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Voltametria e Polarografia
Voltametria e Polarografia
UNIDADE
VOLTAMETRIA/POLAROGRAFIA: CONCEITOS E TCNICAS
Mtodos Eletroanalticos
Os mtodos eletroanalticos so mtodos instrumentais de anlises que empregam as
propriedades eletroquimicas de uma soluo para determinas a concentrao de um analito.
Analito
Em qumica analtica, analito o componente (elemento, composto ou on) de interesse
analtico de uma amostra.
A informao analtica que se obtm sobre o analito na amostra pode ser qualitativa (se
o analito est presente ou numa determinada concentrao na amostra), quantitativa (a
proporo em que se encontra) e estrutural.
A voltametria uma tcnica eletroqumica onde as informaes qualitativas e
quantitativas de uma espcie qumica so obtidas a partir do registro de curvas correntepotencial, feitas durante a eletrlise dessa espcie em uma cela eletroqumica constituda de
pelo menos dois eletrodos, sendo um deles um microeletrodo (o eletrodo de trabalho) e o outro
um eletrodo de superfcie relativamente grande (usualmente um eletrodo de referncia). O
potencial aplicado entre os dois eletrodos em forma de varredura, isto , variando-o a uma
velocidade constante em funo do tempo. O potencial e a corrente resultante so registrados
simultaneamente. A curva corrente vs. potencial obtida chamada de voltamograma.
Na voltametria, o potencial aplicado a um eletrodo o parmetro de controle e variado
de forma sistemtica de modo a produzir uma reao redox sobre o eletrodo. A corrente, por
outro lado, resultante da transferncia de eltrons que ocorre durante a reduo ou a oxidao
de espcies eletroativas; sobre a superfcie do eletrodo.
Entre o final do ano 1950 e o incio de 1960, o desenvolvimento de tcnicas
espectroscpicas diminuiu consideravelmente a utilizao da polarografia em anlises, exceto
em aplicaes especiais, como a determinao de oxignio molecular em solues. A partir da
metade dos anos 60, com o desenvolvimento de amplificadores operacionais rpidos e estveis,
importantes modificaes na polarografia clssica foram desenvolvidas, de modo a aumentar
significantemente a sensibilidade e a seletividade do mtodo. Atualmente, instrumentos
relativamente baratos e com sensibilidade, em parte por bilho para muitas substncias
eletroativas so comercializados. Desta forma, um recente ressurgimento no interesse da
utilizao da polarografia tem sido comprovado.
Como a rea dos dois eletrodos diferente, o microeletrodo se polarizar, isto ,
assumir o potencial aplicado a ele. O eletrodo de referncia, por possuir uma rea grande, no
se polarizar, mantendo o seu potencial constante. O microeletrodo comumente feito de um
material inerte, como Au, Pt, Hg e C. Quando o microeletrodo constitudo de um eletrodo
gotejante de mercrio, a tcnica chamada de polarografia.
Os microeletrodos tm formatos e tamanhos diferentes, com frequncia so discos
pequenos de um condutor que prensado em um cilindro de material inerte, como Teflon, que
tenha em si, um fio para contato (Figura 1). O condutor pode ser um material inerte, como Pt,
Au. Em voltametria os sinais de excitao (Figura 1), de potencial varivel, so aplicados sobre
uma clula eletroqumica contendo um microeletrodo. Esse sinal extrai uma resposta
caracterstica de corrente na qual se baseia o mtodo.
FIGURA 1: Microeletrodos
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Os primeiros estudos voltamtricos foram feitos por Heyrovsky e Kuceras, em 1922,
usando um eletrodo gotejante de mercrio como eletrodo de trabalho e como eletrodo de
referncia, o ECS. Portanto, a primeira tcnica voltamtrica desenvolvida foi a polarografia. A
curva corrente vs voltagem obtida, chamada de polarograma. A Figura 2, mostra um
polarograma obtido para uma soluo de Cd(II) em HCl 1 mol/L.
FIGURA 2: Polarogramas de corrente contnua (DC) tpicos: (A) polarograma de 0,5x10 -3 mol/L
Cd+2 em HCl 1,0 mol/L. (B) Polarograma de HCl 1,0 mol/L.
Para melhor entendimento, o polarograma mostrado na Figura 2 pode ser dividido em
cinco partes:
1. Regio onde o potencial positivo (E > 0): surge uma corrente andica devido a oxidao do
mercrio do prprio eletrodo de trabalho:
Hg Hg2+ + 2eportanto, nessa regio a polarografia no pode ser usada.
2. Regio entre 0 V e -0,5 V (0 V < E < -0,5V): nessa parte do polarograma observa-se apenas
a chamada corrente residual, que decorrente de reduo/oxidao de impurezas presentes no
eletrlito de suporte (HCl 1mol L-1).
3. Parte do polarograma onde E = -0,6 V: Neste potencial ocorre um aumento brusco da
corrente em funo da reduo do cdmio junto superfcie do eletrodo gotejante de mercrio
Cd2+ + 2e- + Hg Cd(Hg)
4. Regio de -0,7 V < E < -1V: Nessa parte do polarograma a corrente atinge um valor limite e
por isso chamada de corrente limite e independente do potencial aplicado. Nesse intervalo de
potencial o Cd2+ reduzido to rapidamente quanto chega na superfcie do eletrodo, atravs de
um processo de transporte por difuso de seus ons do interior da soluo at superfcie do
eletrodo. Como a soluo mantida sem agitao, o transporte de massa da espcie eletroativa
(Cd2+) no envolver conveco. Como a soluo tambm possui um eletrlito de suporte (HCl 1
mol/L), o transporte de massa da espcie eletroativa no envolver migrao, o que produziria
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uma corrente de migrao devido movimentao de espcies carregadas sob efeito de um
campo eltrico.
Tendo HCl 1 mol/L como eletrlito de suporte, a corrente de migrao ser praticamente
devido ao HCl. Assim, este transporte do Cd 2+ do seio da soluo junto superfcie do eletrodo
ser governado apenas por um processo difusional. Nessa condio, a corrente resultante
chamada de corrente de difuso. Como pode ser visto na Figura 2, essa corrente obtida pela
diferena entre a corrente residual e a corrente limite, e representada por id.
A relao entre a corrente de difuso (que uma corrente do tipo faradaica, isto , uma
corrente produzida por uma reao eletrdica) e a concentrao da espcie eletroativa em
soluo dada pela equao de Ilkovic:
onde
id = corrente de difuso (A)
n = quantidade de matria (antigamente conhecido como nmero de moles) de
eltrons por mol de substncia
m = velocidade da vazo de mercrio atravs do capilar de vidro (mg/s)
t = tempo de gota (s)
C = concentrao em mmol L-1.
Alm da difuso, como comentado acima, mais dois processos de transferncia de massa
entre a soluo e a superfcie do eletrodo podem ocorrer. Um desses processos a migrao de
partculas carregadas em um campo eltrico. O outro a conveco, um processo mecnico, que
ocorre devido movimentao da soluo (usando-se um agitador magntico e uma barra
magntica, por exemplo). O processo de migrao em um campo eltrico minimizado pela
adio de um eletrlito inerte (eletrlito de suporte) soluo em uma concentrao pelo menos
100 vezes maior do que a substncia eletroativa (HCl 1 mol/L, neste caso). O processo de
conveco eliminado mantendo-se a soluo em repouso, sem agitao. Assim, apenas o
processo de difuso ser responsvel pelo transporte de massa, e a corrente medida, id, pode
ser efetivamente expressa como corrente de difuso.
5. Regio do polarograma onde E < -1,0 V: A corrente aumenta em funo do potencial devido
reduo de H3O+ (simplificadamente, H+) do eletrlito de suporte:
H+ + e- H2
Nessa regio a polarografia tambm no pode ser usada, pois a corrente devido ao
eletrlito de suporte (ons H+, neste exemplo) sobrepor-se- corrente de difuso produzida
pela espcie eletroativa de interesse (analito).
O potencial no polarograma correspondente meia altura da onda polarogrfica (no
ponto onde i = id/2), cujo valor est ao redor de -0,6 V conforme pode ser visto no exemplo da
Figura 1, chamado de potencial de meia-onda, representado por E1/2. O potencial de meia
onda caracterstico da substncia eletroativa e reflete a facilidade de reduo ou oxidao da
substncia em um dado eletrlito. O valor de E1/2, desse modo, serve para identificar a espcie
eletroativa, ou seja, para fazer a anlise qualitativa de espcies presentes em uma dada
amostra.
Do ponto de vista de anlise quantitativa a informao importante do polarograma o
fornecimento do valor da corrente de difuso, id. A corrente de difuso relacionada
concentrao da substncia eletroativa pela equao de Ikovic, conforme discutido acima no
tem 4, equao 1. Esta equao pode ser simplificada para:
onde k envolve os termos (607nD1/2m2/3t1/2) da eq. 1, uma vez que eles permanecem constantes
em um dado eletrlito de suporte, para um mesmo capilar, uma mesma temperatura, e uma
mesma presso de Hg sobre o capilar. A eq. 2 chamada de equao simplificada de Ilkovic
que, por ser mais conveniente do que a equao 1, preferencialmente usada para fins
analticos.
Quanto ao potencial de meia-onda, E1/2, trata-se de um parmetro oriundo da equao
de Nernst aplicada polarografia. Esta equao considera que a reao eletroqumica junto
superfcie do eletrodo gotejante de mercrio reversvel. De um modo geral, a reao
representada por:
Ox + ne- Red
A equao de Nernst para esta reao no sentido da reduo (onda polarogrfica
catdica), a 250 C, adquire a forma:
onde :
E = potencial devido relao de concentraes na interface eletrodo/soluo das
formas oxidada e reduzida da espcie eletroativa ([Ox]i/[Red]),
E0 = potencial padro do sistema de xido reduo constitudo pelas formas oxidada e
reduzida da espcie eletroativa,
[Ox]i = concentrao da forma oxidada da espcie eletroativa junto interface eletrodosoluo,
[Red]i = concentrao da forma reduzida da espcie eletroativa junto interface
eletrodo-soluo.
A partir desta considerao inicial, e das consideraes sobre a relao entre as
correntes e concentraes das formas oxidada e reduzida da espcie eletroativa, expressas pela
equao de Ilkovic (eq. 2) tem-se:
sendo:
i = corrente em qualquer ponto da onda polarogrfica,
[Ox] = concentrao da forma oxidada da espcie eletroativa no seio da soluo e
K = constante da equao de Ilkovic para a forma oxidada da espcie eletroativa.
No plat da onda polarogrfica, [Ox]i , a concentrao da forma oxidada da espcie
eletroativa na interface do eletrodo, torna-se zero, pois toda partcula da espcie eletroativa
que chegar junto superfcie do eletrodo (governada por difuso, como a
polarografia/voltametria) ser reduzida, e a corrente ser = corrente de difuso. A eq. (4) se
torna:
Se a forma reduzida da espcie eletroativa for solvel em gua e esta forma no estiver
presente originalmente junto com a forma oxidada, ela se difundir da superfcie do eletrodo
para o corpo da soluo, ou, no caso de metais, elpoder se difundir da superfcie do eletrodo
para o interior da gota de mercrio, formando amlgama. Assim, para qualquer valor de:
onde k a constante da equao de Ilkovic para a forma reduzida da espcie eletroativa. Aqui a
corrente i depender apenas da concentrao da forma reduzida junto superfcie do eletrodo,
uma vez que a concentrao da forma reduzida originalmente presente igual a zero.
