Livro de Bioquimica Pratica

BIOQUMICA PRTICA
Protocolos para anlise de biomolculas e exerccios complementares
BIOQUMICA PRTICA
Protocolos para anlise de biomolculas e exerccios complementares
Corpo tcnico:
Profa. Dra. Ana Paula S. Azevedo dos Santos
Profa. Ms Barbara Tereza Fonseca Silva
Profa. Ms. Dbora Luana Ribeiro
Profa. Dra. Elizabeth S. Barcelos Barroqueiro
Profa. Dra. Maria do Socorro S. Cartagenes
Profa. Dra. Sandra Nunes
Profa. Ms. Selma do Nascimento Silva
Profa. Ms. Serlyjane Penha H. Nunes
Colaboradores:
Cacionor Pereira da Cunha Junior
Flavio Protsio Veras
Gustavo Medeiros Frota
Jeniffer Guimares de Sousa
Joberth Mendes Cerqueira
Maria Helena de Almeida Costa
Thais Cristina Sousa Madeira
Desing da capa:
Profa. Dra. Patrcia Silva de Azevedo
NDICE
Pgina
Apresentao
04
01
Regras gerais de segurana em laboratrio ............................
05
02
Preparo de solues e reagentes ............................................
11
03
Caracterizao de Carboidratos ..............................................
25
04
Caracterizao de Lipdios ....................................................... 34
05
Caracterizao de Aminocidos e Protenas ...........................
06
Caracterizao de cidos Nuclicos ........................................ 48
07
Desnaturao protica .............................................................
53
08
Enzimas ...................................................................................
59
09
Analise bioqumica da urina .....................................................
69
10
Colorimetria e espectofotometria .............................................
81
REFERNCIAS CONSULTADAS
89
41
APRESENTAO
A Bioqumica a ciencia que estuda as biomolculas, isto , moleculas envolvindas

com a formao e viabilidade da menor unidade viva a clula. Neste contexto, aspectos
estruturais e funcionais so importantes para entendermos com estas estruturas esto
envolvidas com os mecanismos de transformao ou metabolismo, permitindo a adaptao da
clula ao ambiente. Outra caracteristica da vida, a hereditariedade, s possivel devido a
propriedade de algunas molculas serem capazes de fazer cpias.
As principias biomolculas so os carboidratos, lipdios, aminocidos, protenas,
nucleotdios e cidos nucleicos. Estas juntamente com outras molculas regulatorias como
vitaminas e minerais atuam nos mecanismos de gerao de energia, sintese e diviso celular.
Com base em suas propriedades quimicas alguns experimentos podem ser feitos de forma a
caracterizar as biomoleculas e ajudar a compreender suas aes na clula.
A Bioqumica permite observar como a versatilidade das biomolculas so
determinantes para a formao da clula. Considerando que esta, compe os tecidos, estes
do sistemas e por ultimo o organismo, o entendimento das biomolculas permite compreender
como tudo funciona n asua condio mais simples.
Assim,
nesta
apostila
iremos
realizar
alguns
experimentos
para
determinar
caracteristicas estruturais e funciais das principias biomoleculas e, desta forma, a facilitar o

aprendizado da bioqumia e perceber esta ciencia no est distante do nosso cotidiano, pelo
contrario ela faz parte dele a todo momento.
1. REGRAS GERAIS DE SEGURANA EM LABORATRIO

As regras gerais de segurana em laboratrio resultam de vrios anos de
esforos de pessoas preocupadas em tornar o trabalho no laboratrio uma atividade
segura. Assim, os laboratrios so lugares de trabalho que necessariamente no so
perigosos, desde que certas precaues sejam tomadas.
Acidentes em laboratrios ocorrem freqentemente em virtude da pressa
excessiva na obteno de resultados. Todo aquele que trabalha em laboratrio deve ter
responsabilidade no seu trabalho e evitar atitudes ou pressa que possam acarretar
acidentes e possveis danos para si e para os demais. Deve prestar ateno a sua
volta e se prevenir contra perigos que possam surgir do trabalho de outros, assim como
do seu prprio. O usurio de laboratrio deve, portanto, adotar sempre uma atitude
atenciosa, cuidadosa e metdica no que faz. Deve, particularmente, concentrar-se no
trabalho que faz e no permitir qualquer distrao enquanto trabalha. Da mesma forma
no deve distrair os demais enquanto desenvolvem trabalhos no laboratrio
PORTANTO, a observncia das normas de segurana pessoal importante para a
integridade fsica das pessoas que atuam de forma permanente (professores e
tcnicos) ou eventual (pessoal de limpeza, alunos etc).
Vesturio Apropriado
1. Avental de mangas compridas, longos at os joelhos, com fios de algodo na

composio do tecido.
2. Cala comprida de tecido no inteiramente sinttico.
3. Sapato fechado, de couro ou assemelhado.
4. culos de segurana.
5. Luvas
Vesturio NO RECOMENDADO
1. Bermuda ou short.
2. Sandlia, Chinelo, Sapato aberto.
3. Uso de braceletes, correntes ou outros adereos.
4. Avental de naylon ou 100% poliester.
HBITOS INDIVIDUAIS
Faa no Laboratrio
1. Lave as mos antes de iniciar seu trabalho.

2. Lave as mos entre dois procedimentos.
3. Lave as mos antes de sair do laboratrio.
4. Certifique-se da localizao do chuveiro de emergncia, lava-olhos, e suas
operacionalizaes.
5. Conhea a localizao e os tipos de extintores de incndio no laboratrio.
6. Conhea a localizao das sadas de emergncias.
No Faa no Laboratrio
1. Fumar
2. Comer
3. Correr
4. Beber
5. Sentar ou debruar na bancada
6. Sentar no cho
7. No use cabelo comprido solto
8. No (ou evite) trabalhar solitrio no laboratrio
9. No manuseie slidos e lquidos desconhecidos apenas por curiosidade
Atitudes Individuais com Bicos de Gs
1. Feche completamente a vlvula de regulagem de altura de chama.

2. Abra o registro do bloqueador da linha de alimentao.
3. Providencie uma chama piloto e aproxime do bico de gs.
4. Abra lentamente a vlvula de regulagem de altura de chama at que o bico de
gs ascenda.
5. Regule a chama.
RISCOS RELACIONADOS AOS PRODUTOS QUMICOS
Os produtos qumicos mais agressivos ao homem e ao meio ambiente podem ainda

afetar pessoas que no tm conhecimentos de suas caractersticas, como o caso do
7
pessoal da coleta de lixo, catadores de lixo etc. Estes, por serem leigos no assunto,
ficam sobremaneira expostos s consequncias do seu manuseio inadequado.
Alm do contato direto com a pele, os diversos agentes qumicos manuseados em
laboratrios podem agredir o organismo humano por trs vias:
a) Por inalao: constitui a principal via de intoxicao. A absoro de gases, vapores,
poeiras e aerossis pelos pulmes e a sua distribuio pelo sangue, que os leva s
diversas partes do corpo, extremamente facilitada pela elevada superfcie dos
alvolos pulmonares. A equivocada cultura de que laboratrios tm naturalmente odor
de produtos qumicos com freqncia leva a atitudes negligentes, provocando efeitos
crnicos sade, com danos muitas vezes permanentes ou irreversveis.
b) Por absoro cutnea: a pele e a gordura protetora so barreiras bastante efetivas,
sendo poucas as substncias que podem ser absorvidas em quantidades perigosas.
Os efeitos mais comuns da ao de substncias qumicas sobre a pele so as
irritaes superficiais e sensibilizaes decorrentes da combinao do contaminante
com as protenas. Como decorrncia destes fatos, o agente qumico pode penetrar pela
pele, atingindo a corrente sangunea. Neste sentido necessrio especial cuidado
quando houver danos integridade da pele feridas expostas devem ser
devidamente protegidas.
c) Por ingesto: pode ocorrer de forma acidental, ou ao ingerir partculas
que estejam retidas no trato respiratrio, resultantes da inalao de ps ou fumos. Os
riscos de ingesto por contaminao das mos e alimentos sero inexistentes se
houver a devida ateno e higiene no trabalho.
Atitudes Individuais com cidos
1. Adicione sempre o cido gua; nunca faa o inverso.
Atitudes Individuais com Solues
1. No transporte solues em recipientes de boca largas, se tiver que efetu-lo

por certa distncia, triplique sua ateno durante o percurso e solicite um colega
que o acompanhe.
2. No leve a boca a qualquer reagente qumico, nem mesmo o mais diludo.
3. Certifique-se da concentrao e da data de preparao de uma soluo antes
de us-la.
4. No pipete, aspirando com a boca, lquidos custicos, venenosos ou corantes,

use pra de segurana.
5. No use o mesmo equipamento volumtrico para medir simultneamente
solues diferentes.
6. Volumes de solues padronizadas, tiradas dos recipientes de origem e no
utilizadas, devem ser descartados e no retornados ao recipiente de origem
. Manuseio e cuidados com frasco de reagentes
1. Leia cuidadosamente o rtulo do frasco antes de utiliz-lo, habitue-se a llo, mais uma vez, ao peg-lo, e novamente antes de us-lo.
2. Ao utilizar uma substncia slida ou lquida dos frascos de reagentes, pegue-o
de modo que sua mo proteja o rtulo e incline-o de modo que o fluxo escoe do
lado oposto ao rtulo.
3. Muito cuidado com as tampas dos frascos, no permita que ele seja
contaminada ou contamine-se. Se necessrio use o auxlio de vidros de relgio,
placas de Petri, etc. Para evitar que isso acontea.
4. Ao acondicionar um reagente, certifique-se antes da compatibilidade com o
frasco, por exemplo, substncias sensveis luz, no podem ser acondicionadas
em embalagens translcidas.
5. No cheire diretamente frascos de nenhum produto qumico, aprenda esta
tcnica e passe a utiliz-la de incio, mesmo que o frasco contenha perfume.
6. Os cuidados com o descarte de frascos vazios de reagentes no devem ser
menores que os cuidados com o descarte de solues que eles do origem.
Descarte de slidos e lquidos
1. Dever ser efetuado em recipientes apropriados separando-se o descarte de

orgnicos de inorgnicos.
Cuidados com aquecimento, includo: reao exotrmica, chama direta,

resistncia eltrica e banho-maria.
1. No aquea bruscamente qualquer substncia.

2. Nunca dirija a abertura de tubos de ensaio ou frascos para si ou para outrem
durante o aquecimento.
3. No deixe sem o aviso "cuidado material aquecido", equipamento ou vidraria
que tenha sido removida de sua fonte de aquecimento, ainda quente e deixado
repousar em lugar que possa ser tocado inadvertidamente.
4. No utilize "chama exposta" em locais onde esteja ocorrendo manuseio de
solventes volteis, tais como teres, acetona, metanol, etanol, etc.
5. No aquea fora das capelas, substncias que gerem vapores ou fumos txicos.
CUIDADOS
COM
APARELHAGEM,
EQUIPAMENTOS
VIDRARIAS
LABORATORIAIS
1. Antes de iniciar a montagem, inspecione a aparelhagem, certifique-se de que ela
esteja completa, intacta e em condies de uso.
2. No utilize material de vidro trincado, quebrado, com arestas cortantes.
3. No seque equipamentos volumtricos utilizando estufas aquecidas ou ar
comprimido.
4. No utilizes tubos de vidro, termmetros em rolha, sem antes lubrific-los com
vaselina e proteger as mos com luvas apropriadas ou toalha de pano.
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SAIBA COMO AJUDAR A SI MESMO E A OUTROS MEMBROS DO LABORATRIO

EM CASO DE EMERGNCIA
Memorize os nmero de telefone de segurana.
Bombeiros 193
Polcia 190
SAMU 192
Localize onde est o estojo de primeiros socorros
No execute nada que voc tenha dvidas, sem antes esclarec-las.
Relacionar os produtos qumicos empregados, com danos e seus riscos,
sintomas e tratamento especfico.
-
Em caso de acidentes deve-se, mantendo a calma, desligar todos os
equipamentos e materiais prximos, evacuar a rea e no permitir a entrada no

laboratrio de pessoas estranhas, enquanto aguarda a chegada de socorro.
Algumas providncias imediatas devem ser tomadas:
Havendo cortes no profundos, deve-se deixar sangrar um pouco e verificar
se ficaram estilhaos de vidro. Lavar com gua corrente e desinfetar com
lcool,
protegendo
ferimento
com
gaze
esterilizada.
Se
houver
sangramento ou hemorragia, pressionar o ferimento at cessar.

