UNIVERSIDADE PARANAENSE

BRUNA BRASIL RODRIGUES FURTADO

DESENHO DE UM MEIO DE FERMENTAO PARA BIOMASSA DE

LEVEDURAS
Relatrio realizado como atividade de avaliao
parcial da disciplina em Processos de
Fermentaes Industriais do curso de
Especializao em Microbiologia Agroindustrial.
Professor:
Fernandez

TOLEDO
2010

Daniel

Ernesto

Rodrguez-

1. INTRODUO

O avano da biotecnologia tem proporcionado ao homem o progresso

nos alimentos, medicamentos, agricultura, pecuria, etc. Grande parte desse
avano se deve ao aprimoramento do conhecimento relativo fermentao
microbiana e a modelagem dos processos fermentativos por tcnicas de
engenharia, de modo a aperfeioar o processo, gerando mais produtividade
(VILLEN, 2010).
Muito mais que somente visar o aumento da produo do que
determinada empresa produz, a modelagem dos processos fermentativos ainda
tem como um dos principais objetivos a reduo de custos ao mximo, visando
o mximo de lucro com o mnimo de desperdcio, ainda mais em processos
biolgicos em que a manuteno e aquisio de microorganismos so bastante
onerosas para a empresa que trabalha com processos fermentativos, alm de
outros custos (VILLEN, 2010).
A necessidade de profissionais que consigam compreender e modificar
processos fermentativos de modo a extrair-lhes o melhor com menos custos
possveis vm crescendo constantemente. Com isso, a preparao com aulas
prticas que demonstrem em sistema de bancada a importncia do processo
de modelagem de processos fermentativos importante como fundamento
para compreenses posteriores.
Com isso, o objetivo da aula prtica realizada foi demonstrar na prtica
como definir o meio mais adequado para o crescimento de leveduras e com o
menor custo, atravs da realizao de clculos diversos.

2. METODOLOGIA

O encaminhamento metodolgico da prtica foi realizado entre os dias

25 e 26 de junho do ano de 2010 no laboratrio de Biologia da UNIPAR
Campus Toledo, sob a superviso do professor Dr. Daniel Ernesto RodrguezFernandez.
Inicialmente, foram dadas as instrues acerca do procedimento
realizado com a levedura Candida albicans, que iria fermentar trs meios
(caldos) distintos para verificar-se em qual meio produziria mais biomassa e se
seria economicamente vivel.
Para a preparao dos caldos utilizou-se 200 mL de gua destilada, que
foi mensurada com auxilio de proveta e transferida para erlenmeyer, tendo no
fim trs erlenmeyers com volume final de 200 mL cada um, reservando-se.
Depois foram pesados em balana analtica com auxlio de papelalumnio os reagentes slidos necessrios para a preparao dos trs caldos:

Substrato Econmico 1 (E1): composto por sacarose (8 g), sulfato

de amnio (1,8 g) e fosfato monobsico de potssio (0,49 g);

Substrato Econmico 1 (E2): composto por sacarose (8 g),nitrato

de sdio (2,4 g) e fosfato monobsico de potssio (0,49 g);

Caldo YM (Yeast Malt): meio adquirido pronto e que consiste em
extratos de levedura (3 g) e malte (3 g), peptona (5 g) e dextrose
(10 g) por 1000 mL. Este meio foi preparado com 4,2 g do
preparado em p para 200 mL de gua destilada.

Todos os ingredientes, aps a pesagem foram transferidos para

erlenmeyers distintos, que foram devidamente identificados e homogeneizados
com a gua destilada, sendo seguidamente selados e devidamente
identificados para a realizao de esterilizao por autoclave durante 20
minutos com presso de 1,1 atm.
Os erlenmeyers foram resfriados aps esse processo e ento inoculados
com as cepas de Candida albicans em camra de fluxo laminar, sendo depois
incubados em estufa a 35C durante 16 horas.
Passado o tempo de incubao, os meios fermentativos foram retirados
da estufa, comparados visualmente em funo de sua turbidez. Para a
avaliao da produo de biomassa, utilizou-se uma gota de cada um dos
meios para a visualizao e contagem em cmara de Neubauer de cinco
quadrados na diagonal, para a estimativa da mdia.
O restante de cada um dos meios foi filtrado vcuo com papel-filtro
previamente tarado e o precipitado (biomassa) que ficou no papel-filtro foi seco
em estufa a 110C, at completa evaporao da gua. Esse papel-filtro seco
contendo a biomassa foi novamente pesada, retirando-se ento o peso do
papel-filtro antes do procedimento, obtendo-se um valor que foi utilizado nos
clculos.

