pelas partculas em soluo determinada pelo nmero de partculas por unidade de volume porque cada partcula em soluo exerce, em mdia, a mesma presso sobre a membrana, independentemente da sua massa. Por isso, uma das propriedades coligativas. Como a presso osmtica exercida por um soluto proporcional concentrao do soluto em nmero de molculas ou ies, a unidade que exprime a concentrao em termos de nmero partculas designa-se osmole. Por exemplo, 1M soluo de glicose tem 1 Osm por litro; 1M de soluo de NaCl contm 2 Osm de solutos por litro de soluo. A Presso osmtica () pode ser calculada pela lei de van't Hoff: = RT(ic) (moles/s)

onde R a constante dos gases perfeitos, T a temperatura absoluta, o coeficiente osmtico, i o nmero de ies formados pela dissociao do soluto e c a concentrao molar do soluto (moles de soluto por litro de soluo). O coeficiente osmtico depende da concentrao do soluto e das suas propriedades qumicas.
Figura 5 - Osmose. A gua desloca-se atravs de uma membrana semipermevel dos locais de menor concentrao de soluto (A) para os de maior concentrao de soluto (B).

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temperatura corporal normal, uma concentrao de 1 miliosmole por litro equivale a 19,3 mmHg de presso osmtica. Multiplicando este valor pela osmolalidade normal dos fludos intra e extracelulares (300 miliosmolar), obtemos uma presso osmtica calculada da totalidade dos fludos corporais de 5790 mmHg. O valor real , no entanto de 5500 mmhg. Esta diferena pode ser explicada pelo facto de muitos ies, como o Na+ e o Cl-, se atrarem mutuamente e, como tal, no contribuirem com todo o seu potencial osmtico.

Figura 6 - Presso Osmtica. Resulta de uma diferena de concentrao de gua entre a gua pura e uma soluo. Pode ser medida pela Presso Hidrosttica que necessrio aplicar ao compartimento A de modo a no haver movimento de gua atravs da membrana. A presso osmtica igual mas oposta presso hidrosttica exercida.

A Osmolalidade expressa-se em osmoles por quilograma de gua. Devido dificuldade da medio em quilogramas de gua em soluo, utiliza-se geralmente o termo Osmolaridade que exprime a concentrao osmolar em osmoles por litro de soluo. Apesar de ser a osmolalidade que determina a presso osmtica, as diferenas quantitativas, para solues diludas, entre osmolalidade e osmolaridade so inferiores a um por cento. Apesar da osmolaridade se referir concentrao de soluto, tambm determina a concentrao de gua na soluo, uma vez, que quanto maior a osmolaridade, menor a concentrao de gua. Uma soluo diz-se isosmtica quando tem uma concentrao de solutos por unidade de volume igual soluo padro (ou de referncia), independentemente da natureza do soluto. Para o fludo extracelular, esse valor de 300 mOsmol/L. Diz-se hiperosmtica ou hipoosmtica quando tem uma concentrao de solutos, respectivamente, maior (>300 mOsmol/L) ou menor (<300 mosmol/L) em relao soluo de referncia, independentemente da natureza dos solutos.

A Tonicidade de uma soluo refere-se tendncia do volume celular diminuir ou aumentar quando as clulas so colocadas em soluo. A osmolaridade normal do citopiasma e do fludo extracelular de 300 mOsmol/L. Os fludos intra e extracelulares so isosmticos mas devero ser tambm isotnicos. Uma soluo diz-se isotnica quando tem uma concentrao extracelular de solutos impermeantes (isto , incapazes de atravessar a membrana plasmtica) igual intracelular (300 mOsmol/L), no havendo variao do volume celular. Diz-se hipertnica quando contm uma concentrao de solutos impermeantes superior a 300 mOsmol/L e causa retraco celular pela sada

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osmtica de gua. Diz-se hipotnica se, pelo contrrio, a concentrao de solutos impermeantes for inferior a 300 mOsmol/L, causando expanso celular pela entrada osmtica de gua. Exemplificando as diferenas entre tonicidade e osmolaridade, consideremos uma clula numa soluo isotnica qual se adiciona uma certa quantidade de soluto. Se a clula for permevel ao soluto parte deste passa para o citoplasma. Aps o equilbrio difusional e osmtico ser atingido, a osmolaridade intra e extracelular ficam iguais. Neste caso, a adio de soluto torna a soluo extracelular isotnica e hiperosmtica relativamente inicial. Se a clula for impermevel ao soluto adicionado, o aumento da concentrao de soluto extracelular cria um gradiente de presso osmtica que causa sada de gua, havendo diminuio do volume celular. A soluo extracelular fica, assim, hipertnica e hiperosmtica relativamente inicial. A forma como os solutos permeantes e impermeantes influenciam o volume celular pode ser resumida em trs regras prticas: a) O volume da clula apenas determinado pela concentrao de solutos impermeantes extracelulares; b) Os solutos permeantes causam apenas alteraes transitrias no volume celular; c) As alteraes transitrias so tanto mais rpidas quanto maior a velocidade de difuso do soluto permeante. Para o fludo extracelular ser isotnico dever conter uma concentrao de solutos impermeantes que iguale as partculas impermeantes intracelulares. Os principais impermeantes intracelulares so alguns solutos orgnicos (como as protenas) e os ies potssio. As protenas so molculas de grandes dimenses e polares incapazes de atravessar a membrana. Os ies potssio, apesar de poderem difundir para o meio extracelular, so bombeados activamente para o citoplasma pela bomba Na+/K+. No fludo extracelular, os ies Na+ e Cl- so os principais impermeantes. O sdio bombeado activamente para o meio extracelular pela bomba Na+/K+ e comporta-se, assim como um soluto confinado ao fludo extracelular. Os ies cloreto, atravs do transporte activo secundrio e do potencial de repouso da membrana, so exteriorizados rapidamente medida que entram na clula.