Em caso de acidente com fogo, se as propores no forem grandes, abafase a chama com pano mido. Se alguma roupa pegar fogo nunca correr, e
sim rolar no cho ou envolver-se num cobertor.
Queimaduras trmicas, provocadas por chamas, gua fervente ou placas
quentes devem ser resfriadas com gua e nunca gelo. Recomenda-se um
jato fraco de gua levemente morna ou fria, demoradamente, sobre a zona
queimada. Para aliviar a ardncia pode ser usado creme de sulfadiazina de
prata a 1 %. Encaminhar para atendimento mdico.
Em caso de queimadura com cido ou base, lava-se a regio atingida com
gua corrente em abundncia para remover todo o reagente. Se o produto
cair no vesturio, remov-lo imediatamente. Em seguida se providencia
cuidados mdicos.
11
Se houver queimaduras qumicas nos olhos, lav-los abundantemente com

gua (lava-olhos) e em seguida procurar atendimento mdico.
Quando houver inalao de gases, vapores ou poeiras, deve-se afastar a
pessoa afetada da rea contaminada e lev-la para outro bem arejado,
afrouxar-lhe a roupa e mant-la deitada de lado enquanto aguarda socorro
mdico. Nunca dar gua, leite ou qualquer lquido.
Se houver ingesto acidental de slidos ou lquidos deve-se levar a pessoa
imediatamente a um hospital, cuidando para levar junto a anotao das
especificaes da substncia ingerida. Jamais provocar o vmito.
Todos os acidentes devem ser imediatamente relatados ao professor
responsvel.
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2. PREPARO DE REAGENTES E SOLUES
O preparo das solues e reagentes consiste de uma etapa importante para um

experimento bem sucedido. Para isso necessrio verificar as normas tcnicas
relacionadas ao preparo de solues, observar os rtulos dos produtos a serem
manipulados, averiguar possveis incompatibilidades e condies fsico-qumicas para
manipulao e atentar para a concentrao.
A validade dos produtos varivel dependendo do local de armazenamento
(temperatura, umidade, incidncia de luz, entre outros). Entretanto qualquer
modificao no aspecto da soluo se faz prudente descart-la, atentando para as
normas de segurana quanto eliminao de resduos.
Assim para evitar desperdcios, observamos a rotina do laboratrio e
manipulamos um volume de soluo suficiente para, no mximo, um ano de durao.
SOLUES
Solues so misturas homogneas unifsicas constitudas de duas ou mais
substncias miscveis, que no reagem quimicamente entre si. As partculas dispersas
so molculas ou ons invisveis a olho nu e ao microscpio. So formados por dois
compostos, o soluto e o solvente. O solvente a substncia que dissolve o soluto e o
soluto a substncia que est dissolvida no solvente.
Nas solues de slido em lquido ou de gs em lquido, o solvente o lquido.
Porm, quando a soluo de dois lquidos ou de dois slidos, o solvente o que
existe em maior proporo.
Soluo Diluda
Soluo em que a proporo de soluto numa determinada soluo pequena. O
parmetro soluo que apresenta no mximo um dcimo de mol de soluto por litro de
soluo.
Soluo Concentrada
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Soluo em que a proporo de soluto numa determinada quantidade de

soluo grande. O parmetro soluo que apresenta mais de um dcimo de mol de
soluto por litro de soluo.
Soluo Saturada
Soluo saturada a que contm a quantidade mxima possvel de um soluto
em uma determinada temperatura e presso, perfeitamente dissolvido no solvente.
Coeficiente de Solubilidade
Coeficiente de solubilidade a quantidade de soluto necessria para saturar
uma quantidade padro de solvente, em determinadas condies de temperatura e
presso.
A variao do coeficiente de solubilidade em funo da temperatura em um
(g de KNO3/ 100 g de gua)
sistema de coordenadas produz uma curva, chamada de curva de solubilidade.
260
240
220
200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
Regi o da s
soluoes
supersa turadas
(instve is)
Regi o da s
soluoes no
satura da s
(ou inst ve is)
(e stve is)
20
40
60
80
100
Temperatura (C)
Figura 1: Curva de solubilidade do nitrato de potssio (kno3)
As solues podem ser classificadas segundo o grau de solubilidade:

- Soluo insaturada: apresenta quantidade de soluto inferior ao coeficiente de
solubilidade nessa temperatura.
- Soluo saturada: apresenta quantidade de soluto dissolvido exatamente igual ao
coeficiente de solubilidade nessa temperatura. Pode ou no conter precipitado.
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- Soluo supersaturada: apresenta quantidade de soluto dissolvido superior ao

coeficiente de solubilidade nessa temperatura. uma soluo instvel.
UNIDADES DE CONCENTRAO
Concentrao comum a relao entre a massa do soluto, em gramas, e o
volume da soluo, em litro.
C=
Massa do soluto
Volume da soluo
Densidade da soluo a relao entre a massa, em gramas, e o volume da

soluo, em centmetros cbicos.
D=
Massa da soluo
Volume da soluo
Ttulo a relao entre a massa do soluto e a massa da soluo, ambos na

mesma unidade.
Massa do soluto
Massa da soluo
Ttulo em volume a relao entre o volume de soluto e o volume de soluo,

ambos na mesma unidade.
v= Volume do soluto
Volume da soluo
Molaridade ou Concentrao em Quantidade de Matria a relao entre a

quantidade de matria, nmero de mol, do soluto e o volume da soluo em litros.
M= Nmero de mol do soluto
Volume da soluo
Frao Molar relao entre o nmero de mol do soluto ou o nmero de mol do

solvente com o nmero de mol da soluo.
X= Nmero de mol do soluto/ solvente
Nmero de mol da soluo
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Molalidade a relao entre a quantidade de matria em nmero de mol

absoluto e a massa do solvente em quilogramas.
M= Nmero de mol do soluto
Massa da soluo
Normalidade a relao entre o nmero de equivalente-grama do soluto

dissolvido e o volume da soluo em litros.
N= Nmero de equivalente-grama de soluto

Volume da soluo
Obs.: O equivalente-grama de um elemento qumico a relao entre tomograma e sua valncia no composto considerado. Equivalente-grama de um cido a
relao entre o mol do cido e o nmero de hidrognios cidos ou ionizveis.
Equivalente-grama de uma base a relao entre o mol da base e o nmero de
hidroxilas. Equivalente-grama de um sal a relao entre o mol do sal e valncia
total do ction ou nion. Equivalente-grama de um oxidante ou redutor a relao
entre o mol da substncia e o nmero total de eltrons cedidos ou recebidos pela
molcula.
REAGENTES E SOLUES DE TRABALHO
SOLUO DE GLICOSE A 1%
Soluto: glicose (C6H12O6).
Solvente: gua destilada (H2O).
Procedimento: Pesar 1g de Glicose e completar com gua destilada para 100mL,
homogeneizando bem.
Condies de armazenamento: manter em geladeira.
Prazo de validade: aproximadamente 2 meses.
SOLUO DE FRUTOSE A 1%
Soluto: frutose (C6H12O6).
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Procedimento: Mea em uma proveta 1mL de Frutose. Transferir para um bquer,

lavando vrias vezes a proveta. Completar com gua destilada para 100mL,
homogeneizando bem.
SOLUO DE SACAROSE A 1%
Soluto: sacarose (C12H22O11).
Procedimento: Pesar 1g de Sacarose e completar com gua destilada para 100mL,
homogeneizando bem.
Prazo de validade: devido sua instabilidade deve ser preparada pouco antes da
realizao dos experimentos.
SOLUO ALCOLICA DE KOH 5%

Soluto: Hidrxido de Potssio (KOH).
Solvente: lcool etlico (C2H6O).
Procedimento: Dissolver 5g de Hidrxido de Potssio (KOH) em lcool etlico e
completar o volume para 100mL.
Condies de armazenamento: manter a temperatura ambiente em frasco emtico.
SOLUO DE NaOH (HIDRXIDO DE SDIO) 2N

Soluto: Hidrxido de Sdio (NaOH).
Procedimento: Dissolver cerca de 8 a 9g de NaOH puro em gua e completar ao
volume de 100mL com gua destilada, ou: diluir 33mL de NaOH 6N com gua e
completar o volume para 100mL.
Obs.: Imediatamente aps a pesagem do NaOH, cubra-o com filme plstico.
Substncia muito higroscpica.
Condies de armazenamento: manter temperatura ambiente em frasco emtico.
Prazo de validade: soluo estvel indefinidamente.
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SOLUO DE NaOH (HIDRXIDO DE SDIO) 10%

Soluto: Hidrxido de Sdio (NaOH).
Procedimento: Pesar 10g de NaOH e dissolver em 70mL de gua destilada.
Completar o volume para 100mL, homogeneizando bem.
Obs.: Imediatamente aps a pesagem do NaOH, cubra-o com filme plstico.
Substncia muito higroscpica.
Prazo de validade: soluo estvel indefinidamente.
SOLUO DE ACETATO DE CHUMBO A 1%

Soluto: Acetato de Chumbo (C4H6O4Pb).
Procedimento: Dissolver 1g de Acetato de Chumbo em gua destilada e completar o
volume para 100mL.
Condies de armazenamento: manter temperatura ambiente em frasco mbar e
emtico.
Prazo de validade: aproximadamente um ano.
SOLUO DE CLORETO DE CLCIO A 5%

Soluto: Cloreto de Clcio (CaCl2).
Procedimento: Dissolver 5g de Cloreto de Clcio em gua e completar o volume a
100mL.
Prazo de validade: aproximadamente um ano.
SOLUO DE CIDO CLORDRICO (HCl) 1:2

Soluto: cido Clordrico (HCl).
Procedimento: Adiciona-se 100mL de cido Clordrico em 100mL de gua.
Condies de armazenamento: manter temperatura ambiente em frasco mbar e
emtico.
Prazo de validade: esta soluo estvel indefinidamente.
18
SOLUO DE CIDO ACTICO 1:2

Soluto: cido actico (CH3COOH).
Procedimento: Diluem-se 100mL de cido actico glacial com gua destilada para
200mL.
Condies de armazenamento: manter a temperatura ambiente em frasco emtico.
SOLUO ALCOLICA DE PIRAMIDO A 5%

Soluto: Piramido (C21H29N3O).
Procedimento: Dissolver 5g de Piramido em lcool etlico, completando o volume para
100mL.
Condies de armazenamento: manter a temperatura ambiente em frasco mbar e
emtico.
SOLUO DE CIDO SULFOSALICLICO A 20%

Soluto: cido Sulfosaliclico.
Solvente: lcool etlico (C2H6O).
Procedimento: Dissolver 20g de cido Sulfosaliclico em gua destilada e completar o
volume para 100mL.
emtico.
SOLUO DE CIDO TRICLOROACTICO A 20%

Soluto: cido Tricloroactico (CCl3COOH).
Procedimento: Diluem-se 20mL de cido Tricloroactico com gua destilada at
100mL.
19

emtico.
Prazo de validade: Esta soluo estvel indefinidamente.
SOLUO DE OVOALBUMINA A 10%

Soluto: clara de ovo.
Procedimento: Adiciona-se 50mL de gua destilada em 10mL de clara de ovo fresco,
completa-se o volume para 100mL, em seguida homogeneizando bem.
Condies de armazenamento: acondicionada em geladeira.
Prazo de validade: Esta soluo deve ser preparada no momento do uso.
SOLUO DE TUNGSTATO DE SDIO A 10%

Soluto: Tungstato de Sdio (Na2WO4).
Procedimento: Dissolver 10g de Tungstato de Sdio em gua destilada e completar o
volume para 100mL.
Condies de armazenamento: Manter a temperatura ambiente em frasco mbar e
emtico.
Prazo de validade: aproximadamente 1 ano.
SOLUO CLOROFRMICA DE COLESTEROL

Soluto: Colesterol (C27 H46O).
Solvente: clorofrmio (CHCl3).
Procedimento: Diluir 0,5g de Colesterol em 50mL de clorofrmio.
Condies de armazenamento: Diluir 0,5g de Colesterol em 50mL de clorofrmio.
Prazo de validade: aproximadamente 1 dia.
SOLUO DE VERMELHO DE FENOL A 4%

Soluto: Vermelho de Fenol (C19H14O5S).
Procedimento: Dissolver 4g Vermelho de Fenol em gua destilada e completar o
volume para 100ml.
20

emtico.
REAGENTE DE MILLON
Soluto: cido ntrico (HNO3) e mercrio (Hg).
Procedimento: Adiciona-se 40mL de cido ntrico concentrado frio em 20g de cido
ntrico , deixa-se dissolver por aquecimento e dilui-se com gua duas vezes em
volume. Deixa-se decantar durante 24 horas e usa-se a soluo superficial. Para
recuperar a eficincia desta soluo, adicionam-se diversas gotas de soluo aquosa
de NaNO2 a 1% ou KNO2 a 1%.
Condies de armazenamento: Manter a temperatura ambiente em frasco e emtico.
SOLUO DE -NAFTOL
Soluto: -Naftol (C10H8O).
Solvente: lcool etlico (CH3CH2OH).
Procedimento: Pesar 5g de -Naftol e completar com lcool etlico para 100mL.
emtico.
REAGENTE DE LUGOL
Soluto: Iodato de Potssio (KIO3).
Procedimento: Pesar 5g de Iodo e 10g de Iodato de Potssio. Misturar em 60mL de
gua destilada, em seguida completar o volume para 100mL, homogeneizando bem.
emtico.
SOLUO DE LUGOL A 1%
Soluto: Reagente de Lugol.
21

Procedimento: Diluir 1mL do reagente de Lugol em 100mL de gua destilada.
emtico.
SOLUO DE AMIDO A 1%
Soluto: amido (C6H10O5)n.
Procedimento: Misturar 2g de amido com 20mL de gua destilada. Derramar a pasta
lentamente, agitando em um bquer com 200mL de gua fervente. Cessar a ebulio e
deixar esfriar e sedimentar. Separar, por decantao, aspirao ou centrifugao a
parte sobrenadante sem grumos. Para maior estabilidade da soluo, convm
adicionar 1% de cido saliclico.
Condies de armazenamento: Preparar um dia antes do experimento e manter na
geladeira em frasco emtico.
REATIVO DE BENEDICT
Solutos: citrato de sdio (Na3C6H5O7), carbonato de sdio anidro (Na2CO3) e sulfato
de cobre (CuSO4) cristalizado.
Procedimento: Dissolver 85g de citrato de sdio e 50g de carbonato de sdio anidro
em cerca de 350mL de gua quente. Dissolver parte, em 50mL de gua quente, 0,5g
de sulfato de cobre cristalizado. Transferir lentamente, com agitao constante, a
soluo cprica para a primeira. Completar o volume para 500mL com gua destilada,
e filtrar se necessrio.
Condies de armazenamento: Manter a temperatura ambiente em frasco emtico.
REATIVO DE FEHLING
SOLUO A
Soluto: sulfato de cprico (CuSO4).
22

