Biosseguranca em Laboratorios Biomedicos e de Microbiologia

F
U
N
A
S
A
VIGILNCIA EPIDEMIOLGICA
Biossegurana em
Laboratrios
Biomdicos e de
Microbiologia
Biossegurana em
Laboratrios
Biomdicos e de
Microbiologia
Biossegurana em Laboratrios
Biomdicos e de Microbiologia
Braslia, outubro de 2001
2001
Edio original em ingls: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories
editado pelo CDC - Centro de Controle e Preveno de Doenas / Estados
Unidos e pelo Instituto Nacional de Sade / Estados Unidos - 4
edio Maio de
1999 - HHS Publicao N (CDC) 93-8395
permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a
fonte.
Reviso Tcnica da Traduo:
Ncleo de Biossegurana/NuBio
Vice-Presidncia de Tecnologia
Fundao Oswaldo Cruz
Endereo: Av. Brasil, 4036 - 7 andar - sala 716
Telefone: (21) 590-9122 R-257/258, Fax: (21) 590-9122
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70058-902 - Braslia DF
Impresso no Brasil / Printed in Brazil
FICHA CATALOGRFICA
Biossegurana em laboratrios biomdicos e de microbiologia / editado
por Jonathan Y. Richmond, Robert W. Mckinney; organizado por Ana Rosa
dos Santos, Maria Adelaide Millington, Mrio Cesar Althoff. - Braslia :
Ministrio da Sade : Fundao Nacional de Sade, 2000.
290 p. il; 21,5x14 cm
Traduo de: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories
1. Laboratrios de sade pblica. I. Richmond, Jonathan Y. II. Mckinney,
Robert W. III. Santos, Ana Rosa. IV. Millington, Maria Adelaide. V. Althoff,
Mrio. VI. Ministrio da Sade. VII. Fundao Nacional de Sade.
APRESENTAO
O imprevisvel e diversificado comportamento das doenas infecci-
osas emergentes e reemergentes tem acarretado a discusso das condi-
es de biossegurana nas instituies de ensino, pesquisa, desenvolvi-
mento tecnolgico e de prestao de servios. A despeito do avano
tecnolgico, o profissional de sade est freqentemente exposto a ris-
cos biolgicos e de produtos qumicos, cujo enfrentamento est
consubstanciado na adequao das instalaes do ambiente de trabalho
e na capacitao tcnica desses profissionais. O manejo e a avaliao
de riscos so fundamentais para a definio de critrios e de aes, e
visam minimizar os riscos que podem comprometer a sade do homem,
dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvi-
dos - Biossegurana.
A Biossegurana constitui uma rea de conhecimento relativamente
nova, regulada em vrios pases no mundo por um conjunto de leis, pro-
cedimentos ou diretrizes especficas. No Brasil, a legislao de
Biossegurana foi criada em 1995 e, apesar da grande incidncia de do-
enas ocupacionais em profissionais de sade, engloba apenas a
tecnologia de engenharia gentica, estabelecendo os requisitos para o
manejo de organismos geneticament modificados.
A segurana dos laboratrios e dos mtodos de trabalho transcen-
de aos aspectos ticos implcitos nas pesquisas com manipulao gen-
tica. Medidas de biossegurana especficas devem ser adotadas por la-
boratrios e aliados a um amplo plano de educao baseado nas normas
nacionais e internacionais quanto ao transporte, conservao e manipu-
lao de microorganismos patognicos.
Ao apresentar este livro, traduo autorizada do original em ingls
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - 4 Edition -
CDC-INH, 1999, esperamos atender s necessidades de conhecimentos
bsicos de biossegurana laboratorial, dos profissionais participantes do
Programa Nacional de Capacitao em Biossegurana Laboratorial, que
est sendo desenvolvido pelo Centro Nacional de Epidemiologia da Fun-
dao Nacional de Sade - CENEPI/FUNASA, e constituir um roteiro
atualizado de condutas gerais de segurana para os profissionais que
atuam na Rede Nacional de Laboratrios de Sade Pblica.
Braslia/DF, Agosto de 2000
JARBAS BARBOSA DA SILVA JUNIOR
Diretor do CENEPI / FUNASA
Organizado por:
Coordenao Nacional de Laboratrios de Sade Pblica
Centro Nacional de Epidemiologia
Fundao Nacional de Sade
Equipe Tcnica:Ana Rosa dos Santos
Maria Adelaide Millington (Coordenadora)
Mrio Cesar Althoff
Reviso Tcnica da Traduo:
Ncleo de Biossegurana/NuBio
Vice-Presidncia de Tecnologia
Fundao Oswaldo Cruz
Equipe Tcnica: Bernardo Elias Corra Soares
Francelina Helena Alvarenga Lima e Silva
Leila Macedo Oda (Coordenadora)
Sheila Sotelino da Rocha
Telma Abdalla de Oliveira Cardoso
Traduo de: Denise Bittar
DEDICATRIA
Esta quarta edio de Biossegurana em Laboratrios
Biomdicos e Microbiolgicos dedicada vida e realizaes de
John H. Richardson, D.V.M, M.P.H.
Dr. Richardson foi o pioneiro e incessante defensor da
segurana para educao biolgica. Ele foi o co-editor das duas
primeiras edies da BLBM, cujas normas so agora aceitas como
o padro ouro internacional para a conduo segura de uma
pesquisa microbiolgica. Ele adaptou os programas de quarentena
de animais importados para os Estados Unidos e o de manejo de
organismos biolgicos perigosos em laboratrios de pesquisas. Ele
foi scio-presidente e ex-presidente da Associao Americana de
Segurana Biolgica (American Biological Safety Association) e
auxiliou no desenvolvimento do programa de qualificao dos
profissionais da rea de segurana biolgica. Aps uma longa e
ilustre carreira no Servio de Sade Pblica (Public Health Service),
ele atuou como Diretor de Segurana do Meio Ambiente e na
Secretaria de Sade da Universidade de Emory antes de tornar-se
um renomado Consultor de Biossegurana.
Talvez, o aspecto mais importante, por ter sido um cavalheiro
e defensor da sade pblica, os muitos amigos e associados que
tiveram o privilgio de conhec-lo e trabalhar ao seu lado sentiro
muito a sua falta.
Editores:
Jonathan Y. Richmond, Ph.D.
Diretor do Escritrio de Sade e Segurana
Servio de Sade Pblica
Centros de Preveno e Controle da Doena
1600 Clifton Road N.E.
Atlanta, Georgia 30333
Robert W. McKinney, Ph. D.
Diretor da Diviso de Segurana
Servio de Sade Pblica
Institutos Nacionais de Sade
Building 31, Room 1C02
Bethesda, Maryland 20892
EDITORES CONVIDADOS:
Centros para Preveno e Controle da Doena
Robert B. Craveb, M.D. Chefe do Departamento de Epidemiologia
Diviso de Doena Provocada por
Arbovrus
Centro Nacional de Doenas Infecciosas
Mark L. Eberhard, Ph.D. Chefe da Di vi so de Bi ol ogi a e
Diagnsticos
Diviso de Doenas Parasitrias
Thomas Folks, Ph. D. Chefe da Di vi so de HIV e
Retrovirologia
Diviso de AIDS, DST e Laboratrio de
Pesquisa.
Centro Nacional de Doenas Infecciosas.
Bradford Kay, Dr.P.H. Consultor Senior do Laboratrio da
Diviso de Bacteriologia e Doenas
Micticas.
Richard C. Knudsen, Ph.D. Chefe do Laboratrio de Segurana
Secretaria da Sade e Segurana
Brian W. J. Mahy, Sc.D, Ph.D. Diretor da Diviso de Doenas Virais e
Rickettsiais.
C.J. Peters, M.D. Chefe da Di vi so de Patgenos
Especiais
ii
Margaret A.Tipple, M.D. Chefe do Programa de Atividades
Externas
Secretaria da Sade e Segurana
Instituto Nacional de Sade
John Bennett, M.D. Chefe da Seo de Micologia do Instituto
Nacional de Alergias e Doenas
Infecciosas
David Hackstadt, Ph.D Microbiologista do Rocky Mountain
Laboratory.
Deborah E. Wilson, Dr.P.H. Chefe da Diviso de Segurana e Sade
Ocupacional
Departamento de Segurana.
Editores individuais convidados
Jonathan Crane, A.I.A Arquiteto
Atlanta, GA
Peter J. Gerone, Sc.D Diretor do Centro de Pesquisa Regional
de Primatas de Tulane
Centro Mdico da Universidade de Tulane
Convington, Louisiana.
Thomas Hamm, D.V.M, Ph.D Consultor
Cary, NC
Debra L. Hunt, Dr. P.H. Diretor da Segurana Biolgica e
Controle de Infeces.
Centro Mdico da Universidade de Duke
Durham, North Carolina.
iii
Peter Jahrling, Ph.D. Cientista Senior de Pesquisa
Diviso de Avaliao da Doena
USAMRIID
Frederick, Maryland.
Thomas Kost, Ph.D. Chefe do Departamento de Cincias
Moleculares.
Glaxo Welcome, Inc.
Research Triangle Park, NC.
Editor tcnico
Marie J. Murray Editor-Escritor
Atlanta, GA
iv
CONTEDO
SEO I
Introduo .............................................................................. 01
SEO II
Princpios de Biossegurana .................................................. 08
SEO III
Nveis de Biossegurana Laboratorial ..................................... 19
Tabela 1. Resumo dos Nveis de Biossegurana Recomendados
para Agentes Infecciosos
....................................................
59
SEO IV
Critrios para os Nveis de Biossegurana para
Animais Vertebrados ................................................................ 60
Tabela 1. Resumo dos Nveis de Biossegurana
Recomendados para as Atividades nas quais Animais
Vertebrados Invertebrados`Naturalmente ou Experimentalmente
so Utilizados
.................................................................
86
SEO V
Avaliao dos Riscos ............................................................. 87
SEO VI
Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes
Infecciosos e Animais Infectados ........................................... 96
SEO VII
Relao dos Agentes ............................................................. 100
Seo VII-A: Agentes Bacterianos ......................................... 100
Seo VII-B: Agentes Fngicos ............................................. 133
Seo VII-C: Agentes Parasitrios ......................................... 142
Seo VII-D: Prions................................................................ 150
Seo VII-E: Agentes Ricketisiais.......................................... 165
Seo VII-F: Agentes Virais (no incluindo o arbovrus) .......... 171
Seo VII-G: Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados ....... 205
v
287
Arbovrus Designados para o Nvel de Biossegurana 2....... 205
Tabela 1. Arbovrus e Arenavrus Designados para o Nvel
de Biossegurana 2. ................................................... 208
Tabela 2. Cepas de Vacina de Vrus do NB-3/4 que Podem Ser
Manipulados em um Nvel de Biossegurana 2.
Arbovrus e Arenavrus Designados para o Nvel de
Biossegurana 3. ........................................................ 211
Tabela 3. Arbovrus e Alguns Outros Vrus Designados
para o Nvel e Biossegurana 3 (baseado em
experincia insuficiente). ............................................. 216
Tabela 4. Arbovrus e Alguns Outros Vrus Designados
para oNvel de Biossegurana 3. ................................ 217
Arbovrus, Arenavrus e Filovrus Designados ao Nvel
de Biossegurana 4. ................................................... 219
Tabela 5. Arbovrus, Arenavrus e Filovrus Designados
para o Nvel de Biossegurana 4. ................................ 221
APNDICE A
Conteno Primria: Cabines de Segurana Biolgica ........... 224
Tabela 1. Comparao das Cabines de Segurana
Biolgica. .................................................................... 229
Figura 1. Cabine de Segurana Biolgica Classe I ............ 230
Figura 2a. Cabine de Segurana Biolgica Classe II,
Tipo A ......................................................................... 231
Figura 2b. Cabine de Segurana Biolgica Classe II,
Tipo B1 ....................................................................... 232
Figura 2c. Cabine de Segurana Biolgica Classe II,
Tipo B2 ....................................................................... 233
Figura 2d. Cabine de Segurana Biolgica Classe II,
Tipo B3 ....................................................................... 234
Figura 3. Cabine de Segurana Biolgica Classe III ........... 235
APNDICE B
Imunoprofilaxia ....................................................................... 236
vi
APNDICE C
Transporte e Transferncia de Agentes Biolgicos.......... 238
Figura 1. Embalagem e Rotulagem de Substncias
Infecciosas ................................................................ 244
Figura 2. Embalagem e Rotulagem de Amostras Clnicas
....
244
APNDICE D
Patgenos Animais ............................................................ 245
APNDICE E
Fontes de Informaes ...................................................... 248
APNDICE F
Segurana do Laboratrio e Resposta de Emergncia para
Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia ............... 250
APNDICE G
Gerenciamento Integrado de Roedores e Insetos............ 256
APNDICE H
Trabalhos com Clulas e Tecidos Humanos e de Outros Primatas ... 261
APNDICE I
Normas para o Trabalho com Toxinas de Origem Biolgica .... 264
NDICE REMISSIVO
ndice Remissivo ................................................................ 270
vii
PREFCIO
Essa publicao descreve as combinaes das prticas
microbiolgicas padres e as especiais, dos equipamentos de
segurana e instalaes que constituem os Nveis de Biossegurana
de 1-4 recomendados para um trabalho que envolva uma variedade
de agentes infecciosos em vrios estabelecimentos laboratoriais.
Essas recomendaes possuem um carter consultivo. A
inteno o de fornecer um guia voluntrio ou cdigo de prtica,
assim como os objetivos para operaes de um nvel mais alto.
Esses conselhos so tambm oferecidos como um guia e uma
referncia na construo das instalaes de um novo laboratrio e
na reforma de instalaes j existentes.
Porm, a aplicao destas recomendaes em uma operao
de um laboratrio particular dever se basear na avaliao do risco
de agentes e de atividades especiais, ao invs de ser utilizado
como um cdigo universal e genrico aplicvel a todas as situaes.
Desde a publicao da terceira edio do livro Biossegurana
em Laboratrios Biomdicos e Microbiolgicos, ocorreram inmeros
eventos que acabaram por influenciar algumas das mudanas feitas
nesta quarta edio.
Em resposta preocupao global concernente s doenas
infecciosas emergentes e as reemergentes, a seo de
Avaliao de Riscos foi ampliada para proporcionar ao
laboratorista informaes adicionais para facilitar a implantao
de tais determinaes.
Devido a grande demanda de projetos e construes de
laboratrios biomdicos e microbiolgicos, particularmente nos
Nveis de Biossegurana 3 e, incorporamos esclarecimentos e
acrscimos s Sees Instalaes, em particular s Sees III
e IV. O objetivo a expanso de nossa abordagem baseada na
atuao com o objetivo de obtermos uma conteno apropriada.
viii
Com a identificao da encefalopatia espongiforme bovina (EEB)
na Inglaterra houve um aumento significativo do interesse sobre
doenas provocadas por prions. Por esta razo, acrescentamos
um apndi ce para di reci onar as vri as preocupaes
associadas ao trabalho com estes agentes.
Como tem ocorrido vrias infeces associadas a laboratrios
envolvendo agentes previamente conhecidos e desconhecidos,
modi fi camos ou acrescentamos vri os Resumos das
Caractersticas de Agentes nesta edio.
Os resumos de agentes agora contm informaes sobre os
requisitos necessrios para obteno de licenas para o
transporte de microrganismos infecciosos. O motivo para essa
modificao foi a preocupao em relao ao crescente
transporte nacional e internacional de microorganismos
infecciosos.
E finalmente, nestes ltimos anos, houve um aumento nas
preocupaes em relao ao bioterrorismo, o que tem provocado
um considervel interesse nas questes que envolvem a
biossegurana. Portanto, acrescentamos um apndice para
ajudar a concentrarmos nossas atenes nas necessidades de
aumento de segurana em nossos laboratrios de microbiologia.
Gostaramos tambm de agradecer as contribuies de muitos
da comunidade cientfica que proporcionaram idias para
aperfeioarmos essa edio. Em particular, temos um grande dbito
com o Comit Tcnico de Reviso (Technical Review Committee)
da Associao Americana de Segurana Biolgica (American
Biological Safety Association) por seus amveis comentrios e
sugestes.
ix
1
SEO I
Introduo
Laboratrios de microbiologia so, com freqncia, ambientes
singulares de trabalho que podem expor as pessoas prximas a
eles ou que neles trabalham a riscos de doenas infecciosas
identificveis. As infeces contradas em um laboratrio tm sido
descritas por meio da histria da microbiologia. Os relatrios de
microbiologia publicados na virada do sculo descreveram casos
de ti fo, cl era, mormo, brucel ose, e ttano associ ados a
laboratrios
1
. Em 1941, Meyer e Eddie
2
publicaram uma pesquisa
de 74 casos de brucelose associados a laboratrio, ocorrido nos
Estados Unidos, e concluram que a manipulao de culturas ou
espcies ou ainda a inalao da poeira contendo a bactria Brucella
emi nentemente peri gosa para os trabal hadores de um
laboratrio.Inmeros casos foram atribudos falta de cuidados
ou a uma tcnica de manuseio ruim de materiais infecciosos.
Em 1949, Sulkin e Pike
3
, publicaram a primeira de uma srie
de pesquisas sobre infeces associadas a laboratrios. Eles
constataram 222 infeces virais, sendo 21 delas fatais. Em pelo
menos um tero dos casos, a provvel fonte de infeco estava
associada ao manuseio de animais e tecidos infectados. Acidentes
conhecidos foram registrados em 27 (12%) dos casos relatados.
Em 1951, Sulkin e Pike
4
, publicaram a segunda de uma srie
de pesquisas baseada em um questionrio enviado a 5.000
laboratrios. Somente um tero dos 1.342 casos citados foram
rel atados na l i teratura. A Brucel ose era a i nfeco mai s
freqentemente encontrada nos relatrios em relao s infeces
contradas em um laboratrio e juntamente com a tuberculose, a
tularemia, o tifo, e a infeco estreptoccica contribuam para 72%
de todas as infeces bacterianas e 31% das infeces causadas
por outros agentes. O ndice total de mortalidade era de 3%.
Somente 16% de todas as infeces relatadas estavam associadas
a um acidente documentado. A maioria destes estavam relacionados
ao uso de pipetas, seringas e agulhas.
2
Essa pesquisa foi atualizada em 1965
5
, quando houve um
acrscimo de 641 novos casos ou de casos que no havia sido
relatados anteriormente. Em 1976
6
, houve uma nova atualizao
perfazendo um total acumulativo de 3.921 casos. A brucelose, o
tifo, a tularemia, a tuberculose, a hepatite e a encefalite eqina
venezuelana eram as infeces mais comumente relatadas. Menos
de 20% de todos os casos estavam associados a um acidente
conhecido. A exposio aos aerossis infecciosos era considerada
como sendo uma fonte plausvel, mas no confirmada de infeco
para mais de 80% dos casos onde as pessoas infectadas haviam
trabalhadas com o agente.
Em 1967
7
, Hanson e colaboradores relataram 428 casos
patentes de infeces de arbovrus associados a laboratrio. Em
alguns casos, a capacidade de um dado arbovrus de produzir uma
doena humana foi primeiramente confirmada como o resultado de
uma infeco no intencional da equipe laboratorial. No caso, os
aerossis infecciosos eram considerados a fonte mais comum de
infeco.
Em 1974, Skinholj
8
publicou os resultados de uma pesquisa
que mostrava que o corpo de funcionrios dos laboratrios clnicos
dinamarqueses apresentava uma relatada incidncia de hepatite
(2,3 casos ao ano por 1.000 funcionrios) sete vezes maior que a
populao em geral. De maneira semelhante, uma pesquisa de 1976
realizada por Harrington e Shannon
9
indicou que os trabalhadores
de laboratrios mdicos na Inglaterra apresentavam um risco cinco
vezes maior de adquirir uma tuberculose do que a populao em
geral.A Hepatite B e a shigelose tambm eram conhecidas por
serem um contnuo risco ocupacional. Junto com a tuberculose,
essas eram as trs causas mais comuns de infeces associadas
a laboratrio relatadas na Gr-Bretanha.
Embora esses relatrios sugerissem que os funcionrios de
laboratrios corriam um elevado risco de se contaminarem pelos
agentes que eles prprios manipulavam, os ndices atuais de
infeco no se encontram disponveis. Porm, os estudos de
Harington e Shannon e os de Skinhoj
10
indicam que as equipes
Introduo
3
laboratoriais apresentavam maiores ndices de tuberculose,
shigelose e de hepatite B do que a maioria da populao em geral.
Ao contrrio das ocorrncias documentadas de infeces
contradas por funcionrios de laboratrios, esses laboratrios que
trabalham com agentes infecciosos no representam uma ameaa
sociedade. Por exemplo, embora 109 casos de infeces
associadas a laboratrios tenham sido registrados nos Centros de
Preveno e Controle de Doena de 1947 a 1973
11
, nenhum caso
secundrio foi relatado nos membros da famlia ou em contatos
comunitrios. O Centro Nacional de Doena Animal relatou uma
experincia
12
semelhante, sem nenhum caso secundrio ocorrido
nos contatos laboratoriais e no laboratoriais em relao aos 18
casos de infeces associadas a laboratrio no perodo de 1960 a
1975. Atravs de um caso secundrio da Doena de Marburg
contrado pela esposa de um caso primrio, concluiu-se que a
infeco havia sido sexualmente transmitida dois meses aps o
marido ter recebido alta do hospital
13
. Trs casos secundrios de
varola foram relatados em dois surtos associados a laboratrio na
Inglaterra em 1973
14
e 1978
15
. Relatos anteriores de seis casos de
febre Q entre os funcionrios de uma lavanderia comercial que
lavava os uniformes e roupas de um laboratrio que manipulava o
agente
16
, um caso de uma pessoa que visitava o laboratrio
17
e
doi s casos de febre Q em contatos domi ci l i ares de um
rickettsiologista
18
tambm foram constatados. Existe o relato de um
caso de transmisso do vrus B de macaco de um tratador de animais
infectados para a sua esposa, aparentemente provocado pelo
contato do vrus com a pele lesionada do indivduo
19
. Esses casos
so representativos da natureza espordica e da pouca freqncia
das infeces na comunidade de trabalhadores de laboratrio que
lidam com agentes infecciosos.
Na reviso de 1979
20
, Pike chegou a concluso que o
conhecimento, as tcnicas e o equipamento para a preveno das
infeces laboratoriais j esto disponveis.Nos Estados Unidos,
porm, nenhum cdigo de prtica, padres, diretrizes ou outras
publicaes proporcionaram descries detalhadas das tcnicas,
equipamento e outras consideraes ou recomendaes para um
Introduo
4
maior esfera de ao das atividades laboratoriais conduzidas com
uma variedade de agentes infecciosos exticos e nativos. O folheto
Classificao dos Agentes Etiolgicos Baseando-se no Grau de
Risco
21
serviu como uma referncia geral para vrias atividades
laboratoriais que utilizam agentes infecciosos. Neste folheto, o
conceito sobre a classificao dos agentes infecciosos e das
atividades laboratoriais em quatro nveis ou classes, serviu como
um formato bsico para as edies anteriores do Biossegurana
em Laboratrios Biomdicos e Microbiolgicos (BLBM). Esta quarta
edio do BLBM continua a descrever especificamente as
combinaes de prticas microbiolgicas, instalaes laboratoriais,
equipamento de segurana e recomendaes sobre suas utilizaes
nas quatro categorias ou nos quatro nveis de biossegurana de
operao laboratorial com agentes infecciosos que afetam homens.
As descries dos Nveis de Biossegurana de 1-4 paralelas
quelas contidas nas Diretrizes do NIH para Pesquisa Envolvendo
o DNA Recombinante
22, 23
, esto de acordo com os critrios gerais
originalmente usados para a designao dos agentes infecciosos
para as Classes de 1-4 na Classificao dos Agentes Etiolgicos
Baseando-se no Grau de Risco
24
. Quatro nveis de biossegurana
tambm so determinados para as atividades de doenas
infecciosas utilizando pequenos animais de laboratrios. As
recomendaes para os nveis de biossegurana para agentes
especficos so feitas com base no risco potencial do agente, da
funo ou da atividade do laboratrio.
Desde o incio dos anos 80, os laboratrios aplicam esses
fundamentos em atividades associadas com manipulaes
envolvendo o vrus da imunodeficincia humana (HIV). Mesmo antes
do HIV ter sido identificado como o agente causador da Sndrome
da Imunodeficincia Adquirida (AIDS), os princpios que regulam a
manipulao de um patgeno presente no sangue j eram
considerados adequados para um trabalho laboratorial seguro.
Normas tambm foram publicadas para os trabalhadores da rea
de sade sob o ttulo de Precaues Universais
25
. De fato, as
Precaues Universais e esta publicao tornaram-se a base do
manuseio seguro de sangue e de fludos corporais, como descrito
Introduo
5
na recente publicao OSHA, intitulada Padro de Patgenos San-
guneos
26
.
No final dos anos 80 havia uma grande preocupao com o
lixo mdico-hospitalar, o que levou a publicao do Ato de
Rastreamento de Lixo Hospitalar de 1988
27
. Os princpios
estabelecidos nos volumes anteriores do BLBM para o manuseio
de dejetos potencialmente infecciosos como um risco ocupacional
foi reforado pela Pesquisa do Conselho Nacional intitulada
Biossegurana em Laboratrios: Prticas Prudentes para o
Manuseio e Remoo de Materiais Infecciosos
28
.
No momento em que esta publicao estava sendo editada,
h uma preocupao crescente em relao ao reaparecimento do
M. tuberculosis e a segurana dos trabalhadores de laboratrios e
equipamentos da rea de sade. Os princpios descritos no BLBM
que tentam assegurar as prticas, procedimentos e instalaes de
segurana na sade so aplicveis ao controle deste patgeno
areo incluindo sua cepas resistentes a inmeras drogas
(multidrogas resistentes)
29, 30
. As tecnologias com DNA recombinante
esto sendo aplicadas rotineiramente em laboratrios para modificar
a composio gentica de vrios microorganismos. Uma avaliao
completa de riscos deve ser conduzida quando nos referimos a
estas atividades e a seus resultados e desconhecidos.
A experincia tem demonstrado a importncia das precaues
tomadas com as prticas, procedimentos, e instalaes dos Nveis
de Biossegurana de 1-4 descritas para as manipulaes de agentes
etiolgicos em montagem de laboratrios e dependncias animais.
Embora no exista nenhum tipo de relatrio nacional que descreva
as infeces associadas a laboratrios, casos curiosos sugerem
que uma rgida adeso a essas normas contribui para um meio de
trabalho mais seguro e saudvel para a equipe do laboratrio, seus
colaboradores e a comunidade ao redor. Para reduzir ainda mais o
potencial de risco de infeces associadas a laboratrios, as normas
apresentadas aqui devem ser consideradas como uma orientao
mnima para conteno das mesmas. Estas devem ser adaptadas
para cada laboratrio em particular e podem ser utilizadas
juntamente com outras informaes cientficas disponveis.
Introduo
6
Referncias:
1. Weden, A.G. History of Microbiological Safety. 1975. 18
th
Biological
Safety Conference. Lexington, Kentucky.
2. Meyer, K.F., Eddie, B. 1941. Laboratory Infections due to Brucella.
J Infect Dis 68: 24-32
3. Sulkin, S.E., Pike, R.M. 1949. Viral Infections Contracted in the
Laboratory. New Engl J Med 241 (5): 205-213.
4. Sulkin, S.E., Pike, R.M. 1951. Survey of laboratory-acquired infec-
tions. Am J Public Health 41 (7):769-781.
5. Pike, R.M., Sulkin, S.E., Schulze, M.L. 1965. Continuing impor-
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analysis of 3,921 cases. Hlth Lab Sci 13: 105-114.
7. Hanson, R.P., Sulkin, S.E., Buescher, E.L., et al. 1967. Arbovirus
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MMWR 41, N RR 11.
Introduo
8
SEO II
Princpios de Biossegurana
O termo conteno usado para descrever os mtodos de
segurana utilizados na manipulao de materiais infecciosos em
um meio laboratorial onde esto sendo manejados ou mantidos. O
objetivo da conteno o de reduzir ou eliminar a exposio da
equipe de um laboratrio, de outras pessoas e do meio ambiente
em geral aos agentes potencialmente perigosos.
A conteno primria, a proteo da equipe do laboratrio e
do meio de trabalho contra a exposio aos agentes infecciosos,
proporcionada por uma boa tcnica de microbiologia e pelo uso de
um equipamento de segurana adequado. O uso de vacinas pode
fornecer um elevado nvel de proteo pessoal. J a conteno
secundria, a proteo do meio ambiente externo ao laboratrio
contra a exposio aos materiais infecciosos, proporcionada pela
combinao de um projeto das instalaes e das prticas
operacionais. Desta forma, os trs elementos de conteno incluem
a prtica e a tcnica laboratorial, o equipamento de segurana e o
projeto da instalao. A avaliao do risco do trabalho a ser
realizado com um agente especfico determinar a combinao
adequada destes trs elementos.
Prtica e Tcnica Laboratorial. O elemento de conteno
mais importante a adeso rgida s prticas e tcnicas
microbiolgicas padres. As pessoas que trabalham com agentes
infecciosos ou com materiais potencialmente contaminados devem
se conscientizar sobre os riscos potenciais, e devem ser treinadas
e estarem aptas a exercerem as tcnicas e prticas necessrias
para o manuseio seguro destes materiais. Cabe ao diretor ou a
pessoa responsvel pelo laboratrio, a responsabilidade tambm
pelo fornecimento ou pela elaborao de um treinamento adequado
para o corpo de funcionrios.
Cada laboratrio dever desenvolver ou adotar um manual
de biossegurana ou de operaes que identifique os riscos que
9
sero ou que podero ser encontrados e que especifique tambm
as prticas e procedimentos especficos para minimizar ou eliminar
as exposies a estes perigos. Os funcionrios devem receber
informaes sobre os riscos especiais e devem ler e seguir todas
as prticas e procedimentos solicitados. Um cientista treinado e
com grande conhecimento das tcnicas laboratoriais apropriadas,
dos procedimentos de segurana e dos perigos associados ao
manuseio de agentes infecciosos deve ser o responsvel pela
conduo do trabalho envolvendo quaisquer agentes ou materiais
infecciosos.
Quando as prticas laboratoriais padres no forem
suficientes para controlar os perigos associados a um agente ou a
um procedimento laboratorial em particular, medidas adicionais
podero ser necessri as. O di retor do l aboratri o ser o
responsvel pela seleo das prticas adicionais de segurana que
devem estar relacionadas aos riscos associados aos agentes ou
aos procedimentos.
A equipe, as prticas de segurana e as tcnicas laboratoriais
devero ser complementadas com um projeto apropriado das
instalaes e das caractersticas da arquitetura, do equipamento
de segurana e das prticas de gerenciamento.
Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias). O
equipamento de segurana inclui as cabines de segurana biolgica
(CSB), recipientes adequados e outros controles da engenharia
de segurana projetados para remover ou minimizar exposies
aos materiais biolgicos perigosos. A cabine de segurana biolgica
(CSB) o dispositivo principal utilizado para proporcionar a
conteno de borrifos ou aerossis infecciosos provocados por
inmeros procedimentos microbiolgicos. Trs tipos de cabines de
segurana biolgica (Classe I, II e III) usados em laboratrios de
microbiologia esto descritos e ilustrados no Apndice A. As cabines
de segurana biolgica Classe I e II, que possuem a frente aberta,
so barreiras primrias que oferecem nveis significativos de
proteo para a equipe do laboratrio e para o meio ambiente
quando utilizado com boas tcnicas microbiolgicas. A cabine de
10
segurana biolgica Classe II tambm fornece uma proteo con-
tra a contaminao externa de materiais (por exemplo, cultura de
clulas, estoque microbiolgico) que sero manipulados dentro das
cabines. A cabine de segurana biolgica Classe III hermtica e
impermevel aos gases proporciona o mais alto nvel de proteo
aos funcionrios e ao meio ambiente.
Um outro exemplo de barreira primria o copo de segurana
da centrfuga, um recipiente conectado centrfuga projetado para
evitar que aerossis sejam liberados durante uma centrifugao.
Para minimizarmos este perigo, controles de conteno como as
cabines de segurana biolgicas (CSB) ou os copos da centrfuga
devero ser utilizadas ao manipularmos agentes infecciosos que
possam ser transmitidos atravs da exposio aos aerossis.
O equipamento de segurana tambm pode incluir itens para
a proteo pessoal como luvas, aventais, gorros, proteo para
sapatos, botas, respiradores, escudo ou protetor facial, mscaras
faciais ou culos de proteo. O equipamento de proteo pessoal
freqentemente usado em combinao com as cabines de
segurana biolgica e outros dispositivos que faam a conteno
os agentes, animais ou materiais que esto sendo manipulados.
Em alguns casos nos quais torna-se impossvel trabalhar em capelas
de segurana biolgica, o equipamento de segurana pessoal deve
formar a barreira primria entre os trabalhadores e os materiais
infecciosos. Os exemplos incluem certos estudos animais, necropsia
animais, atividades de produo em grande escala do agente e
atividades relacionadas manuteno, servios ou suporte da
instalao do laboratrio.
Projeto e Construo das Instalaes (Barreiras
Secundrias). O planejamento e a construo das instalaes
contri buem para a proteo da equi pe do l aboratri o,
proporcionando uma barreira de proteo para as pessoas que se
encontram fora do laboratrio e para as pessoas ou animais da
comunidade contra agentes infecciosos que podem ser liberados
acidentalmente pelo laboratrio. A gerncia do laboratrio deve
ser a responsvel por instalaes que estejam de acordo com o
11
funcionamento do mesmo e com o nvel de biossegurana reco-
mendado para os agentes que forem ali manipulados.
As barreiras secundrias recomendadas dependero do risco
de transmisso dos agentes especficos. Por exemplo, o risco das
exposies para grande parte dos trabalhos laboratoriais em
dependncias de um Nvel De Biossegurana 1 e 2 ser o contato
direto com os agentes ou as exposies inadvertidas atravs de
um meio de trabalho contaminado. As barreiras secundrias nestes
laboratrios podem incluir o isolamento da rea de trabalho ao
acesso pblico, disponibilidade de uma dependncia para
descontaminao (por exemplo, uma autoclave) e dependncias
para lavagem das mos.
Quando o risco de contaminao atravs da exposio aos
aerossis infecciosos estiver presente, nveis mais elevados de
conteno primria e barreiras de proteo secundrias podero
ser necessrios para evitar que agentes infecciosos escapem para
o meio ambiente. Estas caractersticas do projeto incluem sistemas
de venti l ao especi al i zados em assegurar o fl uxo de ar
uni di reci onado, si stemas de tratamento de ar para a
descontaminao ou remoo do ar liberado, zonas de acesso
controlado, cmaras pressurizadas como entradas de laboratrio,
separados ou mdulos para isolamento do laboratrio. Os
engenhei ros responsvei s pel o proj eto devem l evar em
considerao as recomendaes especficas para ventilao como
as encontradas no Manual de Aplicaes para Calefao,
Ventilao e Refrigerao (Applications Handbook for Heating,
Ventilation and Air-Conditioning - HVAC) publicado pela Sociedade
Ameri cana de Engenhei ros de Cal efao, Refri gerao e
Condicionamento de Ar (American Society of Heating, Refrigerating
and Air-Conditioning Engineers ASHRAE)
1
.
Nveis de Biossegurana. Os quatro nvei s de
biossegurana (NB) esto descritos na Seo III, e consistem de
combinaes de prticas e tcnicas de laboratrio, equipamento
de segurana e instalaes do laboratrio. Cada combinao
especificamente adequada para as operaes realizadas, vias de
12
transmisses documentadas ou suspeitas de agentes infecciosos
e funcionamento ou atividade do laboratrio.
Os nvei s de bi ossegurana recomendados para os
organismos da Seo VII (Resumo dos Agentes) representam as
condies nas quais o agente pode ser manuseado com segurana.
O diretor do laboratrio especificamente e primariamente o
responsvel pela avaliao dos riscos e pela aplicao adequada
dos nveis de biossegurana recomendados. Geralmente, o trabalho
com agentes desconhecidos deve ser conduzido em um nvel de
biossegurana recomendado pela Seo VII. Quando temos uma
informao especfica disponvel que possa sugerir a virulncia, a
patogenicidade, os padres de resistncia a antibiticos, a vacina
e a di sponi bi l i dade de tratamento, ou outros fatores
significativamente alterados, prticas mais (ou menos) rgidas
podero ser adotadas.
Nvel de Biossegurana 1 - As prticas, o equipamento
de segurana e o projeto das instalaes so apropriados para
o treinamento educacional secundrio ou para o treinamento
de tcnicos, e de professores de tcnicas laboratoriais. Este
conjunto tambm utilizado em outros laboratrios onde o
trabal ho, com cepas defi ni das e caracteri zadas de
microorganismos viveis e conhecidos por no causarem
doenas em homens adultos e sadios, realizado. O Bacillus
subtilis, o Naegleria gruberi, o vrus da hepatite canina infecciosa
e organi smos l i vres sob as Di retri zes do NIH de DNA
Recombinantes so exemplos de microorganismos que
preenchem todos estes requisitos descritos acima. Muitos
agentes que geralmente no esto associados a processos
patolgicos em homens so, entretanto, patgenos oportunos
e que podem causar uma infeco em jovens, idosos e
indivduos imunosupressivos ou imunodeprimidos. As cepas de
vacina que tenham passado por mltiplas passagens in vivo no
devero ser consideradas no virulentas simplesmente por
serem cepas de vacinas.
O Nvel de Biossegurana 1 representa um nvel bsico
de conteno que se basei a nas prti cas padres de
13
microbiologia sem uma indicao de barreiras primrias ou se-
cundrias, com exceo de uma pia para a higienizao das
mos.
Nvel de Biossegurana 2 - As prti cas, os
equipamentos, a planta e a construo das instalaes so
aplicveis aos laboratrios clnicos, de diagnstico, laboratrios
escolas e outros laboratrios onde o trabalho realizado com
um maior espectro de agentes nativos de risco moderado
presentes na comunidade e que estejam associados a uma
patologia humana de gravidade varivel. Com boas tcnicas de
microbiologia, esses agentes podem ser usados de maneira
segura em atividades conduzidas sobre uma bancada aberta,
uma vez que o potencial para a produo de borrifos e aerossis
baixo. O vrus da hepatite B, o HIV, a salmonela e o Toxoplasma
spp. so exemplos de microorganismos designados para este
nvel de conteno. O Nvel de Biossegurana 2 adequado
para qualquer trabalho que envolva sangue humano, lquidos
corporais, tecidos ou linhas de clulas humanas primrias onde
a presena de um agente infeccioso pode ser desconhecido.
Os laboratoristas que trabalham com materiais humanos devem
consultar o livro Padro de Patgenos Transmitidos pelo Sangue
da OSHA (OSHA Bloodborne Pathogen Standard
2
) para as
precaues especficas necessrias.
Os perigos primrios em relao aos funcionrios que
trabalham com esses agentes esto relacionados com acidentes
percutneos de as exposies da membrana mucosa ou com a
ingesto de materiais infecciosos. Deve-se tomar um extremo
cuidado com agulhas contaminadas ou com instrumentos
cortantes. Embora os organismos rotineiramente manipulados
em um Nvel de Biossegurana 2 no sejam transmitidos atravs
de aerossis, os procedimentos envolvendo um alto potencial
para a produo de salpicos ou aerossis que possam aumentar
o risco de exposio destes funcionrios devem ser conduzidos
com um equipamento de conteno primria ou com dispositivos
como a CSB ou os copos de segurana da centrfuga. Outras
barreiras primrias, como os escudos para borrifos, proteo
14
facial, aventais e luvas devem ser utilizados de maneira ade-
quada.
As barreiras secundrias como pias para higienizao das
mos e instalaes para descontaminao de lixo devem existir
com o objetivo de reduzir a contaminao potencial do meio
ambiente.
Nvel de Biossegurana 3 - As prticas, o equipamento
de segurana, o planejamento e construo das dependncias
so aplicveis para laboratrios clnicos, de diagnsticos,
laboratrio escola, de pesquisa ou de produes. Nestes locais,
realiza-se o trabalho com agentes nativos ou exticos que
possuam um potencial de transmisso via respiratria e que
podem causar infeces srias e potencialmente fatais. O
Mycobacterium tuberculosis, o vrus da encefalite de St. Louis
e a Coxiella burnetii so exemplos de microorganismos
determinados para este nvel. Os riscos primrios causados aos
trabalhadores que lidam com estes agentes incluem a auto-
inoculao, a ingesto e a exposio aos aerossis infecciosos.
No Nvel de Biossegurana 3, enfatizamos mais as
barreiras primrias e secundrias para protegermos os
funcionrios de reas contguas, a comunidade e o meio
ambiente contra a exposio aos aerossis potencialmente
infecciosos. Por exemplo, todas as manipulaes laboratoriais
devero ser realizadas em uma CSB (Cabine de Segurana
Biolgica) ou em um outro equipamento de conteno como
uma cmara hermtica de gerao de aerossis. As barreiras
secundrias para esse nvel incluem o acesso controlado ao
laboratrio e sistemas de ventilao que minimizam a liberao
de aerossis infecciosos do laboratrio.
Nvel de Biossegurana 4 As prticas, o equipamento
de segurana, o planejamento e construo das dependncias
so aplicveis para trabalhos que envolvam agentes exticos
perigosos que representam um alto risco por provocarem
doenas fatais em indivduos. Estes agentes podem ser
15
transmitidos via aerossis e at o momento no h nenhuma
vacina ou terapia disponvel. Os agentes que possuem uma
relao antignica prxima ou idntica aos dos agentes do Nvel
de Biossegurana 4 tambm devero ser manuseados neste
nvel. Quando possumos dados suficientes, o trabalho com
esses agentes deve continuar neste nvel ou em um nvel inferior.
Os vrus como os de Marburg ou da febre hemorrgica Crimia
- Congo so manipulados no Nvel de Biossegurana 4.
Os riscos primrios aos trabalhadores que manuseiam
agentes do Nvel de Biossegurana 4 incluem a exposio
respiratria aos aerossis infecciosos, exposio da membrana
mucosa e/ou da pele lesionada as gotculas infecciosas e a auto-
inoculao. Todas as manipulaes de materiais de diagnstico
potencialmente infecciosos, substncias isoladas e animais
naturalmente ou experimentalmente infectados apresentam um
alto risco de exposio e infeco aos funcionrios de laboratrio,
comunidade e ao meio ambiente.
O completo isolamento dos trabalhadores de laboratrios
em relao aos materiais infecciosos aerossolizados realizado
primariamente em cabines de segurana biolgica Classe III ou
com um macaco individual suprido com presso de ar positivo.
A instalao do Nvel de Biossegurana 4 geralmente
construda em um prdi o separado ou em uma zona
completamente isolada com uma complexa e especializada
ventilao e sistemas de gerenciamento de lixo que evitem uma
liberao de agentes viveis no meio ambiente.
O diretor do laboratrio primariamente e especificamente
responsvel pel a operao segura do l aboratri o. O
conhecimento e julgamento dele/dela so crticos para a
avaliao dos riscos e para a aplicao adequada destas
recomendaes. O nvel de biossegurana recomendado
representa as condies sob as quais o agente pode ser
manipulado com segurana. As caractersticas especiais dos
agentes utilizados, o treinamento e experincia dos empregados
e a natureza da funo do laboratrio podero posteriormente
influenciar o diretor quanto aplicao destas recomendaes.
16
Dependncias para Animais. Os quatro nvei s de
biossegurana tambm so descritos para as atividades que
envolvem o trabalho de doenas infecciosas com animais
experimentais. Estas quatro combinaes de prticas, equipamento
de segurana e de instalaes so denominadas de Nveis de
Biossegurana Animal 1, 2, 3, e 4 e proporcionam nveis crescentes
de proteo aos funcionrios e ao meio ambiente.
Laboratrios Clnicos. Os l aboratri os cl ni cos,
especialmente aqueles situados em clnicas e hospitais recebem
amostras cl ni cas requi si tando uma grande vari edade de
diagnsticos e servios de apoio clnico. Geralmente, a natureza
infecciosa do material clnico desconhecida e as amostras so
freqentemente submetidas a uma ampla solicitao de exame
microbiolgico em relao aos mltiplos agentes (por exemplo, o
escarro pode ser submetido a uma cultura de rotina, cido
resistente e cultura fngica. responsabilidade do diretor do
laboratrio estabelecer procedimentos padres no laboratrio que,
de fato, direcionem a questo do perigo da infeco imposto pelas
amostras clnicas.
Com exceo de circunstncias extraordinrias (por exemplo,
suspeita de uma febre hemorrgica), o processamento inicial de
uma amostra clnica e a identificao sorolgica de substncias
isoladas poder ser realizado de forma segura em um Nvel de
Biossegurana 2 - o nvel recomendado para o trabalho com
patgeno do sangue como o vrus da hepatite B e o HIV. Os
elementos de conteno descritos no Nvel de Biossegurana 2
devero estar de acordo com o padro da OSHA, Exposio
Ocupacional aos Patgenos Transmitidos atravs do Sangue
3, 4
publicado pela Administrao de Sade e Segurana Ocupacional.
Isto requer o uso de precaues especficas para todas as amostras
clnicas de sangue ou outros materiais potencialmente infecciosos
(Precaues ou Padres Uni versai s)
5
. Al m di sto, outras
recomendaes especficas para laboratrios clnicos podem ser
obtidas atravs do Comit Nacional de Padres para Laboratrios
Clnicos (National Committee for Clinical Laboratory Standard)
6
.
17
As recomendaes para o nvel de Biossegurana 2 e os
requerimentos do OSHA enfocam a preveno exposio por
contato com a pele e mucosas materiaias clnicos. Barreiras
primrias, como as cabines de segurana biolgica ( Classe I e II),
devem ser usadas quando procedimentos que causam gotejamento,
pulverizao e salpicos de gotas. As cabines de segurana biolgica
tambm devem ser usadas quando do incio da manipulao de
espcimes clnicos, cuja natureza do teste requerer, ou em presena
de um agente que reconhecidamente transmite infeces por
aerossis (por ex.; M. tuberculosis) ou quando o uso de uma cabine
de segurana biolgica (Classe II) indicado para proteger a
integridade do espcime.
A segregao das funes de um laboratrio clnico e o
acesso limitado ou restrito a estas reas de responsabilidade do
diretor da instituio. responsabilidade tambm do diretor
estabelecer um padro e procedimentos por escrito que direcionem
os riscos potenciais e os cuidados ou precaues necessrias a
serem implantadas.
Importao e Expedio Interestadual de Certos
Materiais Biomdicos. A importao de vetores e agentes
etiolgicos de patologias humanas est sujeita aos regulamentos
da Public Health Service Foreign Quarentine. Os regulamentos do
Servio de Sade Pblica e do Departamento de Transportes
especificam os requisitos necessrios para a embalagem, rotulagem
e embarque de agentes etiolgicos e amostras para diagnsticos
expedidos para o comrcio interestadual (veja Apndice).
O Departamento de Agricultura dos E.U. A regulamenta a
importao e expedio interestadual de patgenos animais e
probe a importao, posse ou uso de certos agentes patolgicos
de animais exticos que possam ser uma ameaa para aves e
criaes em geral por provocarem srias doenas (veja o Apndice
D).
18
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19
SEO III
Nveis de Biossegurana Laboratorial
Os principais requisitos exigidos para os quatro nveis de
biossegurana em atividades que envolvam microorganismos
infecciosos e animais de laboratrio esto resumidos na Tabela 1
desta Seo e da Seo IV. Os nveis so designados em ordem
crescente, pelo grau de proteo proporcionado ao pessoal do
laboratrio, meio ambiente e comunidade.
Nvel de Biossegurana (NB-1)
O Nvel de Biossegurana 1 adequado ao trabalho que
envolva agentes bem caracterizados e conhecidos por no
provocarem doena em seres humanos e que possuam mnimo
risco ao pessoal do laboratrio e ao meio ambiente. O laboratrio
no est separado das demais dependncias do edifcio. O trabalho
conduzido, em geral, em bancada, com adoo das boas prticas
laboratoriais (BPL). Equipamentos especficos de proteo ou
caractersticas especiais de construo no so geralmente usados
ou exigidos. O pessoal do laboratrio dever ter treinamento
especfico nos procedimentos realizados no laboratrio e devero
ser supervisionados por um cientista com treinamento em
microbiologia geral ou cincia correlata.
Os seguintes padres e prticas especiais, equipamento de
segurana e as instalaes devero ser aplicados aos agentes
designados ao Nvel de Biossegurana 1:
A. Prticas Padres em Microbiologia
1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado ou restrito de
acordo com a definio do diretor do laboratrio quando
estiverem sendo realizados experimentos ou trabalhos com
culturas e amostras.
2. As pessoas devero lavar as mos aps o manuseio de
materiais viveis, aps a remoo das luvas e antes de
sarem do laboratrio.
20
3. No permitido comer, beber, fumar, manusear lentes de
contato, aplicar cosmticos ou armazenar alimentos para
consumo nas reas de trabalho. As pessoas que usam
lentes de contato em laboratrios devero usar tambm
culos de proteo ou protetores faciais. Os alimentos
devero ser guardados fora das reas de trabalho em
armrios ou geladeiras especficos para este fim.
4. proibida a pipetagem com a boca; devem ser utilizados
dispositivos mecnicos.
5. Devem ser institudas normas para o manuseio de agulhas.
6. Todos os procedi mentos devem ser real i zados
cuidadosamente a fim de minimizar a criao de borrifos ou
aerossis.
7. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas,
pelo menos, uma vez ao dia e sempre depois de qualquer
derramamento de material vivel.
8. Todas as culturas, colnias e outros resduos devero ser
descontaminados antes de serem descartados atravs de
um mtodo de descontaminao aprovado como, por
exemplo, esterilizao por calor mido (autoclave). Os
materiais que forem ser descontaminados fora do laboratrio
devero ser colocados em recipientes inquebrveis, prova
de vazamentos e hermeticamente fechados para serem
transportados ao local desejado. Os materiais que forem
enviados para descontaminaco fora da instituio devero
tambm ser embalados de acordo com os regulamentos
locais, estaduais e federais, antes de serem removidos das
dependncias do laboratrio.
9. O smbolo de Risco Biolgico dever ser colocado na
entrada do laboratrio em qualquer momento em que o
Nveis de Biossegurana Laboratorial NB1
21
agente infeccioso estiver presente no local. Este sinal de
alerta dever indicar o(s) agente(s) manipulado(s) e o nome
e nmero do telefone do pesquisador.
10. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle
de insetos e roedores. (ver Apndice G).
B. Prticas Especiais Nenhuma
C. Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias)
1. Os equipamentos especiais de conteno, tais como as
cabines de segurana biolgica, no so geralmente
exigidas para manipulaes de agentes de classe de risco
1.
2. recomendado o uso de jalecos, aventais ou uniformes
prprios, para evitarem a contaminao ou sujeira de suas
roupas normais.
3. Recomenda-se o uso de luvas para os casos de rachaduras
ou ferimentos na pele das mos. Algumas alternativas como
o uso de luvas de ltex com talco devero ser avaliadas.
4. culos protetores devero ser usados na execuo de
procedimentos que produzam borrifos de microorganismos
ou de materiais perigosos.
D. Instalaes Laboratoriais (Barreiras Secundrias)
1. Os laboratrios devero possuir portas para controle do
acesso.
2. Cada laboratrio dever conter uma pia para lavagem das
mos.
3. O laboratrio deve ser projetado de modo a permitir fcil
limpeza. Carpetes e tapetes no so apropriados para
laboratrios.
22
4. recomendvel que a superfcie das bancadas seja im-
permevel gua e resistente ao calor moderado e aos
solventes orgnicos, cidos, lcalis e qumicos usados para
a descontaminao da superfcie de trabalho e do
equipamento.
5. Os mveis do laboratrio devero ser capazes de suportar
cargas e usos previstos. Os espaos entre as bancadas,
cabines e equipamento devero ser suficientes de modo a
permitir fcil acesso para limpeza.
6. Se o laboratrio possuir janelas que se abram para o
exterior, estas devero conter telas de proteo contra
insetos.
Nveis de Biossegurana 2 (NB-2)
O nvel de Biossegurana 2 semelhante ao Nvel de
Biossegurana 1 e adequado ao trabalho que envolva agentes
de risco moderado para as pessoais e para o meio ambiente. Difere
do NB-1 nos seguintes aspectos: (1) O pessoal de laboratrio
dever ter um treinamento especfico no manejo de agentes
patogni cos e devem ser supervi si onados por ci enti stas
competentes; (2) O acesso ao laboratrio deve ser limitado durante
os procedimentos operacionais; (3) precaues extremas sero
tomadas em relao a objetos cortantes infectados; e (4)
Determinados procedimentos nos quais exista possibilidade de
formao de aerossis e borrifos infecciosos devem ser conduzidos
em cabines de segurana biolgica ou outros equipamentos de
conteno fsica.
Os seguintes padres e prticas especiais, equipamentos de
segurana e instalaes so aplicveis aos agentes designados
para o Nvel de Biossegurana 2:
A. Prticas Padres de Microbiologia
estiver sendo realizado experimento.
23
2. As pessoas devem lavar as mos aps a manipulao de
materiais viveis, aps a remoo das luvas e antes de
sarem do laboratrio.
3. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato
e aplicar cosmticos nas reas de trabalho. Os alimentos
devero ser guardados fora das reas de trabalho em
armrios ou geladeiras especficas para este fim.
4. proibida a pipetagem com a boca; devem ser utilizados
cuidadosamente a fim de minimizar a criao de borrifos ou
aerossis.
7. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas com
desinfetantes que sejam eficazes contra os agentes
manipulados, ao final do trabalho ou no final do dia e aps
qualquer vazamento ou borrifada de material vivel.
8. Todas as culturas, colnias e outros resduos devero ser
descontaminados antes de serem descartados atravs de
um mtodo de descontaminao aprovado como, por
exemplo, esterilizao por calor mido (autoclave). Os
materiais que forem ser descontaminados fora do prprio
l aboratri o devero ser col ocados em reci pi entes
inquebrveis, prova de vazamentos e hermeticamente
fechados para serem transportados ao local desejado.
contra insetos e roedores (veja Apndice G).
B. Prticas Especiais
acordo com a definio do diretor, quando o trabalho com
24
agentes infecciosos estiver sendo realizado. Em geral, pes-
soas susceptveis s infeces, ou pessoas que quando
infectadas possam apresentar srias complicaes, no
sero permitidas no laboratrio ou nas salas dos animais.
Por exemplo, pessoas que estejam imunocomprometidas
ou imunodeprimidas podero estar correndo um srio risco
de se contaminarem. Cabe ao diretor a deciso final quanto
avaliao de cada circunstncia e a determinao de quem
deve entrar ou trabalhar no laboratrio ou na sala de
animais.
2. O diretor do laboratrio dever estabelecer normas e
procedimentos com ampla informao a todos que
trabalharem no laboratrio sobre o potencial de risco
associado ao trabalho, bem como sobre os requisitos
especficos (por exemplo, imunizao) para entrada em
laboratrio.
3. O smbolo de Risco Biolgico dever ser colocado na
entrada do laboratrio onde agentes etiolgicos estiverem
sendo utilizados. Este sinal de alerta dever conter
i nformaes como o(s) nome(s) o(s) agente(s)
manipulado(s), o nvel de biossegurana, as imunizaes
necessrias, o nome e nmero do telefone do pesquisador,
o tipo de equipamento de proteo individual que dever
ser usado no laboratrio e os procedimentos necessrios
para sair do laboratrio.
4. O pessoal do laboratrio deve estar apropriadamente
imunizado ou examinado quanto aos agentes manipulados
ou potencialmente presentes no laboratrio (por exemplo,
vacina contra a hepatite B ou teste cutneo para a
tuberculose).
5. Quando apropri ado, dependendo do(s) agente(s)
manipulado(s), para referncia futura, devem ser mantidas
amostras sorolgicas da equipe do laboratrio e de outras
pessoas possivelmente expostos aos riscos. Amostras
25
sorolgicas adicionais devem ser colhidas periodicamente,
dependendo dos agentes manipulados ou da funo das
instalaes laboratoriais.