2.3. TRANSPORTE MEMBRANAR MEDIADO POR PROTENAS

O transporte de solutos polares e ies atravs de uma membrana celular realiza-se por intermdio de protenas membranares intrnsecas. Este transporte designa-se por transporte mediado por protenas ou simplesmente, transporte mediado. Tem como caractersticas bsicas:

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a) O transporte mais rpido do que aquele que seria de esperar por difuso simples de uma molcula com peso molecular e solubilidade similares; b) A taxa de transporte atinge saturao (figura 7); c) As protenas de transporte possuem especificidade estereoqunica; d) Molculas estruturalmente semelhantes podem competir pelo sistema de transporte (competio anloga inibio competitiva de uma enzima); e) O transporte pode ser inibido pela diminuio da afinidade da protena de transporte para o substrato normal.

A Taxa de Transporte

Vmax

Figura 7 - Efeito da concentrao de uma substncia sobre a taxa de difuso numa membrana em que h difuso simples (A) e numa onde h transporte mediado por protenas (B). Podemos verificar que o transporte mediado aproxima-se de um valor mximo de taxa de difuso (Vmax).

Concentrao da substncia

O transporte mediado classifica-se, sob o ponto de vista termodinmico, em activo e passivo. As principais diferenas so a bidireccionalidade do transporte passivo e o gasto energtico do transporte activo. As protenas de transporte podem ser divididas em 2 grupos principais: canais e transportadores. As principais diferenas entre eles esto sumariadas no quadro I.

Quadro I - Caractersticas diferenciais entre canais e transportadores.

CANAIS Tubo ou poro formado por uma ou mais Constituio protenas membranares intrnsecas, geralmente com um local de abertura ou encerramento do canal. Taxa de transferncia Tipo de transporte Elevada (vrios milhes a centenas de milho de ies por segundo). Passivo (segundo o gradiente de concentrao). TRANSPORTADORES Protenas transmembranares que se submetem a um ciclo de ligao ao soluto a transportar e a uma alterao conformacional. Baixa (algumas centenas de milhar de molculas por segundo). Activo ou passivo.

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Figura 8 -Tipos de Transporte Mediado: Difuso Facilitada (canal inico), transporte activo primrio (ATPase) e transporte activo secundrio ( antiporte e simporte).

2.3.1. TRANSPORTE PASSIVO

O transporte passivo, por definio, no requer energia metablica e ocorre apenas segundo o gradiente de concentrao. Tambm se designa difuso facilitada porque o transporte de substncias mediado por protenas ocorre dos locais de maior concentrao para os locais de menor concentrao, sendo muito mais rpido do que seria de esperar pela sua lipossolubilidade. um mecanismo particularmente eficaz na captao celular de substncias que so metabolizadas (como a glicose), uma vez que a sua converso qumica intracelular sustenta o gradiente de concentrao. O transporte passivo determinado pelo(a): a) Gradiente de concentrao atravs da membrana; b) Nmero de protenas transportadoras; c) Velocidade de interaco soluto-protena de transporte; d) Velocidade de alterao conformacional da protena de transporte.

2.3.2. TRANSPORTE ACTIVO

Por defmio, transporte activo um processo que desloca solutos contra o seu gradiente electroqumico e que est ligado a uma fonte de energia. Esta pode ser o ATP (transporte activo primrio) ou um gradiente transmembranar de um segundo soluto (transporte activo secundrio) No transporte activo primrio o transportador uma ATPase que catalisa o ATP e se autofosforila. Esta fosforilao pode alterar a afinidade do seu local de ligao para o soluto e a taxa de alterao conformacional, causando uma assimetria na distribuio da substncia transportada (figura. 9). Existem trs classes de ATPases transportadoras de ies: tipo P, tipo V e tipo F. A ATPase tipo F mitocondrial a principal fonte de ATP e as de tipo P e V so as principais consumidoras de ATP (Quadro II).

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Quadro II -ATPases transportadoras de ies.
CLASSE ATPase tipo P ATPase Ca2+ EXEMPLOS ATPase Na /K
+ +

LOCALIZAO Todas as membranas celulares

FUNO* Transporta 3 ies Na+ para o exterior e 2 ies K+ para o interior; a sua taxa de transporte regulada pela concentrao intracelular de Na+

Membrana plasmtica Retculo sarcoplasmtico e endoplasmtico

Bombeia clcio para o fludo extracelular Bombeia o clcio para o seu interior

ATPase H+/K+
+

Membrana celular das clulas Secreo gstrica no estmago; parietais gstricas No electrognica (ao contrrio das restantes) Acidificao dos organelos onde esto presentes Usa a energia do gradiente de ies H+ para a sntese de ATP

ATPase tipo V

ATPase H

Lisossomas, endossomas, vesculas de secreo e grnulos de armazenamento

ATPase tipo F

ATPase H+

Membrana mitocondrial interna

*Como todas as reaces qumicas so reversveis, as ATPases dos tipos P e V podem usar a energia do gradiente inico para a produo de energia; a A TPase do tipo F pode usar o A TP para bombear protes.