3. RESULTADOS
Os dados obtidos na contagem em cmara de Neubauer e a quantidade
de biomassa seca obtida foram organizados conforme a tabela 1:

Tabela 1: Resultados obtidos nas atividades prticas

Meio
YM
E1
E2

Biomassa (g)
1,00
0,02
0,03

Contagem (UFC)
1,7 x 109
1,75 x 107
5 x 107

Com o resultado da massa seca obtida, realizou-se um clculo para

estimar a quantidade de biomassa seca que seria produzida em 1 litro (1000
mL) de meio, conforme o modelo para caldo YM:

YM C BIOMASSA SECA = 1 g/200 mL = 5 x 10-3 g/mL . (1000 mL/ 1 L) = 5 g/L

A partir desse resultado realizou-se um segundo clculo para determinar

o volume de meio/caldo necessrio para a produo de 1 kg de biomassa seca:

V = YM M BIOMASSA PRODUZIDA = 1 kg/5 g = 1000 g/5 g = 200 L

C BIOMASSA SECA

Esses dois clculos foram realizados para os trs meios, cujos

resultados foram tabulados na tabela 2:

Tabela 2: Resultados dos clculos de concentrao de biomassa seca e

de volume para produo de 1 kg de biomassa
Meio
YM
E1
E2

C BIOMASSA SECA
5,00 g
0,1 g
0,15 g

Volume
200 L
10.000 L
6.700 L

Com esses dados foi possvel ento calcular o custo do meio para
produzir a quantidade de biomassa a partir dos reagentes. Para exemplificar o
clculo, utilizou-se o modelo do meio YM:
CUSTO = M YM X VALOR
Onde:
M YM = V x C YM 200 L x 21 g/L = 4.200 g ou 4,2 kg

O pote contendo 500 g do caldo YM para preparao de meio com

concentrao de 21 g/L custa R$ 116.22. Com isso, cada grama de p para
caldo YM custa R$ 0,23244. Assim:
CUSTO = M YM X VALOR
CUSTO = 4.200 g X R$ 0,23244
CUSTO = R$ 976,29

Os resultados de clculo de custo com os respectivos custos foram

compilados na tabela 3:

Tabela 3: Custos de cada meio para a produo de 1 kg de biomassa

Meio

Custo do meio para

200 mL
Aprox. 0,98
Aprox. 0,08
Aprox. 0,09

YM
E1
E2

Volume

Custo Final

200 L
10.000 L
6.700 L

976,29
R$ 3091,26
R$ 3073,73

Os custos dos reagentes utilizados nos clculos foram disponibilizados

com base nos dados fornecidos pela indstria farmacutica Prati Donaduzzi,
para seus funcionrios que realizam a especializao:
Meio YM:

Extrato de Levedura 500 g: R$ 99,44

Extrato de Malte 500 g: 96,80
Peptona 500 g: 316,80
Dextrose 500 g: 26,80

Demais reagentes dos outros meios:

Nitrato de Sdio 500 g: R$ 12,70

Fosfato Monobsico de Potssio 500 g: R$ 23,34
Sulfato de Amnio 500 g: R$ 8,62
Sacarose 1000 g: R$ 0,99

4. CONCLUSO

A partir do exposto no presente relatrio define-se que o meio YM o

mais econmico e vivel para a produo de biomassa, pois apesar da grama

de produto ser mais cara do que a dos outros dois meios, necessria pouca
quantidade do mesmo para produzir a mesma quantidade de biomassa que os
demais, que necessitam de maior concentrao para que a levedura os utilize
para fermentao.

5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
VILLEN, R. A. Biotecnologia Histrico e Tendncias. Disponvel em
http://www.hottopos.com/regeq10/rafael.htm. Acesso em 30 jun. 2010.