6. Os procedi mentos de bi ossegurana devem ser
incorporados aos procedimentos operacionais padres ou
a um manual de biossegurana especfico do laboratrio,
adotado ou preparado pelo diretor do laboratrio. Todo
pessoal deve ser orientado sobre os riscos e devem ler e
seguir as instrues sobre as prticas e procedimentos
requeridos.
7. O diretor do laboratrio dever assegurar que o laboratrio
e a equipe de apoio receba um treinamento apropriado
sobre os ri scos potenci ai s associ ados ao trabal ho
desenvolvido, as precaues necessrias para preveno
de exposio e os procedimentos para avaliao das
exposies. A equipe de funcionrios dever receber cursos
de atualizao anuais ou treinamento adicional quando
necessrio e tambm no caso de mudanas de normas ou
de procedimentos.
8. Deve-se sempre tomar uma enorme precauo em relao
a qualquer objeto cortante, incluindo seringas e agulhas,
lminas, pipetas, tubos capilares e bisturis.
a. Agulhas e seringas hipodrmicas ou outros instrumentos
cortantes devem ficar restritos ao laboratrio e usados
somente quando no houver outra alternativa para
inoculao parenteral, flebotomia ou aspirao de fludos
de animais de laboratrio e de garrafas com diafragma.
Recipientes plsticos devem ser substitudos por
recipientes de vidro sempre que possvel.
b. Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa
ou agulha e seringa em uma unidade nica descartvel
usada para injeo ou aspirao de materiais infecciosos.
26
As agulhas descartveis usadas no devero ser do-
bradas, quebradas, reutilizadas, removidas das serin-
gas ou manipuladas antes de serem desprezadas. Ao
contrrio, elas devero ser cuidadosamente colocadas
em recipiente resistente a perfuraes localizado con-
venientemente, utilizado para recolhimento de objetos
cortantes desprezados. Obj etos cortantes no
descartveis devem ser colocados em um recipiente cuja
parede seja bem resistente para o transporte at a rea
para descontaminao, de preferncia atravs de uma
autoclave.
c. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha,
ou sistemas sem agulha e outros dispositivos de
segurana devero ser utilizados quando necessrios.
d. Vi dros quebrados no devem ser mani pul ados
diretamente com a mo, devem ser removidos atravs
de meios mecnicos como uma vassoura e uma p de
lixo, pinas ou frceps. Os recipientes que contm
agulhas, equipamentos cortantes e vidros quebrados
contaminados devero passar por um processo de
descontaminao antes de serem desprezados, de
acordo com os regulamentos locais, estaduais ou
federais.
9. Culturas, tecidos e amostras de fludos corpreos ou dejetos
potencialmente infecciosos devem ser colocados em um
recipiente com uma tampa que evite o vazamento durante
a coleta, o manuseio, o processamento, o armazenamento,
o transporte ou o embarque.
10. O equipamento laboratorial e as superfcies de trabalho
devero ser descontaminadas rotineiramente com um
desinfetante eficaz aps a concluso do trabalho com
materiais infecciosos e especialmente aps borrifos e
derramamentos ou depois que outras contaminaes por
materiais infecciosos tenham ocorrido. O equipamento
27
contaminado dever ser descontaminado de acordo com
as normas locais, estaduais ou federais antes de ser
enviado para conserto, manuteno ou acondicionamento
para transporte de acordo com as normas locais, estaduais
ou federais aplicveis, antes de ser removido do local.
11. Respingos e acidentes resultantes de uma exposio de
materi ai s i nfecci osos aos organi smos devero ser
imediatamente notificados ao diretor do laboratrio. A
avaliao mdica, a vigilncia e o tratamento devero ser
providenciados e registros do acidente e das providncias
adotadas devero ser mantidos por escrito.
12. proibida a admisso de animais que no estiverem
relacionados ao trabalho em execuo no laboratrio.
C. Equipamento de Segurana (Barreira Primria)
1. Devem ser usadas cabines de segurana biolgica
mantidas de maneira adequada, de preferncia de Classe
II, ou outro equipamento de proteo individual adequado
ou dispositivos de conteno fsica sempre que:
a. Sejam realizados procedimentos com elevado potencial
de criao de aerossis ou borrifos infecciosos como
centrifugao, triturao, homogeneizao, agitao
vigorosa, misturas, ruptura por sonificao, abertura de
recipientes contendo materiais infecciosos onde a
presso i nterna possa ser di ferente da presso
ambiental, inoculao intranasal em animais e em cultura
de teci dos i nfectados de ani mai s ou de ovos
embrionados.
b. Altas concentraes ou grandes volumes de agentes
infecciosos forem utilizados. Tais materiais s podero
ser centrifugados fora das cabines de segurana se
forem utilizadas centrfugas de segurana e frascos
28
lacrados. Estes s devero ser abertos no interior de
uma cabine de segurana biolgica.
2. Proteo para o rosto (mscaras de proteo, protetor facial,
culos de proteo ou outra proteo para respingos) deve
ser usada para prevenir respingos ou sprays proveniente
de materiais infecciosos ou de outros materiais perigosos,
quando for necessria a manipulao de microrganismos
fora das cabines de segurana biolgica.
3. No interior do laboratrio, os freqentadores devero utilizar
roupas apropriadas como jalecos, gorros ou uniformes de
proteo. Antes de sair do laboratrio para as reas externas
(cantina, biblioteca, escritrio administrativo), a roupa
protetora dever ser retirada e deixada no laboratrio, ou
encaminhada para a lavanderia da instituio. A equipe do
laboratrio nunca deve lev-la para a casa.
4. Devem ser usadas luvas, quando houver um contato direto
com materiais e superfcies potencialmente infecciosas ou
equipamentos contaminados. O mais adequado usar dois
pares de luvas. Essas luvas devem ser desprezadas quando
esti verem contami nadas, o trabal ho com materi ai s
infecciosos for concludo ou quando a integridade da luva
estiver comprometida. Luvas descartveis no podero ser
lavadas, reutilizadas ou usadas para tocar superfcies
limpas (teclado, telefones, etc.), e no devem ser usadas
fora do laboratrio. Alternativas como luvas de ltex com
talco devero estar disponveis. As mos devero ser
lavadas aps a remoo das luvas.
D. Instalaes Laboratoriais (Barreiras Secundrias)
1. exi gi do um si stema de portas com trancas em
dependncias que abrigarem agentes restritos (como
definido em 42 CFR 72.6).
2. Considere a construo de novos laboratrios longe de rea
pblicas.
29
3. Cada laboratrio dever conter uma pia para a lavagem
das mos. Recomendamos a construo de pias que
funcionem automaticamente ou que sejam acionadas com
o p ou com o joelho.
4. O laboratrio dever ser projetado de modo a permitir fcil
limpeza e descontaminao. Carpetes e tapetes no so
apropriados para laboratrio.
5. As bancadas devero ser impermeveis gua e resistentes
ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis
e solventes qumicos utilizados na descontaminao das
superfcies de trabalho e do equipamento.
6. Os mveis do laboratrio devem suportar cargas e usos
previstos com espaamento suficiente entre as bancadas,
cabines e equipamentos para permitir acesso fcil para
limpeza. As cadeiras e outros mveis utilizados no trabalho
laboratorial devem ser cobertos com um material que no
seja tecido e que possa ser facilmente descontaminado.
7. Cabines de segurana biolgica devem ser instaladas, de
forma que a variao da entrada e sada de ar da sala, no
provoque alterao nos padres de conteno de seu
funcionamento. As cabines de segurana biolgica devem
estar localizadas longe de portas, janelas que possam ser
abertas, reas laboratoriais muito cheias e que possuam
outros equipamentos potencialmente dilaceradores, de
forma que sejam mantidos os parmetros de fluxo de ar
nestas cabines de segurana biolgica.
8. Um lava olhos deve estar disponvel.
9. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades,
evitando reflexos e luzes fortes e ofuscantes que possam
impedir a viso.
10. No existem exigncias em relao ventilao. Porm, o
planejamento de novas instalaes deve considerar
30
sistemas mecnicos de ventilao que proporcione um flu-
xo interno de ar sem que haja uma recirculao para os
espaos fora do laboratrio. Caso o laboratrio possua
janelas que se abram para o exterior, essas devero possuir
telas para insetos.
Nvel de Biossegurana 3 (NB-3)
O Nvel de Biossegurana 3 aplicvel para laboratrios
clnicos, de diagnstico, ensino e pesquisa ou de produo onde o
trabalho com agentes exticos possa causar doenas srias ou
potencialmente fatais como resultado de exposio por inalao. A
equipe laboratorial deve possuir treinamento especfico no manejo
de agentes patognicos e potencialmente letais devendo ser
supervisionados por competentes cientistas que possuam vasta
experincia com estes agentes.
Todos os procedimentos que envolverem a manipulao de
materiais infecciosos devem ser conduzidos dentro de cabines de
segurana biolgica ou outro dispositivo de conteno fsica. Os
manipuladores devem usar roupas e equipamento de proteo
individual.
Sabe-se, porm, que algumas instalaes existentes podem
no possuir todas as caractersticas recomendadas para um Nvel
de Biossegurana 3 (por exemplo, uma rea de acesso com duas
portas, selamento das entradas de ar). Nestas circunstncias, um
nvel aceitvel de segurana para conduo dos procedimentos
de roti na (por exempl o, procedi mentos para di agnsti cos
envolvendo a reproduo de um agente para identificao, tipagem,
teste de susceptibilidade, etc.) poder ser conseguido atravs de
instalaes do Nvel de Biossegurana 2 garantindo-se que: (1) o
ar liberado do laboratrio seja jogado para fora da sala, (2) a
ventilao do laboratrio seja equilibrada para proporcionar um fluxo
de ar direcionado para dentro da sala, (3) o acesso ao laboratrio
seja restrito quando o trabalho estiver sendo realizado e (4) as
Prticas Padres de Microbiologia, as Prticas Especiais e o
Equipamento de Segurana para o Nvel de Biossegurana 3 sejam
31
rigorosamente seguidas. A deciso de implementar essas modifi-
caes das recomendaes do Nvel de Biossegurana 3 deve ser
tomada somente pelo diretor do laboratrio.
O seguinte padro e prticas de segurana especiais,
equipamentos e instalaes se aplicam aos agentes enumerados
no Nvel de Biossegurana 3:
1. O acesso ao laboratrio deve ser limitado ou restrito de
experimentos estiverem sendo realizados.
2. As pessoas devem lavar as mos aps a manipulao de
materiais infecciosos, aps a remoo das luvas e antes
de sarem do laboratrio.
e aplicar cosmticos dentro da rea de trabalho. As pessoas
que usarem lentes de contato em laboratrios devero
tambm usar culos de proteo ou protetores faciais. Os
alimentos devem ser armazenados fora do ambiente de
trabalho em armrios ou geladeiras utilizadas somente para
este fim.
4. proibido a pipetagem com a boca, devem ser utilizados
cuidadosamente a fim de minimizar a criao de aerossis.
7. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas
pel o menos uma vez ao di a e depoi s de qual quer
derramamento de material vivel.
8. Todas as culturas, colnias e outros resduos relacionados
devem ser descontaminados antes de serem descartados,
32
atravs de um mtodo de descontaminao aprovado, como
por exemplo, a autoclavao. Os materiais que forem ser
descontaminados fora da rea prxima ao laboratrio
devero ser colocados dentro de um recipiente rgidos,
prova de vazamento e hermeticamente fechado para ser
transportado do laboratrio. O lixo infeccioso de laboratrios
de Nveis de Biossegurana 3 dever ser descontaminado
antes de ser removido para locais fora do laboratrio.
de insetos e roedores (veja o Apndice G).
1. As portas do laboratrio devem permanecer fechadas
quando experimentos estiverem sendo realizados.
2. O diretor do laboratrio dever controlar e limitar o acesso
ao laboratrio. Somente as pessoas necessrias para que
o programa seja executado ou o pessoal de apoio devem
ser admitidos no local. As pessoas que apresentarem risco
aumentado de contaminao ou que possam ter srias
conseqncias caso sejam contaminadas, no sero
permitidas dentro do laboratrio ou na sala de animais. Por
exemplo, pessoas imunocomprometidas ou imunodeprimidas
podem estar mais susceptveis a uma contaminao. O
diretor dever ser o responsvel final pela avaliao de
cada caso e na determinao de quem dever ou no entrar
ou trabalhar dentro do laboratrio. No permitida a
entrada de menores no laboratrio.
3. O diretor do laboratrio dever estabelecer normas e
procedimentos pelos quais s sero admitidas no laboratrio
ou nas salas dos animais pessoas que j tiverem recebido
informaes sobre o potencial de risco, que atendam todos
os requisitos para a entrada no mesmo (por exemplo,
imunizao) e que obedeam a todas as regras para entrada
e sada no laboratrio.
33
4. Quando materiais infecciosos ou animais infectados esti-
verem presentes no laboratrio ou no mdulo de conten-
o, deve ser colocado em todas as portas de acesso do
laboratrio e das salas de animais um sinal de alerta con-
tendo o smbolo universal de risco biolgico e a identifica-
o do agente, do nome do Pesquisador principal ou de
outro responsvel e endereo completo. O sinal de alerta
tambm dever indicar qualquer requisito especial neces-
srio para a entrada no laboratrio, tais como a necessida-
de de imunizao, respiradores ou outras medidas de
proteo individual.
5. O pessoal do laboratrio deve ser apropriadamente
imunizado ou examinado quanto aos agentes manipulados
ou potencialmente presentes no laboratrio (por exemplo,
vacina para hepatite B ou teste cutneo para tuberculose)
e exames peridicos so recomendados.
6. Amostras sorolgicas de toda a equipe e das pessoas
expostas ao risco devero ser coletadas e armazenadas
adequadamente para futura refernci a. Amostras
sorolgicas adicionais podero ser periodicamente
coletadas, dependendo dos agentes manipulados ou do
funcionamento do laboratrio.
7. Um manual de biossegurana especfico para o laboratrio
dever ser preparado e adotado pelo diretor do laboratrio
e os procedi mentos de bi ossegurana devem ser
incorporadas aos procedimentos operacionais padro. Todo
pessoal deve ser orientado sobre os riscos especiais devem
ler e seguir as instrues sobre as prticas e procedimentos
requeridos.
8. A equipe do laboratrio e a equipe de apoio devero receber
trei namento adequado sobre os ri scos potenci ai s
associ ados ao trabal ho desenvol vi do, os cui dados
necessrios para evitar uma exposio perigosa ao agente
infeccioso e sobre os procedimentos de avaliao da
34
exposio. A equipe do laboratrio dever freqentar cur-
sos de atualizao anuais ou treinamento adicional quan-
do necessrio e tambm em caso de mudanas de normas
e procedimentos.
9. Caber ao diretor do laboratrio assegurar que antes que
o trabalho com os organismos designados para o Nvel de
Biossegurana 3 se inicie, toda a equipe do laboratrio
demonstre estar apto para as prticas e tcnicas padres
de microbiologia e demonstrar habilidade tambm nas
prticas e operaes especficas do laboratrio. Podendo
estar includo uma experincia anterior em manipulao de
patgenos humanos ou culturas de clulas, ou um
treinamento especfico proporcionado pelo diretor do
laboratrio ou por outros peritos na rea de manejo de
prticas e tcnicas microbiolgicas seguras.
10. Deve-se tomar uma extrema precauo, quando objetos
cortantes, incluindo seringas e agulhas, lminas, pipetas,
tubos capilares e bisturis forem manipulados.
cortantes devem ficar restritos ao laboratrio e usados
somente quando no houver outra alternativa para
inoculao parenteral, flebotomia ou aspirao de fludos
de animais de laboratrio e de garrafas com diafragma.
Recipientes plsticos devem ser substitudos por
b. Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa
ou agulha e seringa em uma unidade descartvel (por
exemplo, quando a agulha parte integrante da seringa)
usada para injeo ou aspirao de materiais infecciosos.
As agulhas descartveis usadas no devero ser
dobradas, quebradas, reutilizadas, removidas das
seringas ou manipuladas antes de serem desprezadas.
Ao contrri o, el as devero ser cui dadosamente
colocadas em um recipiente resistente a perfuraes
35
localizado convenientemente, utilizado para recolhimento
de objetos cortantes desprezados. Objetos cortantes no
descartveis devero ser colocados em um recipiente
cuja parede dever ser bem resistente para o transporte
at uma rea para descontaminao, de preferncia
atravs de uma autoclave.
c. Seringas que possuem um envoltrio para a agulha, ou
sistemas sem agulhas e outros dispositivos de segurana
devero ser utilizados quando necessrios.
federais.
11. Todas as manipulaes abertas que envolvam materiais
infecciosos devero ser conduzidas no interior de cabines
de segurana biolgica ou de outros dispositivos de
conteno fsica dentro de um mdulo de conteno.
Nenhum trabalho onde tenhamos que abrir a pele para
alcanarmos os vasos dever ser conduzido em bancadas
abertas. A limpeza dever ser facilitada atravs do uso de
toalhas absorventes com uma face de plstico voltada para
baixo, recobrindo as superfcies de trabalho no perfuradas
das cabines de segurana biolgica.
12. O equipamento laboratorial e as superfcies de trabalho
devero ser descontaminadas rotineiramente com um
desinfetante eficaz aps a concluso do trabalho com
materi ai s i nfecci osos, especi al mente no caso de
derramamento, vazamentos ou outras contaminaes por
materiais infecciosos.
36
a. Vazamentos de materiais infecciosos devero ser
descontaminados, contidos e limpos pela equipe de
profissionais especializados ou por outras pessoas
adequadamente treinadas e equipadas para trabalharem
com material infeccioso concentrado. Os procedimentos
para vazamento devero ser desenvol vi dos e
notificados.
b. O equipamento contaminado dever ser descontaminado
antes de ser removido do laboratrio para conserto,
manuteno ou para ser embalado para transporte de
acordo com os regulamentos locais, estaduais e federais
aplicveis.
13. As culturas, tecidos, amostras de fludos corpreos ou
resduos devero ser colocados em um recipiente que evite
um vazamento durante a coleta, manuseio, processamento,
armazenamento, transporte ou embarque.
14. Todos os dejetos contendo materiais contaminados (por
exemplo, luvas, jalecos de laboratrios, etc.) em laboratrio
devero ser descontaminados antes de serem desprezados
ou reutilizados.
15. Vazamentos e acidentes que resultem em exposies
abertas dos materiais infecciosos aos organismos devero
ser imediatamente relatados ao diretor do laboratrio.
Avaliao mdica adequada, vigilncia e tratamento
devero ser proporcionados e registros por escrito devero
ser mantidos.
16. Animais e plantas que no estiverem relacionados ao
trabalho em desenvolvimento no devero ser admitidos
dentro do laboratrio.
1. Roupas de proteo como jalecos com uma frente inteira,
macaco ou uniforme de limpeza devero ser usados pela
37
equipe quando estiver dentro do laboratrio. A roupa de
proteo no dever ser usada fora do laboratrio. Antes
de ser lavada esta roupa dever ser descontaminada e
dever ser trocada depois de contaminada.
2. Todos devero usar luvas quando estiverem manuseando
materiais infecciosos, animais infectados e equipamentos
contaminados.
3. Recomenda-se a mudana freqente das l uvas
acompanhada de lavagem das mos. As luvas descartveis
no devero ser reutilizadas.
4. Todas as manipulaes de materiais infecciosos, necropsias
de animais infectados, coleta de tecidos ou lquidos de
animais infectados ou de ovos embrionados, etc., devero
ser conduzidas em uma cabine de segurana biolgica de
Classe II ou de Classe III (veja Apndice A).
5. Quando um procedimento ou processo no puder ser
conduzido dentro de uma cabine de segurana biolgica
devem ser uti l i zadas combi naes apropri adas de
equipamentos de proteo individual (por exemplo,
respiradores, protetores faciais) com dispositivos de
conteno fsica (por exemplo, centrfugas de segurana e
frascos selados).
6. A proteo facial e o respirador devero ser usados quando
a equipe estiver dentro de salas contendo animais
infectados.
D. Instalaes do Laboratrio (Barreiras Secundrias)
1. O laboratrio dever estar separado das reas de trnsito
irrestrito do prdio com acesso restrito. exigido um sistema
de dupla porta com sistema de intertravamento automtico
como requisito bsico para entrada no laboratrio a partir
de corredores de acesso ou outras reas contguas. As
38
portas devero conter fechaduras (Veja Apndice F). Uma
sala para a troca de roupas dever ser includa no
laboratrio.
2. Cada sala do laboratrio dever possuir uma pia para
l avagem das mos. A pi a dever ser aci onada
automaticamente sem o uso das mos e estar localizada
perto da porta de sada.
3. As superfcies das paredes internas, pisos e tetos das reas,
onde os agentes de NB-3 so manipulados, devero ser
construdas e mantidas de forma que facilitem a limpeza e
a descontaminao. Toda a superfcie deve ser selada e
sem reentrncias. As paredes, tetos e pisos devero ser
lisas, impermeveis e resistentes a substncias qumicas e
desinfetantes normalmente usados em laboratrios. Os
pisos devero ser monolticos e anti - derrapante. O uso de
revestimento de piso dever ser levada em considerao.
Orifcios ou aberturas nas superfcies de pisos, paredes e
teto devero ser selados. Dutos e espaos entre portas e
esquadrias devem permitir o selamento para facilitar a
descontaminao.
4. As bancadas devero ser impermeveis e resistentes ao
calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis
e solventes qumicos utilizados para descontaminao de
superfcies e equipamentos.
5. Os mveis do laboratrio devero suportar cargas e usos
previstos com espaamento suficiente entre as bancadas,
cabines e equipamentos para permitir acesso fcil para a
limpeza. As cadeiras e outros mveis utilizados em um
laboratrio devero ser cobertos por uma material que no
seja tecido e possa ser facilmente descontaminado.
6. Todas as janelas do laboratrio devero ser fechadas e
lacradas.
7. Um mtodo para descontaminao de todos os dejetos do
laboratrio dever estar disponvel para a equipe e utilizado
39
de preferncia dentro do laboratrio (por exemplo,
autoclave, desinfeco qumica, incinerao, ou outros
mtodos aprovados de descontaminao). Deve-se
considerar os meios de descontaminao de equipamentos.
Caso o lixo seja transportado para fora do laboratrio, ele
dever ser adequadamente lacrado e no dever ser
transportado em corredores pblicos.
8. Devero existir cabines de segurana biolgica em todos
os laboratrios. Estas cabines devero estar localizadas
distantes de portas, de venezianas, do almoxarifado e de
reas do laboratrio que possuam um grande movimento.
9. O laboratrio dever ter um sistema de ar independente,
com ventilao unidirecional onde o fluxo de ar penetra no
laboratrio atravs da rea de entrada. O sistema de ar
dever tirar o ar contaminado para fora do laboratrio e
jogar o ar de reas limpas para dentro do mesmo. O ar de
exausto no dever recircular em outras reas do prdio.
A filtrao e outros tratamentos do ar liberado no so
necessrios, mas podero ser utilizados dependendo das
condies do local, dos agentes especficos manipulados
e das condies de uso. O ar liberado dever ser jogado
fora de reas ocupadas e de entradas de ar, ou dever ser
filtrado atravs de filtro HEPA (High Efficiency Particulated
Ai r). A equi pe do l aboratri o dever veri fi car
constantemente se o fluxo de ar (para dentro do laboratrio)
est funcionado de forma adequada. Recomenda-se que
um monitor visual seja instalado para indicar e confirmar a
entrada direcionada do ar para dentro do laboratrio.
Devemos considerar a instalao de um sistema de controle
HVAC para evitar uma pressurizao positiva contnua do
laboratrio. Alarmes audveis tambm so recomendados
para notificar a equipe de uma possvel falha no sistema
HVAC.
10. O ar exaurido de uma cabine de segurana biolgica Classe
II, filtrado pelo HEPA poder recircular no interior do
laboratrio se a cabine for testada e certificada anualmente.
40
O ar exaurido das cabines de segurana biolgica deve
ser retirado diretamente para fora do ambiente de trabalho
atravs do sistema de exausto do edifcio. As cabines
devero estar conectadas de maneira que evitem qualquer
interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do sistema
de exausto do edifcio (por exemplo, uma abertura de ar
entre o exaustor das cabines e o duto do exaustor). Quando
as cabines de segurana biolgica Classe III forem utilizados,
estas devero estar conectadas diretamente ao sistema de
exaustores. Se as cabines de Classe III estiverem
conectadas ao sistema de insuflao do ar, isto dever ser
feito de tal maneira que previna uma pressurizao positiva
das cabines (veja Apndice A).
11. Centrfugas de fluxo contnuo ou outros equipamentos que
possam produzir aerossis devero ser refreadas atravs
de dispositivos que liberem o ar atravs de filtros HEPA
antes de serem descarregados no do laboratrio. Esses
sistemas HEPA devero ser testados anualmente. Uma outra
alternativa seria jogar o ar de sada das cabines para fora,
em locais distantes de reas ocupadas ou das entradas de
ar.
12. As linhas de vcuo devero ser protegidas por sifes
contendo desinfetantes lquidos e filtros HEPA, ou o
equivalente. Os filtros devero ser substitudos quando
necessrio. Uma alternativa usar uma bomba a vcuo
porttil (tambm adequadamente protegida com sifes e
filtros).
13. Um lava olhos deve estar disponvel no laboratrio.
evitando reflexos e brilhos que possam ofuscar a viso.
15. O projeto da instalao e os procedimentos operacionais
do Nvel de Biossegurana 3 devem ser documentados. Os
parmetros operacionais e das instalaes devero ser
41
verificados quanto ao funcionamento ideal antes que o es-
tabelecimento inicie suas atividades. As instalaes deve-
ro ser verificadas pelo menos uma vez ao ano.
16. Protees adicionais ao meio ambiente (por exemplo,
chuveiros para a equipe, filtros HEPA para filtrao do ar
exaurido, conteno de outras linhas de servios e a
descontaminao dos efluentes) dever ser considerada
em conformidade com as recomendaes para manipulao
dos agentes, com as normas de avaliao de risco,
condies do local ou outras normas locais, estaduais ou
federais aplicveis.
Nvel de Biossegurana 4 (NB-4)
O Nvel de Biossegurana 4 indicado para o trabalho
que envolve agentes exticos e perigosos que exponham o indivduo
a um alto risco de contaminao de infeces que podem ser fatais,
alm de apresentarem um potencial relevado de transmisso por
aerossis. Os agentes com uma relao antignica prxima ou
idntica aos dos agentes includos no Nvel de Biossegurana 4
devero ser manipulados neste nvel at que se consigam dados
suficientes para confirmao do trabalho neste nvel ou para o
trabalho em um nvel inferior. A equipe do laboratrio dever ter
um treinamento especfico e completo direcionado para a
manipulao de agentes infecciosos extremamente perigosos e
dever ser capaz de entender as funes da conteno primria e
secundria, das prticas padres especficas, do equipamento de
conteno e das caractersticas do planejamento do laboratrio.
Os trabalhadores devero ser supervisionados por cientistas
competentes, treinados e com vasta experincia no manuseio destes
agentes. O acesso ao laboratrio dever ser rigorosamente
controlado pelo diretor. A instalao dever ser em um edifcio
separado ou em uma rea controlada dentro do edifcio, que seja
totalmente isolada de todas as outras. Um manual de operaes
especfico para as instalaes dever ser preparado ou adotado.
Dentro do ambiente de trabalho, todas as atividades devero
permanecer restritas s cabines de segurana biolgica Classe III
42
ou de Classe II usadas com roupas de proteo com presso posi-
tiva, ventiladas por sistema de suporte de vida. O laboratrio do
Nvel de Biossegurana 4 dever possuir caractersticas especfi-
cas quanto ao projeto e a engenharia para preveno da dissemi-
nao de microorganismos dentro do meio ambiente.
As seguintes prticas de segurana padres e especiais e
as instalaes se aplicam aos agentes pertencentes ao Nvel de
Biossegurana 4:
1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado pelo diretor,
quando experimentos estiverem sendo realizados.
2. A norma para uma manipulao segura de objetos
perfurocortantes devero ser institudas.
3. Todos os procedimentos devero ser cuidadosamente
realizados para minimizar a produo de aerossis.
4. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas
pelo menos uma vez ao dia e depois de qualquer vazamento
de material vivel.
5. Todo o lixo dever ser descontaminado antes de ser
desprezado atravs de um mtodo de descontaminao
aprovado tal qual a autoclavao.
6. Deve-se providenciar um programa rotineiro de controle de
insetos e roedores (ver Apndice G).
B. ` Prticas Especiais
1. Somente as pessoas envolvidas na programao e no
suporte ao programa a ser desenvolvido e cujas presenas
forem solicitadas no local ou nas salas do laboratrio
devero ter permisso para entrada no local. As pessoas
43
que estiverem imunocomprometidas ou imunodeprimidas
estaro correndo um alto risco de adquirirem infeces.
Portanto, estas pessoas que forem susceptveis ou as
pessoas em que uma eventual contaminao possa
provocar srios danos, como no caso de crianas ou
gestantes, no recebero permisso para entrarem no
laboratrio ou nas salas de animais.
O supervi sor do l abora tri o dever ter a
responsabilidade final no controle do acesso. Por questo
de segurana, o acesso ao l aboratri o dever ser
bloqueado por portas hermeticamente fechadas. A entrada
dever ser controlada pelo diretor do laboratrio, por outra
pessoa responsvel pelo controle dos riscos biolgicos ou
por outra pessoa responsvel pela segurana fsica da
instalao. Antes de entrar no laboratrio, as pessoas
devero ser avisadas sobre o risco potencial e devero ser
instrudas sobre as medidas apropriadas de segurana. As
pessoas autorizadas devero cumprir com rigor as
instrues dadas e todos os outros procedimentos aplicveis
para a entrada e sada do laboratrio. Dever haver um
registro, por escrito, de entrada e sada de pessoal, com
data, horrio e assinaturas.
2. Quando materiais infecciosos ou animais infectados
estiverem presentes no laboratrio, deve ser colocado em
todas as portas de acesso do laboratrio e das salas de
animais um sinal de alerta contendo o smbolo universal de
risco biolgico. O sinal de alerta dever identificar o agente,
relacionar o nome do diretor do laboratrio ou outra pessoa
responsvel e tambm indicar qualquer requisito especial
necessri o para a entrada na rea (por exempl o,
necessidade de imunizao, respiradores ou outras
medidas de proteo individual).
3. O diretor do laboratrio dever ser o responsvel por
assegurar que, antes de iniciar o trabalho com organismos
pertencentes ao Nvel de Biossegurana 4, toda a equipe
44
demonstre uma alta competncia em relao s prticas e
tcnicas microbiolgicas e em prticas e operaes
especiais especficas do laboratrio. Isto poder incluir uma
experincia anterior no manuseio de patgenos humanos
ou culturas de clulas, ou um treinamento especfico
fornecido pelo diretor do laboratrio ou por outro perito com
experincia nestas tcnicas e prticas microbiolgicas
singulares.
4. A equipe do laboratrio dever receber imunizaes para
os agentes manipulados ou potencialmente presentes no
laboratrio.
5. Amostras sorolgicas de toda a equipe do laboratrio e de
outras pessoas expostas a um elevado risco devero ser
coletadas e armazenadas. Amostras sorolgicas adicionais
devero ser periodicamente coletadas, dependendo dos
agentes manipulados ou do funcionamento do laboratrio.
Ao estabelecer um programa de vigilncia sorolgica deve-
se considerar a disponibilidade dos mtodos para a
avaliao do anticorpo do(s) agente(s) em questo. O
programa para o teste das amostras sorolgicas dever
ter um intervalo a cada coleta e o responsvel pelo projeto
dever comunicar os resultados aos participantes.
6. Um manual sobre biossegurana dever ser preparado ou
adotado. A equipe dever ser avisada quanto aos perigos
e riscos especiais e devero ler e seguir as instrues sobre
as prticas e procedimentos.
7. A equipe do laboratrio e a equipe de apoio devero receber
treinamento adequado sobre os perigos e riscos associados
ao trabalho, as precaues necessrias para a preveno
de exposies e os procedimentos de avaliao da
exposio. A equipe tambm dever participar de cursos
de atualizao anual ou treinamento adicional quando
necessrio em caso de mudanas nos procedimentos.
8. A entrada e sada de pessoal do laboratrio devem ocorrer
somente aps uso do chuveiro e troca de roupas. Os
45
funcionrios devero usar o chuveiro de descontaminao
a cada sada do laboratrio. A entrada e sada de pessoal
por antecmara pressurizada somente devero ocorrer em
situaes de emergncia.
9. Para adentrar ao laboratrio, a roupa comum, dever ser
trocada (nos vestirios externos) por roupa protetora
completa e descartvel. Todas as roupas usadas no
laboratrio, incluindo roupas de baixo, calas e camisas ou
macaces, sapatos e luvas devero ser fornecidas e
utilizadas por todas as pessoas que entrarem no laboratrio.
Ao deixar o local e antes de se dirigirem para as reas de
banho, as pessoas devero retirar a roupa usada no
laboratrio no vestirio interno. As roupas sujas devero
passar pela autoclave antes de serem lavadas.
10. Estoques e materiais necessrios para o laboratrio
devero ser descontaminadas em autoclave de dupla porta,
cmara de fumi gao ou si stema de antecmara
pressurizada antes de serem utilizados. Aps garantir a
segurana das portas externas, a equipe dentro do
laboratrio dever retirar os materiais abrindo as portas
interiores da autoclave, da cmara de compresso ou da
cmara de fumigao. Estas portas devero ser trancadas
depois da retirada dos materiais.
11. Deve-se sempre tomar extrema precauo com qualquer
objeto perfurocortante contaminado, como seringas e
agulhas, lminas, pipetas, tubos capilares e bisturi.
cortantes so restritos ao laboratrio e usados somente
quando no houver outra alternativa para inoculao
parenteral, flebotomia ou aspirao de fludos de animais
de laboratrio e de garrafas com diafragma. Recipientes
plsticos devem ser substitudos por recipientes de vidro
sempre que possvel
b. Devem ser usadas somente seringas com agulhas fixas
ou agulha e seringa em uma unidade nica e descartvel
46
(por exemplo, quando a agulha parte integrante da
seringa) usada para injeo ou aspirao de materiais
infecciosos. As agulhas descartveis usadas no
devero ser dobradas, quebradas, reuti l i zadas,
removidas das seringas ou manipuladas antes de serem
desprezadas. Ao contrri o, el as devero ser
cuidadosamente acondicionadas em um recipiente
resistente a perfuraes localizado convenientemente,
utilizado para recolhimento de objetos cortantes
desprezados. Objetos cortantes no descartveis
devero ser acondicionados em um recipiente cuja
parede dever ser bem resistente para o transporte at
uma rea para descontaminao, de preferncia atravs
de uma autoclave.
c. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha,
ou sistemas sem agulha e outros dispositivos de
federais.
12. O material biolgico vivel ou intacto, a ser removido de
cabi nes Cl asse III ou do l aboratri o de Nvel de
Biossegurana, dever ser acondicionado em recipiente de
conteno primria lacrado e inquebrvel. Este, por sua
vez, dever ser acondicionado em um segundo recipiente
tambm selado e inquebrvel que dever passar por um
tanque de imerso contendo desinfetante, uma cmara de
fumigao ou por uma cmara de compresso planejada
com este propsito.
47
13. Nenhum material, com exceo do material biolgico que
dever permanecer intacto ou vivel poder ser removido
de um laboratrio de Nvel de Biossegurana 4, sem antes
ter sido autoclavado ou descontaminado. Equipamentos ou
materiais que no resistam a temperaturas elevadas ou ao
vapor devero ser descontaminados utilizando-se gases ou
vapor em uma cmara de compresso ou em uma cmara
especfica para este fim.
14. O equipamento do laboratrio dever ser descontaminado
rotineiramente aps o trabalho com materiais infecciosos e
especialmente depois de vazamentos, gotejamentos ou
outras contami naes por materi al i nfecci oso. O
equipamento dever ser descontaminado antes de ser
enviado para conserto ou manuteno.
15. Vazamentos de materiais infecciosos devero ser refreados
e limpos por profissionais especializados ou outros
propriamente treinados e equipados para o trabalho com
material infeccioso concentrado. Um procedimento para
vazamento dever ser desenvolvido e adotado pelo
laboratrio.
16. Um sistema de notificao de acidentes e exposies
laboratoriais, absentesmo de empregados e doenas
associadas ao laboratrio dever ser organizado, bem como
um sistema de vigilncia mdica. Relatos por escrito
devero ser preparados e mantidos. Deve-se ainda, prever
uma unidade de quarentena, isolamento e cuidados mdicos
para o pessoal contaminado por doenas conhecidas ou
potencialmente associado a laboratrio.
17. Todos os materiais no relacionados ao experimento que
estiver sendo realizado no momento (por exemplo, plantas,
ani mai s e roupas) no devero ser permi ti dos no
laboratrio.
48
Todos os procedimentos dentro do laboratrio devero ser
conduzidos em cabines de segurana biolgica Classe III ou cabines
de Classe II usadas em associao com roupas de proteo pessoal
com presso positiva e ventiladas por sistema de suporte de vida.
D. Instalao do Laboratrio (Barreiras Secundrias)
Exi stem doi s model os de l aboratri o de Nvel de
Biossegurana 4: (A) o Laboratrio Cabine onde todas as
manipulaes do agente so realizadas em uma cabine de
segurana biolgica Classe III, e o (B) que o Laboratrio
Escafandro onde a equipe usa uma roupa de proteo. Os
laboratrios de Nvel de Biossegurana 4 podem se basear em um
dos modelos ou em uma combinao dos dois modelos na
construo de um s laboratrio. Se a combinao for utilizada,
cada tipo dever atender todos os requisitos identificados para o
mesmo.
(A) Laboratrio Cabine (veja Apndice A)
1. O laboratrio de Biossegurana 4 dever estar separado
do prdio ou em uma rea claramente demarcada e isolada
dentro de um prdio. As salas do laboratrio devero ser
planejadas para assegurar a passagem atravs de no
mnimo duas portas antes de entrarmos nas salas contendo
as cabines de segurana biolgica Classe III (sala das
cabines). Devem estar previstas cmaras de entradas e
sadas de pessoal, para troca de roupas, separadas por
chuveiro. Deve ser previsto, ainda, um sistema de autoclave
de duas portas, um tanque de i merso contendo
desinfetante, uma cmara de fumigao ou uma ante-sala
ventilada para descontaminao na barreira de conteno
para o fluxo de materiais, estoques ou equipamentos que
no passam no interior dos pelos vestirios para chegarem
at a sala.
49
2. Inspees dirias de todos os parmetros de conteno
(por exemplo, fluxo de ar direcionado) e sistemas de suporte
de vida devero estar concludos antes que o trabalho se
inicie dentro do laboratrio para asseguramos que este
esteja funcionando de acordo com os parmetros de
operao.
3. As paredes, os pisos e tetos da sala contendo as cabines e
do vestirio interno devero ser construdas de maneira
que formem uma concha interna selada que facilitar a
fumigao e que evitar a entrada e sada de animais e
insetos. Os pisos devero ser totalmente selados e
revestidos. As superfcies internas desta concha devero
ser resistentes a lquidos e produtos qumicas para facilitar
a limpeza e a descontaminao da rea. Aberturas ao redor
das portas das salas de cabine e dentro dos vestirios
internos devero ser minimizadas e facilmente seladas para
facilitar a descontaminao. O sistema de drenagem do piso
da sala da cabine dever estar conectado diretamente ao
sistema de descontaminao do dejeto lquido. O sistema
de esgoto e outra linha de servio devero conter filtros
HEPA e protees contra animais nocivos, parasitas, etc.
4. As bancadas devero possuir superfcies seladas e sem
reentrncias que devero ser impermeveis gua e
resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos,
ci dos, l cal i s e sol ventes qumi cos uti l i zados na
descontaminao das superfcies de trabalho e dos
equipamentos.
5. Os mveis do laboratrio devero ter uma construo
simples e devero suportar cargas e usos previstos. O
espaamento entre as bancadas, as cabines e armrios e
o equipamento dever ser suficiente para facilitar a limpeza
e a descontaminao. As cadeiras e outros mveis usados
em um laboratrio devero ser cobertos por um material
que no sej a teci do e que possa ser faci l mente
descontaminado.
50
6. Pias com acionamento automtico ou que sejam acionadas
sem uso das mos, devero ser construdas prximas
porta da sala da cabine e perto dos vestirios internos e
externos.
7. Se existir um sistema central de vcuo, este no dever
servir as reas fora da sala das cabines. Filtros HEPA em
srie devero ser colocados da forma mais prtica possvel
em cada ponto onde ser utilizado ou prximo da vlvula
de servio. Os filtros devero ser instalados de forma a
permitir a descontaminao e a substituio local dos
mesmos. Outras linhas utilitrias, como a de gs e lquidos,
que convergem para a sala das cabines devero ser
protegidas por dispositivos que evitem o retorno do fluxo.
8. Se houver bebedouros de gua, eles devero ser acionados
automaticamente ou atravs dos ps e devero estar
localizados nos corredores do local, fora do laboratrio. O
servio de abastecimento da gua dos bebedouros dever
ser isolado do sistema de distribuio e abastecimento de
gua das reas laboratoriais e dever ser equipado com
um dispositivo que previna o retorno do fluxo.
9. As portas de acesso ao laboratrio devero possuir trancas
e fechamento automtico.
10. Todas as janelas devero ser inquebrveis e seladas.
11. Todos os laboratrios devero possuir autoclaves de duas
portas para a descontaminao de materiais que passem
pelas cabines de segurana biolgica Classe III em pelas
salas com cabines. As portas das autoclaves que se abrem
para fora da barreira de conteno devero ser seladas s
paredes da barreira de conteno. Estas portas devero
ser controladas automaticamente de forma que a porta
externa da autoclave somente possa ser aberta depois que
o ciclo de esterilizao da autoclave tenha sido concludo.
12. Todos os laboratrios devero possuir tanques de imerso
contendo desinfetantes, cmaras de fumigao ou mtodos
51
equivalentes de descontaminao de forma que os materi-
ais e equipamentos que no possam ser descontaminados
em uma autoclave possam ser removidos de maneira se-
gura das cabines de segurana biolgica Classe III e das
salas com as cabines.
13. Efluentes lquidos vindos da parte suja dos vestirios internos
(incluindo os vasos sanitrios), das pias das salas das
cabines, do sistema de esgoto (se utilizado), das cmaras
da autoclave e de outras fontes dentro da sala das cabines
devero ser descontaminados atravs de um mtodo de
descontaminao comprovado, de preferncia atravs de
um tratamento por calor antes de serem jogados no esgoto
sanitrio. Os efluentes vindo de chuveiros e vasos sanitrios
limpos devero ser jogados no esgoto sem antes passar
por um tratamento. O processo usado para a
descontaminao de dejetos lquidos dever ser validado
fisicamente e biologicamente.
14. Todos os laboratrios devero possuir um sistema de
ventilao sem uma re-circulao. Os componentes de
abastecimento e de liberao do sistema devero estar
equilibrados para assegurar um fluxo de ar direcionado da
rea de menos risco para rea(s) de maior risco potencial.
O sistema de ar no laboratrio dever prever uma presso
diferencial e fluxo unidirecionado de modo a assegurar
diferencial de presso que no permita a sada do agente
de risco. O fluxo de ar direcionado/presso diferencial
dever ser monitorado e dever conter um alarme que
acuse qualquer irregularidade no sistema. Um dispositivo
visual que monitorize a presso de maneira apropriada, que
indique e confirme o diferencial da presso da sala das
cabines dever ser providenciado e dever ser colocado
na entrada do vestirio. O fluxo de ar de entrada e sada
tambm dever ser monitorado, e um sistema de controle
HEPA dever existir para evitar uma contnua pressurizao
positiva do laboratrio. A cabine de Classe III dever ser
diretamente conectada ao sistema de exaustores. Se a
cabine de Classe III estiver conectada ao sistema de
52
abastecimento, isto dever ser feito de forma que previna
uma pressurizao positiva da cabine.
15. O ar que entra e sai da sala das cabines, do vestirio interno
e da ante-sala dever passar pelo(s) filtro(s) HEPA. O ar
dever ser liberado longe dos espaos ocupados e das
entradas de ar. O(s) filtro(s) dever(o) estar localizado(s)
de maneira mais prxima possvel da fonte a fim de minimizar
a quantidade de canos potencialmente contaminados.
Todos os filtros HEPA devero ser testados e certificados
anualmente. O alojamento dos filtros HEPA dever ser
projetado de maneira que permita uma descontaminao
in situ do filtro antes deste ser removido, ou antes, da
remoo do filtro em um recipiente selado e de conteno
de gs para subseqente descontaminao e/ou destruio
atravs da incinerao. O projeto do abrigo do filtro HEPA
dever facilitar a validao da instalao do filtro. O uso de
filtros HEPA pr-certificado pode ser vantajoso. A vida mdia
de filtros HEPA de exausto pode ser prolongada atravs
de uma pr-filtrao adequada do ar insuflado.
16. O projeto e procedimentos operacionais de um local de Nvel
de Biossegurana 4 devero ser documentados. O local
dever ser testado em funo do projeto e dos parmetros
operacionais para ser verificado se realmente atendem a
todos os critrios antes que comecem a funcionar. Os locais
devero ser checados novamente pelo menos uma vez ao
ano e os procedimentos neles existentes devero ser
modificados de acordo com a experincia operacional.
17. Sistemas de comunicaes apropriados devero ser
instalados entre o laboratrio e o exterior (por exemplo, fax,
computador, interfone).
(B) Laboratrio Escafandro
1. A instalao de Nvel de Biossegurana 4 consiste de um
edifcio separado ou de uma rea claramente demarcada e
53
isolada dentro do edifcio. As salas devero ser construdas
de forma que assegurem a passagem atravs dos vestirios
e da rea de descontaminao antes da entrada na(s)
sala(s) onde o trabalho com os agentes do NB-4 (rea do
escafandro). Vestirios interno e externo, separados por
um chuveiro devero ser construdos para a entrada e sada
da equipe que trabalha no laboratrio escafandro. Uma rea
para o uso do escafandro, projetada especialmente para o
local, tambm ser construda para proporcionar uma
proteo pessoal equivalente quela proporcionada pelas
cabines de segurana biolgica Classe III. As pessoas que
entrarem nesta rea devero vestir uma roupa de pea
nica de presso positiva e que seja ventilada por um
sistema de suporte de vida protegido pelo sistema de filtros
HEPA. O sistema de suporte de vida inclui compressores
de respirao de ar, alarmes e tanques de ar de reforo de
emergncia. A entrada nesta rea dever ser feita atravs
de uma cmara de compresso adaptada com portas
hermticas. Um chuveiro qumico para descontaminao da
superfcie da roupa antes que o trabalhador saia da rea
dever ser instalado. Um gerador de luz, automaticamente
acionado em casos de emergncia, ser instalado para
evitar que os sistemas de suporte de vida, os alarmes, a
iluminao, os controles de entrada e sada e as cabines
de segurana parem de funcionar. A presso do ar dentro
da roupa dever ser positiva em relao rea ao redor
do laboratrio. J a presso do ar dentro da rea da roupa
dever ser menor que aquela das reas adjacentes. A
iluminao e os sistemas de comunicao de emergncia
devero ser instalados. Todas as aberturas e fendas dentro
da concha interna da sala da roupa de proteo, do
chuveiro qumico e das fechaduras devero ser seladas.
2. Uma inspeo diria de todos os parmetros de conteno
(por exemplo, o fluxo de ar direcionado, chuveiros qumicos)
e dos sistemas de suporte de vida devero estar concludos
antes que o trabalho no laboratrio se inicie para garantir
que o laboratrio esteja operando de acordo com os
parmetros operacionais.
54
3. Uma autoclave com duas portas dever ser instalada na
barreira de conteno para descontaminao dos dejetos
a serem removidos da rea do laboratrio escafandro. A
porta da autoclave, que se abre para a rea externa da
sala escafandro, dever ser automaticamente controlada
de forma que a porta exterior s possa ser aberta depois
que o ciclo de esterilizao esteja concludo. Um tanque
de imerso, uma cmara de fumigao, ou cmara de
compresso dever ser colocado no local para permitir a
passagem de materiais, suprimentos ou equipamentos que
sero trazidos para o interior do laboratrio escafandro,
atravs dos vestirios. Estes dispositivos podem tambm
ser utilizados para a remoo de materiais, suprimentos ou
equipamentos que no possam ser descontaminados em
uma autoclave.
4. As paredes, pisos e tetos do laboratrio escafandro devero
ser construdos de maneira que formem uma concha interna
selada, que facilite a fumigao e que evite a entrada de
animais e insetos (veja Apndice G). As superfcies internas
desta concha devero ser resistentes a lquidos e solues
qumicas, facilitando a limpeza e a descontaminao da rea.
Todas as aberturas e fendas nestas estruturas e superfcies
devero ser seladas. Qualquer sistema de drenagem do
piso dever conter sifes cheios de desinfetante qumico
de eficcia comprovada contra o agente alvo e devero
estar conectados di retamente ao si stema de
descontaminao de dejetos lquidos. O esgoto e outras
linhas de servio devero conter filtros HEPA.
5. Acessrios internos como dutos de ventilao, sistemas de
suprimento de luz e gua devero ser instalados de maneira
que minimizem a rea da superfcie horizontal.
6. As bancadas devero possuir superfcies seladas e sem
emendas que devero ser impermeveis e resistentes ao
calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis
e solventes qumicos utilizados na descontaminao das
superfcies de trabalho e nos equipamentos.
55
7. Os mveis do laboratrio devero ter uma construo sim-
ples e devero suportar cargas e usos previstos. Reco-
menda-se o uso de materiais no porosos. Os espaos entre
os bancadas, as cabines e armrios e o equipamento de-
vero ser sufi ci entes para faci l i tar a l i mpeza e a
descontaminao. As cadeiras e outros mveis do
laboratrio devero ser cobertos por um material que no
seja tecido e que possa ser facilmente descontaminado.
8. Pias com funcionamento automtico ou que sejam acionadas
sem o uso das mos, devero ser construdas prximas
rea em conjunto com a roupa de proteo. A construo
de pias para a lavagem das mos nos vestirios internos e
externos dever ser considerado bsico para a avaliao
de risco.
9. Se existir um sistema central de vcuo, este no servir as
reas fora do laboratrio conjunto com a roupa de proteo.
Os filtros HEPA enfileirados devero ser colocados da forma
mais prtica possvel em cada ponto onde ser utilizado ou
prximo da vlvula de servio. Os filtros devero ser
instalados para que permitam a descontaminao e a
substituio local dos mesmos. Outros servios de gs e
lquidos para estas reas conjuntas devero ser protegidas
atravs de dispositivos que evitem o retorno do fluxo.
10. As portas de acesso ao laboratrio devero possuir trancas
e fechamento automtico. As portas internas e externas ao
chuveiro qumico e as internas e externas s entradas de
ar devero ser trancadas para evitar que ambas as portas
sejam abertas simultaneamente.
11. Todas as janelas devero ser resistentes e devero ser
seladas.
12. Efluentes lquidos provenientes das pias, dos canos de
esgoto do piso (se utilizado), das cmaras da autoclave e
56
de outras fontes dentro da barreira de conteno devero
ser descontami nados atravs de um mtodo de
descontaminao comprovado, de preferncia atravs de
um tratamento com calor antes de serem jogados no
esgoto sanitrio. Os efluentes vindo de chuveiros e vasos
sanitrios limpos devero ser jogados no esgoto sem antes
passar por um tratamento. O processo usado para a
descontaminao de dejetos lquidos dever ser validado
fisicamente e biologicamente.
13. Todos os laboratrios devero possuir um sistema de
venti l ao sem re-ci rcul ao. Os componentes de
insuflao e exausto de ar do sistema devero estar
equilibrados para assegurar um fluxo de ar direcionado da
rea de menos risco para rea(s) de maior perigo.
Recomendamos o uso de ventiladores para o abastecimento
e para a liberao de ar. O fluxo de ar direcionado/presso
diferencial entre as reas adjacentes dever ser monitorado
e dever conter um al arme para i ndi car qual quer
irregularidade no sistema. Um dispositivo visual que
monitore a presso de maneira apropriada, que indique e
confirme o diferencial da presso da sala das cabines dever
ser providenciado e dever ser colocado na entrada do
vestirio. O fluxo de ar nos componentes de abastecimento
e escape tambm dever ser monitorado, e um sistema de
controle HVAC dever ser instalado para evitar uma
pressurizao positiva do laboratrio.
14. O ar que abastece a rea conjunta, o chuveiro qumico e a
cmara de compresso devero passar atravs do filtro
HEPA. O ar que sai desta rea conjunta, do chuveiro qumico
e das cmaras de compresso e de descontaminao
dever passar por dois filtros HEPA em srie antes de ser
jogado para fora do laboratrio. O ar dever ser lanado
distante dos espaos ocupados e das entradas de ar. O(s)
filtro(s) HEPA devero estar localizados de maneira mais
prxima possvel da fonte a fim de minimizar a extenso
dos canos potencialmente contaminados. Todos os filtros
57
HEPA devero ser testados e certificados anualmente.
O abrigo para os filtros HEPA dever ser projetado de
maneira que permita uma descontaminao in situ do
filtro antes deste ser removido. Uma outra alternativa
seria a remoo do filtro em um recipiente primrio e
hermtico ao gs para subseqente descontaminao
e/ou destruio atravs da incinerao. O projeto do
abrigo do filtro HEPA dever facilitar a validao da
instalao do filtro. O uso de filtros HEPA pr-certificados
pode ser vantajoso. A vida mdia de filtros HEPA
exaustores pode ser prolongada atravs de uma pr-
filtrao adequada do ar fornecido.
15. O posicionamento dos pontos de entrada e sada de ar
dever ser de forma que os espaos de ar estticos
dentro do laboratrio escafandro sejam minimizados.
16. O ar de sada tratado e o liberado das cabines de
segurana biolgica Classe II, localizadas no local onde
os trabalhadores vestem a roupa de presso positiva,
poder ser jogado para dentro do ambiente de trabalho
ou para o exterior atravs do sistema de exaustores do
local. Se o ar tratado for liberado para fora atravs dos
exaustores, este dever estar diretamente conectado a
este sistema, de maneira que evite qualquer interferncia
no equilbrio do ar das cabines ou do sistema de
exaustores.
17. O projeto e procedimentos operacionais de um local de
Nvel de Biossegurana 4 devero ser documentados.
O local dever ser testado em funo do projeto e dos
parmetros operacionais para que se verifique se
realmente atendem a todas as necessidades antes que
comecem a funcionar. Os locais devero ser checados
novamente uma vez ao ano e os procedimentos neles
existentes devero ser modificados de acordo com a
experincia operacional.
58
18. Sistemas de comunicaes apropriados devero ser insta-
lados entre o laboratrio e o exterior (por exemplo, fax, com-
putador, interfone).
5
9
NB-3 mais:
Edifcio separado ou rea iso-
lada.
Sistemas de abastecimento e
escape, a vcuo, e de descon-
taminao.
Outros requisitos sublinhados
no texto.
Tabela 1. Resumo dos Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes Infecciosos.
INSTALAES (Barreiras Secun-
drias)
NB AGENTES PRTICAS EQUIPAMENTO DE SEGURANA
(Barreiras Primrias)
Bancadas abertas com pias pr-
ximas.
1
2
3
4
Que no so conhecidos
por causarem doenas
em adultos sadios.
No so necessrios Prticas Padres de microbiologia
Barreiras Primrias= Cabines de Clas-
se I ou II ou outros dispositivos de con-
teno fsica usados para todas as
manipulaes de agentes que provo-
quem aerossis ou vazamento de ma-
teriais infecciosos; Procedimentos Es-
peciais como o uso de aventais, luvas,
proteo para o rosto como necessrio.
Associados com doenas
humanas, risco = leso
percutnea, ingesto, ex-
posio da membrana
mucosa.
Prtica de NB-1 mais:
Acesso limitado
Avisos de Risco Biolgico
Precaues com obj etos
perfurocortantes.