Procedimento: Dissolver 34,64g de sulfato de cobre cristalizado em 300mL de gua
quente. Completar o volume para 500mL.
Condies de armazenamento: Manter a temperatura ambiente em frasco emtico de
vidro.
SOLUO B
Soluto: Hidrxido de Potssio (KOH) e Tartarato duplo de sdio e potssio
(KNaC4H4O64H2O).
Procedimento: Dissolver 125g de Hidrxido de Potssio e 173g de Tartarato duplo de
sdio e potssio em 400mL de gua destilada. Completar o volume para 500mL.
Condies de armazenamento: Manter a temperatura ambiente em frasco emtico de
polietileno.
REAGENTE DE SELIWANOFF
Soluto: Resorcinol (C6H4(OH)2)
Solvente: cido clordrico (HCl).
Procedimento: Dissolver 0,05g de Resorcinol em 100mL de HCl diludo (na proporo
1:2).
emtico.
Prazo de validade: aproximadamente de 1 ano.
REAGENTE DO BIURETO
Solutos: sulfato cprico (CuSO4), hidrxido de sdio (NaOH) e tartarato de sdio e
potssio (KNaC4H4O64H2O).
Procedimento: Dissolver 150mg de sulfato cprico em 50mL de gua quente. Misturar
esta soluo com 30mL de soluo de NaOH a 10% e 600mg de tartarato de sdio e
potssio. Completar o volume com gua destilada para 100mL.
23
Condies de armazenamento: Armazenar em frasco de polietileno e ao abrigo da luz

direta.
Prazo de validade: Este reativo estvel indefinidamente, porm deve ser desprezado
caso aparecer precipitado escuro.
SOLUO DE UREASE A 1%
Soluto: urease
Procedimento: Pesar 0,1g de urease e completar com gua destilada para 10mL,
homogeneizando bem.
Condies de armazenamento: Manter na geladeira em frasco emtico e mbar.
SOLUO DE FENOL SATURADO EM GUA

Soluto: fenol (C6H5OH)
Procedimento: Pesar 100g de fenol e adicionar 39,5mL de gua destilada,
homogeneizar bem.
SOLUO DE NINHIDRINA
Soluto: ninhidrina (C9H6O4).
Solvente: acetona (C3H6O).
Procedimento: Pesar 0,2g de ninhidrina e diluir em 100mL de acetona, homogeneizar
e acondicionar em frasco emtico.
Prazo de validade: aproximadamente 1 dia.
EXERCCIOS
1- Cada litro de gua do mar possui cerca de 3,5g de cloreto de sdio (NaCl), ou seja C
= 3,5
g
/L.
Qual o volume de gua do mar necessrio ser evaporado para ter-se 700g
de sal?
24
2- Uma soluo de sacarose (acar comum) possui concentrao C = 90,0 g/L.

Quanto de acar existir em uma garrafa de 330 mL (miliLitros, ou 0,330L)?
3- Quantos mols existem um 0,4L de soluo Na2S 1,5M?
4 - Qual o volume de soluo AlCl3 0,8M necessrio para conter 2,0 mols deste sal?
5 - Quantas gramas de Na2CO3 existem em 0,8L deste sal, da concentrao M = 2,5
mol/L? (dados 23Na, 32C, 16O)
RESULTADOS
1- Resoluo: 3,5 g/1,0L = 700g/(x)L
3,5g (x)L = 700g 1,0L ou seja, x = 200 L de gua do mar.
2- Resoluo: 90,0 g/1,0L = (x)g/(x)0,330L
90,0g 0,330L = (x)g 1,0L ou seja, x = 29,7g de acar.
3- Resoluo:
M = 1,5 mol/1,0L = (x)mol/0,4L
onde 1,0L (x)mol = 1,5mol 0,4L
x = 0,6 mol deste cido.
4 - Resoluo:
M = 0,8 mol/1,0L = 2mol/(x)L
onde 0,8mol (x)mol = 2,0mol 1,0L
x = 0,25 litros desta soluo.
5 - Resoluo: Primeiro achamos quantos mols existem em 0,8 litros desta soluo
M = 2,5 mol/1,0L = (x)mol/0,8L
onde 1,0L (x)mol = 2,5mol 0,8L
x = 2,0 mol deste cido.
Depois transformamos estes 2,0 mols em gramas, pois 1 mol de Na2CO3 = 106 gramas
106g 0,8 mol = 84,8 gramas de Na2CO3
25
3. CARACTERIZAO DE CARBOIDRATOS
O termo carboidrato denota hidratos de carbono, designao oriunda da formula
geral (CH2O)n sendo substncias orgnicas constitudas por carbono, hidrognio e
oxignio. Esses dois ltimos elementos, na maioria dos casos, esto presentes nos
carboidratos na mesma proporo que na gua. Quimicamente so representados
como poliidroxi-aldedos ou poliidroxi-cetonas ou substncias que liberam tais grupos
por hidrlise. Estes grupos conferem aos carboidratos a capacidade de participar de
vrias reaes como oxidao, reduo, esterificao, isomerizao e capacidade de
formar ligaes glicosdicas. Algumas dessas reaes envolvem a formao de
complexos corados, e a especificidade da identificao depende da estrutura dos
carboidratos.
1. Teste de Molisch (reao geral para carboidratos)

a)
Fundamentao terica:
Os monossacardeos mais importantes so formados por cinco ou seis tomos de
carbono (pentoses e hexoses respectivamente). Por serem molculas muito ricas
em grupamentos hidroxila (-OH), os monossacardeos podem ser facilmente
desidratados por ao de cidos fortes concentrados como, o cido sulfrico
(H2SO4). O cido rompe facilmente as ligaes glicosdicas presentes em
molculas
de
polissacardeos,
quebrando-os
fornecendo
seus
monossacardeos. Esses, por sua vez, so desidratados e podemos ter como

produto: o furfural, quando o monossacardeo desidratado for uma pentose, e o
hidroximetilfurfural (HMF), quando for uma hexose.
Tanto o furfural quanto o HMF so substncias incolores, impedindo que a reao
seja visualizada. Para resolver esse problema, adiciona-se um composto fenlico
26
ao meio (alfa-naftol, conhecido como reativo de Molisch). O fenol reage com os

produtos, incolores e provoca o aparecimento de um anel de colorao lils.
A reao que ocorre a seguinte:
O
O
C5H10O 5
H2SO 4
H -naftol
Composto violeta
furfural
O
HOH2C
C6H12O 6
b) Objetivo:
H2SO4
C
H -naftol
Evidenciar ahidroximetilfurfural
presena de
Composto violeta
monossacardeos
nas
amostras
analisadas.
c) Materiais:
Vidrarias:
4 pipetas de vidro de 5mL
1 pipeta de vidro de 1mL
3 Tubos de ensaio
Reagentes:
Soluo alcolica de alfa-naftol a 5%
cido Sulfrico concentrado
Soluo de Glicose 1%
Soluo de Frutose 1%
Acessrios:
Estante para tubos de ensaio
Pra de borracha
Papel Toalha
Descarte para pipetas
Frasco com gua destilada
d) Procedimento:
Identificar os tubos de ensaio como Glicose (Tubo 1), Frutose (Tubo 2) e gua
(Tubo 3). Pipetar para primeiro tubo 2mL de glicose, ao segundo 2mL de frutose e
27
ao terceiro 2mL de gua destilada, que vai servir como um controle negativo.
Acrescentar 5 gotas da soluo de alfa-naftol e agitar. Pipetar cuidadosamente 2
mL de cido sulfrico concentrado com o tubo inclinado, deixando escorrer pelas
paredes do tubo sem agitar.
e) Resultado esperado:
Tubo 1 (Glicose): Ocorre a formao de um anel vermelho na interface da reao

indicando resultado positivo.
Tubo 2 (Frutose): Ocorre a formao de um anel vermelho na interface da reao
indicando resultado positivo.
Tubo 3 (gua): No h formao de anel na interface indicando resultado
negativo.
Glicose
Frutose
gua destilada
f) Resultado obtido:
Tubo1: _____________________________________________
Tubo 2: _____________________________________________
Tubo 3: _____________________________________________
2. Reao de Seliwanoff (Reao para distino entre aldoses e cetoses)

a) Fundamentao terica:
Este teste permite diferenciar aldoses de cetoses que, sob ao de cidos fortes,
so transformadas em derivados de furfural que se condensam com o resorcinol,
presente no reativo de seliwanoff formando um produto vermelho de composio
incerta. A reao com cetoses rpida e mais intensa pela maior facilidade de
28
formao do derivado furfural. Logo, a frutose e o mel de abelha, por conter frutose
reagem positivamente.
A reao que ocorre a seguinte :
Aquecimento
Cetose + HCl
O
H
Resorcinol
Composto violeta
Furfural
b) Objetivos: Identificar a presena de cetoses presentes nas solues pela

reao de Seliwanoff.
c) Materiais:
Vidrarias:
3 Tubos de ensaio
Reagentes:
Reagente de Seliwanoff
cido Clordrico concentrado
Soluo de Glicose 1%
Soluo de Frutose 1%
Mel de abelha
Equipamentos:
Banho-Maria
Acessrios:
Pra de borracha
Pina
Papel Toalha
d)
Procedimentos:
29
Identificar os tubos de ensaio como Glicose (Tubo 1), Frutose ou mel de

abelha (Tubo 2) e gua (Tubo 3). Pipetar para o primeiro tubo 1mL de glicose, ao
segundo 1mL de frutose ou mel de abelha e ao terceiro 1mL de gua destilada,
que vai servir como um controle negativo, com pipetas de 1mL. Adicionar em
todos os tubos de ensaio 1,5mL de cido clordrico e 0,5mL de reativo de
Seliwanoff*. Agitar cuidadosamente. Deixar em banho-maria fervente at
completar a reao. Observar.
e)
Resultado esperado:
Tubo 1 (Glicose): No h mudana do reativo indicando resultado negativo.

Tubo 2 (Frutose): Ocorre a formao de uma soluo vermelha indicando
resultado positivo.
Tubo 3 (gua): No h mudana do reativo, indicando resultado negativo.
Glicose
Frutose
gua destilada
f) Resultado Obtido:
Tubo1:______________________________________________
Tubo 2: _____________________________________________
Tubo 3: _____________________________________________
3. Reao de Benedict (Identificao de Acares Redutores)
30
Reao para identificar carboidratos redutores. Nas estruturas cclicas dos

monossacardeos os tomos de carbono anomricos(C1 nas aldoses e C2 nas
cetoses) so susceptveis de oxidao por vrios agentes oxidantes contendo ons
cpricos (Cu2+) devido a presena de grupos aldeidos ou cetonas livres ou
potencialmente livres. Na reao de Benedict os ons cpricos so reduzidos pela
carbolina dos carboidratos a ons cuprosos formando xido cuproso que tem cor
vermelho tijolo. Tal princpio til na anlise de acares e, por muitos anos, foi
utilizado na determinao dos nveis sanguneos de glicose no sangue e na urina como
diagnstico da diabetes melito. Atualmente, h testes mais sensveis para dosagem
rpida da glicose, baseadas em ensaios enzimtico (glicofita/glicose-oxidase) e que
so muito mais prticos, por no exigirem a disponibilidade dos reagentes
mencionados.
A reao que ocorre a seguinte:
Ausncia de composto redutor:
Meio alcalino
CuO
Cu(OH)2
(azul)
Aquecimento
H2O
(preto)
Presena de composto redutor:

Meio Alcalino
Cu (OH)2
(azul)
Cu2O
Aquecimento
H2O
(amarelo/vermelho)
b) Objetivos: caracterizar a presena de aucares redutores atravs da reao de

Benedict em solues de carboidrato.
c) Materiais:
Vidrarias:
3 Tubos de ensaio
31
Reagentes:
Reagente de Benedict
Soluo de Glicose 1%
Soluo de Sacarose 1%
Equipamentos:
Banho-Maria
Acessrios:
Pra de borracha
Pina
Papel Toalha
d) Procedimento
Identificar os tubos de ensaio como Glicose (Tubo 1), Sacarose (Tubo 2) e gua
(Tubo 3). Pipetar, com auxlio da pipeta de 5mL, para os trs tubos de ensaio 5mL do
reativo de Benedict. Acrescentar ao primeiro tubo 5mL de glicose, ao segundo 5mL de
sacarose e ao terceiro 5mL de gua destilada, que vai servir como um controle
negativo, com pipetas de 5mL. Agitar at completa homogeneizao. Deixar em banhomaria fervente por cinco minutos. Observar a reao.
Tubo 1 (Glicose): A presena de um precipitado vermelho tijolo ou soluo amareloesverdeada indica a reduo do cobre, possibilitando um resultado positivo.
Tubo 2 (Sacarose): No h mudana do reativo, a cor permanece azul, indicando
resultado negativo.
Tubo 3 (gua): No h mudana do reativo, a cor permanece azul, indicando resultado
negativo.
32
Glicose
Sacarose
gua destilada
Tubo1:______________________________________________
Tubo 2: _____________________________________________
Tubo 3: _____________________________________________
5. Reao do Lugol (Identificao de Polissacardeos)
O iodo metlico presente no lugol forma complexos com a cadeia de alfaamilose do amido que um polissacardeo formado um composto de cor roxo a
azulado.
b) Objetivo: Identificar a presena do amido pela formao de complexos com

iodo presente no reativo de lugol.
c) Material:
Vidrarias:
2 Tubos de ensaio
Reagentes:
Lugol
Soluo de amido 1%
Acessrios:
33

Pra de borracha
Papel Toalha
d) Procedimento:
Em um tubo de ensaio identificado colocar 1 mL de soluo de amido e em outro

1 mL de gua destilada. Adicionar 5 gotas de lugol e observar os resultados
Tubo 1 (Amido): Mudana de cor da soluo transparente ou leitosa para uma cor
azul intensa, resultado positivo.
Tubo 2 (gua destilada): No h mudana de cor da soluo, reao negativa.
Amido
gua destilada
Tubo1: ______________________________________________
Tubo 2: _____________________________________________
PESQUISA
1. Qual o princpio da reao de Molish e o que acontece quando a mesma aplicada
a um monossacardeo?
34
2. Na reao de Benedict carbonos anomricos so susceptveis de oxidao por

vrios agentes oxidantes contendo ons cpricos isso devido a presena de quais
grupos livres?
3. O princpio que utilizado na reao de Benedict foi por muito tempo um mtodo
que permitia analisar aucares a nveis sanguneos contribuindo para determinao
do diabetes melitos. Explique o princpio que utilizado na reao de Benedict que
permite a analise dos aucares?
4. Qual reao que permite diferenciar aldoses e cetoses ?
5. Em que consiste a reao de lugol?