Substituindo-se na equao (3), chega-se a
ou
onde
Quando a corrente i for igual metade da corrente de difuso ( i =i d/2), o potencial ser
igual ao potencial de meia onda, E1/2, ( Figura 1)e a equao (9) se reduz :
Desta equao pode-se ver que o potencial de meia onda, E1/2, constante e
caracterstico para uma dada substncia eletroativa que constitua um sistema de xido-reduo
reversvel e que seu valor independente da concentrao da forma oxidada, [Ox], no corpo da
soluo. Assim, combinando-se as equaes (9) e (11) , chega-se :
Esta equao chamada de equao da onda polarogrfica e representa o potencial como uma
funo da corrente em qualquer ponto da onda polarogrfica.
O potencial de meia onda caracterstico da substncia eletroativa, no dependendo nem
mesmo das caractersticas do eletrodo. Por isso ele til na anlise qualitativa de amostras
desconhecidas, podendo ser usado na identificao de substncias presentes nessas amostras.
AS CLULAS VOLTAMTRICAS
As clulas eletroqumicas utilizadas em voltametria/polarografia so, evidentemente , do
tipo eletroltica e podem ter dois ou trs eletrodos. Heyrovsky utilizou uma clula de dois
eletrodos e durante muito tempo usou-se apenas esse tipo de clula. Na clula de dois eletrodos
(Figura 2), conforme j foi exposto na introduo, tem-se um eletrodo de trabalho, de superfcie
pequena, ou seja, um microeletrodo. No caso da polarografia o eletrodo de trabalho um
microeletrodo gotejante de mercrio. O potencial aplicado no eletrodo de trabalho frente a um
eletrodo de referncia, usualmente um eletrodo de calomelano saturado, de rea superficial
grande, para que apenas o eletrodo de trabalho polarize. Essa clula apresenta alguns
inconvenientes, pois a corrente resultante da varredura de potencial passa atravs do eletrodo
de referncia. Isto obriga a usar-se um eletrodo de calomelano de reservatrio grande de KCl,
devido reao que ocorrer no mesmo.
Por exemplo: na determinao polarogrfica de cobre, haver reduo de Cu(II) no
eletrodo de mercrio (eletrodo de trabalho), e, conseqentemente oxidao de Hg na outra meia
clula (calomelano saturado). Assim, na meia clula do eletrodo de trabalho:
Cu+2 + 2 e- Cu
Na meia clula do calomelano:
Ou seja, haver consumo de Hg0 e Cl-, necessitando usar-se eletrodos de referncia grandes,
para que eles mantenham o potencial constante durante a aplicao de potencial.
Devido passagem de corrente atravs do eletrodo de referncia e reaes que ocorrem
no mesmo, isto afetar as medidas em concentraes da ordem de 10 -4 mol L-1, pois essa
corrente se aproximar do valor da corrente de difuso. Outra limitao a resistncia da clula.
Quando ela aumenta, como no caso de meio no aquoso, aumentar a corrente que passar
atravs dos eletrodos o que provocar distores nos polarogramas, tornando invivel a
utilizao da tcnica nessas condies.
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quando for aplicada uma diferena de potencial entre o eletrodo de trabalho e o eletrodo de
referncia, fazendo com que a resistncia do eletrodo de referncia aumente e a do eletrodo
auxiliar diminua (Figura 3b). Assim, a corrente passar entre o eletrodo de trabalho e o auxiliar,
evitando que ocorram distrbios (como eletrlise, por exemplo) no eletrodo de referncia. Com
este recurso o eletrodo de referncia realizar o seu papel sem interferncias, que o de manter
o seu potencial constante durante as medidas. Por isto pode-se usar alm do eletrodo de
trabalho e do auxiliar, um eletrodo de referncia de dimenses pequenas, o que facilita o uso de
recipientes polarogrficos/voltamtricos de tamanho reduzido.
De um modo geral, a clula de trs eletrodos apresenta as vantagens de:
1. ser mais adequada para solues diludas,
2. poder ser usada para solues de alta resistncia (solventes orgnicos, mistura gua mais
solvente orgnico),
3. poder ser usada com eletrlitos de suporte mais diludos.
CLULA ELETROQUMICA E INSTRUMENTAO
Os experimentos eletroqumicos usualmente so realizados em uma clula contendo trs
eletrodos imersos na soluo a ser analisada (vide Figura 3):
1) O eletrodo de trabalho, onde se processa a reao de interesse. Na polarografia
clssica, o eletrodo de trabalho utilizado o eletrodo gotejante de mercrio;
2) O eletrodo de referncia, que fornece um potencial estvel, com o qual o potencial
aplicado ao eletrodo de trabalho comparado. Os eletrodos de referncia mais utilizados em
polarografia so o eletrodo de calomelano saturado (ECS) e o eletrodo de prata/cloreto de prata
(Ag/AgCl);
3) O eletrodo auxiliar (ou contra eletrodo), que consiste de um material condutor e
quimicamente inerte, como por exemplo, platina (Pt).
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Nos polargrafos modernos o gotejamento do mercrio passa a ser controlado por
dispositivos eletromecnicos, devido aos recursos instrumentais incorporados nos aparelhos
modernos. Uma vlvula solenide abre e fecha o duto do mercrio, sincronizada a um dispositivo
(chamado de martelo) que golpeia o capilar, derrubando a gota. Isto permite ao usurio
controlar o tempo de durao e o tamanho da gota selecionando-os no painel do instrumento em
uso.
Escolhe-se um tamanho e um tempo pr-determinado para a durao da gota de
mercrio, a vlvula solenide abre e fecha rapidamente aps a gota atingir o tamanho escolhido,
o martelo acionado a seguir no tempo pr-determinado golpeando o capilar e derrubando a
gota. Logo uma nova gota formada, repetindo-se o ciclo sucessivamente at ao final da
varredura de potencial.
Todo o conjunto de operaes, envolvendo formao da gota, tempo de durao da
gota, varredura de potencial, medida da corrente e registro do polarograma/voltamograma
feito de maneira sincronizada e automtica, em razo dos recursos eletrnicos presentes nos
polargrafos. Esta meia-clula de mercrio a preferida para ser usada em sistemas de clulas
de trs eletrodos.
O MXIMO POLAROGRFICO
O mximo polarogrfico um fenmeno que ocorre durante o registro do polarograma
devido a turbulncias envolvendo a gota de mercrio e a camada de difuso adjacente a ela. No
incio do plat da onda polarogrfica a corrente de difuso fica maior do que deveria, voltando
aps mais alguns milivolts de varredura ao nvel normal, governada pelo processo de difuso.
Esse mximo interfere na anlise polarogrfica pela distoro da forma da onda, o que dificulta a
determinao de sua altura (corrente de difuso, id). Na maior parte das vezes ele tem uma
forma aguda, como mostrada na Figura 5, e chamado de mximo de primeira ordem.
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Geralmente esse mximo explicado em termos de uma no uniformidade do campo
eltrico devido geometria da gota de mercrio, ou seja, a densidade de corrente seria
desigualmente distribuda na gota. Ela seria maior na parte da gota que est presa ao capilar do
que no fundo da gota. Isto faria com que a camada deslizasse na superfcie da gota de mercrio
aumentando momentaneamente a quantidade de partculas que reagiriam no eletrodo e
conseqentemente a corrente medida nessa parte do polarograma. Aps essa quantidade de
partculas extras reagirem, ela se reduziria quantidade governada pela difuso e a corrente se
normalizaria.
A maneira de evitar a formao de mximos na prtica utilizar os chamados
supressores de mximo, que so substncias tenso-ativas. As molculas dessas substncias so
adsorvidas junto superfcie da gota de mercrio formando um filme protetor, o que impediria o
deslizamento da camada de difuso. O supressor mais comum a gelatina, que utilizada a
uma concentrao de 10-3 a 10-4 % (m/V). Outros supressores comuns so o vermelho de
metila e o triton X-100, sempre usados em baixas concentraes para no isolarem a superfcie
do eletrodo devido espessura do filme de adsoro.
Em alguns casos o mximo polarogrfico tem a forma arredondada e ocorre em solues
de eletrlitos concentradas (a partir de 0,1 mol/L). Esse tipo de mximo chamado de mximo
de segunda ordem e tambm evitado usando-se supressores de mximo como no caso
anterior. A causa para esse mximo atribuda a processos convectivos ocorrendo dentro da
gota de mercrio (movimentao do mercrio dentro da prpria gota) mais que na soluo.
Fenmenos de adsoro tambm podem produzir mximos polarogrficos. Nesse caso o
mximo chamado mximo de terceira ordem. Ele ocorre em razo da adsoro de substncias
que apresentam propriedades superfcie-ativas. Na regio do polarograma em cujo potencial a
adsoro ocorrer haver um aumento da corrente de modo semelhante aos casos anteriores.
ELETRODOS DE TRABALHO
O eletrodo de trabalho mais importante usado em voltametria ainda o eletrodo de
mercrio. Ele pode ser usado tanto no modo gotejante quanto no modo esttico. Nesse modo, a
gota de mercrio, depois de formada, permanece imvel na ponta do capilar e o voltamograma
registrado nessa nica gota. O eletrodo de mercrio tambm pode ser usado na forma de filme
de mercrio. Neste caso, o filme depositado eletroquimicamente em superfcies slidas, como
de platina e carbono vtreo. A sua atuao (do eletrodo de mercrio) marcadamente na regio
catdica, em potenciais que podem variar de +0,3 V a -2,3 V vs. o eletrodo de calomelano
saturado (ECS), dependendo do meio utilizado. Esta regio de potencial onde ocorrem as
reaes eletrdicas da maioria dos ons metlicos e de grande nmero de espcies orgnicas, da
a sua importncia. No modo gotejante ele um eletrodo de superfcie renovvel, evitando
problemas, entre outros, devido aos chamados envenenamentos superficiais.
O eletrodo gotejante de mercrio (DME) foi inventado por Heyrovsky para medidas de
tenso superficial e representa, historicamente e atualmente, um instrumento de enorme
importncia para a eletroanaltica. A Figura 4 mostra o diagrama de um DME. O mercrio est
contido em um reservatrio e liberado atravs de um fino tubo capilar (dimetro interno de
-0,05 mm) na forma de gotas esfricas. Cada gota cresce at que seu peso no possa mais ser
suportado pela tenso superficial. Tipicamente, o tempo de vida de uma gota de 2 a 6 s e cada
gota "madura" tem um dimetro de 0,5 a 1,0 mm.
Para um processo de eletrlise ocorrendo durante o crescimento de uma gota de
mercrio, a corrente deve possuir uma dependncia com o tempo, que reflete tanto a expanso
do "eletrodo esfrico" quanto os efeitos da eletrlise. Alm disso, cada gota que se desprende do
capilar agita a soluo e praticamente anula os efeitos de depleo, tanto que cada gota pode
ser considerada como "nascendo em uma soluo fresca e o tempo de vida representando um
novo experimento.