Manual de Biossegurana que de-
fina qualquer descontaminao de
dejetos ou normas de vigilncia
mdica.
NB-1 mais: Autoclave disponvel.
Barreiras Primrias = Cabines de Clas-
se I ou II ou outros dispositivos de
conteno usados para todas as mani-
pulaes abertas de agentes; Uso de
aventais, luvas, proteo respiratria
quando necessria.
Agentes exticos com
potencial para transmis-
so via aerosol; a doen-
a pode ter conseqn-
cias srias ou at fatais.
Prticas de NB-2 mais:
Acesso controlado
Descontaminao de todo o lixo
Descontaminao da roupa usada
no lab. antes de ser lavada.
Amostra sorolgica
NB-2 mais:
Separao fsica dos corredo-
res de acesso.
Portas de acesso dupla com
fechamento automtico.
Ar de exausto no recirculante.
Fluxo de ar negativo dentro do
laboratrio.
Agentes exticos ou peri-
gosos que impem um
alto risco de doenas que
ameaam a vida, infec-
es laboratoriais transmi-
tidas via aerosol; ou rela-
cionadas a agentes com
risco desconhecido de
transmisso.
NB-3 mais:
Mudana de roupa antes de entrar.
Banho de ducha na sada.
Todo o material descontaminado na
sada das instalaes.
Barreiras Primrias = Todos os proce-
dimentos conduzidos em cabines de
Classe III ou Classe I ou II juntamente
com macaco de presso positiva com
suprimento de ar.
59
60
SEO IV
Critrios para os Nveis de Biossegurana para Animais
Vertebrados
Caso sejam usados animais experimentais, a administrao
da instituio dever fornecer instalaes adequadas, equipe para
cuidar dos animais e estabelecer prticas que assegurem nveis
apropriados para a qualidade, segurana e cuidados para com o
meio ambiente. As instalaes para animais de laboratrio
consistem de um tipo especial de laboratrio. Como princpio geral,
os nveis de biossegurana (as instalaes laboratoriais, as prticas
e os requisitos operacionais) indicado para o trabalho envolvendo
agentes infecciosos in vivo e in vitro so similares.
Porm, bom lembrarmos que as salas onde se encontram
os animais podem apresentar alguns problemas singulares. No
laboratrio de microbiologia, as condies de risco so provocadas
pela equipe do laboratrio ou pelo equipamento usado por eles.
Nas salas dos animais, as atividades dos prprios animais podem
apresentar novos riscos. Os animais podem produzir aerossis,
morder e arranhar e podem estar infectados por uma doena
zoontica.
Essas recomendaes presumem que as dependncias de
um laboratrio de experimentao animal, as prticas operacionais
e a qualidade do tratamento ao animal atendam a padres e
regulamentos aplicveis (por exemplo, Guide for the Care and Use
of Laboratory Animals
1
e Laboratory Animal Welfare Regulations
2
)
e que espcies adequadas tenham sido selecionadas para os
experimentos animais. Alm deste aspecto, a organizao dever
ter um plano de segurana e de sade ocupacional. A publicao
recente do Institute of Medicine, Occupational Health and Safety
Care of Research Animals
3
, auxilia muito.
O ideal seria que as dependncias para animais de
laboratrios usados nos estudos de doenas infecciosas ou no
infecciosas possussem um isolamento fsico de outros locais, onde
so realizadas atividades tais como a reproduo animal e a
61
quarentena; de laboratrios clnicos e especialmente de depen-
dncias onde pacientes so atendidos. No momento da elabora-
o do projeto das instalaes, deve-se considerar o fluxo de pes-
soas no local, de forma que minimize o risco de infeces.
As recomendaes, detalhadas abaixo, descrevem quatro
combi naes de prti cas, equi pamentos de segurana e
dependncias para experimentos com animais infectados por
agentes que provocam, ou que possam provocar infeces
humanas. Essas quatro combinaes, designadas de Nveis de
Biossegurana para Animais (NBA) 1-4, proporcionam nveis
crescentes de proteo ao pessoal e ao meio ambiente, e so
recomendadas como padres mnimos a serem seguidos em
atividades que envolvam animais de laboratrios infectados. Os
quatro nveis descrevem as dependncias para animais e prticas
apl i cvei s para o trabal ho com ani mai s i nfectados por
microorganismos pertencentes aos Nveis de Biossegurana 1-4,
respectivamente.
Os pesquisadores inexperientes quanto conduo destes
tipos de procedimentos devero procurar ajuda com pessoas que
possuam experincia com esse trabalho especial para que possam
realiz-lo com segurana.
Padres para as instalaes e prticas de manuseio de
vetores e hospedeiros invertebrados no esto includos nos
padres de trabalhos para animais de laboratrio comumente
utilizados. O livro Laboratory Safety for Arboviruses and Certain
Other Viruses of Vertebrates
4
, preparado pelo Subcomit de
Segurana de Laboratrios de Arbovrus (SALS) do Comit
Americano de Vrus de Artrpodes, serve como uma referncia til
no planejamento e operao das dependncias onde sero
realizados trabalhos com artrpodes.
Nvel de Biossegurana Animal 1 (NBA-1)
O Nvel de Biossegurana Animal 1 (NBA-1) recomendado
para o trabalho que envolva agentes bem caracterizados, que no
Critrios para os Nveis de Biossegurana para Animais Vertebrados
62
sejam conhecidos por provocarem doenas em humanos adultos
sadios e que apresentem um risco potencial mnimo para a equipe
laboratorial e para o meio ambiente.
A. Prticas Padres
1. O chefe do laboratrio de experimentao animal dever
estabelecer normas, procedimentos e protocolos para
situaes de emergncia. Cada projeto dever ser
submetido a uma pr-aprovao pelo Comit Institucional
de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit
Institucional de Biossegurana (IBC). Quaisquer prticas
especiais devero ser aprovadas neste momento.
2. Somente as pessoas que trabalham ou que fazem parte da
equipe de apoio devero receber autorizao para entrarem
no local. Antes de entrarem, essas pessoas devero ser
avisadas quanto aos riscos biolgicos potenciais e devero
receber instrues sobre os procedimentos de segurana
apropriados.
3. Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser
institudo.
4. Um manual de segurana dever ser preparado ou adotado.
A equipe dever ser avisada sobre os riscos especiais,
devero ler e seguir as instrues sobre as prticas e os
procedimentos.
e aplicar cosmticos. Os alimentos para uso humano
devero ser guardados somente em reas designadas para
esse fim, e no sero permitidos nas salas de trabalho ou
nas salas dos animais.
6. Todos os procedimentos devero ser realizados com
cuidado para minimizarmos a criao de aerossis e
borrifos.
Nvel de Biossegurana Animal NBA-1
63
7. As superfcies de trabalho devero ser descontaminadas
aps o uso ou depois de qualquer derramamento de
materiais viveis.
8. Todos os rejeitos da sala de animais (incluindo tecidos,
carcaas e o material das camas de animais contaminados)
devero ser transportados da sala dos animais em
recipientes, rgidos, cobertos e a prova de vazamento para
serem adequadamente desprezados de acordo com os
requisitos locais ou institucionais aplicveis. Recomenda-
se a incinerao.
9. Normas quanto ao manuseio seguro de objetos cortantes
devero ser institudas.
10. A equipe dever lavar as mos aps ter manuseado culturas
e animais, depois da remoo das luvas e antes de sarem
da sala dos animais.
11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada
da sala de animais quando agentes infecciosos estiverem
presentes no local. O aviso de risco dever identificar o(s)
agente(s) infeccioso(s) em uso, o nome e o nmero do
telefone da pessoa responsvel e indicar os requisitos
especiais para a entrada na sala dos animais (por exemplo,
necessidade de imunizao e do uso de respiradores).
de insetos e roedores (veja Apndice G).
B. Prticas Especiais: Nenhuma.
C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias):
1. Recomenda-se o uso de jalecos, aventais e/ou uniformes
prprios nas dependncias. Estes devero permanecer no
local e no devero ser usados fora das dependncias do
laboratrio de experimentao animal.
64
2. As pessoas que tiverem contato com primatas no-huma-
nos devero avaliar o risco de exposio das mucosas e
usar uma proteo para os olhos e a face
5
.
D. Instalaes (Barreiras Secundrias):
1. As dependncias do laboratrio de experimentao animal
devero estar separadas das reas do edifcio abertas ao
pblico.
2. As portas externas do laboratrio devero ser fechadas e
trancadas automaticamente. As portas das salas dos
animais devero abrir para dentro, fechar automaticamente
e serem mantidas fechadas quando os animais estiverem
presentes. As portas internas da sala da ante-sala devero
abrir para fora ou deslizarem vertical ou horizontalmente.
3. As dependncias devero ser planejadas, construdas e
mantidas de tal forma a facilitar a limpeza e a manuteno.
As superfcies das paredes, pisos e tetos devero ser
impermeveis a gua.
4. Acessrios internos, como fixao de luzes, dutos de ar, e
canos de gs e gua devero ser instalados de tal forma a
minimizar reas de superfcie horizontal.
5. Janelas no so recomendadas. Qualquer janela dever
ser resistente a quebra. Em todos os locais possveis as
janelas que porventura existirem, devero ser seladas. Se
as dependncias para animais possurem janelas que so
abertas, estas devero conter telas para insetos.
6. Se houver sistema de drenagem no piso, os ralos devero
sempre conter gua e/ou um desinfetante adequado.
7. A ventilao a ser instalada dever estar de acordo com a
ltima edio do Guide for Care and Use of Laboratory
Animals
6
. No dever haver nenhuma recirculao do ar
65
exaurido. Recomenda-se que as salas para os animais se-
jam mantidas com uma presso negativa em relao aos
corredores adjuntos.
8. A dependncia dever conter uma pia para lavagem das
mos.
9. As caixas e gaiolas devero ser lavadas manualmente ou
em uma mquina para a lavagem mecnica de caixas e
gaiolas. Esta mquina dever ter enxge final com gua a
uma temperatura de pelo menos 72C (180
0
F).
evitando reflexos e brilhos que possam impedir a viso.
O Nvel de Biossegurana Animal 2 envolve prticas para o
trabalho com agentes associados a doenas humanas. Esse nvel
indicado tanto para riscos advindos da ingesto, quanto para
exposies da membrana mucosa e cutnea. O NBA-2 baseia-se
nos requisitos de prticas padres, procedimentos, equipamentos
de conteno e instalaes do NBA-1.
A. Prticas Padres
1. Alm das normas, procedimentos e protocolos padres para
situaes de emergncia estabelecidas pelo diretor do local,
normas e procedi mentos especi ai s devero ser
desenvolvidos quando necessrio e devero ser aprovados
pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais
(IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC).
2. O acesso s salas dos animais dever ser limitado,
permitindo o acesso ao menor nmero de pessoas possvel.
As pessoas que receberem autorizao para entrar nas
salas para trabalharem ou realizarem algum tipo de servio
quando o trabalho estiver sendo realizado, devero ser
avisadas em relao aos riscos em potencial.
66
adotado. Toda a equipe dever ser imunizada e testada
contra os agentes manuseados ou potenci al mente
presentes (por exemplo, vacina de Hepatite B, teste cutneo
para TB). Quando apropriado, um sistema de vigilncia
sorolgica dever ser implementado
7
.
4. Um manual de biossegurana dever ser preparado ou
adotado. A equipe do laboratrio dever ser avisada sobre
os riscos especiais, devero ler e seguir as instrues sobre
e aplicar cosmticos. Os alimentos de uso humano devero
ser guardados somente em reas designadas para esse
fim e no sero permitidos dentro das salas para os animais
ou salas de procedimentos.
6. Todos os procedimentos devero ser realizados com
cuidado para minimizarmos a criao de aerossis e
borrifos.
7. O equipamento e as superfcies de trabalho na sala devero
ser rotineiramente descontaminados com um desinfetante
de ao comprovada, aps o trabalho com o agente, e
especialmente depois de borrifos, derramamentos ou de
outras contaminaes com materiais infecciosos.
8. Todas as amostras infecciosas devero ser coletadas,
etiquetadas, transportadas e processadas de maneira que
contenha e previna a transmisso do(s) agente(s). Todos
os rejeitos da sala para animais (incluindo tecidos, carcaas
e o material das camas contaminadas dos animais, sobra
de alimentos e objetos perfurocortantes) devero ser
transportados da sala de animais em recipientes rgidos,
cobertos e a prova de vazamentos, de acordo com os
requisitos locais aplicveis. A superfcie exterior dos
recipientes dever ser desinfetada antes do material ser
67
transportado. Antes da incinerao o contedo dever ser
autoclavado.
9. Normas para um manusei o seguro de obj etos
perfurocortantes devero ser adotadas:
a. As seri ngas e agul has ou outros i nstrumentos
perfurocortantes devero ficar restritos ao laboratrio e
devero ser usados somente quando no houver uma
outra alternativa, como nos casos de injeo parenteral,
flebotomia, aspirao de lquidos de animais e de
garrafas de diafragma.
b. Usar seringas que possuam envoltrio para a agulha,
ou sistemas que no utilizam agulhas e outros dispositivos
de segurana quando apropriados.
c. Recipientes de plstico devero ser substitudos por
10. A equipe dever lavar as mos aps o manuseio de culturas
e animais, aps a remoo das luvas, e antes de sair das
dependncias dos animais.
da sala dos animais sempre que houver agentes infecciosos
presentes. Este aviso dever conter a identificao do(s)
agente(s) infeccioso(s), dever relacionar o nome e o
telefone da pessoa responsvel e dever indicar os
requisitos especiais (por exemplo, necessidade de
imunizao e do uso de respiradores) para a entrada na
sala dos animais.
12. Um programa de controle de insetos e roedores dever ser
adotado (veja Apndice G).
1. As pessoas que tratam dos animais e as que do suporte
ao programa, devero receber treinamento adequado sobre
68
os riscos potenciais associados ao trabalho, sobre as pre-
caues necessrias para evitar exposies e os procedi-
mentos de avaliao da exposio. A equipe dever rece-
ber cursos anuais de atualizao, ou treinamento adicional
quando forem necessrias mudanas de normas ou proce-
dimentos. Os registros de todo o treinamento fornecido
devero ser mantidos. Em geral, as pessoas expostas a
um elevado risco de contaminao ou para quem as infec-
es possam ser perigosas, no sero permitidas dentro
da sala para animais, a menos que procedimentos especi-
ais possam eliminar os riscos extras.
2. Somente animais usados para o(s) experimento(s) sero
permitidos na sala.
3. Todo o equi pamento dever ser adequadamente
descontaminado antes de ser removido da sala.
4. Respingos e acidentes que resultem em exposies a
materiais infecciosos devero ser imediatamente relatados
ao chefe do laboratrio. Uma avaliao mdica, vigilncia e
tratamento devero ser providenciados e registros por
escrito devero ser mantidos.
C. Equipamento de Segurana (Barreira Primria)
1. Os aventais, uniformes, ou jalecos de laboratrio devero
ser usados enquanto a pessoa estiver dentro da sala dos
animais. O jaleco do laboratrio dever ser removido e
mantido dentro da sala. Antes de sair da sala, os aventais,
uniformes e jalecos devero ser removidos. As luvas
devero ser usadas ao manipular animais infectados e
quando for inevitvel o contato da pele com os animais
infectados.
2. O equipamento de proteo individual dever ser baseado
nas determinaes da avaliao do risco (veja Seo V).
Protetores respiratrios e para olhos/rosto devero ser
usados por todos que entrarem nas salas de animais que
abrigam primatas no-humanos
8
.
69
3. Cabines de segurana biolgica, assim como outros dispo-
sitivos de conteno fsica e/ou equipamento de conten-
o fsica (por exemplo, respiradores, protetores faciais)
devero ser usados ao conduzir procedimentos que apre-
sentem um alto potencial de criao de aerossis. Estes
procedimentos incluem necropsia de animais infectados,
coleta de tecidos, lquidos de animais ou ovos infectados e
inoculao intranasal de animais.
4. Quando necessrio, os animais devero ser alojados em
equipamentos de conteno primria apropriados s
espcies animais. Sistemas com filtros de caixas ou gaiolas
devero sempre ser mani pul adas em cabi nes de
bioconteno animal, recomendadas para roedores,
adequadamente projetadas e operadas.
D. Instalaes (Barreiras Secundrias)
1. A dependncia para animais dever ser separada das reas
que so abertas ao trnsito irrestrito de pessoas dentro do
edifcio.
2. O acesso s dependncias dever ser limitado atravs de
portas hermeticamente fechadas. As portas externas
devero ser fechadas e trancadas automaticamente. As
portas das salas dos animais devero se abrir para dentro,
ser fechadas automaticamente e mantidas fechadas quando
os animais estiverem presentes. As portas internas da sala
da ante-sala devero ser abertas para fora ou deslizarem
vertical ou horizontalmente.
3. As dependncias devero ser planejadas, construdas e
mantidas de tal forma a facilitar a limpeza e a manuteno.
As superfcies das paredes, pisos e tetos devero ser
impermeveis a gua.
70
5. As janelas no so indicadas. Qualquer janela dever ser
resistente a quebra. Em todos os locais possveis, as janelas
que porventura existirem, devero ser seladas.
6. Se houver sistema de drenagem no piso, os sifes devero
sempre conter desinfetante adequado.
7. O ar exaurido dever ser jogado para o lado de fora do
prdio, sem recircular por outras salas. A ventilao a ser
instalada dever estar de acordo com a ltima edio do
Guide for Care and Use of Laboratory Animals. A direo
do fluxo de ar na sala dos animais dever ser para dentro;
e as salas para os animais devero ser mantidas sob
presso negativa em relao aos corredores adjuntos.
0
F).
9. Dever existir uma autoclave dentro do laboratrio de
experimentao animal para descontaminao do lixo
infeccioso.
10. A sala de manuteno de animais infectados dever conter
uma pia para lavagem das mos, assim como em qualquer
outro lugar do laboratrio.
Nvel de Biossegurana Animal 3 (NBA 3)
O Nvel de Biossegurana Animal 3 envolve as prticas
adequadas para o trabalho com animais infectados por agentes
nativos ou exticos que apresentem potencial elevado de
transmisso por aerossis e risco de provocar doenas fatais ou
srias. O NBA-3 baseia-se nos requisitos de prticas padres,
71
procedimentos, equipamentos de conteno e instalaes do
NBA-2.
A. Prticas Padres
situaes de emergncia estabelecidas pela chefia do
laboratrio, normas e procedimentos especiais devero ser
desenvolvidos quando necessrio e devero ser aprovadas
pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais
(IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC).
2. O chefe do laboratrio limitar o acesso s salas dos
animais, ao menor nmero de pessoas possvel. As pessoas
que receberem autorizao de entrada, para trabalharem
ou realizarem algum tipo de servio, devero ser avisadas
em relao ao risco em potencial.
adotado. Toda a equipe dever ser imunizada e testada
contra os agentes manuseados ou potenci al mente
presentes (por exemplo, vacina de Hepatite B, teste cutneo
para TB). Quando apropriado, um sistema de vigilncia
sorolgica dever ser adotado
9
. Em geral, as pessoas que
podem estar passando por um risco crescente de adquirirem
a infeco ou para quem as infeces possam ter srias
conseqncias, no sero permitidas dentro da sala para
animais, a menos que procedimentos especiais possam
eliminar os riscos extras.
4. Um manual de biossegurana dever ser preparado ou
adotado. A equipe do laboratrio dever ser avisada sobre
os riscos especiais, devero ler e seguir as instrues sobre
e aplicar cosmticos. Os alimentos de uso humano devero
ser guardados somente em reas designadas para esse
72
fim e no sero permitidos dentro das salas para animais
ou das salas de procedimentos.
6. Todos os procedi mentos devero ser real i zados
cuidadosamente para minimizar a produo de aerossis e
borrifos.
7. Os equipamentos e as superfcies de trabalho na sala
devero ser roti nei ramente descontami nados com
desinfetante que possua ao comprovada, aps o trabalho
com agentes infecciosos, e especialmente aps borrifos,
derramamentos ou outras contaminaes com materiais
infecciosos tenham ocorrido.
8. Todos os rejeitos da sala de animais (incluindo tecidos,
carcaas e o material das camas dos animais contaminados,
alimentao que no tenha sido utilizada e objetos
perfurocortantes) devero ser transportados da sala dos
animais em recipientes rgidos, a prova de vazamentos e
cobertos, para serem desprezados de forma adequada e
de acordo com os requisitos locais ou institucionais
aplicveis. Recomendamos a incinerao. A superfcie
externa dos recipientes dever ser desinfetada antes da
remoo do material (veja Prticas Especiais N 3 abaixo).
9. Normas quanto ao manusei o seguro de obj etos
perfurocortantes devero ser restritos ao laboratrio e
somente usados quando no houver outra alternativa,
como nos casos de injeo parenteral, flebotomia,
aspirao de lquidos de animais e de garrafas de
diafragma. Os recipientes de plstico devero ser
substitudos por recipientes de vidro sempre que
possvel.
b. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha,
ou sistemas sem agulhas e outros dispositivos de
73
c. Vasi l has pl sti cas devero ser substi tudas por
vasilhames de vidro sempre que possvel.
10. A equipe dever lavar as mos aps ter manuseado culturas
e animais, depois da remoo das luvas e antes de sair da
sala dos animais.
da sala do laboratrio de experimentao animal, quando
agentes infecciosos estiverem presentes no local. O aviso
de risco dever identificar o(s) agente(s) infeccioso(s) em
uso, relacionar o nome e o nmero do telefone da pessoa
responsvel e indicar os requisitos especiais para a entrada
na sala dos animais (por exemplo, necessidade de
imunizao e do uso de respiradores).
12. Todas as amostras infecciosas devero ser coletadas,
etiquetadas, transportadas e processadas de maneira que
faam a devida conteno e previnam a transmisso de
agentes.
13. As pessoas que cuidam dos animais de laboratrio e as
que do suporte ao programa, devero receber treinamento
adequado sobre os riscos potenciais associados ao
trabalho, sobre as precaues necessrias para evitar
exposies e os procedimentos de avaliao da exposio.
A equipe dever receber cursos anuais de atualizao, ou
treinamento adicional quando forem necessrias mudanas
de normas ou procedimentos. Os registros de todo o
treinamento fornecido devero ser mantidos.
14. Um programa de controle de insetos e roedores dever ser
adotado.
1. As caixas e gaiolas dos animais devero passar pela
autoclave ou tero que ser descontaminadas antes que o
74
material da cama seja removido e antes de serem lavadas.
O equipamento dever ser descontaminado de acordo com
as normas locais, estaduais ou federais antes de ser
embalado para transporte ou remoo do local, para reparo
ou manuteno.
2. Deve-se desenvolver um procedimento para o caso de
respingos. Somente o pessoal adequadamente treinado e
equipado para trabalhar com materiais infecciosos dever
limpar os respingos. Respingos e acidentes que resultem
em uma exposio direta com materiais infecciosos devero
ser imediatamente relatados ao chefe do laboratrio. Uma
avaliao mdica, vigilncia e tratamento devero ser
providenciados e registros por escrito devero ser mantidos.
3. Todos os rejeitos provenientes das salas de animais devero
passar pela autoclave antes de serem incinerados ou serem
tratados atravs de outro mtodo de esterilizao.
4. Os materiais que no tiverem relao alguma com o
experimento (por exemplo, plantas ou animais que no forem
ser utilizados no ensaio) no sero permitidos na sala.
1. Uniformes ou roupas especficos devero ser usadas pelas
pessoas que entrarem na sala de animais. Estas vestimentas
tero toda frente protegida, ou seja, as vestimentas que
so abotoadas na frente no so adequados. O uniforme
dever ser retirado e deixado na sala de animais NBA-3.
Antes de sair das salas, as roupas ou uniformes devero
ser removidos e adequadamente acondicionados e
descontaminados antes de serem lavados ou descartados
(no caso de uniformes descartveis).
2. O equipamento de proteo individual dever ser usado
de acordo com as determinaes da avaliao de riscos.
a. O equipamento de proteo individual dever ser usado
em todas as atividades envolvendo manipulaes de
material infeccioso ou de animais infectados.
75
b. A equipe dever usar luvas ao manusear animais
i nfectados. Essas l uvas devero ser removi das
assepticamente e autoclavadas juntamente com outros
lixos da sala de animais antes de serem descartadas.
c. Protetores respiratrios e para olhos/rosto devero ser
usados por todos que entrarem nas salas de animais.
d. Botas, sapatilhas ou pr-ps ou outro tipo de proteo
para os ps, e banhos desinfetantes para os ps ou
lava-ps devero ser avaliados e usados onde forem
indicados.
3. Podemos reduzir o risco de formao de aerossis
infecciosos advindos da manipulao de animais infectados
ou dos materiais utilizados nas camas infectadas, se os
animais forem colocados em sistemas de confinamento
parcial, como caixas cobertas com filtros e paredes rgidas,
colocadas em locais com ventilao direcionada para o
interior das mesmas (por exemplo, cabines de fluxo laminar),
ou outros sistemas similares de conteno primria.
4. As cabines de segurana biolgica e outros dispositivos de
conteno fsi ca devero ser usados ao conduzi r
procedimentos que possuam um alto risco de criao de
aerossis. Esses incluem a necropsia de animais infectados,
coleta de tecidos, lquidos de animais ou ovos infectados e
inoculao intranasal de animais. Em um laboratrio NBA-
3, todo o trabalho dever ser realizado em uma barreira
primria, caso contrrio as pessoas devero usar protetores
respiratrios dentro da sala.
1. A dependncia para os animais dever ser separada das
reas que so abertas ao trnsito irrestrito de pessoas
dentro do edifcio.
76
2. O acesso s dependncias dever ser limitado atravs de
portas que se fecham e se trancam automaticamente, com
sistema de intertravamento, ou leitura tica ou carto
magntico. A entrada de pessoal para a sala dos animais
dever ser real i zada atravs de uma antecmara
pressurizada, que dever incluir chuveiro(s) e um vestirio
para troca de roupa. Um acesso adicional com porta dupla
(air-lock) dever ser construdo ou uma autoclave com porta
dupla dever existir no local para o fluxo de suprimentos e
rejeitos dentro e fora do laboratrio, respectivamente. As
portas para as salas de animais devero se abrir para dentro
e devero se fechar automaticamente. As portas internas
da ante-sala dentro de uma sala para animais devero ser
abertas para fora ou deslizarem vertical ou horizontalmente.
3. As instalaes de um laboratrio de experimentao animal
NBA-3 devero ser planejadas, construdas e mantidas de
forma que facilitem a limpeza e a manuteno. As superfcies
das paredes, pisos e tetos devero ser impermeveis a gua.
Selar as juntas, fendas ou aberturas em paredes, pisos e
tetos. Penetraes das linhas de servio, tais como gua,
luz, gs, e outras devem ser vedadas e os espaos entre
as portas e esquadrias devero permitir um selamento para
facilitar a descontaminao do ambiente.
4. Cada sala para animais dever conter uma pia para lavagem
das mos acionada automaticamente ou sem o uso das
mos perto das portas de sada. O sifo da pia dever conter
um desinfetante adequado aps o uso da mesma.
6. Qualquer janela dever ser resistente a quebra. Em todos
os locais possveis, as janelas que porventura existirem,
devero ser vedadas. Se as instalaes para animais
possurem janelas que so abertas, estas devero conter
telas contra insetos.
77
7. Se houver sistema de drenagem no piso, estes devero
sempre conter um desinfetante adequado.
8. A ventilao instalada dever estar de acordo com a ltima
edio do Guide for Care and Use of Laboratory Animals.
Os sistemas de entrada de ar e exausto devem ser
interligados. Esse sistema cria um fluxo de ar direcionado,
retirando o ar contaminado de dentro do laboratrio,
jogando-o para fora e ao mesmo tempo retira o ar das reas
limpas e o joga para dentro do laboratrio. O ar exaurido
no pode recircular em nenhuma outra rea do prdio.
Filtrao ou outros tipos de tratamento do ar exaurido
podem no ser necessrios, mas devero ser considerados,
baseados nos requisitos do local, nos microorganismos
especficos manipulados e nas condies de uso. O ar
exaurido dever ser lanado para longe de reas ocupadas
e de entradas de ar, ou poder ser filtrado atravs de filtros
HEPA. A equipe dever verificar se a direo do ar insuflado
(para dentro das reas dos animais) est apropriada.
Recomenda-se o uso de monitores visuais que indiquem e
confirmem o fluxo de ar direcionado para dentro do recinto.
Devemos considerar a instalao de um sistema de controle
de HVAC para evitar a pressurizao positiva nas reas
onde esto os animais. Alarmes audveis devem ser
considerados para evidenciar qualquer falha no sistema de
controle HVAC.
9. O ar filtrado pelo HEPA de uma cabine de segurana
biolgica Classe II poder recircular dentro da sala para
animais se a cabine for testada e aprovada anualmente.
Quando o ar exaurido das cabines de segurana biolgica
classe II, for lanado para fora do ambiente de trabalho,
atravs do sistema de exausto do edifcio, as cabines
devero estar conectadas de maneira que evitem qualquer
interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do sistema
de exausto do edifcio (por exemplo, uma conexo metlica
entre o exaustor das cabines e que se prende ao duto dos
exaustores do edifcio). Quando as cabines de segurana
78
biolgica Classe III forem utilizadas, elas devero estar
conectadas diretamente ao sistema de exausto. Se as
cabines de Classe III estiverem conectadas ao sistema de
insuflao, isto dever ser feito de tal maneira que previna
a pressurizao positiva das cabines (veja Apndice A).
0
F).
11. Dever exi sti r uma autocl ave dentro da sal a de
experimentao animal NBA-3, onde o risco est contido,
para descontaminao de lixo infeccioso antes de ser
removido para outras reas do local.
12. Se houver um sistema de vcuo (por exemplo, central ou
local), cada conexo de servio dever possuir um sifo
contendo desinfetante lquido e um filtro HEPA em linha,
colocado o mais prximo possvel de cada ponto de uso ou
da vlvula de servio. Os filtros devero ser instalados de
tal forma que permitam a descontaminao e a substituio
dos mesmos no local.
14. O projeto de edificao e os procedimentos operacionais
do laboratrio de experimentao animal NBA-3, deve ser
documentado. O local dever ser testado em funo do
projeto e dos parmetros operacionais para verificarmos
se realmente eles atendem a todas as necessidades antes
que comecem a operar. Os locais devero ser checados
novamente pelo menos uma vez ao ano e os procedimentos
neles existentes devero ser modificados de acordo com a
experincia operacional.
15. Protees adicionais ao meio ambiente (por exemplo,
chuveiros para a equipe, filtros HEPA para filtrao do ar
79
exaurido, conteno de outras linhas de servios, e a pro-
viso da descontaminao dos efluentes) devero ser con-
siderados, se recomendados devido s caractersticas
dos agentes manipulados, determinado pela avaliao do
risco das condies locais, ou por outros regulamentos
locais, estaduais ou federais.
O Nvel de Biossegurana Animal 4 envolve as prticas
adequadas para o trabalho com agentes perigosos ou exticos que
exponha o indivduo a um alto risco de infeces que podem ser
fatais, alm de apresentarem um potencial elevado de transmisso
por aerossis ou de agentes relacionados com um risco de
transmisso desconhecido. O NBA-4 baseia-se nos requisitos de
prticas, procedimentos, equipamento de conteno e instalaes
padres do NBA-3. Os procedimentos devero ser desenvolvidos
no prprio local para direcionar as operaes especficas das
cabines de segurana biolgica Classe III ou no laboratrio
escafandro.
A. Prticas Padres
situaes de emergncia estabelecidas pela chefia do
laboratrio, normas e procedimentos especiais devero ser
desenvol vi dos, quando necessri o, e devero ser
aprovadas pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso
de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de
Biossegurana (IBC).
2. O chefe do laboratrio dever limitar o acesso s salas dos
animais, permitindo o acesso ao menor nmero de pessoas
possvel. As pessoas que receberem autorizao de
entrada, para trabalharem ou realizarem algum tipo de
servio, devero ser avisadas em relao ao risco em
potencial.
adotado para todas as pessoas que entrarem em um
80
laboratrio NBA-4. Esse programa dever incluir imuniza-
es, coleta para acompanhamento sorolgico, disponibili-
dade de aconselhamento ps-exposio e potencial
profilaxia
10
. Em geral, as pessoas que podem estar passan-
do por um crescente risco de adquirirem a infeco ou para
quem as infeces possam ser perigosas, no sero per-
mitidas dentro da sala para animais a menos que procedi-
mentos especiais possam eliminar os riscos extras. A avali-
ao dever ser realizada pelo mdico do trabalho.
4. Um manual de biossegurana especfico para o local dever
ser preparado ou adotado. A equipe do laboratrio dever
ser avisada sobre os riscos especiais, devero ler e seguir
as instrues sobre as prticas e procedimentos.
e aplicar cosmticos. O alimento de uso humano dever
ser guardado somente em reas designadas para esse fim
e no ser permitido dentro das salas para os animais ou
salas de procedimentos.
6. Todos os procedi mentos devero ser real i zados
cuidadosamente para minimizar a produo de aerossis e
borrifos.
7. Os equipamentos e as superfcies de trabalho na sala
devero ser roti nei ramente descontami nados com
desinfetante que possua ao comprovada, aps o trabalho
com agentes infecciosos, e especialmente aps borrifos,
infecciosos tenham ocorrido.
8. Um procedimento para borrifos dever ser desenvolvido e
institudo. Somente o pessoal adequadamente treinado e
equipado para esse tipo de trabalho dever limpar os
borrifos de materiais infecciosos. Borrifos e acidentes que
resultem em uma exposio direta com materiais infecciosos
devero ser i medi atamente rel atados ao chefe do
81
laboratrio. Uma avaliao mdica, vigilncia e tratamento
devero ser providenciados e registros por escrito devero
ser mantidos.
9. Todos os rejeitos provenientes das salas de animais
(incluindo tecidos animais, carcaas e material da cama
contaminado), outros materiais que sero descartados e
as roupas ou uniformes usados que iro ser encaminhados
para a lavanderia, devero ser esterilizadas em uma
autoclave de porta dupla (veja B-4 abaixo). Recomendamos
a incinerao de materiais descartveis.
10. Normas quanto ao manusei o seguro de obj etos
perfurocortantes devero ser restritos a sala dos animais
e devero ser usados somente quando no houver uma
outra alternativa, como nos casos de injeo parenteral,
coleta de sangue ou aspirao de lquidos de animais
de laboratrio e de garrafas de diafragma.
b. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha,
ou sistemas sem agulhas e outros dispositivos de
c. Vasi l has pl sti cas devero ser substi tudas por
vasilhames de vidro sempre que possvel.
da sala do laboratrio de experimentao animal, quando
agentes infecciosos estiverem presentes no local. O aviso
de risco dever identificar o(s) agente(s) infeccioso(s) em
uso, relacionar o nome e o nmero do telefone da pessoa
responsvel e indicar os requisitos especiais para a entrada
na sala dos animais (por exemplo, necessidade de
imunizao e do uso de respiradores).
12. As pessoas que cuidam dos animais de laboratrio e as
que do suporte ao programa devero receber treinamento
82
adequado sobre os riscos potenciais associados ao traba-
lho, sobre as precaues necessrias para evitar exposi-
es e os procedimentos de avaliao da exposio. A equi-
pe dever receber cursos anuais de atualizao, ou treina-
mento adicional quando forem necessrias mudanas de
normas ou procedimentos. Os registros de todo o treina-
mento fornecido devero ser mantidos.
13. As caixas e gaiolas dos animais devero passar pela
autoclave ou tero que ser descontaminadas antes que o
material da cama seja removido e antes de serem lavadas.
Os equipamentos e as superfcies de trabalho devero ser
rotineiramente descontaminados com desinfetante que
possua ao comprovada, aps o trabalho com materiais
i nfecci osos, e especi al mente depoi s de borri fos,
infecciosos tenham ocorrido. Os equipamentos devero ser
descontaminados de acordo com qualquer regulamento
local, estadual ou federal antes de ser removido do local
para reparo ou manuteno.
14. As pessoas responsveis pelo trabalho com animais
infectados devero trabalhar em pares. Baseado na
avaliao dos riscos (veja Seo V), procedimentos, tais
como o uso de caixas ou gaiolas de conteno, realizao
de trabalho somente com animais anestesiados ou outros,
que visem reduzir as possveis exposies do trabalhador
devero ser adotados.
15. Os materiais no relacionados ao ensaio (por exemplo,
plantas e animais que no forem ser utilizados) no sero
permitidos no local.
1. Medidas adicionais devero ser efetivadas para controle
do acesso (por exemplo, um sistema de guarda durante 24
horas para entrada e sada de pessoas). A equipe dever
83
entrar ou sair do local somente atravs do vestirio e das
salas de banhos. Cada vez que sarem do local, a equipe
dever tomar banho. A entrada ou a sada de pessoal por
antecmara pressurizada somente dever ocorrer em
2. Em uma operao na cabine de segurana biolgica Classe
III, a roupa do pessoal dever ser retirada no vestirio
externa e deixada l mesmo. O traje laboratorial completo,
incluindo peas ntimas, calas e camisas ou macaces,
sapatos e luvas devero ser fornecidos e usados pelo
pessoal. Ao sair, devero retirar os trajes laboratoriais no
vestirio interno antes de entrar na sala de banho. A roupa
suja (usada) dever ser esterilizada na autoclave.
3. Nos procedimentos operacionais em laboratrios NBA-4,
dever ser necessria a mudana completa de roupa. Um
banho ser necessri o aps a remoo da roupa
descontaminada. As roupas sujas do laboratrio devero
ser autoclavadas antes de serem lavadas.
4. Os materiais e suprimentos que forem introduzidos no
laboratrio devero passar por uma autoclave de porta
dupla ou por uma cmara de fumigao. Depois que a porta
externa estiver trancada, as pessoas dentro do laboratrio
devero abrir a porta interna e retirar os materiais. As portas
da autoclave e da cmara de fumigao devero ser
interligadas de maneira que a porta externa s seja aberta
depois que o ciclo de esterilizao tenha sido concludo
ou depoi s que a cmara de fumi gao tenha si do
descontaminada.
5. Um sistema para notificao de acidentes, incidentes,
exposies e absentesmo deve ser estabelecido, e um
outro sistema para a vigilncia mdica de doenas
potencialmente associadas ao trabalho em laboratrio. Um
aspecto essencial para esta vigilncia/notificao a
disponibilidade de um local para quarentena, isolamento e
84
atendimento mdico de pessoas com suspeitas de conta-
minao.
6. As amostras sorolgicas coletadas devero ser analisadas
periodicamente. Os resultados devero ser comunicados
aos participantes.
1. Os animais infectados com microorganismos da classe de
risco 4 devero ser alojados dentro de cabines de segurana
biolgica classe III em um laboratrio NBA-4. Em um
laboratrio NBA-4 escafandro, toda a equipe dever vestir
macaces com presso positiva e ventilados com um
sistema de suporte de vida. Os animais infectados devero
ser alojados em um sistema de conteno parcial (como
em caixas abertas colocadas em locais ventilados, caixas
de paredes slidas, possuindo um sistema de ventilao e
a exausto feita atravs de filtros e abertas em fluxos
laminares ou outros sistemas de conteno primria
equivalentes).
2. O uso de materiais descartveis que no requerem limpeza,
incluindo caixas e gaiolas de animais, devero ser levadas
em considerao. Esses materiais descartveis devero
passar pela autoclave na sada do laboratrio e depois
incinerados.
Os laboratrios NBA-4 podero ser includos como uma
parte integrante dos Laboratrios NBA-4 de Cabine ou aos
Laboratrios NBA-4 de Escafandro como descrito na Seo III
deste documento. Os requisitos para instalaes descritos na seo
Laboratrio NB-4 devero ser utilizados juntamente com o uso das
caixas descritas na seo de equipamentos acima.
85
Referncias:
1. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, National Acad-
emy Press, Washington, DC, 1996.
2. U.S. Department of Agriculture. Laboratory Animal Welfare Regula-
tions 9 CRF, Subchapter A, Parts 1, 2 and 3.
3. Occupational Health and Safety in the Care of Research Animals.
National Academy Press, Washington, D.C., 1996.
4. Subcommittee on Arbovirus Laboratory Safety for Arbovirus and Cer-
tain Other Viruses for Vertebrates. 1980. Am J Trop Med Hyg 29(6):
1359-1381.
5. Centers for Disease Control and Prevention. 1998. Fatal
Cercopithecine herpesvirus 1 (B Virus) Infection Following a Muco-
cutaneous Exposure and Interim Recommendations for Worker Pro-
tection. MMWR 47 (49); 1073-6, 1083.
6. Guide for the Care ands Use of Laboratory Animals (1)
7. Occupational Health and Safety in the Care of Research Animals
(3).
8. Centers for Disease Control and Prevention. 1998. (5)
9. Occupational Health and Safety in the Care of Research Animals (3)
10. Occupational Health and Safety in the Care of Research Animals.
(3)
Instalaoes de NBA-3 mais:
- Edifcio separado ou rea isolada.
- Sistemas de insuflao e exausto,
vcuo e sistemas de descontaminao.
- Outros requisitos enfatizados no texto.
Tabela 1. Resumo dos Nveis de Biossegurana Recomendados para as Atividades nas quais Animais Vertebrados Infectados Natural-
mente ou Experimentalmente so Utilizados.
Instalaes (Barreiras Secundrias) BSL Agentes Prticas Equipamentos de Segurana
(Barreiras Primrias)
Instalaes animal padres.
- Nenhuma recirculao do ar exaurido.
- Recomendao de fl uxo de ar
direcionado.
- Recomendao de pia para lavagem de
mo.
1
2
3
4
Desconhecidos por causarem
doenas em adultos humanos
sadios
Cuidados normais, solicitados,
por cada espcie.
Cui dado com o ani mal e prti cas de
gerenciamento padres, incluindo programas de
vigilncia mdica adequados.
Equipamento de NBA-1 mais barreiras primri-
as: equipamento de conteno adequado para
espcies animais; PPES: jalecos, luvas,
proteo facial e respiradores quando necess-
rios.
Associados com doenas hu-
manas. Ri sco: exposi o
cutnea, ingesto, exposio da
membrana mucosa.
Prticas de NBA-1 mais:
- Acesso limitado.
- Avisos de risco
- Precauo com objetos perfurocortantes.
- Manual de biossegurana.
- Descontaminao de todo o lixo infeccioso e
de caixas e gaiolas de animais antes da lava-
gem.
Instalaes de NBA-1 mais:
- Autoclave disposio.
- Pia para lavagem de mos dentro da
sala de animais.
- Uso de lavagem mecnica das caixas e
gaiolas.
- Acesso controlado.
- Descontaminao das roupas antes de serem
lavadas.
- Descontaminao das caixas e gaiolas antes
do material da cama ser removida.
- Lavagem dos ps com desinfetante.
Agentes nativos ou exticos
com elevado potencial de trans-
misso por aerossis; doenas
que podem causar srios da-
nos sade.
Prticas de NB-2 mais:
Acesso controlado
Descontaminao de todo o lixo
Descontaminao da roupa usada no lab.
antes de ser lavada.
Amostra sorolgica
Equipamento de NBA-2 mais:
- Equipamento de conteno para manu-
teno dos animais.
- Cabines SB de Classe I ou II para ma-
nipulaes (inoculao, necropsia) que
possam criar aerossis infecciosos.
PPEs: proteo respiratria adequada.
Instalaes de NBA-2 mais:
- Separao fsica dos corredores de
acesso.
- Fechamento automtico, porta dupla de
acesso.
- Linhas de penetraes seladas.
- Janelas vedadas.
- Autoclave presente no local.
Agentes exticos ou perigosos
que imponham alto risco de do-
ena fatal, transmisso por
aerossis, ou relacionada a
agentes com risco de transmis-
so desconhecido.
- Entrada atravs do vestirio para troca de
roupa onde a roupa pessoal removida e a do
laboratrio vestida; banho na sada.
- Todos os lixos devero ser descontaminados
antes da remoo do local.
Equipamento de NBA-3 mais:
- Equipamento de mxima conteno (CSB Clas-
se III ou de conteno parcial junto com maca-
co pressurizado positivamente com ar) usa-
do para todas as atividades e procedimentos.
86
87
SEO V
Avaliao dos Riscos
A palavra risco indica a probabilidade que um dano, um
ferimento ou uma doena ocorra. No contexto dos laboratrios
biomdicos e de microbiologia, a avaliao do risco se concentra
primariamente na preveno de infeces relacionadas aos
laboratrios. Ao enderear atividades laboratoriais que envolvam
materiais infecciosos ou potencialmente infecciosos, a avaliao
do risco um exerccio essencial e produtivo. Ele auxilia a designar
os nveis de biossegurana (instalaes, equipamentos e prticas)
que reduziro para um risco mnimo, a exposio de trabalhadores
e do meio ambiente a um agente perigoso. A inteno desta seo
a de fornecer um guia e o de estabelecer parmetros para a
seleo do apropriado nvel de biossegurana.
A avaliao do risco pode ser qualitativa ou quantitativa. Na
presena de riscos conhecidos (por exemplo, nveis residuais de
gs de formaldedo depois da descontaminao do laboratrio), a
avaliao quantitativa poder ser realizada. Mas em muitos casos,
os dados quantitativos estaro incompletos ou ausentes (por
exemplo, a investigao de um agente desconhecido ou de uma
amostra sem rtulo). Os tipos, subtipos e variantes dos agentes
infecciosos envolvendo vetores diferentes ou raros, a dificuldade
de avaliar as medidas de um potencial de amplificao do agente e
as singulares consideraes dos recombinantes genticos so
alguns dos vrios desafios na conduo segura de um laboratrio.
Diante tal complexidade, nem sempre os mtodos de amostragem
quantitativa significativos esto nossa disposio. Desta forma, o
processo de avaliao do risco para o trabalho com materiais
biolgicos perigosos pode no depender de um algoritmo prescrito.
O diretor do laboratrio ou o principal pesquisador dever
ser o responsvel pela avaliao dos riscos que implique no
estabelecimento de nveis de biossegurana para o trabalho. Isto
dever ser realizado em colaborao com o Institutional Biosafety
Committee (e/ou outros profissionais ou instituies se necessrio)
para assegurar a obedincia s normas e regras estabelecidas.
88
Ao realizar a avaliao do risco qualitativo, todos os fatores
de risco devero ser identificados e explorados. Informaes
relacionadas devero estar disponveis, na forma de um manual.
Consultas s Normas do NIH de DNA Recombinante, Normas de
Biossegurana em Laboratrios Canadenses e Normas de
Segurana da Organizao Mundial de Sade devero ser
consideradas. Em alguns casos, devemos confiar nas fontes de
informaes, como os dados de campo de um expert no assunto.
Essa informao dever ser interpretada pela sua tendncia em
aumentar ou diminuir o risco de uma infeco adquirida em
laboratrio
1
.
O desafio da avaliao do risco se encontra naqueles casos
onde uma informao completa sobre esses fatores no est
nossa disposio. Uma abordagem conservadora geralmente
aconselhada quando as informaes forem insuficientes nos
forando a um julgamento subjetivo. As Precaues Universais
devero sempre ser recomendadas.
Os fatores de interesse em uma avaliao dos riscos incluem:
A patogenicidade do agente infeccioso ou suspeito,
incluindo a incidncia e gravidade da doena (ex.
morbidade mdia contra uma mortalidade alta, doena
aguda versus doena crnica). Quanto mais grave a
potencialidade da doena adquirida, maior ser o risco.
Por exemplo, o Sthaphilococcus aureus raramente
provoca uma doena grave ou fatal em um indivduo
contaminado em um laboratrio e est relegado ao NB-2.
J vrus como o Ebola, Marburg e da febre de Lassa, que
provocam doenas com alta taxa de mortalidade e para
as quais no existem vacinas ou tratamentos so
trabalhadas em um NB-4. Porm, a gravidade da doena
precisa ser amenizada por outros fatores. O trabalho com
um vrus humano de imunodeficincia (HIV) e com o vrus
da Hepatite B tambm feito em um NB-2, embora eles
possam causar uma doena potencialmente fatal. Mas
esses vrus no so transmitidos atravs de aerossis, e
Avaliao dos Riscos
89
a incidncia de uma infeco adquirida em laboratrio
extremamente baixa para o HIV. No caso da Hepatite B, j
existe uma vacina eficaz contra esta patologia.
A via de transmisso (por exemplo, parenteral, via area
ou por ingesto) de agentes isolados recentemente pode
no estar definitivamente estabelecida. Os agentes que
podem ser transmitidos via aerosol tm provocado grande
parte das infeces laboratoriais. Ao planejar o trabalho
com um agente relativamente no caracterizado e com
um modo de transmisso desconhecido, o mais seguro
considerar o potencial de transmisso por via aerosol.
Quanto maior o potencial do aerosol, maior o risco.
A estabilidade do agente um aspecto que envolve no
somente a infectividade de aerossis (por exemplo, de
bactrias formadoras de esporos), mas tambm a
capacidade de sobreviver por um tempo extra do agente
no meio ambiente. Fatores como a dissecao, a
exposio luz solar ou ultravioleta, ou a exposio a
desinfetantes qumicos dever ser considerada.
A dose infecciosa do agente um outro fator a ser
considerado. A dose infecciosa pode variar de uma a
milhares de unidades. A natureza complexa da interao
dos microorganismos e do hospedeiro apresenta um
desafio significativo at mesmo para o mais saudvel e
imunizado trabalhador de laboratrio, e pode impor um
srio risco queles com menos resistncia. O grau de
imunizao do trabalhador do laboratrio est diretamente
relacionado sua susceptibilidade doena provocada
por um agente infeccioso.
A concentrao (nmero de organismos infecciosos por
unidade de volume) ser importante na determinao do
risco. Essa determinao dever considerar o meio que
contm o organismo (por exemplo, tecido slido, sangue
viscoso ou escarro ou meio lquido) e a atividade
Avaliao dos Riscos
90
laboratorial planejada (por exemplo, amplificao,
sonificao ou centrifugao do agente). O volume do
material concentrado a ser manipulado tambm
importante. Na maioria dos casos, os fatores de risco
aumentam com o aumento do volume de trabalho de
microorganismos de alta titulao, uma vez que um
manuseio adicional dos materiais freqentemente
solicitado.
A origem do material potencialmente infeccioso
tambm fundamental para a avaliao dos riscos. A
palavra origem pode se referir localizao geogrfica
(por exemplo, domstico ou originrios de outros pases);
hospedeiro (por exemplo, animal ou ser humano infectado
ou no); ou natureza da fonte (por exempl o,
potencialmente zoontica ou associada a um outro surto
de doena). Sob outro ngulo, esse fator pode tambm
levar em considerao o potencial dos agentes que
ameaam as aves e os animais de criao.
A disponibilidade de dados gerados por estudos
animais, na falta de dados humanos, poder fornecer
informaes teis para uma avaliao do risco. As
informaes sobre a patogenicidade, a infectividade e a
via de transmisso em animais podem proporcionar
informaes valiosas. Porm, sempre devemos tomar
cuidado em traduzir dados de uma espcie animal para
os de outras espcies.
A disponibilidade de uma profilaxia eficaz estabelecida ou
de uma interveno teraputica outro fator importante
a ser considerado. A forma mais comum de profilaxia a
imunizao com uma vacina eficiente. A avaliao do risco
inclui a determinao da disponibilidade de imunizaes
eficazes. Em alguns casos, a imunizao pode afetar o
nvel de biossegurana (por exemplo, o vrus Junin do
grupo NB-4 pode ser trabalhado no NB-3 por um
trabalhador imunizado). A imunizao tambm pode ser
Avaliao dos Riscos
91
passiva (por exemplo, o uso de uma imunoglobulina
sorolgica nas exposies ao HBV). Apesar de importante,
a imunizao somente servir como uma camada adicional
de proteo mediante os controles de engenharia, as
prticas e procedimentos padres e o uso de equipamento
de proteo individual. Ocasionalmente, a imunizao ou
a interveno teraputica (terapia com antibiticos ou
antiviral) pode ser particularmente importante nas
condies de campo. A oferta de imunizaes parte do
gerenciamento do risco.
A vigilncia mdica assegura que as normas de segurana
decididas realmente produzam os resultados positivos
esperados. A vigilncia mdica tambm parte da
administrao do risco. Podemos incluir o banco de soro,
monitoramento da condio de sade do trabalhador e a
participao em um gerenciamento ps-exposio.
A avaliao do risco tambm pode incluir uma avaliao
da experincia e nvel de capacitao das pessoas
expostas a riscos como os laboratoristas e as pessoas
que cuidam dos animais, da limpeza e manuteno (veja
Seo III). Uma educao adicional tambm pode ser
necessria para garantir a segurana das pessoas que
trabalham em cada um dos nveis de biossegurana.
Os agentes infecciosos cujo risco avaliado freqentemente
sero classificados em uma destas categorias:
Materiais contendo agentes infecciosos conhecidos.
As caractersticas da maioria dos agentes infecciosas so
conhecidas. As informaes teis para a avaliao do risco podem
ser obtidas atravs de pesquisas laboratoriais, vigilncia da doena
e estudos epidemiolgicos. Os agentes infecciosos conhecidos por
causarem infeces associadas a laboratrio esto includas no
Resumo das Caractersticas dos Agentes neste volume (veja Seo
VII). Outras fontes incluem o manual do American Public Health
Association, Control of Communicable Diseases
2
. Os artigos
Avaliao dos Riscos
92
literrios sobre infeces adquiridas em laboratrio tambm pode-
ro ser teis
3, 4, 5, 6, 7, 8
.
Materiais contendo agentes infecciosos
desconhecidos. O desafio aqui estabelecer o nvel de
bi ossegurana mai s adequado tendo, em mos, somente
informaes limitadas. Com freqncia essas sero amostras
clnicas. Algumas perguntas que podero auxili-lo em uma
avaliao do risco so as seguintes:
1. Por que um agente infeccioso considerado suspeito?
2. Quais so os dados epidemiolgicos disponveis? Qual
via de infeco indicada? Qual o ndice de morbidade
ou de mortalidade associado ao agente?
3. Quais so os dados mdicos disponveis?
As respostas a essas perguntas podem identificar o agente
ou o agente substituto cujas caractersticas encontradas no Resumo
das Caractersticas dos Agentes e podero ser utilizadas para
determinarmos um nvel de biossegurana. Na ausncia de dados
concretos, recomenda-se uma abordagem conservadora.
Materiais contendo molculas de DNA recombinantes.
Essa categoria de agentes inclui os microorganismos que foram
geneticamente modificados atravs de tecnologias do DNA
recombinante. Essas tecnologias continuam a serem desenvolvidas
rapidamente. Os projetos experimentais designados para extrair
novos vrus, bactri as, l evedo e outros mi croorgani smos
recombinantes se tornaram comuns nos dias de hoje. muito
provvel que futuras aplicaes da tecnologia do DNA recombinante
produziro novos vrus hbridos. A publicao do National Institutes
of Health chamado Guidelines for Research Involving Recombinant
DNA Molecules
9
um excelente ponto de referncia para a seleo
de um nvel de biossegurana adequado para o trabalho que
envolva microorganismos recombinantes.
Ao selecionar um nvel de biossegurana apropriado para
este trabalho, talvez o maior desafio seja avaliar o aumentado do
Avaliao dos Riscos
93
risco biolgico associado a uma modificao gentica em particu-
lar. Em grande parte dos casos, a seleo de um nvel de
biossegurana adequado comea ao estabelecermos a classifica-
o do vrus no modificados. Entre os vrus recombinantes, agora
rotineiramente desenvolvidos esto o adenovrus, alfavrus,
retrovrus, vrus vacnia, herpesvrus e outros designados para
expressar os produtos de genes heterlogos. Porm, a natureza
da modificao gentica e a quantidade de vrus devero ser cui-
dadosamente consi derados ao sel eci onar um nvel de
bi ossegurana adequado para o trabal ho com um vrus
recombinante.
Entre os pontos a serem considerados no trabalho com os
microorganismos recombinantes esto:
O gene inserido codifica uma toxina conhecida ou uma
toxina relativamente descaracterizada?
A modificao possui um potencial para alterar o alcance
do hospedeiro ou o tropismo celular do vrus?