4. CARACTERIZAO DE LIPDIOS
Os Lipdeos so substncias orgnicas hidrofbicas que podem ser extrados de

clulas e tecidos por solventes no polares como clorofrmio e ter. Fazem parte
as gorduras, leos, ceras, esterides e outros. Em contato com a gua, alguns
lipdeos podem vir a formar micelas, devido ao fato de possurem carter
anfiptico, ou seja, um grupo carboxila em uma de suas extremidades, o que
confere certo grau de hidrofilia molcula de lipdeo, e um grupo apolar na outra.
1. MANCHA CARACTERSTICA EM PAPEL DE FILTRO
a) Fundamentao terica
Os lipdios so substncias capazes de em contato com as fibras do papel formar
uma mancha que no se desfaz, deixando um aspecto transparente.
b) Objetivo: Observar a formao de uma mancha no papel de filtro caracterstico

dos lipdios.
c) Material
Vidrarias:
35
Reagentes:
leo vegetal
Acessrios:
Papel de filtro
gua destilada
d) Procedimento
Pipetar para o centro do primeiro papel de filtro 0,5 ml de gua, e para o centro
do outro 0,5 ml de leo. Espere secar 20 mim e observe.
e) Resultado Esperado
Formao de uma mancha translcida caracterstica da presena de lipdeos
permanece no papel de filtro. O aluno pode ler o roteiro da aula pratica atravs do
papel de filtro
f) Resultado Obtido
__________________________________________________________________
_________________________________________________________________
2. SOLUBILIDADE DOS LIPDIOS
a) Fundamentao Terica
Devido a natureza apolar, os lipdios apresentam baixa solubilidade em gua e
boa solubilidade em solventes orgnicos.
b) Objetivo : verificar a solubilidade dos lipdeos nos mais variados tipos de
solventes.
c) Materiais
Vidrarias:
5 Tubos de ensaio
36
Reagentes:
cido Clordrico 0,1N
Hidrxido de Sdio 0,1N
Etanol
ter etlico
Acessrios:
Pra de borracha
Papel Toalha
d) Procedimento: Colocar em tubos de ensaio os respectivos reagentes:

Tubo 1: 3ml de gua destilada
Tubo 2: 3ml de cido cloridrico 0,1N
Tubo 3: 3ml de hidroxido de sdio 0,1N
Tubo 4: 3ml de etanol
Tubo 5: 3ml de eter etlico
Adicionar em cada tubo 1ml de leo de soja, e observar.
Colocar 2ml de ter etlico em dois tubos de ensaio. Adicionas a cada tubo duas
gotas de NaOH 0,1N, e uma gota de fenolftaleina. Observar.
No primeiro tubo adicionar leo ranoso gota a gota at descorar. Contar o
nmero de gotas adicionadas.
No segundo tubo adicionar o mesmo nmero de gotas da experincia anterior e
observar os resultados.
e) Resultado Esperado: o leo apresentar solubilidade no tudo 5, baixa no tubo 4
e insolvel nos 1, 2 e 3.
f) Resultado obtido
__________________________________________________________________
_________________________________________________________________
37
3. REAO DE SAPONIFICAO
Os lipdios podem ser caracterizados pelas suas caractersticas fsico-qumicas.
Em geral so insolveis na gua e solveis em solventes apolares. Os triglicerois,
na presena de bases, podem ser hidrolisados liberando glicerol e sais de cido
graxos (sabes), de acordo com a reao:.
Glicerol
Sais de cido Graxo
Triacilglicerol
Os sais de cidos graxos apresentam uma caracterstica anfiptica onde em
soluo aquosa diminuem a tenso superficial da gua formando espuma sob
agitao.
b) Objetivos: realizar a hidrlise alcalina dos triglicerdeos presentes no leo.
c) Materiais
Vidrarias:
3 Tubos de ensaio
Reagentes:
leo de soja ou de girassol
Soluo etanlica de hidrxido de potssio 5%
Soluo de Cloreto de clcio 10%
Equipamentos:
38
Banho-Maria
Acessrios:
Pra de borracha
Pina
Termmetro
Cronmetro
Papel Toalha
d) Procedimento
Pipetar para um tubo de ensaio rotulado 2 mL de leo e 5mL da soluo de
potassa alcolica. Aquecer no banho-maria fervente durante cinco minutos. A
reao de hidrlise alcalina estar completa quando o tubo de ensaio apresentar
uma fase. Pipetar para o tubo de ensaio rotulado (tubo 1) 1mL de gua e 2 mL da
soluo de sabo. Agitar vigorosamente e observar.
Pipetar para outro tubo de ensaio rotulado (tubo 2) 2 mL da soluo de
sabo. Adicionar 5 gotas da soluo de cloreto de clcio. Agitar bem e observar.
e) Resultado esperado
Tubo 1: Formao de espuma indica a presena de sais de cidos graxos
Tubo 2: formao de precipitado indica a presena de sabes de clcio que no
formam espuma
f) Resultado obtido
Tubo 1: _________________________________________
Tubo 2: _________________________________________
4. DETECO DE COLESTEROL (MTODO DE SALKOWISKI)

39
O colesterol apresenta em sua estrutura o anel ciclopentanoperidro
fenantreno, representado por quatro anis fundidos (A,B,C e D), apresenta uma
funo alcolica na posio do carbono 3 do anel A, uma insaturao entra os
carbonos 5 e 6 do anel B e uma cadeia alquila no carbono 17 do anel D. Embora
as propriedades de solubilidade sejam anlogas as dos lipdios, os esteroides
como o colesterol possuem estrutura e propriedades qumicas diferentes,
podendo ser diferenciado atravs de reaes de colorao especfica. A reao
de Salkowiski especfica para esteride contendo dupla ligao na molcula,
ocorrendo desidratao na insaturao formando um composto colorido.
b) Objetivo: Caracterizar a presena do colesterol pela reao de Salkowiski.
c) Materiais
Vidrarias:
1 Tubo de ensaio
Reagentes:
Soluo Clorofrmica de colesterol
cido Sulfrico concentrado
Acessrios:
Pra de borracha
Papel Toalha
d) Procedimento:
Em um tubo de ensaio identificado pipetar 1mL da soluo cloroformica de
colesterol e adicionar 1mL de cido sulfrico concentrado, cuidadosamente pela
parede.
40
Tubo 1: reao positiva com a formao de compostos de vermelho

amarronzada.
Colesterol
f) Resultado obtido
Tubo 1: _______________________________________________
PESQUISA
1. Quais as caractersticas qumicas e estruturais dos lipdios e como eles
se classificam?
2. Quais as funes biolgicas desempenhadas pelos lipdios na clula?
3. Explique a baixa solubilidade dos lipdios em solventes polares:
4. Descreva como ocorre o transito de lipidios pela corrente sangunea?
41
5. CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PROTENAS

Todas as protenas existentes nos seres vivos, desde os vrus at os seres
humanos, so constitudas por combinaes de apenas vinte aminocidos. Esses
blocos constituintes da vida se unem entre si, como contas de um colar, para formar
longas cadeias e molculas complexas que configuram a estrutura de todos os
organismos vivos. O aminocido um composto orgnico que apresenta, em sua
molcula, um grupo cido (-COOH) e um grupo amino (-NH2), alm de um radical -R,
que vai ser responsvel pela diferenciao entre os diversos tipos de aminocidos
existentes.
As protenas podem ser caracterizadas e diferenciadas por propriedades
especficas como a carga eltrica, massa molar, solubilidade e afinidade por certos
compostos de carter sinttico ou natural. Alm disso podem tambm ser
caracterizadas por reaes de precipitao e/ou colorao.
Todas as reaes desenvolvidas baseiam-se na presena de ligaes peptdicas
e tambm na presena de diferentes aminocidos, evidenciadas pela afinidade
especfica que essas molculas possuem a certos compostos.
1. REAO DE BIURETO
Est reao especfica para substncias que possuem pelo menos dois grupos
CO-NH unidos por carbono ou nitrognio como ocorre no biureto, que empresta o seu
nome para a reao. Biureto o nome dado estrutura originada a partir da
42
decomposio da uria, quando esta submetida a uma temperatura de,

aproximadamente, 180oC:
As protenas e seus produtos de hidrlise que contm duas ou mais ligaes

peptdicas do resultado positivo neste teste. A reao tambm positiva para as
substncias que contm 2 grupos carbamnicos (-CO-NH2) ligados diretamente ou
atravs de um nico tomo de carbono ou nitrognio. Esta uma reao geral para
protenas. Esse fenmeno deve-se formao de um complexo entre o on Cu2+,
presente no reativo, e os tomos de nitrognio presentes na molcula:
Figura 2: Representao da reao do on cobre com os grupos polarizados presente

nos resduos de aminocidos
b) Objetivo: Identificar a presena de peptdios na amostra atravs do reativo de

biureto.
c) Materiais
Vidrarias:
43
2 Tubos de ensaio
Reagentes:
Reativo de Biureto
Soluo de ovoalbumina 10%
Acessrios:
Pra de borracha
Papel Toalha
d) Procedimento
Colocar 2 mL de reativo de biureto em dois tubos de ensaio. Ao primeiro juntar 1

mL de ovoalbumina e no segundo 1 mL de gua destilada. Agitar e observar a reao.
Tubo 1 (ovoalbumina): formao de colorao violcea indicando positivo para

protena
Tubo 2 (gua destilada): No h mudana de cor, indicando reao negativa
Ovoalbumina
gua destilada
Tubo1: ______________________________________________
44
Tubo 2: _____________________________________________
2. REAO XANTOPROTICA
Os aminocidos so identificados pela presena de seus radicais que podem ser
de cadeia aliftica ou cclica. Esta reao acontece devido presena nas protenas do
grupamento fenil da tirosina e triptofano, com qual o cido ntrico forma nitroderivados
que so coloridos no meio alcalino. uma reao especfica para identificao dos
aminocidos tirosina e triptofano.
b) Objetivo: evidenciar a presena de resduos de tirosina e triptofano na

soluo de ovoalbumina testada.
c) Materiais
Vidrarias:
1 Tubo de ensaio
Reagentes:
cido Ntrico concentrado
Hidrxido de sdio 2N
Equipamentos:
Banho-Maria
45
Acessrios:
Pra de borracha
Pina
Termmetro
Papel Toalha
d) Procedimento
Pipetar para um tubo de ensaio 1 mL de ovoalbumina, adicionar 10 gotas de
cido ntrico e aquecer at ferver. Acrescentar 4 mL da soluo de hidrxido de sdio.
Observar a reao.
Reao positiva quando h a formao de uma soluo amarelada.
Aquecimento
NaOH
Ovoalbumina
f) Resultado obtido
Tubo1: ______________________________________________
Tubo 2: _____________________________________________
3. REAO DE MILLON
46
Quando se aquece um composto que contm tirosina com o reativo de Millon,

observa-se a formao de um produto colorido avermelhado. Explicado pela formao
de um fenolato de mercrio por reao ao grupo hidroxifenil da tirosina com o mercrio
do reativo.
b) Objetivo: identificar a presena de tirosina, atravs do reativo de Millon, na
soluo amostra.
c) Materiais
Vidrarias:
1 Tubo de ensaio
Reagentes:
Reativo de Millon
Equipamentos:
Banho-Maria
Acessrios:
Pra de borracha
Pina
Termmetro
Cronmetro
Papel Toalha
d) Procedimentos
Pipetar para um tubo de ensaio 1 mL de ovoalbumina e acrescentar 5 gotas do
reativo de Millon. Aquecer em Banho-Maria por 10 minutos e observar a reao.
47
Tubo 1 (Ovoalbumina): a soluo adquire colorao vermelha roxa, indicando

positividade da reao.
Aquecimento
Ovoalbumina
f) Resultado obtido
Tubo1: ______________________________________________
Tubo 2: _____________________________________________
PESQUISA
1) Em que se baseia a reao do biureto?
2) Em que se fundamenta a reao xantoprotica e que grupos de aminocidos
so responsveis por esta reao?
3) Que aminocido pode ser identificado pela reao de Millon e de que forma isto
acontece?
4) O que proteinria?
5) Qual significado e importncia da deteco da protena de Bence-Jones em
urina de indivduos?
48
6. CARACTERIZAO DOS CIDOS NUCLICOS
Os
cidos
nuclicos
so
macromolculas
polimricas
constitudas
de
subunidades nucleotdicas unidas por ligaes fosfodister, responsveis pelo