Entre os eletrodos slidos o de platina um dos mais importantes. Ele atua na regio de
potencial de cerca de +1,1 V a -0,5 V vs. ECS, dependendo do eletrlito de suporte utilizado.
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til na regio andica, onde o eletrodo de mercrio no atua. Outro eletrodo slido til na regio
andica o de ouro, que pode ser utilizado em intervalos de potencial de +1,5 a -0,8 V vs. ECS.
Muito usados na regio andica so os eletrodos de carbono, principalmente o de carbono vtreo,
que atua no intervalo de +1,5 V a -1,1 V vs. ECS, dependendo do meio utilizado.
Embora diversos eletrodos slidos possam ser usados em parte da regio catdica, todos
tm desempenho inferior ao eletrodo de mercrio, devido principalmente as suas propriedades
envolvendo a renovao superficial e formao de amlgamas com vrios metais.
Mais recentemente tm sido desenvolvidos novos tipos de eletrodos de trabalho para
serem usados em voltametria, tais como os eletrodos quimicamente modificados e os ultramicroeletrodos. Embora em boa parte ainda estejam em estgio de pesquisa, apresentam um
grande potencial para ampliar o campo de utilizao da tcnica voltamtrica.
Na Tabela 1 so apresentados os valores para a reprodutibilidade do tamanho da gota e
na 2, os valores tpicos das reas de gotas de mercrio do sistema Modelo 303 SMDE,
comercializado pela empresa EG&G Pinceton Applied Research Corporation.
TABELA 1 REPRODUTIBILIDADE DO TAMANHO DA GOTA DE MERCRIO COM O SISTEMA 303
SMDE DA EG&G PARC.
Modo de operao
Tamanho da Gota
EGM
Pequeno
0,79
EGPM
Pequeno
0,56
EGPM
Grande
0,87
TABELA 2 reas tpicas da gota de mercrio com o sistema 303 SMDE da EG&G PARC
Tamanho da Gota
Peso da Gota
(mg)
rea da Gota
(cm2)
Pequeno
1,2
0,096
Mdio
2,5
0,0156
Grande
5,4
0,0261
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potenciais mais negativos que qualquer outro eletrodo metlico e toma possvel o estudo de
reaes que so termodinamicamente menos favorveis.
Um exemplo a reduo do on sdio a amlgama de sdio em soluo aquosa alcalina,
que pode ser claramente observada em um experimento polarogrfico.
A grande desvantagem do eletrodo gotejante de mercrio o seu limite andico. A
oxidao do mercrio cm solues aquosas cidas, por exemplo, ocorre em potenciais prximos
a 0,0 V vs. ECS e no permite a anlise de materiais que so oxidados em potenciais mais
positivos.
REMOO DO OXIGNIO DISSOLVIDO
Quando se trabalha na regio catdica, como o caso da polarografia, h a necessidade
da remoo do oxignio atmosfrico dissolvido nas solues. Isto porque o O 2 eletroativo e
produz duas ondas polarogrficas nessa regio, uma com potencial de meia onda, E 1/2, ao redor
de -0,05 V vs. o eletrodo de calomelano saturado (ECS) e a outra com E 1/2 ao redor de -1,0 V
vs. ECS. A primeira onda catdica devido s reaes:
O2 + 2 H+ + 2e- .. H2O2 (meio cido)
O2 + 2 H+ + 2e- .. 2 H2O (meio alcalino ou neutro)
Tanto a formao de gua oxigenada na reduo do oxignio em meio cido como a formao
de gua em meio alcalino ou neutro ocorrero no mesmo potencial (E1/2 -0,05 V vs. ECS).
A segunda onda catdica (E1/2 -1,0 V vs. ECS) devido s reaes:
O2 + 4 H+ + 2e- H2O2 (meio cido)
O2 + 2 H2O + 4e- 4 OH (meio alcalino ou neutro)
Como consequncia, na regio catdica quando se faz uma medida polarogrfica ou voltamtrica
na presena de O2 a corrente de fundo ser alta, e vai mascarar a corrente produzida pela
espcie eletroativa. Por isso necessrio remover o O 2 dissolvido na soluo antes das medidas
serem feitas. Isto feito desaerando-se a soluo, pela passagem de um gs inerte, isento de
O2. O gs borbulhado na soluo durante alguns minutos, remove o O2, e fica dissolvido em
seu lugar. Mas como eletroquimicamente inerte nesse intervalo de potencial (regio catdica
considerada acima) no produzir nenhuma corrente polarogrfica ou voltamtrica. Os gases
mais usados para esse fim so: N2, Ar, Ne e He.
O Nitrognio o mais usado por ser mais barato e poder ser facilmente obtido com pureza
alta em relao presena do oxignio. Quando isto no ocorre, podem ser usados frascos
lavadores de gs intercalados entre o cilindro de N2 e o recipiente polarogrfico, contendo
redutores que removero o O2, purificando assim o nitrognio que ser borbulhado na soluo a
ser polarografada.
FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DE UMA REAAO
NA INTERFACE ELETRODO-SOLUO
Consideremos uma reao composta de diversas etapas, ocorrendo na interface
eletrodo-soluo (reao eletrdica), e produzindo a oxidao de espcies dissolvidas, O, em
espcies reduzidas, R, tambm em soluo (Figura 6), ou seja, a reao global pode ser escrita
como:
O + ne- R
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Em geral, a corrente governada pelas velocidades dos seguintes processos:
1) Transferncia de massa do seio da soluo para a superfcie do eletrodo;
2) Transferncia de cargas na superfcie do eletrodo;
3) Reaes qumicas precedentes ou subsequentes transferncia de carga. Estas
podem ser processos homogneos (em soluo), como protonao ou dimerizao,
ou heterogneos (na superfcie do eletrodo), como decomposio cataltica;
4) Outras reaes superficiais, como adsoro, dessoro, ou cristalizao
(eletrodeposio).
E E0
RT C 0 ( x 0) ,
ln
nF C R ( x 0)
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v v tm
i
nFA
J i (x)
zi
C ( x )
( x )
Di Ci
Di i
C i v( x ) ,
RT
(x)
(x)
onde:
Jj(x) o fluxo de espcies i (mol s-1 cm-2 ) a uma distncia x da superfcie;
Di o coeficiente de difuso (cm2 s-1);
C i ( x )
o gradiente de concentrao a uma distncia x;
(x)
( x )
o gradiente de potencial;
(x)
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seja iniciada, transporte de massa por difuso desempenha um papel fundamental em qualquer
experimento eletroqumico.
Assim sendo, consideremos um eletrodo planar, de rea A, imerso em uma soluo
inicialmente contendo somente espcies O que so reduzidas de acordo com a reao:
O + ne- R
j aqui demonstrada.
A soluo contm um excesso de eletrlito de suporte e a clula eletroqumica est livre
de distrbios mecnico e trmico, ou seja, migrao e conveco esto ausentes. Alm disso, as
dimenses da clula so grandes quando comparadas com as do eletrodo. Sob tais condies,
possvel supor que o transporte de massa ocorre pelo processo denominado de difuso linear
semi-infinita.
VOLTAMETRIA (POLAROGRAFIA) CLSSICA
Os
princpios
discutidos
at
aqui
constituem
a
atualmente
chamada
voltametria/polarografia clssica ou de corrente contnua. Do ponto de vista analtico esta
tcnica muito limitada para os dias atuais, pois no consegue determinar espcies com
concentraes abaixo de 10-4 a 10-5 mol L-1. A atual anlise de traos exige determinao de
concentraes da ordem de at 10-
12
18
A outra componente da corrente de fundo ou residual uma corrente do tipo faradica,
que ocorre devido a impurezas presentes no eletrlito de suporte, em outros reagentes
utilizados e ao oxignio dissolvido. Essa corrente pode ser reduzida ou mesmo eliminada
usando-se reagentes mais puros e removendo-se o oxignio pela passagem de um gs inerte.
Assim, ficou claro que a principal componente da corrente de fundo que limita a
sensibilidade a corrente capacitiva. Ento a pesquisa cientfica direcionou-se na busca de
procurar reduzir essa corrente para que a sensibilidade da tcnica pudesse ser melhorada.
Portanto, a razo para o baixo limite de deteco da polarografia clssica porque a corrente
faradica, isto , a corrente devido reao no eletrodo da substncia a ser determinada, fica
da mesma ordem ou menor do que a corrente capacitiva quando a sua concentrao atinge
valores da ordem de 10-4 a 10-5 mol L-1, no sendo mais possvel distingui-la da corrente de
fundo. Desse modo, conseguindo-se discriminar essas correntes, a sensibilidade da tcnica pode
ser melhorada.
Em um experimento de polarografia, o analisador polarogrfico, varre o intervalo de
potencial no qual a reduo (ou oxidao) da espcie eletroativa de interesse ocorre. O mtodo
mais simples de se aplicar uma varredura de potencial na forma de uma "rampa" linear, como
a ilustrada na Figura 8. Esta a programao de potencial utilizada na polarografia DC ("Direct
Current Polarography").
E
E2
v = 2 5 mV/s
E1
0
19
A DC amostrada ser registrada em funo do potencial aplicado e produzir um
polarograma como o mostrado na Figura 6b. No h aqui os "dentes de serra" apresentados nos
polarogramas da Figura 2 e da Figura 9a, mas uma linha registrada em "saltos" ou "degraus".
Entretanto, a forma desse novo polarograma a mesma dos polarogramas das Figuras 2 e 9b,
ou seja, em forma de onda. Os saltos ou degraus verificados para o registro da corrente (em um
registrador analgico) se deve convenincia de utilizar-se a rampa de potencial aplicado em
etapas, ou seja, sincronizando-se a velocidade de varredura com o tempo de durao da gota.
Por exemplo, usando-se uma velocidade de varredura de 10 mV/s e um tempo de gota de 1 s,
avana-se o potencial de 10 mV a cada segundo, realizando-se as medidas a cada etapa.
Entretanto, as melhorias obtidas no trouxeram de fato benefcios significativos tcnica
voltamtrica, em termos de sensibilidade.
Rigorosamente falando, consegue-se apenas trabalhar-se com conforto em
concentraes da ordem de 10-4 a 10-5 mol L-1 e melhorar um pouco a resoluo, ou seja, a
diferena de potenciais de meia onda entre duas substncias adjacentes pode ser um pouco
menor que na polarografia DC clssica para que possam ser determinadas simultaneamente,
uma vez que os polarogramas ficam mais bem definidos sem "os dentes de serra" da DC
clssica.
20
A VOLTAMETRIA (POLAROGRAFIA) DE PULSO NORMAL
Na dcada de 50, a polarografia de varredura linear deixou de ser uma tcnica analtica
importante devido ao desenvolvimento de mtodos espectroscpicos com melhores limites de
deteco, mais rpidos e mais convenientes.
Alm disso, na polarografia de corrente amostrada, a corrente medida somente em um
perodo de tempo muito pequeno durante a vida da gota, e toda a corrente faradica que flui
antes do perodo de amostragem no utilizada na medio, pelo contrrio, reduz o fluxo de
espcies eletroativas para a superfcie do eletrodo no tempo da medida real. Estas limitaes
foram largamente superadas a partir da metade dos anos 60, com a introduo das tcnicas
polarogrficas de pulso e a comercializao de eletrodos gotejantes de mercrio esttico.
