Doq Cgcre 8 - 02 PDF

Instituto Nacional de Metrologia,
Normalizao e Qualidade Industrial
ORIENTAO SOBRE VALIDAO DE

MTODOS DE ENSAIOS QUMICOS
Documento de carter orientativo
DOQ-CGCRE-008
Reviso 02 JUNHO/2007
MOD-SEGEQ-002 - Rev. 00 - Apr.JUL/06 - Pag. 01/02
DOQ-CGCRE-008 Reviso 02 JUNHO/2007

ORIENTAO SOBRE VALIDAO DE MTODOS DE ENSAIOS QUMICOS
SUMRIO
1
2
3
4
5
6
7
8
Objetivo
Campo de Aplicao
Responsabilidade
Documentos de Referncia
Introduo
Definies
Questes relevantes na utilizao de mtodos analticos
Validade de mtodos
8.1 Validao
8.2 Comparao de mtodos
8.3 Programas interlaboratoriais
9 Planejamento de validao
10 Parmetros de validao
10.1 Especificidade e seletividade
10.2 Linearidade
10.3 Faixa de trabalho e faixa linear de trabalho
10.4 Sensibilidade
10.5 Limite de deteco
10.6 Limite de quantificao
10.7 Exatido e tendncia (bias)
10.7.1 Materiais de referncia certificados (MRC)
10.7.2 Recuperao
10.8 Preciso
10.8.1 Preciso
10.8.2 Reprodutibilidade
10.8.3 Preciso intermediria
10.8.4 Comparao da preciso entre mtodos
10.9 Robustez
10.10 Incerteza de medio
11 Documentao de mtodos validados
12 Itens revisados
ANEXO Relao dos participantes da elaborao deste documento.
MOD-SEGEQ-002 - Rev. 00 - Apr.JUL/06 - Pag.02/02
01/24
02/24
1 OBJETIVO
Este documento tem como objetivo auxiliar laboratrios na tarefa de demonstrar que um mtodo
de ensaio qumico, nas condies em que praticado, tem as caractersticas necessrias para a
obteno de resultados com a qualidade exigida.
2 CAMPO DE APLICAO
Este documento aplica-se Dicla, aos laboratrios acreditados e postulantes acreditao.
3 RESPONSABILIDADE
A responsabilidade pela reviso deste documento da Dicla.
4 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Diretiva Parte 2 : 2007 Regras para a Estrutura e Redao de Documento Tcnico ABNT
ABNT ISO/IEC Guia 43-1:1999. Ensaio de Proficincia por Comparaes Interlaboratoriais.
Parte 1: Desenvolvimento e Operao de Programas de Ensaios de Proficincia.
ABNT NBR ISO/IEC 9000:2000. Sistemas de gesto da qualidade - Fundamentos e vocabulrio
ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005. Requisitos Gerais para Competncia de laboratrios de
Ensaio e Calibrao.
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater, 21st ed. Washington, 2005.
ASTM D 5172:1991(2004) Standard Guide for Documenting the Standard Operating Procedures
used for the Analysis of Water.
ASTM E178:2002 Standard Practice for Dealing With Outlying Observations.
ASTM E 1169:2002 Standard Guide for Conducting Ruggedness Tests.
Bruce, P., Minkkinen P., Riekkota M.L. Practical Method Validation: Validation Sufficient for
an Analysis Method. Mikrochim. Acta. 128, 93-106. 1998.
Bruns, R. E.; Neto, B. B.; Scarminio, I. S. Como fazer Experimentos. Pesquisa e
Desenvolvimento na Cincia e na Indstria - Editora da Unicamp - 2 edio - 2005
CFR Title 40 - Part 136 - Guidelines Establishing Test Procedures for the Analysis of Pollutants
Appendix B Definition and Procedure for the Determination of the Method Detection Limit.
Revision 1.11.
EAL.- P11. Validation of Test Methods - General principles and concepts. EAL European
cooperation for Accreditation of Laboratories. 1997.
03/24
EURACHEM. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A laboratory Guide to Method
Validation and Related Topics. 1st ed. 1998.
EURACHEM. Guide Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. 2nd ed., 2000
GARFIELD, F.M. Quality Assurance Principles for Analytical Laboratories. AOAC. Arlington.
1997.
GREEN, J.M. A Practical Guide to Analytical Method Validation. Analytical Chemistry. 1996.
(68) 305A-309A
HUBER, Ludwig, Validation and Qualification in Analytical Laboratories. Interpharm Press.
1999.
INMETRO/ABNT. Guia para a Expresso da Incerteza de Medio, 2003, 3 Ed. Brasileira do
ISO Guide to the Expression of Uncertainty in Measurements.
ISO 3534-1:1993 - Statistics - Vocabulary and Symbols - Part 1: Probability and general
statistical terms.
ISO 3534-2:1993 - Statistics - Vocabulary and Symbols - Part 2: Statistical quality control.
ISO 3534-3:1999 - Statistics - Vocabulary and Symbols - Part 3: Design of experiments.
ISO 5725-1:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results - Part
1: General principles and definitions.
ISO 5725-2:1994(1998). Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and
Results - Part 2: basic method for the Determination of Repeatability and Reprodutibility of a
Standard Measurement Method.
Results - Part 3: Intermediate Measures of Precision of a Standard Measurement Method.
ISO 5725-4:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results - Part
4: Basic Methods for the Determination of the Trueness of a Standard Measurement method.
Results - Part 6: Use in Practice of Accuracy Values.
ISO 78-2:1999 Chemistry Layout for standards Part 2: Methods of chemical analysis.
LGC / VAM In-House Method Validation - A Guide for Chemical Laboratories. 2003.
NATA. Technical Note 17. Format and Content of Test Methods and Procedures for Validation
and Verification of Chemical Test Methods. 1997.
RELACRE. Guia Relacre 13. Validao de Mtodos Internos de Ensaio em Anlise Qumica.
Portugal. 2000.
04/24
RESOLUO RE n 899, de 29/05/03, da ANVISA Guia para Validao de Mtodos