Figura 9 -Ciclo da Bomba de Sdio-Potssio. A- trs ies Na+ ligam-se no lado citoplasmtico; B- a protena transportadora fosforilada pelo ATP; C- A fosforilao causa uma alterao conformacional da protena, diminuindo a afinidade para o Na+ e aumentando a do K+; os trs ies Na+ so libertados para o exterior da clula; D- Dois ies K+ ligam-se do lado exterior da protena e, aps o regresso conformao inicial, so libertados no citoplasma.

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No transporte activo secundrio utilizada a energia potencial qumica armazenada num gradiente de concentrao de outra molcula. Assim, o fluxo de ies dos locais de maior concentrao (estado energtico mais elevado) para os de menor concentrao ( estado energtico mais baixo) fornece a energia necessria para o transporte activo contra-gradiente do soluto. As protenas de transporte secundrio tm um local de ligao para o soluto transportado activamente mas tambm um local de ligao alostrica para o io. O io geralmente o sdio mas, em alguns casos, pode ser o bicarbonato, o cloreto ou o potssio. Em ltima anlise, a energia para o transporte activo secundrio provm do ATP que utilizado pela bomba Na+/K+ para criar o gradiente de sdio. Se inibirmos a produo de ATP, o transporte activo primrio de sdio cessa, deixa de existir o gradiente de sdio, o que conduz falncia dos sistemas de transporte activo secundrio dependentes do gradiente de sdio. Deste modo, no transporte activo secundrio, o movimento de sdio sempre segundo o seu gradiente enquanto que o soluto transportado activamente contra-gradiente, isto , para os locais de maior concentrao. Se o movimento do soluto e do io ocorrem na mesma direco designa-se por simporte (ou cotransporte). Se ocorrer em direces opostas diz-se tratar de um antiporte (ou contra-transporte). Exemplos: co-transportador de Na+-glicose (forma de absoro intestinal da glicose), co-transportador Na+-K+-2Cl- (importante na reabsoro de solutos nos tbulos renais); trocador Na+-Ca2+ (entrada de sdio e sada de clcio).

Quadro III - Principais caractersticas dos diferentes tipos de transporte.

DIFUSO SIMPLES Bicamada fosfolipdica Direco do fluxo Equilbrio Utilizao de uma protena integral da membrana Saturao Especificidade qumica Uso de energia (fonte) Ex. de molculas que transportam N N N No polares: O2, CO2, c. gordos S S N Polares: glicose S S S (ATP) Ies: Na+, K+. Ca ,H
2+ +

TRANSPORTE MEDIADO Transporte passivo Segundo gradiente Ce=Ci S Transporte activo primrio Contra gradiente CeCi S Transporte activo secundrio Contra gradiente CeCi S

Segundo gradiente Ce=Ci N

S S S (Gradiente inico) Polares: aminocidos, glicose, alguns ies

Legenda: N -No; S -Sim; Ce -Concentrao extracelular; Ci- Concentrao intracelular .

15 2.4. ENDOCITOSE E EXOCITOSE

As clulas tambm podem transportar macromolculas atravs da sua membrana plasmtica. Para tal, utilizam os processos de endo e exocitose. A Endocitose o processo que permite a entrada de material para a clula sem atravessar a sua membrana celular que requer energia metablica (activo). Ocorre quando regies da membrana plasmtica se invaginam e formam vesculas intracelulares que encerram um pequeno volume de matriz extracelular .A maior parte das vesculas endocticas fundem-se com lisossomas primrios, constituindo os lisossomas secundrios onde o contedo da vescula digerido. A Endocitose mediada por receptores um tipo particular de endocitose que envolve regies membranares com a protena clatrina que permitem a formao de vesculas franjadas ou revestidas. A Fagocitose ocorre apenas em clulas especializadas, como os macrfagos e os granulcitos envolve a digesto de partculas de grandes dimenses (ex.: vrus, bactrias, detritos celulares). A Pinocitose caracterstica de todas as clulas e permite a captao de fludos e dos seus constituintes. A Exocitose que ocorre quando vesculas intracelulares se fundem com a membrana plasmtica, uma forma de adicionar componentes membrana plasmtica e uma via pela qual molculas impermeantes (como protenas sintetizadas pelas clulas) podem ser libertadas para o fludo extracelular. A libertao de neurotransmisores dos terminais axonais ocorre por exocitose.

2.5 TRANSPORTE EPITELIAL

A membrana das clulas epiteliais encontra-se polarizada relativamente s suas caractersticas de transporte e permeabilidade. As clulas epiteliais do intestino delgado e do tbulo proximal do rim so bons exemplos desta polaridade. As junes apertadas que unem as clulas lateralmente, evitam que as protenas transportadoras das membranas luminal e basolateral se misturem. A membrana luminal destas clulas tem sistemas de transporte activo secundrio que permitem a entrada de glicose e de aminocidos pelo gradiente de sdio, mas deixam a clula por sistemas de transporte passivo presentes na membrana basolateral. Nos epitlios, as molculas podem ser transportadas de dois modos diferentes: atravs das junes apertadas entre as clulas -Via paracelular ou atravessando a membrana luminal, o citoplasma da clula e a membrana basolateral- Via transcelular.

Figura 10 - Tipos de transporte epitelial: B paracelular (A) e transcelular (R).