A modificao possui um potencial para aumentar a
capacidade de replicao do vrus?
O gene inserido codifica um oncogene conhecido?
O gene inserido possui o potencial para alterar o ciclo
celular?
O DNA viral se integra ao genoma do hospedeiro?
Qual a probabilidade de que cepas de vrus competentes
replicados sejam geradas?
A lista de perguntas no significa que seja uma questo
inclusiva. Pelo contrrio, elas servem como um exemplo de
informao necessrio para julgarmos se um nvel de biossegurana
maior necessrio para o trabalho com microorganismos
geneticamente modificados. J que em muitos casos as respostas
para essas perguntas no sero definitivas, importante que a
empresa possua um Comit Institucional de Biossegurana
constituda e informada, como enfatizado pelos estatutos do NIH,
para verificar a avaliao do risco.
Materiais que possam conter ou no agentes
infecciosos desconhecidos. Na ausncia de informaes que
possam sugerir a infectividade do agente, deve-se considerar as
precaues universais.
Avaliao dos Riscos
94
Avaliao dos Riscos
Estudos Animais. Estudos laboratoriais que envolvam ani-
mais podero apresentar muitos tipos diferentes de riscos fsicos,
biolgicos e ao meio ambiente. Os riscos especficos presentes em
qualquer dependncia para animais em particular so nicos,
variando de acordo com as espcies envolvidas e com a natureza
da pesquisa desenvolvida. A avaliao do risco quanto ao perigo
biolgico dever se concentrar particularmente no potencial das
instalaes animais para uma aumentada exposio de patgenos
humanos e aos agentes zoonticos.
Os prprios animais podem introduzir novos perigos
biolgicos nas instalaes. As infeces latentes so mais comuns
em animais capturados no campo ou em animais vindo de
populaes no selecionadas. Por exemplo, o vrus-b do macaco
apresenta um risco latente aos indivduos que lidam com smios.
As vias de transmisso animais devem tambm ser consideradas
na avaliao do risco. Os animais que transmitem vrus atravs de
disseminao respiratria ou disseminao na urina ou fezes so
muito mais perigosos do que aqueles que no o fazem. As pessoas
que lidam com animais experimentais em locais de pesquisas e que
trabalham com agentes infecciosos apresentam um risco muito maior
de exposio devido s mordidas, arranhes e aerossis
provocados por eles. A Seo IV descreve as prticas e instalaes
aplicveis ao trabalho de animais infectados por agentes listados
nos Nveis de Biossegurana de 1-4
1
.
Outras aplicaes. O processo de avaliao dos riscos
descritos tambm se aplica s operaes laboratoriais que no
envolvam o uso de agentes primrios de doenas humanas.
verdade que os estudos microbiolgicos de patgenos especficos
de hospedeiros animais, do solo, gua, alimentos, raes e outros
materi ai s naturai s ou i ndustri al i zados i mpem ri scos
consideravelmente menores para os laboratoristas. Ainda assim,
os microbiologistas e outros cientistas que trabalhem com esses
materiais podem achar de grande valor estas prticas, equipamentos
de conteno e recomendaes para as instalaes descritas neste
livro, para o desenvolvimento de padres operacionais que atenda
todas as necessidades de suas prprias avaliaes.
95
Referncias:
1. Knudsen, R.C. 1998. Risk Assessment for Biological Agents in the
Laboratory. In J. Richmond, Ph. D, R.B.P. (ed.) Rational Basis for
Biocontainment: Proceedings of the Fifth National Symposium on
Biosafety. American Biological Safety Association, Mundelein, IL.
2. Benenson, Abram S., Editor. Control of Communicable Diseases
Manual. 16
th
Edition, 1995. American Public Health Association,
Washington, D.C. 200005.
3. Collins, C.H. Laboratory-acquired infections, history, incidence,
causes and prevention. Butterwoths, and Co.Ltd. 1983.
4. Richmond, Jonathan Y., McKinney, Robert W. Editors. Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories. Public Health Service,
3
rd
Edition, May, 1993.
5. Sewell, David L. Laboratory Associated Infections and Biosafety.
Clinical Microbiology Reviews, 8:389-405, 1995.
6. Sulkin, S.E., Pike, R.M. 1949. Viral Infections contracted in the labo-
ratory. New England J. Medicine. 241:205-213.
7. Sulkin, S.E., Pike, R.M. 1951. Survey of Laboratory Acquired infec-
tions. Am J Public Health 41:769-781.
8. Sullivan, J.F. Songer, J.R., Estrem, I.E. 1978. Laboratory acquired
infections at the National Animal Disease Center, 1960-1975. Health
Laboratory Sci. 15: 58-64.
9. National Institutes of Health. Guidelines for Research Involving Re-
combinant DNA Molecules. (Washington: GPO, 1998) Federal Reg-
ister. 59FR34496.
Outras Fontes:
NIH Guidelines for Recombinant DNA Molecules:
http://www.NIH.gov/od/orda/toc.html
NIH Office of Recombinant DNA Activities:
http://www.NIH.gov/od/orda
Avaliao dos Riscos
96
SEO VI
Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes
Infecciosos e Animais Infectados
A seleo de um nvel de biossegurana adequado para o
trabalho envolvendo um agente ou um estudo animal em particular
depende de um nmero de fatores (veja a Seo V, Avaliao dos
Riscos). Alguns destes fatores mais importantes so: a virulncia,
a patogenicidade, a estabilidade biolgica, a rota de disseminao
e a transmissibilidade do agente; a natureza ou funo do
laboratrio; os procedimentos e manipulaes envolvendo o agente;
a endemicidade do agente e a disponibilidade de vacinas ou de
medidas teraputicas eficazes.
A relao sumria dos agentes apresentada nesta seo
proporciona um guia para a seleo dos nveis de biossegurana
adequados. As informaes especficas sobre riscos laboratoriais
relacionados com um agente em particular e as recomendaes
sobre uma conduta segura de procedimentos que possam reduzir
significativamente o risco de doenas associadas ao trabalho
laboratorial, tambm se encontram relacionadas nesta seo. As
relaes sumrias dos agentes incluem um ou mais dos seguintes
critrios: o agente um fator de risco comprovado para os
trabalhadores que manipulam materiais infecciosos (por exemplo,
vrus da hepatite B, M. tuberculosis); o potencial para as infeces
associadas ao trabalho laboratorial elevado mesmo na falta de
um documento prvio das infeces adquiridas em laboratrio (por
exemplo, arbovrus exticos); ou as conseqncias da infeco
sero graves.
As recomendaes para o uso de vacinas e toxides esto
includas nas relaes sumrias dos agentes, assim como os
produtos licenciados disponveis, alm dos produtos em investigao
pelo Investigational New Drug (IND) (veja o Apndice B,
Imunoprofilaxia). Quando aplicvel, as recomendaes para o uso
destes produtos sero baseadas nas recomendaes do Public
Health Service Advisory Committeee on Immunization Practice, e
so especficas s pessoas que esto expostas a este tipo de risco,
97
que trabalham em laboratrio ou as que tm de entrar em reas
laboratoriais. Essas recomendaes especficas de maneira alguma
devero impedir o uso rotineiro destes produtos como o toxide
tetnico-diftrico, a vacina contra plio, a vacina contra influenza e
outras, porque o risco potencial de exposio da comunidade,
i ndepende de quai squer ri scos l aboratori ai s. Precaues
adequadas devero ser tomadas na administrao de vacinas
atenuadas de vrus vivo em indivduos com sistema auto-imune
alterado ou com outra condio mdica (por exemplo, gravidez),
na qual uma infeco viral pode resultar em conseqncias
adversas.
As avaliaes dos riscos e os nveis de biossegurana
recomendados nas relaes sumrias dos agentes referem-se a
uma populao de indivduos imune competentes. As pessoas com
a imunocompetncia alterada podero ser expostos gradativamente
aos riscos. A imunodeficincia pode ser hereditria, congnita ou
induzida por um nmero de doenas neoplsicas ou infecciosas,
por terapia ou por radiao. O risco de se tornar infectado ou a
conseqncia de uma infeco pode tambm ser influenciado por
fatores tais como: idade, sexo, raa, gravidez, cirurgias (por
exemplo, esplenectomia, gastrostomia), predisposio a doenas
(por exemplo, diabetes, lpus eritematoso) ou uma funo fisiolgica
alterada. Estas e outras variveis devero ser consideradas na
aplicao das avaliaes dos riscos s atividades especficas dos
indivduos selecionados.
O nvel de biossegurana escolhido para um agente
baseado nas atividades associadas ao crescimento e manipulao
das quantidades e concentraes dos agentes infecciosos
requeridos para realizar a identificao ou a tipagem. Se as
atividades com os materiais infecciosos provocarem um menor risco
aos trabalhadores do que aquelas atividades associadas com a
manipulao de culturas, recomenda-se um nvel de biossegurana
menor. Por outro lado, se as atividades envolverem grandes volumes
e/ou altas concentraes (quantidades de produo) ou se as
manipulaes geralmente provocarem a formao de aerossis ou
que sejam intrinsicamente perigosos, podem ser indicados
precaues individuais especficas e de elevar os nveis de
conteno primria a secundria.
Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes Infecciosos e Animais Infectados
98
O termo quantidades de produo se refere a grandes vo-
lumes ou altas concentraes de agentes infecciosos considera-
dos volumosos em relao quelas usadas para a identificao e a
tipagem. A propagao e a concentrao dos agentes infecciosos,
como ocorre na fermentao em grande escala, na produo de
antgeno e de vacinas e em inmeras atividades comerciais e de
pesquisa, lidam claramente com massas significativas de agentes
infecciosos que so considerados quantidades de produo. Po-
rm, em termos de um risco potencialmente aumentado em funo
da massa de agentes infecciosos, impossvel definir como quan-
tidades de produo os volumes ou concentraes finitas de qual-
quer agente. Portanto, cabe ao diretor do laboratrio realizar uma
avaliao das atividades conduzidas e das prticas selecionadas,
dos equipamentos de conteno e das instalaes apropriadas ao
risco, independente do volume ou da concentrao do agente en-
volvido.
Haver casos em que o diretor do laboratrio ter que
selecionar um nvel de biossegurana maior que o recomendado.
Por exemplo, um nvel de biossegurana maior poder ser indicado
pela natureza nica da atividade proposta (por exemplo, a
necessidade de uma conteno especial para aerossis gerados
experimentalmente para estudos de inalao) ou pela proximidade
das reas de risco do laboratrio (por exemplo, um laboratrio de
diagnsticos localizado prximo s reas de atendimento de
pessoas). Da mesma forma, um nvel de bi ossegurana
recomendado pode ser adaptado para compensar a ausncia de
certas protees recomendadas. Por exemplo, nas situaes em
que recomendado Nvel de Biossegurana 3, pode-se conseguir
um nvel satisfatrio de proteo nas operaes rotineiras ou
repetitivas (por exemplo, procedimentos para diagnstico
envolvendo a reproduo de um agente para identificao, tipagem
e teste de susceptibilidade) nos laboratrios onde as caractersticas
construtivas satisfaam as recomendaes para o Nvel de
Biossegurana 2, providos das boas prticas microbiolgicas, de
prticas especiais e de equipamentos de segurana para que o
Nvel de Biossegurana 3 seja rigorosamente seguido.
Um exempl o envol ve o trabal ho com o vrus da
imunodeficincia humana (HIV). O trabalho de rotina para o
99
diagnstico do vrus com amostras clnicas pode ser feito com se-
gurana em um nvel de Biossegurana 2, usando as prticas e
os procedimentos do Nvel de Biossegurana 2. O trabalho de
pesquisa (incluindo co-cultivo, estudos de replicao do vrus, ou
manipulaes envolvendo o vrus concentrado) pode ser feito em
instalaes NB-2, usando as prticas e os procedimentos de NB-3.
As atividades de produo de vrus, incluindo as concentraes
vi rai s, requerem i nstal aes NB-3 e o uso de prti cas e
procedimentos de NB-3 (veja o resumo dos agentes).
A deciso de adaptar as recomendaes do Nvel de
Biossegurana 3, como foi feito no exemplo acima, dever ser
tomada somente pelo diretor do laboratrio. Essa adaptao, porm,
no indicada para as operaes ou atividades de produo de
agentes onde os procedimentos freqentemente so mudados. O
diretor do laboratrio tambm dever ter uma ateno especial ao
estabelecer procedimentos de segurana para os materiais que
possam conter um agente suspeito. Por exemplo, soro de origem
humana pode conter vrus da hepatite B e desta forma, todo o
sangue ou fluidos derivados do sangue devero ser manuseados
sob condies que evitem ao mximo a exposio cutnea, da
membrana mucosa ou parenteral do pessoal. O escarro enviado
ao laboratrio para o ensaio do bacilo da tuberculose dever ser
manipulado sob condies que evitem a formao de aerossis
durante a manipulao dos materiais clnicos ou das culturas.
Os agentes i nfecci osos que atendam os cri tri os
anteriormente estabelecidos esto relacionados pela categoria do
agente na Seo VII. Para usar esses sumrios, primeiro localize o
agente na lista atravs da categoria adequada ao mesmo. Segundo
utilize as prticas, os equipamentos de segurana e o tipo de
instalao recomendada nas relaes dos agentes como descrito
na Seo VII para o trabalho com materiais clnicos, culturas,
agentes infecciosos, ou animais infectados.
O diretor do laboratrio tambm ser o responsvel pela
avaliao dos riscos e pela utilizao adequada das prticas, dos
equipamentos de conteno e das instalaes para os agentes
no includos na lista dos agentes.
100
SEO VII
Relao dos Agentes
Seo VII-A: Agentes Bacterianos

Agente: Bacillus anthracis
Numerosos casos de carbnculo adquiridos no laboratrio
que acontecem primariamente em locais onde so conduzidas
pesquisas do antraz, tm sido relatados
1, 2
. Nenhum caso de antraz
que no esteja associado a laboratrio foi relatado nos Estados
Unidos desde o final dos anos 50 quando a vacina contra o
carbnculo foi introduzida. Nenhum trabalho com o B. anthracis
requer consideraes de segurana especiais devido ao seu uso
potencial no terrorismo biolgico. Os animais naturalmente e
experimentalmente infectados oferecem um risco potencial equipe
do laboratrio e aos tratadores de animais.
Riscos no Laboratrio: O agente pode estar presente no
sangue, em exudatos de leso de pele, no lquido cerebroespinhal,
no lquido pleural, no escarro e raramente na urina e fezes. O
contato direto e indireto da pele intacta e rachada com culturas e
superfcies laboratoriais contaminadas, inoculaes parenterais por
acidente e raramente atravs de aerossis infecciosos so
considerados como riscos primrios para os trabalhadores de um
laboratrio.
Precaues Recomendadas: As prticas, o equipamento de
conteno e as dependncias do Nvel de Biossegurana 2 devero
ser os procedimentos indicados para as atividades que utilizem
materiais clnicos e quantidades de culturas infecciosas para
diagnstico. As prticas, os equipamentos de conteno e as
dependncias do Nvel de Biossegurana Animal 2 so as
recomendadas para estudos que utilizem roedores de laboratrio
infectados experimentalmente. J as prticas, o equipamento de
conteno e as dependncias do Nvel de Biossegurana 3 so
i ndi cados para o trabal ho que envol va quanti dades ou
101
concentraes de produo de culturas, e para as atividades com
um alto potencial para a produo de aerossis.
Observao: Uma vacina licenciada est disponvel atravs
dos Centers for Disease Control and Prevention; porm, a
imunizao de toda a equipe no recomendada a no ser que o
freqente trabalho com amostras clnicas ou culturas para
diagnstico esteja previsto (por exemplo, laboratrio de diagnstico
de doena animal). Nestas dependncias, a imunizao
recomendada para todas as pessoas que trabalhem com o agente,
todas as pessoas que trabalhem na mesma sala do laboratrio onde
as culturas so manuseadas e para as pessoas que trabalhem com
animais infectados.
Transferncia do Agente: A licena para a importao deste
agente pode ser obtida junto com o CDC. J para exportao ligue
para o Department of Commerce. necessrio um registro do
laboratrio com o CDC antes de enviar ou receber esse agente.
Uma licena para importao ou transporte domstica pode ser
obtida atravs da USDA/APHIS/VS.
Agente: Bordetella pertussis
O Bordetella pertussis, um patgeno presente no sistema
respiratrio humano e de distribuio mundial, o agente causador
da coqueluche. A doena tipicamente uma doena que ocorre na
infncia; entretanto, o agente tem sido cada dia mais associado
com a doena em adultos
3, 4, 5
. Vrios surtos em trabalhadores da
rea da sade foram relatados na literatura
6, 7
. Adolescentes e
adultos com doena atpica ou sem diagnstico podem servir como
reservatrios da infeco e podem transmitir o patgeno para recm-
nascidos e crianas
8
. Oito casos de infeco em adultos pelo B.
pertussis foram documentados em um instituto de grandes
pesquisas. Os indivduos infectados no trabalhavam diretamente
com o microorganismo, mas possuam um acesso aos espaos em
comum de um laboratrio onde o agente era manipulado. Um caso
de transmisso secundria para uma pessoa da famlia foi tambm
documentado
9
. Um incidente semelhante ocorreu em uma grande
Relao dos Agentes Agentes Bacterianos
102
universidade do Meio-Oeste dos Estados Unidos que resultou em
dois casos documentados de infeco adquirida em laboratrio e
um caso documentado de transmisso secundria
10
. Outras
infeces com o B. pertussis adquiridas em laboratrio foram
relatadas, assim como a transmisso de adulto para adulto no local
de trabalho
11, 12
. As infeces adquiridas em laboratrios resultantes
de manipulao de amostras clnicas ou substncias isoladas no
foram relatadas. A incidncia desta infeco disseminada no ar
influenciada pela intimidade e freqncia da exposio de indivduos
susceptveis.
Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente em
secrees respiratrias, mas no encontrado no sangue ou tecido.
Uma vez que o modo de transmisso via respiratria, quanto maior
a gerao de aerossis durante a manipulao de culturas ou de
suspenses concentradas do agente, maior ser o risco.
recomendados para todas as ati vi dades que envol vam a
manipulao de materiais ou culturas conhecidamente ou
potencialmente infecciosas. J o Nvel de Biossegurana Animal 2
dever ser usado para o alojamento de animais. Os dispositivos e
equipamentos de conteno primria (por exemplo, cabines de
segurana biolgica, conchas de segurana para centrfugas ou
centrfugas de segurana especialmente projetadas) devero ser
utilizados para as atividades que provavelmente iro causar a
formao de aerossis potencialmente infecciosos. As prticas, os
procedimentos e as dependncias do Nvel de Biossegurana 3
so indicados para produes em grande escala.
Observao: As vacinas contra a coqueluche esto
disponveis, mas no so atualmente recomendadas para uso em
adultos. Sugerimos ao leitor consultar as recomendaes atuais
do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicada
no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para a
vacinao de adultos contra a coqueluche.
Transferncia do Agente: A licena de importao deste
agente dever ser obtida junto ao CDC.
103
Agente: Brucella (B. abortus, B. canis, B. melitensis, B. suis).
A Brucelose continua sendo a infeco bacteriana associada
a laboratrio mais comumente relatada
13, 14,15
. O B. abortus, o B.
canis, o B. melitensis e o B. suis tm provocado vrias doenas em
trabalhadores de laboratrios
16, 17,18
. A hipersensibilidade aos
antgenos da Brucella tambm prejudicial equipe do laboratrio.
Casos ocasionais tm sido atribudos exposio a animais
infectados experimentalmente ou naturalmente e aos seus tecidos.
Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente no
sangue, no lquido cerebroespinhal, no smen e ocasionalmente
na urina. A maioria dos casos associados a laboratrio ocorreu em
dependncias para pesquisas e envolveu a exposio ao agente
Brucella largamente produzido. Vrios casos em laboratrios clnicos
tambm foram constatados em cul turas bacteri ol gi cas
desprezadas
19
. O contato direto da pele com culturas ou com
amostras clnicas infecciosas de animais (por exemplo, sangue,
secrees uterinas) est comumente envolvido nestes casos. Os
aerossis formados durante os procedimentos laboratoriais tm
provocado grandes surtos
20, 21
. Pipetagem com a boca, inoculaes
parenterais acidentais e sprays lanados nos olhos, nariz e boca
tambm tm provocado infeces.
Precaues Recomendadas: Recomenda-se as prticas do
Nvel de Biossegurana 2 para atividades que envolvam amostras
clnicas de origem humana ou animal contendo ou potencialmente
contendo Brucella spp. patognico. J as prticas, o equipamento
de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 3 e do
Nvel de Bi ossegurana Ani mal 3 so recomendados,
respectivamente, para todas as manipulaes de culturas do
Brucella spp. patognico relacionadas neste resumo e para estudos
de animais experimentais.
Observao: Embora as vaci nas humanas contra a
brucelose tenham sido desenvolvidas e testadas em outros pases
com limitado sucesso, at o momento da publicao deste volume,
nenhuma vacina humana encontrava-se disposio nos Estados
Unidos
22
.
104
agente deve ser conseguida junto ao CDC e a licena de exportao
dever ser obtida no Department of Commerce. No caso de envio
ou recebimento deste agente necessrio obter um registro do
laboratrio com o CDC. A licena para importao ou transporte
domstico deste agente poder ser obtida no USDA/APHIS/VS.
Agente: Burkholderia pseudomallei (Pseudomonas
pseudomallei)
Dois casos de melioidose associados a laboratrio foram
relatados: um associado exposio massiva da pele aos aerossis;
e o segundo provocado pela formao de aerossis durante uma
destruio de uma cultura, que se supunha ser de Ps. Cepacia, em
frasco aberto atravs das ondas sonoras de alta freqncia
24
.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode estar presente no
escarro, sangue, exsudatos de um ferimento e em vrios tecidos,
dependendo do local da infeco. O contato direto com culturas e
materiais infecciosos de homens, animais ou do meio ambiente, a
ingesto, auto-inoculao e exposio aos aerossis e perdigotos
infecciosos so considerados como riscos primrios de um
laboratrio. O agente tem sido encontrado em sangue, escarro e
materiais de abscesso e pode estar presente em amostras de solo
e de gua de reas endmicas.
Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de
conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so
recomendadas para todas as atividades que envolvam lquidos
corporais, tecidos e culturas reconhecidamente ou potencialmente
infecciosas. Deve-se usar luvas ao manusear animais infectados
durante a necropsia e quando existir a possibilidade de contato
direto da pele com os materiais infecciosos destes animais. A
conteno primria e precaues pessoais adicionais, como quelas
descritas para o Nvel de Biossegurana 3, podem ser indicadas
para atividades com um alto potencial para produo de aerossis
ou perdigotos, e para as atividades envolvendo quantidades ou
concentraes de produo de materiais infecciosos. As vacinas
no se encontram atualmente a disposio para o uso em homens.
105
Transferncia do Agente: Entre em contato com o Department
of Commerce para uma licena de exportao do agente.
Agente: Campylobacter (C. jejuni/C. coli, C. fetus subsp. fetus).
O C. jejuni / C. coli gastroenteritis raramente a causa de
doenas associadas a laboratrio, embora alguns casos adquiridos
em laboratrios tenham sido documentados
25, 26,27
. Numerosos
animais domsticos e selvagens, incluindo aves, animais de
estimao, animais de fazenda, animais de laboratrio e pssaros
selvagens so reconhecidos como reservatrios e so uma fonte
potencial de infeco para as pessoas que cuidam destes animais
e que trabalham no laboratrio. Animais experimentalmente
infectados tambm so uma fonte potencial de infeco
28
.
Riscos em Laboratrio: As campylobacters patognicas
podem ser encontradas em amostras fecais em grande nmero. A
C. fetus subsp. fetus pode tambm estar presente no sangue,
exudatos de abscessos, tecidos e escarro. A ingesto ou inoculao
parenteral da C. jejuni constitui os riscos primrios de um laboratrio.
A ingesto oral de 500 microorganismos provocou uma infeco
em um indivduo
29
. A importncia da exposio aos aerossis no
conhecida.
recomendadas para atividades que envolvam culturas ou materiais
clnicos potencialmente infecciosos. As prticas, equipamento de
conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2
so recomendadas para atividades com animais experimentalmente
ou naturalmente infectados. As vacinas, atualmente, no se
encontram a disposio para o uso em humanos.
Transferncia do Agente: Para obteno de uma licena para
importao, entre em contato com o CDC.
Agente: Chlamidia psittaci, C. pneumoniae, C. trachomatis.
As infeces como a psitacose, tracoma e o linfogranuloma
venreo j foram, no passado, as infeces bacterianas mais
106
comuns associadas a laboratrio
30
. Em casos relatados antes de
1955
31
, a maioria das infeces diagnosticadas era de psitacose e
esta era a doena que apresentava o mais alto ndice de mortalidade
de agentes infecciosos adquiridos em laboratrio. O contato e a
exposio aos aerossis infecciosos ao manusear, cuidar ou realizar
necropsias em animais naturalmente ou experimentalmente
infectados so as maiores fontes de transmisso da psitacose
associada a laboratrio. Ratos e ovos infectados so fontes menos
importantes do C. psittaci. Os animais de laboratrio no so fontes
relatadas de infeco humana com o C. trachomatis.
Riscos em Laboratrio: A bactria C. psittaci pode estar
presente nos tecidos, fezes, secrees nasais e sangue de pssaros
infectados, e no sangue, escarro e tecidos de homens infectados.
A C. trachomatis pode estar presente nos lquidos genitais, bulbares
e conjuntivais de homens infectados. A exposio aos aerossis e
perdigotos infecciosos produzidos durante o manuseio de pssaros
e tecidos infectados o risco primrio para os trabalhadores de um
laboratrio que trabalham com a bactria psitacose. J os riscos
primrios em um laboratrio em relao ao C. trachomatis se
encontram na inoculao parenteral acidental e na exposio direta
ou indireta das membranas mucosas dos olhos, nariz e boca aos
lquidos genitais, bulbares e conjuntivais, aos materiais de culturas
de clulas e aos lquidos de ovos infectados. Os aerossis
infecciosos tambm podem ser uma fonte potencial de infeco.
conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so os
recomendados para atividades envolvendo a necropsia de pssaros
infectados e no diagnstico de tecidos ou de culturas conhecidas
por conterem ou por estarem potencialmente infectadas com a C.
psittaci ou a C. trachomatis. Para reduzirmos o risco de formao
de aerossis de fezes e secrees nasais infectadas contidas nas
asas e nas superfcies externas do pssaro, o melhor procedimento
molhar as asas dos pssaros infectados com um detergente-
desinfetante antes de realizar a necropsia. As prticas, o
equipamento de conteno, as instalaes e a proteo respiratria
do Nvel de Biossegurana Animal 2 so os procedimentos indicados
107
para as pessoas que realizam trabalhos com pssaros engaiolados
naturalmente ou experimentalmente infectados. Recomenda-se o
uso de luvas para a necropsia dos pssaros e ratos, para a abertura
de ovos inoculados e quando houver a possibilidade de contato
direto da pele com tecidos infectados, lquido bulbar e outros
materi ai s cl ni cos. As i nstal aes e prti cas do Nvel de
Biossegurana 3 so indicadas para as atividades com alto potencial
de produo de perdigotos ou aerossis e para as atividades
envolvendo grandes quantidades ou concentraes de materiais
infecciosos.
Observao: Atualmente, as vacinas para esses agentes no
se encontram disponveis para o uso humano.
Transferncia dos Agentes: Para obter uma licena para
exportao dos agentes, entre em contato com o Department of
Commerce.
Agente: Clostridium botulinum
Embora s exista um relatrio
32
sobre o botulismo associado
ao manuseio do agente ou da toxina no laboratrio ou no trabalho
com animais naturalmente ou experimentalmente infectados, as
conseqncias de tais intoxicaes ainda so consideradas bem
graves. O trabal ho com cul turas de C. botul i num requer
consideraes especiais de segurana devido ao uso potencial
destas culturas no terrorismo biolgico.
Riscos em Laboratrio: O C. botulinum ou a sua toxina pode
estar presente em uma variedade de produtos alimentcios, em
materiais clnicos (soro, fezes) e amostras do meio ambiente (solo,
gua de superfcie). A exposio toxina do C. botulinum
considerada o risco laboratorial primrio. Esta toxina pode ser
absorvida aps a ingesto ou contato posterior com a pele, ou com
as membranas mucosas, incluindo o trato respiratrio. A inoculao
parenteral acidental tambm representa uma significativa exposio
toxina. O crescimento das culturas em caldos quando sob tima
produo de toxina pode conter uma DL
50
de 2x 10
6
ratos por mL
34
.
108
conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so as
indicadas para todas as atividades com materiais conhecidos por
conter ou potencialmente conter a toxina. Um toxide pentavalente
do botulismo (ABCDE) encontra-se disponvel atravs dos Centers
for Disease Control and Prevention, como uma nova droga de
pesquisa (IND). Este toxide indicado para as pessoas que
trabalham com culturas de C. botulinum ou com suas toxinas.
Solues de hipoclorito de sdio (0.1%) ou de hidrxido de sdio
(0.1 N) inativam a toxina prontamente, e so recomendadas para a
descontaminao das superfcies de trabalho e perdigotos de
culturas ou de toxinas. Cuidados pessoais e conteno primria
adicional, como as recomendadas para o Nvel de Biossegurana
3, so indicadas para as atividades com um alto potencial para a
produo de aerossis ou perdigotos e para as atividades
envolvendo quantidades grandes de toxinas. As prticas,
equipamento de conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana
Animal 2 so indicadas para estudos de diagnsticos e titulao da
toxina.
Transferncia do Agente: Para obter uma licena de
importao para este agente, entre em contato com o CDC.
Agente: Clostridium tetani
Embora o risco de infeco da equipe do laboratrio seja
insignificante, cinco incidentes relacionados exposio do pessoal
durante a manipulao da toxina foram relatados
35
.
Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental e
a ingesto da toxina so consideradas como risco primrio para a
equipe laboratorial. Como no se tem certeza se a toxina pode ser
absorvida atravs das membranas mucosas, os riscos associados
aos aerossis e perdigotos ainda permanecem desconhecidos.
indicadas para atividades envolvendo a manipulao de culturas
109
ou toxinas. Embora o risco de ttano associado a laboratrio seja
baixo, a administrao de um toxide ttano-difteria adulto em
intervalos de 10 anos, reduz o risco de exposio toxina e de
contaminao por ferimento do pessoal do laboratrio e dos
tratadores de animais, e , portanto, altamente recomendada
36
. O
leitor dever consultar as atuais recomendaes do Advisory
Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC
Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para a vacinao
de adultos contra o C. tetani.
Transporte do Agente: Para obter uma licena de importao
para esse agente, entre em contato com o CDC e com o Department
of Commerce para uma licena de exportao. O registro do
laboratrio com o CDC ser necessrio antes do envio ou
recebimento deste agente.
Agente: Corynebacterium diphtheriae
As infeces com o C. diphteriae associadas a laboratrio
tm sido relatadas, mas as associadas a animais de laboratrio
ainda no foram relatadas
37
.
exudatos ou secrees de nariz, garganta (amdala), faringe, laringe,
ferimentos, sangue e sobre a pele. A inalao, a inoculao
parenteral acidental e a ingesto so os riscos primrios em um
laboratrio.
conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so as
indicadas para todas as atividades utilizando materiais clnicos ou
culturas potencialmente ou conhecidamente infectadas. J as
prticas do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para
estudos que utilizem animais de laboratrios infectados. Embora o
risco da difteria associado a laboratrio seja baixo, a administrao
de um toxide ttano-difteria adulto em intervalos de 10 anos pode
posteriormente reduzir o risco de exposies toxina e a trabalhos
com materiais infecciosos pela equipe do laboratrio e aos tratadores
110
de animais
38
. O leitor dever consultar as atuais recomendaes
do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas
no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para a
vacinao contra o C. diphteriae.
este agente, entre em contato com o CDC.
Agente: Escherichia coli (organismos produtores (VTEC/SLT)
de citotoxina)
As cepas produtoras de citotoxina (VTEC/SLT) da Escherichia
coli (tambm chamada de cepas enterohemorrgicas) so riscos
comprovados para as pessoas que trabalham em laboratrios nos
Estados Unidos e em outros locais
39, 40,41
. A sndrome urmica
hemoltica ocorre em uma pequena proporo de pacientes
(geralmente crianas) e a responsvel pela maioria das mortes
associadas s infeces com esses organismos. Os animais
domsticos de fazendas (em particular os bovinos) so reservatrios
significativos do organismo. Porm, os pequenos animais
experimentalmente infectados tambm so fontes de infeces no
laboratrio.
Riscos em Laboratrio: A E. coli enterohemorrgica
geralmente isolada nas fezes. Uma grande variedade de alimentos
contaminados com esses agentes pode servir como veculo de
transmisso e incluem a carne moda crua e produtos de laticnio
no pasteurizados. Ela raramente encontrada no sangue de
homens e animais infectados. A ingesto o risco laboratorial
primrio. A importncia da exposio aos aerossis ainda no
conhecida.
conteno e as instalaes do nvel de Biossegurana 2 so as
indicadas para todas as atividades utilizando materiais clnicos ou
culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosos. J as
prticas do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para as
atividades com animais naturalmente ou experimentalmente
111
infectados. Atualmente, as vacinas para uso em homens no se
encontram a disposio. O leitor deve consultar as recomendaes
atualizadas do ACIP relacionadas no CDC Morbidity and Mortality
Weekly Report (MMWR) sobre a existncia de indicaes para a
vacinao contra cepas enterohemorrgicas de E. coli.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste
agente dever ser obtida no CDC.
Agente: Francisella tularensis
A tularemia tem sido uma infeco bacteriana associada a
laboratrio comumente relatada
42
. Quase todos os casos ocorreram
nas dependncias onde a pesquisa da tularemia estava sendo
realizada. Casos ocasionais tm sido relacionados ao trabalho com
animais naturalmente ou experimentalmente infectados ou seus
ectoparasitas. Embora no tenha sido relatado, existem casos que
ocorreram em laboratrios. O trabalho com culturas de F. tularensis
requer uma segurana especial devido ao seu potencial uso no
terrorismo biolgico.
exudatos de l eses, secrees respi ratri as, l qui do
cerebroespinhal, sangue, urina, tecidos de animais infectados e
lquidos de artrpodes infectados. O contato direto da pele ou de
membranas mucosas com materiais infecciosos, inoculao
parenteral acidental, ingesto e exposio aos aerossis e
perdigotos infecciosos resultaram em infeco. A infeco tem sido
mais comumente associada s culturas do que aos materiais clnicos
e animais infectados. A dose 25% a 50% infecciosa para homens
de aproximadamente 10 microorganismos pela via respiratria
43
.
indicadas para as atividades com materiais clnicos de origem
humana ou animal contendo ou potencialmente contendo Francisella
tularensis. J as prticas, equipamento de conteno e as
i nstal aes do Nvel de Bi ossegurana 3 e do Nvel de
112
Biossegurana Animal 3 so indicadas, respectivamente, para to-
das as manipulaes de culturas e para estudos de animais expe-
rimentais.
Observao: A vacinao contra a F. tularensis encontra-
se a di sposi o para a popul ao e deve ser l evada em
considerao para as pessoas que trabalham com materiais
i nfecci osos ou roedores i nfectados. A vaci na tambm
recomendada para as pessoas que trabalham com o agente ou
animais infectados e para aquelas que trabalham dentro ou que
entram no laboratrio ou na sala para animais onde as culturas ou
animais infectados esto sendo mantidos
44
. O leitor dever consultar
as recomendaes atualizadas do Advisory Committee on
Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and
Mortality Weekly Report (MMWR) sobre as recomendaes para
vacinas contra a F. tularensis.
Transferncia do Agente: Para obteno de licena para
importao do agente, entre em contato com o CDC. Se a licena
for para exportao deste agente, entre em contato com o
Department of Commerce. O registro do laboratrio com o CDC
necessrio antes do envio ou recebimento deste agente.
Agente: Heliobacter pylori
Desde a sua descoberta em 1982, a Heliobacter Pylori tem
recebido uma grande ateno como um agente causador da
gastrite
45
. O habitat principal do H. pylori a membrana mucosa
gstrica humana. A infeco com este agente pode ser longa quanto
durao, com poucos ou nenhum sintoma, ou pode-se apresentar
como uma doena gstrica aguda. Tanto as infeces humanas
associadas a laboratrios experimentais ou as acidentais foram
relatadas
46, 47
. O agente pode estar presente nas secrees gstricas
ou orais e nas fezes. A transmisso, embora no seja completamente
clara, acredita-se ser atravs da via oral-fecal ou oral-oral.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode ser encontrado nas
secrees gstricas e orais ou nas fezes. A ingesto o principal
113
risco dentro de um laboratrio. A importncia da exposio aos
aerossis desconhecida.
indicadas para as atividades com materiais clnicos e culturas
conhecidamente ou potencialmente infectados por este agente. J
as prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel
de Biossegurana Animal 2 so indicadas para atividades com
animais naturalmente ou experimentalmente infectados. Atualmente,
as vacinas no se encontram a disposio para o uso em homens.
Transferncia do Agente: A licena para importao do agente
poder ser obtida atravs do CDC.
Agente: Leptospira interrogans todos os sorotipos
A leptospirose um risco laboratorial muito bem documentado.
Pike relatou 67 infeces associadas a laboratrio e 10 mortes
48
, e
ainda trs casos foram relatados em outros locais
49
.
Um coelho infectado experimentalmente foi identificado como
uma fonte de contami nao do L. i nterrogans soroti po
icterohemorrhagiae
50
. O contato direto e indireto com lquidos e
tecidos de mamferos naturalmente ou experimentalmente infectados
durante o manuseio, o cuidado, ou a necropsia uma fonte
potencial de infeco. Em animais com infeces renais crnicas, o
agente encontrado na urina em numerosas quantidades por longos
perodos.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado na
urina, sangue e tecidos de animais e homens infectados. A ingesto,
a inoculao parenteral acidental e o contato direto ou indireto da
pele ou da membrana mucosa com culturas, tecidos ou lquidos
corporais infectados especialmente a urina so considerados
riscos laboratoriais primrios. Ainda no se conhece a importncia
da exposio aos aerossis.
114
indicadas para todas as atividades que envolvam o uso ou a mani-
pulao de tecidos, lquidos corporais e culturas conhecidamente
ou potencialmente infecciosas e para o alojamento de animais
infectados. Recomenda-se o uso de luvas para o manuseio e a
necropsia de animais infectados e quando houver uma possibilida-
de de contato direto da pele com os materiais infectados.
Atualmente, as vacinas contra este agente no se encontram a
disposio para uso em homens.
Transferncia de Agentes: Uma licena para importao
destes agentes poder ser obtida junto ao CDC. Uma licena para
importao ou transporte domstico deste agente poder ser obtida
no USDA/APHIS/VS.
Agente: Listeria monocytogenes
A Listeria monocytogenes oferece um risco potencial para a
equipe de laboratrio. Os bacilos aerbicos, gram-positivos e no
formadores de esporos so hemolticos e catalase positivos
51
. As
bactrias tm sido isoladas no solo, poeira, alimento humano,
animais e humanos assintomticos
52, 53
. A maioria dos casos de
l i sterose aconteceram devi do i ngesto de al i mentos
contaminados, mais notavelmente de queijos suaves, carne crua e
vegetais crus no lavados
54
. Embora adultos e crianas saudveis
possam contrair a infeco por Listeria, elas geralmente no
adquirem uma doena sria. J as mulheres grvidas, os recm-
nascidos e as pessoas com um sistema imune deficiente fazem parte
do grupo de risco e adquirem a forma grave da doena.
Riscos em Laboratrio: A Listeria monocytogenes pode ser
encontrada nas fezes, lquido cerebroespinhal e no sangue, assim
como em alimentos e materiais provenientes do meio ambiente
55, 56
.
Os animais naturalmente ou experimentalmente infectados so uma
fonte de exposio aos trabalhadores de laboratrio e as pessoas
que zelam dos animais, e para outros animais. A ingesto o modo
de exposio mais provvel, mas a Listeria tambm pode causar
infeces nos olhos e na pele aps uma exposio direta. As
infeces causadas por este agente em mulheres grvidas ocorrem
115
com mais freqncia no terceiro semestre e podem precipitar o
parto. A transmisso transplacentria deste agente oferece um grave
risco ao feto e pode at resultar em um abscesso disseminado,
contribuindo para o ndice de mortalidade de aproximadamente
100%
57
.
indicadas para todas as atividades com amostras clnicas e culturas
reconhecidas ou suspeitas de conterem o agente. Recomenda-se
o uso de luvas e proteo para os olhos ao manusear culturas
infectadas. As prticas, equipamento de conteno e as instalaes
do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para atividades
com animais naturalmente ou experimentalmente infectados.
Atualmente, as vacinas no se encontram a disposio para uso
humano
58
. Mulheres grvidas que trabalham com este agente em
um laboratrio de diagnstico ou de pesquisa devero ser
informadas sobre os riscos potenciais associados ao agente,
incluindo os riscos potenciais para o feto.
Transferncia do Agente: Uma licena para importao ou
transporte domstico deste agente poder ser obtida atravs do
USDA/APHIS/VS.
Agente: Legionella pneumophila, outros agentes semelhantes
a Legionella.
Devido a uma presumida exposio aos aerossis ou
perdigotos durante estudos animais com o agente da Febre de
Pontiac (L. pneumophilia), um nico documento apresentando um
caso de legionelose associado a laboratrio foi relatado
59
. A
transmisso de homem para homem ainda no foi documentada.
As infeces experimentais so prontamente produzidas em
cobaias e ovos de galinha embrionrios
60
. Coelhos de laboratrios
tambm desenvolvem anticorpos, mas no a doena clnica,
enquanto que os camundongos so resistentes a exposio
parenteral. Estudos no publicados dos Centers for Disease Control
116
and Prevention mostram que a transmisso de animais para ani-
mais no acontece em uma variedade de espcies mamferas e
avcolas experimentalmente infectadas.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode ser encontrado no
lquido pleural, tecido, escarro e fontes do meio ambiente (por
exemplo, gua de torre). Uma vez que o modo natural de transmisso
aparentemente via area, o maior risco potencial a produo
de aerossis durante a manipulao de culturas ou de outros
materi ai s que contenham uma grande concentrao de
microorganismos infecciosos (por exemplo, tecidos e o saco vitelino
infectado).
conteno e as instalaes do nvel de Biossegurana 2 so
indicadas para todas as atividades envolvendo o uso ou a
manipulao de materiais clnicos ou de culturas sabiamente ou
potenci al mente i nfecci osas. J as prti cas do Nvel de
Biossegurana 3 com dispositivos de conteno primrios e
equipamentos (por exemplo, cabines de segurana biolgica,
conchas de segurana em centrfugas) so usadas para atividades
que possivelmente produzem aerossis potencialmente infecciosos
e para as atividades que envolvam quantidades de produo de
microorganismos.
Observao: Atualmente, as vacinas para uso em homens
no se encontram a disposio.
Transferncia do Agente: A obteno de uma licena para
importao deste agente dever ser feita atravs do CDC.
Agente: Mycobacterium leprae
A transmisso parenteral acidental da lepra de homens para
homens tem sido relatada aps a contaminao de um cirurgio
atravs de uma picada acidental de uma agulha
61
, e atravs do uso
de uma agulha para tatuagem provavelmente contaminada
62
. No
existem casos relatados que tenham sido provocados pelo trabalho
117
em um laboratrio envolvendo bipsias ou outros materiais clnicos
de ori gem humana e ani mal . Embora a l epra que ocorre
naturalmente ou as doenas semelhantes lepra tenham sido
relatadas em tatus
63
e em primatas no humanos
64, 65
, o ser humano
o nico reservatrio importante desta doena.
Riscos em Laboratrio: O agente infeccioso pode ser
encontrado em tecidos e exudatos de leses de homens infectados
e em animais naturalmente ou experimentalmente infectados. O
contato direto da pele e das membranas mucosas com materiais e
inoculaes parenterais acidentais infecciosas considerado risco
primrio de um laboratrio, associado com o manuseio de materiais
clnicos infecciosos.
indicadas para todas as atividades com materiais clnicos
sabidamente ou potencialmente infecciosos de homens e animais
infectados. Um cuidado especial deve ser tomado para evitar uma
inoculao parenteral acidental com instrumentos cortantes
contaminados. As prticas, equipamento de conteno e as
instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para
estudos animais que utilizem roedores, tatus e primatas no
humanos. Atualmente, as vacinas para uso em humanos no se
encontram a disposio.
importao deste agente dever ser feita atravs do CDC.
Agente: Mycobacterium spp. diferente do M. tuberculosis, M.
bovis ou M. leprae.
Pike relatou 40 casos de tuberculose no-pulmonar que se
acreditava estar relacionada a acidentes ou incidentes ocorridos
no laboratrio ou na sala de autpsia
66
. Provavelmente, essas
infeces eram provocadas por um outro tipo de micobactria que
no a M. tuberculosis ou a M. bovis. Um nmero de micobactrias
que so ubquas na natureza associado com outras doenas que
118
no a tuberculose ou a lepra em homens, animais domsticos e
selvagens. Em relao s caractersticas, esses organismos so
infecciosos, mas no so contagiosos. J clinicamente, as doenas
associadas com as infeces por essas atpicas bactrias podem
ser divididas, em geral, em trs categorias:
1. Doenas semelhantes tuberculose, que podem estar
associadas com a infeco pelo complexo M. kansasii,
M. avium e raramente pelos M. xenopi, M. malmoense, M.
asiaticum, M. simiae e M. szulgai.
2. Limfadenitis, que podem estar associadas com a infeco
pelo complexo M. scrofulaceum, M. avium e raramente
pelo M. fortuitum e M. kansasii.
3. lceras de pele e infeces de ferimentos do tecido
mole, que podem estar associadas com infeco pelo M.
ulcerans, M. marinum, M. fortuitum e M. chelonei.
Riscos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados
no escarro, exudatos de leses, tecidos e em amostras do meio
ambiente (por exemplo, solo e gua). O contato direto da pele ou
da membrana mucosa com materiais infecciosos, ingesto e
inoculao parenteral acidental o risco primrio laboratorial
associado aos materiais clnicos e s culturas. Um risco de infeco
potencial aos trabalhadores de laboratrio tambm oferecido pelos
aerossis infecciosos criados durante a manipulao do caldo de
culturas ou homogeneizao de tecidos contendo esses organismos
associados com a doena pulmonar.
indicadas para atividades com materiais clnicos e culturas de
Mycobacterium spp. com exceo dos tipos M. tuberculosis ou M.
bovis. As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do
Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para estudos animais
com a micobactria que no a M. tuberculosis, M. bovis ou M. leprae.
Atualmente, as vacinas para uso humano ainda no se encontram
disponveis.
119
importao do agente dever ser feita atravs do CDC.
Agente: Mycobacterium tuberculosis, M. bovis.
As infeces com a Mycobacterium tuberculosis e a M. bovis
(incluindo a BCG) so um risco comprovado aos trabalhadores de
laboratrio assim como para outras pessoas que podem estar
expostas aos aerossis infecciosos no laboratrio
67, 68, 69, 70,71
. A
incidncia da tuberculose em pessoas que trabalham com a M.
tuberculosis em laboratrio tem sido relatada como sendo trs vezes
maior do que em pessoas que no trabalham com o agente.
Pri matas no-humanos i nfectados natural mente ou
experimentalmente so uma fonte comprovada de infeco humana
(por exemplo, o ndice de converso anual de tuberculina em
pessoas que trabalham com primatas no-humanos infectados
de aproximadamente 70/10. 000 se comparada ao ndice de menos
de 3/10. 000 da populao em geral)
73
. Cobaias ou camundongos
experimentalmente infectados no oferecem o mesmo risco, uma
vez que ncleos em perdigotos no so produzidos pela tosse nestas
espcies; porm, o dejeto de animais infectados pode se tornar
contaminado e servir como uma fonte de aerossis infecciosos.
Riscos em Laboratrio: Os bacilos da tuberculose podem ser
encontrados no escarro, lquidos de lavagem gstrica, lquido
cerebroespinhal, urina e nas leses em vrios tecidos
74
. A exposio
aos aerossis produzidos em laboratrio o risco mais importante
encontrado. Os bacilos da tuberculose podem sobreviver em
esfregaos fixados com o calor
75
e podem ser nebulizados na
preparao de seces congeladas e durante a manipulao de
culturas lquidas. Devido baixa dose infecciosa do M.tuberculosis
para homens (i.e., DI
50
< 10 bacilos) e, em alguns laboratrios, um
alto ndice de isolamento de organismos resistentes ao cido
originado de amostras clnicas (>10%)
76
, o escarro e outras amostras
clnicas de casos de tuberculose suspeitos ou j comprovados deve
ser considerados potencialmente infecciosos e manipulados com
os adequados cuidados.
conteno e as instalaes do nvel de Biossegurana 2 so
120
indicadas para as manipulaes de materiais clnicos que no pro-
duzam aerossis como a preparao de esfregaos cido-resis-
tentes. Todas as atividades que formem aerossis devero ser
conduzidas em cabines de segurana biolgicas Classe I ou II. Re-
comenda-se o uso de uma bandeja para aquecer a lmina ao
invs de sec-la em um Bico de Bunsen. A liquidificao ou a
concentrao do escarro para a colorao cido-resistente pode
tambm ser conduzida de forma segura em uma bancada aberta,
tratando, primeiramente, a amostra (em uma cabine de segurana
Classe I ou II) com um igual volume de soluo de hipoclorito de
sdio a 5% (branqueamento domstico no diludo) e depois
esperando 15 minutos antes da centrifugao
77, 78
.
As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do
Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para atividades laboratoriais
na propagao e manipulao de culturas de M. tuberculosis ou
M. bovis, e para estudos animais que utilizem primatas no-humanos
natural mente ou experi mental mente i nfectados com a M.
tuberculosis ou a M. bovis. Estudos animais utilizando cobaias ou
camundongos podem ser conduzi dos em um Nvel de
Biossegurana Animal 2
79
.
Observao: O teste cutneo com uma protena purificada
derivada (PPD) de pessoas que trabalham em laboratrios e que
apresentem um teste cutneo negativo podem ser usados como
um procedimento de vigilncia. Uma vacina de vrus vivo atenuado
(BCG) encontra-se a disposio, mas no usada nos Estados
Unidos para equipes de laboratrio. O leitor deve consultar as
recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization
Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly
Report (MMWR) para as recomendaes atuais para vacinao.
importao deste agente conseguida no CDC. J a licena para
importao e transporte domstico do M. bovis deve ser obtida
atravs do USDA/APHIS/VS.
Agente: Neisseria gonorrhoeae
As infeces gonoccicas associadas a laboratrio tm sido
relatadas nos Estados Unidos
80
.
121
Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado
em exudatos cervicais, uretrais e conjuntivais, lquido sinovial, urina,
fezes e lquido cerebroespinhal. A inoculao parenteral acidental
e o contato direto ou indireto da membrana mucosa com materiais
infecciosos so os riscos primrios laboratoriais conhecidos. A
importncia dos aerossis no foi ainda determinada.
indicadas para todas as atividades que envolvam o uso ou a
manipulao de materiais clnicos ou de culturas. Recomenda-se o
uso de luvas ao manipular animais laboratoriais infectados e quando
houver a possibilidade do contato direto da pele com os materiais
infecciosos. Cuidados de conteno primria ou pessoal, como as
descritas para o Nvel de Biossegurana 3, podem ser indicados
para a produo de perdigotos ou aerossis e para as atividades
envolvendo quantidades de produo ou concentraes de
materiais infecciosos. As vacinas, atualmente, no esto disponveis
para uso em humanos.
Transferncia do Agente: A obteno e uma licena para
importao deste agente devero ser feitas atravs do CDC.
Agente: Neisseria meningitis
A meningite meningoccica um risco demonstrado, mas raro
de ocorrer com trabalhadores de laboratrio
81, 82,83
.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado em
exudatos faringneos, lquido cerebroespinhal, sangue e saliva. A
inoculao parenteral, a exposio da membrana mucosa a
perdigotos e a ingesto so os riscos primrios para a equipe do
laboratrio.
indicadas para todas as atividades que utilizem lquidos corpreos,
tecidos e culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosas.
122
Precaues pessoais e de conteno primria adicional, como as
descritas para o Nvel de Biossegurana 3, podem ser indicadas
para atividades com um alto risco potencial para formao de
perdigotos ou aerossis, e para as atividades que envolvam
quantidades de produo ou concentraes de materiais infecciosos.
Observao: As vacinas para a N. meningitidis esto
disponveis e devem ser consideradas para as pessoas que
trabalham regularmente com materiais infecciosos. O leitor deve
consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on
Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and
Mortality Weekly Report (MMWR) para as recomendaes sobre
vacinao contra a N. meningitidis.
Transferncia de Agentes: A obteno de uma licena para
importao deste agente deve ser feita atravs do CDC.
Agente: Salmonella todos os sorotipos com exceo do typhi
A salmonelose um risco documentado para as pessoas que
trabalham em uns laboratrio84, 85,86. Os hospedeiros -
reservatrios primrios incluem um amplo espectro de animais
domsticos e selvagens incluindo os pssaros, mamferos e rpteis,
sendo que todos podem servir como uma fonte de infeco para a
equipe laboratorial.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado nas
fezes, sangue, urina e em alimentos, raes e materiais provenientes
do meio ambiente. A ingesto ou a inoculao parenteral um
perigo primrio para um laboratrio. A importncia da exposio
aos aerossis ainda desconhecida. Animais naturalmente ou
experimentalmente infectados so uma fonte potencial de infeco
para funcionrios do laboratrio e para os que tratam dos animais,
alm de serem perigosos para outros animais tambm.
indicadas para as atividades com materiais clnicos e culturas
123
conhecidas por possurem ou potencialmente conterem os agen-
tes. As prticas, equipamento de conteno e instalaes do Nvel
de Biossegurana Animal 2 so recomendadas para atividades com
animais naturalmente ou experimentalmente infectados. As vacinas
ainda no se encontram a disposio da populao.
agente deve ser obtida atravs do CDC.
Agente: Salmonella typhi
A febre tifide um risco comprovado para pessoas que
trabalham em laboratrio
87, 88,89
.
nas fezes, sangue, vescula biliar (bile) e urina. O ser humano o
nico reservatrio conhecido da infeco. A ingesto e a inoculao
parenteral do agente representam o risco primrio em laboratrio.
No se conhece ainda a importncia da exposio aos aerossis.
indicadas para todas as atividades que utilizem materiais clnicos e
culturas sabidamente ou potencialmente infecciosas. As prticas
do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para atividades que
possivelmente provoquem a formao de aerossis ou de atividades
que envolvam quantidades de produo de microorganismos.
As vacinas para a S. typhi esto disponveis no mercado e
devem ser consi deradas para as pessoas que trabal hem
regularmente com materiais potencialmente infecciosos. O leitor
deve consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee
on Immunization Practices (ACIP) publicadas pelo CDC Morbidity
and Mortality Weekly Report (MMWR) para as recomendaes sobre
a vacinao contra a S. typhi.
Transferncia do Agente: A licena para importao pode
ser conseguida atravs do CDC.
124
Agente: Shiguella spp.
A shigelose um risco comprovado aos trabalhadores de um
laboratrio, com dzias de casos relatados s nos Estados Unidos
e Gr-Bretanha
90, 91, 92,93
. Embora surtos tenham ocorrido em primatas
no-humanos em cativeiro, somente o ser humano considerado
um reservatrio significativo da infeco. Porm, cobaias, outros
roedores e primatas no-humanos experimentalmente infectados
tambm so fontes comprovadas de infeco.
nas fezes e raramente no sangue de animais e humanos infectados.
A ingesto e a inoculao parenteral do agente so os riscos
primrios de um laboratrio. A dose oral 25%-50% infecciosa do
agente da S. flexneri para humanos de aproximadamente 200
microorganismos
94
. Ainda no se sabe a importncia da exposio
aos aerossis deste agente.
Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento e as
instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas
as atividades que utilizem materiais clnicos ou culturas sabidamente
ou potencialmente infecciosas. J as prticas e instalaes do Nvel
de Biossegurana Animal 2 so indicadas para atividades com
animais infectados experimentalmente ou naturalmente. As vacinas
no se encontram a disposio no mercado para uso em homens.