O eletrodo gotejante de mercrio inicialmente mantido em um potencial de base Eb,
durante um perodo de tempo de vida da gota. Neste potencial, a reao em estudo no se
processa, ou seja, corrente faradica no flui no sistema. Quando restarem apenas cerca de 60
milisegundos (ms) do tempo de vida da gota, ou seja, num tempo , o potencial
instantaneamente mudado para um novo valor E. Durante os ltimos 17 ms deste pulso, ou
seja, a partir de um tempo , a corrente medida e registrada em funo do potencial, e a
aplicao do pulso de potencial termina com o retorno do potencial ao valor inicial Eb. Para cada
nova gota de mercrio, o potencial E maior que o da gota anterior. A Figura 10 mostra os
polarogramas obtidos, de pulso normal e de corrente amostrada, para uma soluo 10-5 mol/L
Cd2+ em 0,01 mol/L HCl, e comprova as maiores magnitudes das correntes faradicas com o
mtodo de pulso. Note que as escalas de corrente so diferentes.
21
Figura 10 Polarograma de uma soluo soluo 10-5 mol/L Cd2+ em 0,01 mol/L HCl. (a)
polarografia de pulso normal e (b) polarografia de corrente amostrada.
A VOLTAMETRIA (POLAROGRAFIA) DE PULSO DIFERENCIAL
Uma melhoria instrumental considervel na discriminao da corrente faradica da
capacitiva viria a ser conquistada com o desenvolvimento das tcnicas de pulso, principalmente
a de pulso diferencial. Neste caso a instrumentao foi desenvolvida de tal modo que as medidas
de corrente e aplicaes de potencial e pulsos de potencial sejam realizados em intervalos de
tempo muito pequenos.
Na polarografia de pulso diferencial a programao de potencial feita aplicando-se um
pulso de potencial superposto em uma rampa de potencial linearmente crescente em
instrumentos analgicos (uma rampa DC) e cada etapa de aplicao do pulso definida pela
varredura de potencial e pelo tempo de gota utilizados. O pulso aplicado de pequena amplitude
(10 a 100 mV) e imposto durante 50 a 60 ms perto do final da vida da gota, quando o
crescimento da gota de mercrio j cessou Figura 11a.
A corrente amostrada em dois intervalos de tempo de cerca de 15 ms cada um; o
primeiro intervalo imediatamente antes da aplicao do pulso (S 1) e o segundo prximo do final
do tempo de vida da gota (S2). O valor final da corrente a diferena entre esses dois valores
medidos.
22
23
24
25
caso de picos com certa sobreposio a medida da corrente de pico (Ip) d melhores resultados
(Figura 13).
FIGURA 13: Polarogramas de pulso diferencial com sobreposio. As linhas tracejadas indicam
a maneira correta de completar o polarograma para ler as correntes de pico
em termos de altura mxima.
A relao entre a corrente de pico (altura ou rea) e a concentrao da espcie
eletroativa obtida pelo uso da equao de Parry e Osteryoung (equao14) simplificada de
maneira anloga equao de Ilkovic. Mantendo-se todos os parmetros constantes da equao
(14), ela se torna:
onde:
Ip= corrente de pico.
K = constante englobando todos os termos da equao (14) mantidos constante durante
as medidas (exceto C, naturalmente).
C = concentrao da espcie eletroativa.
VOLTAMETRIA DE ONDA QUADRADA
A polarografia/voltametria de pulso diferencial ainda a tcnica mais usada
presentemente para fins analticos, devido s vantagens apresentadas em relao
detectabilidade e resoluo frente as tcnicas de corrente contnua. Mas, ao lado dela, uma
tcnica muito conveniente do ponto de vista analtico que tem sido incorporada em diversos
instrumentos comerciais a voltametria de onda quadrada de varredura rpida. Ainda que a
voltametria de onda quadrada tenha surgido em 1957 devido aos estudos de Baker, a utilizao
da tcnica era limitada pela tecnologia eletrnica.
Com os progressos da tecnologia analgica e digital, ela passou a ser incorporada nos
polargrafo a partir dos anos 80, principalmente, na sua forma de varredura rpida. Nessa
forma ela tambm chamada de voltametria de onda quadrada de Osteryoung, atribuda ao
nome do pesquisador americano que a desenvolveu.
A tcnica pode ser usada para realizar-se experimentos de um modo bem mais rpido do
que com a tcnica de pulso diferencial, com sensibilidade semelhante ou um pouco melhor, pois
aqui tambm ocorrem compensaes da corrente capacitiva. Um experimento tpico que requer
cerca de trs minutos para ser feito pela polarografia de pulso diferencial pode ser feito em
segundos pela voltametria de onda quadrada.
26
A programao de potencial usada na voltametria de onda quadrada pode ser vista na
Figura 14. Uma onda quadrada simtrica (Figura 14b) superposta sobre uma rampa de
potencial em forma de degraus (Figura 14a) de tal forma que o pulso direto da onda quadrada
coincida com o incio do degrau da rampa (Figura 14c). O pulso reverso da onda quadrada por
sua vez coincide com a metade da etapa da rampa em degraus.
Os parmetros tempo e potencial aplicado so mostrados na Figura 15, onde o
tempo de um ciclo de onda quadrada e tambm de um ciclo da rampa em degraus. A freqncia
da onda quadrada em Hz 1/. Es a amplitude do pulso de onda quadrada em mV, onde 2xEsw
a amplitude pico a pico (amplitude do pico direto ao reverso).
FIGURA 14: Seqencial potencial vs. Tempo (E vs. T) usada em voltametria de onda quadrada.
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FIGURA 15: Parmetros tempo e potencial aplicado em voltametria de onda quadrada, onde:
= tempo de um ciclo de onda quadrada; 1/ = freqncia da onda quadrada em
Hz; Ew =amplitude de pulso da onda quadrada em mV; E = potencial em mV da
etapa de rampa de potencial e 2Esw = amplitude de pico a pico da onda
quadrada em mV. Eetapa o potencial da etapa da rampa de potencial em
degraus. A velocidade de varredura v para um experimento de voltametria de
onda quadrada pode ser calculada pela equao:
28
todo o tempo despendido para a medida experimental, no apresentando os problemas de rea
superficial que ocorrem com o eletrodo gotejante de mercrio.
Quanto s freqncias usadas em voltametria de onda quadrada, elas encontram-se
tipicamente na regio de 1 a 120 Hz. Dentro desta faixa de freqncias, as medidas podem ser
feitas com velocidades cem vezes maiores ou mais que nas tcnicas de pulso.
VOLTAMETRIA DE REDISSOLUO
O desenvolvimento das tcnicas polarogrficas/voltamtricas de pulso diferencial e onda
quadrada permitiram chegar a determinaes analticas da ordem de 10-7 a 10-8 mol/L.
entretanto, na moderna anlise de traos necessrio chegar-se a limites abaixo de 10-8 mol/L,
o que no se consegue apenas utilizando-se medidas polarogrficas/voltamtricas usuais. essas
medidas, tambm chamadas de medidas voltamtricas/polarogrficas diretas, so afetadas pela
chamada corrente de fundo, que a corrente residual j discutida quando tratou-se da
polarografia dc. essa corrente, tambm comentada anteriormente ao tratar-se do
desenvolvimento das tcnicas de pulso e de onda quadrada, apresenta os dois componentes, o
faradaco e o capacitivo. O faradaco, devido a impurezas e oxignio dissolvido pode ser
minimizado pelo uso de reagentes puros e desaerando-se a soluo. O capacitivo minimizado
pela forma de amostragem da corrente. A questo aqui que essa amostragem de fato no zera
a corrente capacitiva, apenas a minimiza. Assim, quando a concentrao atinge valores da
ordem de 10-8 mol/L cai-se em um problema semelhante aquele que havia na polarografia
clssica: a corrente faradica torna-se muito baixa e fica encoberta pela corrente de fundo,
chegando-se ao limite da tcnica.
Uma possibilidade para resolver esse problema a utilizao de processos de prconcentrao da substncia a ser determinada, de maneira que a corrente faradaca possa
aumentar, suplantando a de fundo, e chegar-se a limites de deteco inferiores a 10-7 - 10-8
mol/L. Na anlise voltamtrica a pr-concentrao apresenta a vantagem de poder ser feita no
prprio eletrodo de trabalho, sendo, sob este aspecto, bastante fcil e conveniente a sua
utilizao.
VOLTAMETRIA DE REDISSOLUO ANDICA
Uma das tcnicas que se utiliza de processos de pr-concentrao a voltametria de
redissoluo andica( VRA) (do ingls, Anodic Stripping Voltammetry, ASV), muito utilizada na
determinao de metais pesados, uma vez que vrios deles podem ser depositados no eletrodo
de mercrio atravs de eletrlise de solues de seus ons.
Nesta tcnica a etapa de pr-concentrao consiste de uma eletrodeposio a potencial
constante e controlado da espcie eletroativa sobre um eletrodo estacionrio. Esta etapa
seguida por uma etapa de repouso e uma de determinao, sendo que esta ltima consiste na
redissoluo de volta soluo da espcie anteriormente eletrodepositada.
Como exemplo pode ser citado a determinao de ons cobre. Inicialmente ajusta-se o
potencial do eletrodo a um valor suficientemente negativo para reduzir os ons cobre a cobre
metlico, o qual eletrodepositado sobre o eletrodo.
A eletrlise feita por um tempo suficiente e sob agitao constante para concentrar o
cobre na superfcie do eletrodo a partir de um volume relativamente grande da soluo sobre
um volume muito menor do eletrodo, devido pequena superfcie necessria ao eletrodo de
trabalho (que na verdade um microeletrodo). A seguir, deixa-se a soluo em repouso por
alguns segundos para o sistema entrar em equilbrio.
Na etapa seguinte procede-se varredura de potencial para valores mais positivos
(andicos), e o cobre redissolvido retornando soluo, devido sua reoxidao.
29
Ao ocorrer a reoxidao do cobre a corrente variar, e como no caso da reduo, haver
a formao de um pico com o valor de Ep andico praticamente igual ao do Ep catdico para um
sistema reversvel.
A corrente de pico obtida (Ip) proporcional concentrao do cobre, sendo um sinal
analtico correspondente a uma concentrao que estaria abaixo do limite de deteco na
medida voltamtrica/polarogrfica direta.
A pr-concentrao faz com que a concentrao, na gota de mercrio, devido ao seu
volume minsculo, seja muito maior que na soluo, obtendo-se assim um sinal analtico bem
maior relativamente concentrao presente na soluo, explicando-se o aumento da
sensibilidade da tcnica.
As trs etapas envolvidas na voltametria de redissoluo andica sero discutidas a
seguir e esto esquematicamente representadas na Figura 15.
FIGURA 15: Na Figura 15a: etapas envolvidas na voltametria de redissoluo andica. (a)
programao E vs t mostrando os tempos de deposio (Td); e potenciais de
deposio Ed, para Cd2+ e Cu2+. (b) Tempo de repouso (T1). (c) etapa de
redissoluo. Na Figura 15b; voltamogramas hipotticos obtidos na etapa da
redissoluo para Cd2+ e Cu2+.