16 3. EQUILBRIO INICO

A difuso inica de sdio e de potssio segundo os seus gradientes transmembranares origina potenciais que se designam potenciais de difuso. Para uma melhor compreenso deste conceito, consideremos o seguinte modelo (figura 11): uma clula cuja membrana apenas permevel ao potssio, cuja concentrao intracelular de 150 mEq/L, banhada por uma soluo isotnica que contm 5 mEq K+/L. Nestas condies, o gradiente de concentrao transmembranar de potssio ir conduzir sada destes ies. No entanto, cada io K+ que sai da clula deixa uma carga negativa desemparelhada, conduzindo acumulao de cargas negativas na superfcie membranar interna, criando-se um potencial membranar negativo no interior. Aps alguns milisegundos, o potencial elctrico produz um fluxo inico igual mas oposto ao fluxo criado pelo gradiente de concentrao. O potencial de difuso correspondente ao ponto em que os dois fluxos do io so iguais em grandeza mas opostos em direco, designa-se por potencial de equilbrio para esse io, neste caso, do potssio. O valor do potencial de equilbrio para qualquer tipo de io depende do gradiente de concentrao desse io: quanto maior o gradiente de concentrao, maior o potencial de equilbrio, uma vez que maior ser o movimento inico devido ao potencial elctrico necessrio para contrabalanar o movimento inico pela diferena das concentraes.

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+ + + + -

+ + + + + -

+ + + + + + -

+ + + + + - + - + - + - + + + - + - + - + - + + + + + + -

+ -

+ -

+ + -

B
Figura 11 -Estabelecimento do equilbrio electroqumico numa clula imaginria, apenas permevel ao potssio (+). A- Grande efluxo de potssio atravs da membrana (pelo gradiente de concentrao); B- Diminuio do efluxo de ies potssio (pela diminuio da grandeza do gradiente de concentrao) e aumento do seu influxo (pela atraco elctrica intracelular). C- Estado de equilbrio electroqumico em que as foras elctrica e de concentrao so iguais em grandeza e opostas em direco.

+ + + -

+ -

+ + + + + -

+ -

+ -

+ -

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A relao entre o gradiente de concentrao e o potencial de equilbrio para um io X (Ex) dado pela Equao de Nernst:

Ex = ( R T / Z F ) ln ( [X]e / [X]i )
Onde R a constante dos gases perfeitos ( [8,314] K-1 mol-l) T temperatura absoluta (310K no corpo humano) F a constante de Faraday (carga por mole = 9,65x104 A.s.mol-l) Z o nmero de cargas do io ln -logaritmo natural [X] a concentrao molal do io no exterior (e) e no interior (i) da clula.

temperatura ambiente, substituindo os valores das constantes e convertendo o logaritmo natural para um logaritmo de base 10, obtemos:

Ex = (60 /z) log ( [X]e / [X]i )

(mV)

Se, por exemplo, o io for o potssio temos: Ek = (60/1) log (5/150) = -90 mV. A equao de Nernst pode, tambm, ser utilizada para prever a direco do fluxo de ies: a) Se, para um dado io, a diferena de potencial medida na membrana for igual calculada pela equao de Nernst, ento esse io est em equilbrio electroqumico e no h fluxo b) Se, para um dado io, o potencial elctrico medido tem o mesmo sinal do calculado pela equao de Nernst mas numericamente superior, a fora elctrica superior fora da concentrao; o fluxo do io determinado pela fora elctrica c) Se, para um dado io, o potencial elctrico medido tem o mesmo sinal do calculado pela equao de Nernst mas numericamente inferior, a fora da concentrao superior fora elctrica, o fluxo do io determinado pelo gradiente de concentrao d) Se, para um dado io, o potencial elctrico medido tem um sinal oposto ao que seria previsvel pela equao de Nernst, as foras elctrica e de concentrao actuam no mesmo sentido e a direco do fluxo inico determinado por ambas as foras.

4. POTENCIAL DE REPOUSO
Todas as clulas em condies de repouso tm uma diferena de cargas elctricas entre os dois lados da membrana celular, sendo o interior da clula negativo. Este potencial denomina-se potencial membranar de repouso ou, simplesmente, potencial de repouso.

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Por conveno, assume-se que o fludo extracelular tem uma voltagem de zero e que a polaridade (negativa ou positiva) do potencial de membrana definido em termos do sinal do excesso de carga presente no interior da clula. Os potenciais de membrana podem ser quantificados atravs de um microelctrodo intracelular e de um elctrodo extracelular conectados a um voltmetro. O potencial de repouso varia geralmente entre os -40 e os -80 m V, dependendo do tipo de clula. O nmero de cargas positivas e negativas que esto separadas pela membrana celular representam uma nfima parte do total das cargas dos dois compartimentos. O potencial de repouso determllado principalmente por dois factores: 1) Diferenas nas concentraes inicas especficas dos fludos intra e extracelular; 2) Diferenas na permeabilidade da membrana para os diferentes ies (reflectem o nmero de canais inicos abertos para os vrios ies). Na maioria dos tecidos, os ies no se encontram em equilbrio entre o fludo extracelular e o citoplasma. Os ies mais importantes na gnese do potencial de repouso so o sdio, o potssio e o cloreto (Quadro IV).

Quadro IV- Composio inica do citoplasma e fludo extracelular (Concentrao em mMol).