armazenamento e expresso da informao gentica. Existem dois tipos de cidos
nuclicos: cido desoxirribonuclico (DNA) e cdo ribonuclico (RNA).
Cada nucleotdeo formado pela unio de uma base nitrogenada, um acar e

um fosfato. As bases nitrogenadas podem ser de dois tipos: purinas (adenina ou
guanina) e pirimidinas (citosina, timina ou uracila). O acar pode ser a desoxirribose,
que caracteriza a molcula de DNA, ou a ribose, encontrada nas molculas de RNA
(Fig.1).
Figura 3: Desenho esquemtico da estrutura dos nucleotdios
49
No genoma humano so encontrados 46 cromossomos, cada um formado por

uma molcula de DNA. O DNA uma longa molcula helicoidal constituda de dois
filamentos de nucleotdeos enrolados de forma helicoidal. Os dois filamentos so
unidos por pontes de hidrignio que se estabelecem entre as bases nitrogenadas,
obedecendo ao seguinte pareamento: uma adenina se liga a uma timina por duas
pontes de hidrognio (A=T); uma citosina se une a uma guanina por trs pontes de
hidrognio (CG). Note que na molcula de DNA no encontrada a base uracila (U),
exclusivas das molculas de RNA.
Se compararmos a molcula de DNA a uma escada veremos que o corrimo

ser constitudo pelas molculas de desoxirribose e fosfato, enquanto as bases
nitrogenadas correspondem aos degraus.
A separao das duas fitas de DNA pode ser obtida ao serem rompidas as
pontes de hidrognio entre as bases, o que se faz submetendo-se o DNA a
temperaturas elevadas, por exposio a pH extremos ou diminuindo-se a fora inica.
Na clula podemos encontrar dois tipos de DNA: o DNA nuclear e o DNA
mitocondrial. Enquanto o primeiro codifica cerca de 100.000 genes, o segundo
representa apenas 1 a 2% do DNA celular, codificando apenas 37 genes. Na
mitocndria so encontrados de 1 a 10 molculas de DNBA mitocondrial, cuja forma
circular e formada por dois filamentos: um filamento leve rico em citosina (L de light =
leve) e outro filamento pesado rico em guanina (H de heavy = pesado).
Diferente das molculas de DNA, as molculas de RNA so constitudas por um
nicos filamento. Elas so produzidas a partir da informao contida nas molculas de
DNA e podem ser dos seguintes tipos:
RNA mensageiro (mRNA)

A sequncia de nucleotdeos nessa molcula corresponde sequncia de
aminocidos em uma cadeia polipeptdica. Antes disso, entretanto, a estrutura

imediatamente formada a partir de DNA sofre modificaes, como a remoo de alguns
seguimentos (os ntrons), para adquirir caractersticas particulares, nicas para cada
protena a ser sintetizada.
50
RNA ribossomal (rRNA)

Unidos a protenas, constituem os ribossomos, responsveis por ler a
infomao gentica levada pelos RNAs mensageiros at o citosol. Podem permanecer

livres no citosol ou ligados ao retculo endoplasmtico. So formados por duas
subunidades (uma maior, outra menor) que se unem no momento da sntese protica.
RNA transportador (tRNA)

So responsveis por transportar os aminocidos at o local onde se dar a sua
incorporao na cadeia polipeptdica em crescimento. Embora a molcula seja

constituda de uma fita nica, pode se dobrar sobre si mesma, assumindo um aspecto
de trevo ou semelhante a um crucifixo.
Pequenas molculas de RNA

Servem como iniciadores para a replicao de DNA, auxiliam na remoo dos
ntrons durante a preparao do transcrito primrio do RNA mensageiro para traduo

e alguns intervm no movimentos dos ribossomos no citosol.
1. Extrao de DNA
A extrao de DNA hoje uma tcnia extensamente utilizada com diversos fins,
como na medicina forense, em investigaes criminais, na excluso de paternidade, na
busca de marcadores tumorais ou agentes infecciosos, entre outros.
A obteno do DNA pelos mtodos convencionais inclui lise celular e
procedimentos que tornam o DNA disponvel para a extrao. Para isso, vrios so os
passos laboratoriais necessrios e muitas vezes necessrio ajustar um protocolo
dependendo do material utilizado para extrao e da finalidade do procedimento.
A extrao de DNA realizada basicamente utilizando-se detergentes, sais e
lcool. Veja as funes de cada um desses componentes.
Detergentes
Rompem as membranas celulares pela desestruturao da bicamada lipdica
51
Sais
Fornecem ctions que diminuir neutralizam as cargas negativas do grupo fosfato
do DNA , diminuindo sua solubilidade e facilitando a aglomerao dessas molculas
lcool
Como o DNA tende a no ser solvel em lcool, sua desidratao com esse
componente impede que fique dissolvido no meio aquoso, facilitando seu agrupamento.
Quanto mais gelado o lcool, menos solvel ser o DNA.
Alm dessas solues, so comumente utilizados tampes, solues de

fenol/clorofrmio, antioxidantes, alm de procedimentos como banho-maria e
centrifugao que variam dependendo do protocolo utilizado para cada tipo de
extrao. Esto listados abaixo alguns reagentes utilizados em diversos protocolos e
suas funes.
1. EDTA (cido etileno diamono tetractico) e tampes Solues quelantes de
ctions divalentes ou que mantm o pH por volta de 8.0. Impedem a ao de
DNAses, enzimas que degradam o DNA usando esses ctions como cofatores ou
quando o pH fica em torno de 7.0;
2. Fenol/clorofrmio Permitem a separao do DNA das protenas, desnaturando
estas ltimas e tornando-as insolveis em fase aquosa, onde so encontradas as
molculas de DNA;
3. Agentes antioxidantes, como PVP (polivinilpirrolidona), BSA (albumina de soro
bovino) ou mercaptoetanol protegem o DNA da ao de compostos fenlicos, que
oxidam o DNA, impedindo a ao de enzimas de restrio
b) Objetivo: Verificar a existncia de molculas de DNA em amostra de vegetais

atravs da visualizao a olho nu.
c) Materiais
Vidrarias
Vidro de relgio
2 bqueres
52
1 proveta de 100 mL
2 Bastes de vidro
Funil de vidro
Amostra e Reagentes
1 banana
gua destilada
NaCl (sal de cozinha)
Detergente para loua
lcool etlico a 95% gelado (-10C)
Acessrios
Banho-maria (60C)
Balana analtica
Papel de filtro
Caixa de isopor com gelo
d) Procedimento
1. Corte e amasse a banana utilizando o basto de vidro

2. Em um bquer contendo 100 mL de gua, adicione 60 mL de detergente e 5 g de
NaCl
3. Mexa at a total dissoluo
4. Adicione a banana amassada a essa soluo recm preparada
5. Deixe em banho-maria por 15 minutos
6. Resfrie a soluo rapidamente, colocando o bquer no gelo durante 5 minutos
7. Filtre
8. Adicione ao filtrado 100 mL de lcool gelado, deixando-o escorrer vagarosamente
pela borda.
9. Observe
10. Com o basto de vidro limpo, faa movimentos circulares misturando as fases.
53
11. Observe o resultado final.
Precipitao das molculas de DNA com formao de nuvem na fase alcolica.
PESQUISA
1. Por que o material precisa ser macerado para isolar o DNA?
2. Qual o papel do detergente presente no processo de extrao do DNA?
3. De que composta a molcula de DNA?
4. Visto que o DNA no solvel em lcool, o que ocorre com suas molculas quando
colocadas neste meio?
7. DESNATURAO PROTICA
Protenas so polmeros de aminocidos unidos por ligaes covalentes. Os

tipos de aminocidos (polares ou apolares) e as seqncias em que eles se encontram
direcionam o enovelamento da cadeia polipeptdica, levando a uma conformao
tridimensional especfica, que indispensvel para sua funo biolgica. Devido s
diferenas nessas caractersticas estruturais, as protenas possuem diferentes
propriedades fsico-qumicas, tais como: tamanho, massa molecular, carga eltrica e
solubilidade. Essas propriedades, por sua vez, permitem que as protenas contidas em
uma mistura sejam separadas umas das outras.
Figura 4: Representao da ligao peptdica
A perda da estrutura tridimensional levando a perda da funo da protena

chamada de desnaturao. Muitas protenas podem ser desnaturadas pelo calor,
54
assim como por mudanas do pH, cidos e bases, ons de metais pesados, certos
solventes orgnicos, como o lcool ou as cetonas, por certos solutos como a uria ou,
por detergentes. Muitas destas substncias ligam-se s cadeias de protenas formando
precipitados.
O principio da precipitao das protinas consiste de que as mesmas so molculas

eletricamente carregadas. A carga eltrica das protenas est na dependncia dos
grupos ionizveis presentes nos radicais que fazem parte da molcula protica,
podendo se apresentar de trs maneiras, ou como ctions, ou como nions ou como
molcula neutra. A dissociao destas protenas em soluo depende da dissociao
dos radicais dos aminocidos presentes na molcula, e consequentemente do diversos
pKs. De uma maneira geral, considera-se que em pH neutro (ponto isoeltrico) a
solubilidade destas protenas mnima.
1. Precipitao por cidos fortes e metais pesados
a) Fundamentos terica
Os ons positivos de metais pesados (Hg2+, Pb2+, Cu2+, Fe2+) formam compostos
insolveis com as protenas. Os metais positivos reagem com as cargas negativas de
protenas, principalmente se o pH estiver acima do ponto isoeltrico da protena (ponto
neutro), formando precipitados.
Quando a protena est com pH abaixo do ponto isoeltrico, as bases
provenientes de cidos fortes so exemplos de ons negativos que combinam-se com
partes positivas de protenas, formando complexos insolveis, que precipitam na
soluo. Como exemplos dessas bases podemos citar os alcalides, uma classe de
compostos naturais, e as bases derivadas do cido tricloroactico (TCA). Esses
reagentes tambm tm ao desnaturante, ou seja, provocam a perda da conformao
tridimensional da protena de forma irreversvel. Conseqentemente, a protena
separada por esse mtodo perde a sua funo. Esse mtodo bastante utilizado para
remover protenas de amostras de soro, plasma e leite, quando se deseja analisar a
presena de minerais, tais como clcio e magnsio, ou a contaminao por metais
pesados, como chumbo e nquel.
b) Objetivos: Provocar a desnaturao de protenas em presena de cidos

fortes
55
c) Materiais
Vidrarias
1 Tubo de ensaio
Reagentes:
Soluo de cido tricloroactico 20%
Acessrios:
Pra de borracha
Papel Toalha
d) Procedimento
Pipetar para um tubo de ensaio 2 mL da soluo de ovoalbumina. Acrescentar 1

mL da soluo de cido tricloroactico.
Tubo1: resultado positivo com a formao de uma soluo leitosa com
precipitados brancos
Ovoalbumina
56
f) Resultado Obtido
___________________________________________________________
___________________________________________________________
2. Desnaturao da protena atravs de cidos
Os nios de reagentes alcalides (tricloroactico, pcrico, etc.) so capazes de

se combinar com protenas que possuam resduos de aminociods na forma de
ctions (carregados positivamente) formando complexos insolveis.
b) Objetivo: Provocar a desnaturao de protenas em presena de metais
pesados.
c) Materiais
Vidrarias:
1 Tubo de ensaio
Reagentes:
Soluo de Acetato de chumbo a 10%
Acessrios:
Pra de borracha
Papel Toalha
d) Procedimentos
57
Pipetar para um tubo de ensaio 2 mL da soluo de ovoalbumina. Acrescentar 5

gotas de soluo de acetato de chumbo. Observar a reao.
e) Resultados esperados
Tubo1: resultado positivo com a formao de uma soluo leitosa com
f) Resultado Obtido
___________________________________________________________
___________________________________________________________
3. Precipitao fracionada por solues salinas concentradas
Os sais neutros tm efeitos pronunciados na solubilidade das protenas

globulares, podendo tanto aumentar quanto diminuir a solubilidade da protena na
soluo. A capacidade desses sais de influenciar a solubilidade das protenas uma
funo de sua fora inica, que depende tanto de sua concentrao como do nmero
de cargas eltricas dos ctions e nions que formam o sal. Entretanto, o efeito do
aumento ou da reduo da fora inica na solubilidade pode ser diferente para cada
tipo de protena, o que permite que elas sejam separadas de uma mistura apenas
variando-se a concentrao de sal na soluo. medida que a concentrao do sal
aumentada, a solubilidade da protena se reduz gradativamente. Em foras inicas
suficientemente elevadas, uma protena pode ser quase completamente precipitada de
sua soluo, um efeito denominado precipitao por salificao ou salting out.
Um dos fatores que a concentrao elevada de sais pode remover a gua de
hidratao das molculas de protena, reduzindo, dessa maneira, sua solubilidade;
alm disso, outros fatores podem estar envolvidos como a competio entre os ons
salinos adicionados e o soluto (protena), diminuindo a capacidade de solvatao do
solvente aquoso.
58
Os precipitados proticos resultantes da precipitao por salificao mantm sua

conformao nativa e podem ser dissolvidos novamente, em geral sem haver
desnaturao. Conseqentemente, a funo da protena pode ser recuperada aps o
trmino do processo e remoo do sal.
b) Objetivos:Correlacionar a concentrao de sais neutros com a

solubilidades das protinas
c) Materiais
Vidrarias:
1 Tubo de ensaio
Reagentes:
Soluo de concentrada de sulfato de amnio (NH4)2SO4
Acessrios:
Pra de borracha
Papel Toalha
d) Procedimento
Pipetar para um tubo de ensaio (A) 2 mL da soluo de ovoalbumina. Adicionar,
pelas paredes, 2mL da soluo concentrada de (NH4)2 SO4
Pipetar para um tubo de ensaio (B) 2 mL da soluo de ovoalbumina. Adicionar,
pelas paredes, 2mL da soluo concentrada de (NH4)2 SO4
e 2mL de gua
destilada
TuboA: resultado positivo com a formao de uma soluo leitosa com
Tubo B: Sem alterao
59
f) Resultado Obtido
___________________________________________________________
___________________________________________________________
PESQUISA
1. De quais formas se pode promover a desnaturao de protenas?
2. O que desnaturao protica?