ETAPA DE DEPOSIO
Esta etapa principia por escolher o eletrodo de trabalho mais adequado. Os mais usados
so os eletrodos de mercrio de gota pendente, de mercrio de gota esttica, de filme de
mercrio e de carbono vtreo. Praticamente no h diferena entre os eletrodos de mercrio de
gota pendente e de gota esttica, apenas na maneira de amostrar a corrente, nas clulas
30
modernas. Os eletrodos de mercrio so mais vantajosos na determinao de metais pesados
pois muito deles formam amlgamas, produzindo sinais mais reprodutveis do que os depsitos
metlicos formados na superfcie de eletrodos slidos. Os eletrodos estacionrios de gota de
mercrio so usados para concentraes acima de 1 ng/mL e os de filme de mercrio para
concentraes abaixo de 1 ng/mL (ppb).
O eletrodo de filme de mercrio mais sensvel que o de gota, pois ele tem um volume
bem menor. Mas para concentraes acima de 1 ng/mL ele pode formar compostos
intermetlicos, o que produz interferncias nas determinaes.
Uma vez escolhido o eletrodo, a deposio feita eletroliticamente aplicando-se o
potencial de deposio (Ed) (Figura 13a) durante um determinado tempo e com agitao da
soluo. O tempo de deposio (td) escolhido em funo da espcie eletroativa, ficando
geralmente entre 30 s e 3 min. Tempos muito longos devem ser evitados, pois podem produzir
sinais fora da regio de proporcionalidade entre a corrente e a concentrao. A agitao faz com
que o transporte de massa por conveco mantenha a concentrao da espcie eletroativa junto
superfcie do eletrodo igual do resto da soluo, permitindo um depsito maior do metal em
um dado tempo de deposio do que se o processo de transporte de massa fosse difusional.
Essa agitao deve ser feita velocidade constante e controlada com preciso.
Nesta etapa, ocorrer ento a reduo do metal e conseqentemente a sua deposio
sobre a superfcie do eletrodo. Para o caso de eletrodos de mercrio:
31
quadrada de varredura rpida for disponvel, ela pode ser usada pois rene as vantagens do
pulso diferencial e da LSV, resultando em varreduras rpidas com alta sensibilidade.
A ASV apesar de ser uma tcnica muito sensvel e conveniente para a anlise de traos,
ela praticamente restrita a metais que apresentam solubilidade no mercrio, sendo aplicvel
cerca de 30 elementos. Ela pode tambm ser aplicada a alguns compostos inicos e a algumas
substncias orgnicas, que formam compostos pouco solveis com o mercrio e ficam
depositados junto superfcie do eletrodo. Nestes ltimos dois casos a voltametria de
redissoluo normalmente usada com varreduras catdicas, ou seja, no modo de voltametria
de redissoluo catdica (CSV, do ingls, Cathodic Stripping Voltammetry), uma vez que as
espcies acumuladas no eletrodo sofrero reduo.
Quanto aos metais, somente alguns poucos podem ser determinados pela voltametria de
redissoluo catdica, tais como Mn e Pb. Eles so determinados na forma de seus xidos
depositados na superfcie de eletrodos slidos, como de carbono ou platina.
VOLTAMETRIA ADSORTIVA POR REDISSOLUO
As limitaes apresentadas pela ASV e CSV podem ser removidas atravs da tcnica
voltamtrica chamada de voltametria adsortiva por redissoluo. Esta tcnica foi desenvolvida
mais recentemente, tendo-se em vista justamente superar os limites impostos pela ASV e CSV e
ampliar o uso da voltametria em anlise de traos.
Na voltametria adsortiva, a pr-concentrao feita pela adsoro da espcie eletroativa
na superfcie do eletrodo. No caso de metais isto feito atravs de seus ons complexos.
Adiciona-se ento soluo contendo o on metlico um complexante adequado e o complexo
formado (metal-ligante) que ser acumulado junto superfcie do eletrodo. Dessa maneira a
pr-concentrao no depende da solubilidade do metal no mercrio, como no caso da
voltametria de redissoluo convencional, e metais pouco solveis (no mercrio) podero ser
determinados.
Devido a essas caractersticas, a tcnica tambm aplicvel a um nmero ilimitado de
substncias orgnicas, bastando que elas apenas tenham propriedades superfcie-ativa, para
poderem ser adsorvidas na superfcie do eletrodo de trabalho, e que sejam, evidentemente,
eletroativas.
Quanto a detectabilidade, o limite de deteco pode chegar a valores ao redor de 100
vezes menor dos que os observados na voltametria de redissoluo andica. Podem ser usados
eletrodos de mercrio, onde obtm-se limites de deteco de at 10-11 - 10-12 mol/L, ou
eletrodos slidos, principalmente na regio andica, com limites de deteo da ordem de 10-8 a
10-10 mol/L.
As propriedades adsortivas podem ser verificadas por voltametria cclica, de pulso
diferencial, cronocoulometria, etc. As espcies a serem adsorvidas necessitam possuir um
coeficiente de adsoro maior que 10-4 cm.
O esquema de pr-concentrao utilizado na voltametria adsortiva por redissoluo
(AdSV, do ingls, Adsorptive Stripping Voltammetry) anlogo ao da voltametria de
redissoluo convencional (ASV).
ETAPA DE PR-CONCENTRAO
Os parmetros usados nesta etapa so basicamente os mesmos j discutidos para a
ASV, sendo apenas diferentes os processos de acumulao e de redissoluo.
Na Figura 16 est representado esquematicamente o procedimento usado na voltametria
adsortiva por redissoluo, para a determinao de um metal M na presena do ligante L,
formando o complexo a ser adsorvido MLn. Pode-se usar um potencial anlogo ao potencial de
32
deposio da ASV, o potencial de acumulao (Eac), para obter-se uma pr-concentrao mais
seletiva, embora isso no seja necessrio em muitos casos. Aqui tambm existir um tempo de
acumulao (tac), anlogo ao td da ASV, que tambm cronometrado, durante o qual a espcie
de interesse ser adsorvida sobre a superfcie do eletrodo. As reaes envolvidas nesta etapa
so:
ou seja, como o metal foi adsorvido, ele ser reduzido a partir do ponto onde o potencial atingir
o valor do potencial de decomposio, e o valor de potencial de pico Ep tambm
correspondente ao E1/2 da onda polarogrfica. Assim, a varredura de potencial aqui ser
catdica, e no andica como no caso da ASV, onde o metal pr-concentrado ser reoxidado.
33
Na voltametria adsortiva por redissoluo tambm h a possibilidade do ligante sofrer
reduo ou oxidao no processo de redissoluo do complexo adsorvido, se o ligante usado for
uma espcie eletroativa. Assim, o seu sinal tambm poder ser usado para a determinao do
metal. Para o caso de substncias orgnicas o processo anlogo.
EXPERIMENTOS PARA VERIFICAR PROPRIEDADES ADSORTIVAS
Para que uma substncia possa ser determinada pela voltametria adsortiva por
redissoluo (AdSV) ela precisa apresentar propriedades de adsoro (superfcie ativa) junto
superfcie do eletrodo de trabalho, alm de ser, evidentemente, eletroativa em uma dada regio
de potencial. Isto pode ser feito usando-se as prprias tcnicas de voltametria de pulso
diferencial e de onda quadrada.
Por exemplo, no caso de um metal, adiciona-se um complexante na soluo e o
complexo formado poder adsorver-se ou no sobre a superfcie do eletrodo. Se for feita a
varredura no sentido catdico em vrios tempos de "espera", ou seja, de acumulao, e o pico
do voltamograma de pulso diferencial ou onda quadrada aumentar a cada vez, de modo anlogo
a esse tipo de estudo com a ASV, indicao de que o complexo estar sendo adsorvido.
Aumentando-se o tempo de acumulao, aumenta-se a adsoro e a concentrao do complexo
na superfcie do eletrodo, aumentando-se ento a corrente de pico a cada etapa, enquanto no
houver saturao da superfcie. Se no houver alterao da altura do pico voltamtrico antes de
uma eventual saturao, o on complexo formado no estar sendo adsorvido e no apresentar
coeficiente de adsoro apropriado ao uso desta tcnica.
Outra tcnica voltamtrica muito empregada para este fim a voltametria cclica
repetitiva (Figura 17).
34
A cada ciclo, aumenta-se a concentrao do complexo junto superfcie do metal,
aumentando a corrente do pico, na varredura direta. O metal se deposita ento na superfcie do
eletrodo, dando o pico andico na varredura reversa e aumentando a cada ciclo devido ao
aumento da concentrao do metal reduzido na superfcie do eletrodo.
O TRATAMENTO DE DADOS EM POLAROGRAFIA E VOLTAMETRIA
O tratamento de dados usuais em polarografia e voltametria para fins de anlise
quantitativa, consiste em medir-se a corrente de difuso (no caso da polarografia DC) ou as
correntes de pico no caso de outras tcnicas polarogrficas/voltamtricas como pulso diferencial
e onda quadrada. As correntes obtidas so ento relacionadas s concentraes de solues
padres da espcie eletroativa e concentrao dessa espcie na amostra de interesse. As trs
maneiras mais comuns de se fazer isso sero discutidas a seguir.
MTODO DA CURVA PADRO
Nesse mtodo, tambm chamado de curva de calibrao ou ainda curva analtica, medese a corrente polarogrfica/voltamtrica de solues padro de vrias concentraes da
substncia em estudo (analito), colocando-se os valores de corrente (corrente de pico, Ip, ou
corrente de difuso, Id) versus os valores de concentrao em um grfico de coordenadas
cartesianas. A curva obtida apresenta um comportamento linear na regio de concentrao de
interesse, passando pela origem no caso das tcnicas clssicas. No caso de tcnicas mais
sensveis, devido as correntes de fundo, ela pode no passar pela origem, o que no afeta o uso
do mtodo. A concentrao calculada pela interpolao da corrente medida da amostra na
curva padro. Isto pode ilustrado na Figura 18.
Geralmente a corrente usada na curva, Ip, a corrente correspondente altura mxima
de pico, mas pode-se tambm usar a rea de pico, quando isto for conveniente.
Esse mtodo o mais comum em qumica analtica. Entretanto, quando se trabalha com
matrizes complexas freqentemente ocorre o chamado efeito de matriz, ou seja, a determinao
da concentrao por interpolao da corrente da amostra lida na curva padro leva a resultados
errados. Isto porque a curva padro feita usando-se solues padres em condies de pureza
e conhecimento das substncias presentes, diferente das condies da matriz, onde se
desconhece a presena de diversas espcies, sendo que vrias delas podem causar
interferncias. No caso de acontecer interferncias, pode-se usar o mtodo da adio de padro.
35
FIGURA 18: Curva padro. O grfico representa a corrente de pico vs. Concentrao do Fe(III)
usando-se a polarografia de pulso diferencial em um eletrlito de suporte base
de citrato em pH 5,00.