Na+ K+ ClCITOPLASMA 15 150 7 FLUDO EXTRACELULAR 150 5 110 RATIO 10/1 1/30 15/1 POTENCIAL DE EQUILBRIO +60 mV -90 mV -70 mV

O potencial de membrana , aproximadamente, -70 mV para clulas musculares e nervosas tpicas. Apesar do potencial de repouso no ser igual ao potencial de equilbrio do potssio ( -90 m V) nem ao do sdio (+60 m V), est mais prximo do potencial de equilbrio do potssio, uma vez que a permeabilidade da membrana ao potssio muito maior do que a permeabilidade ao sdio. Assim, h um movimento contnuo atravs dos canais inicos de sdio para o interior e de potssio para o exterior. A razo pela qual no h aumento progressivo do sdio intracelular e do potssio extracelular a existncia da bomba Na+/K+, que repe os gradientes destes dois ies. Na clula em repouso, as concentraes destes ies no variam porque o nmero de ies deslocados pela bomba igual ao nmero de ies que se deslocam em direco oposta atravs dos canais inicos. A bomba Na+/K+ responsvel pela manuteno dos gradientes de sdio e de potssio entre os fludos intra e extracelulares. Como bombeia para o exterior trs ies sdio e apenas dois ies potssio para o interior, causa uma transferncia de cargas positivas para o fludo extracelular ( electrognica), contribuindo, assim, para o potencial de repouso. Nas clulas musculares estriadas e nos neurnios dos vertebrados, a contribuio electrognica para o potencial de repouso pequena (inferior a 5 m V). Nestes

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tecidos, o potencial de repouso deve-se, sobretudo, difuso de Na+ e de K+ segundo os seus gradientes electroqumicos. Em concluso: nos neurnios e nas clulas musculares estriadas, o potencial de repouso resulta directamente da difuso dos ies Na+ e K+ segundo os seus gradientes electroqumicos e, indirectamente, pela bomba Na+/K+ que mantm estes gradientes. Nas clulas musculares lisas e em vrias outras clulas, o efeito electrognico da bomba pode contribuir para uma fraco substancial do potencial de repouso. O io cloreto est em equilbrio electroqumico em muitas clulas, pelo que no contribui para o potencial de repouso. Nas clulas em que o Cl- transportado activamente para o exterior a sua difuso para o citoplasma contribui para o excesso de cargas negativas no interior da clula. Para se determinar o potencial da membrana celular, necessrio considerar as permeabilidades e os gradientes de concentrao para todos os ies. Por definio, a equao de Nernst descreve estados de equilbrio electroqumico. necessrio modific-la de modo a exprimir a relao entre os gradientes de concentrao dos vrios ies, a permeabilidade da membrana para esses ies e o potencial de repouso, j que, nenhum destes ies est em equilbrio electroqumico. O resultado a Equao de Goldman:

Vrep = (RT / F) ln ( Pk [K+]e + PNa [Na+]e ) / ( Pk [K+]i + PNa [Na+]i)

Onde Pk- permeabilidade ao K+; PNa -permeabilidade ao Na+. Os restantes termos so iguais aos da equao de Nernst. Da equao de Goldman pode-se concluir que o potencial de repouso determinado pela grandeza relativa dos gradientes de concentrao de todos o ies transportados activamente e pelas suas permeabilidades relativas. Assim, para as clulas que transportam activamente o Cl-, tem que ser adicionado um novo termo equao para este io.

5. ACTIVIDADE ELCTRICA DA MEMBRANA

A manuteno do potencial de membrana uma propriedade de todas as clulas vivas mas a capacidade de gerar potenciais de aco est presente apenas em clulas especializadas como os nervos e os msculos. Considerando o potencial de repouso, que o ponto de referncia para a medio das alteraes do potencial de membrana, designamos hiperpolarizao quando o potencial de membrana est mais polarizado (internamente mais negativo) e despolarizao quando o potencial de membrana se torna menos negativo intracelularmente (deslocando-se em direco aos 0 mV).

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As alteraes do potencial de membrana em clulas excitveis podem ser devidas a modificaes temporrias na permeabilidade inica. Quantos mais canais de um io estiverem abertos, mais o potencial de repouso se desloca na direco do potencial de equilbrio desse io. A corrente elctrica provocada por um io est dependente do nmero de canais abertos e da driving force para esse io. A driving force a diferena, em milivolts, entre o potencial de equilbrio desse io e o potencial de membrana. Por exemplo, a driving force para o potssio de apenas 20mV, enquanto que para o sdio de 130mV. A elevada driving force que tende a mover o Na+ atravs da membrana celular, contrariada pela baixa permeabilidade ao Na+ da mesma. Pelo contrrio, a pequena driving force do potssio compensada pela maior permeabilidade da membrana celular ao K+ no estado de repouso. As modificaes do potencial de membrana podem decorrer em pequenas regies da membrana ou serem transmitidas ao longo da superfcie da clula. As modificaes locais podem representar a resposta a um estmulo, como ocorre nos potenciais dos receptores ou nos potenciais sinpticos. Os potenciais de aco so utilizados na sinalizao, a grande distncia, dos nervos e msculos.