.
3. No que consiste a precipitao por salificao?
8. ENZIMOLOGIA
As enzimans possuem, em geral, estrutura protica, sendo que foram
descritas algumas molculas de RNA com atividade cataltica
As enzimas, como todas as protenas, so sintetizadas pelas clulas e
constituem catalizadores biolgicos, muito mais eficientes do que os
catalizadores inorgnicos.
Os catalisadores so substncias, que aceleram a velocidade de uma
reao qumica, diminuindo a energia de ativao, sem serem consumidos no
processo. Embora toda a estrutura da molcula seja necessria para o papel
cataltico, a ligao com o substrato d-se apenas numa poro bem definida da
enzima o stio ou centro ativo, formado por alguns resduos de aminocidos
presentes na cadeia polipeptdica, que se aproximaram devido aos dobramentos
inerentes da estrutura terciria. Portanto, a estrutura e a forma do centro ativo
so uma decorrncia da estrutura tridimensional da enzima e podem ser
afetadas
por
quaisquer
agentes
capazes
de
provocar
mudanas
conformacionais na estrutura protica.

As enzimas no alteram a constante de equilbrio nem a variao de
energia livre das reaes, sendo regeneradas, sob a forma original, ao final da
catlise. As molculas reagentes so denominadas substratos (S) e produtos (P)
60
so formados ao final. As enzimas so, geralmente, bastante especficas com

relao aos substratos, formando um complexo com estes durante a catlise:
E
S ES E
Algumas teorias procuram explicar esta especificidade: 1- teoria de Fischer

(chave-fechadura) , onde enzima e substrato seriam complementares; 2- teoria
de Koshland do encaixe induzido, ou seja, o substrato durante a catlise se
encaixa na enzima; 3- teoria que prope o perfeito encaixe no estado de
transio, estado onde a barreira energtica (energia de ativao) foi vencida.
Diversos so os fatores que influenciam a velocidade de uma reao enzimtica.
Por terem estrutura protica, alteraes no pH, na temperatura, compostos
orgnicos como a uria, na fora inica do meio reacional podem modific-las (s
vezes, at a estrutura dos substratos alterada), modificando, assim, a
velocidade das reaes. Como esperado, a concentrao de substrato e de
enzima no meio reacional so determinantes para a velocidade reacional.
Neste
captulo
apresentamos
como
objetivo
geral
evidenciar
comportamento enzimtico como catalisador biolgico, tanto nas condies ideais,

como sob as mais variadas mudanas de temperatura, pH, substratos
(especificidade enzimtica), tempo de reao e concentraes do substrato.
1)
Atividade cataltica da Amilase salivar

O amido um polissacardeo formado da unio de vrias molculas de glicose
por meio das ligaes glicosdicas. Amido formado por molculas de alfa-Dglicose.
O amido uma mistura de dois polissacardeos: o amido solvel, ou Amilose,
possui apenas cadeias lineares de glicose unidas em ponte alfa-osdicas 1:4.
Figura 5: Representao das ligaes glicosdicas presentes no amido

61
Cadeias de alfa-D-glicose costumam enrolar-se em espiral, formando

essa estrutura helicoidal na qual as hidroxilas esto voltadas para o exterior.
Figura 6: Estrutura helicoidal caracteristica da amilose
O lugol cora o amido porque o iodo fica preso no interior dessas hlices.
Amilopectina corresponde ao amido ramificado, o segundo componente
dos gros de amido. Ramificaes surgem sempre que so montadas pontes
osdicas 1:6.
Figura 7: Representao das ligaes glicosdicas comuns nas

ramificaes da amilopectina
Nos carboidratos complexos ramificados (amilopectina), os pontos de

ramificao (pontes 1:6) do origem a cadeias laterais cujas extremidades so
no redutoras. Durante o processo de digesto, a alfa-amilase quebra as pontes
osdicas 1:4, mas no as 1:6, resultando numa estrutura bastante ramificada
chamada
dextrina-limite.
Somente
amilo-1:6
glicosidase
(enzima
62
desramificadora) capaz de hidrolisar essas pontes 1:6, permitindo a completa

digesto da amilopectina.
Figura 8: Aspecto estrutural do amido

Quimicamente, a hidrlise tambm pode ser desencadeada pela ao de cidos
fortes.
b) Objetivos: realizar a hidrolise qumica e enzimtica do amido.
c) Material
Soluo de amido a 1%
Soluo de lugol
Soluo de HCl 1:2
Soluo salina a 0,95%
Soluo de saliva: secretar 1ml d saliva em um tubo de ensaio adicionar 9ml de
saliva e misturar
d) Procedimento da Hidrolise Qumica

- Rotular um erlenmeyer para a anlise cida (amido+HCl)
- Adicionar com auxlio de uma proveta 30ml da soluo de amido a 1%
- Acrescentar 3ml de HCl 1:2
63
- Rotular trs tubos de ensaio em AA1, AA2 e AA3, cada um deles contendo 5ml
de gua destilada.
- No tubo de ensaio rotulado em AA1, em tempo 0pipetar uma alquota de 5ml do
erlenmeyer e deixar em banho de gelo.
- No tubo de ensaio rotulado em AA2 pipetar uma alquota de 5ml do erlenmeyer,
levar para o banho de gua fervente em tempo 10 e depois levar para o banho de
gelo.
- No tubo de ensaio rotulado em AA3 pipetar uma alquota de 5ml do erlenmeyer,
levar para o banho de gua fervente em tempo 20 e depois levar para o banho de
gelo.
- Retirar os tubos de banho de gelo
- Quando todos os tubos estiverem em temperatura ambiente adicionar 10 gotas
de sol. De lugol em cada tubo.
e) Procedimento da Hidrolise enzimtica

- Rotular um erlenmeyer para a anlise enzimtica (amido+sol. saliva)
- Adicionar com auxlio de uma proveta 30ml da soluo de amido a 1%
- Acrescentar 1ml de sol. de saliva a 1%
- Rotular trs tubos de ensaio em AE1, AE2 e AE3, cada um deles contendo 5ml
de gua destilada.
- No tubo de ensaio rotulado em AE1, em tempo 0pipetar uma alquota de 5ml do
erlenmeyer e deixar em banho de gelo.
- No tubo de ensaio rotulado em AE2 pipetar uma alquota de 5ml do erlenmeyer,
deixar em temperatura ambiente pelo tempo 10 e depois levar para o banho de
gelo.
- No tubo de ensaio rotulado em AE3 pipetar uma alquota de 5ml do erlenmeyer,
deixar em temperatura ambiente pelo tempo 20 e depois levar para o banho de
gelo.
64
- Retirar os tubos de banho de gelo

- Quando todos os tubos estiverem em temperatura ambiente adicionar 10 gotas
de sol. De lugol em cada tubo.
f) Resultado esperado: desaparecimento gradativo da cor azul do lugol,

indicando a quebra do amido.
g) Resultado Obtido
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
PESQUISA
1) Explique como a concentrao de substrato pode interferir na velocidade da
reao
2) Faa um grfico, que evidencie o efeito da temperatura na atividade
enzimtica
3) Discorra sobre a ao do pH na atividade enzimtica observada in vitro
4) Explique por que desnaturao implica em perda da atividade enzimtica.
2)
Caracterizao da Urease
A urase uma enzima responsvel pela catalise da uria em amnia e dixido

de carbono, de acordo com a reaoabaixo:
(NH2)2CO + H2O
CO2 + 2NH3
(NH4)2CO3
Esta esnzima encontrada em diversos microrganismos como bactrias, fungos

e tambm em seres superiores como algumas plantas. Como grande parte dos
catalisadores
biolgicos
estrutura
bioqumica
da
urase
protica,
apresentando caractersticas compatveis com esta classe de biomolculas.
65
b) Objetivos: demonstrar a natureza protica da enzima.
c) Materiais
Vidrarias
3 Tubos de ensaio
8 pipetas de vidro de 2 ou 5 mL
Reagentes
Soluo de urease
Reativo de Biureto
cido Ntrico Concentrado
Acessrios
Pra de borracha
Papel Toalha
gua destilada
d) Procedimentos
1) Reao do Biureto
Em um tubo de ensaio marcado A colocar 2 gotas de soluo de urease e juntar
2ml de gua destilada.Agitar e adicionar 2ml do reativo de biureto.
Em um tubo marcado de B colocar 2 ml de gua destilada e 2 ml do reativo de
biureto. Misturar e compara os tubos
2) Reao de Heller
66
Em outro tubo de ensaio colocar 4 gotas de soluo de urease e 2ml de gua

destilada. Agitar. Manter o tubo inclinado e juntar pela parede 1ml de cido ntrico
concentrado, sem agitar.
e) Resultado esperado: Positivo na reao de biureto no tubo A ocorrendo

mudana de cor para lils.
Urease
gua destilada
Positivo no teste de Heller com o surgimento de um anel branco na interface de

reao dos lquidos
Urease
f) Resultado Obtido
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
_____________________________________________________________
PESQUISA
1) Qual a reao catalisada pela urase?
2) Qual a fonte da urase usada nos experimentos?
67
3) Explique a ausncia de atividade da urase, quando previamente

fervida
4) Explique a inibio da enzima por sais de mercrio
3) Enzimas Oxiredutases: Polifenol Oxidase

As oxidoredutases so enzimas relacionadas com as reaes de xido-reduo
em sistemas biolgicos. As polifenis oxidases so enzimas responsveis pela
oxidao de compostos fenlicos. Frutas e vegetais que contem compostos
polifenlicos, quando cortados e expostos ao ar sofrem escurecimento, causando pela
ao da polifenol oxidase sobre os compostos fenlicos que so oxidados a
ortoquinonas. Essas ortoquinonas polimerizam com facilidade formando compostos
escuros, as melaninas. Essas reaes de escurecimento enzimtico podem ser mais
facilmente observadas em vegetais de cores claras como batatas, bananas e maas.
A reao enzimtica do tipo: AH2 + O2 A + H2O. As enzimas que catalisam
essas reaes contm cobre na estrutura.
Os compostos produzidos na reao absorvem luz na regio do espectro entre
320 a 450nm e portanto pode-se avaliar espectrofotometricamente a atividade da
polifenol oxidase.
b) Objetivo:Extrair e avaliar a atividade da polifenol oxidase da banana.
c) Procedimento
- Extrao da polifenol oxidase da banana
Pesar 23g de banana e homogeneizar em um liquidificador juntamente com
100mL de tampo citrato-fostato (cido ctrico 0,1M + K2HPO4 0,1M, pH 6,0).
Centrifugar a 3000 rpm por 20min. O sobrenadante um substrato aquoso que
contm a polifenol oxidase.
- Determinao da atividade da polifenol oxidase
68
Preparar 2 tubos de ensaio contendo em cada um deles de pirogalol 0,1M e 3mL

do tampo citrato-fosfato, pH 6,0. Um tubo ser o branco (B) e o outro tubo teste (T).
Tubos
Substrato pirogalol (mL)
Tampo Ac, Ctrico-Fostafo pH 6 (mL)
H2O (mL)
2,0
3,0
2,0
3,0
3,0
2,0
Obs: Zerar o espectrofotmetro com gua em 390 nm.

Fazer as seguintes adies, na ordem:
Tubo B (branco) 0,1 mL de gua
Tubo C (controle) 0,1 mL do extrato (no contm o substrato)
Tubo T (teste) 0,1mL do extrato. Disparar imediatamente o cronmetro e
proceder a leitura das absorbncias nos tempos indicados na tabela:
Tempo (minutos)
TESTE Absorbncias (390 nm)
0,5 (30 seg)

1
2
3
4
5
6
7
8
10
Terminada a leitura de todos os tempos indicados proceder a leitura dos tubos branco
(B) e controle (C).
Para cada um dos tempos fazer a seguinte subtrao:
Abs = Absorbncia do teste (Leitura do branco leitura do controle).
69
Representar graficamente a absorbncia em funo do tempo.