MTODO DA ADIO DE PADRO
O mtodo da adio de padro usado com o objetivo de minimizar-se o problema de
efeito de matriz. Como uma matriz complexa geralmente tem espcies presentes que afetam as
propriedades da substncia a ser determinada (por exemplo, amostras contendo substncias
que alteraram a fora inica do meio ou que complexam-se com metais, mudando as
caractersticas polarogrficas/voltamtricas desses metais), a idia realizar as medidas
experimentais nas mesmas condies ou mais prximas possveis das condies da matriz.
Nesse procedimento, a amostra adicionada clula polarogrfica/voltamtrica
juntamente com o eletrlito de suporte e a corrente referente espcie de interesse (analito)
registrada. A seguir, adiciona-se sobre a soluo da amostra uma alquota de alguns microlitros
da soluo padro do analito, de tal modo que a variao do volume total seja desprezvel. Por
exemplo, se a soluo da amostra tiver um volume de 5 mL, adiciona-se uma alquota do padro
de 5 L. Aps a adio do padro, l-se a corrente referente soma da concentrao do analito
mais a concentrao adicional da soluo padro do analito adicionada.
Usualmente adicionam-se pelo menos trs alquotas da soluo padro, registrando-se a
corrente aps cada adio. O volume adicionado escolhido de tal forma a no ocorrer diluio
aprecivel da amostra, o que alteraria as suas condies originais, que aqui s so alteradas
praticamente pela variao da concentrao do analito.
Como as medidas com os padres so feitas em condies muito prximas das condies
da amostra, o efeito de matriz significativamente minimizado, ou seja, as interferncias que
afetam as medidas da corrente referente ao analito presente na amostra, afetaro da mesma
maneira as medidas das correntes referentes ao analito mais as alquotas da soluo padro
sucessivamente adicionadas sobre a amostra.
36
Com os valores obtidos das correntes da amostra e dos padres, constri-se uma curva
corrente vs. concentrao como est mostrado na Figura 19. A corrente da amostra (Ip ou Id,
dependendo da tcnica usada), colocada no eixo "y" para o valor 0 (zero) do eixo "x"'. Os
prximos valores da corrente total de amostra mais padres, para cada adio de padro, so
colocados no eixo "y" e as respectivas concentraes no eixo "x". O grfico resultante deve dar
uma reta. Essa reta extrapolada at cortar o eixo da concentrao (eixo "x") no lado negativo
das coordenadas.
37
onde (ip)p a corrente de pico do padro interno ou on piloto, Ip uma constante (anloga
constante k da equao de Ilkovic) e Cp a concentrao do padro interno ou on piloto. Da
mesma maneira, a equao para o analito torna-se:
ip/ix chamado de relao do padro interno, Rx. Finalmente a equao (20) se torna:
Rx uma constante vlida para um dado meio e um dado capilar, no caso de usar-se eletrodos
de mercrio no modo gotejante ou esttico. Qualquer alterao de algum parmetro dessas
condies um novo valor de R deve ser determinado.
O mtodo do padro interno ou on piloto considerado muito bom para minimizar
efeitos de matrizes, mas difcil encontrar substncias que apresentem o perfil adequado para
serem usadas como tal. Uma espcie para servir como padro interno necessita ter o seu
potencial de meia onda (ou de pico) relativamente prximo ao do analito e no ter a
possibilidade de ser encontrada como um componente da matriz ou como um contaminante dos
reagentes utilizados.
38
A vidraria deve ser deixada em cido ntrico 6 mol L - durante vrias horas para
descontaminao, uma vez que o vidro adsorve ons em sua estrutura devido ao efeito da troca
inica. Em seguida, antes de serem usadas, as peas devem ser lavadas vrias vezes com
pores de gua destilada e gua desionizada (pelo menos 6 vezes em cada caso).
Os reagentes usados para a preparao de eletrlitos de suporte e padres devem ser da
mais alta pureza possvel. Alguns desses reagentes so fornecidos comercialmente, outros
necessitam de purificao adicional feita no prprio laboratrio de anlise.
A gua a ser utilizada na preparao de solues de padres e amostras deve ser de alta
pureza. Assim, deve-se usar gua destilada de destiladores de vidro tipo pyrex, destiladores de
quartzo, etc, conforme a necessidade de aplicao. Em geral recomenda-se usar gua
desionizada de alta pureza usando-se o sistema de purificao Millipore Milli-Q.
A contaminao devido a impurezas de reagentes, particulados do ar, e trao de metais
de recipientes e paredes de clulas so os componentes primrios do branco. Devido a isso, o
pr-tratamento da amostra deve ser simplificado. Quanto menor o nmero de etapas no
processo de abertura e preparao da amostra, menor ser a contaminao. Sobre as
contaminaes oriundas de paredes de recipientes feitos de vidro, s vezes prefervel utilizarse frascos de teflon ou polietileno, que tem coeficientes de adsoro bem menores que o vidro
em relao a espcies inicas. Solues padres de concentrao abaixo de 10 -3 mol L-1 jamais
devem ser estocadas. Padres diludos devem ser preparados diariamente.
Quanto ao problema da formao de compostos intermetlicos, isto acontece quando se
usam os eletrodos de mercrio para a anlise de traos de metais por ASV. Ao formar-se um
desses compostos, os picos voltamtricos podem sofrer severas alteraes, diminuindo a altura
ou sofrendo deslocamentos. A causa da formao desses compostos a alta de concentrao no
mercrio de metais que so depositados junto com o analito. Vrios compostos intermetlicos
so conhecidos, incluindo, por exemplo as combinaes: Ag-Cd, Ag-Cu, Cu-Cd, Cu-Ni, Ag-Zn,
Cu-Zn, Co-Zn, Cu-Sb, Cu-Sn, Ni-Sb, etc. Uma interferncia muito comum desse tipo entre
zinco e cobre. Quando eles so depositados simultaneamente pode ocorrer a formao de trs
compostos, CuZn, CuZn2 e CuZn3. Esses compostos produzem picos prximos ao potencial de
pico do cobre, resultando em um aumento da corrente de pico do cobre e uma diminuio da
corrente de pico do zinco.
39
A maneira prtica utilizada para minimizar as interferncias devido a formao de
compostos intermetlicos em anlise de traos por voltametria de redissoluo andica (ASV),
envolve o uso de tcnicas mais sensveis como pulso diferencial ou onda quadrada, em lugar de
varredura linear, pois elas exigem um tempo de deposio menor, diminuindo a concentrao
dos metais no eletrodo e reduzindo a formao desses compostos. Outro recurso utilizado
usar-se o eletrodo de mercrio de gota pendente para concentraes mais elevadas e o de filme
de mercrio apenas para concentraes mais baixas. Assim, de um modo geral, para
concentraes de metais acima de 10 g L-1 pode-se usar o eletrodo de gota de mercrio, e o de
filme de mercrio para concentraes menores que 10 g L-1.
VALIDAO DE MTODOS VOLTAMTRICOS
A utilizao de um mtodo analtico exige confiabilidade, ou seja, que o resultado
apresentado pelo mesmo seja exato, o que cientificamente significa que o valor obtido para a
concentrao do analito deve ser verdadeiro dentro do erro experimental. Para isso, quando o
mtodo utilizado em uma dada matriz, h a necessidade de se ter certeza a respeito do
resultado da anlise. Isto feito verificando-se a validez ou validade do mtodo. O procedimento
para essa verificao chamado de validao.
A validao feita envolvendo os parmetros analticos usuais (erro, desvio, desvio
padro, etc) e a obteno do resultado da anlise por mais de uma via analtica e a comparao
entre si dos diferentes valores obtidos. De um modo geral, h trs maneiras comuns para
realizar-se a validao: o mtodo (teste) de recuperao, a anlise de amostra certificada e a
determinao analtica por um segundo mtodo.
TESTE DE RECUPERAO
Este procedimento feito enriquecendo-se a amostra com uma quantidade conhecida do
padro utilizado. A amostra mais o padro passam por todo o procedimento de anlise que a
amostra sozinha passou previamente no procedimento usual de anlise. O resultado obtido para
a concentrao do analito com a amostra enriquecida subtrado do resultado obtido da amostra
sozinha, sem o enriquecimento. A diferena deve dar o valor da concentrao do padro
adicionado para o enriquecimento da amostra dentro do erro experimental. O resultado
expresso em termos de porcentagem de recuperao do padro adicionado. O resultado ideal
de uma recuperao de 100%, mas evidentemente o valor obtido aceitvel estar ao redor de
100% dentro do erro experimental do mtodo.
AMOSTRA CERTIFICADA
A amostra certificada uma amostra referente a uma dada matriz, onde vrios de seus
constituintes foram analisados por diversos laboratrios e diversos mtodos, coordenados por
uma instituio. A instituio fornece um certificado sobre o resultado das anlises ao
comercializar a amostra. H amostras certificadas para vrias matrizes, como ligas metlicas,
plantas, material biolgico, solos, etc. A validade do mtodo verificada aqui, determinando-se
o analito para qual o mtodo foi desenvolvido, na matriz certificada, e comparando-se o
resultado obtido com o valor certificado. Esse resultado, para ser aceito, deve concordar com o
valor certificado dentro do erro apresentado por este valor (o valor certificado). Evidentemente,
a matriz referente amostra certificada deve ser do mesmo tipo da matriz estudada.
DETERMINAO POR UM SEGUNDO MTODO
Essa via de validao feita usando-se um mtodo diferente do mtodo em estudo. O
ideal que sejam os mais diferentes possveis. Por exemplo, no caso de um mtodo
voltamtrico, que um mtodo eletroanaltico, tratando-se de um metal, pode-se usar para a
validao um mtodo com tcnica espectroanaltica, tal como absoro atmica. Os resultados
obtidos por ambas as tcnicas devem concordar dentro do erro experimental.
40
CONSIDERAES GERAIS SOBRE A VALIDAO
Como j foi dito, necessrio validar o mtodo o desenvolvido, quando aplicado a uma
matriz, para que o mesmo tenha confiabilidade. Embora possam existir aspectos diversos e
mesmos polmicos sobre essa questo, em geral recomendvel que um dos procedimentos
seja o teste de recuperao. Mesmo que nesse procedimento o pesquisador use os seus prprios
padres, justamente esse aspecto, a certeza que ele pode ter da exatido de seus padres,
que um dos motivos para que ele use essa via. Uma outra razo para usar-se o mtodo de
recuperao que um grande nmero de matrizes com que se trabalha no tem amostras com
certificado disponveis comercialmente, e quando tem podem ser muito caras. Finalmente h o
fato de que nem sempre h a possibilidade de usar-se um segundo mtodo, pela falta de
equipamento. J o teste de recuperao uma via sempre disponvel. Mas, uma s via de
validao pode no ser completamente satisfatria. Assim, recomendvel usar-se pelo menos
duas vias, podendo uma delas ser o mtodo de recuperao, e a outra, um segundo mtodo
com tcnica diferente da do mtodo desenvolvido, ou a anlise de uma amostra certificada,
quando esta estiver disponvel.
Naturalmente, h outros pontos que sempre devem ser considerados em anlises
qumicas, tais como a amostragem e a abertura e tratamento da amostra, que so aspectos
bsicos da qumica analtica e que envolvem todas as tcnicas de anlise.