Transferncia do Agente: A licena para a exportao deste
agente dever ser obtida no Department of Commerce.
Agente: Treponema pallidum
A sfilis um risco comprovado para as pessoas de um
laboratrio que manipulam ou coletam materiais clnicos de leses
cutneas. Pike relacionou 20 casos desta infeco associada a
laboratrio
95
. O ser humano o nico reservatrio conhecido deste
agente. Um exemplo o caso onde o agente foi transmitido a um
indivduo da equipe de um laboratrio que trabalhava com uma
suspenso concentrada do T. pallidum obtido de um coelho com
125
orquite experimental
96
. A transferncia hematognica da sfilis tem
ocorrido atravs da transfuso de uma unidade de sangue fresco
obtida de um paciente com sfilis secundria. O T. pallidum se
encontra presente na circulao durante a sfilis primria e
secundria. O nmero mnimo de organismos do T. pallidum (DL
50
)
necessrios para infectar um indivduo atravs de uma injeo
subcutnea de 23
97
. A concentrao do T. pallidum no sangue de
pacientes durante o incio da sfilis, porm, ainda no foi
determinada.
Nenhum caso de infeco associado a laboratrios animais
foi relatado at o momento; porm cepas do T. pallidum (Nichols e
possivelmente outras) adaptadas a coelhos conservaram suas
virulncias em homens.
em materiais coletados de leses cutneas, de membranas
mucosas primrias e secundrias e no sangue. A inoculao
parenteral acidental, o contato das membranas mucosas e de pele
lesada com os materiais infecciosos e possivelmente com aerossis
infecciosos so os riscos primrios para as pessoas que trabalham
em laboratrio.
indicadas para todas as atividades que envolvam o uso ou a
manipulao de sangue ou material de leses de homens ou de
coelhos infectados. Recomenda-se o uso de luvas quando houver
a possibilidade do contato direto da pele com os materiais da leso.
O monitoramento sorolgico peridico deve ser considerado para
pessoas que trabalham com materiais infecciosos. As vacinas,
atualmente, no se encontram disponveis para o uso em humanos.
de ver ser obtida atravs do CDC.
Agente: Vibrionic enteritis (Vibrio cholerae, V.
parahaemolyticus).
A enterite vibrinica causada pelo Vibrio cholerae ou pelo
Vibrio parahaemolyticus uma doena associada a laboratrio
126
documentada, mas rara
98
. Os animais naturalmente ou experimen-
talmente infectados so uma fonte potencial de infeco.
Riscos em Laboratrio: Os vibries patognicos podem ser
encontrados nas fezes. A ingesto do V. cholerae e a ingesto ou
inoculao parenteral de outros vibries constituem os riscos
primrios laboratoriais. A dose infecciosa oral humana de
aproximadamente 10
6
organismos
99
. A importncia da exposio aos
aerossis ainda desconhecida. O risco de infeco aps uma
exposio oral pode ser aumentado em indivduos aclordricos.
indicadas para atividades com culturas ou materiais clnicos
potencialmente infecciosos. J as prticas, equipamento de
conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2
so indicados para atividades com animais naturalmente ou
experimentalmente infectados. Embora existam vacinas contra a
clera, no se recomenda o uso rotineiro pela equipe laboratorial.
O leitor deve consultar as atuais recomendaes do Advisory
Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) sobre as
recomendaes para a vaci nao humana contra V.
parahaemolyticus.
Transferncia do Agente: A licena para exportao deste
agente dever ser obtida atravs do Department of Commerce.
Agente: Yersinia pestis
A peste um risco laboratorial comprovado, mas raro. Nos
Estados Unidos h relatos desta infeco
100, 101
. O trabalho com o Y.
pestis requer consideraes especiais de segurana devido ao seu
alto uso potencial no terrorismo biolgico.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode ser encontrado no
lquido bulbar, sangue, escarro, lquido cerebroespinhal, fezes e
urina humana, dependendo da forma clnica e estgio da doena.
127
Os riscos primrios para a equipe do laboratrio se constituem do
contato direto com culturas e materiais infecciosos de homens ou
animais, aerossis ou perdigotos infecciosos produzidas durante a
manipulao de culturas e de tecidos infectados. Na necropsia de
roedores, o risco primrio para a equipe laboratorial inclui a
inoculao parenteral acidental, a ingesto e a picada de pulgas
infectadas coletadas em roedores.
indicadas para todas as atividades que envolvam o manuseio de
materiais clnicos e culturas potencialmente infecciosas. Deve-se
tomar um cuidado especial para evitar a produo de aerossis de
materi ai s i nfecci osos e durante a necropsi a de roedores
naturalmente ou experimentalmente infectados. Recomenda-se o
uso de luvas ao manusear roedores de laboratrio coletados no
campo ou infectados e quando houver a possibilidade do contato
direto da pele com os materiais infecciosos. A necropsia de roedores
idealmente conduzida em uma cabine de segurana biolgica.
Precaues individuais e de conteno primria adicional, como as
descritas para o Nvel de Biossegurana 3, so recomendadas para
atividades com um alto potencial para formao de perdigotos ou
aerossis, para o trabalho com cepas resistentes a antibiticos e
para as atividades envolvendo quantidades ou concentraes de
produo de materiais infecciosos.
Observao: A vacina para o Y. pestis est disposio
para uso em humanos e deve ser usada pela equipe do laboratrio
que trabalha com materiais infecciosos ou roedores infectados. O
leitor deve consultar as recomendaes atuais do Advisory
Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para maiores
informaes sobre a vacinao contra o Y. pestis.
agente dever ser obtida atravs do CDC. J a licena para
exportao deve ser conseguida atravs do Department of
Commerce. necessrio o registro do laboratrio junto ao CDC
antes do envio ou recebimento deste agente.
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133
Seo VII-B: Agentes Fngicos

Agente: Blastomyces dermatitidis
Infeces locais associadas a laboratrio tm sido relatadas
aps a inoculao parenteral acidental com tecidos ou culturas
infectadas contendo formas da B. dermatitidis semelhantes
levedura
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8
. Infeces pulmonares ocorreram depois de
uma suposta inalao de condios; duas pessoas desenvolveram
pneumonia e uma apresentou uma leso osteoltica de onde se
retirou amostra da. B. dermatitis para cultura
9,10
. Provavelmente,
as infeces pulmonares esto associadas somente s formas
semelhantes levedura formadoras de esporos (condio).
Riscos em Laboratrio: Formas semelhantes a leveduras
podem ser encontradas nos tecidos de animais infectados e em
amostras clnicas. A inoculao parenteral (subcutnea) destes
materiais pode provocar granulomas locais. As culturas das formas
fngicas da B. dermatitidis contendo condios infecciosos, solo
processado ou outras amostras ambientais podem oferecer um risco
quanto exposio aos aerossis.
Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do
Nvel de Biossegurana 2 e Nvel de Biossegurana Animal 2 so
indicadas para as atividades com materiais clnicos, tecidos animais,
culturas, amostras ambientais e animais infectados.
agente dever ser obtida atravs do CDC. O registro do laboratrio
junto ao CDC dever ser obtido antes do envio ou recebimento
deste agente.
Agente: Coccidioides immitis
A coccidioidomicose adquirida em laboratrio um risco
documentado
11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22
. Smith relatou que de 31
infeces adquiridas em laboratrios da sua instituio, 28 (90%)
resultaram em uma doena clnica, onde mais da metade destas
infeces adquiridas na natureza eram assintomticas
23
.
134
Riscos em Laboratrio: Devido ao tamanho (2-5 milimicrons),
os artrocondios tendem a ser prontamente espalhados no ar e
retidos nos profundos espaos pulmonares. Quanto maior o
tamanho da esfrula (30-60 milimcrons) mais reduzida ser a
eficcia desta forma de fungo como um patgeno areo.
As esfrulas dos fungos podem estar presentes em amostras
clnicas e tecidos animais. J os artrocondios infecciosos so
encontrados em culturas e solo mofados ou em outras amostras de
locais naturais. A inalao do artrocondio contido nas amostras
ambientais ou nas culturas da forma fngica um perigo srio dentro
de um laboratrio. Um risco terico dentro de um laboratrio
imposto por amostras clnicas ou tecidos de animais ou homens
infectados que foram armazenados ou embalados de forma a
produzir a germinao de artrocondios. H um nico relatrio sobre
um veterinrio com uma coccidiodomicose que se iniciou 13 dias
depois da autpsia de um cavalo com esta infeco, embora o
veterinrio morasse em uma rea endmica
24
. A inoculao
percutnea acidental da esfrula pode resultar na formao de um
granuloma local
25
. A doena disseminada ocorre com uma freqncia
muito maior em negros e em filipinos do que em brancos.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para o manuseio e
processamento de amostras clnicas, identificao isolada e
processamento dos tecidos animais. J as prticas e as instalaes
do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para estudos de
experimentao animal quando a via de transmisso do agente a
via parenteral.
As prticas e as instalaes do Nvel de Biossegurana 3
so indicadas para a reproduo e manipulao de culturas que
formam esporos j identificados como C. immitis, e para o
processamento de solo ou outros materiais do meio ambiente que
contenham ou possivelmente contenham artrocondios infecciosos.
Transferncia do Agente: a licena para importao deste
agente dever ser obtida atravs do CDC. O registro do laboratrio
dever ser obtido junto ao CDC antes do envio ou recebimento
deste agente.
Relao dos Agentes Agentes Fngicos
135
Agente: Cryptococcus neoformans
A inoculao acidental de uma pesada quantidade de
Cryptococcus neoformans nas mos de um trabalhador de
laboratrio ocorreu durante a injeo ou a necropsia de animais de
laboratrios
26, 27
. Mas no houve a formao de um granuloma local
e nem uma leso, sugerindo uma baixa patogenicidade por esta
via. As infeces respiratrias como conseqncia de exposio
laboratorial ainda no foram registradas.
Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental de
culturas ou de outros materiais infecciosos representa um risco
potencial para a equipe laboratorial, particularmente queles que
possam estar imunodeprimidos. Mordidas de camundongos
experimentalmente infectados e as manipulaes de materiais do
meio ambiente infeccioso (por exemplo, excrementos de pombos)
tambm representam um risco primrio ao pessoal do laboratrio.
Nvel de Biossegurana 2 e do Nvel de Biossegurana Animal 2
so indicadas, respectivamente, para atividades com materiais
clnicos, ambientais ou de culturas sabidamente ou potencialmente
infecciosas e ainda com animais infectados experimentalmente.
O processamento do solo ou de outros materiais do meio
ambiente que contenha ou que potencialmente contenha clulas
infecciosas semelhantes levedura dever ser conduzida em
cabines de segurana biolgicas Classe I ou II. Esta precauo
tambm indicada para a cultura do estado perfeito ou sexual do
agente.
agente dever ser obtida atravs do CDC.
Agente: Histoplasma capsulatum
A histoplasmose associada a laboratrio um risco
comprovado em instalaes onde so conduzidos trabalhos de
136
investigao ou de diagnsticos
28, 29,30
. As infeces pulmonares so
resultantes de culturas que formam fungos
31
. J uma perfurao na
pele durante uma autpsia de um indivduo infectado
32
e uma
inoculao parenteral acidental de uma cultura vivel
33
provoca
uma infeco local. A coleta e processamento de amostras de solo
retiradas de reas endmicas tm provocado infeces pulmonares
em trabalhadores de laboratrio. Os esporos encapsulados so
resistentes a secagem e podem permanecer viveis durante longos
perodos de tempo. O pequeno tamanho do condio infeccioso
(menos que 5 mcrons) possibilita sua disperso no ar e a reteno
intrapulmonar. Furcolow relatou que em camundongos 10 esporos
foram quase que to infecciosos quanto uma dose letal de 10.000
a 100.000 esporos
34
.
Riscos em Laboratrio: O estgio infeccioso deste fungo
di mrfi co (condi o) est presente nas cul turas de formas
esporuladas e no solo de reas endmicas. A forma de levedura
em tecidos ou lquidos de animais infectados pode produzir uma
infeco local aps uma inoculao parenteral. As prticas e
instalaes do Nvel de Biossegurana 2 e Nvel de Biossegurana
Animal 2 so indicadas para o manuseio e processamento de
materiais clnicos, identificao de substncias isoladas, tecidos
animais e culturas fngicas, identificao de culturas na rotina de
laboratrios de diagnsticos e para estudos animais experimentais
quando a via do agente for parenteral.
As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 3 so
indicadas para a reproduo e manipulao de culturas j
identificadas como de H. capsulatum, e para o processamento de
solo ou de outros materiais ambientais conhecidos por conter ou
possivelmente conter condio infeccioso.
agente deve ser feita atravs do CDC.
Agente: Sporothrix schenckii
O S. schenckii tem causado um nmero expressivo de
infeces locais na pele e nos olhos de pessoas que trabalham em
137
laboratrios
35
. A maioria dos casos est associada a acidentes que
ocorrem com borrifos do material de uma cultura dentro do olho
36, 37
,
arranho
38
ou mordida de um animal infectado
40, 41
ou ao injetar
39
material infectado na pele. As infeces dermatolgicas so
causadas tambm pelo manuseio de culturas
42, 43
ou necropsias de
animais
45
sem que ocorra um conhecido erro tcnico na hora do
procedimento. No houve nenhum caso de infeco pulmonar
resultante da exposio laboratorial, embora se supe que a doena
pulmonar tenha ocorrido naturalmente como resultado de uma
inalao.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do
so indicadas para todas as atividades em laboratrios e em
atividades com experimentao animal com S. schenckii.
Recomenda-se o uso de l uvas ao manusear ani mai s
experimentalmente infectados e durante operaes com culturas
lquidas (caldos) que possam resultar em uma contaminao da
mo.
Agente: Membros patognicos dos Gneros Epidermophyton,
Microsporum e Trychophyton.
Embora as infeces de pele, cabelo e unhas provocadas
por estes fungos dermatofdites estejam entre as infeces humanas
mais freqentes, o processamento do material clnico ainda no foi
associado s infeces laboratoriais. As infeces relatadas foram
adquiridas atravs de contatos com animais de laboratrios
naturalmente ou experimentalmente infectados (camundongo,
cobaias, etc.) e ocasionalmente com o manuseio de culturas
46, 47,
48,49
.
Perigos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados
na pele, cabelo e unhas de hospedeiros humanos e animais. O
contato com animais de laboratrios infectados que apresentem
138
infeces aparentes ou no aparentes considerado como risco
primrio para a equipe do laboratrio. As culturas e materiais clnicos
no so uma fonte importante de infeco humana.
so indicadas para todas as atividades em laboratrios e em
atividades com experimentao animal com os dermatofitdes. Os
animais infectados experimentalmente devem ser manipulados com
luvas descartveis.
Agente: Fungos diversos
Vri os fungos tm provocado sri as i nfeces em
hospedeiros imunocompetentes aps uma provvel inalao ou
inoculao parenteral acidental de fontes do meio ambiente. Esses
agentes so os Penicillium marneffei, Exophiala (Wangiella)
dermatitidis, Fonsecaea pedrosoi, Ochroconis gallopavum,
Clauduphialopora bantians e Ramichlorisium mackenzieim. Embora
nenhuma infeco causada por grande parte destes agentes
associados a laboratrios tenha sido registrada, a gravidade desta
patologia adquirida naturalmente suficiente para adotarmos
cuidados especiais no laboratrio. O Penicillium marneffei causou
uma infeco local por inoculao acidental em um laboratorista
50
.
J o Stachybotrus atra provavelmente no o agente causador da
infeco em seres humanos quando o fungo ou fomitos contidos
no mofo so inalados, embora a ingesto de gros mofados que
possuam o fungo tenha envenenado animais.
Riscos em Laboratrio: A inalao de condios em culturas
de fungos com esporos ou a injeo acidental na pele durante um
procedimento de infeco de animais de experimentao so riscos
tericos aos trabalhadores de um laboratrio.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para a reproduo e
manipulao de culturas conhecidas por conterem esses agentes.
139
Transferncia do Agente: A licena para importao dever
ser obtida junto ao CDC.
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142
Seo VII-C: Agentes Parasitrios

Agente: Protozorios Parasitas de Tecido e Sangue Humanos
Infeces com o Plasmodium spp. (incluindo o P. cynomolgi),
o Trypanosoma spp e a Leishmania spp. adquiridas em laboratrio
foram relatadas
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12
. Embora nenhuma infeco
laboratorial com a Babesia spp. tenha sido relatada, um indivduo
pode adquirir uma infeco atravs de uma picada acidental com
agulha ou atravs de uma picada de um carrapato infectado.
Embora infeces associadas a animais de laboratrio no
sejam comuns, a malria transmitida pelo mosquito realmente ocorre.
Outras fontes diretas potenciais de infeco para a equipe de um
laboratrio incluem o contato com um material extrado de uma leso
de roedores que apresentam uma leishmaniose cutnea e o contato
com fezes ou sangue de animais experimentalmente ou naturalmente
infectados com T. cruzi
13
.
Riscos em Laboratrio: Os estgios contagiosos destes
agentes podem estar presentes no sangue, fezes, fl udo
cerebroespinhal, medula ssea ou em outros tecidos de bipsia,
exudatos de leso e artrpodes infectados. Dependendo do
parasita, os riscos primrios laboratoriais incluem a ingesto,
penetrao na pele atravs de ferimentos ou microabrases,
inoculao parenteral acidental e transmisso atravs de vetores
artrpodes. A exposio aos aerossis ou perdigotos de organismos
nas membranas mucosas dos olhos, nariz ou boca considerada
como um risco potencial quando o trabalho com culturas de
Leishmania spp., T. cruzi ou com homogeneizao de culturas ou
de sangue contendo hemoflagelados realizado. Os indivduos
imunocomprometidos devem evitar qualquer trabalho com esses
agentes vivos.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do nvel
de Biossegurana 2 so indicadas para atividades com estgios
infecciosos dos parasitas acima relacionados. Os artrpodes
143
infectados devem ser mantidos em dependncias que impeam a
exposio do pessoal do laboratrio ou a sada do artrpode para
fora do local. A conteno primria (por exemplo, cabine de
segurana biolgica) ou proteo pessoal (por exemplo, proteo
facial) pode ser indicada quando o trabalho com culturas de
Leishmania spp., de T. cruzi, ou a homogeneizao de tecidos ou
de sangue contendo hemoflagelados forem realizados
14, 15
.
Recomenda-se o uso de luvas para atividades onde exista a
possibilidade do contato direto da pele com os estgios infecciosos
dos parasitas acima listados. O tratamento apropriado para a maioria
das infeces provocadas por protozorios existe e as informaes
sobre dosagem, fonte da droga, etc. se encontram a disposio
16
.
Agente: Protozorios Parasitas do Intestino Humano.
Infeces com o Toxoplasma spp.; Entamoeba spp.; Isospora
spp.; Giardia spp.; Sarcocystis spp. e o Cryptosporidium spp.
associadas a laboratrio foram relatadas
17, 18, 19, 20,21
. Nenhuma infeco
laboratorial com microspordios foi registrada, mas a ingesto de
esporos encontrados nas fezes, uri na, escarro, fl udo
cerebroespinhal ou culturas pode provocar uma infeco.
Infeces associadas ao laboratrio de experimentao animal
tm sido relatadas e constituem uma fonte direta de infeco para
as pessoas que trabalham nestes laboratrios e que esto em
contato com as fezes de animais naturalmente ou experimentalmente
infectados. No caso de roedores inoculados experimentalmente com
o Toxoplasma via intraperitoneal, o contato com o lquido peritoneal
pode provocar uma exposio aos organismos infecciosos.
J as infeces com o Cryptosporidium adquiridas em
laboratrio ocorrem com regularidade em quase todos os
laboratrios que trabalham com esse agente, especialmente
aqueles nos quais os bezerros so usados como fonte de ocitos.
Outros animais infectados experimentalmente tambm oferecem
Relao dos Agentes Agentes Parasitrios
144
riscos potenciais. A evidncia circunstancial sugere que a trans-
misso area de ocitos deste pequeno organismo pode aconte-
cer. Uma obedincia rigorosa a todas essas recomendaes reduz
a ocorrncia de infeces nos laboratrios e em tratadores de ani-
mais.
Riscos em Laboratrio: Os estgios ativos infecciosos podem
ser encontrados nas fezes ou em outros fludos e tecidos corporais.
Dependendo do parasita, a ingesto o risco primrio laboratorial.
Embora no se conhea o nvel do risco, as exposies das
membranas mucosas dos olhos, nariz ou boca aos aerossis ou
perdigotos de trofozotas podem ser riscos potenciais quando
trabalhos com culturas de amebas que vivem livremente, como a
Naegleria fowleri, Acanthamoeba ou a Balamuthia esto sendo
realizados. Os indivduos imunocomprometidos devem evitar o
trabalho com organismos vivos. Devido s graves conseqncias
da toxoplasmose em fetos em desenvolvimento e em mulheres
sorologicamente negativas que podem engravidar, cabe ao
supervisor do laboratrio informar essas mulheres sobre os riscos
potenciais ao feto. Caso os empregados bem informados sobre os
riscos se recusarem a ficar expostos a esses agentes, o laboratrio
dever designar outras atividades em uma rea de trabalho onde
o Toxoplasma no esteja sendo manipulado. O trabalho com ocitos
contagiosos oferece um risco maior de se adquirir uma infeco.
As picadas de agulhas com material contendo taquizotas ou
bradizotas atravs da membrana mucosa ou de abrases na pele
tambm so riscos significativos. A infeco por taquizotas ou
bradizotas atravs da membrana mucosa ou de abrases da pele
tambm so possveis. Os laboratrios que conduzem estudos
somente com materiais de parasitas mortos ou inativados e com
fraes de parasitas no oferecem riscos significativos de infeco.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades com estgios
contagiosos dos parasitas acima listados. A conteno primria (por
exemplo, cabine de segurana biolgica) ou a proteo pessoal
(por exemplo, protetor facial) pode ser indicada em trabalhos
envolvendo culturas de Naegleria fowleri ou Cryptosporidium. O
145
tratamento apropriado para a maioria das infeces provocadas
por protozorios j existe e mais informaes sobre a dose, fonte
das drogas, etc. esto disponveis
22
.
Agente: Trematdeos Parasitas de Humanos (Schistosoma
spp. e Fasciola spp.)
Infeces com o Schistosoma spp. e a Fasciola spp. adquiridas
em laboratrio tm sido relatadas. Nenhuma infeco estava
diretamente associada aos animais de laboratrio, com exceo
dos moluscos infectados, que so os hospedeiros intermedirios
23,
24, 25,26
.
Ri scos em Laboratri o: Os estgi os contagi osos do
Schistosoma spp. (cercria) e da Fasciola spp. (metacercria)
podem ser encontrados, respectivamente, na gua ou encistados
em plantas de aqurios de laboratrios usados para manter os
caracis hospedeiros. A penetrao das cercrias do esquistossomo
na pele e a ingesto da metacercria de qualquer trematdeo so
considerados riscos primrios. A disseco ou o esmagamento de
caracis infectados pelo esquistossomo pode tambm resultar na
exposio da pele ou da membrana mucosa aos tecidos contendo
as cercrias. Alm disto, a metacercria pode ser transferida
inadvertidamente das mos para a boca atravs dos dedos ou das
luvas, depois do contato com a vegetao aqutica contaminada
ou com as superfcies contaminadas do aqurio. A maioria das
exposies laboratoriais ao Schistosoma spp. supostamente
resultaria em baixas cargas de vermes com um potencial mnimo
da doena. Drogas seguras e eficazes para o tratamento da
esquistossomose j se encontram no mercado.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades com os
estgios contagiosos dos parasitas acima citados. Recomenda-se
o uso de luvas onde houver um contato direto com gua contaminada
146
por cercrias, ou onde houver vegetao contendo metacercria
de caracis infectados experimentalmente ou naturalmente. Jalecos
de mangas compridas ou outro traje de proteo devero ser
usados quando um trabalho ao redor do aqurio ou em outras fontes
de gua que possam conter cercrias do esquistossomo estiver
sendo realizado. Os caracis e as cercrias encontradas na gua
proveniente do aqurio do laboratrio devem ser eliminados atravs
de substncias qumicas (por exemplo, hipoclorito, iodo) ou atravs
do calor antes de serem jogados no esgoto. O tratamento
apropriado para grande parte das infeces causadas por
trematdeos existe, e as informaes sobre a fonte das drogas,
dosagens, esto disponveis
27
.
deve ser obtida junto ao CDC.
Agente: Cestides Parasitas de Humanos Echinococcus
granulosus, Taenia solium (cysticercus cellulosae) e
Hymenolepis nana.
Embora nenhuma infeco com o E. granulosus ou a T. solium
relacionada a laboratrio tenha sido relatada, as conseqncias
destas infeces aps a ingesto de ovos infectados por E.
granulosus ou T. solium so potencialmente srias. A H. nana um
parasita cosmopolita que no requer um hospedeiro intermedirio
e a contaminao se d diretamente atravs da ingesto de fezes
humanas ou de roedores infectados.
Riscos em Laboratrio: Os ovos infectados podem ser
encontrados nas fezes de ces ou de outros candeos (hospedeiro
definitivo do E. granulosus) ou nas fezes humanas (o hospedeiro
definitivo da T. solium). A ingesto de ovos infectada destas fontes
considerada como risco primrio em laboratrios. Os cistos e fludo
de cistos do E. granulosus no so infecciosos para o homem. J
os cistos que contm a larva da T. solium (Cysticercus cellulosae)
prontamente produzem a infeco humana com a solitria adulta.
A ingesto de um nico ovo infectado pelos dois parasitas e
proveniente das fezes do hospedeiro definitivo pode potencialmente
147
resultar em uma sria patologia. A ingesto dos ovos da H. nana
nas fezes do hospedeiro definitivo pode causar uma infeco
intestinal.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para o trabalho com os
estgios contagiosos destes parasitas. Deve-se dar uma ateno
especial a higiene pessoal (por exemplo, a lavagem das mos) e
evitar a ingesto de ovos infectados. Recomenda-se o uso de luvas
quando houver um contato direto com as fezes ou com superfcies
contaminadas por fezes frescas de ces infectados por E.
granulosus, com humanos infectados pela T. solium adulta ou com
humanos ou roedores infectados pela H. nana. O tratamento
adequado para muitas infeces causadas por cestides existe e
informaes sobre a fonte das drogas, dosagem, etc. j se
encontram disponveis
28.
agente deve ser obtida atravs do CDC.
Agente: Nematides Parasitas de Humanos
Infeces por Ascaris spp.; Strongyloides spp; ancilstomos
e Enterobius spp. j foram relatadas. As reaes alrgicas a vrios
componentes antignicos de nematides (por exemplo, antgenos
de Ascaris nebulizados) podem representar um risco ao indivduo
sensvel. As infeces associadas a laboratrio (incluindo
artrpodes) no foram registradas, mas as larvas contagiosas
encontradas nas fezes de primatas no-humanos infectados com o
Strongyloides spp. so consideradas como um risco potencial de
infeco para trabalhadores de laboratrio e tratadores de animais.
Riscos em Laboratrio: Os ovos e larvas de fezes frescas do
hospedeiro definitivo no so geralmente infecciosos, uma vez que
o desenvolvimento dos estgios infecciosos pode levar de um dia
at vrias semanas. A Trichinella preocupa porque o tecido fresco
ou digerido pode conter larvas que seriam infecciosas se ingeridas.
A ingesto de ovos infectados ou a penetrao na pele de larvas
148
infectadas so os riscos primrios para as pessoas que trabalham
em um laboratrio e as que tratam dos animais. Os artrpodes
infectados com os parasitas filariais oferecem um risco potencial
para a equipe laboratorial. comum o desenvolvimento de uma
hi persensi bi l i dade em trabal hadores de l aboratri os que
freqentemente so expostos aos antgenos aerolizados de Ascaris
spp.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades que
envolvam os estgios contagiosos relacionados. A exposio aos
antgenos sensibilizados aerolizados do Ascaris spp. deve ser
evitada. Uma conteno primria (por exemplo, cabine de segurana
biolgica) pode ser necessria para o trabalho com estes materiais
por indivduos hipersensveis. O tratamento adequado para maior
parte das infeces causadas por nematides existe, e maiores
informaes sobre a dosagem, fonte das drogas e etc. j se
encontram disponveis
32
.
agente deve ser obtida junto ao CDC.
Referncias:
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29. Herwaldt and Juranek. 1995. (9).
30. Lettau. 1991. (5).
31. Pike. 1976. (6).
32. Anonymous. 1995. (16).
150
Seo VII-D: Prions

Os Centros para Controle e Preveno da Doena e os
Institutos Nacionais de Sade gostariam de expressar seus
agradecimentos a Jiri Safar, M.D; Darlene Groth, A.B; Stephen J.
DeArmond, M.D., Phd. e Stanley B. Prusiner, M.D., da University of
California San Francisco, San Francisco, CA, pelas contribuies
neste campo emergente e na preparao desta seo.
Os prions so partculas Infecciosas de Proteinceos que
no possuem cidos nuclicos
1
. Os prions so em grande parte, se
no totalmente, compostos por um isoforme anormal de uma
protena celular normal. Em mamferos, os prions so compostos
de um isoforme anormal, patognico da protena prinio (PrP),
chamada de PrP
Sc
. O expoente Sc inicialmente derivou-se do termo
scrapie (tronco), j que a scrapie um distrbio degenerativo
contagioso do sistema nervoso de ovinos e caprinos provocado
pelos prions. Uma vez que todas as doenas causadas por prions
conhecidas (Tabela 6) em mamferos envolvem o metabolismo
aberrante do PrP semelhante ao observado na scrapie, o uso de
um expoente Sc indicado para todos os isoformes PrP
patognicos, anormais
2
. Neste contexto, o expoente Sc utilizado
para designar a isoforma do PrP semelhante do scrapie.
Um gene cromossmico decodifica os genes PrP e no PrP
que so encontrados em preparaes purificadas dos prions. O
PrP
Sc
derivado do PrP
C
(o isoforme celular do PRP) por um
processo ps-translacional onde o PrP
Sc
adquire um alto contedo
da enzima b da ovelha
3
. Nem os cidos nuclicos especficos de
prions e nem as partculas semelhantes ao vrus foram detectados
nas preparaes infecciosas purificadas. Em fungos, evidncias
de trs prions diferentes foram acumuladas
4
.
Os prions em mamferos causam a scrapie e outras doenas
neurodegenerativas relacionadas ao homem e animais (Tabela 6).
151
As doenas provocadas pelos prions tambm so referidas como
encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs)
5
.
Tabela 1. As doenas causadas por Prions
Patologias Hospedeiro Prions Isoforma Patognica
(Abreviao) Natural do PrP
Scrapie ovelhas e cabras scrapie prions OvPrP
Sc
Encefalopatia viso prions TME MkPrP
Sc
Transmissvel de Viso
(TME)
Doena Crnica alce e veado de prions CWD MdePr
Sc
Distrfica(CWD) orelhas longas
Encefalopatia Espongiforme gado prions BSE BoPrP
Sc
Bovina (BSE)
Encefalopatia Espongiforme gatos prions FSE FePrP
Sc
Felina (FSE)
Encefalopatia Extica antlope africano e prions EUE UngPrP
Sc
Ungulado (EUE) niala
Kuru humanos prions kuru HuPrP
SC
Doena de Cretzfeldt- humanos prions CJD HuPrP
Sc
Jakob (CDJ)
Sndrome de Gerstmann humanos prions GSS HuPrP
Sc
Stussler-Scheinker (GSS)
Insnia familiar Gatal (FFI) humanos prions FFI HuPrP
Sc
Prions especficos de espcies. Diferente de alguns vrus, as
propriedades dos prions mudam dramaticamente quando so
passados de uma espcie para outra. Os resultados de estudos
transgnicos (Tg) em camundongos indicam que, quando os prions
de homens so passados para os camundongos, a patogenicidade
potencial dos no transgnicos para os humanos diminui
drasticamente
6
. Os prions que so reproduzidos em camundongos
no transgnicos so agora prions de camundongo e prions no
Relao de Agentes Prions
152
humanos. Estes prions de camundongos contm o PrP
Sc
, o PrP
Sc
no humano. Esta mudana especfica da espcie na molcula do
PrP
Sc
acompanhada pela alterao na patogenicidade do prions.
Em contraste aos prions humanos, os prions de camundongo so
altamente patognicos para o prprio camundongo. Nossa
compreenso destas mudanas especficas na patogenicidade do
prions de cada espcie proveniente, em grande parte, de estudos
de camundongos que apresentam uma variedade de transgenes
PrP. Uma vez que o PrP
Sc
produzido no camundongo derivado do
PrP
C
no possvel determinar a origem do prions inicialmente
inoculado no camundongo
7
.
Vale a pena observar que a susceptibilidade de espcies em
particular a um prions de outras espcies pode ser profundamente
afetada pelas diferentes cepas de prions. As propriedades
manifestadas pelas cepas de prions como o perodo de incubao
e os perfis neuropatolgicos parecem estar contidas na estrutura
do PrP
Sc
.
Tais consideraes dos princpios bsicos da biologia prinica
ajudam a formar a base para a classificao da biossegurana de
diferentes prions.
Classificao do Nvel de Biossegurana: Os prions humanos
e os reproduzidos em macacos e chimpanzs so manipulados no
Nvel de Biossegurana 2 ou 3, dependendo dos estudos que esto
sendo conduzidos. Os prions BSE so igualmente manipulados no
Nvel de Biossegurana 2 ou 3, devido possibilidade dos prions
terem sido transmitidos aos seres humanos na Gr-Bretanha e na
Frana
9
.
Todos os outros prions animais so considerados patgenos
do Nvel de Biossegurana 2. Portanto, baseado na nossa
compreenso atual sobre a biologia do prions descrita acima, assim
que os prions humanos so passados para camundongos ocorre a
produo do PrP
Sc
de camundongo. Neste caso, estes prions devem
ser considerados como prions do Nvel de Biossegurana 2, embora
os prions humanos sejam manipulados no Nvel de Biossegurana
153
3 em grande parte das condies experimentais. Uma exceo a
esta regra no caso de camundongos que apresentam transgenes
de camundongo/humanos qui mri cos ou humanos. Esses
camundongos transgnicos produzem prions humanos quando
infectados por prions humanos e devem ser tratados no Nvel de
Biossegurana 2 ou 3, de acordo com os procedimentos descritos
acima. Os mecanismos do prions disseminado em ovelhas e caprinos
que so os responsveis pelo desenvolvimento do scrapie ainda
so desconhecidos
10, 11
. Acredita-se que os prions CWD, TME, BSE,
FSE e EUE ocorrem depois do consumo de alimentos infectados
por prions
12, 13, 14,15
.
Doenas Humanas provocadas por Prions: Os mesmos
cuidados usados em pacientes com AIDS ou com hepatite so
certamente adequados para as patologias provocadas por prions
e pacientes que esto morrendo devido a esta patologia. Em
contraste a essas doenas virticas, as doenas provocadas por
prions no so transmissveis e nem contagiosas
16
. No h
evidncias sobre a transmisso atravs de contato ou de aerossis
de prions de um indivduo para outro. Porm, esses agentes se
tornam contagiosos sob algumas circunstncias, como por exemplo,
no ritual de canibalismo na Nova Guin que provoca a doena
chamada de kuru, na administrao do hormnio do crescimento
contaminado por prions que resultar na CJD iatrognica e no
transplante de enxertos de tecido da dura-mter contaminado por
prions que provocam a doena em outras pessoas. J as doenas
CJD, GSS e FFI familiares, so doenas provocadas por prions
dominantes herdados. Cinco mutaes diferentes do gene PrP
mostraram ser geneticamente ligadas ao desenvolvimento da
doena congnita. Muitos prions de doenas congnitas foram
transmitidos aos chimpanzs, macacos e camundongos portadores
de transgenes PrP humano
20, 21,22
.
Procedimentos Cirrgicos: Os procedimentos cirrgicos em
pacientes diagnosticados como portadores da doena prinica
devem ser minimizados. Acredita-se que a CJD tenha sido
transmitida de um paciente portador da CJD para dois outros que,
momentos depois, sofreram procedimentos neurocirrgicos na
154
mesma sala de cirurgia
23
. Embora no existam documentos que
comprovem a transmisso de prions aos homens atravs da
exposio da pele intacta ou das membranas e gstricas aos
perdigotos de sangue ou de lquido cerebroespinhal, o risco da
ocorrncia de tais infeces uma possibilidade. A esterilizao
dos instrumentos e a descontaminao da sala de cirurgia deve
ser realizada, de acordo com as recomendaes descritas acima.
Por ser importante o estabelecimento de um diagnstico
definitivo de uma doena provocada por prions e a distino entre
casos familiares e espordicos e as adquiridas pela contaminao
ocorrida atravs de procedimentos mdicos ou da ingesto de
alimentos contaminados por prions, deve-se obter o tecido cerebral
no-fixado. Em todos os casos de suspeita de uma doena prinica,
um mnimo de um centmetro cbico de crtex cerebral no-fixado
deve fazer parte da bipsia. Essa amostra deve ser biseccionada a
partir da superfcie cortical at a substncia branca do crebro
adjacente, com uma metade da amostra fixada em formalina e a
outra metade congelada.
Autpsias: As autpsias de rotina e o processamento de
quantidades de tecidos fixados em formalina contendo prions
humanos requerem os cuidados de um Nvel de Biossegurana 2
21
.
Na autpsia, todo o crebro deve ser coletado e cortado em
seces coronais de aproximadamente 4 cm de espessura.
Pequenos blocos de tecidos podem facilmente ser removidos de
cada seco coronal e colocados em um fixador para posterior
anl i se hi stopatol gi ca. Cada seco coronal dever ser
imediatamente lacrada por calor em uma sacola de plstico para
carga pesada. Presupe-se que o exterior desta sacola esteja
contaminado por prions e por outros patgenos. Com luvas novas
ou com a ajuda de um assistente que esteja usando luvas sem
contaminao, esta sacola contendo a amostra dever ser colocada
em outra sacola plstica que no possua uma superfcie exterior
contaminada. As amostras, ento, devero ser congeladas em gelo
seco ou colocadas diretamente em um freezer com temperatura de
70 C para armazenamento. Deve-se obter e congelar, no mnimo,
uma seco coronal do hemisfrio do cerebelo contendo o tlamo
e uma do hemisfrio cerebelar e do tronco cerebral.
155
A ausncia de qualquer tratamento eficaz para doenas
prinicas demanda muita cautela. As maiores concentraes de
prions se encontram na rea do sistema nervoso central. Baseado
em estudos animais h a possibilidade de que altas concentraes
de prions sejam encontradas no bao, timo, ndulos linfticos e
pulmes. O principal cuidado a ser tomado quando estiver realizando
um trabalho com material contaminado ou infectado por prions o
de evitar a perfurao da pele
25
. A pessoa que estiver realizando o
procedimento dever utilizar luvas resistentes a perfuraes. Caso
ocorra uma contaminao acidental da pele, a rea dever ser
esfregada com hidrxido de sdio a 1 N durante cinco minutos e
depois enxaguada com enormes quantidades de gua. As Tabelas
de 2-5 proporcionam procedimentos para a reduo de perfuraes
na pele, formao de aerossis e contaminao da sala de cirurgia,
das superfcies do necrotrio e dos instrumentos. As amostras no-
fixadas de crebro, medula espinhal e de outros tecidos contendo
prions humanos devero ser processadas com extremo cuidado
em um Nvel de Biossegurana 3.
Encefalopatia Espongiforme Bovino. O risco de contaminao
humana pelos prions BSE ainda no est muito claro. Talvez, a
abordagem mais prudente seja estudar os prions BSE em
dependncias de um Nvel de Biossegurana 2 ou 3 dependendo
das amostras a serem estudadas, como observado para prions
humanos (crebro, medula espinhal).
Doenas pri ni cas em roedores experi mentai s. Os
camundongos e hamsters so os animais experimentais de escolha
para todos os estudos da doena prinica. Com o desenvolvimento
do camundongo transgnico, que altamente susceptvel aos prions
humanos, o uso de chimpanzs e macacos raramente necessrio.
As maiores titulaes de prions (~ 10
9,5
DI
50
/g) so encontradas no
crebro e na medula espinhal de roedores de laboratrio infectados
com cepas adaptadas de prions
26, 27
, e as menores titulaes (~ 10
6
DI
50

/g) esto presentes no bao e no sistema linforeticular
28, 29
.
Propriedades Fsicas dos Prions. A menor partcula de um
prions infeccioso provavelmente de um dmero de PrP
Sc
. Esta
156
estimativa consistente com o tamanho de um alvo de radiao
ionizante de 55 9 kDa
30
. Portanto, os prions podem no ser
contidos pela maioria dos filtros existentes que de forma eficaz
eliminam as bactrias e vrus. Alm disto, os prions se agregam s
partculas de tamanho no uniforme e assim, os detergentes no
conseguem solubiliz-los, exceto sob condies de desnaturao
onde a infectividade perdida
31, 32
. Os prions resistem inativao
atravs da nuclease
33
, irradiao de UV a 254 nm
34, 35
e tratamento
com psoralens
36
, ctions divalentes, queladores do on metal, cidos
(entre pH 3 e 7), hidroxilamina, formalina, ebulio ou proteases
37,
38
.
Inativao dos prions. Os prions se caracterizam pela extrema
resistncia aos procedimentos convencionais de inativao incluindo
a irradiao, a ebulio, calor seco e agentes qumicos (formalina,
betapropiolactona, lcoois). Embora a infectividade do prions em
amostras purificadas seja diminuda pela prolongada digesto com
proteases
39, 40
, os resultados de ebulies em dodecilsulfato de sdio
e uria so variveis. A esterilizao de extratos cerebrais de
roedores com altas titulaes requer o uso da autoclave a 132 C
durante quatro horas e mei a. Os sol ventes orgni cos
desnaturadores como o fenol, os reagentes caotrpicos como o
tiocianato de guanidina e os lcalis como o NaOH podem tambm
ser utilizados para a esterilizao
41, 42, 43, 44,45
. Os prions so inativados
atravs do NaOH a 1 N, cloridrato ou isocianato de guanidnio a 4.0
M, hipoclorito de sdio (concentrao livre de cloro 2) e autoclave
a vapor a 132 C durante quatro horas e meia
46, 47, 48,49
. Recomenda-
se que o dejeto seco seja autoclavado a 132 C durante quatro
horas e meia ou ento incinerado. Grandes volumes de dejetos
lquidos infecciosos contendo altas titulaes de prions podem ser
totalmente esterilizados atravs do tratamento com NaOH a 1 N
(concentrao final) ou atravs de uma autoclave a 132 C durante
quatro horas e meia. Os vasilhames plsticos, que podem ser
descartados como dejeto seco, so altamente recomendveis. Uma
vez que o procedimento de vaporizao com paraformaldedo no
diminui a titulao do prions, as cabines de segurana devem ser
descontaminadas com NaOH a 1 N, seguido de HCI a 1 N e depois
enxaguadas com gua. Os filtros HEPA devem ser autoclavados e
incinerados.
157
Embora no haja evidncias que possam sugerir que a trans-
misso via aerosol ocorra na doena natural, mais prudente evi-
tar a formao de aerossis ou perdigotos durante a manipulao
de teci dos ou l qui dos e durante a necropsi a de ani mai s
experimentais. Recomenda-se tambm, o uso de luvas para
atividades que propiciem o contato direto da pele com tecidos e
lquidos infecciosos. Os tecidos fixados em formaldedos e
embebidos em parafina, especialmente tecidos cerebrais,
permanecem infecciosos. Alguns pesquisadores recomendam que
tecidos de casos suspeitos de doenas prinicas fixados em
formaldedos sejam imersos durante 30 minutos em cido frmico
a 96% ou em fenol antes de ser processado histopatologicamente
50
,
mas esse tratamento pode distorcer a neuropatalogia microscpica.
Manuseio e processamento de tecidos de pacientes com
suspeita de doena por prions. As caractersticas especiais do
trabalho com prions requerem uma ateno particular com as
instalaes, equipamentos, normas e procedimentos envolvidos.
As consideraes relacionadas sublinhadas nas seguintes tabelas
devem ser incorporadas administrao dos riscos laboratoriais
para este trabalho.
Tabela 2. Precaues padres* para autpsias de pacientes
com suspeita de doena por prions.
*No confundir com Procedimentos Universais Padres
1. O atendimento dever ser limitado a um patologista experiente
e uma equipe pequena. Os membros da equipe devero evitar
o contato direto com o corpo, mas devero assistir ao
procedimento atravs do manuseio dos instrumentos e
recipientes da amostra.
2. Um traje padro para autpsia obrigatrio.
a. Ao invs de um avental de tecido, deve-se usar uma roupa
descartvel e a prova de gua.
b. Luvas resistentes a cortes e perfuraes devero ser
colocadas debaixo de dois pares de luvas cirrgicas ou
158
luvas chain mail, que devero ser usadas entre dois pa-
res de luvas cirrgicas.
c. Os aerossis so formados principalmente durante a
abertura do crnio com uma serra Stryker. Uma proteo
respiratria adequada dever ser utilizada (PAPR).
3. Para reduzir a contaminao da sala de autpsia:
a. A mesa de autpsia dever ser coberta com um lenol
descartvel com fundo plstico prova dgua.
b. Os instrumentos contaminados devero ser colocados em
um papel absorvente.
c. O crebro dever ser removido, enquanto a cabea dever
ser colocada em um saco plstico para a reduo da
nebulizao e de borrifos.
d. O crebro poder ser colocado em um recipiente com um
revestimento de saco plstico para pesagem.
e. O crebro dever ser colocado em uma tbua de corte e
as amostras adequadas sero di ssecadas para o
congelamento instantneo (veja Tabela 4).
f. O crebro ou os rgos a ser fi xado dever ser
imediatamente colocado em um recipiente com um tampo
neutro de formalina a 10%.
g. Na maioria dos casos de suspeita de doena prinica, a
autpsia pode ser limitada somente ao exame do crebro.
Em casos que exijam uma autpsia completa, devemos
considerar o exame e amostragem dos rgos torcicos e
abdominais in situ.
Tabela 3. Procedimentos de descontaminao da sala de
autpsia.
1. Os instrumentos (grampos) e as lminas da serra devero ser
colocados em uma placa grande de ao inoxidvel que dever
159
ser imersa durante uma hora em hidrxido de sdio a 2 N ou
durante duas horas em hidrxido de sdio a 1 N, e depois
devero ser bem enxaguados em gua antes de serem
autoclavados a uma temperatura de 134 C (autoclave de vapor
com deslocamento de gravidade) por 1 hora; autoclave de
vapor para cargas porosas por um ciclo de 18 minutos a 30
libras por polegada quadrada ou seis ciclos de 3 minutos a 30
libras por polegada quadrada).
2. A serra Stryker dever ser descontaminada atravs de
repetidas umidificaes com uma soluo de hidrxido de sdio
a 2 N por um perodo de um hora. Uma lavagem adequada
dever ser realizada para remoo do NaOH residual.
3. O papel absorvente que cobre a mesa e envol ve os
instrumentos, as roupas descartveis, etc. devero ser
duplamente embaladas em sacos adequados para lixos
infecciosos para posterior incinerao.
4. Quaisquer reas suspeitas de contaminao da mesa ou da
sala de autpsia devero ser descontaminadas atravs de
repetidos banhos de uma soluo de hidrxido de sdio a 2 N
durante uma hora.
Tabela 4. Procedimentos de corte do crebro.
1. Aps a adequada fixao em formaldedo (pelo menos de 10-
14 dias), o crebro dever ser examinado e cortado sobre
uma mesa coberta com um papel absorvente que possua a
parte de trs coberta por um material impermevel.
2. As amostras para a histologia devero ser etiquetadas com o
termo: As precaues da CJD. Para laboratrios que no
possuam equipamento para colorao e imerso ou um
micrtomo exclusivo para doenas infecciosas incluindo a CJD,
blocos de tecido fixado atravs da formalina podero ser
colocadas em cido frmico absoluto a 96% durante 30
minutos, seguido de uma soluo de tampo neutro de formalina
a 10% por pelo menos 48 horas
51
. O bloco de tecido ser,
160
ento, imerso em parafina como normalmente realizado. As
tcnicas neurohistolgicas ou imunohistoqumicas padres no
so afetadas pelo tratamento com o cido frmico; porm, de
acordo com a nossa experincia, os cortes de tecidos se tornam
quebradios e danificados durante o seccionamento.
3. Todos os instrumentos e superfcies que tiveram um contato
com o tecido devero ser descontaminados como descrito na
Tabela 3.
4. Os resduos de tecidos, fragmentos de cortes e soluo de
formaldedo contaminado devero ser descartados como lixo
hospitalar descartvel para eventual incinerao.
Tabela 5. Preparao do tecido
1. Os tcnicos de histologia devero usar luvas, aventais, jalecos
e proteo facial.
2. A fixao adequada de pequenas amostras de tecidos (por
exemplo, bipsias) de um paciente com suspeita de doena
prinica dever passar por uma ps-fixao em cido frmico
absoluto a 96% durante 30 minutos, seguido de 48m horas
em formalina fresca a 10%.
3. O dejeto lquido dever ser coletado em um garrafo para lixo
de 4 litros contendo 600 ml de hidrxido de sdio a 6 N.
4. As luvas, moldes imersos e todos os materiais de manipulao
devero ser descartados como lixo de perigo biolgico.
5. As fitas de tecido devero ser processadas manualmente para
prevenir a contaminao dos processadores de tecido.
6. Os tecidos que devero ser imersos em um molde descartvel.
Caso seja utilizado, as pinas devero ser descontaminados.
7. Ao preparar as seces, recomenda-se o uso de luvas. Os
cortes no usados devero ser coletados e desprezados em
um container para lixo de perigo biolgico. A faca dever ser
161
lavada com uma soluo de NaOH a 1-2N e dever ser des-
cartada imediatamente em um recipiente para objetos cor-
tantes biolgicos. As lminas devero ser etiquetadas com
os dizeres Precaues contra CDJ. O bloco seccionado
dever ser fixado com parafina.
8. Colorao de rotina:
a. As lminas devero ser processadas manualmente.
b. Os reagentes devero ser preparados em clices de 100
ml descartveis.
c. Aps a colocao da lamnula, as lminas devero ser
descontaminadas ao mergulh-las em uma soluo de
NaOh a 2 N durante 1 hora.
d. As lminas devero ser etiquetadas como CDJ
Infecciosos.
9. Outras sugestes:
a. Os clices descartveis ou as estantes para lminas
podero ser usados para os reagentes.
b. As l mi nas para a i munoci toqumi ca podero ser
processadas em placas de Petri descartveis.
c. O equipamento dever ser descontaminado como descrito
acima.
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49. Taylor, D.M. et al. 1997. (45)
50. Brown P., Wolff A., Gajdusek D.C. 1990. (38)
51. Brown P., Wolff A., Gajdusek D.C. 1990. (38)
165
Seo VII-E: Agentes Rickettsiais

Agente: Coxiella burnetii
Dos agentes rickettisiais, a Coxiella burnetii provavelmente
o agente que apresenta o maior risco de uma infeco laboratorial.
O organismo altamente contagioso e incrivelmente resistente
secagem e as condies ambientais
1
. A dose infecciosa dos
organismos da Fase I virulenta em laboratrios animais tem sido
cal cul ada como sendo to pequena quanto um ni co
microorganismo. A dose humana infecciosa estimada ID
25-50
(inalao) para a febre Q de 10 organismos
2
. O resumo de Pike
indica que a febre Q a segunda infeco associada a laboratrio
mais comumente relatada, com surtos envolvendo 15 ou mais
pessoas registradas em vrias instituies
3, 4
. Vrios mamferos
domsticos e selvagens so os hospedeiros naturais da febre Q e
podem servir como fontes potenciais de infeco para as pessoas
que trabalham em um laboratrio e para os tratadores de animais
de laboratrios. A exposio a ovelhas naturalmente infectadas e
freqentemente assintomticas e seus filhotes so parte de um risco
documentado ao pessoal
5, 6
. Embora rara, a C. burnetii conhecida
por causar infeces crnicas como a endocardite ou a hepatite
granulomatosa.
Riscos em Laboratrio: A necessidade do uso de ovos
embrionrios ou de tcnicas de cultura celular para a reproduo
da C. burnetii leva a extensivos procedimentos de purificao. A
exposio aos aerossis contagiosos e inoculao parenteral so
as fontes mais provveis de contgio para as pessoas que
trabalham em laboratrios e as que tratam de animais
7
. Os agentes
podem ser encontrados em artrpodes infectados, no sangue, urina,
fezes, leite e tecidos de hospedeiros animais ou humanos
infectados. As placentas de ovelhas infectadas podem conter at
10
9
organismos por grama de tecido
8
, enquanto que o leite pode
conter 10
5
organismos por grama.
Nvel de Biossegurana 2 so indicados para procedimentos
166
laboratoriais no reprodutivos, incluindo os exames sorolgicos e
a colorao de impresso dos esfregaos. As prticas e instalaes
do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para atividades
envolvendo a inoculao, incubao e a coleta de ovos embrionados
ou de culturas de clulas, a necropsia de animais infectados e a
manipulao de tecidos infectados. Uma vez que cobaias e outros
roedores podem conter o agente nas fezes ou urina
9
, os roedores
experimentalmente infectados devero ser mantidos sob um Nvel
de Biossegurana Animal 3. O isolamento clonal especfico de cepas
no virulentas (Fase II) pode ser considerado para condies de
conteno inferiores
10
.
Spi nel l i
11
e Bernard
12
descreveram as precaues
recomendadas para as instalaes, quando ovelhas so utilizadas
como animais experimentais. Uma nova Fase I de investigao, a
vacina contra a febre Q (IND), j se encontra disponvel para os
indivduos includos no Special Immnunizations Program (USAMRIID),
em Fort Detrick, Maryland. O uso da vacina deve se limitar aos
indivduos que esto expostos a altos riscos e que no tenham
demonstrado sensibilidade ao antgeno da febre Q. Os indivduos
que possuem uma doena cardiovalvular no devero trabalhar
com a C. burnetii.
agente deve ser obtida atravs do CDC. No caso de uma licena
para exportao, esta dever ser conseguida atravs do Department
of Commerce. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio
para o envio ou recebimento do agente. J a licena para importao
ou transporte domstico deste agente poder ser obtida atravs
do USDA/APHI/VS.
Agente: Rickettsia prowazekii, Rickettsia typhi (R. mooseri),
Orientia (Rickettsia) tsutsugamushi e os agentes do
Grupo da Febre Maculosa de doena humana;
Rickettsia ricketsii, Rickettsia conorii, Rickettsia
akari, Rickettsia australis, Rickettsia siberica e
Rickettsia japonicum.
Pike relatou 57 casos de tifo (tipo no especificado) associado
a laboratrio, 56 casos de tifo epidmico com trs mortes e alguns
Relao de Agentes Agentes Rickettsiais
167
casos de tifo murino
13
. Mais recentemente, trs casos de tifo murino
foram relatados em um laboratrio de pesquisa
14
. Dois destes trs
casos estavam associados ao manuseio de materiais infecciosos
em bancadas abertas e o terceiro caso foi provocado por uma
inoculao parenteral acidental. Esses trs casos representaram
uma incidncia de 20% das pessoas que trabalham com materiais
infecciosos.
A febre maculosa das Montanhas Rochosas um risco
documentado para as equipes laboratoriais. Pike relatou 63 casos
adquiridos em laboratrio, dos quais 11 foram fatais
15
. Oster, por
sua vez, registrou 9 casos que ocorreram por um perodo de 6
anos em um laboratrio, que acreditava serem resultantes de uma
exposio aos aerossis infecciosos
16
.
Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental e a
exposio aos aerossis contagiosos so as fontes mais provveis
de infeces associadas a laboratrio
17
. A transmisso bem sucedida
atravs de aerossis contaminados por R. rickettsii foi documentada
experimentalmente em primatas no-humanos
18
. Cinco casos de
varola por riqutsia registrados por Pike estavam associados a
exposio s picadas de caros infectados
19
.