5.1. POTENCIAIS GRADATIVOS

Podemos encontrar vrios potenciais gradativos que tomam designaes relacionadas com o local onde ocorrem ou com a funo que desempenham: potenciais dos receptores, potenciais sinpticos, potenciais de pacemaker e potenciais da placa terminal. Diferentes tipos de receptores sensitivos esto especializados na resposta a diferentes estmulos, como o toque, o som, o odor. Os inputs resultantes de respostas a estmulos determinam a actividade da clula sensitiva. Por outro lado, a actividade das clulas que recebem inputs de outros neurnios determinada pelos potenciais sinpticos desencadeados pela activao dos neurnios que com elas contactam. Certas clulas so capazes de gerar espontaneamente potenciais de pacemaker nas quais a actividade de diferentes tipos de canais inicos presentes na membrana causam despolarizao gradativa da membrana; se o limiar for atingido, desencadeiam um potencial de aco. Os potenciais de pacemaker esto implicados em fenmenos rtmicos, como a ventilao e os batimentos cardacos. Estes potenciais tm caractersticas comuns: 1) As suas amplitudes so gradativas e aumentam com a grandeza dos estmulos que os desencadeiam 2) No podem ser transmitidos por longas distncias porque a corrente propaga-se para as regies vizinhas por conduo decremental 3) Podem sofrer somao, isto , os potenciais desencadeados por diferentes estmulos adicionam-se (figura. 12).

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Figura 12 Estmulo despolarizante (A, B); Somao temporal (AA);.Somao espacial (AB); Estmulo hiperpolarizante (C).

Dependendo da natureza do estmulo, o potencial gradativo pode ser despolarizante ou hiperpolarizante. Quando uma pequena regio de uma membrana despolarizada por um dado estmulo, a face externa da membrana fica negativa e a interna positiva relativamente s regies adjacentes. O fluxo destas correntes locais despolarizam a membrana adjacente regio de despolarizao inicial. Estas novas reas de despolarizao causam fluxos de corrente que despolarizam outros segmentos da membrana. A grandeza das correntes vai decrescendo medida que se afastam do local de despolarizao inicial porque a membrana permevel a ies que anulam rapidamente estas correntes locais. Por esta razo, diz-se que as correntes locais tm uma conduo decremental.

5.2. POTENCIAIS DE ACO

Os potenciais de aco diferem dos potenciais gradativos em dois aspectos importantes: 1) so eventos de "tudo ou nada" (a sua amplitude praticamente constante e independente da grandeza do estmulo ); 2) tm conduo no decremental, isto , propagam-se ao longo da membrana sem perda de intensidade.

As clulas musculares e nervosas, bem como algumas clulas do sistema endcrino, reprodutivo e imunitrio so capazes de produzir potenciais de aco (figura. 13). Estas membranas dizem-se excitveis e a sua capacidade de gerarem potenciais de aco designa-se por excitabilidade. Da mesma forma que a grandeza do potencial de repouso depende dos gradientes de concentrao e das permeabilidades inicas da membrana, tambm os potenciais de aco resultam de uma alterao transitria na permeabilidade inica da membrana que permite o movimento de certos ies segundo os seus gradientes de concentrao.

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Figura 13 -Exemplos de clulas excitveis e respectivas duraes dos potenciais de aco.

O potencial de aco pode ser dividido em trs fases sucessivas. A fase de repouso corresponde ao potencial de repouso da membrana antes de ocorrer o potencial de aco. Na fase de despolarizao, a membrana torna-se permevel aos ies sdio de modo sbito, permitindo a entrada de um grande fluxo de ies sdio para o interior da clula. O potencial de membrana aproxima-se, assim, do potencial de equilbrio do sdio (+60m V). O estmulo provoca a abertura de alguns canais de sdio dependentes da voltagem, aumentando a permeabilidade da membrana para este io. Consequentemente os ies sdio difundem para o interior da clula. Este aumento da positividade intracelular despolariza a membrana, abrindo mais canais de sdio dependentes da voltagem, aumentando ainda mais a permeabilidade ao sdio e assim sucessivamente, descrevendo um ciclo de feedback positivo (figura 14 ).

Figura 14- Ciclo de feedback positivo entre a despolarizao da membrana e a permeabilidade aumentada ao sdio que conduz rpida fase de despolarizao do potencial de aco.

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O simples encerramento dos canais de sdio permitiria restabelecer o potencial de repouso mas tomaria a fase de repolarizao extremamente lenta. Este processo acelerado pelo aumento simultneo da permeabilidade ao potssio atravs da activao de canais de potssio dependentes da voltagem cuja abertura est atrasada relativamente despolarizao. Na fase de repolarizao, a difuso de potssio para o exterior excede largamente a difuso de sdio para o interior, permitindo atingir rapidamente o potencial de repouso. Como alguns canais de potssio dependentes da voltagem permanecem abertos aps todos os canais de sdio dependentes da voltagem estarem encerrados, h geralmente uma hiperpolarizao da membrana que se designa por hiperpolarizao ps-potencial (figura. 15).

Figura 15 Grfico que relaciona as alteraes da voltagem durante o potencial de aco e as condutncias dos ies sdio e potssio.

Os principais intervenientes nas fases de despolarizao e de repolarizao durante um potencial de aco so os canais de sdio e de potssio dependentes da voltagem. Os canais de sdio dependentes da voltagem tm trs estdios funcionais diferentes: repouso, activo e inactivo (figura. 16). Quando ocorre uma despolarizao da membrana h uma rpida alterao conformacional e o canal fica activado. Os ies sdio difundem, ento, para o interior da clula. O mesmo aumento da voltagem que abre a 'porta' de activao, encerra tambm a 'porta' de inactivao do canal, conduzindo-o ao seu estdio inactivo. Esta 'porta' de inactivao s reabre quando o potencial de membrana regressa para o nvel do potencial de repouso.

Figura 16 Estdios dos canais de sdio dependentes da voltagem: activado (aberto), inactivado e repouso (encerrado).