VOLTAMETRIA CCLICA
A Voltametria Cclica Rpida (VC ou VCR) uma tcnica muito utilizada in vivo,
desenhada para providenciar uma boa resoluo temporal e qumica. Esta tcnica baseia-se na
aplicao de uma varredura de potencial ao eletrodo, cuja direo varia ao longo do tempo.
Como cada varredura demora em mdia cerca de 20 ms, pode-se aplicar repetidas varreduras
por segundo. A maior diferena entre a voltametria cclica e a voltametria tradicional, a
velocidade da medio e o tamanho dos eletrodos usados (cerca de 8 mm de dimetro).
A VC (ou VCR) permite estudar as propriedades eletrofisiolgicas dos neurnios e,
atendendo ao neurotransmissor que tem sido mais estudado, a DA, a VCR proporciona um bom
estudo dos vrios subsistemas dopaminrgicos e as suas respectivas funes nas desordens
motoras e psicolgicas.
Alm da corrente faradaica, existem outras contribuies de corrente, como resultado do
carregamento da dupla camada (corrente capacitiva) e da existncia de grupos funcionais
eletroativos no eletrodo (como o caso dos xidos nos eletrodos de carbono). Os microeletrodos
em fibra de carbono tm uma linha de base (ou rudo) muito estvel que pode facilmente ser
medida a priori e subtrada da corrente total. A estabilidade da corrente no faradica , alis,
um pr-requisito para os sistemas que empregam a VCR.
O varrimento negativo, seguido da aplicao de um potencial positivo, permite que as
espcies electroctivas retomem ao seu estado de oxidao inicial, evitando o efeito txido que
estas espcies tm sobre os tecidos (neurotoxinas) e ao mesmo tempo, previne a formao de
filmes de xidos sobre o eletrodo (passivao).
APLICAO DE TCNICAS VOLTAMTRICAS
A habilidade para fazer medies dos nveis de neurotransmissores em tempo real, com
a voltametria in vivo, permite que muitas questes quanto mecanstica do processo de
neurotransmisso sejam respondidas. Estas anlises fornecem informaes nicas relativas
cintica de administrao de drogas; permitem o estudo de variaes qumicas no crtex,
associadas a alteraes fisiolgicas (como a fome ou a sede) bem como, tm sido utilizado no
estudo de doenas neurodegenerativas como a doena de Parkinson ou Alzheimer.
41
A voltametria uma tcnica que pode ser utilizada para estudar vias bioqumicas e
mecanismos de ao celulares, j que se conseguem produzir eletrodos miniaturizados que
podem ser colocados no fluido extra-celular, com pouca danificao dos tecidos circundantes.
Atualmente tem sido muito utilizada para estudar os mecanismos que esto na base de
regulao dos nveis de neurotransmissores, numa dada regio do crtex, utilizando-se meios
para manipular a secreo e captao desse transmissor. Esta tcnica tem sofrido alteraes ao
longo do tempo, visando ultrapassar alguns problemas, como o caso do bloqueamento do
eletrodo quando este est exposto a constituintes biolgicos e atingir os mais altos nveis de
especificidade, reprodutibilidade e sensibilidade.
Apenas molculas que possam ser facilmente oxidadas ou reduzidas so abrangidas pela
voltametria, como o caso das catecolaminas: dopamina (DA) e noradrenalina (NA) e as aminas
biognicas: serotonina (5-hidroxitriptamina ou 5-HT) e histamina.
Os neurotransmissores so substncias qumicas produzidas pelos neurnios e so
usadas para transmitir informao entre as clulas. Estes so libertados por um neurnio prsinptico para a fenda sinptica, no espao extra-celular e causam uma alterao na membrana
ps-sinptica. Esta clula receptora, pode ser um neurnio com receptores par aos
transmissores, sofrendo uma alterao de potencial, porm, tambm pode ser uma clula
muscular ou uma clula glandular. (Fig.1).
Neurotransmisso a converso de um evento eltrico num evento qumico e
posteriormente noutro evento eltrico. Com o presente trabalho, pretende-se fazer uma
abordagem geral sobre a utilizao da voltametria in vivo para o estudo dos processos da
neurotransmisso.
sintetizado
e
armazenado em vesculos que fundem com a membrana
libertando o seu contedo para a fenda sinptica. Uma vez
libertos, os transmissores ligam-se aos receptores pssinpticos e aos autorreceptores. A captao e difuso da
catecolamina finda a estimulao da clula ps-sinptica.
O transmissor reciclado e armazenado ou metabolizado.
PERSPECTIVA HISTRICA
A voltametria in vivo foi introduzida em 1973
quando Ralph Adams e os seus colaboradores
implantaram, pela primeira vez, um eletrodo miniaturizado
em pasta de carbono, no crtex de um ratinho e
conseguiram detectar material eletroativo. Adams centrou-se mais no estudo das correntes de
oxidao de catecolaminas, porm, deparava-se com o problema de existirem outras espcies
eletroativas, como o cido ascrbico, no mesmo potencial e por estas se encontrarem em
concentraes muito superiores s das catecolaminas.
Gonon desenvolveu outro tipo de eletrodos para detectar as catecolaminas. Nestes caso
ele usou um eletrodo de trabalho em fibra de carbono, associado voltametria de impulso
diferencial, tendo conseguido diminuir o dimetro do eletrodo para 12mm.
Wightman, ao contrrio dos trabalhos anteriores, em vez de procurar detectar os nveis
basais de dopanina no crtex, utilizou a voltametria cclica rpida (VCR) para detectar a
dopamina libertada pelos terminais nervosos, aps estimulao eltrica. A concentrao de
dopamina (e de qualquer outro neurotransmissor) medida afetada pela libertao, captao,
difuso e metabolismo do neurotransmissor.
42
APLICAO DE OUTROS TIPOS DE VOLTAMETRIA
Alm da VCR, a cronoamperometria, a amperometria de potencial constante e a
voltametria de pulso diferencial, so tambm tcnicas utilizadas na monitorizao de
neurotransmissores.
Na amperometria de potencial constante, aplicado s um passo de potencial
produzindo-se uma corrente que decai com o tempo. Esta tcnica oferece a melhor resoluo
temporal, porm, no permite distinguir as correntes de oxidao dos vrios analitos,
oferecendo uma fraca seletividade. Esta tcnica tambm muito utilizada na obteno de
senssores e biossensores, visando interesse em neurotransmissores.
Na cronoamperometria aplicado um potencial de onda quadrada, repetitivamente,
medindo-se a variao da corrente com o tempo. O potencial escolhido o suficiente para oxidar
e re-reduzir as espcies de interesse o que tambm evita a acumulao de neurotransmissores
oxidados (como no caso da CVR). Atualmente tem-se utilizado a cronoamperometia ultra-rpida
in vivo, para monitorizar os nveis de 5-HT no meio extra-celular. Para tal introduzem-se os
eletrodos na regio subgranular do gyrus dentado, que uma regio de densa enervao
seretonrgica e, no corpos calosum, o qual est privado do transportador de 5-HT. Neste estudo
utilizou-se meios farmacolgicos, a fuvoxamina que um inibidor da captao de 5-HT, a fim de
ampliar o sinal do transmissor em estudo.
O ELETRODO
Desde o incio do uso da voltametria in vivo at aos dias de hoje, o tipo de eletrodo
utilizado tem sofrido algumas alteraes, nomeadamente no que diz respeito ao seu tamanho,
s tcnicas utilizadas para melhorar a seletividade e a constante de tempo do eletrodo, mas,
tem-se mantido o uso do eletrodo de fibra de carbono. Este pode apresentar a forma de disco,
cilindro ou elipse (Figura 22):
43
O aumento da seletividade e sensibilidade tem sido conseguida com a alterao da
superfcie do eletrodo. Recorre-se por vezes ao uso de eletrocatalizadores ou mediadores, que
podem estar ligados por diversas formas ao eletrodo. O mtodo mais comum na monitorizao
de neurotransmissores, para aumentar a especificidade, a formao de um filme polimrico
com Nafion na superfcie do eletrodo. Dada a sua natureza aninica, consegue-se uma prconcentrao de espcies catinicas, como o caso da DA ou NA e repulso de espcies
aninicas, como o ascorbato.
Nas anlises in vivo, deve-se ter em considerao que nas diferentes regies do crtex,
o contedo neuroqumico varia consideravelmente, assim, algum grau de especificidade
conseguido selecionando-se um local alvo apropriado.
Por exemplo, colocando um eletrodo no "striatum" pode-se considerar que a corrente do
oxidao obtida, devida grande concentrao de DA e no de NA, que nesta zona est
presente em baixa quantidade.
Por outro lado, pode-se manipular o contedo do meio extra-celular com uso de
compostos farmacolgicos: pode-se inibir seletivamente a sntese de um dado transmissor ou
bloquear a secreo, diminuindo a sua concentrao no meio extra-celular, ou, pode-se bloquear
a captao do transmissor, produzindo-se um efeito oposto. Isto permite a deteco da DA sem
interferncia do seu principal metabolito. Estas manipulaes farmacolgicas podem causar
alteraes fisiolgicas uma vez que interferem com mecanismos de feedback inerentes ao
processo de neurotransmisso.
Outra forma de melhorar a seletividade in vivo, estimular apenas os axnios dos
neurnios de interesse. Esta aproximao limitada pelo fato do grupo de neurnios que foi
estimulado, poder no representar o que sucede fisiologicamente.
UMA ALTERNATIVA: O ELETRODO DE SLICA
Os eletrodos de carbono so selados por vidro. Recentemente foram criados novos
eletrodos que procuram responder a alguns problemas, nomeadamente a fragilidade do vidro;
procuram simplicidade de montagem do material no laboratrio e que consigam penetrar mais
fundo no crtex dos animais em estudo. Estes eletrodos so manufaturados com carbono e slica
fundida. Tm boas propriedades mecnicas; so muito fceis de montar num laboratrio, j que
no requerem material especial; exibem uma sensibilidade DA e NA semelhante dos
eletrodos de carbono e podem ser produzidos longos o suficiente para atingir zonas mais
profundas do crtex.
PROBLEMA DA ANLISE IN VIVO
A principal diferena entre as anlises eletroqumicas in vivo, em relao anlise de
clulas ou tecidos (brian slice), a distncia entre o local de secreo e o eletrodo. O tamanho
da fenda sinptica muito reduzida, por exemplo, a sinapse dopamnica do striatum, tem uma
fenda de apenas 15 nm, de forma que no se consegue colocar o eletrodo diretamente sobre o
local de secreo. Para se obter correntes de oxidao, necessrio que o neurotransmissor
abandone a sinapse e percorra um caminho at ao eletrodo, por difuso, que dificultado pelas
estruturas celulares.
As correntes medidas refletem ento, as alteraes ocorridas no meio extra-sinptico. A
interaco dos transmissores com receptores e transportadores, diminui a sua concentrao
extra-celular, da que a concentrao seja uma medida da "eficcia" de um neurotransmissor no
crtex.
44
CONCLUSO RESUMIDA
A voltametria in vivo tem sido utilizada desde que Ralph Adams introduziu pela primeira
vez um eletrodo de trabalho no crtex de um animal. Desde ento esta tcnica tem sofrido as
naturais evolues que decorrem ao longo do tempo. Tem-se mantido o uso do eletrodo em fibra
de carbono, com ligeiras alteraes no sentido de melhorar a seletividade e sensibilidade.