Mamferos naturalmente ou experimentalmente infectados,
seus ectoparasitas e seus tecidos infectados so considerados riscos
potenciais de infeco humana. Os organismos so relativamente
instveis sob condies ambientais normais.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para procedimentos
laboratoriais no reprodutivos, incluindo procedimentos sorolgicos
e de anticorpo fluorescente e ainda a colorao de impresso dos
esfregaos. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 3
so indicadas para todas as outras manipulaes de materiais
sabiamente ou potencialmente infecciosos, incluindo a necropsia
de animais experimentalmente infectados e triturao de seus
tecidos, a inoculao, incubao e coleta de ovos embrionados e
culturas de clulas. As prticas e instalaes do Nvel de
168
Biossegurana Animal 2 so indicadas para o alojamento de mam-
feros, com exceo dos artrpodes, experimentalmente infectados.
J as prticas e instalaes do Nvel 3 so indicadas para estudos
animais com artrpodes naturalmente ou experimentalmente
infectados por agentes rickettsiais da doena humana.
Devido ao valor comprovado da terapia com antibiticos nos
estgios iniciais da infeco, essencial que os laboratrios que
trabalham com a riqutsia possuam um sistema eficaz de relato de
doenas febris na equipe laboratorial, uma avaliao mdica de
casos potenciais e, quando indicado, a instituio de uma terapia
antibitica adequada. As vacinas, atualmente, no esto a
disposio para uso em homens (veja a seo seguinte sobre
Vigilncia).
para o envio ou recebimento do agente.
Vigilncia da Equipe Laboratorial em relao s Infeces
Rickettsiais Adquiridas em Laboratrios.
Sob circunstncias naturais, a gravidade da doena causada
por agentes rickettsiais varia consideravelmente. Em laboratrio,
inoculaes muito grandes so possveis, o que poderia produzir
respostas raras, mas muito srias. A vigilncia da equipe em relao
s infeces por rickttsias adquiridas a laboratrio pode reduzir
de forma dramtica o risco de srias conseqncias da doena.
A experi nci a mostra que as i nfeces quando
adequadamente tratadas com quimioterapia anti-rickettisial
especfica no primeiro dia da doena, geralmente no provocam
srios problemas no indivduo. A demora em adotar esta
quimioterapia, porm, pode resultar em uma doena debilitante ou
muito aguda variando com perodos crescentes de convalescena
169
no caso do tifo e em morte no caso de tifo rural em infeces por R.
rickettsii. A chave para a reduo da gravidade da doena
provocada por infeces associadas a laboratrio um sistema
confivel de vigilncia que inclui: 1. Disponibilidade total de um
mdico experiente; 2. Doutrinao de toda a equipe sobre os riscos
potenciais do trabalho com agentes rickettisiais e as vantagens de
uma terapia precoce, 3. Um sistema de relatrios para todas as
exposies conhecidas e para todos os acidentes ocorridos, 4.
Relatrios de todas as doenas febris, especialmente as associadas
a dor de cabea, mal-estar e prostrao quando no existir nenhuma
outra causa e 5. Uma atmosfera de no punio que possa motivar
o relato de qualquer doena febril.
Os agentes rickttesiais podem ser manipulados em um
laboratrio com um perigo real mnimo quando um sistema
adequado de vigilncia for complementado por uma equipe que
tenha conhecimento sobre os riscos de infeces por riqutsias e
usos de medidas seguras recomendadas pelo Resumo das
Caractersticas dos Agentes.
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171
Seo VII-F: Agentes Virais (no incluindo o arbovrus)

Agentes: Hantavrus
O trabalho com o vrus de Hantaan (febre hemorrgica com
sndrome renal) e outros hantavrus (Puumala, Seul e Sin Nombre
sendo ou no registrados no International Catalogue of Arboviruses
and Certain Other Viruses 1985, como o vrus El Moro Canyon)
em ratos, ratazana e outros roedores de laboratrio, dever ser
conduzido com especial cuidado devido ao risco extremo de
contgio por aerossis, especialmente da urina de roedores
infectados.
A Sndrome Pulmonar por Hantavrus (HPS) uma nova
doena grave e freqentemente fatal, causada pelo vrus Sin
Nombre e/ou um vrus relacionado
1
. A maioria dos casos de
patologias humanas resultou de exposies a roedores selvagens
naturalmente infectados. Os vetores artrpodes no so conhecidos
como transmissores do hantavrus. Nenhuma transmisso de um
indivduo para outro foi provocada por um vrus associado a essa
doena.
Riscos em Laboratrio: A transmisso laboratorial do
hantavrus de roedores para os homens atravs do aerossol bem
documentada
2, 3, 4,5
. As exposies s excrees de roedores, material
fresco para necropsia e roupas que envolvem os animais de
laboratrio so supostamente associadas ao risco. Outras vias
potenciais de infeco incluem a ingesto, o contato de materiais
contagiosos com membranas mucosas ou pele rachada e, em
particular, mordidas de animais.
Quatro trabalhadores de laboratrio foram infectados
enquanto trabalhavam com o vrus Hantaan adaptado a uma cultura
de clulas. Embora os procedimentos associados s infeces ainda
no estejam bem explicados, esses quatro indivduos trabalharam
repetidas vezes com culturas de hantavrus e realizaram a
centrifugao do vrus concentrado
6
. O RNA viral foi detectado em
amostras de necropsias e no sangue e plasma de um paciente
172
coletados no incio da doena
7
. As implicaes destas descobertas
para a infectividade do sangue ou dos tecidos so desconhecidas.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para o manuseio laboratorial
de soros de pessoas potencialmente infectadas com os agentes
da HPS. O uso de uma cabine de segurana biolgica certificada
recomendado para todas as manipulaes com lquidos humanos
corporais quando existe um potencial para a formao de borrifos
ou aerossis.
Amostras de tecidos potencialmente infectados devero ser
manipuladas em instalaes do NB-2 seguindo as prticas e
procedimentos do NB-3. A reproduo do vrus em culturas de
clulas dever ser realizada em uma instalao do NB-3, seguida
das prticas e procedimentos do NB-3. O crescimento em grande
escal a do vrus, i ncl ui ndo a preparao e manusei o dos
concentrados virais, dever ser feito em instalaes de conteno
do NB-4.
Espcies de roedores experimentalmente infectados
conhecidos por no apresentarem o vrus nas fezes podero ser
alojados em instalaes do NBA-2, usando prticas e procedimentos
do NBA-2. As cabines de segurana e outros dispositivos de
conteno fsica primria devero ser utilizados onde procedimentos
com um alto potencial para formao de aerossis estiverem sendo
conduzi dos. O soro ou amostras de teci dos de roedores
potencialmente infectados dever ser manipulado em NB 2,
usando prticas e procedimentos de um NB-3. Todo o trabalho
envolvendo a inoculao do vrus contendo amostras do P.
maniculatus ou outras espcies permissivas dever ser conduzido
em NBA-4.
Transferncia do Agente: A licena para importao destes
agentes deve ser conseguida atravs do CDC. A licena para
exportao dever ser conseguida junto ao Department of
Commerce e necessrio o registro do laboratrio junto ao CDC
antes do envio ou recebimento destes agentes.
Relao de Agentes Agentes Virais
173
Agente: Hendra e Vrus Semelhantes a Hendra (inclusive o
vrus anteriormente conhecido como Morbilivirus
Eqino)
Surtos de um paramixovrus anteriormente desconhecido, que
foi primeiramente chamado de morbilivrus eqino e posteriormente
denominado de vrus Hendra, ocorreram em cavalos na Austrlia
em 1994 e 1995
8, 9, 10,11,12
. Trs pessoas que possuam um contato
prximo com cavalos enfermos desenvolveram a encefalite ou a
doena respiratria e duas falecerem. Nenhum surto associado
doena humana foi reconhecido, mas dois indivduos que
trabalhavam em chiqueiro de porcos lembraram de uma doena
que tiveram semelhante gripe, na mesma poca em que ocorreram
os surtos. Alm disto, todos os dois indivduos possuam titulaes
neutralizadoras de anticorpos ao vrus de Menangle. De 1998 a
1999, um surto da doena provocado por um vrus semelhante,
mas distinto do Hendra aconteceu na Cingapura e Malsia
13
. Nestes
dois pases, a doena humana - caracterizada por febre, dor de
cabea grave, mialgia e sinais de encefalite acometeu indivduos
que tiveram um contato prximo com porcos (isto , fazendeiros e
trabalhadores de abatedouros). Poucos pacientes desenvolveram
uma doena respiratria. Metade das pessoas infectadas por esse
vrus faleceram. O(s) hospedeiro(s) natural(is) da Hendra e de vrus
semelhantes a Hendra no foram identificados. Porm, na Austrlia
os morcegos eram animais suspeitos de carregarem o vrus Hendra.
Estudos epidemiolgicos e laboratoriais esto em andamento.
Nenhuma infeco adquirida em laboratrio conhecida por
ter sido resultante da exposio ao Hendra ou ao vrus semelhante
a Hendra. Porm, deve-se observar que nos surtos da Austrlia e
da Malria/Cingapura, o vrus foi reconhecido como um significativo
patgeno veterinrio. Estudos laboratoriais foram limitados aos
laboratrios de doenas infecciosas humanas e/ou veterinrias de
alta conteno. Os cientistas e veterinrios da sade pblica, por
sua vez, tm acompanhado de perto todos estes estudos.
Riscos em Laboratrio: O modo exato de transmisso ainda
no foi estabelecido. Todos os casos at hoje estavam associados
174
ao contato prximo com cavalos, e com o sangue ou lquidos cor-
porais de cavalos (Austrlia) ou de porcos (Malsia/Cingapura). O
vrus Hendra e o semelhante a ele foram encontrados nos tecidos
de animais contaminados durante os surtos descritos acima. Em
um recente surto na Malsia e em Cingapura, o antgeno viral foi
descoberto no sistema nervoso central, tecidos renais e pulmonares
de casos humanos fatais
14
.
Precaues Recomendadas: Devi do aos ri scos
desconhecidos para os trabalhadores do laboratrio e ao impacto
potencial sobre criaes de animais nativos, o vrus dever ser
pesquisado ou diagnosticado no laboratrio. Os fiscais da sade e
os gerentes dos laboratrios devero avaliar a necessidade de se
real i zar um trabal ho com esse vrus e a capaci dade das
dependncias antes de iniciarem qualquer trabalho com o Hendra,
com o vrus semelhante ao Hendra ou com vrus suspeitos
relacionados. Especialistas em doenas da sade pblica e
veterinria devero desenvolver planejamentos como estudos
laboratoriais e transporte de amostras e de substncias isoladas
para o laboratrio. At que mais informaes sejam conseguidas,
o manuseio de amostras clnicas humanas ou tentativas de
isolamento deste vrus dever ser realizado em dependncias de
um NB-3 e por pessoas experientes. O NB-4 (laboratrio escafandro
ou cabines de segurana Classe III) dever ser utilizado em qualquer
trabalho envolvendo animais contaminados ou envolvendo grandes
quantidades de vrus
15
.
Transferncia do agente: A licena para importao deste
para o envio ou recebimento do agente.
Agente: Vrus da Hepatite A, Vrus da Hepatite E
As infeces com os vrus da hepatite A e E adquiridas em
laboratrio no parecem ser importantes riscos ocupacionais para
as equipes laboratoriais. Porm, a doena um risco documentado
para as pessoas que manuseiam animais e para outros que
trabalham com chimpanzs e outros primatas no-humanos
175
experimentalmente ou naturalmente contaminado
16
. O vrus da he-
patite E parece ser um risco menor para as pessoas que trabalham
com ele do que o grande risco envolvendo os que manuseiam o
vrus da hepatite A, exceto durante a gravidez quando a infeco
pode resultar em uma doena fatal ou grave. Os trabalhadores
que manipulam outros primatas recentemente capturados e sus-
ceptveis (macacos coruja, sagis) podem tambm estar correndo
um srio risco.
Riscos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados
nas fezes, saliva e sangue de humanos e primatas no-humanos
contaminados. A ingesto de fezes, gua de vaso sanitrio e de
outros materiais contaminados o risco primrio para a equipe
laboratorial. A importncia da exposio aos aerossis no foi
demonstrada. Cepas atenuadas ou no virulentas dos vrus da
hepatite A resultantes de passagens em srie em cultura celular
foram descritas
17, 18
.
segurana e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicados
para atividades com fezes humanas ou de primatas no - humanos
conhecidamente ou potencialmente contaminada. J as prticas e
instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para
atividades que usem primatas no-humanos naturalmente ou
experimentalmente contaminados. Os tratadores de animais devero
usar luvas e tomar outras precaues adequadas para evitar
possveis exposies fecal-oral. Uma vacina inativada licenciada
contra a hepatite A est disponvel na Europa. Nos Estados Unidos
encontramos somente uma vaci na de pesqui sa que a
recomendada para os trabalhadores de laboratrio. As vacinas
contra a hepatite E no esto disponveis para o uso em humanos.
Transferncia do Agente: A licena para importao este
Agente: Vrus da Hepatite B, Vrus da Hepatite C (anteriormente
conhecido como Vrus no-A e vrus no-B) e Vrus
da Hepatite D
A hepatite B tem sido uma das infeces associadas a
laboratrio
19
mais freqentemente encontrada e os trabalhadores
176
de laboratrio so reconhecidos como o grupo de maior risco de
contaminao por este vrus
20
. Os indivduos contaminados pelo
vrus da hepatite B correm o risco de contrarem o vrus da hepatite
D (delta), que incompleto e requer a presena do vrus da hepatite
B para se reproduzir.
A infeco por hepatite C pode acontecer em um laboratrio.
A prevalncia do anticorpo da hepatite C levemente maior em
trabalhadores da rea da sade pblica do que na populao em
geral. Evidncias epidemiolgicas indicam que a hepatite C
disseminada predominantemente pela via parenteral
21, 22,23
.
Riscos em Laboratrio: O vrus da hepatite B pode ser
encontrado no sangue e produtos sanguneos de origem humana,
na urina, smen, lquido cerebroespinhal e saliva. A inoculao
parenteral, exposio das membranas mucosas e da pele lesada
aos perdigotos so os riscos primrios laboratoriais. O vrus pode
ser estvel no sangue ou nos componentes do sangue seco. Cepas
atenuadas ou no virulentas no foram identificadas.
O vrus da Hepatite C tem sido detectado primariamente em
sangue e soro, menos freqentemente na saliva e raramente em
urina ou semen. E aparece ser relativamente instvel, quando
estocado em temperatura ambiente, e em congelamentos e
descongelamentos repetidos.
conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas
para todas as atividades utilizando lquidos corporais e tecidos
conhecidamente ou potencialmente contaminados. Precaues
pessoais e conteno primria adicional, como as descritas para o
Nvel de Biossegurana 3, podem ser indicadas para atividades
com potencial para a formao de perdigotos ou aerossis e para
as atividades envolvendo quantidades ou concentraes de
produo de materiais infecciosos. As prticas, equipamento de
conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so
indicadas para atividades que utilizem chimpanzs ou outros
pri matas no-humanos contami nados natural mente ou
experimentalmente. Deve-se usar luvas quando trabalhos com
177
animais contaminados estiverem sendo realizados ou quando hou-
ver a possibilidade de contato da pele com materiais contamina-
dos. As vacinas recombinantes licenciadas contra a hepatite B es-
to disponveis e so altamente recomendadas e oferecidas aos
trabalhadores e laboratrios
24
. J as vacinas contra a hepatite C e
D ainda no esto disponveis para uso humano.
Alm destas precaues recomendadas, as pessoas
que trabalham com o HBV, HVC ou outros patgenos do
sangue devero consultar o ASHA Bloodborne Pathogen
Standard
25
. Questes relacionadas interpretao destes
padres devero ser direcionadas aos escritrios federais,
regionais e estaduais da OSHA.
agentes dever ser obtida atravs do CDC.
Agentes: Herpesvirus simiae (Cercopithecine herpesvirus [CHV-
1], B-virus)
O CHV-1 um alfaherpesvrus que ocorre naturalmente
contaminando smios livres ou em cativeiro incluindo a Macaca
mulatta, M. fascicularis e outros membros do gnero. Em smios
este est associado a leses orais vesiculares agudas, assim como
infeces latentes e freqentemente recrudescentes
26
. A infeco
humana tem sido documentada em pelo menos 50 casos,
geralmente com um resultado fatal ou com srias seqelas de
encefalites
27, 28, 29, 30, 31, 32,33
. Vinte e nove casos fatais de infeces
humanas (com um ndice de fatalidade de 58%) com o CHV-1 foram
relatados
34, 35, 36,37
.
Embora o CHV-1 apresente um ri sco potenci al aos
trabalhadores de laboratrios que manipulam esse agente, as
infeces humanas com o CHV-1 adquiridas em laboratrio, com
raras excees, se limitaram aos trabalhadores que tiveram um
contato direto com os smios. As culturas celulares primrias de
smi os, i ncl ui ndo as cl ul as dos ri ns do macaco reso
comerci al mente preparadas, ocasi onal mente podem ser
178
assintomaticamente contaminadas com o CHV-1 e estavam com-
prometidas em um caso humano
38
.
O treinamento especfico peridico sobre a avaliao do risco,
a compreenso dos modos de transmisso e exposio ao CHV-1
e o uso adequado de equipamentos de proteo pessoal so itens
altamente recomendados para as pessoas que trabalham com ou
que possuam um contato direto com smios, seus tecidos e com um
meio ambiente potencialmente contaminado por eles (incluindo
gaiolas, brinquedos e materiais de dejetos). necessrio um
trei namento adequado para pri mei ros socorros e para o
abastecimento, alm de um apoio mdico emergencial.
Riscos em Laboratrio: O alojamento assintomtico acontece
na maioria das transmisses entre os macacos e os trabalhadores
humanos, embora o maior risco de se adquirir o vrus CHV-1 de
smios seja atravs da mordida de um macaco contaminado e que
possua leses ativas. A contaminao da pele rachada ou das
membranas mucosas por secrees orais, oculares ou urogenitais
de smios contaminados durante suas infeces recrudescentes
ou primrias tambm perigosa e tem provocado pelo menos um
caso de mortalidade ocupacional
39
. A estabilidade de partculas virais
em gaiolas e outras superfcies no conhecida, mas o risco
potencial dever ser reconhecido para cortes ou abrases
provocados por estas superfcies potencialmente contaminadas.
Acredita-se que outros alfaherpesvrus no iro persistir no meio
ambiente por longo tempo. O trabalho experimental com animais
indica que a importncia da exposio aos aerossis do CHV-1
possivelmente mnima. Cepas atenuadas ou no virulentas ainda
no foram identificadas.
O agente tambm pode ser encontrado em vsceras torcicas
e abdominais e nos tecidos nervosos de smios naturalmente
contaminados. Esses tecidos e as culturas preparadas a partir deles,
so riscos potenciais
40
.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades
179
envolvendo o uso ou manipulao de tecidos lquidos corporais e
materiais para cultura de tecidos de smios. As prticas e precau-
es individuais adicionais, como as detalhadas para o Nvel de
Biossegurana 3, so indicadas para atividades envolvendo o uso
ou a manipulao de qualquer material conhecido por conter ou
por suspeitamente conter o CHV-1, incluindo a reproduo in vitro
do vrus para diagnstico. Seria pudente limitar as manipulaes
de culturas positivas contendo altas titulaes de vrus para
instalaes do Nvel de Biossegurana 4 (CSB de Classe III ou
laboratrio escafandro - veja Seo III), dependendo da deciso
do diretor do laboratrio.
As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 4 so
recomendadas para as atividades envolvendo a reproduo e a
manipulao de quantidades e concentraes de produo de CHV-1.
Todas as colnias de smios, mesmo as que acreditamos no
possurem o anticorpo do CHV-1, devem ser vistas como
naturalmente contaminadas. Os animais com leses orais sugestivas
de uma infeco pelo vrus B ativo devero ser identificados e
manipulados com extremo cuidado. Os estudos com animais
experi mental mente contami nados por CHV-1 devero ser
conduzidos em um ANB-3.
Existem normas para o trabalho seguro com smios e estas
devero ser consultadas
41, 42
. O uso de luvas, mscaras e jalecos
ou macaces de laboratrios recomendado para todas as pessoas
enquanto estiverem trabalhando com primatas no-humano
especialmente smios e outras espcies do Velho Mundo e para
todas as pessoas que entrarem nas salas de animais onde os
primatas no-humanos so alojados. Para minimizar o potencial da
exposio da membrana mucosa
43
, alguma forma de barreira dever
ser utilizada para prevenir a contaminao dos olhos, boca e narinas
por borrifos e perdigotos. O uso de diferentes tipos de equipamento
de proteo individual (culos de proteo, culos com escudos
slidos ou escudos faciais usados juntamente com mscaras e
respiradores) deve ser obrigatrio para a avaliao do risco em
laboratrio. As especificaes do equipamento devero ser
180
balanceadas com o trabalho realizado, de maneira que as barrei-
ras selecionadas no aumentem o perigo apresentado pelo local
de trabalho obscurecendo a viso e contribuindo para o aumento
de mordidas, picadas por agulhas ou arranhes de animais.
As drogas antivirais representam grandes promessas em
relao terapia de coelhos contaminados com H. simiae e a
limitada experincia clnica
44, 45
sugere que esta pode ser estendida
ao homem
46, 47
. Devido gravidade da infeco com este vrus,
pessoas com experincia mdica devero estar constantemente
presentes e disponveis para que pudessem gerenciar os incidentes
envolvendo as exposies ao agente ou as infeces suspeitas. A
transmisso de homens para homens foi documentada em um nico
caso, mostrando que se devem tomar cuidado com lquidos
vesiculares, secrees orais e secrees conjuntivais de pessoas
contaminadas
48
. As vacinas no esto disponveis para o uso em
humanos.
Agente: Herpesvrus Humano
Os herpesvrus so patgenos humanos ubquos e so
comumente encontrados em uma variedade de materiais clnicos
submetidos ao isolamento do vrus. Embora poucos vrus sejam
agentes comprovadamente causadores de infeces associadas a
laboratrios, eles so patgenos primrios e oportunistas,
especialmente em hospedeiros imunocomprometidos. Os vrus
herpes simples 1 e 2, e o vrus da varicela apresentam algum risco
pelo contato direto e/ou aerossis. J os citomegalovrus e o vrus
Epstein-Barr apresentam riscos de infeco relativamente baixos
para as equipes de laboratrios. O risco de uma infeco laboratorial
tendo os herpesvrus 6 e 7 como agentes etiolgicos ainda
desconhecido. Embora esse grupo diversificado de agentes virais
nativos no atenda aos critrios para que possam ser includos no
resumo das caractersticas dos agentes (isto , risco comprovado
ou alto risco potencial para infeces associadas a laboratrio e
181
para graves seqelas provocadas por uma infeco), a freqncia
de sua presena em materiais clnicos e o uso comum deste grupo
em pesquisas garante sua incluso nesta publicao.
Riscos em Laboratrio: Os materiais clnicos e as substncias
isoladas dos herpesvrus apresentam um risco de infeco aps a
i ngesto, i nocul ao parenteral aci dental , exposi o das
membranas mucosas dos olhos, nariz ou boca aos perdigotos ou
inalao de materiais concentrados nebulizados. As amostras
clnicas contendo o Herpesvirus simiae (vrus B) mais virulento podem
ser inadvertidamente submetidas a diagnstico de uma suspeita
infeco por herpes simples. O vrus tambm foi encontrado em
cul turas de cl ul as renai s pri mri as do macaco reso. O
citomegalovrus pode ser um risco especial durante a gravidez
devido infeco potencial do feto.
conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas
para atividades que utilizem materiais clnicos sabidamente ou
potencialmente infecciosos ou culturas de agentes virais nativos
que estejam associadas ou sejam identificadas como patgeno
primrio de doena humana. Embora existam poucas evidncias
de que os aerossis infecciosos sejam uma fonte significativa de
infeces associadas a laboratrio, mais prudente evitar a
formao de aerossis durante a manipulao de materiais clnicos
ou de produtos isolados, ou durante a necropsia de animais. Os
dispositivos de conteno primria (cabines de segurana biolgica)
constituem a barreira bsica de proteo dos trabalhadores para
evitar a exposio de aerossis infecciosos.
agentes dever ser obtida junto ao CDC.
Agente: Influenza
As infeces adquiridas em laboratrios e que possuem o
vrus da influenza como agente causador no so normalmente
documentadas na literatura. Entretanto deve-se considerar dados
182
informais e relatrios publicados que indicam que quando novas
cepas que apresentam um desvio ou uma flutuao antignica fo-
ram introduzidas em um laboratrio para o diagnstico ou pesquisa
acabaram por causar infeces deste tipo
49
.
As infeces adquiridas em laboratrios animais, por sua vez,
no foram relatadas, mas h uma grande possibilidade de
transmisso atravs de doninhas infectadas para o ser humano e
vice e versa.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado em
tecidos ou secrees respiratrias de humanos ou de grande parte
de animais contaminados e na cloaca de muitas espcies de aves
contaminadas. O vrus pode ser disseminado em mltiplos rgos
de algumas espcies animais infectadas.
O risco laboratorial primrio a inalao do vrus atravs de
formao de aerossis de materiais de animais contaminados ou
pela aspirao, suspenso ou mistura de amostras contaminadas
pelo vrus. A manipulao gentica tem um potencial de alterar o
alcance, a patogenicidade e a composio dos vrus da influenza.
Existe um potencial desconhecido na introduo de vrus humanos
transmissveis com uma nova composio antignica.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para o recebimento e
inoculao rotineira de amostras laboratoriais para diagnsticos.
O material para autpsia dever ser manipulado em uma cabine de
segurana biolgica usando os procedimentos do Nvel de
Biossegurana 2.
Atividades Utilizando Cepas de Vrus No Contemporneas:
Os requisitos para a Biossegurana no caso de uma infeco
adquirida em laboratrio e transmisso subseqente, devem estar
de acordo com as informaes disponveis sobre a patogenicidade
e virulncia das cepas que esto sendo usadas e o potencial de
danos para o ser humano ou para a sociedade. As atividades de
produo e pesquisa utilizando cepas contemporneas podem ser
realizadas com segurana usando as prticas de conteno do Nvel
183
de Biossegurana 2. A susceptibilidade infeco com cepas hu-
manas no contemporneas mais velhas, recombinantes, ou com
substncias isoladas de animais garante o uso de procedimentos
de conteno do Nvel 2. Mas no h evidncias para infeces
adquiridas em laboratrio com referncia as cepas A/PR/8/34 e A/
WS/33, ou com suas variantes neurotrpicas mais comumente
usadas.
Transferncia de Agente: A licena para importao deste
agente dever ser feita junto ao CDC. J a licena para importao
ou transporte domstico dever ser obtida junto ao USDA/APHIS/VS.
Agente: Vrus da Coriomeningite Linfoctica
As infeces com o vrus LCM adquiridas em laboratrios
so bem documentadas onde ocorram infeces em roedores de
laboratrio especialmente camundongos, hamsters e cobaias
50,
51,52
. Os camundongos desprotegidos podem oferecer riscos
especiais por alojarem infeces crnicas silenciosas. As culturas
celulares, que inadvertidamente se tornaram contaminadas,
representam uma fonte potencial de infeco em de disseminao
do agente. As infeces naturais so encontradas em primatas no-
humanos, incluindo chimpanzs e macacos sagis (o vrus Callitrichid
um vrus coriomeningite linfoctica) e pode ser fatal para os sagis.
Os sunos e ces so vetores menos importantes.
Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado no
sangue, lquido cerebroespinhal, urina, secrees da nasofaringe,
fezes e teci dos de hospedei ros ani mai s contami nados e
possivelmente do homem. A inoculao parenteral, inalao,
contaminao das membranas mucosas ou de peles rachadas por
tecidos ou lquidos contaminados de animais infectados so os riscos
mais comuns. A transmisso por aerossis tambm bem
documentada
53
. O vrus pode oferecer um risco especial durante a
gravidez devido infeco potencial do feto.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para as atividades que
184
utilizam lquidos corporais sabidamente ou potencialmente infecci-
osos e passagem de cultura celular de cepas de clulas cerebrais
de camundongo adaptadas para laboratrio. As prticas e instala-
es do Nvel de Biossegurana Animal 2 so adequadas para es-
tudos em camundongos adultos com cepas de passagem cerebrais
de rato. Porm, a conteno e precaues individuais adicionais,
como as descritas para o Nvel de Biossegurana 3, so indicadas
para atividades que possuam um alto potencial para a formao de
aerossis ou atividades que envolvam quantidades ou concentra-
es de produo de materiais infecciosos. Estas precaues tam-
bm so recomendadas para a manipulao de tumores contami-
nados infectveis, isolamento de campo e materiais clnicos de ca-
sos humanos. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana
Animal 3 so recomendadas para o trabalho com hamsters conta-
minados. As vacinas no esto disponveis para uso em huma-
nos
54
.
agente deve ser obtida junto ao CDC.
Agente: Poliovrus
As infeces com o poliovrus adquiridas em laboratrios so
raras e se limitam s pessoas que trabalham diretamente com este
vrus em laboratrio e que no so vacinadas
55
. Existem no mnimo
12 casos documentados de infeces por poliovrus associados a
laboratrio, incluindo duas mortes entre 1941 e 1976
56
. Porm, uma
vez que ~1% das infeces com o poliovrus resultou em patologia,
sem uma confirmao laboratorial impossvel estimar precisamente
os nmeros das infeces adquiridas em laboratrio. Com vacinas
efi cazes, i nstal aes l aboratori ai s efi cazes, tecnol ogi a e
procedimentos so bem possvel que estas infeces j sejam raras
em laboratrios. Mas, se os trabalhadores de um laboratrio se
contaminarem, esses se tornaro uma fonte de vrus para a
populao no vacinada
57
. As infeces em animais, associadas a
laboratrio, entretanto, no tem sido relatadas
58
, mas os primatas
no-humanos experimentalmente ou naturalmente contaminados
poderiam ser uma fonte de infeco se expostos s pessoas no
185
imunizadas. Os ratos transgnicos apresentam o receptor humano
para o poliovrus e podem tambm ser fontes potenciais de infec-
o humana.
Riscos em Laboratrio: Esse agente est presente nas fezes
e em secrees de garganta de pessoas infectadas. A ingesto ou
a inoculao parenteral de tecidos ou lquidos infecciosos por
trabalhadores no imunizados considerada como risco primrio
de infeco em laboratrios. As exposies laboratoriais oferecem
um risco insignificante para as pessoas adequadamente imunizadas.
que utilizam lquidos sabidamente ou potencialmente infecciosos e
materiais clnicos contendo ou suspeitos de conter cepas do tipo
selvagens. Todos os trabalhadores de laboratrios que trabalhem
diretamente com o agente devero possuir um atestado de
vacinao ou provas sorolgicas da imunidade a todos os trs tipos
de poliovrus
59
. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana
Animal 2 so indicados para estudos de vrus virulentos em animais.
menos que existam fortes razes cientficas para o trabalho com
poliovrus virulentos (que foram erradicados dos Estados Unidos),
os laboratrios devero usar cepas de vacina oral Sabin de
poliovrus atenuado. Essas no oferecem risco algum equipe
imunizada dos laboratrios.
A Organizao Mundial de Sade (WHO) tem publicado guias
documentadas
60
relacionados ao trabalho com este poliovrus
selvagem. A partir de 1999, os laboratrios que manipulam o
poliovrus devero estabelecer um NB-2 (especfico para plio) para
todos os trabalhadores que manipulam ou que forem manipular o
poliovrus selvagem. As NB-2 para plio seguem os requisitos do
NB-2 tradicional quanto s instalaes, prticas e procedimentos
com os seguintes acrscimos: 1) todos os estoques de poliovrus e
materiais potencialmente infecciosos sero descartados quando no
houver mais a necessidade de ret-los para a realizao de pesquisa
ou diagnsticos; 2) todas as pessoas que entrarem no laboratrio
devero estar completamente imunizadas contra o vrus da plio;
3) o acesso ao laboratrio dever ser restrito; 4) todos os poliovrus
186
selvagens retidos no laboratrio devero ser relacionados e arma-
zenados em uma rea separada e segura com acesso limitado; 5)
somente os vrus que forem prontamente identificveis por mto-
dos moleculares sero usados se as cepas de vrus selvagens ou
estoques de trabalho forem necessrios; e 6) o descarte de
pol i ovrus sel vagens, materi ai s i nfecci osos e materi ai s
potencialmente infecciosos dever ser feito utilizando a esterilizao
e/ou a incinerao.
Todos os laboratrios que desejarem guardar materiais
contaminados por poliovrus selvagem ou potencialmente infeccioso
devero comear a implementao dos procedimentos de
conteno do Nvel de Biossegurana 3 para plio e fornecer a
documentao necessria para implementao at o segundo ano.
No caso de laboratrios que desejarem ser qualificados como uma
instalao de NB-3/plio e quiserem reter materiais contaminados
por poliovrus devero, ento, ser relacionados na Agency/
Institutional e no National Inventories. J os que no desejarem a
converso para uma conteno de NB especfica para a plio
devero destruir todos os materiais contendo o poliovrus selvagem
ou potencialmente infecciosos atravs da incinerao ou uso da
autoclave. Uma outra alternativa seria o contato com um depsito
designado pela Organizao de Sade Pblica especfico para
conteno de agentes de um NB-3/plio, e que sero responsveis
pelo transporte e armazenamento dos materiais selecionados.
Quando a imunizao pela OPV (vacina oral de poliovrus
vivos) terminar, todo o trabalho com o poliovrus selvagem ficar
restrito a laboratrios de conteno mxima (NB-4). Essas devero
ser em laboratrios cabines ou laboratrios de roupa de proteo
(Seo III).
Agente: Poxvrus
Casos espordicos de infeces por poxvrus (catapora,
vacni a, yabapox, tanabox) foram rel atados
61
. Evi dnci as
187
epidemiolgicas sugerem que a transmisso do vrus do macaco
para homens ou de roedores para homens possa ter ocorrido na
natureza, mas no nas dependncias de um laboratrio. Animais
de laboratrios naturalmente ou experimentalmente contaminados
so fontes potenciais de infeco para pessoas que trabalham em
um laboratrio e que no so vacinadas. Vrus da vacnia
recombinantes reproduzidos geneticamente oferecem um risco
potencial ainda maior para a equipe laboratorial devido ao contato
direto ou contato com materiais clnicos de voluntrios ou animais
contaminados.
Riscos em Laboratrio: Esses agentes podem ser encontrados
em lquidos de leses ou em escaras, secrees respiratrias ou
tecidos de hospedeiros contaminados. A ingesto, inoculao
parenteral e a exposio de membranas mucosas ou da pele
rachada aos perdigotos ou aerossis de lquidos ou tecidos
infecciosos so os riscos primrios para trabalhadores de
laboratrios e tratadores de animais. Alguns poxvrus so estveis
em temperatura ambiente quando secos e podem ser transmitidos
atravs dos fomitos.
Precaues Recomendadas: A posse e uso do vrus da varola
ficam restritos ao Collaborating Center for Smallpox and Other
Poxvirus Infections da Organizao Mundial de Sade localizado
nos Centros de Controle e Preveno de Doenas em Atlanta,
Gergia. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2
so recomendadas para todas as atividades envolvendo o uso ou
a manipulao de poxvrus, com exceo do vrus da varola, que
apresentam um grande risco de infeco aos homens. Todas as
pessoas que trabalham dentro de um laboratrio ou que forem entrar
nas reas de laboratrios ou reas dos animais onde atividades
com os vrus vaccnia, vrus da varola bovina e de macacos
estiverem sendo conduzidas devero possuir um atestado de
vacinao. Esta imunizao dever ter sido realizada dentro de um
perodo de dez anos. As atividades com os vrus relacionados acima
em quantidades maiores que as apresentadas nas culturas para
diagnstico, podero tambm ser conduzidas em um Nvel de
Biossegurana 2, mas por pessoas imunizadas j que todas as
188
manipulaes de materiais viveis devero ser realizadas em cabi-
nes de segurana biolgica Classe I ou II. Indivduos imunodeprimidos
correm um risco de adquirirem uma patologia ainda mais grave
quando infectado por um poxvrus
64
.
agente dever ser obtida junto ao CDC. No caso de uma licena
para exportao, esta dever ser obtida atravs do Department of
Commerce. O registro dos laboratrios junto ao CDC dever ser
obtido antes do envio ou recebimento destes agentes.
Agente: Vrus da Raiva
As infeces provocadas por este agente e adquiridas em
laboratrio so extremamente raras. Somente duas foram
documentadas. Todas as duas resultaram de uma suposta exposio
a nevoas infecciosa de altas titulaes, sendo uma formada em um
local de produo da vacina
65
e a outra em um local de pesquisa
66
.
Os animais naturalmente ou experimentalmente contaminados, seus
tecidos e excrees constituem uma fonte potencial de exposio
para o pessoal do laboratrio e tratadores de animais.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode estar presente em
todos os tecidos de animais contaminados. As maiores titulaes
so encontradas em tecidos, glndulas salivares e saliva do Sistema
Nervoso Central. A inoculao acidental, cortes ou farpas de
equipamento laboratorial contaminado, mordidas de animais
infectados e exposio de membranas mucosas ou pele rachada a
lquidos ou tecidos contaminados, so as fontes mais provveis de
riscos para a equipe laboratorial e tratadores de animais. J os
aerossis contaminados ainda no foram demonstrados como
sendo um perigo comprovado ao pessoal que trabalha com materiais
clnicos e que conduzem exames de diagnsticos. Cepas fixas ou
atenuadas deste vrus so supostamente menos perigosas, mas
os nicos dois casos comprovados de raiva adquiridos em
laboratrios resultaram de exposio de um Padro Viral Desafiador
(CVS) fixo e de uma cepa atenuada derivada de uma cepa SAD
(Street Alabama Dufferin), respectivamente
67, 68
.
189
que utilizam materiais sabidamente ou potencialmente infecciosos.
A imunizao recomendada para todos os indivduos antes que
se inicie o trabalho com o vrus da raiva ou com animais infectados,
ou atividades que envolvam o diagnstico, produo ou pesquisa
do vrus. A imunizao tambm recomendada para todos os
indivduos que forem entrar na mesma sala onde o vrus da raiva
ou de animais contaminados estiver sendo usado. Embora no seja
sempre possvel abrir o crnio ou retirar o crebro de um animal
infectado dentro de uma cabine de segurana biolgica, essencial
o uso de luvas pesadas de proteo para prevenir cortes ou farpas
de instrumentos cortantes ou de fragmentos de ossos e tambm o
uso de um escudo facial para proteo das membranas mucosas
dos olhos, nariz e boca quanto exposio destas aos perdigotos
infecciosos ou fragmentos de tecidos. Se a serra de Stryker for
usada para abrir o crnio, evite o contato do crebro com a lmina
da serra. A conteno primria e as precaues individuais
adicionais, como as descritas para o Nvel de Biossegurana 3,
podero ser indicadas para atividades com um alto potencial de
formao de aerossis ou perdigotos e para as atividades que
envolvam quantidades ou concentraes de materiais infecciosos
em grande escala.
Agente: Retrovrus, incluindo o Vrus da Imunodeficincia
Humana e o Vrus da Imunodeficincia Smia(HIV e SIV)
Os dados sobre a transmisso da HIV ocupacional em
trabalhadores de um laboratrio so coletados atravs de dois
sistemas de vigilncia nacional apoiados pelos CDC: vigilncia
quanto a: 1) AIDS e 2) pessoas infectadas pelo HIV que no
adquiriram a infeco atravs de exposies ocupacionais. Para
propsitos de vigilncia, os trabalhadores de laboratrios so
definidos como as pessoas, incluindo estudantes e estagirios, que
trabalham ou j trabalharam em um laboratrio para diagnstico
190
do HIV ou laboratrio clnico a partir de 1987. Os casos reportados
nestes dois sistemas so classificados como uma transmisso
ocupacional possvel ou documentada. As que so classificadas
como transmisso ocupacional documentada possuem evidncias
de uma soroconverso do HIV (um teste HIV negativo no momento
da exposio que se alterou e se tornou positivo) seguido de uma
discreta exposio ocupacional percutnea ou mucocutnea ao
sangue, lquidos ou outras amostras clnicas ou laboratoriais. At
junho de 1998, o CDC havia registrado 16 trabalhadores de
laboratrios (todos clnicos) nos Estados Unidos com transmisso
ocupacional documentada
69
.
Em 1992, dois trabalhadores de diferentes laboratrios
desenvolveram o Vrus da Imunodeficincia de Smios (SIV) aps
terem se exposto. Um caso estava associado a uma picada de
agulha que aconteceu enquanto o trabalhador estava manipulando
uma agulha contaminada com sangue aps uma hemorragia em
um macaco infectado por SIV
70
. J o outro envolveu um trabalhador
que manipulava amostras de sangue de um macaco infectado pelo
SIV sem usar luvas. Embora ele no se lembrasse deste incidente
especfico, este indivduo apresentou dermatites nos antebraos e
mo enquanto trabalhava com amostras de sangue infectado
71
. O
primeiro trabalhador apresentou uma soroconverso e, portanto
no apresentou evidncia alguma de infeco pelo SIV. O segundo
era soropositivo durante pelo menos nove anos sem evidncia
alguma da doena ou de deficincia imunolgica.
Publicaes recentes
72, 73
identificaram a prevalncia (4/231,
1.8%) da infeco por vrus espumosos de smios (SFV) entre
humanos ocupacionalmente expostos a primatas no-humanos. O
diagnstico de infeces por SFV inclui a soropositividade, deteco
de DNA proviral e isolamento do vrus espumoso. O SFV se originou
do macaco-verde africano (uma pessoa) e de babunos (trs
pessoas). Essas infeces ainda no provocaram doenas ou
transmisso sexual, e podem representar infeces endpoints
benignas.
Riscos em Laboratrio: O HIV tem sido isolado do sangue,
smen, saliva, lgrimas, urina, lquido cerebroespinhal e tecido de
191
pessoas infectadas e de primatas no-humanos experimentalmen-
te infectados
74
. O CDC recomenda que o cuidado com o sangue e
lquidos corporais seja usado consistentemente quando amostras
de sangue contaminadas estejam sendo manipuladas
75, 76
. Esta
abordagem, chamada de precaues universais, inclui a
necessidade de identificar as amostras clnicas obtidas de pacientes
soropositivos ou de se realizar um teste HIV da amostra.
Embora o risco de um HIV adquirido ocupacionalmente ser
primariamente atravs da exposio ao sangue contaminado, deve-
se usar luvas quando outros lquidos corporais como fezes, saliva,
urina, lgrimas, suor, vmito e leite do seio humano estiverem sendo
manipulados. Este procedimento tambm reduzir o potencial de
exposio a outros microorganismos que possam causar outros
tipos de infeces.
No laboratrio, deve-se supor que o vrus esteja presente
em todas as amostras sanguneas e clnicas contaminadas por
sangue, em qualquer tecido ou rgo (que no seja a pele intacta)
humano (vivo ou morto) no fixado, em culturas de HIV, em todos
os materiais derivados de culturas de HIV e em/sobre equipamentos
e dispositivos que tenham um contato direto com qualquer um destes
materiais.
J o SIV tem sido isolado no sangue, lquido cerebroespinhal
e em uma variedade de tecidos de primatas no-humanos
infectados. Existem dados limitados sobre a concentrao do vrus
no smen, saliva, lquido cerebroespinhal, urina, leite materno
humano e no lquido amnitico. No laboratrio, deve-se supor que
o vrus esteja presente em todas as culturas com SIV, em animais
experimentalmente infectados ou inoculados com SIV, em todos os
materiais derivados de culturas de HIV ou de SIV e em/sobre todos
os equipamentos de dispositivos que tenham um contato direto com
qualquer um destes materiais
77
.
No laboratrio, a pele (especialmente quando arranhes,
cortes, abrases, dermatites ou outras leses estiverem presen-
tes) e as membranas mucosas dos olhos, nariz e boca devero ser
consideradas como vias de entradas potenciais destes retrovrus.
192
No se sabe se a infeco pode ocorrer via trato respiratrio. A
necessidade do uso de objetos cortantes no laboratrio dever ser
avaliada. Agulhas, instrumentos afiados, vidros quebrados e ou-
tros objetos afiados devero ser cuidadosamente manipulados e
adequadamente descartados. Deve-se tomar cuidado para preve-
nir a formao de borrifos ou vazamento do lquido de cultura de
clulas contaminadas e de outros materiais contendo o vrus ou
potencialmente contaminados
78
.
Precaues Recomendadas:
Alm das seguintes precaues recomendadas, as pes-
soas que trabalham com o HIV, SIV ou outros patgenos pre-
sentes no sangue devero consultar o OSSHA Bloodborne
Pathogen Standard
79
. As questes relacionadas interpre-
tao deste Padro devero ser dirigidas aos escritrios
Federais, regionais ou estaduais da OSHA.
1. O padro do NB-2 e prticas especiais, equipamento de con-
teno e instalaes so indicadas para as atividades que
envolvam todas as amostras clnicas contaminadas com san-
gue, lquido corporal e tecidos de todos os homens ou de
animais laboratoriais inoculados ou infectados com SIV ou HIV.
2. As atividades como a produo de quantidades em grande
escala para laboratrios de pesquisas de HIV ou SIV, manipu-
lao de preparaes concentradas de vrus e conduo de
procedimentos que

possam formar perdigotos ou aerossis,
devero ser realizadas em um local de NB-2, mas usando
prticas e equipamentos de conteno adicionais recomen-
dadas para o Nvel de Biossegurana 3.
3. As atividades que envolvem volumes em escala industrial ou
preparao de HIV ou SIV concentrado devero ser conduzi-
dos em um local de NB-3, usando prticas e equipamento de
conteno 3.
4. Primatas no-humanos ou outros animais infectados com HIV
ou SIV devero ser alojados em instalaes de NB-2 usando
prticas especiais e equipamento de conteno de NBA-2.
193
1. No existem evidncias que as roupas usadas em laboratrio
representam um risco para a transmisso do retrovrus; po-
rm, as roupas contaminadas pelo HIV ou o SIV devero ser
descontaminadas antes de serem encaminhadas
p
ara a lavan-
deria ou descartadas. A equipe do laboratrio dever retirar a
roupa usada neste local antes de se dirigirem s reas no
pertencentes ao laboratrio.
2. As superfcies de trabalho devero ser descontaminadas com
um germicida qumico apropriado depois do procedimento ser
concludo, quando as superfcies estiverem excessivamente
contaminadas e no final de cada dia de trabalho. Muitos
desinfetantes qumicos vendidos comercialmente
80, 81, 82, 83,84
podero ser utilizados para a descontaminao das superfcies
do laboratrio e de alguns instrumentos, para limpeza local de
roupas contaminadas usadas em laboratrio e para vazamento
de materiais infecciosos. A descontaminao imediata de
vazamentos ocorridos dever ser uma prtica padro.
3. O soro humano de qualquer fonte usado como um controle ou
reagente em um teste dever ser manipulado em um NB-2.
4. Recomenda-se que todas as instituies estabeleam normas
por escrito em relao ao gerenciamento das exposies em
laboratrio do HIV e SIV juntamente com as leis federais,
estaduais e locais aplicveis. Tais normas devero considerar
como confidenciais questes como o consentimento para
realizao de teste, administrao de terapia de drogas
profilticas adequadas85, aconselhamento e outros itens
relacionados. Se um trabalhador do laboratrio expuser a
membrana mucosa ou parenteral ao sangue, lquido corporal
ou material de cultura viral, o material utilizado dever ser
identificado e, se possvel, testado para verificao da presena
do vrus. Se o material fonte for HIV positivo para o antgeno,
vrus ou anticorpo, ou no possuir quantidade suficiente para
realizao do teste, o trabalhador dever ser aconselhado
Comentrios Adicionais:
194
sobre o risco de infeco e dever ser avaliado clinicamente e
sorologicamente para evidncia de uma infeco por HIV. A
profilaxia ps-exposio dever ser oferecida de acordo com
as ltimas normas. O trabalhador deve ser advertido a relatar
e procurar atendimento mdico caso haja a ocorrncia de um
quadro agudo de febre, com 12 semanas aps a exposio
86
.
Uma vez que a doena possui caractersticas singulares, se o
indivduo apresentar sintomas como febre, erupes ou
linfoadenopatias, estes podero ser indicativos de uma
infeco recente ao HIV. Se no incio (no momento da
exposio) o teste for negativo, o trabalhador dever refazer
o teste 6 semanas depois da exposio e a partir da
periodicamente (isto , na 12 semana e no 6, 9 e 12 ms
aps a exposio). Durante este acompanhamento, os
trabal hadores expostos devero ser aconsel hados a
prevenirem a transmisso do HIV
87, 88, 89, 90,91
.
5. Outros agentes patognicos oportunistas e primrios podero
estar presentes nos lquidos corporais e tecidos de pessoas
infectadas com o HIV. Os trabalhadores de laboratrios devero
seguir as prticas de biossegurana aceitas para assegurar
uma proteo mxima contra a exposio inadvertida aos
agentes que podem tambm estar presentes em amostras
clnicas ou em amostras obtidas de primatas no-humanos
92,
93,94
.
A pesquisa envolvendo outros retrovrus humanos (isto ,
vrus linfotrpico-T tipo I e II) e de smios est sendo desenvolvida
em muitos laboratrios. Uma vigilncia recente para essas infeces
revelou a exposio e infeco ocupacional pelo vrus espumoso
do smio entre zeladores de animais de locais de pesquisa
laboratoriais
95, 96
. As precaues destacadas acima devero ser
suficientes enquanto o trabalho com esses agentes estiver sendo
conduzido.
Os laboratrios que trabalham com vetores do retrovrus,
especialmente os que possurem genomas moleculares infecciosos
de longa durao (HIV-1), devero ser manipulados em NB-2 sob a
195
prtica de NB-2/3. Isto inclui os clones infecciosos derivados de
vrus no-humanos, mas que possuem uma esfera de hospedeiro
xemotrpio (especialmente para clulas humanas).
Agente: Encefalopatias Espongiformes Transmissveis (por
agentes da Creutzfeldt-Jakob, kuru e outros agentes)
As infeces por encefalopatias espongiformes transmissveis
e adquiridas em laboratrio (doenas prinica) ainda no foram
documentadas. Porm, existe uma evidncia de que a doena de
Creutzfeldt-Jakob (CJD) tenha sido iatrogenicamente transmitida
aos pacientes atravs de transplantes de crnea, transplante da
dura-mter e extrao do hormnio do crescimento das glndulas
pituitrias humanas e atravs da exposio aos eletrodos
eletroencefalogrficos contaminados
97
. A infeco sempre fatal.
No se conhece um reservatrio no-humano para a CDJ ou para
a kuru. Os primatas no-humanos e outros animais de laboratrios
foram contaminados atravs da inoculao, mas no existem
evidncias de uma transmisso secundria. A scrapie de ovelhas
e cabras, a encefalopatia espongiforme bovina e a encefalopatia
de vises so encefalopatias espongiformes transmissveis de
animais que so semelhantes s doenas humanas transmissveis.
Entretanto, no existem evidncias de que as doenas animais
possam ser transmitidas ao homem. (Veja tambm a Seo VII-D,
Prions).
Riscos em Laboratrio: Altas titulaes de um agente
transmissvel foram encontradas no crebro e medula espinhal de
pessoas com kuru. Em pessoas com a doena de Creutzfeldt-Jakob
e as variantes da Sndrome de Gerstmann-Strussler-Schenker,
encontrou-se um agente transmissvel semelhante no crebro,
bao, fgado, ndulos linfticos, pulmes, medula espinhal, rins,
crnea e lentes e no lquido espinhal e sangue. A inoculao
parenteral acidental, especialmente de tecidos nervosos, incluindo
amostras de tecidos no fixados, extremamente peri
go
sa. Embora
196
os tecidos no - nervosos sejam bem menos infecciosos, todos os
tecidos de homens e de animais infectados com esses agentes
devero ser considerados potencialmente perigosos. O risco de
uma infeco atravs de aerossis, perdigotos e de exposies da
pele intacta, das membranas mucosas e gstricas no conhecido;
mas no h evidncia de contaminaes por transmisso atravs
de aerossis ou contato. Esses agentes so caracterizados pela
extrema resistncia aos procedimentos de inativao convencionais
incluindo a radiao, a ebulio, o calor seco e as substncias
qumicas (formalina, betapropiolactona, lcool). Porm, eles foram
inativados atravs do uso
d
e NaOH a 1 N, ao hipocloreto de sdio
(concentrao sem cloro 2%) e da autoclave a vapor durante
quatro horas e meia em uma temperatura de 132 C.
Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todos as atividades
utilizando tecidos e lquidos sabiamente ou potencialmente
infecciosos de homens naturalmente infectados e de animais
experimentalmente infectados. Deve-se tomar um extremo cuidado
para evitar a auto-inoculao acidental ou outras inoculaes
parenterais traumticas de tecidos e lquidos infecciosos
98
. Embora
no haja evidncias que sugiram a transmisso via aerossis na
doena natural, mais prudente evitar a formao de aerossis ou
perdigotos durante a manipulao de tecidos e lquidos e durante
a necropsia de animais experimentais. Recomenda-se muito o uso
de luvas para as atividades que proporcionem o contato da pele
com tecidos e lquidos infectados. Os tecidos fixados em formaldedo
e imersos em parafina, especialmente os tecidos do crebro,
permanecem infecciosos. Recomenda-se, ento, que os tecidos
de casos suspeitos de encefalopatia fixados em formalina, sejam
imersos em cido frmico a 96% durante trinta minutos antes do
processamento histopatolgico
99
. As vacinas no esto disponveis
para uso em humanos
100
.
agentes dever ser obtida atravs do CDC. A licena para
importao ou transporte domstico do vrus da encefalopatia
espongiforme bovina poder ser obtido atravs do USDA/APHIS/
VS.
197
Agente: Vrus da Estomatite Vesicular (VSV)
Um nmero de infeces por cepas nativas do VSV adquiri-
das em laboratrio foi relatado
101
. As atividades laboratoriais com
essas cepas apresentam dois diferentes nveis de risco ao pessoal
do laboratrio e esto relacionadas, pelo menos em parte, hist-
ria das passagens das cepas utilizadas. As atividades que usam
criaes, seus tecidos infectados e substncias virulentas isoladas
destas fontes so um perigo demonstrado aos funcionrios do
laboratrio e aos tratadores de animais
102, 103
. Os ndices de
soroconverso e doena clnica em pessoas que trabalham com
estes materiais so altos
104
. Riscos semelhantes podem estar
associados s cepas exticas como a Piry
105
.
Em contraste, informaes no oficiais indicam que as
atividades com cepas menos virulentas adaptadas a laboratrio
(por exemplo, Indiana, San Juan e Glascow) so raramente
associadas com a soroconverso ou com a doena. Essas cepas
so comumente utilizadas por bilogos moleculares, freqentemente
em grandes volumes e altas concentraes, sob condies de
conteno mnima ou nenhuma conteno primria. Algumas cepas
do VSV so consideradas organismos restritos pelos regulamentos
da USDA (9CFR 122.2). Ratos infectados experimentalmente no
serviram como uma fonte documentada de infeco humana.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado no
lquido vesicular, tecidos de animais infectados e no sangue e
secrees de garganta de homens infectados. A exposio aos
aerossis ou perdigotos contaminados, ao contato direto da pele e
da membrana mucosa com os tecidos e lquidos infectados e a
auto-inoculao acidental, so os perigos primrios associados com
a substncia virulenta isolada. A inoculao parenteral acidental e
a exposio aos aerossis infectados representam os riscos
potenciais ao pessoal que trabalha com cepas menos virulentas
adaptadas aos laboratrios.
Precaues Recomendadas:As prticas e instalaes do nvel
de biossegurana 3 so indicadas para atividades que envolvam o
198
uso ou a manipulao de tecidos infectados e substncias virulen-
tas isoladas de animais de criao infectados naturalmente ou ex-
perimentalmente. As luvas e a proteo respiratria so recomen-
dadas para a necropsia e manuseio de animais infectados. As pr-
ticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para
atividades que utilizam cepas adaptadas em laboratrios de baixa
virulncia. As vacinas no esto disponveis para uso em huma-
nos.