A atividade comumente expressa nos laboratrios de controle das indstrias como
aumento da absorbncia / min / g de material seco.
PESQUISA
1.
Qual o intervalo de tempo no qual a velocidade da reao cresce
linearmente? Justifique.
2.
Qual a atividade da enzima por mL da preparao enzimtica?
3.
Qual a importncia dessa reao enzimtica na indstria de frutas?
4.
Sugira
uma
forma
de
evitar
escurecimento
enzimtico
na
industrializao da banana.
9. ANALISE BIOQUMICA DA URINA
O exame simples de urina, exame sumrio de urina ou urina tipo I um dos

mtodos mais prticos para diagnstico e acompanhamento de pacientes com
alteraes do trato urinrio.
O exame deve ser feito com urina recm-colhida, no meio do jato urinrio, em
frasco limpo. A melhor amostra para exame a primeira urina da manh, por ser
mais concentrada e ter pH mais baixo, permitindo melhor conservao dos elementos
figurados e de cilindros, alm de facilitar a determinao semi-quantitativa da
proteinria (presena de protena na urina).
O exame tem incio pela avaliao da cor, turvao e cheiro da urina.
Presena de espuma em abundncia indica proteinria. Vrios medicamentos podem
alterar a cor da urina. Utilizam-se mtodos fsico-qumicos para anlise da densidade,
do pH, pesquisa de protenas, glicose, e cetonas. O sedimento urinrio examinado
ao microscpio. E o exame bacteriolgico da urina compreende a microscopia direta
e a cultura.
70
Neste livro, nos deteremos ao exame qualitativo de urina (EQU), que nos
fornece informaes de grande utilidade clnica, no apenas no mbito do
funcionamento do sistema urinrio, mas tambm de outros rgos, como o pncreas
endcrino e o fgado. A presena de glicosria e/ ou cetonria so bons indicativos
de Diabetes Mellitus, j a presena de bilirrubinria, urobilinogenria, cristais de
blirrubina, e/ ou cristais de urato de amnia so indicativos de doena heptica.
Neste exame so analisados aspectos fsico-qumicos da urina que, somados a
outros exames laboratoriais e aos achados clnicos, ajudam no diagnstico de vrios
quadros patolgicos.
Caracterizao de Glicose na Urina Mtodo de Benedict

A glicose um monossacardeo que apresenta o grupo aldedo livre. A presena
de glicose na urina pode ser evidenciada na reao de Benedict, onde a ao redutora
do carboidrato age sobre os sais de cobre em meio alcalino, produzindo um precipitado
amarelo ou vermelho tijolo de xido cuproso.
b) Objetivo:Determinar a presena de glicose em uma amostra de urina.

c) Materiais
Vidrarias:
1 pipeta de vidro de 5 mL
1 Tubo de ensaio
Reagentes: Reagente de Benedict
Amostra: Urina
Equipamentos:
Banho-Maria
Acessrios:
71
Pra de borracha
Pina
Termmetro
Cronmetro
Papel Toalha
d) Procedimento
Em um tubo de ensaio identificado, limpo e seco, pipetar 5 mL do Reativo de
Benedict e adicionar 10 gotas de urina lmpida agitar e ferver em banho-maria por 5
minutos.
e) Resultados esperados
Resultado positivo para glicose: lquido de cor vermelho tijolo
Resultado negativo para glicose: lquido de cor azul ou verde
Negativo
Positivo
f) Resultado obtido
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
g) Interpretao do resultado
A glicosria acompanhada de hiperglicemia indicativo de Diabetes melitus,
entretanto, sem hiperglicemia pode ser doena tubular renal ou sndrome de Fanconi
72
(defeito reabsortivo generalizado dos tbulos renais). Resultados falso-positivos podem

ocorrer em ingesto elevada de carboidrato pouco antes da coleta da urina.
Determinao de Albumina na Urina Mtodo de Heller

a) Fundamento da tcnica
A reao se baseia na coagulao da protena, presente na urina, pelo cido
ntrico, manifestada atravs de anel branco leitoso. A coagulao causada pela perda
da solubilidade da protena no estado desnaturado, provocado pelo cido.
b) Objetivo: Evidenciar a presena de proteinria pela desnaturao com cido ntrico.

c) Materiais
Vidrarias:
2 pipetas de vidro de 5 mL
1 Tubo de ensaio
Funil de vidro
Bquer de 25 mL
Reagentes: cido Ntrico
Amostra: Urina filtrada
Acessrios:
Pra de borracha
Suporte para funil
Papel de filtro
Papel Toalha
d) Procedimento
73
Em um tubo de ensaio limpo e seco pipetar 3 mL de urina filtrada e adicionar 2

mL de cido ntrico, lentamente no fundo do tubo, de modo que os dois lquidos no se
misturem.
Resultado positivo para protena: Formao de anel branco leitoso na superfcie
de contato dos dois lquidos.
Resultado negativo: Formao de anel transparente na superfcie de contato dos
dois lquidos.
Negativo
Positivo
f) Resultado obtido
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
O resultado de proteinria positiva indicativo de leso glomerular com perda da
protena de alto peso molecular que normalmente no filtrada pelo glomrulo intacto.
Determinao de Albumina na Urina Mtodo Sulfossaliclico

A reao consiste da desnaturao da protena pelo cido sulfossaliclico com
formao de metalprotena.
74
b) Objetivo: Evidenciar a presena de protena na urina pela desnaturao com cido

ntrico.
c) Materiais
Vidrarias:
1 Tubo de ensaio
Funil de vidro
Bquer de 25 mL
Reagentes: cido Sulfossaliclico 20%
Amostra: Urina flitrada
Acessrios:
Pra de borracha
Suporte para funil
Papel de filtro
Papel Toalha
d) Procedimento
Em um tubo de ensaio identificado, limpo e seco, colocar 5 mL de urina filtrada e
adicionar 5 gotas de soluo de cido sulfossaliclico e misturar.
Resultado positivo para protena: Turvao ou precipitao do lquido.
Resultado negativo: Lquido translcido.
75
Negativo
Positivo
f) Resultado obtido
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
O resultado de proteinria positiva indicativo de leso glomerular com perda da
protena de alto peso molecular que normalmente no filtrada pelo glomrulo intacto.
Determinao de Corpos Cetnicos na Urina

Os corpos cetnicos (acetona, acido diacetico e beta-hidroxibutirico) so
procedentes do metabolismo dos acidos graxos.Tem maior relevncia clinica no
diagnostico da cetoacidose diabetica, entretanto, cetonuria pode ser encontrada em
outras situacoes: dieta rica em gordura, cetoacidose alcoolica, jejum prolongado, febre,
apos execicios fisicos, gravidez, pos-operatorios. Com o auxlio reagente de Imbert,
apresentando na sua composio o nitroprussiato de sdio, este reage em meio
actico sobre a acetona formando composto colorido.
b) Objetivo: Evidenciar a presena de corpos cetnico em uma amostra de urina

c) Materiais
Vidrarias:
2 pipetas de vidro de 5 mL
1 Tubo de ensaio
76
Reagentes: Reagente de Imbert

Hidrxido de amnio
Acessrios:
Pra de borracha
Suporte para funil
Papel de filtro
Papel Toalha
d) Procedimento
Em um tubo de ensaio limpo, seco e identificado, colocar 5 mL de urina, 1mL do
reativo de Imbert. Agitar e inclinar o tubo deixando escorrer pela parede de tubo 2 mL
de hidrxido de amnio, cuidadosamente de modo a no se misturarem os lquidos.
Resultado positivo para cetonria: aparecimento de anel violcio a roxo na
superfcie de contato dos lquidos.
Resultado negativo para cetonria: formao de anel transparente na superfcie
de contato dos lquidos.
Negativo
Positivo
f) Resultado obtido
77
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
A cetonria caracterstica em pacientes diabticos e pode ocorrer em
indivduos normais quando submetidos a jejum prolongado.
Reaes falso-positivas podem ocorrer no uso de levodopa, metildopa e
captopril. O acido beta-hidroxibutirico no detectado pela reao do nitroprussiato de
sdio, podendo a cetonria pode ser negativa caso este seja o corpo cetnico
predominante.
Deteco de Fadiga Muscular por meio da Urina Test de Donnaggio

A fadiga muscular capaz de provocar desequilbrio bioqumico, facilmente
constatado pela reao de Donnaggio, a qual somente ocorre em meio cido, sendo
indispensvel verificar o pH da urina a ser examinada. Se a mesma apresentar pH
neutro ou alcalino, dever ser acidulada com algumas gotas de cido actico, em
quantidade suficiente para que ela se torne cida. Esta exigncia sumamente
importante, porque sem a sua observncia, observa-se resultados irregulares e
duvidosos.
b) Objetivo: Determinar fadiga muscular por intermdio de amostra de urina.

c) Materiais
Vidrarias:
Tubos de ensaios
Funis de vidro
Pipetas graduadas de 10 mL
Reagentes:
78
Soluo aquosa de tionina Merck a 0,1% (esta soluo deve ser preparada
a quente para que o corante se dissolva completamente)
Soluo aquosa de tionina a 0,01%
Soluo de molibdato de amnia a 4% (preparada a soluo acidula-se com
1 gota de cido clordrico para cada 25 mL de soluo)
cido actico
Acessrios:
Pra de borracha
Suporte para funil
Papel de filtro
Papel de Tournesol
Papel Toalha
d) Procedimento
Aps coleta e verificao de pH (a urina deve ter pH < 7), filtra-se a urina. Em
seguida ferve-se durante 1 minuto, espera-se esfriar e filtra-se novamente. Nestas
condies, a amostra pode ser submetida ao Test de Donnaggio, constitudo em 2
fases.
1 Fase:
A reao feita em uma srie de 6 tubos de ensaio, designados por A1, A2, A3,
A4, B1 e B2, nos quais os reativos sero colocados em diferentes propores, dentro
da ordem exposta no quadro abaixo e que deve ser atentamente observada. Deve se
ter o cuidado de agitar a cada nova mistura.
1 lugar
Tubo A1
2 mL mol. de am.
2 lugar
2 mL de urina
3 lugar
1 mL tion. 0,1%
79
Tubo A2
2 mL de urina
1 mL tion. 0,1%
2 mL mol. de am.
Tubo A3
2 mL de urina
1 mL mol. de am.
1 mL tion. 0,1%
Tubo A4
2 mL de urina
2 mL tion. 0,1%
1 mL mol. de am.
Tubo B1
1 mL mol. de am.
1 mL de urina
2 mL tion. 0,01%
Tubo B2
1 mL de urina
2 mL tion. 0,1%
1 mL mol. de am.
Aps repouso de 24h, procede-se a leitura desta 1 fase.

Os resultados obtidos nos diversos tubos so expressos por nmeros que
obedecem a uma graduao que vai de 0 (negativo) a 5 (fortemente positivo),
graduao esta correspondente ao maior ou menor deposito de tionina formado e
colorao mais ou menos intensa do lquido sobrenadante.
Designa-se por 0 (zero), quando a tionina precipita-se completamente no fundo
do tubo e a urina apresenta-se completamente lmpida e clara.
Designa-se por 5 (cinco), quando pelo contrrio, a coluna lquida fica
inteiramente corada, no havendo precipitao alguma de tionina.
Os graus so, pois, os seguintes:
1 Levssima positividade (urina ligeiramente corada e quase total precipitao
da tionina);
2 Leve positividade (urina um pouco mais corada e grande precipitao de
tionina);
3 Mediana positividade (acentuada colorao da urina e mdia precipitao de
tionina);
4 Grande positividade (forte colorao da urina e pouca preciptao de
tionina);
5 Forte positividade (intensa colorao da urina e nenhuma precipitao de
tionina).
A soma dos graus de cada tubo constitui o resultado da primeira fase da reao.
80
2 Fase:
Tomam-se os tubos que apresentaram reao positiva na 1 fase e verifica-se a
reao cida do lquido, reao esta que poderia ter sido modificada eventualmente
pela fermentao da urina. Caso no seja cida, procede-se nova acidulao pelo
cido actico e ferve-se durante 1 minuto. Aps 12 ou 14h de sedimentao, faz-se a
leitura do resultado parcial desta 2 fase, pelo mesmo mtodo adotado na 1 fase. O
resultado obtido, somado ao da 1 fase, dar a soma global, com que se constri o
diagrama, que representar o grau de fadiga do examinado.
e) Resultado obtido
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
f) Interpretao do resultado
A reao de Donnaggio sempre positiva aps esforo muscular. Com o
treinamento, porm, h diminuio e mesmo desaparecimento de positividade da
reao, o que torna este teste um timo meio para o controle do treinamento dos
desportistas.
PESQUISA
1) A presena de glicose na urina (glicosria) determinada por agentes redutores
no-especficos, como na reao de Benedict, ou com tiras com reagentes
especficos para a glicose. Os primeiros, alm de menos sensveis, produzem
reao falso-positivo em presena de vrios acares, cidos e alguns
medicamentos. Explique a reao de Benedict, identificando os agentes
responsveis pelo processo de oxidao-reduo.
81
2) Com o passar do tempo, alm da eventual alterao de pH devido

fermentao da urina, que outra alterao podemos esperar no tubo positivo
para a reao de Benedict?
3) A determinao do teor de glicose circulante (glicemia) o elemento bsico para
o diagnstico de diabetes, no sendo fundamental a pesquisa de glicosria, pois
resultados falsamente positivos ou negativos podem ser encontrados.
Exemplifique estas situaes.
4) Concentraes elevadas de glicose na urina esto associadas a algumas
condies no necessariamente patolgicas. Exemplifique situaes fisiolgicas
em que podemos encontrar glicosria.
5) Qual o papel do nitroprussiato de sdio, presente no reativo de Imbert, na
caracterizao de corpos cetnicos na urina?
6) Em que condio a cetonria pode estar presente mesmo que no seja
detectada pela anlise da urina?
7) Presena de cetonria em pacientes diabticos indica descompensao
metablica grave. Por outro lado, indivduos normais aps jejum prolongado
tambm podem apresentar cetonria. Explique os mecanismos envolvidos nas
duas situaes.
8) O que representa o anel branco leitoso formado no tubo positivo para a reao
de Heller?
9) Explique o mtodo sulfossaliclico para deteco de proteinria (protena na
urina).
10) Qual a importncia clnica da deteco precoce de microalbuminria (excreo
urinria de albumina entre 30 e 300mg/24h ou entre 20 e 200g/min, na
ausncia de infeco urinria ou doenas agudas) em pacientes diabticos e ou
hipertensos?
82
10. COLORIMETRIA E ESPECTROFOTOMETRIA