Os mecanismos de neurotransmisso tm sido elucidados principalmente com a VCR.
Ainda recentemente foi desvendado o processo de regulao da captao e secreo da DA ,
com o uso desta tcnica, porm, convm dizer que a voltametria frequentemente confirmada e
complementada por outras tcnicas. O conhecimento bsico do funcionamento anatmico do
sistema nervoso, fundamental para a correta interpretao dos resultados. A microdilise bem
como a cromatografia lquida de alta presso so frequentemente utilizadas em conjunto com a
voltamentria, alargando o espectro de compostos analisados e melhorando a seletividade.
A voltametria tem sido uma ferramenta fundamental no que toca ao esclarecimento de
processos envolvidos na neurotransmisso, mas ainda h muitas barreiras a transpor. Num
futuro talvez possamos contar com nanoeletrodos que consigam atingir os espaos mais
recndidos do nosso crebro, como a fenda sinptica.
BIBLIOGRAFIA UTILIZADA
1. Texto descrito por:
Luiz Manoel Aleixo
Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Qumica, CP 6154
13084-862 Campinas, So Paulo - Brasil
OBS: foram feitas alteraes no seu contedo.
2. BRETT, A. M. O., BRETT, C. M. A., Bioelectroqumica princpios, mtodos e aplicaes,
Coimbra: Livraria Almedina, 1996.
3. AWS, L.C. TONEY, G.M., DAVIS, D.J.; GERHARDT, G.A. FRAZER, A. In vivo
chronoamperometric measurements of the clearance of exogenously applied serotonin
in the rat dentate gyrus, Journal of Neuroscience Methods, 78:1-2:139-150, 1997.
4. FINLAY, Janet M.; SMITH, Gwenn S. A Critical Analysis of Neurochemical Methods for
Monitoring Transmitter Dynamics in the Brain., 2000.
5. NATHAN, S. L. et al., Advances in the Voltammetric Analysis of Small Biologically
Relevant Compounds, Analytical Biochemistry 303, 1-16, 2002.
6. SWIERGIEL, Artur H.; PALAMARCHOUK1, Vitaliy S.; DUNN, Adrian J. A New Design of
Carbon Fiber Microelectrode for in vivo voltammetry using fused silica, Journal of
Neuroscience Methods, in press, 1997.
7. STAMFORD, Jonathan A.; JUSTICE, JR, Joseph B. Analytical Chemistry (68) 359A-366A,
1996.
8. WIGHTMAN, R. M.; MICHAEL, D. J.; Electrochemical monitoring of biogenic amine
neurotransmission in real time, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 19, 33-46,
1998.
9. WU, Qun, et al, Concurrent Autoreceptor-Mediated Control of Dopamine Release and
Uptake during Neurotransmission: An In Vivo Voltammetric Study, The Journal of
Neuroscience, 22(14):6272-6281, 2002).
10. Neuroscience Clinic http://www.pallidotomy.com/neurotransmitters.html
45
46
EXERCCIOS DE VOLTAMETRIA
1)
2)
3)
4)
5)
47
EXEMPLOS ENVOLVENDO VOLTAMETRIA
48
EXPERIMENTO 01
Introduo
A voltametria uma tcnica eletroqumica fundamentada na interpretao das relaes
tenso-corrente durante a eletrlise, em meio quiescente, de uma espcie eletroativa muito
diluda, na presena de uma elevada concentrao de um eletrlito inerte. O potencial variado
de modo sistemtico e a curva corrente-potencial obtida chamada de voltamograma.
A aplicao mais comum da voltametria na anlise de qualquer espcie que seja
eletroativa, ou seja, que possa ser oxidada e reduzida. A medida que o eletrodo torna-se mais
negativo, o eletrodo aumenta a sua capacidade de reduzir espcies eletroativas. Inversamente,
quando o potencial torna-se mais positivo, a sua capacidade de oxidar espcies eletroativas
aumenta.
A corrente a medida do fluxo de eltrons devida a transferncia (e -) que se processa
quando uma oxidao (perda de eltrons) ou reduo (ganho de eltrons) ocorre sobre uma
superfcie de um eletrodo.
O potencial de reduo formal (E0) de um par reversvel centrado entre o potencial do
pico andico e o catdico, ou seja:
E0 = (Epa + Epc)/2
O nmero (n) de eltrons transferidos na reao de eletrodo para um par reversvel pode
ser determinado por meio da separao entre os potenciais de picos e aproximadamente 0,059
V.
Para um sistema reversvel, a corrente de pico descrita pela equao de RandlesSevcik (varredura direta do primeiro ciclo):
Ip = 2,69x105 n3/2 A D1/2 c v
onde:
Ip =corrente de pico (A).
n = nmero de eltrons
A = rea do eletrodo (cm)
D = coeficiente de difuso (cm2/s)
c = concentrao (mol/cm3)
v = velocidade de varredura (v/s).
Os valores de Ipa/Ipc 1.
A clula voltamtrica normalmente usada em experimentos eletroqumicos contm trs
eletrodos imersos na soluo a ser analisada:
Eletrodo de Trabalho: onde a reao de interesse ocorre. Ex. (ouro, platina, grafite piroltico,
carbono vtreo);
Eletrodo de Referncia: fornece um potencial estvel, com o qual o potencial do eletrodo de
trabalho comparado. Ex. Eletrodo de Calomelano Saturado (ECS), Prata/ Cloreto de Prata
(Ag/AgCl);
Eletrodo Auxiliar ou Contra Eletrodo: consiste de um material condutor e quimicamente inerte.
Ex. Platina (Pt), Grafite.
49
50
EXPERIMENTO 02
Determinao do Potencial de Oxidao da Dopamina
por Voltametria de Onda Quadrada
Introduo
A Voltametria de Onda Quadrada (SWV) a mais sensvel das tcnicas tradicionais de
pulso. Nesta tcnica a medida de corrente realizada com velocidades de varredura maiores que
100mV/s, e as medidas de corrente sendo realizadas apenas ao final do pulso de potencial, onde
a magnitude da corrente capacitiva j est minimizada. Como vantagens pode ser citada a
formao de ondas quadradas sobrepostas de forma a construir degraus de potenciais e o fato
de que a varredura completa de potencial, no intervalo de trabalho, pode ser feita mais
rapidamente.
A tcnica consiste em uma amostragem da corrente no final de cada um dos pulsos. Em
sistemas reversveis as correntes reversas so significantes, assim as correntes de sada so
maiores do que as correntes diretas ou reversas. Essa uma das razes para que a SWV
apresente maior sensibilidade do que as tcnicas: voltametria de pulso diferencial e polarografia.
A SWV apresenta, em relao voltametria cclica, uma maior capacidade de deteco de
pequenas quantidades de compostos, pois no gera corrente capacitiva constante durante a
medida. A maior sensibilidade e velocidade dessa tcnica tm aumentado seu uso em
determinaes quantitativas de espcies eletroativas em soluo.
O experimento proposto objetiva utilizar a tcnica de voltametria de onda quadrada
(SWV) para determinar o potencial de oxidao da dopamina, [DA] = 1x 10 -4 mol/L em soluo
tampo fosfato pH 7.
Procedimento
Antes de comear seu experimento seu professor ou monitor lhe mostrar a estrutura da
dopamina e falar sobre sua importncia na pesquisa cientfica, do ponto de vista clnico e
farmacutico.
Os experimentos eletroqumicos sero realizados em uma cela eletroqumica (Figura 1)
de trs compartimentos contendo:
Eletrodo de Trabalho: Pasta de carbono
Eletrodo de Referncia: Prata /Cloreto de Prata (Ag/AgCl) ou Calomelano Saturado (ECS).
Eletrodo Auxiliar ou Contra Eletrodo: Platina (Pt)
51
Entrada
Entrada
Entrada
Entrada
Tampas
Cela
Figura 2:
trabalho
Diagrama
do
eletrodo
de
52
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
Wang, J. Analytical Electrochemistry, John Wiley & Sons, New York, 2000, p.118-127, 171202.
Eggins, B. R. Biosensors: An Introduction, John Wiley & Sons, New York, 1997.
Sotomayor, M.D.P.T.; Kubota, L.T., Qumica Nova, 2002, 25, 123.
Sotomayor, M.D.P.; Tanaka, A.A.; Kubota, L.T.; Anal.Chim.Acta, 2002, 455, 215.
Hasebe, Y.; Akiyama, T.; Yagisawa, T.; Uchiyama, S.; Talanta, 1998, 47, 1139.
Osteryoung, J. e ODea, J. Electroanalytical Chemistry, Ed. A. J. Bard, Dekker, New York, Vol.
14, 1986, pp. 209-308.
Skoog, D. A., Holler, F. J. e Nieman, T. A., Princpio de Anlise Instrumental, Artmed
Editora S.A, So Paulo, 2002.
53
EXPERIMENTO 03
Determinao da Corrente de Oxidao do Catecol
por Cronoamperometria
Introduo
A cronoamperometria uma tcnica eletroqumica de pulso, que consiste em aplicar um
potencial constante e analisar a corrente resultante que pode ser identificada atravs de anlise
de sua variao com o tempo. A curva corrente versus tempo chamada cronoamperograma.
Esta tcnica permite utilizar sensores amperomtricos os quais so promissores para o
desenvolvimento de tcnicas analticas versteis na determinao de compostos fenlicos, como
por exemplo, o catecol.
Este experimento objetiva utilizar a tcnica de cronoamperometria para determinao da
corrente de oxidao do catecol em soluo tampo fosfato.
Procedimento
Os experimentos eletroqumicos sero realizados em uma cela eletroqumica (Figura 1)
de trs compartimentos contendo:
Eletrodo de trabalho: Pasta de carbono
Eletrodo de referncia: Prata/Cloreto de Prata (Ag/AgCl) ou Calomelano Saturado (ECS).
Eletrodo auxiliar ou contra eletrodo: Platina(Pt)
54
55
EXPERIMENTO 04
Tratamento de dados
Os polarogramas devero ser enumerados e serem usados para determinar a corrente
de difuso, o potencial de meia onda e o nmero de eltrons.
56
Fazer uma tabela contendo duas colunas: concentrao de Pb (NO 3)2 em mol/l e
corrente (A), para os polarogramas no modo DC.
Construir o grfico correspondente Equao de Ilkovic e determinar os valores dos
coeficientes angular, linear e de correlao.
Escrever a equao da reta.
OBSERVAO: este roteiro de prtica foi gentilmente cedido pela Prof a. Dra. Aldala L.
B. Marques.
Bibliografia Consultada
Ohlweiler, O. A. Qumica Analtica Quantitativa, 2a edio. Livros Tcnicos e Cientficos, Rio
de Janeiro. 1976.
Skoog, A. D.; West, D. M., e Holler, F. J. Fundamentals of Analytical Chemistry. 6a edio
Saunders College Publishing, New York, 1981.
Christian, G. D. Analytical Chemistry, John Wiley Sons, 4a edio, New York. 1986.
Skoog, D. A., Holler, F. J. e Nieman, T. A. Princpio de Anlise Instrumental, Artmed Editora
S.A., 2a edio, So Paulo, 2002.