Transferncia do Agente: A licena para exportao deste
agente dever ser obtida no Department of Commerce. J a licena
para importao ou transporte domstico para este agente dever
ser obtido no USDA/APHIS/VS.
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205
Seo VII-G: Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados
Arbovrus Designados para o Nvel de Biossegurana 2
O American Committee on Arthropod-Borne Viruses (ACAV)
registou 537 casos de arbovrus at dezembro de 1997. Em 1979,
o subcomit da ACAV sobre a Segurana quanto ao Arbovrus em
Laboratrio (SALS Subcommittee on Arbovrus Labroratory
Safety) classificaram e registraram 424 vrus no Catalogue of
Arboviruses and Certain Other Viruses of Vertebrates
1
(Catlogo
de Arbovrus e Alguns Outros Vrus de Vertebrados) em um dos
quatro grupos de prticas, equipamento de segurana e instala-
es

recomendadas. Essas recomendaes esto descritas nesta
publicao como Nveis de Biossegurana 1-4
2
. A SALS tem
atualizado periodicamente a publicao de 1980, fornecendo uma
lista suplementar para os arbovrus registrados desde 1979.
As classificaes da SALS se baseiam nas avaliaes do ris-
co derivadas de informaes fornecidas por uma pesquisa mundial
de 585 laboratrios que trabalham com o arbovrus. A SALS reco-
menda que o trabalho com grande parte destes agentes seja con-
duzido em um nvel semelhante ao Nvel de Biossegurana 2 (Ta-
bela 2). A SALS tambm reconhece cinco cepas de vacinas
comumente usadas, nas quais a atenuao foi firmemente
estabelecida. Esses vrus podem ser manipulados com segurana
em um Nvel de Biossegurana 2, uma vez que as pessoas que
trabalham com essas cepas de vacinas so imunizadas (Tabela 2).
A SALS classificou todos os vrus registrados, com os quais a ex-
perincia laboratorial insuficiente como um Nvel de Biossegurana
3 (Tabela 3) e reavalia a classificao assim que recebe novas
informaes.
Os vrus classificados como um NB-2, esto relacionados por
ordem alfabtica na Tabela 1 e incluem os seguintes agentes que
so relatados como causadores de infeces adquiridas em labo-
ratrio
3, 4,5
.
Vrus Casos
Estomatite Vesicular** 46
Febre do carrapato do Colorado 16
Dengue* 11
Pichinde 17
206
Encefalomielite eqina ocidental** 7 (2 mortes)
Rio Bravo 7
Kunjin 6
Catu 5
Caraparu 5
Rio Ross 5
Bunyamwera 4
Encefalomielite eqina do leste** - * 4
Zika 4
Apeu 2
Marituba 2
Tacaribe 2
Murutucu 1
Onyong nyong 1
Modoc 1
Oriboca 1
Ossa 1
Keystone 1
Bebaru 1
Bluetongue *-** 1
* Licena de exportao obtida atravs do Department of Commerce.
** A licena para importao ou transporte domstico para este
agente pode ser obtido atravs do USDA/APHIS/VS.
Os resultados de uma pesquisa realizada pela SALS indicam,
claramente, que a fonte suspeita das infeces adquiridas em
laboratrio relacionadas acima no foi a exposio aos aerossis
infecciosos. A recomendao de que o trabalho com os 342 vrus
relacionados acima na Tabela 1 seja conduzido em um Nvel de
Biossegurana 2, baseou-se na existncia de uma experincia
laboratorial durante toda a histria para a avaliao dos riscos do
trabalho com este grupo de vrus de riscos. Isto indica que (a)
nenhuma infeco aberta e associada ao laboratrio foi relatada;
(b) as infeces foram provocadas por exposies diferentes das
exposies aos aerossis; ou (c) se a doena provocada pela
exposio aos aerossis foi documentada, ela rara.
Relao de Agentes Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados
207
Riscos em Laboratrio: Os agentes relacionados neste gru-
po podem ser encontrados no sangue, lquido cerebroespinhal,
tecidos do sistema nervoso central e outros tecidos e em artrpodes
infectados, dependendo do agente e do estgio da infeco. Os
riscos primrios em laboratrios so impostos pela inoculao
parenteral acidental, contato do vrus com pele rachada ou
membranas mucosas e mordidas de roedores e artrpodes de
laboratrio. Porm, os aerossis infecciosos podem tambm ser
uma fonte potencial de infeco.
segurana e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicados
para as atividades com materiais clnicos potencialmente
infecciosos, ovos embrionados e roedores. A infeco de galinhas
recm-nascidas pelos vrus da encefalomielite eqina ocidental e
do leste especialmente perigosa e dever ser manipulada por
pessoas imunizadas em condies de um Nvel de Biossegurana
3. As vacinas investigacionais (IND) contra a encefalomielite eqina
do leste e a ocidental esto a disposio atravs do Centro de
Preveno e Controle da Doena (telefone 404-639-3356) e atravs
do Instituto de Pesquisa Mdica de Doenas Infecciosas do Exrcito
(USDAMRIID) em Fort Detrick, Maryland (telefone 301-619-2833).
O uso destas vacinas recomendado para as pessoas que
trabalham diretamente e regularmente com esses dois agentes no
laboratrio.
Antes de 1988, foram relatados 12 casos de dengue
adquiridos em laboratrios. Porm, de 1988 at 1991, somente
quatro casos foram documentados. Em todos os quatro casos, no
se usou uma roupa de segurana apropriada (jaleco de manga
comprida amarrado atrs, luvas, mscaras e culos de proteo) e
em trs casos a conteno para aerossis potenciais em uma cabine
de biossegurana de fluxo laminar foi ignorada. Esses sprays ou
lquidos infectados possivelmente contaminaram a pele desprotegida
ou rachada. Um fator adicional nestes casos foi o trabalho com
quantidades de vrus altamente concentradas. A manipulao
segura do vrus da dengue em laboratrio (particularmente em
preparaes concentradas) requer uma obedincia severa s
recomendaes do Nvel de Biossegurana 2.
208
Grandes quantidades e/ou altas concentraes de qualquer
vrus possui um potencial para superar os mecanismos imunes
naturais e a imunidade induzida pela vacina. Quando um vrus do
Nvel de Biossegurana 2 produzido em grandes quantidades ou
em altas concentraes, os diretores dos laboratrios devero
garantir que a roupa de proteo adequada seja usada, como
descrita no pargrafo acima, e que as manipulaes sejam
realizadas em cabines de biossegurana de fluxo laminar (Veja
tambm a Seo V, Avaliao do Risco).
agentes dever ser conseguida atravs do CDC. O registro do
laboratrio junto ao CDC necessrio antes do envio ou
recebimento destes agentes.
Tabela 1. Arbovrus e Arenavrus designados para o Nvel d
Bouiboui
Bujaru
Bunyamwera
Bunyp Creek
Burg El Arab
Bushbush
Bussuquara
Buttonwillow
Bwamba
Cacao
Cache Valley
Caimito
California enc.
Calovo
Candiru
Cape Wrath
Capim
Caraparu
Catu
Chaco
Chagres
Chandipuras
Changuinola
Abras
Abu Hammad
Acado
Acara
Aguacate
Alfuy
Almpiwar
Amapari
Ananindeua
Anhang
Anhembi
Anfilo A
Anfilo B
Apeu
Apoi
Aride
Arkonam
Aroa
Aruac
Arumowot
Aura
Avalon
Babahoyo
Bagaza
Bahig
Bakau
Baku
Bandia
Bangoran
Bangui
Banzi
Barur
Batai
Batama
Bauline
Bebaru
Belmont
Benevides
Benfica
Bertioga
Bimiti
Birao
Bluetongue*
Boracia
Botambi
Boteke
209
Chardleville
Chenuda
Chilibre
Chobar gorge
Clo Mor
Corriparta
Cotia
Cowbone Ridge
Csiro Village
Cuiab
DAguilar
Dengue-1
Dengue-2
Dengue-3
Dengue-4
Dera Ghazi Khan
do Leste **
Doena Hem. Ep
Edge Hill
Encef. Eqina
Encef. Eqina
Ocid.**
Erve
Eubenangee
Eyach
Feb. do carrapato
do Colorado
Febre do Mosquito-
Plvora (Naples)
Febre do Mosquito-
Plvora (Sicilian)
Febre Hem de
Smios
Flanders
Floresta Barmah
Forte Morgan
Frijoles
Gamboa
Gan Gan
Gomoka
Gossas
Grand Arbaud
Great Island
Guajara
Guama
Guaratuba
Guaroa
Gumbo Limbo
Hart Park
Highlands J
Huacho
Hughes
Icoaraci
Ieri
Ilesha
Ilha Carey
Ilheus
Ingwavuma
Inkoo
Ippy
Irituia
Isfahan
Itaporanga
Itaqui
Jamestown Canyon
Japanaut
Johnson Atoll
Joinjakaka
Juan Diaz
Jugra
Jurona
Jutiapa
Kadam
Kaeng Khoi
Kaikalur
Kaisodi
Kamese
Kammavanpettai
Kannamangalam
Kao Shuan
Karimabad
Karshi
Kasba
Kemerovo
Kern Canyn
Ketapang
Keterah
Keuraliba
Keystone
Kismayo
Klamath
Kokobera
Kolongo
Koongol
Kowanyama
Kunjin
Kununurra
Kwatta
La Crosse
La Joya
Landjia
Langat
Lanjan
Las Maloyas
Latino
Le Bombo
Le Dantec
Lednice
Lipovnik
Lokern
Lone Star
Lukuni
Mpoko
Madrid
Maguari
Main Drain
Malakal
210
Manawa
Manitoba
Manzanilla
Mapputta
Maprik
Marco
Marituba
Marrakai
Matara
Matruh
Matucare
Melao
Mermet
Minatitlan
Minnal
Mirim
Mitchell River
Modoc
Mono Lake
Mont. Myotis leuk
Morcego Dakar
Morcego Entebe
Morcego Lagos
Morcego Mount
Elgon
Morcego Phnom-
Penh
Moriche
Mosqueiro
Mossuril
Murutucu
Mykines
Navarro
Ncgaigan
Nepuyo
Nique
Nkolbisson
Nola
Ntaya
Nugget
Nyamanini
Nyando
Onyong-nyong
Okhotskiy
Okola
Olifantsvlei
Oriboca
Ossa
Pacora
Pacui
Palyam
Paran
Pata
Pathum Thani
Patois
Pichinde
Pixuna
Pongola
Ponteves
Precarious Point
Pretoria
Prospect Hill
Puchong
Punta Salinas
Punta Toro
Qalyub
Quaranfil
Rede Mahogany
Restan
Rio Bravo
Rio Grande
Ross River
Royal Farm
Sabo
Saboya
Saint Floris
Sakhalin
Salehabad
San Angelo
Sandjimba
Sango
Sathuperi
Sawgrass
Sebokele
Seletar
Serra do Navio
Shark River
Sharmonda
Shuni
Silverwater
Simbu
Sindbis
Sixgun City
Snowshoew hare
Sokuluk
Soldado
Sororoca
Stratford
Sunday Canyon
Tacaiuma
Tacaribe
Taggert
Tahyna
Tamiami
Tanga
Tanjong Rabok
Tataguine
Tehran
Tembre
Tembusu
Tensaw
Tete
Tettnang
Thimiri
211
* A licena para a exportao deste agente deve ser obtida atravs
do Department of Commerce.
** A vacina j se encontra disponvel e recomendada para todas
as pessoas que trabalham com o agente.
a licena para importao ou para o transporte domstico para
este agente poder ser obtido junto ao USDA/APHIS/VS.
agentes dever ser obtida atravs do CDC. O registro do laborat-
rio junto ao CDC necessrio para o envio ou recebimento destes
agentes.
Tabela 2. Cepas vacinais de vrus do NB-3/4 que podem ser
manipulados em um Nvel de Biossegurana 2.
Vrus Cepa da Vacina
Chikungunya* 131/25
Junin*
C
ndida N 1
Febre do Vale Rift* 20 MP-12
Encefalomielite Eqina Venezuelana* TC-83
Febre amarela* 17-D
* A licena para exportao deve ser obtida atravs do Department
of Commerce.
Thottapalayan
Tibrogargan
Timbo
Timboteua
Toscana
Toure
Tribec
Triniti
Trivittatus
Tsuruse
Turlock
Tyndholmur
Tyuleniy
Uganda S
Uma
Umatilla
Umbre
Upolu
Urucuri
Usutu
Uukuniemi
Vellore
Venkatapuram
Vinces
Virgin River
VS-Indiana
VS-New Jersey
Wad Medani
Wallal
Wanowrie
Warrego
Whataroa
Witwatersand
Wongal
Wongorr
Wyeomyia
Yaquina Head
Yata
Yogue
Zaliv Terpeniya
Zegla
Zika
Zirqa
212
Arbovrus e Arenavrus Designados para o Nvel de
Biossegurana 3.
A SALS recomenda que o trabalho com os 184 arbovrus
includos nas listas por ordem alfabtica das Tabelas 3 e 4 seja
conduzido pelas prticas, equipamento de segurana e instalaes
semelhantes as do Nvel de Biossegurana 3. Essas recomendaes
baseiam-se nos seguintes critrios: para a Tabela 3, a SALS
considerou a experincia inadequada laboratorial para a avaliao
de risco, sem levar em considerao as informaes disponveis
sobre a gravidade da doena. Para os agentes relacionados na
Tabela 4, a SALS registrou as infeces adquiridas em laboratrios
abertos e que eram transmitidas atravs de aerossis e na ausncia
de vacinas. A SALS considerou que a doena natural em homens
potencialmente grave, ameaa vida ou causa seqelas. Os
arbovrus tambm foram classificados no NB-3 se causassem
doenas em animais domsticos em pases fora dos Estados Unidos.
As infeces associadas ao laboratrio ou ao laboratrio
animal com os seguintes agentes de NB-3 foram relatados6, 7,8:
Vrus Casos (SALS)
Encefalomielite Eqina Venezuelana* 150 (1 morte)
Febre do Vale Rift

* 47 (1 morte)
Chikungunya * 39
Febre Amarela* 38 (8 mortes)
Encefalite Japonesa* 22
Encefalite Ovina 22
Nilo Oeste 18
Coriomeningite Linfoctica* 15
Orungo 13
Piry 13
Wesselsbron 13
Mucambo 10
Bhanja 6
Hantaan* 6
Mayaro 5
213
Spondweni 4
Encefalite do Vale Murray 3
Semliki Forest 3 (1 morte)
Powassan 2
Dugbe 2
Issyk-kul 1
Koutango 1
A licena para a exportao destes agentes deve ser obtida no
Department of Commerce.
A licena para a importao ou transporte domstico do agente
dever ser conseguida junto ao USDA/APHIS/VS.
Grandes quantidades e altas concentraes do Vrus da
Floresta de Semliki so comumente usadas ou manipuladas por
bilogos moleculares sob condies de uma conteno moderada
ou baixa. Embora os anticorpos tenham sido demonstrados em
indivduos que trabalhavam com esse vrus, a primeira infeco
aberta (e fatal) adquirida em laboratrio foi relatada em 1979. Uma
vez que o resultado desta infeco pode ter sido influenciada por
uma via de exposio incomum ou por uma alta dose, um hospedeiro
comprometido ou uma cepa de vrus mutante, este caso e seu
resultado no so exemplos tpicos. Mais recentemente, o SFV foi
associado ao surto de doena febris entre soldados europeus cuja
base militar era em Bangui
9
. A via de exposio no foi determinada
na infeco laboratorial fatal; uma vez que os mosquitos foram os
provveis vetores destas infeces naturais. A SALS continua a
classificar este vrus (SFV) como um vrus do NB-3, com advertncia
de que a maioria das atividades com esse vrus pode ser conduzida
com segurana em um Nvel de Biossegurana 2.
Alguns vrus (por exemplo, a meningoencefalite turca de
Israel, Akabane) esto relacionados em um NB-3, no por serem
uma ameaa sade humana, mas por serem doenas exticas
de aves ou criaes domsticas.
Riscos em Laboratrio: Os agentes relacionados neste grupo
podem ser encontrados no sangue, lquido cerebroespinhal, urina
214
e exudatos dependendo do agente especfico e estgio da doen-
a. Os riscos laboratoriais primrios so a exposio aos aerossis
de solues infecciosas e roupas de cama de animais, inoculao
parenteral acidental e o contato com a pele rachada. Alguns des-
tes agentes (por exemplo, o VEE) podem ser relativamente est-
veis no sangue seco ou em exudatos. Para os vrus de um NB-3/4,
as cepas atenuadas existem e podem ser manipuladas em um NB-
2, como relacionado na Tabela 2.
segurana e instalaes do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas
para as atividades que usam materiais clnicos potencialmente
infecciosos e culturas de tecido, animais e artrpodes infectados.
Um vrus vivo atenuado licenciado se encontra a disposio
para a imunizao contra a febre amarela. Recomenda-se o uso
desta vacina para as pessoas que trabalham com este agente ou
com animais infectados e a pessoas autorizadas a entrarem na
sala onde os agentes ou os animais infectados estejam presentes.
Realmente, para esta vacina, a infectividade dos aerossis e alto
ndice de fatalidade do vrus da febre amarela fazem com que ele
seja classificado como um vrus do NB-4. Para a encefalomielite
eqina venezuelana, a vacina investigacional TC-83 proporciona
uma excelente proteo contra muitas cepas epizoticas. Esta
proteo pode se estender a outras cepas de VEE do complexo,
incluindo os vrus Everglades, Mucambo, Tonate e Cabassou. A
vacina TC-38 dever ser usada como parte de um programa de
segurana e pode ser particularmente importante para a proteo
das pessoas que trabalham com animais infectados e vrus
concentrados. A administrao da vacina e o uso deste complemento
inativado (C-84) devero ser determinados por peritos com
experincia no uso destas vacinas dentro das restries compatveis
com as drogas de pesquisas. De forma semelhante, a vacina IND
inativada est a disposio para o vrus da febre do Vale Rift. Uma
vacina de vrus Junin atenuado (Cndida n 1) tambm est
disponvel. Essas vacinas de IND podem ser obtidas atravs do
U.S Army Medical Research and Material Command, aps consulta
ao USAMRIID (telefone 301-619-2833).
215
A SALS tem diminudo a classificao do risco biolgico do
vrus Junin para o nvel de Biossegurana 3, j que todas as pes-
soas do grupo de risco so imunizadas e o laboratrio se encontra
equipado com filtros HEPA de exausto. A SALS tambm diminuiu a
classificao do vrus da encefalite transmitida pelo carrapato da
Europa Central (CETBE) para o Nvel de Biossegurana 3, j que
todas as pessoas do grupo de risco so imunizadas. Uma vacina
IND inativada para o CTEBE se encontra disponvel atravs da
USAMRIID e recomendada para todos os funcionrios de
laboratrios e tratadores de animais que trabalham com o agente
ou os animais infectados e tambm para todas as pessoas que
entrarem nos laboratrios ou nas salas de animais quando o agente
estiver sendo usado.
Conteno acentuada do Nvel de Biossegurana 3: Podem
ocorrer situaes onde so necessrias intensificaes das prticas
e equipamentos do nvel de Biossegurana 3. Um exemplo desta
situao seria um laboratrio de NB-3 realizar testes de diagnsticos
em amostras de pacientes com febre hemorrgica quando se
suspeita de uma febre amarela ou dengue. Quando a origem das
amostras a frica, o Oriente Mdio ou a Amrica do Sul, o potencial
est presente em amostras que contenham agentes etiolgicos
como o arenavrus, filovrus ou outros vrus que so geralmente
manipulados em laboratrios de NB-4. As intensificaes aos
laboratrios de NB-3 podem incluir uma ou mais destas trs
categorias a seguir: a) aumentada proteo respiratria individual
contra os aerossis; b) filtrao pelo HEPA do ar liberado do
l aboratri o; c) descontami nao de efl uentes l qui dos de
laboratrios. Um treinamento apropriado para as pessoas que tratam
os animais dever ser considerado.
Bioconteno de Agentes Infecciosos Desconhecidos: As
decises em relao classificao do perigo biolgico para
materiais que contenham um vrus infeccioso devero se basear
em todas as informaes disponveis em relao ao agente. Os
vrus isolados de pacientes humanos infectados devero ser
manipulados em um nvel de biossegurana 3 com precaues
intensificadas, como detalhado no resumo as caractersticas do
216
agente Hantavrus, ou de preferncia em um NB-4, a menos que se
tenha certeza que o agente no infeccioso atravs de aerossis.
Todas as amostras desconhecidas devero ser manipuladas em
um NB-3, a menos que haja evidncias de uma transmisso atravs
de aerossis (que iria requer uma conteno do NB-4). A SALS
continuar a avaliar a infectividade e os dados sobre virulncia
para todos os vrus registrados no Catalogue of Arboviruses and
Certain Other Viruses of Vertebrates e para vrus recentemente
desenvolvidos antes do registro.
Transferncia do Agente: A licena para a importao destes
agentes dever ser conseguida junto ao CDC.
Tabela 3. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o
Nvel de Biossegurana 3 (baseado em experincia
insuficiente)
Adelaide River
gua Preta
Alenquer
Almeirim
Altamira
Andasibe
Antequera
Araguari
Aransas Bay
Arbia
Arboledas
Babanki
Batken
Belm
Berrimah
Bimbo
Bobaya
Bobia
Bozo
Buenaventura
Cabassou,
Cacipacore
Calchaqui
Canania
Canind
Chim
Coastal Plains
Connecticut
Corfou
Dabakala
Douglas
Enseada
Estero Real
Fomede
Forecariah
Fort Sherman
Gabek Forest
Gadgets Gully
Garba
Gordil
Gray Lodge
Gurupi
Iaco
Ibaraki
Ife
Iguape
Inhangapi
Inini
Issyk-Kul
Itaituba
Itimirim
Itupiranga
Jacareacanga
Jamanxi
Jar
Kedougou
Khasan
Kindia
Kyzylagach
Lake Clarendon
Llano Seco
Macaua
Mapuera
217
A SALS recomenda que o trabalho com este agente dever ser
feito somente em instalaes de NB-3 que proporcionem a filtrao
HEPA de todo o ar liberado antes de ser jogado para o laboratrio.
A vacina TC-83 est disponvel e recomendada para todas as
pessoas que trabalham com o agente.
Tabela 4. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o
Nvel de Biossegurana 3
Mboke
Meaban
Moji Dos Compos
Monte Dourado
Munguba
Naranjal
Nariva
Nasoule
Ndelle
New Minto
Ngari
Ngoupe
Nodamura
Northway
Odrenisrou
Omo
Oriximina
Ouango
Oubangui
Oubi
Ourem
Palestina
Palma
Para
Paramushir
Paroo River
Perinet
Petevo
Picola
Playas
Pueblo Viejo
Purus
Radi
Razdan
Resistencia
Rochambeau
Salanga
San Juan
Santa Rosa
Santarm
Saraca
Saumarez Reef
Sena Madureira
Sendlec
Sepik
Shokwe
Slovakia
Somone
Sripur
Tai
Tamdy
Telok Forest
Termeil
Thiafora
Tilligerry
Tinaroo
Tlacotalpan
Tonate,
Utinga
Xiburema
Yacaaba
Yaounde
Yoka
Yug Bogdanovac
Aino
Akabane
c
Banna
a,f
Bhanja
Central Eur. TBE
b,d
(Kumlinge. Hypr,
Hanzalova,
Absettarov)
Chikungunya
c,d
Cocal
Dhori
Dobrava-Belgrade
218
a A importao, posse ou uso deste agente fica restrito ao regula-
mento ou norma administrativa do USDA. Veja o Apndice D.
b O vrus da Encefalite do carrapato da Europa Central (CETBE)
no um nome registrado no The International Catalogue of
Arboviruses 1985. At a questo do registro do nome ter sido
resolvida taxonomicamente, a CETBE se refere ao seguinte
grupo de flavivrus associado ao carrapato muito prximo, mas
no idntico da Tchecoslovquia, Finlndia e Rssia como:
Absettarov, Hanzalova, Hypr e Kumlinge. Esses quatro vrus so
antigenicamente homogneos e so diferenciados do vrus da
Encefalite Primavera-Vero da Rssia (RSSE)10, 11,12. Embora
haja uma vacina que confira imunidade ao grupo do CETBE de
vrus geneticamente homogneos (> 98%), a eficcia desta
vacina contra as infeces causadas pelo vrus da CETBE ainda
no foi estabelecida. Desta forma, a SALS reclassificou o grupo
de vrus CETBE como do N
ve
l de Biossegurana 3, quando as
pessoas esto imunizadas com a vacina contra a CETBE. O RSSE
continua classificado como um vrus pertencente ao Nvel de
Biossegurana 4.
Doena Ovina de
Nairobi
a
Dugbe
Enc. De Vale Murray
Encef. Japonesa
h
Encefalite Eqina
Venezuelana
c,d,h
Estomatite Vesicular
(Alagoas)
h
Everglades
c,d
Febre Amarela
c,d
Febre do Rift Valley
a,c,d,h
Flexal
Germiston
c
Getah
Haantan
h
Junin
c,d,h
Kairi
Kimberley
Koutango
Kumlinge (Europa
Central, TBE)
Louping III
a,c,h
Mayaro
Menin. Tur. De
Israel.
Mopeia
e
Middelburg
Mobala
Mucambo
c,d
Ndumu
Negishi
Oropouche
c
Orungo
Peaton
Piry
Puumala
Rocio
Sagiyama
Sal Vieja
San Perlita
Seuol
Sin Nombre
Spondweni
Thogoto
Turuna
Wesselsbron
a,c
West Nile
Zinga
g
219
c. A SALS tambm recomenda que o trabalho com estes agentes
sej a conduzi do somente em i nstal aes do nvel de
Biossegurana 3, que proporcione uma filtrao HEPA de todo
o ar liberado antes de ser jogado para dentro do laboratrio.
d. A vacina est disponvel e recomendada para todas as pesso-
as que trabalham com este agente.
e. Este vrus, atualmente est sendo registrado no Catalogue of
Arboviruses.
f. Os cientistas da Repblica da China verbalmente relataram o
vrus Banna como sendo associado a casos graves de
encefalites. As tradues dos originais do chins para o Ingls
no se encontravam a disposio para esta reviso.
g. O vrus Zinga agora reconhecido como idntico ao Vrus da
Febre do Rift Vale.
h. A licena para exportao deste vrus deve ser obtida junto ao
i. Uma licena de importao ou transporte domstico deste agente
pode ser obtido atravs do USDA/APHIS/VS.
Arbovrus, Arenavrus e Filovrus Designados ao Nvel de
Biossegurana 4.
A SALS recomenda que o trabalho com os 11 arbovrus,
arenavrus ou filovrus
13
includos na Tabela 5 seja conduzido pela
prtica, equipamento de segurana e instalaes semelhantes as
do Nvel de Biossegurana 4. Essas recomendaes so basea-
das em casos documentados de infeces freqentemente fatais
ocorridas naturalmente em homens e nas infeces transmitidas
por aerossis em laboratrios. A SALS tambm recomenda que
alguns agentes com uma relao prxima com os agentes do Nvel
de Biossegurana 4 (por exemplo, o vrus da Encefalite Primavera-
Vero da Rssia) tambm sejam provisoriamente manipulados neste
nvel at que experincias laboratoriais suficientes indiquem a po-
sio do mesmo neste nvel ou a reclassificao deste apara um
220
nvel menor. Como observado abaixo, com a imunizao, a SALS
recomenda uma diminuio do nvel de classificao do Vrus Junin
e do complexo de vrus da Encefalite do Carrapato da Europa Cen-
tral (Absettarov, Hanzalova, Hypr e Kumlinge) ao Nvel de
Biossegurana 3. As infeces associadas a laboratrio ou ao la-
boratrio animal provocadas pelos seguintes agentes foram rela-
tadas
14, 15, 16, 17, 18, 19,20:
Vrus Casos (SALS)
Junin* 21 (1 morte)
Marburg* 25 (5 mortes)
Enc. Primavera-Vero 8
Enc. Hemorrgica Crimia-Congo 8 (1 morte)
Febre hemorrgica Omsk 5
Lassa* 2 (1 morte)
Machupo* 1 (1 morte)
Ebola* 1
Sabia* 3 (1 morte)
* A licena para exportao deste agente dever
ser ob
tida junto ao
Os roedores so reservatrios naturais do vrus da Lassa
(Mastomys spp.), do Junin, do vrus Machupo (Calomys spp.),
Guaranito (Zygodontomys spp.) e talvez de outros membros deste
grupo. Os primatas no-humanos estavam associados aos surtos
iniciais da Doena da Floresta de Kyasanur (Presbytis spp.) e o
vrus da doena de Marburg (Cercopithecus spp.). Mais recentemen-
te, os filovrus relacionados com o Ebola foram associados com o
Macaca spp. e chimpanzs (Pan troglodytes). Os artrpodes so
os vetores naturais do complexo de agentes da encefalite do car-
rapato. O trabalho com ou a exposio aos roedores, aos primatas
no-humanos ou aos vetores naturalmente ou experimentalmente
infectados com esses agentes representa uma fonte potencial de
infeco humana.
Riscos em Laboratrio: Os agentes infecciosos podem ser
encontrados no sangue, urina e secrees de garganta, smen e
221
tecidos de hospedeiros humanos ou animais, artrpodes, roedo-
res e primatas no-humanos. A exposio respiratria aos aerossis
infecciosos, a exposio da membrana mucosa aos perdigotos in-
fecciosos e a inoculao parenteral acidental so os perigos pri-
mrios para o laboratrio e para as pessoas que cuidam de ani-
mais
21, 22
.
que utilizem materiais sabiamente ou potencialmente infecciosos
de origem humana, animal ou artrpode. As amostras clnicas de
pessoas com suspeita de terem sido contaminadas pelos agentes
relacionados acima devero ser submetidas a um exame laboratorial
do Nvel de Biossegurana 4 de mxima conteno
23, 24
.
Transferncia do Agente: A licena para a importao destes
agentes dever ser obtida no CDC. J a licena para exportao
dever ser conseguida no Department of Commerce. O registro do
laboratrio necessrio junto ao CDC antes do envio ou
recebimento destes agentes.
Tabela 5. Arbovrus, Arenavrus e Filovrus designados para
o Nvel de Biossegurana 4
Encefalite do carrapato da Europa Central
Febre hemorrgica Crimia-Congo
Ebola
Guaranito
Junin
Doena da Floresta de Kyasanur
Lassa
Machupo
Febre hemorrgica de Omsk
Encefalite Primavera-Vero da Rssia
Sabia
222
Referncias:
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viruses of Vertebrates. 1985. The Subcommittee on Informa-
tion Exchange of the American Committee on Arthropod-borne Vi-
ruses. Third edition. N. Karabatsos, Editor. American Society for
Tropical Medicine and hygiene. San Antonio, TX
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Certain Other Viruses of vertebrates. 1980. Am J Trop Med Hyg 29
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5. Subcommittee on Arbovirus Laboratory Safety for Arboviruses and
Certain Other Viruses of Vertebrates. 1980. (2)
6. Hanson, R.P., et al. 1967. (3)
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Virus Infections in Central African Republic. Am J Trop Med Hyg 42:
386-393.
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litis virus: peptide mapping of large non-strucutural proteins of Euro-
pean isolates and comparison with other flaviviruses. J. Gen. Virol.,
62: 271, 1982.
11. Calisher, CH: Antigenic classification and taxonomy of flaviviruses
(Family Flaviviridae) emphasizing a universal system for the taxonomy
of viruses causing tick-borne encephalitis. Acta virol. 32: 469, 1998.
12. Wallner, G. Mandi, CW, Ecker, M, Holzman, H, Stiasny, K, Kunz, C,
and Heinz, FX: Characterization and Complete genome sequences
of high- and low-virulence variants of tick-borne encephalitis vrus.
J. Gen. Virol: 77 1035, 1996.
13. Killey, M.P. et al. 1982. Filoviridae: a taxonomic home for Marburg
and Ebola viruses? Intervirology 18: 24-32.
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Md J 2: 541-544.
15. Hanson, R.P., et al. 1967. (3).
16. Hennessen, W. 1971. Epidemiology of Marburg Vrus disease. In:
223
Martini, G.A., Siegert, R. eds., Marburg Vrus Disease. New
York: S
p
ringer-Verlag 161-165.
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new virus disease of man from West Africa. II. Report of a labo-
ratory-acquired infection treated with plasma from a person
recently recovered from the disease. Am J Trop Hyg 19: 677-9.
18. Pike, R.M. 1976 (4).
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and Certain Other Viruses of Vertebrates. 1980. (2).
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Junin vrus among laboratory workers. J Infect Dis 137: 309-
313.
21. Leifer, E., Gocke, D.J., and Bourne, H. 1970 (24).
22. Weissenbacher, M.C., et al. (27).
23. Centers for Disease Control, Office of Biosafety. 1974. Classi-
fication of Etiologic Agents on the Basis of Hazard, 4th Edition.
U.S. Department of Health, Education and Welfare, Public Health
Service.
24. Oliphant, J.W., et al. 12949. Q fever in Laundry workers, pre-
sumably transmitted from contaminated clothing. Am J Hyg 49
(1):76-82.
224
APNDICE A
Conteno Primria: Cabines de Segurana Biolgica
As cabines de segurana biolgica (CSB) esto entre os mais
comuns e eficazes dispositivos de conteno primria utilizados em
laboratrios que trabalham com agentes infecciosos1. Os trs tipos
gerais de cabines (Classe I, II e III) possuem caractersticas e
aplicaes que sero descritas neste apndice.
As CSB de Classe I e II adequadamente mantidas, quando
usadas em conjunto com boas tcnicas de microbiologia,
proporci onam um si stema de conteno efi caz para uma
manipulao segura de microorganismos de risco moderado ou alto
(agentes do Nvel de Biossegurana 2 e 3). Tanto as Cabines de
Classe I como as de Classe II possuem uma velocidade de fluxo de
ar (75-100 ps lineares por minuto) que proporcionam nveis de
conteno comparveis para a proteo dos funcionrios de
laboratrio e do meio ambiente das reas adjacentes contra
aerossis infecciosos gerados dentro das cabines. As cabines de
segurana biolgica de Classe II tambm protegem o prprio material
e a pesquisa atravs de uma filtrao altamente eficiente (filtrao
HEPA) do fluxo de ar sobre toda a superfcie de trabalho (fluxo
laminar vertical). J as Cabines de Classe III oferecem uma proteo
mxima para os trabalhadores do laboratrio, para a comunidade
e para o meio ambiente porque todos os materiais perigosos esto
contidos em uma cabine ventilada e totalmente fechada.
CLASSE I
(Observao: as cabines de Classe I, atualmente, esto sendo
fabricadas em nmero limitado; muitas podem ser
substitudas por cabines de Classe II).
As Cabines de Segurana Biolgica de Classe I (Fig. 1)
uma cabine ventilada de presso negativa operada por uma abertura
frontal e uma mnima velocidade de face para abertura de trabalho
de 75 ps lineares por minuto (lfpm). Todo o ar da cabine liberado
atravs de um filtro HEPA para dentro ou para fora do laboratrio.
A cabine de Classe I projetada para a pesquisa geral de agentes
225
microbiolgicos de risco moderado e baixo e til para a conteno
de processadores, liquidificadores e de outros equipamentos. Essas
cabines no so apropriadas para a manipulao de materiais de
pesquisa que sejam vulnerveis a contaminao pelo ar, uma vez
que o fluxo interno do ar no filtrado do laboratrio pode carregar
microorganism
o
s contaminantes para dentro da cabine.
A cabine de Classe I pode tambm ser usada, com um painel
frontal fechado e sem as luvas de borracha, que aumentar a
velocidade do fluxo interno para aproximadamente 150 lfpm. Se
essas cabines equipadas estiverem ligadas atravs de dutos
externos de exausto, elas podero ser usadas para materiais
txicos ou com baixos nveis radioativos usados como auxiliares da
pesquisa microbiolgica. Alm disto, as ervas de braos longos de
borracha podem ser anexadas ao painel frontal com um dispositivo
de liberao da presso do ar para proteo adicional. Nesta
configurao, necessrio instalar uma entrada de ar adaptada e
ajustada com um filtro HEPA na cabine.
CLASSE II
A Cabine de Segurana Biolgica de Classe II (Fig. 2)
projetada com um fluxo de ar interior com uma velocidade (75-100
lfpm), para proteger os funcionrios um fluxo de ar laminar vertical
filtrado pelo sistema HEPA para proteo do produto e com ar de
sada, exausto, filtrado pelo sistema HEPA para proteo do meio
ambiente. Os padres do projeto, construo e atuao das cabines
de Classe II, assim como as listas de produtos que atendam a estes
padres foram desenvolvidas pela National Sanitation Foundation
International2 em Ann Arbor, no Michigan. A utilizao deste padro
e desta lista dever ser o primeiro passo na seleo e aquisio de
uma cabine de Classe II.
As cabines de Classe II so classificadas em dois tipos (A e
B) baseadas na construo, velocidades e padres do fluxo de ar
e nos sistemas de exausto. Basicamente, as cabines do Tipo A
so adequadas para pesquisas microbiolgicas na ausncia de
substncias qumicas volteis ou txicas e de radionucldeos, uma
Apndice A
226
vez que o ar recirculado dentro da cabine. As cabines do Tipo A
podem ter exausto dentro do laboratrio ou para fora atravs de
uma conexo metlica que se prende ao sistema de exaustores do
edifcio.
As cabines do Tipo B so sub-divididas em Tipos B1, B2 e
B3. Uma comparao entre as caractersticas do projeto e as
apl i caes est representadas nas Fi guras 2b, 2c e 2d
respectivamente. As cabines do Tipo B possuem dutos rgidos
conectados ao sistema de exausto do prdio e contm um sistema
de ar de presso negativa. Essas caractersticas, mais uma
velocidade plena de 100 lfpm, permitem o trabalho a ser feito com
substncias qumicas txicas ou radionucldeos.
essencial que as cabines de proteo biolgica I e II sejam
testadas e certificadas in situ no momento da instalao dentro do
laboratrio, todas as vezes que a CSB for removida ou uma vez ao
ano. A verificao local pode atestar a performance da cabine
individual ou modelo, mas no poder excluir os testes crticos antes
do uso em laboratrio.
Como em qualquer equipamento do laboratrio, as pessoas
devero ser treinadas para o uso adequado das cabines de
segurana biolgica. De particular interesse so as atividades que
possam romper o fluxo direcionado para o interior. Fatores como a
insero e retirada repetida dos braos dos trabalhadores para
dentro e para fora das cabines, abertura e fechamento de portas
do laboratrio ou do cubculo de isolamento, a colocao ou a
operao imprpria dos materiais ou dos equipamentos dentro da
cmara de trabalho ou uma caminhada vigorosa prxima a CSB
enquanto esta estiver sendo utilizada causam a liberao destas
partculas aerolizadas de dentro da cabine. As cabines de Classe I
e II devero estar localizadas longe do fluxo de pessoas e da portas.
O fluxo de ar gerado por ventiladores, ventilao proveniente de
venezianas, metlicas em portas ou paredes outros dispositivos
para movimentao do ar podem interromper o padro de fluxo de
ar na frente da cabine. A obedincia severa a estas regras para
uso de CSB e a colocao adequada das mesmas em um laboratrio
Apndice A
227
so to importantes na manuteno da capacidade de conteno
mxima do equipamento quanto o prprio funcionamento do equi-
pamento.
CLASSE III
A Cabine de Segurana Biolgica de Classe III (Fig. 3)
uma cabine totalmente fechada e ventilada, a prova de escape de
ar e oferece o mais alto grau de proteo ao pessoal e ao meio
ambiente contra aerossis infecciosos, assim como a proteo de
materiais de pesquisa de contaminantes microbiolgicos. As cabines
de Classe III so mais adequadas para o trabalho com agentes
peri gosos que requerem uma conteno de um Nvel de
Biossegurana 3 ou 4.
Todas as operaes na rea e trabalho da cabine devero
ser realizadas atravs de braos com luvas de borracha ou por
meio de macaco. A cabine de Classe III operada com presso
negativa. O suprimento de ar filtrado atravs do sistema HEPA e
o ar liberado da cabine filtrado atravs de dois filtros HEPA em
srie, ou a filtrao HEPA seguida de uma incinerao, antes de
ser descartado para fora do local.
Todos os equipamentos necessrios para uma atividade em
um laboratrio, como as incubadoras, geladeiras e centrfugas
devero ser uma parte integral do sistema de cabine. A cabine de
Classe III dever ser conectada a uma autoclave de duas portas e/
ou um tanque de imerso qumica usado para esterilizar ou
desinfetar todos os materiais que sarem da cabine, e permitir que
os estoques entrem na cabine. Vrias cabines de Classe II so,
portanto, tipicamente instaladas como um sistema interconectado.
MACACO INDIVIDUAL DE PRESSO POSITIVA
A proteo individual equivalente fornecida por cabines de
Classe III, tambm pode ser obtida atravs do uso de uma vestimenta
de pea nica e ventilada. O trabalhador dever us-la quando
estiver trabalhando com agentes do Nvel de Biossegurana 3 ou 4
Apndice A
228
em uma rea de risco correspondente e usando CSB de Classe I
ou II. A roupa individual mantida sob uma presso positiva com
um sistema de suporte de vida para prevenir o vazamento dentro
desta vestimenta. Neste sistema de conteno, o trabalhador dever
estar isolado dos materiais de trabalho.
A rea escafandro dever ser essencialmente equivalente a
uma cabine grande de Classe III. A entrada nesta rea dever ser
feita atravs da cmara de compresso adaptada com portas
hermticas. Um chuveiro qumico dever ser instalado como um
tanque de imerso para descontaminao das superfcies da roupa
e dos trabalhadores que entram e saem da rea. O ar liberado da
rea escafandro dever ser filtrado atravs de dois filtros HEPA
instalados em sries. Toda a rea dever estar sob presso negativa.
Assim como nas CSB III, as luvas das roupas individuais so
o componente mais vulnervel do sistema, pois esto sujeitas a
perfuraes por objetos cortantes e mordidas de animais.
Outros dispositivos: As bancadas de fluxo laminar de ar
horizontal de clean benches so usados em instalaes clnicas,
farmacuticas e laboratoriais estritamente para garantir a proteo
do produto. Este equipamento nunca dever ser usado para a
manipulao de materiais txicos, infecciosos, radioativos ou
sensibilizadores, uma vez que o trabalhador respira o ar liberado
da bancada limpa. As bancadas de fluxo laminar vertical podem
ser teis para algumas manipulaes de materiais limpos (por
exemplo, placa de agar), mas no devero ser usados quando o
trabalho com materiais infecciosos estiver sendo conduzido.
Referncias:
1. U.S Department of Health and Human Services. Primary Con-
tainment of Biohazards: Selection, Installation and Use of Bio-
logical Safety Cabinets. (Washington: GPO, 1995)
2. National Sanitation Foundation Standard 49. 1983. Class II (lami-
nar Flow) Biohazard Cabinetry. Ann Arbor, Michigan.
Apndice A
Tabela 1. Comparao das Cabines de Segurana Biolgica.
* os compartimentos para as luvas podero ser acrescentados e aumentaro a velocidade frontal para 150 lfpm; as luvas podem ser adicionadas com a
liberao da presso da entrada de ar que permitir o trabalho com radionucldeos/qumicos.
Tipo Velocidade
frontal
Padro de fluxo
do ar
Radionucldeos/
Substncias
Qumicas
Nveis de
Biossegurana
Proteo do
Produto
Classe I*
com a frente
aberta
Classe II
Tipo A
Tipo B1
Tipo B2
Tipo B3
Classe III
75
75
100
100
100
NA
Frontal; atrs e acima
atravs do filtro HEPA.
70% de ar reci rcu-l ado
atravs do HEPA; exausto
atravs do HEPA.
30% de ar reci rcul ado
atravs do HEPA; exausto
de ar via HEPA e dutos.
Nenhuma recir-culao do
ar; total exausto via HEPA
e dutos
Idntica s Cabines IIA, mas
o sistema de ventilao plena
sob presso negativa para
sala e exausto atravs de
dutos.
Entradas e sada do ar
atravs do filtro HEPA 2
No
No
Sim
Sim
(Nveis baixo/
volatilidade)
Sim
Sim
2, 3
2, 3
2, 3
2, 3
2, 3
3, 4
No
Sim
Sim
Sim
Sim
Sim
229
Figura 1
Cabine de Segurana Biolgica Classe I. A. abertura frontal, B. vidraa
corredia. C. filtro HEPA para exausto, D. espao de exausto.
Ar ambiente
Ar potencialmente
contaminado
Ar filtrado por filtro HEPA
VISTA LATERAL
231
Figura 2a
Cabine de segurana Biolgica Classe 2, Tipo A. A. abertura frontal, B.
vidraa corredia, C. filtro HEPA para exausto, D. espao posterior,
E. filtro HEPA para o suprimento de ar, F. ventilador.
VISTA LATERAL
Ar ambiente
Ar potencialmente contaminado
2
3
2
Ar ambiente
232
VISTA LATERAL VISTA FRONTAL
Figura 2b
Cabine de segurana biolgica Classe II, Tipo B1 (desenho clssico). A. abertura frontal, B. vidraa corredia, C. filtro
HEPA para exausto, D. filtro HEPA para o suprimento de ar, E. espao de exausto com presso negativa,, F.
ventilador, G. filtro HEPA adicional para o suprimento de ar. Observao: O exaustor da cabine necessita ser conectado
ao sistema de exaustores do edifcio.
Conexo necessria de sistema de exaustores do edifcio
Ar ambiente
Figura 2c
Cabine de Segurana Biolgica Classe II, Tipo B2. A. abertura frontal, B. vidraa corredia, C. filtro HEPA para exausto,
D. filtro HEPA para suprimento de ar, E. espao de exausto com presso negativa, F. tela do filtro. Observao: O filtro
de carbono do sistema de exaustores do edifcio no est mostrado nesta figura. O ar de exausto na cabine dever ser
conectado ao sistema de exaustores do edifcio.
233
Figura 2d
Cabine de Segurana biolgica Classe II. Tipo B3 (modelo de mesa). A. abertura frontal, B. vidraa corredia, C. filtro
HEPA de exausto, D. filtro HEPA para suprimento de ar, E. espao de presso positiva, F. espao de presso
negativa. Observao: Os exaustores da cabine devero ser conectados aos sistemas dos exaustores do edifcio.
Ar ambiente
234
Figura 3
Cabine de Segurana Biolgica de Classe III. A.compartimento para fixao de luvas longas de borracha cabine, B.
vidraa corredia, C. filtro HEPA para exausto, D. filtro HEPA para o suprimento de ar, E. autoclave dupla sada na
extremidade ou caixa de passagem da cabine. Observao: Um tanque de imerso qumica pode ser instalado e dever
ser colocado abaixo da superfcie de trabalho da CSB com o acesso por cima. O sistema de exaustores da cabine
necessita ser conectada a um sistema de exaustores independente.
Ar ambiente
235
236
APNDICE B
Imunoprofilaxia
Um nvel adicional de proteo para pessoas do grupo de
risco pode ser conseguido atravs de imunizaes profilticas ade-
quadas. essencial uma norma organizacional por escrito que
defina as pessoas do grupo de risco, especifiquem os riscos e os
benefcios das vacinas especficas e que faa distino entre as
vacinas solicitadas e as recomendadas. Ao desenvolver essas nor-
mas organizacionais, essas recomendaes e requisitos devero
ser especificamente concentrados em doenas infecciosas que
sero ou provavelmente sero encontradas em um local em parti-
cular.
As vacinas licenciadas nas quais os benefcios (nveis de
anticorpo considerados como protetores) excedem os riscos (por
exemplo, as reaes locais ou sistmicas) devero ser requisita-
das para todas as pessoas claramente identificadas. Exemplos
destas preparaes incluem as vacinas contra a hepatite B, febre
amarela, anti-rbica e contra a plio. As recomendaes para apli-
cao de vacinas menos eficazes, como as associadas aos altos
ndices de reaes locais ou sistmicas, as que produzem reaes
muito graves com o uso repetido e as vacinas no licenciadas da-
das sob os protocolos de uma nova droga de pesquisa (IND), de-
vero ser cuidadosamente consideradas. Os produtos com essas
caractersticas (por exemplo, as vacinas contra a clera, o antraz e
a tularemia) podem ser recomendados, mas no podero ser re-
quisitados para o trabalho. Um registro completo das vacinas rece-
bidas baseando-se nos requisitos ou recomendaes ocupacionais
dever ser mantido em cada ficha mdica do trabalhador.
As recomendaes para o uso e vacina adaptadas da lista
mencionada no Public Health Service Advisory Committee on
Immunization Practices, esto includas no resumo das caracters-
ticas dos agentes na Seo VII e esto elaboradas nas referncias
abaixo
1, 2
. O leitor dever consultar as recomendaes atuais da
ACIP publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report
(MMWR). Deve-se dar uma ateno particular para os indivduos
que esto ou que podem se tornar imunodeprimidos, uma vez que
237
as recomendaes para administrao de vacinas podem ser dife-
rentes das recomendaes i ndi cadas para um adul to
imunologicamente competente.
Referncias:
1. Centers for Disease Control and Prevention. General Recom-
mendations on Immunization Recommendations of the Advisory
Committee on Immunization Practices (ACIP), January 28, 1994. /
Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) 43(RR01); 1-38.
2. Centers for Disease Control and Prevention. 1997. Immunization
of Health-Care Workers: Recommendations of the Advisory Com-
mittee on Immunization Practices (ACIP) and the Hospital Infec-
tion Control Practices Advisory Committee (HICPAC)
Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) 46 (RR-18); 1-42.
Apndice B
238
APNDICE C
Transporte e Transferncia de Agentes Biolgicos
Os agentes biolgicos incluem os agentes infecciosos de
homens, plantas e animais, assim como as toxinas que podem ser
produzidas por micrbios e por material gentico potencialmente
perigoso por si s ou quando introduzido em um vetor adequado.
Agentes etiolgicos e substncias infecciosas so termos
intimamente relacionados e so encontrados nas normas de
transporte e de transferncia. Os agentes biolgicos podem existir
em culturas purificadas e concentradas, mas tambm podem ser
encontrados em uma variedade de materiais como fludos corpreos,
tecidos, amostras de solo e etc. Agentes biolgicos e materiais
suspeitos de cont-los, ou que sabidamente os contm, so
reconhecidos pelos governos federais e estaduais como materiais
perigosos e o transporte e a transferncia destes materiais devero
estar sujeitos ao controle normativo.
O termo transporte se refere ao acondicionamento e envio
destes materiais pelo ar, terra ou mar, geralmente feito por uma
empresa comercial. J o termo transferncia se refere ao processo
de mudana de local destes materiais.
Transporte
Os regulamentos sobre o transporte de agentes biolgicos
so definidos de forma a assegurar proteo ao pblico e aos
trabalhadores da rede de transporte exposio a qualquer agente
que possa estar presente na embalagem. A proteo obtida
atravs de: (a) requisitos para um rigoroso acondicionamento que
suporte manipulaes bruscas e a conteno de todo o material
lquido dentro da embalagem sem que ocorra vazamento para o
lado de fora, (b) rotulagem adequada das embalagens com o
smbolo de risco biolgico e outros rtulos que alertem os
trabalhadores da rede de transporte sobre o contedo perigoso da
embalagem, (c) documentao sobre o contedo perigoso da
embalagem contendo informaes necessrias para o caso de uma
situao de emergncia e, (d) treinamento de trabalhadores da
rede de transporte para que possam se familiarizar com os
239
contedos perigosos de forma a serem capazes de responder s
Regulamentos
Servi o Pbl i co de Sade 42 CRF Parte 72. Transporte
Interestadual de Agentes Etiolgicos. Este regulamento est sendo
revi sado para harmoni zar-se com outros regul amentos
internacionais e dos E.U.A. Uma cpia do regulamento atual poder
ser conseguida atravs da internet no:
http://www.cdc.gov/od/ohs
Departamento de Transporte. 49 CFR Partes 171-178.
Regulamentos para transporte de Materiais Perigosos. Este se
aplica aos agentes biolgicos e as amostras clnicas. Maiores
informaes podero ser obtidas atravs da internet no site:
http://dot.gov.rules.html
Servio Postal dos Estados Unidos. 39 CFR Parte 111. Envio Postal
de Agentes Etiolgicos. Codificados no Manual de Postagem
Domstica 124.38: Preparaes dos Agentes Etiolgicos. Uma cpia
do Manual de Postagem Domstica poder ser obtida atravs do
Setor de Publicao do Governo atravs do telefone 1-202-512-
1800 ou atravs do site na internet:
http://www.access.gpo.gov
Administrao da Segurana e da Sade Ocupacional (OSHA). 29
CFR Parte 1910.1030 Exposio Ocupacional aos Patgenos do
Sangue. Estabelece os requisitos mnimos para acondicionamento
e rotulagem para o transporte de sangue e de fludos corpreos
dentro do laboratrio e fora dele. Maiores informaes podero
ser adquiridas no escritrio local da OSHA ou no site:
http://osha.gov
Regulamentos sobre Produtos Perigosos (DGR). Associa-
o Internacional de Transporte Areo (IATA). Esses regulamen-
tos fornecem os requisitos para o acondicionamento e rotulagem
de substncias e materiais infecciosos e de amostras clnicas que
Apndice C
240
possuam uma baixa probabilidade de conterem substncias infec-
ciosas. Estes so os regulamentos seguidos pelas empresas are-
as. Eles se baseiam nos regulamentos do Comit de Peritos em
Transporte de Produtos Perigosos, Secretariado das Naes Uni-
das e as Instrues Tcnicas para o Transporte de Produtos Peri-
gosos via area que so fornecidas pela Organizao Internacio-
nal da Associao Civil (ICAO). A cpia do DGR poder ser obtida
atravs do telefone 1-800-716-6326 ou atravs do site:
http://www.iata.org ou http://who.org
Requisitos Gerais de Acondicionamento para Transporte de
Agentes Biolgicos e de Amostras Clnicas
A Figura 1 mostra o acondicionamento do tipo triplo
(container primrio, embalagem secundria com conteno de gua,
embalagem externa resistente a impacto) necessrio para agente
biolgico oriundo de doena humana ou de materiais suspeitos de
cont-los ou que sabidamente os contm. Esta embalagem requer
a colocao de um rtulo externo, com os dizeres Substncia
Infecciosa, mostrado na Figura 2. Esta embalagem dever atender
aos testes de performance enfatizados nos regulamentos do DOT,
USPS, PHS e da IATA.
As amostras clnicas com uma baixa probabilidade de conter
um agente infeccioso tambm necessitam de um acondicionamento
triplo, mas os testes de performance s exigem que a embalagem
no apresente vazamentos aps o teste de uma queda de quatro
ps. O DOT, o PHS e a IATA exigem um rtulo externo identificando
a embalagem como Amostra Clnica.
Transferncia
Os regulamentos para a transferncia de agentes biolgi-
cos visam assegurar que a mudana de posse dos materiais bio-
lgicos esteja dentro dos interesses do pblico e da nao. Estes
regulamentos exigem a documentao dos trabalhadores, insta-
laes e justificativa da necessidade de transferncia do agente
e subseqente aprovao deste processo por uma autoridade
Apndice C
241
federal. Os seguintes regulamentos se aplicam nesta categoria:
Importao de Agentes Etiolgicos de Doenas Humanas
42 CFR Parte 71 Quarentena Estrangeira. Parte 71.54
Agentes, Hospedeiros e Vetores Etiolgicos. Este regulamento exige
uma licena para a importao (obtida nos Centros de Preveno
e Controle de Doenas) dos agentes etiolgicos de doenas
humanas e de quaisquer materiais, incluindo animais e insetos vivos
que possam cont-los. Um requerimento e maiores informaes
sobre as licenas para importao podero ser obtidos atravs do
telefone 1-888-CDC-FAXX e dando entrada no documento nmero
101000 ou no site:
http://www.cdc.gov/od/ohs/biosty/imprtper.html
Importao de Agentes Etiolgicos de Criaes, Aves e de Outras
Doenas em Animais.