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Os canais de potssio dependentes da voltagem possuem apenas dois estdios. Durante o estdio de repouso, o canal est encerrado. A despolarizao da membrana causa uma lenta alterao conformacional de abertura do canal e permite um aumento da difuso de potssio. Como o processo de abertura do canal lento, os canais de potssio s se encontram abertos quando os de sdio comearam j a fechar devido inactivao. Deve-se salientar que o nmero de ies sdio que entram na clula durante o potencial de aco e o nmero de ies potssio que difundem para o exterior durante a repolarizao, so uma nfima parte do nmero total de ies da clula. A acumulao celular de sdio e a perda de potssio so prevenidas pela aco permanente da bomba Na+/K+. Nem todos os estmulos despolarizantes desencadeiam, nas clulas excitveis, potenciais de aco. Estes s ocorrem se a despolarizao abrir o nmero de canais de sdio dependentes da voltagem suficiente para se iniciar o ciclo de feedback positivo. O potencial de membrana que corresponde ao movimento em que o influxo de sdio excede o efluxo de potssio e que o ciclo de feedback positivo desencadeia um potencial de aco designa-se potencial liminar. O estmulo com a grandeza necessria para despolarizar a membrana at este nvel o estmulo limiar. O limiar da maioria das membranas excitveis cerca de 15 m V inferior ao potencial de repouso (ex.: se o potencial de repouso de um neurnio for -70mV, o seu limiar ser -55mV). Nas despolarizaes inferiores ao limiar, o efluxo de potssio aumenta (devido diminuio do potencial de membrana), excedendo a entrada de sdio e no se desencadeia o ciclo de feedback positivo. Estas despolarizaes designam-se por potenciais infra-liminares. Estmulos com uma grandeza superior ao limiar, isto , estmulos supra-liminares, desencadeiam potenciais de aco com uma amplitude igual de um estmulo limiar, uma vez que, ultrapassado o limiar, as alteraes membranares so independentes da grandeza do estmulo. Os potenciais de aco so, pois, eventos de "tudo ou nada".

Durante a maior parte do potencial de aco impossvel que um segundo estmulo produza um segundo potencial de aco e diz-se que a membrana est no perodo refractrio absoluto. Este fenmeno ocorre porque os canais de sdio encontram-se inactivados pela voltagem e no reabrem antes da membrana repolarizar. Durante a parte final do potencial de aco, a clula pode gerar um segundo potencial de aco desde que o estmulo seja substancialmente superior ao limiar. Trata-se do perodo refractrio relativo (que pode durar 10-15 ms) e coincide, grosso modo, com o perodo da hiperpolarizao ps-potencial. Durante o perodo refractrio relativo, alguns dos canais de sdio dependentes da voltagem permanecem inactivos e a condutncia ao potssio est aumentada (figura. 17). Os perodos refractrios limitam o nmero de potenciais de aco que pode ser produzido por uma membrana excitvel num dado perodo de tempo. A geometria celular, a densidade e caractersticas dos

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canais inicos presentes na clula influenciam tambm a frequncia com que so desencadeados os potenciais de aco.

Figura 17 Durante o perodo refractrio absoluto nenhum estmulo, (A), independentemente da sua intensidade, consegue gerar um potencial de aco. No perodo refractrio relativo (B), um estmulo supra-liminar poder gerar um segundo potencial de aco.

As alteraes na concentrao do Ca2+ extracelular podem afectar a excitabilidade da membrana pela modificao do potencial de repouso. O io clcio tem um papel estabilizador na membrana porque interactua com as cargas negativas nas extremidades polares dos fosfolpidos e nas extenses extracelulares de protenas membranares. Por outro lado, o io clcio parece ligar-se superfcie externa dos canais de sdio, aumentando o nvel de voltagem necessrio para abrir o canal. Deste modo, nas condies que elevam o Ca2+ plasmtico (Hipercalcemia), o potencial de repouso est mais afastado do limiar de excitabilidade, pelo que necessrio um estmulo muito elevado para desencadear um potencial de aco. As clulas nervosas e musculares tornam-se mais refractrias. Na Hipocalcemia, o potencial de repouso est mais prximo do limiar porque a voltagem necessria para a abertura dos canais de sdio est diminuda. As clulas nervosas e musculares tornam-se hiper-excitveis.

5.3. INCIO E PROPAGAO DOS POTENCIAIS DE ACO

Em condies normais, os potenciais de aco iniciam-se nas regies da membrana que receberam o estmulo (perto da poro electricamente no excitvel da clula). Nos neurnios, o local de iniciao a membrana adjacente ao cone axonal que responde corrente de despolarizao originada na parte receptora da clula. Se a despolarizao for supra-liminar desencadeado um potencial de aco, que percorre o axnio desde o cone axonal at ao boto pr-sinptico, devido activao dos canais de sdio dependentes de voltagem presentes na membrana excitvel. Uma vez gerado, um determinado potencial de aco no se desloca ao longo da membrana. A corrente local gerada por um potencial de aco serve como estmulo que despolariza a membrana

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adjacente at ao potencial liminar .Desencadeia-se o ciclo de feedback positivo do sdio e ocorre um novo potencial de aco. Esta a base da propagao do potencial de aco ao longo de uma membrana (figura. 18). Uma vez que cada potencial de aco depende do ciclo de feedback do sdio da membrana onde ocorre, o potencial de aco final virtualmente igual ao inicial. Por esta razo, os potenciais no tm uma conduo decremental.

Figura 18 -Propagao do Potencial de Aco em ambas as direces numa fibra condutora.

Quadro V- Diferenas entre Potenciais gradativos e Potenciais de aco.