Na bioqumica, as anlises de biomolculas podem ser realizadas de forma
qualitativa, onde a molcula pesquisada est presente ou ausente em uma amostra,
ou de forma quantitativa, onde se pode determinar a quantidade exata da molcula
pesquisada em um determinado material biolgico.
Um dos principais instrumentos para as anlises quantitativas na bioqumica so os
mtodos de pticos como a colorimetria e a espectrofotometria. Estas anlises se
baseam na capacidade de algumas solues absorverem a luz.
Considerando que a luz definida como uma radiao electromagntica composta
de uma gama de comprimentos de ondas (nm), as anlises colorimtricas se baseam
na absoro da luz visvel pela substncia a ser dosada e na espectrofotometria o
princpio semelhante, entretanto, o espectro de luz absorvido apresenta
comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho. Assim, quanto maior a
concentrao da molcula pesquisada, maior a absoro de luz, sendo relaes
diretamente proporcionais.
UV
IV
Visve
Cor
Comprimento de onda
(nm)
Violeta
390-455
Azul
455-492
Verde
492-577
Amarela
577-597
Laranja
597-622
Vermelho
622-780
Tabela 1: Relao das cores com os respectivos comprimentos de onda

Um raio de luz monocromtica ao atrevessar uma soluo contendo uma
substncia, uma parte da luz ser absorvida (Absorbncia) e outra parte ser
transmitida atravessando a soluo (Transmitncia). A luz pode ser refetida pelo
83
Io = IA + I
recipiente que contm a soluo, entretanto, nas anlises bioqumicas este fenmeno
pode ser desconsiderado j que a natureza das cubetas (quartzo ou vidro) onde as
solues so depositadas para a leitura ou eliminadas por comparao de amostra.
Pode-se escrever portanto que:
Io a intensidade da luz incidente na amostra ser igual a luz absorvida (IA) e a luz
transmitida (IT) de acordo com o esquema abaixo:
IA
Io
Luz Monocromtica
l
Espessura da soluo
Figura 10: Representao dos fenmenos pticos
A Transmitncia a razo a intensidade da luz emergente (I) e a intensidade da luz

incidente (I0), isto :
T = I / Io
A absorbncia (A) definida como logartimo negativo da transmitncia e,

experimentalmente, um parametro mais adequado por apresentar uma relao linear
com a concentrao da substncia absorvente.
Esta relao determinada pela Lei de Lambert-Beer que obtida da relao de
duas leis disintas: a lei de Lambert que diz que cada camada sucessiva do meio
absorve uma frao igual da radiao, destacando a importncia da espessura da
cubeta usada; a lei de Beer determina a relao entre a absoro e a concentrao da
substncia em soluo, sendo razes diretamente proporcionais.
84
Os fotocolorimetros e espectrofotmetros so aparelhos que se baseam nestes

fenmenos fsico-quimicos para quantificar uma determinada amostra tendo um padro
de referncia.
Para a medida da absoro de luz visvel ou invisvel, as industrias oferecem vrios
modelos de aparelhos com o objetivo de viabilizar as anlises bioqumicas. Para o seu
funcionamento, todo fotocolorimetro ou espectrofotometro apresenatam uma fonte de
luz, que em geral uma lmpada de tungstnio para luz visivel e uma de lmpada de
deutrio para ultravioleta. O feixe de luz direcionado para um monocromador, onde
um comprimento de onda selecionado, permitindo ento a emisso de uma luz
monocromtica. A luz incide no compartimento onde a cubeta, contendo a amostra,
encaixado. A luz transmitida pela amostra alcana um fotomultiplicador que converte o
estimulo optico em eltrico que ento convertido em valores de absorbncia,
transmitancia ou at mesmo em concentrao, dependendo dos recursos do aparelho
em uso.
Figura 11: Esquema funcional do espectrofotmetro

As vantagens deste metodo so na simplicidade do seu fundamento, fcil
aplicao e emprego amplo, entretanto, apresenta algumas desvantagens como
incompatibilidade com alguns tipos de amostra (suspensses ou amostras
diferentes que absorvem no mesmo comprimento de onda).
1.
Determinao quantitativa de glicose

a) Fundamentao teorica
A glicose pode ser determinada pelo metodo da ortotoluidina a partir da
reao com uma amina aromtica que reage com a glicose em soluo
de cido actico a quente. A ortotoluidina se condensa com ao grupo
85
aldeido da glicose formando uam glicosilamina e uma base de Schiff

correspondente.
b) Objetivo: determinar a concentrao de glicose e montar uma curva dose
resposta.
c) Material
Vidraria
Pipetas
Tubos de enasio
Provetas
Bequer
Reagentes
Soluo Padro de glicose (10mg de glicose diluida em 100 mL de
gua destilada e contendo 0,2g de cido benzico)
Ortotuluidina a 5% (colocar 950 mL de cido actico glacial em um
bequer de 1000mL e colocar 1,5g de tiuria e misturar,
adicionar50mL de ortotoluidina; manter em frasco ambar e
temperatura ambiente)
Acessrios:
Estante de tubos de ensaio
Pra de borracha
Papel toalha
d) Procedimento
Monte os tubos de ensaio de acordo com a tabela abaixo:
Tubos
Glicose-padro
gua destilada
Sol. Ortotoluidina
1,0mL
10,0mL
T1
0,08mL
1,92mL
10,0mL
Absorbancia
86
T2
0,16mL
1,84mL
10,0mL
T3
0,24mL
1,76mL
10,0mL
T4
0,32mL
1,68mL
10,0mL
T5
0,40mL
1,60mL
10,0mL
Homogeneizar os tubos e levar para o banho-maria por 10minutos. Ler

em filtro de 630nm. Calcule a concentrao da glicose para cada alquota
e monte uma curva correlacionando a concentrao e a absorbncia.
e) Resultado obtido
___________________________________________________________
___________________________________________________________
2.
Determinao quantitativa de protenas

Substncias contendo ligaes peptidicas forma um complexo corado
com sais de cobre em soluo alcalina. Se tambm tiverem grupos
aromticos, estes reduzem o reagente formando complexos coloridos.
b) Objetivo: Determinar quantitativamente a concentao de protenas
c) Material
Vidraria
Pipetas
Tubos de enasio
Provetas
Bequer
Reagentes
Reativo de Biureto
87
Soluo padro de protena: pesar soroalbumina bovina (B.S.A.)

5mg/mL de NaOH a 1%
Acessrios:
Estante de tubos de ensaio
Pra de borracha
Papel toalha
d) Procedimento
Monte os tubos de ensaio de acordo com a tabela abaixo:
Tubos Glicose-
gua destilada
Sol. Ortotoluidina
Absorbancia
padro
B
1,0mL
10,0mL
T1
0,10mL
1,90mL
10,0mL
T2
0,20mL
1,80mL
10,0mL
T3
0,30mL
1,70mL
10,0mL
T4
0,40mL
1,60mL
10,0mL
T5
0,50mL
1,50mL
10,0mL
Homogeneizar os tubos e por 10minutos em temperatura ambiente. Ler

em filtro de 540nm. Calcule a concentrao de protena para cada
alquota e monte uma curva correlacionando a concentrao e a
absorbncia.
e) Resultado obtido
___________________________________________________________
___________________________________________________________
3.
Determinao de Vitamina A
88
O retinol, retinal e cido retinico so formas ativas da vitamina A, uma

vitamina lipossolvel sintetizada pelas plantas como carotendes mais complexos. A
vitamna A participade vrias funces biolgicas principalmente na manuteno da
viso e da pele.
b) Objetivo: Determinar a concentrao de vitamina A em uma amostra
c) Materias
Vidrarias
Erlenmeyer 150mL
Tubos de ensaio
Proveta
Pipetas
Funil de separao
Bequer
Reagentes
Hidroxido de potssio 33%
Etanol amnico
cido cloridrico a 25%
ter de petrlio
Sulfato de sdio anidro
Hexano
cido Trifluoactico (1mL de cido trifluoroactico + 3mL de
cloroformio)
Equipamentos
Banho-Maria
Espectrofotometro
Balana
Acessrios
89

Pra de Borracha
Suporte para funil
Papel toalha
d) Procedimento
Pese 5-10g de amostra (manteiga) e coloque em um erlenmeyer e adicione
10mL de hidroxido de potssio de 33% e 40 mL de etanol amlico. Aquea por 30
minutos em refluxo. Resfrie rapidamente em banho de gelo e adicione 17mL de cido
clordrico a 25% mantendo sempre a amostra refriada. Adicione 50mL de ter de
petrlio. Feche o erlenmeyer e agite vigorosamentepor 3 minutos. Transfira para um
funil de separao, espere a separao das duas fases e reserve a fase organica. Filtre
em sulfato de sdio anidro e evapore em 35C. Dissolva o extrato em 1mL de
cloroformio. Adicione 4 mLde cido trifluoactico. Determina a absorbncia a 620nm
contra um branco contendo todos os reagentes exceto o extrato. Compare a com uma
curva padro.
e) Resultado obtido
___________________________________________________________
___________________________________________________________
90
REFERENCIAS CONSULTADAS
BRASIL. Ministrio da Sade. Normas e Manuais Tcnicos: Lavar as Mos
Informaes
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93

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BIOQUMICA PRTICA

Protocolos para anlise de biomolculas e exerccios complementares

Regras gerais de segurana em laboratrio ............................

Preparo de solues e reagentes ............................................

Caracterizao de Carboidratos ..............................................

Caracterizao de Lipdios ....................................................... 34

Caracterizao de Aminocidos e Protenas ...........................

Caracterizao de cidos Nuclicos ........................................ 48

Desnaturao protica .............................................................

Analise bioqumica da urina .....................................................

Colorimetria e espectofotometria .............................................

A Bioqumica a ciencia que estuda as biomolculas, isto , moleculas envolvindas

caracteristicas estruturais e funciais das principias biomoleculas e, desta forma, a facilitar o

1. REGRAS GERAIS DE SEGURANA EM LABORATRIO

1. Avental de mangas compridas, longos at os joelhos, com fios de algodo na

1. Lave as mos antes de iniciar seu trabalho.

Atitudes Individuais com Bicos de Gs

1. Feche completamente a vlvula de regulagem de altura de chama.

Os produtos qumicos mais agressivos ao homem e ao meio ambiente podem ainda

Atitudes Individuais com cidos

1. Adicione sempre o cido gua; nunca faa o inverso.

Atitudes Individuais com Solues

1. No transporte solues em recipientes de boca largas, se tiver que efetu-lo

4. No pipete, aspirando com a boca, lquidos custicos, venenosos ou corantes,

. Manuseio e cuidados com frasco de reagentes

Descarte de slidos e lquidos

1. Dever ser efetuado em recipientes apropriados separando-se o descarte de

Cuidados com aquecimento, includo: reao exotrmica, chama direta,

1. No aquea bruscamente qualquer substncia.

SAIBA COMO AJUDAR A SI MESMO E A OUTROS MEMBROS DO LABORATRIO

Em caso de acidentes deve-se, mantendo a calma, desligar todos os

equipamentos e materiais prximos, evacuar a rea e no permitir a entrada no

sangramento ou hemorragia, pressionar o ferimento at cessar.

Se houver queimaduras qumicas nos olhos, lav-los abundantemente com

2. PREPARO DE REAGENTES E SOLUES

O preparo das solues e reagentes consiste de uma etapa importante para um

Soluo em que a proporo de soluto numa determinada quantidade de

(g de KNO3/ 100 g de gua)

sistema de coordenadas produz uma curva, chamada de curva de solubilidade.

Figura 1: Curva de solubilidade do nitrato de potssio (kno3)

As solues podem ser classificadas segundo o grau de solubilidade:

- Soluo supersaturada: apresenta quantidade de soluto dissolvido superior ao

Densidade da soluo a relao entre a massa, em gramas, e o volume da

Ttulo a relao entre a massa do soluto e a massa da soluo, ambos na

Ttulo em volume a relao entre o volume de soluto e o volume de soluo,

Molaridade ou Concentrao em Quantidade de Matria a relao entre a

Frao Molar relao entre o nmero de mol do soluto ou o nmero de mol do

Molalidade a relao entre a quantidade de matria em nmero de mol

Normalidade a relao entre o nmero de equivalente-grama do soluto

N= Nmero de equivalente-grama de soluto

Procedimento: Mea em uma proveta 1mL de Frutose. Transferir para um bquer,

SOLUO ALCOLICA DE KOH 5%

SOLUO DE NaOH (HIDRXIDO DE SDIO) 2N

SOLUO DE NaOH (HIDRXIDO DE SDIO) 10%

SOLUO DE ACETATO DE CHUMBO A 1%

SOLUO DE CLORETO DE CLCIO A 5%

SOLUO DE CIDO CLORDRICO (HCl) 1:2

SOLUO DE CIDO ACTICO 1:2

SOLUO ALCOLICA DE PIRAMIDO A 5%

SOLUO DE CIDO SULFOSALICLICO A 20%

SOLUO DE CIDO TRICLOROACTICO A 20%

Condies de armazenamento: manter a temperatura ambiente em frasco mbar e

SOLUO DE OVOALBUMINA A 10%

SOLUO DE TUNGSTATO DE SDIO A 10%