9 CFR Partes 92, 94. 95 96, 122 e 130. Estes regulamentos
exigem que uma licena de importao obtida no Departamento de
Agricultura dos Estados Unidos (USDA), Servio de Inspeo de
Sade de Plantas e Animais (APHIS), Servios Veterinrios para a
importao ou transferncia domstica de agentes etiolgicos de
criaes, aves, outros animais e qualquer outro material que possa
conter estes agentes etiolgicos. Maiores informaes podero ser
obtidas atravs do telefone (301) 734-3277 ou atravs do site:
http://aphisweb.aphis.usda.gov/ncie
Importao de Pestes de Plantas
7 CFR Parte 330. Regulamentos Federais de Pestes de
Plantas; Geral; Pestes de Plantas; Solo; Pedras e Produtos de
Ardsia; Lixo. Este regulamento exige uma licena para a importao
ou a transferncia domstica de pestes botnicas, agente biolgicos
de plantas ou de qualquer material que possa cont-los. Maiores
informaes podero ser obtidas atravs do telefone 301-734-3277
ou atravs do site:
http://aphis.usda.gov./ppq/ppqpermits.html
Apndice C
242
Transferncia de Agentes Biolgicos Selecionados de Doen-
as Humanas
42 CFR Parte 72.6 Exigncias Adicionais para Instalaes
Que Realizam Transferncias ou Recebimento de Agentes
Selecionados. Instalaes que transferem ou importam agentes
selecionados devero ser registrados junto ao CDC e cada trans-
ferncia de um agente selecionado dever ser documentada. Mai-
ores informaes podero ser conseguidas atravs do site:
http://www.cdc.gov/od/ohs/lrsat
Exportao de Agentes Etiolgicos Humanos, Animais, Plantas
e Materiais Relacionados.
Departamento de Comrcio. 15 CFR Partes 730 a 7999. Es-
tes regulamentos exigem que os exportadores de uma grande vari-
edade de agentes etiolgicos humanos, plantas e doenas ani-
mais, incluindo o material gentico, e produtos que podero ser
usados na cultura de grandes quantidades de agentes, possuam
uma licena para exportao. Maiores informaes podero ser
obtidas atravs do telefone do DOC Bureau of Export Administration:
202-482-4811 ou atravs do site:
http://www.bxa.fedworld.gov ou http://www.bxa.doc.gov
As Figuras 1 e 2 ilustram o acondicionamento e rotulao de
substncias e amostras clnicas infecciosas em volumes de menos
de 50 ml, de acordo com as provises do sub-pargrafo 72.3 (a)
do regulamento do Interstate Shipment of Etiologic Agents (42 CFR,
Parte 72). A reviso depende ainda dos resultados dos requisitos
adicionais de rotulao de embalagens, mas at o momento da
publicao desta quarta edio do BMBL, essas modificaes no
haviam sido concludas.
Para maiores informaes sobre qualquer clusula deste
regulamento, entre em contato com:
Centers for Disease Control and Prevention
Attn: External Activities Program
Mail Stop F-05
1600 Clifton Road N.E.
Apndice C
243
Atlanta, GA 30333
Telephone: (404) 639-4418
FAX: (404) 639-2294.
Observe que o nome, endereo e nmero de telefone do
remetente devero ser colocados no lado externo e interno dos
containers. Advertimos ao leitor consultar outras clusulas adicionais
do Department of Transportation (49 CFR, Partes 171-180)
Hazardous Materials Regulations.
Apndice C
244
Figura 1. Embalagem e rotulagem de substncias infecciosas
Figura 2. Embalagem e rotulagem de amostras clnicas
Recipiente primrio
Embalagem de material absorvente
Cultura
Tampa
Rtulo de risco biolgico
Segundo recipiente
ou recipiente
secundrio
Nome, telefone
e endereo
do remetente.
Rtulo de
Substncia
Infecciosa
Rtulo de Risco
Biolgico
Embalagem de
material de absorvente
Cultura
Fita a prova dgua
Outro
recipiente
Rtulo de Identificao
da Amostra
Lista discriminada dos contedos
Recipiente hermtico primrio
Recipiente secundrio hermeticamente
fechado (lacrado em um saco plstico)
recipiente secundrio
hermeticamente fechado
(lacrado em um saco
plstico)
Recipiente hermtico primrio
embalagem de material absorvente
Amostra ID
Rtulo de risco biolgico
nome, telefone e endereo do
destinatrio
Embalagem de
material absorvente
Rtulo da amostra
cl ni ca
245
APNDICE D
Patgenos Animais
Os patgenos que normalmente no so encontrados na criao
domstica de aves e de gado podero necessitar de um projeto laboratorial
especial, operao e caractersticas especficas de conteno, que
geralmente no esto especificadas nesta publicao. A importao,
posse ou uso dos seguintes agentes proibida ou restrita por lei ou pelos
regulamentos ou normas administrativas do Departamento de Agricultura
dos Estados Unidos ou por polticas administrativas:
Doena do Cavalo Africano Mycoplasma mycoides
(mycoides)
Vrus da Febre Suna Africana* Vrus da doena de
ovinos africanos (vrus
Ganjam)
Vrus da Akabane Vrus da Doena de
Newscastle* (cepas
velognicas)
Vrus da Influenza Aviria Peste dos pequenos
ruminantes* (praga
dos pequenos
ruminantes)
Besnoitia besnoiti Vrus da Febre do Vale
Rift*
Vrus da Lngua Azul* Vrus de Rinderspest*
Vrus da Doena de Borna Varola de ovinos e
caprinos*
Encefalopatia Espongiforme Bovina Vrus da Doena
Vesicular de Sunos*
246
Apndice D
Agente da Febre Petequial Infeciosa Bovina Vrus da Doena de
Teschen*
Brucella abortus Theileria annulata
Brucellosis melitensis* Theileria lawrencei
Burckholderia mallei (Pseudomonas Theileria bovis
mallei Glanders)
Vrus da varola do camelo Theileria hirci
Febre Suna clssica Trypanosoma brucei
Cochliomya hominivorax (larva da Trypanosoma
Cochliomya hominivorax) congolense
Cowdria ruminantium (caudriose) Trypanosoma
equiperdum (dourine)
Encefalopatia Espongiforme Bovina, Trypanosoma evansi
variante da Doena de Creutzeldt-Jakob
Vrus da Febre Efemeral Trypanosoma vivax
Vrus da doena da mo-e-boca* Encefalomielite
Eqina Venezuelana
Histoplasma (Zymonema) Vrus do Exantema
farciminosum Vesicular
Vrus da Encefalite Bovina Estomatite Vesicular
Vrus da doena da pele granulosa Doena hemorrgica
viral de coelhos
Mycobacterium bovis Vrus da Doena
de Wesselsbron
Mycoplasma agalactiae
247
A importao, a posse, o uso ou o embarque interestadual
de patgenos animais, com exceo dos relacionados acima, pode
tambm estar sujeita aos regulamentos do Departamento de Agri-
cultura dos Estados Unidos.
A licena para importao atravs do USDA/APHIS
necessria para a importao de qualquer agente infeccioso animal
que estejam na lista de patgenos animais da USDA/APHIS. Esta
licena poder ser requerida para a importao de qualquer outro
agente de infeco de aves e gado. Uma licena de importao
tambm necessria para a importao de qualquer produto
derivado de aves ou de gado, tais como sangue, soro ou outros
tecidos.
Maiores informaes podero ser obtidas escrevendo para:
U.S Department of Agriculture
Animal and Plant Health Inspection Service
Veterinary Services, National Center for Import and Export
4700 River Road, Unit # 40
Riverdale, Maryland 20737-1231
Telefone: (301) 734-3277
Fax: (301) 734-8226
Internet: http: /www.aphis.usda.gov/ncei
Apndice D
248
APNDICE E
FONTES DE INFORMAES
As fontes de informaes, consultas e recomendaes so-
bre o controle de risco biolgico, procedimentos de descontaminao
e outros aspectos do gerenciamento da segurana de um labora-
trio incluem:
Centers for Disease Control and Prevention
Attention: External Activities Program
Atlanta, Georgia 30333
Telefone: (404) 639-4418
National Institutes of Health
Attention: Division of Safety
Bethesda, Maryland
Telefone: (301) 496-1357
National Animal Disease Center
U.S Department of Agriculture
Ames, Iowa 50010
Telefone: (515) 862-8258
United States Department of Labor, Occupational Safety and Health
Administration
Exposio Ocupacional aos Patgenos do Sangue, Regra Final
Fed Reg 1991; 56: 64041-64182
http://www.osha-slc.gov/OshStd_data/1910_1030.html.
Regra Proposta para TB:
http://www.osha
slc.gov/FedReg_osha_data/FED19980205.html.
Padres de Segurana e de Sade. Ocupacional 29 CFR
Parte 1910: (http://www.oshda-slc.gov/OshStd_toc/
OSHDA_Std_toc_1910.html)
Normas:
Centros de Preveno e Controle da Doena
Tuberculose:
1994: http://www.cdc.gov/nchstp/tb/pubs/250001.pdf
1997 (Lab): http://www.cdc.gov/od/ohs/tbdoc2.html
249
Imunizao para Trabalhadores da rea de Sade:
http://www.cdc.gov/epo/mmwr/preview/rr4618.html
Normas para Controle de Infeces em Trabalhadores da
rea de Sade, 1998:
http://www.cdc.gov/ncidod/hip/draft_gu/waisgate.txt
Profilaxia para o HIV:
http://www.cdc.gov/epo/mmwr/mmwr_rr.html
Departamento do Exrcito, DOD. 32 CFR Partes 626, 627
Programa de Segurana da Defesa Biolgica: (http://www.gpo.gov)
Comit Nacional dos Padres de Laboratrios Clnicos (NCCLS)
Normas aprovadas para a proteo de trabalhadores de
laboratrios aos agentes de risco biolgico e doenas infecciosas
transmitidas pelo sangue, fludos corpreos e tecido. Dezembro
de 1997, NCCLS Doc. M29-A (ISBN1-56238-339-6. http://www/
exoffice@nccls.org ).
Institutos Nacionais de Sade
Normas do NIH para Molculas de DNA Recombinante:
http://www.NIH.gov/od/orda/toc.html
Escritrio do NIH para Atividades com DNA Recombinante
http://www.NIH.gov/od/orda
Apndice E
250
APNDICE F
Segurana do Laboratrio e Resposta de Emergncia para
Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia
Normas tradicionais de segurana laboratorial enfatizam o
uso de boas prticas de trabalho, equipamento de conteno
adequado, dependnci as bem proj etadas e control es
administrativos que minimizem os riscos de uma infeco acidental
ou ferimentos em trabalhadores de laboratrio e que evitem a
contaminao do meio ambiente.
Embora os laboratrios clnicos e de pesquisas possam conter
uma variedade de materiais biolgicos, qumicos e radioativos
perigosos, at o momento, existem poucos relatrios sobre o uso
intencional de quaisquer destes materiais para ferir trabalhadores
de laboratrios ou outras pessoas
1, 2, 3, 4, 5,6
.
Entretanto, h uma crescente preocupao sobre o possvel
uso de materiais biolgicos, qumicos e radioativos como agentes
para o terrorismo
7, 8
,. Em resposta a essas preocupaes, as
seguintes normas orientam essas questes de segurana
laboratorial (por exemplo, preveno da entrada de pessoas no
autorizadas em reas laboratoriais e preveno da remoo no
autorizada de agentes biolgicos perigosos).
Os seguintes itens so oferecidos como normas para os
laboratrios que usam agentes biolgicos ou toxinas capazes de
causarem doenas srias ou fatais aos homens e aos animais. A
maioria destes laboratrios estaria trabalhando sob condies de
Nveis de Biossegurana 3 ou 4 descritas nas Sees II e III. Porm,
os laboratrios de pesquisa, de produo e os clnicos que traba-
lham com patgenos recentemente identificados, patgenos ani-
mais de alto nvel, e/ou toxinas no cobertas pelas recomendaes
dos Nveis de Biossegurana 3 ou 4 devero tambm seguir essas
normas para minimizar as oportunidades de remoo acidental ou
intencional destes agentes de um laboratrio.
251
1. Reconhecer que a segurana do laboratrio est relaci-
onada, mas diferente de um laboratrio seguro.
Envolver profissionais com experincia em segurana e
proteo para aval i ao e desenvol vi mento das
recomendaes para um dado local ou laboratrio.
Revisar as normas e os procedimentos de segurana
regularmente. A administrao dever revisar as normas para
garantir que esto adequadas para as condies atuais e
consistentes com outras normas e procedimentos amplos do
local. Os supervisores do laboratrio devero assegurar que
todos os trabalhadores e visitantes de um laboratrio
entendam os requisitos de segurana e sejam treinados e
equipados para seguirem os procedimentos estabelecidos.
Rever as normas e os procedimentos quando ocorrer um
incidente ou quando uma nova ameaa for identificada.
2. Acesso controlado s reas onde agentes biolgicos ou
toxinas estejam sendo usadas ou armazenadas.
As reas dos laboratrios e de tratamento de animais devero
ser separadas das reas pblicas dos edifcios onde se
encontram localizadas.
As reas do laboratrio ou de cuidados animais devero ser
trancadas todas s vezes.
Os cartes-chaves ou dispositivos similares devero ser
usados para permitir a entrada s reas do laboratrio e as
de cuidado do animal.
Todas as entradas (incluindo as entradas para visitantes,
trabalhadores de manuteno, trabalhadores para realizao
de reparos e outros que precisarem entrar ocasionalmente)
devero ser registradas por um dispositivo semelhante a um
carto-chave (prefervel) ou atravs de assinatura no livro
de entrada.
Apndice F
252
Somente os trabalhadores necessrios para a realizao de
um trabalho devero receber permisso para entrar somente
nas reas e nas horas que um trabalho em particular for re-
alizado.
a. O acesso para estudantes, cientistas, etc, dever ser
limitado ao horrio em que os funcionrios regulares
estiverem presentes.
b. O acesso para a limpeza, manuteno e consertos
rotineiros dever ser limitado ao horrio em que os
funcionrios estiverem presentes.
Os freezers, geladeiras, cabines e outros containers onde
estoques de agentes biolgicos, materiais clnicos ou
radioativos devero ser guardados, devero ser trancados
quando no estiverem vista dos trabalhadores (por exemplo,
quando localizados em reas de armazenamento no
freqentadas regularmente).
3. Saber quem est nas reas do laboratrio.
Os supervisores e diretores do local devero conhecer todos
os trabalhadores. Dependendo dos agentes biolgicos
envolvidos e do tipo de trabalho a ser desenvolvido, deve-se
fazer uma reviso da limpeza e da segurana antes que novos
funcionrios sejam designados para a rea de trabalho.
Todos os trabalhadores (incluindo estudantes, cientistas
visitantes e outros trabalhadores tempor
r
ios) devero usar
crachs de identificao. Estes crachs devero conter no
mnimo uma fotografia, o nome do indivduo e a data de
vencimento deste crach. O uso de marcadores colorido ou
de outros smbolos facilmente identificvel sobre os crachs
seria teis para a identificao para indicar a liberao para
a entrada em reas restritas (por exemplo, laboratrios de
NB-3 ou 4, reas de tratamento de animal).
Os visitantes devero ser identificados com crachs e devero
ser acompanhados ou autorizados a entrarem usando os
mesmos procedimentos como os usados para trabalhadores.
Apndice F
253
4. Saber quais os materiais que esto sendo trazidos para
dentro da rea laboratorial.
Todos os materiais devero ser verificados (visualmente ou
por raios-x) antes de serem trazidos para dentro do
laboratrio.
Os pacotes contendo amostras, substncias bacterianas ou
isoladas, ou toxinas devero ser abertos em uma cabine de
segurana ou em outro dispositivo de conteno adequado.
5. Saber quais materiais esto sendo removidos da rea
laboratorial.
Os materiais/toxinas biolgicas que sero removidos para
outros laboratrios devero ser embalados e rotulados de
acordo com todos os regulamentos locais, federais e
internacionais aplicveis9.
a. As licenas necessrias (por exemplo, PHS, DOT, DOC,
USDA) devero ser obtidas antes que os materiais sejam
acondicionados e rotulados.
b. Os recipientes (de preferncia) ou o local de recebimento
dos materiais devero ser conhecidos pelo remetente, e
este remetente dever fazer um esforo para assegurar
que os materiais sejam enviados para um local equipado
com recursos para manipular estes materiais com
segurana.
O transporte manual de materiais e toxinas biolgicas para
outros laboratrios considerado inadequado. Se os materiais
ou toxinas biolgicas a serem carregadas manualmente forem
transportados por carregadores comuns, todos os
regulamentos devero ser seguidos.
Materiais contaminados ou possivelmente contaminados
devero ser descontaminados antes de sarem da rea do
laboratrio. Os materiais qumicos e radioativos devero ser
Apndice F
254
descartados de acordo com os regulamentos locais, federais
e estaduais.
6. Tenha um plano de emergncia.
O controle do acesso s reas do laboratrio poder fazer
com que os procedimentos de emergncia sejam dificultados.
Este fato dever ser considerado quando os planos de
emergncia forem desenvolvidos.
a. Uma avaliao da rea laboratorial pelos funcionrios do
local, com profissionais de fora, se necessrio, para a
identificao dos aspectos de segurana e proteo
devero ser conduzi dos antes que um pl ano de
emergncia seja desenvolvido.
b. Os administradores, diretores, principais pesquisadores e
trabal hadores do l aboratri o e os trabal hadores
responsveis pela segurana do local devero estar
envolvidos no planejamento de emergncia.
c. A polcia, o corpo de bombeiro ou outras pessoas envolvidas
em situaes de emergncia devero ser informados quanto
aos tipos de materiais biolgicos em uso nas reas laboratoriais
e devero dar uma assistncia no planejamento dos
procedimentos de emergncia nas reas laboratoriais.
d. Os planos devero incluir a proviso de uma notificao imediata
dos diretores e trabalhadores do laboratrio e pessoas
encarregadas pela segurana, ou outros indivduos quando
ocorrer uma emergncia, de maneira que possam lidar com as
questes de biossegurana caso ocorra.
O planejamento de emergncia laboratorial dever ser coordenado
com planos de expanso. Fatores como ameaas de bombas,
problemas climticos (furaco e inundao), terremotos, falta de
energia e outros desastres naturais (ou no naturais) devero ser
considerados quando o plano de emergncia estiver sendo
desenvolvido.
Apndice F
255
7. Possua um protocolo para relato de incidentes.
Os diretores do laboratrio, em cooperao com os encarregados
pela segurana e proteo do local, devero ter normas e procedimentos
no local para relatar e investigar os incidentes ou possveis incidentes
(por exemplo, visitantes sem documentos, desaparecimento de
substncias qumicas, telefonemas incomuns ou ameaadores).
Referncias:
1. Torok T J, et al. A large community outbreak of salmonellenosis
caused by intentional contamination of restaurant salad bars.
JAMA 1997; Vol. 278; 389-395.
2. Kolavic SA, et al. An Outbreak of Shigella dysenteriae Type 2
Among Laboratory Workers due to Intenti onal Food
Contamination. JAMA 1997; Vol 278; 396-398.
3. Report to Congress on abnormal Occurrences with occurred
between July and September 1995, 3rd Event: NIH Incident,
Federal Register, February 26, 1996, Vol.61, N 38, pp. 7123-
7124.
4. U.S Nuclear Regulatory Commission, NUREG 1535, Ingestion
of Phosphorous-32 at MIT, Cambridge, MA Identified on Au-
gust 19, 1995.
5. U.S Nuclear Regulatory Commission, Preliminary Notification
of Event or Unusual Occurrence PNO-1-98-052, Subject: In-
tentional Ingestion of Iodine 125 Tainted Food (Brown Uni-
versity), November 16, 1998.
6. National Institutes of Health (NIH) Issuance of Directors Deci-
sion: The NIH Incident, Federal Register, September 24, 1997,
62 (185): 50018-50033.
7. Atlas RM, Biological weapons Pose Challenge for Microbiology
Community. ASM News 1998: Vol 64; 383-389.
8. Ruys, Theodorus, New York: Laboratory Design principles. In:
Handbook of Facilities Planning. Ruys, T, ed. New York: Van
Nostrand Reinhold, 1990; 257-264.
9. U.S Public Health Service. Final Rule: Additional Requirements
for Facilities Transferring or Receiving Select Agents. Federal
Register, Oct. 24, 1996; 61 FR 29327.
Apndice F
256
APNDICE G
Gerenciamento Integrado de Roedores e de Insetos
O gerenciamento de roedores e de insetos uma parte
importante na administrao de um local de pesquisa. Muitos
insetos, como mosquitos e baratas, podem ser vetores e espalhar
mecanicamente os patgenos de doenas e comprometem o meio
ambiente de pesquisa. Mesmo a presena de insetos incuos
contribui para as condies fora dos padres sanitrios.
A abordagem mais comum para o controle de roedores e de
insetos tem sido a aplicao de produtos qumicos, como uma
medida preventiva ou remediadora. Os tratamentos com pesticidas
podem ser eficazes e podem ser necessrios como uma medida
corretiva, mas tm resultados limitados a longo prazo quando usados
sozinhos. As aplicaes de pesticidas tambm apresentam potencial
de contaminao para o meio ambiente de pesquisa, atravs da
aerolizao e volatilizao do pesticida.
Para controlar os roedores e os insetos e para minimizar o
uso de pesticidas, necessrio empregar um programa de
abordagem que integre os servios de limpeza, de manuteno e
de controle de roedores e de insetos. Este mtodo de controle
freqentemente chamado de gerenciamento integrado de roedores
e de insetos(GIRI). O objetivo primrio de um programa GIRI de
prevenir os problemas causados pelos roedores e insetos, atravs
do gerenciamento do meio ambiente local de maneira que o torne
menos propcio para a infestao de roedores e de insetos.
Juntamente com as aplicaes limitadas de pesticidas, o controle
conseguido atravs de estratgias de intervenes administrativas
e operacionais retroativas para corrigirem condies que propiciem
o surgimento de roedores e de insetos.
O GIRI um servio baseado em estratgias. A deciso de
implementar um programa GIRI dever se basear no somente no
custo dos servios, mas tambm na eficcia dos componentes do
servio. O GIRI especfico para cada local e cada programa dever
ser idealizado conforme o meio ambiente onde ser aplicado. Os
servios de GIRI em um laboratrio sero diferentes daqueles
257
aplicados em um edifcio de escritrios ou em um local de tratamento
de animais.
Os programas de gerenciamento integrado de roedores e de
insetos (GIRI) so baseados nos vrios componentes, que esto
inter-relacionados e que contribuem para o gerenciamento do meio
ambiente de pesquisa para controlar os roedores e os insetos.
So eles:
Projeto do Local: A incluso de questes e requisitos para o
gerenciamento de roedores e de insetos no planejamento, no
projeto e na construo, proporcionam a oportunidade de
incorporar caractersticas que auxiliam a impedir a presena de
roedores e de insetos, a minimizar o seu habitat e a promover
condies sanitrias adequadas. Isto poder ajudar a reduzir a
necessidade de futuros servios corretivos de gerenciamento
de roedores e de insetos, que podem ser um obstculo para as
operaes de pesquisa.
Monitoramento: Armadilhas, inspees visuais e entrevistas com
os funcionrios so usadas para identificao das reas e
condi es que possam abri gar roedores e i nsetos. O
monitoramento a atividade central de um programa de GIRI e
usado no lugar de tratamentos preventivos com pesticidas.
Manuteno do Local e do Saneamento Bsico: Muitos dos
problemas com roedores e insetos podem ser prevenidos ou
corrigidos ao usarmos um saneamento adequado, reduzindo a
desordem e o habitat destes. A manuteno de registros das
deficincias estruturais e das condies de manuteno do local
pode ajudar a detectar problemas e determinar se as aes
corretivas foram concludas de maneira satisfatria.
Comunicao: Um membro da equipe do laboratrio pode ser
designado para se reunir com os funcionrios do gerenciamento
de roedores e de insetos, para assist-los nas resolues de
questes especficas do laboratrio, que tenham impacto sobre
o gerenciamento de roedores e de insetos. As informaes sobre
Apndice G
258
as atividades de roedores e de insetos, e recomendaes sobre
as prticas e condies do local que possam impactar o
gerenci amento de roedores e de i nsetos, devem ser
retransmitidos verbalmente ou por escrito para aquelas pessoas.
O treinamento dos indivduos em questes relacionadas
identificao, biologia e condies sanitrias pode tambm
promover a compreenso e a cooperao com os objetivos do
programa de GIRI.
Manuteno de Registros: Um livro de registro pode ser usado
para anotar a atividade dos roedores e dos insetos, e as
condies pertinentes ao programa de GIRI. Este livro poder
conter os protocolos e procedimentos para os servios de GIRI
naquela instalao, folhas de dados sobre a segurana dos
pesticidas, rtulos dos mesmos, registros de tratamento; planos
para o uso, relatrios de pesquisa, etc.
Controle de Roedores e de Insetos sem o Uso de Pesticidas:
Os mtodos de controle como o uso de armadilhas, calafetagem
ou vedao, lavagem e congelamento podem ser aplicados de
forma segura e eficientemente, quando usados juntamente com
condies sanitrias e reparos estruturais adequados.
Controle de Roedores e de Insetos usando Pesticidas: As
apl i caes preventi vas dos pesti ci das devero ser
desencorajadas, e os tratamentos devero ficar restritos s
reas de atividade conhecida de roedores e dos insetos. Quando
os pesticidas so aplicados, deve-se usar e aplicar produtos
menos txicos, de melhor eficcia, de maneira segura.
Avaliao e Garantia de Qualidade do Programa: A reviso do
programa e a garantia da qualidade devero proporcionar uma
avaliao contnua e objetiva das atividades e da eficcia do
GIRI. Isto feito para assegurar que o programa esteja realmente
controlando os roedores e os insetos, e atendendo as
necessidades bsicas do programa da instalao e de seus
ocupantes. Baseado nesta revi so, os protocol os de
Apndice G
259
gerenciamento de roedores e de insetos podem ser modifica-
dos e novos procedimentos podem ser implementados.
Percia Tcnica: Um entomologista qualificado pode fornecer
um guia tcnico til no desenvolvimento e implementao de
um programa GIRI. As pessoas responsvei s pel o
gerenciamento de roedores e de insetos devero ser licenciadas
e certificadas atravs de uma agncia regulamentadora
adequada.
Segurana: Ao limitar o espectro dos tratamentos com pesticidas
e ao usarmos prticas de controle sem pesticidas, o programa
de GIRI poder conseguir minimizar o potencial de exposio
do meio ambiente de pesquisa e da equipe de funcionrios ao
pesticida.
Antes de iniciar qualquer tipo de programa de controle de
roedores e de insetos, o desenvolvimento de uma estrutura
operacional para os servios GIRI poder ajudar a promover a
colaborao entre especialistas no controle e o pessoal do local.
Esta estrutura pode tambm ser usada para incorporar as restries
de instalao fsica laboratorial e questes operacionais e
processuais dentro do programa de GIRI. Um programa eficaz de
gerenciamento de roedores e de insetos uma parte integral da
administrao das instalaes laboratoriais. Ao incluir uma poltica
de GIRI nos procedimentos de operao padro de instalaes
laboratoriais, aumentaremos a conscientizao do programa.
O trei namento sobre os pri ncpi os e prti cas do
gerenciamento estrutural (indoor) integrado ao gerenciamento de
roedores e de insetos e as informaes sobre o programa do GIRI
esto disponveis atravs de muitas fontes. Algumas delas so: os
departamentos de entomologia de universidades, escritrios de
extenso muni ci pal , Soci edade Entomol gi ca dos EUA,
departamentos estaduais de agricultura, associaes estaduais de
controle de roedores e de insetos, estoques de equipamentos para
controle de roedores e de insetos e consultores de gerenciamento
de roedores e de insetos ou firmas de gerenciamento de roedores
Apndice G
260
e de insetos. H tambm cursos por correspondncia em vrias
universidades e cursos curtos e conferncias de treinamento sobre
o gerenciamento estrutural de roedores e de insetos.
Informao Adicional:
Urban Entomolgy. 1996. Insect and mite Pests in the Human
Environment. W.H. Robinson. Chapman and Hall. New York.
Advances in Urban Pest Management. 1986. Gary W. Bennett and
John M. Owens, eds. Van Nostrand Reinhold Company. New York.
Common Sense Pest Control. 1991. Least-toxic solutions for four
home, garden, pests and community. William Olkowski, Sheila Daar,
Helga Olkowski. The Taunton Press., Inc.,
Internet:
Associao Nacional de Controle de Roedores e de Insetos:
http://www.pestworld.org
Rede de Biocontrole: http://www.bioconet.com
Apndice G
261
APNDICE H
Trabalhos com Clulas e Tecidos Humanos e de Outros Primatas
O Centers for Disease Control and Prevention e o National
Institutes of Health gostariam de expressar agradecimentos a Frank
P. Simione, M.S. e Jane Caputo, B.A. da American Type Culture
Collection (ATCC), uma organizao global de biocincia dedicada
aos padres biolgicos e biodiversidade, por suas contribuies
na preparao deste Apndice.
Pelo menos 24 casos documentados de infeco em
funcionrios de laboratrio que manipulam culturas de clulas
primrias (por exemplo, clulas renais do macaco rhesus) ocorreram
nos ltimos 30 anos
1, 2
. Embora um nmero limitado de infeces
adquiridas em laboratrio tenha sido relatado como resultado da
manipulao de clulas humanas e de outros primatas, h um risco
significativamente maior em adquirir uma infeco pelo HIV ou HBV
atravs da exposio ao sangue humano e outros lquidos
corporais
3,4,5
. Por esta razo, a OSHA desenvolveu um padro para
patgenos do sangue.
6
Os procedimentos foram publicados para
reduzir a contaminao de culturas celulares com microorganismos
7,8
ou com outras clulas.
9
Riscos Potenciais em Laboratrios: Os riscos potenciais
laboratoriais associados s clulas e tecidos humanos incluem os
patgenos do sangue HBV e HIV, assim como agentes tais como
Mycobacterium tuberculosis que podem estar presentes nos tecidos
pulmonares humanos. Outras clulas e tecidos de primatas tambm
apresentam riscos aos trabalhadores de laboratrios.
10
Riscos
potenciais aos trabalhadores de laboratrios so apresentados por
clulas transformadas por agentes virais, como as SV-40, EBV ou
a HBV, assim como as clulas que carregam material gentico viral.
As clulas humanas tumorignicas tambm podem oferecer
potenciais riscos como resultado de uma auto-inoculao.
11
Prticas Recomendadas: Clulas humanas e de outros
primatas devero ser manipuladas usando as prticas e a conteno
do Nvel de Biossegurana 2. Todo o trabalho dever ser realizado
em uma cabine de segurana biolgica e todo o material dever
262
ser descontaminado pela autoclave ou desinfetado antes de ser
descartado.
12,13,14,15
Todos os funcionrios que trabalham com clu-
las e tecidos humanos devero ser registrados no Programa de
Patgenos do Sangue, e devero trabalhar de acordo com as nor-
mas e polticas estabelecidas pelo Plano Institucional de Controle
da de Infeco.
16
Os empregados devero fornecer uma amostra
do soro, permitir a sua imunizao contra o vrus da hepatite B e
serem avaliados por um profissional da rea de sade depois de
qualquer exposio incidental.
Referncias:
1. Davidson, W.L. and Hummler, K. 1960. B-virus infection in man.
Annals of the New York Academy of Science 85 : 9970-979
2. National Research Council, 1989. Safe handling of infectious
agents. In: Biosafety in the laboratory, Prudent Practices for
the Handling and Disposal of Infectious Material, NRC, National
Academy Press, Washington, D.C. Pg 13-33.
3. McGarrity, G.J. and C.L. Hoerner. Biological Safety in the Bio-
technology Industry. In: Laboratory Safety: Principles and Prac-
tice. ASM Press, Washington, D.C., 1995.
4. Centers for Disease Control. 1988. Update: Universal Precau-
tions for Prevention of Transmission Human Immunodeficiency
Virus, Hepatitis B Virus and Other Bloodborne Pathogens in
Healthcare Settings. MMWR, 37: 377-382, 387, 388.
5. Centers for Disease control and Prevention, 1989. Guidelines
for Prevention of Transmission of Human Immunodeficiency Vi-
rus and Hepatitis B Virus to Healthcare and Public Safety Work-
ers. MMWR 38, N S-6.
6. U.S Department of Labor, Occupational safety and Health Ad-
ministration. 1991. Occupational Exposure to Bloodborne
Pathogens. 29 CFR Part 1910. 1030:231-243.
7. McGarrity, G.J. and Coriell, L.L. 1971. Procedures to reduce
contamination of cells cultures. In vitro 6(4): 257-265.
8. McGarrity, G.J. 1976. Spread and control of mycoplasmal in-
fection of cell culture. In vitro 12: 643-648.
9. Nelson Rees, W.A., Daniels, D.W., and Flandermeyer, R.R.
1981. Cross-Contamination of Cells in Culture. Science 212:
446-452.
10. McGarrity, G.J. and C.L. Hoerner. 1995 (3).
11. Weiss, R.A. 1978. Why cell biologists should be aware of ge-
Apndice H
263
netically transmitted viruses. National Cancer Institute Mono-
graph 48: 183-189.
12. Barkley, W.E. 1979. Safety considerations in the cell culture
laboratory. Methods Enzymol. 58: 6-54.
13. Grizzle, W.E. and Sarah S. Polt. 1988. Guidelines to avoid per-
sonnel contamination by infective agents in research laborato-
ries that use human tissues. Journal of Tissue Culture Meth-
ods. 11: 191-199.
14. Caputo, J.L 1988. Biosafety procedures in cell culture. Journal
of Tissue Culture Methods 11: 233-227.
15. Caputo J.L. Safety procedures. In: R. Ian Freshney and Mary
G. Freshney, Eds, Culture of Immortalized Cells, Wiley-Liss,
Inc. 1996.
16. Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens (6).
Apndice H
264
APNDICE I
Normas para o Trabalho com Toxinas de Origem Biolgica
Em reconhecimento ao crescente nmero de laboratrios
biomdicos e microbiolgicos que trabalham com toxinas de origem
biolgica, apresentamos as seguintes normas para o trabalho com
estas toxinas.
O material abaixo foi adaptado do Programa de Segurana
da Defesa Biolgica, Requisitos de Segurana Tcnica (DA
Pamphlet 385-69)
1
e do Apndice A do United States Department of
Labor Occupational Safety and Health Association rule Occupational
Exposure to Hazardous Chemicals in Laboratories
2
.
Os gerentes de laboratrios e os encarregados pela
segurana das instalaes devero ser encorajados a utilizar as
referncias relacionadas abaixo e a consultar peritos neste assunto
antes de usar qualquer toxina, para assegurar que as instalaes,
equipamento de conteno, normas e procedimentos, programas
de treinamento de pessoal e protocolos de vigilncia mdica
especficos para a toxina e o para o laboratrio so adequados.
Geral
As instalaes, equipamento e procedimentos laboratoriais
para o trabalho com toxinas de origem biolgica devero refletir o
nvel intrnseco de perigo imposto por uma toxina em particular,
assim como os riscos potenciais inerentes s operaes realizadas.
Se a toxina e os agentes infecciosos forem usados, os dois devero
ser levados em considerao quando o equipamento de conteno
for selecionado e os procedimentos e normas forem escritos. Caso
sejam usados animais, as prticas de segurana animal tambm
devero ser consideradas.
Prticas Padres
As prticas padres relacionadas nos NB - 2 e 3 devero ser
revisadas e incorporadas aos protocolos para o trabalho com as
toxinas.
265
Prticas especiais
As prticas especiais relacionadas no NB - 2 e 3 devero ser
revisadas e incorporadas aos protocolos apropriados para o trabalho
com as toxinas.
1. Cada l aboratri o dever desenvol ver um pl ano de
higienizao qumica especfico para a (s) toxina(s) usada(s)
naquele laboratrio. O plano de higienizao qumica dever:
1) identificar os perigos que sero encontrados no uso normal
da toxina, e os perigos que podero ser encontrados no caso
de um vazamento ou outro acidente, e 2) especificar as
prticas e normas a serem usadas para minimizar os riscos
(por exemplo, equipamento de conteno e proteo
individual, gerenciamento de vazamentos, gerenciamento de
exposies acidentais e vigilncia mdica)
3
.
2. O treinamento especfico para o uso de toxinas dever ser
exigido e documentado para todos os funcionrios de
laboratrios que trabalham com as toxinas antes que o
trabalho com este elemento seja iniciado e a partir da, em
intervalos de tempo.
3. Um sistema de controle de inventrio dever ser adotado.
4. As toxi nas devero ser guardadas em sal as de
armazenamento, cabines ou freezers trancadas quando no
estiverem sendo usados.
5. O acesso s reas que contm toxinas dever ficar restrito
s pessoas que trabalham no local.
6. A preparao de recipientes primrios contendo estoques
de solues de toxinas e manipulaes de containers
primrios de formas secas de toxinas devero ser conduzidas
em uma coifa qumica a vapor, em uma cabine com luvas
(glove box), em uma cabine de segurana biolgica ou em
um sistema de conteno equivalente aprovado pelo
Apndice I
266
responsvel pela segurana. A filtrao do ar liberado atra-
vs de filtros HEPA e/ou atravs de carvo poder ser ne-
cessria, dependendo da toxina.
7. O usurio dever verificar o fluxo de ar no interior da coifa ou
da cabine de segurana biolgica antes de iniciar o trabalho.
8. Todo trabalho dever ser feito dentro de uma rea efetiva da
coifa ou da cabine de segurana biolgica.
9. Quando as toxinas esto sendo usadas, a sala dever conter
um aviso indicando Toxinas em Uso Somente Pessoas
Autorizadas. Qualquer solicitao especial para a entrada
no recinto dever ser colocada na entrada da sala. Somente
os funcionrios cuja presena necessria devero ser
permitidos enquanto as toxinas estiverem sendo usadas.
10. Todas as operaes de alto risco devero ser conduzidas na
presena de duas pessoas experientes. Cada um dever
estar familiarizado com os procedimentos aplicveis,
mantendo o contato visual um com o outro e pronto a prestar
socorro no caso de um acidente.
11. Antes que os recipientes sejam removidos da sala, da coifa,
cabines ou da cabine com luvas (glove box) o exterior do
recipiente primrio fechado dever ser descontaminado e
colocado em um container secundrio limpo. As toxinas
devero ser transportadas somente em containers a prova
de vazamentos.
12. As roupas e equipamentos de proteo contaminados ou
potencialmente contaminados devero ser descontaminados
utilizando mtodos conhecidos pela eficcia contra toxinas
antes de serem removidos do laboratrio para que possam
ser desprezados, l i mpos ou consertados. Caso a
descontaminao no seja possvel/prtica, os materiais (por
exemplo, luvas usadas) devero ser descartados como lixo
txico. Os materiais contaminados com agentes infecciosos
Apndice I
267
e as toxinas devero tambm ser autoclavados ou converti-
dos em no infecciosos de outra maneira antes de deixar o
laboratrio.
13. O interior da coifa, da cabine com luvas (glove box) ou da
cabine dever ser descontaminado periodicamente, por
exemplo, no final de uma srie de experimentos relacionados.
At que seja descontaminada, a coifa, a cabine com luvas
(glove box) ou a cabine dever conter um aviso indicando
que toxinas esto sendo usadas e que o acesso ao
equipamento e utenslios ficam restritos aos funcionrios
autorizados.
Equipamento de Segurana
As normas para o uso de equipamento de segurana
relacionados nos Nveis de Biossegurana 2 e 3 (veja Seo III)
devero ser revisadas e incorporadas adequadamente nos
protocolos para o trabalho com as toxinas.
1. Quando utilizando coifas a vapor com abertura frontal ou
cabine de segurana biolgica, roupa de proteo, incluindo
as luvas e uma capa descartvel que cubra o corpo e tenha
manga comprida (jaleco, avental ou traje semelhante) dever
ser usado de maneira que as mos e os braos estejam
completamente cobertos.
2. Uma proteo para os olhos dever ser utilizada se um
sistema de conteno que possua uma abertura na frente
for usado.
3. Outro equipamento poder ser necessrio, dependendo das
caractersticas da toxina e do sistema de conteno. Por
exemplo, use uma proteo respiratria adicional se a
formao de aerossis ocorrer e se no for possvel o uso
de um equipamento de conteno ou de outros controles de
engenharia de segurana.
Apndice I
268
4. Quando manipular formas secas de toxinas que sejam
eletrostticas:
a. No use luvas (como as de ltex) que ajudem a formar
eletricidade esttica.
b. Use uma glove box ou uma cabine com luvas ou em
uma cabine de segurana biolgica de Classe III.
5. Quando manipular toxinas que sejam perigosas para a mem-
brana percutnea (irritantes, provocam necrose no tecido ou
que sej am extremamente txi cas para a exposi o
dermatolgica), selecione luvas que sejam conhecidas por
serem impermeveis toxina.
6. Considere a toxina e o diluente quando for selecionar luvas e
outras roupas de proteo.
7. Se agentes infecciosos e as toxinas forem usadas juntamen-
te com um sistema experimental, considere as duas quando
for selecionar os equipamentos e roupas de proteo.
Instalaes do Laboratrio
As recomendaes de instalao do laboratrio relaciona-
das para os Nveis de Biossegurana 2 e 3 (veja a Seo III) e os
padres da OSHA* devero ser revisados e incorporados de for-
ma apropriada nos protocolos para o trabalho com toxinas.
1. Linhas de Vcuo. Ao usar as linhas de vcuo juntamente
com sistemas de conteno de toxinas, estas devero ser
protegidas com um filtro HEPA para prevenir a entrada de
toxinas nas linhas. Os ralos das pias devero ser tambm
protegidos quando os aspiradores de gua forem usados.
Referncias
1. Department of the Army, DOD, 32 CFR Parts 626, 628 Bio-
logical Defense Safety Program.
Apndice I
269
2. United States Department of Labor, Occupational Safety and
Health Administration.. 29 CFR Part 1910 Occupational Safety
and Health Standards.
3. United States Department of Labor, Occupational Safety and
Health Administration. 29 CFR Part 1910. (2).
4. United States Department Occupational Safety and Health Ad-
ministration. 29 CFR Part 1910. (2)
Referncias Adicionais
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Manual.
Heinsohn P.A.; Jacobs R.R., Concoby B.A. (eds) American Industrial
Hyigiene Association, Fairfax. 1995
National Research Council. Prudent Practices in the Laboratory:
Handling and Disposal of Chemicals. National Academy Press,
Washington D. C. 1995
CRC Handbook of Toxicology. Derelanko M.J., Hollinger M.A.; (eds)
CRC Press, Boca Raton 1995.
Ellenhorns Medical Toxicology: Diagnosis and Treatment of Human
Poisoning. Ellenhorn M.J., Schonwald S., Ordog G., Wasserrberger
J., Williams and Wilkins, Baltimore 1997
Apndice I
270
NDICE REMISSIVO
ndice Remissivo
Agentes bacterianos.................................................................. 100
Agentes parasitrios.................................................................. 142
Trematdeo............................................................. 145, 146
Agentes virais ................................................... 171, 180, 181, 261
Agulhas e seringas ......................................................... 25, 34, 45
Antraz ................................................................................ 100, 236
Arbovrus e Arenavrus .................................................... 208, 212
Ascaris spp. ...................................................................... 147, 148
Avaliao dos riscos ........... 12, 15, 82, 87, 88, 90, 94, 96,99, 206
Bacillus anthracis ....................................................................... 100
Bacillus subtilis............................................................................. 12
Besnoitia besnoiti ...................................................................... 245
Bioterrorismo ................................................................................ iv
BMBL.......................................................................................... 242
Bordetella pertussis .......................................................... 101, 128
Botulismo ........................................................................... 107,108
Bovino ............................................................................... 110, 155
Abortus .................................................................... 103, 246
Canis ....................................................................... 103, 128
Melitensis ................................................ 103, 128, 129, 245
Suis .................................................................................. 103
Brucelose .......................................................................... 1, 2, 103
CSB ............................................ 9, 10, 13, 14, 179, 224, 226, 228
Cabines de Segurana Biolgica (CSB) .............................. 9, 224
Classe I ................... 9, 10, 17, 73, 100, 120, 135, 188, 224,
225, 226, 228, 229, 230
Classe II .......... 10, 17, 27, 37, 39, 42, 48, 57, 77, 224, 225,
227, 229, 233, 233, 234
Classe III . 10, 15, 37, 40, 41, 46, 48, 50, 51, 53, 73, 78, 79,
83, 84, 100, 174, 179, 224, 227, 228, 228, 268
Calomys spp .............................................................................. 220
Campylobacter .......................................................... 105, 129, 130
Caudriose .................................................................................. 246
Cercopithecus spp. .................................................................... 220
Chimpanzs ............................ 152, 153, 155, 174, 176, 183, 220,
271
Citomegalovrus ................................................................ 180, 181
Clostridium ........................................................................ 107, 108
Coccidioides immitis................................................................... 133
Clera ........................................................................... 1, 126, 136
Condios.................................................................... 133, 134, 138
Conteno ....... 5, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 21, 22, 27, 29, 30,
33, 35, 37, 41, 46, 48, 49, 50, 52, 53, 54, 56, 65, 69, 71, 73, 75,
79, 82, 84, 94, 97, 98, 99, 100, 102, 103, 104, 105, 106,
108, 109, 110, 111, 113, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122,
123, 125, 126, 127, 143, 144, 148, 166, 172, 173, 176, 181, 182
183, 184, 186, 189, 192, 197, 207, 213, 215, 216, 221, 224,
225, 227, 228, 238, 240, 245, 250, 253, 261, 264, 265, 268, viii
Conteno primria ............ 8, 11, 12, 41, 45, 69, 75, 84, 97, 102,
108, 121, 122, 127, 143, 144, 148, 176, 181, 189, 197, 224
Conteno secundria .................................................................. 8
Coriomeningite linfoctica .......................................................... 183
Coxiella burnetti .................................................. 14, 165, 169, 170
Cryptococcus neoformans ............................................... 125, 140
Descontaminao ... 11, 14, 20, 22, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 39, 41,
42, 45, 46, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 70, 73, 75,
78, 79, 87, 100, 108, 154, 158, 193, 215, 228, 248, 266
Dengue ..................................................................... 205, 207, 215
Difteria........................................................................................ 109
Doena da Floresta de Kyasanur .................................... 220, 221
Ebola ................................................................... 88, 220, 221, 222
Encefalite ..................... 2, 14, 173, 177, 212, 213, 215, 218, 219,
220, 221, 246
Encefalomielite eqina ............................. 206, 207, 211, 212, 214
Envio ....................... 104, 109, 112, 127, 133, 134, 166, 168, 172,
174, 188, 208, 211, 221, 238, 239
Equipamento de segurana ..... 4, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 19, 21,
27, 30, 36, 48, 68, 73, 74, 84, 175, 205, 207, 212, 214, 219, 267
Escherichia coli ................................................................. 110, 130
Fasciola spp .............................................................................. 145
Febre amarela ................................. 211, 212, 214, 215, 236, 218
Febre maculosa das Montanhas Rochosas ............................. 167
Febre hemorrgica de Omsk .................................................... 221
Febre de Pontiac ....................................................................... 115
Febre Q ........................................................................ 3, 165, 166
272
Febre tifide .............................................................................. 123
Filovrus ............................................................ 215, 219, 220, 221
Filtro HEPA................................ 39, 52, 56, 57, 78, 224, 225, 229,
230, 231, 232, 233, 234, 235, 268
Francisella tularensis ........................................................ 111, 130
Giardia spp ................................................................................ 143
Hantavrus......................................................................... 171, 216
Heliobacter pylori .............................................................. 112, 130
Hepatite................ 2, 3, 12, 13, 16, 24, 33, 66, 71, 88, 89, 96, 99,
153, 166, 174, 175, 176, 177, 236, 262
Herpesvrus ................................................................ 93, 180, 181
Histoplasma ...................................................................... 135, 246
Capsulatum............................................................. 135, 136
Farciminosum................................................................... 245
Imunoprofilaxia .................................................................... 96, 236
Influenza..................................................... 97, 181, 182, 201, 245
Instalaes Animais ..................................................................... 94
Kuru .................................................................. 151, 153, 162, 195
Laboratrios Clnicos ............ 2, 13, 14, 16, 30, 61, 103, 249, 250
Laboratrio escafandro ..................... 48, 53, 54, 57, 79, 174, 179
Legionella pneumophila ................................................... 115, 131
Leishmania spp. ................................................................ 142, 143
Lepra.................................................................................. 116, 118
Listeria monocytogenes ................................................... 114, 130
Limpeza............ 21, 22, 29, 35, 36, 38, 49, 54, 55, 64, 69, 76, 84,
91, 193, 252, 256
Luvas ............... 10, 14, 19, 21, 23, 28, 31, 36, 37, 45, 63, 67, 78,
73, 75, 83, 100, 104, 107, 114, 115, 121, 125, 127, 137, 138,
143, 147, 154, 155, 157, 158, 160, 175, 176, 179, 189, 190, 191,
196, 198, 207, 225, 227, 228, 229, 235, 265, 266, 267, 268
Machupo ........................................................................... 220, 221
Malaria ....................................................................................... 148
Marburg ................................................... 3, 15, 88, 220, 222, 223
Metacercria ..................................................................... 145, 146
Meyer e Eddie................................................................................ 1
Moldes........................................................................................ 160
Mycobacterium............................ 14, 116, 117, 118, 119, 245, 261
asiaticum .......................................................................... 118
bovis ................................................ 117, 118, 119, 120, 246
273
fortuitum ........................................................................... 118
kansasii ............................................................................ 118
leprae ............................................................... 116, 117, 118
malmoense ....................................................................... 118
marinum ........................................................................... 118
scrofulaceum.................................................................... 118
simiae .......................................... 7, 118, 177, 180, 181, 200
szulgai .............................................................................. 118
tuberculosis ............................... 5. 6, 7, 14, 17, 96, 117, 118
119, 120, 261
ulcerans ........................................................................... 118
xenopi ............................................................................... 118
Mycoplasma agalactiae ............................................................. 246
Mycoplasma mycoides............................................................... 245
Naegleria............................................................................. 12, 144
fowleri ............................................................................... 144
gruberi ................................................................................ 12
Neisseria ........................................................................... 120, 121
Meningitis .................................................................. 121, 132, 201
Nveis de Biossegurana (NB) ..................................................... 11
Nvel de Biossegurana 1 ............................... 11, 12, 19, 22
Nvel de Biossegurana 2 ................... 13, 16, 17, 22, 30, 98
99, 100, 102, 103, 104, 105, 106, 108, 109, 110, 111, 113,
115, 116, 117, 118, 119, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127,
133, 134, 135, 136, 137,138, 142, 144, 145, 147, 148, 152,
153, 154, 155, 165, 167, 172, 175, 176, 178, 181, 182, 183, 185,
187, 189, 196, 198, 205, 206, 207, 208, 211, 213, 224, 261
Nvel de Biossegurana 3 ........... 14, 30, 31, 34, 40, 98, 99,
100, 102, 103, 104, 107, 108, 111, 116, 120, 121, 122,
123, 127, 134, 136, 152, 155, 166, 167, 176, 179, 184,
186, 189, 192, 197, 205, 207, 212, 214, 215, 217, 218,
219, 220, 227
Nvel de Biossegurana 4 ............. 4, 14, 15, 41, 42, 43, 47,
48, 52, 57, 179, 218, 219, 221
Nvel de biossegurana animal 1 ...................................... 61
Nvel de biossegurana animal 2 .... 65, 100, 102, 105, 106,
108, 109, 110, 113, 115, 117, 118, 120, 123, 124, 126, 133,
274
134, 135, 136, 137, 138, 167, 168, 175, 176, 184, 185
Nvel de biossegurana animal 3 ............ 70, 103, 111, 112,
166, 184
Nvel de biossegurana animal 4 ...................................... 79
Normas .............................. 4, 5, 20, 23, 24, 25, 27, 31, 32, 34, 41,
62, 63, 65, 67, 68, 71, 72, 73, 74, 79, 81, 82, 87, 88, 91, 157,
179, 193, 194, 236, 238, 245, 248, 249, 250, 251,
255, 262, 264, 265, 267
Nova droga de pesquisa .................................................. 108, 236
Objetos cortantes ................ 22, 26, 34, 35, 46, 63, 161, 192, 228
Patgenos......................... 5, 12, 13, 16, 17, 34, 44, 94, 152, 154,
177, 189, 192, 239, 245, 247, 248, 250, 256, 261, 262, ii
Patgenos Animais ............................................. 17, 245, 247, 250
Patgenos do sangue ............................. 177, 239, 248, 261, 262
Prticas laboratoriais .............................................................. 9, 19
Pipetagem............................................................... 20, 23, 31, 103
Poliovrus .......................................................... 184, 185, 186, 201
Poxvrus .................................................................... 186, 187, 188
Praga ......................................................................................... 245
Precaues universais ............................................. 4, 88, 93, 191
Presbytis spp. ............................................................................ 220
Primatas .............. 64, 68, 117, 119, 124, 147, 167, 174, 175, 176,
179, 183, 184, 190, 191, 192, 194, 195, 220, 221, 261, iii
Prions .............................. 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,
161, 163, 164, 195, ix
Protozorios parasitas...................................................... 142, 143
Pseudomonas ................................................................... 104, 246
Pseudomallei .................................................................... 104
Projeto da instalao .............................................................. 8, 40
Psittaci ............................................................................... 105, 106
Quantidades de produo ................... 97, 98, 116, 121, 122, 123
Reaes Alrgicas..................................................................... 147
Retrovrus .................................................. 93, 189, 191, 193, 194
Rickttsia ................................................................................... 168
akari ................................................................................. 166
australis............................................................................ 166
conorii ............................................................................... 166
275
coxiella burnetii ......................................... 14, 165, 169, 170
grupo da febre maculosa................................................. 166
mooseri ............................................................................ 166
prowazekii ......................................................................... 166
rickettsii ........................................................... 167, 169, 170
Riscos laboratoriais ...................................... 96, 97, 113, 157, 214
Salmonella ................................................................ 122, 123, 132
SALS ......................................... 61, 205, 206, 212, 213, 215, 216,
217, 218, 219, 220
Schistosoma spp. ...................................................................... 145
Shiguella spp. ............................................................................ 124
Sfilis.................................................................................. 124, 125
Smio .......................................................................................... 194
Sujeira .......................................................................................... 21
Taenia solium............................................................................. 146
Ttano................................................................................... 1, 109
Tatus .......................................................................................... 117
Tecnologias do DNA recombinante ............................................. 92
Transporte e Transferncia de agentes biolgicos .................. 238
Toxinas de origem biolgica ...................................................... 264
Toxides ....................................................................................... 96
Toxoplasma spp. ................................................................. 13, 143
Treponema pallidum ......................................................... 124, 132
Trypanosoma ............................................................ 132, 148, 246
Cruzi ................................................................ 142, 143, 148
Evansi ............................................................................... 246
Vivax ................................................................................. 246
Tuberculose ............................... 1, 2, 3, 24, 33, 99, 117, 119, 248
Tularemia .......................................................... 1, 2, 111, 130, 236
Vacinas ...................... 8, 12, 88, 96, 97, 102, 103, 104, 105, 107,
111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 121, 122,
123, 124, 125, 126, 168, 175, 177, 180, 184
196, 198, 205, 207, 212, 214, 236, 237
Vacnia ........................................................................ 93, 186, 187
Varola ........................................................... 3, 167, 187, 245, 246
Vigilncia............................. 27, 36, 44, 47, 62, 66, 68, 71, 73, 74,
79, 81, 83, 91, 100, 120, 168, 169, 189, 194, 264, 265
276
Vrus Hendra..................................................................... 173, 174
Vrus da doena de Borna ........................................................ 245
Vrus da estomatite vesicular .................................................... 197
Vrus da febre efemeral ............................................................. 246
Vrus da febre do Vale Rift ........................................................ 214
Vrus da Imunodeficincia humana ................................ 4, 98, 189
Vrus da raiva ................................................................... 188, 189
Vrus Junin .......................................................... 90, 214, 215, 220
Yersinia pestis............................................................................ 126

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