CARACTERSTICA Localizao Evento inicial Natureza da resposta Intensidade Difuso da corrente Sumao Propagao Limiar Perodo refractrio Alterao do potencial Tipo de canal inico POTENCIAIS GRADATIVOS Receptores sensitivos. Sinapses Fsico ou qumico Gradativa Varivel (geralmente < 10 mV) Conduo decremental Sim No No No Despolarizante ou Hiperpolarizante Dependente de ligandos ou de alteraes qumicas ou fsicas POTENCIAIS DE ACO Axnios dos neurnios, clulas musculares Elctrico Tudo ou Nada Geralmente > 10 mV Conduo no decremental No Sim Sim Sim Despolarizante Dependente da voltagem

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Como as reas da membrana que acabaram de produzir um potencial de aco esto refractrias a novos estmulos, a nica direco possvel de propagao do potencial de aco a jusante da regio da membrana que acabou de ser despolarizada. Se a membrana em que se propaga o potencial de aco no for refractria, como nas clulas musculares esquelticas, os potenciais so conduzidos nas duas direces. A velocidade de propagao do potencial de aco depende de dois factores principais: 1) Dimetro da fibra -quanto maior for o dimetro da fibra, maior a velocidade de propagao (pela diminuio da resistncia corrente local) 2) Mielina -permite um isolamento da fibra nervosa, dificultando o fluxo de cargas entre os fludos intra e extracelulares; interrompida ao nvel dos ndulo de Ranvier onde a concentrao de canais de sdio elevada. Nas fibras mielnicas, os potenciais de aco ocorrem apenas nos ndulos de Ranvier, pelo que, medida que percorrem o axnio como que saltam de ndulo em ndulo. Este tipo de propagao designa- se por conduo saltatria (figura.19). O fluxo de corrente unidireccional porque os canais a montante da onda de despolarizao esto inactivados. A distncia intenodular geralmente pequena e a grandeza da corrente est acima do limiar, pelo que, um potencial de aco que se inicia num determinado ndulo, despolariza vrios ndulos a jusante. A propagao por conduo saltatria muito mais rpida do que a propagao em neurnios amielnicos com o mesmo dimetro.

Figura 19 Conduo Saltatria ao longo de um axnio mielinizado, desde o segmento inicial at ao terminal pr-sinptico.

As velocidades de conduo variam desde 0,5m/s (para fibras amielnicas de pequeno calibre) at 100m/s (para fibras mielnicas de grande calibre). Com a velocidade de 0.5m/s, o tempo necessrio para um potencial de aco percorrer a distncia desde o crebro at um msculo de um dedo do p de uma pessoa de estrutura mdia cerca de 4s; velocidade de 100m/s cerca de 0.02s.

28 5.4. CRONAXIA E REOBASE

Um estmulo pode ser caracterizado quanto sua natureza (mecnico, elctrico, qumico, luminoso, osmtico) e quanto sua grandeza ( dependente da intensidade, tempo de variao e tempo de actuao ). Tomemos por exemplo um estmulo trmico. A Intensidade desse estmulo a diferena entre os valores inicial e fmal da temperatura. O Tempo de Variao o intervalo de tempo entre o valor inicial e o valor mximo atingido. O Tempo de Actuao o intervalo de tempo durante o qual mantido o valor mximo da temperatura (figura. 20).

a b

Figura 20 -Determinantes da Grandeza de um estmulo: (a) Intensidade (b) Tempo de variao (c) Tempo de actuao.

Para uma mesma grandeza podemos ter um nmero infmito de estmulos, na medida em que podem ser considerados valores diferentes de intensidade, tempo de variao e tempo de actuao. Deste modo, um estmulo ser tanto mais eficaz quanto maior a sua intensidade e o seu tempo de actuao e quanto menor o seu tempo de variao. Se representarmos graficamente tempo de actuao versus intensidade, obtemos um conjunto de pontos que correspondem a todos os estmulos possveis. Os estmulos liminares definem uma hiprbole equiltera que se designa por Curva de Excitabilidade (figura. 21 ). Os estmulos direita da curva so supra-liminares e esquerda infra-liminares. Todas as estruturas vivas apresentam uma curva de excitabilidade que varia em conformidade com a modificao do limiar de excitabilidade. Os estmulos elctricos dependem sobretudo da intensidade e do tempo de actuao, visto que o tempo de variao reduzido. A excitabilidade de um nervo pode ser caracterizada por dois parmetros: a) Reobase -valor da intensidade do menor estmulo capaz de, pela primeira vez, gerar uma resposta (potencial de aco) para valores finitos de tempo de actuao, i.e., valor da intensidade do estmulo abaixo da qual no possvel obter uma resposta para valores finitos de tempo de actuao.

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b) Cronaxia -tempo de actuao necessrio para obter uma resposta ou gerar um potencial de aco quando a intensidade do estmulo o dobro da reobase.

Intensidade

b 2a

Figura 21 -Curva de Excitabilidade (a) Reobase (b) Cronaxia

Tempo de actuao

O grau de excitabilidade de uma estrutura viva tanto maior quanto menores for a sua cronaxia e a sua reobase. O conceito de cronaxia o mais utilizado dado que uma pequena variao de intensidade traduz uma muito maior variao do tempo de actuao. A cronaxia permite, ento, medir , excitabilidade de um nervo sem ser necessrio conhecer a intensidade da corrente das suas fibras individuais bem como a medio da velocidade de conduo desse nervo.