Analticos e Bioanalticos.
TAYLOR, J.K . Quality Assurance of Chemical Measurements. Lewis Publishers, 1987.
VIM - Vocabulrio Internacional de Termos Fundamentais e Gerais de Metrologia, 1995.
5
INTRODUO
fundamental que os laboratrios disponham de meios e critrios objetivos para demonstrar, por
meio da validao, que os mtodos de ensaio que executam conduzem a resultados confiveis e
adequados qualidade pretendida. Se um mtodo existente for modificado para atender aos
requisitos especficos, ou um mtodo totalmente novo for desenvolvido, o laboratrio deve se
assegurar de que as caractersticas de desempenho do mtodo atendem aos requisitos para as
operaes analticas pretendidas.
O laboratrio, ao empregar mtodos de ensaios qumicos emitidos por organismos de
normalizao, organizaes reconhecidas na sua rea de atuao ou publicados em livros e/ou
peridicos de grande credibilidade na comunidade cientfica, necessita demonstrar que tem
condies de operar de maneira adequada estes mtodos normalizados, dentro das condies
especficas existentes nas suas instalaes antes de implant-los.
6 DEFINIES
As definies gerais referentes qualidade so as da norma ABNT NBR ISO/IEC 9000.
Preferem-se as definies do VIM se diferentes da ABNT NBR ISO/IEC 9000.
6.1
Validao
Comprovao, atravs do fornecimento de evidncia objetiva, de que os requisitos para uma
aplicao ou uso especficos pretendidos foram atendidos. (ABNT NBR ISO/IEC 9000).
6.2
Mtodo normalizado
aquele desenvolvido por um organismo de normalizao ou outras organizaes (por exemplo,
ABNT, ASTM, ANSI ou APHA/AWWA/WEF), cujos mtodos so aceitos pelo setor tcnico
em questo.
6.3
Mtodo no normalizado
aquele desenvolvido pelo prprio laboratrio ou outras partes, ou adaptado a partir de mtodos
normalizados e validados. Por exemplo, mtodos publicados em revistas tcnicas, mtodos de
fabricantes de equipamentos, mtodos utilizando conjuntos (kits) de ensaio e instrumentos
portteis.
7 QUESTES RELEVANTES NA UTILIZAO DE MTODOS ANALTICOS
O laboratrio deve estar ciente dos requisitos da Norma ABNT NBR ISO/IEC 17025 para a
seleo de mtodos de ensaios (item 5.4.2), desenvolvimento de mtodos de ensaio pelo
laboratrio (item 5.4.3), utilizao de mtodos no normalizados (item 5.4.4) e validao de
mtodos (item 5.4.5).
Quando o laboratrio utilizar mtodos normalizados, ser necessrio verificar se os dados de
desempenho declarados so adequados ao propsito do ensaio e, se necessrio, fazer declarao
de competncia. No caso do mtodo normalizado, se no declarar dados de desempenho
relevantes para a aplicao em questo, o laboratrio deve comprovar a sua competncia.

8
05/24
VALIDAO DE MTODOS (ABNT NBR ISO/IEC 17025)
8.1
Validao
Com o objetivo de confirmar que os mtodos so apropriados para o uso pretendido, o
laboratrio deve validar:
Mtodos no normalizados;
Mtodos criados/desenvolvidos pelo prprio laboratrio;
Mtodos normalizados usados fora dos escopos para os quais foram concebidos;
Ampliaes e modificaes de mtodos normalizados.
O processo de validao de um mtodo deve estar descrito em um procedimento, e os estudos
para determinar os parmetros de desempenho devem ser realizados com equipamentos e
instrumentos dentro das especificaes, funcionando corretamente, adequadamente calibrados e
validados. Do mesmo modo, o operador que realiza os estudos deve ser competente na rea de
estudo e precisa ter conhecimento suficiente sobre o trabalho sendo capaz de tomar as decises
apropriadas durante a realizao do estudo.
8.2 Comparao de Mtodos
Consiste na comparao dos resultados obtidos utilizando um mtodo interno com os resultados
conseguidos por meio de um mtodo de referncia. O objetivo estudar o grau de proximidade
dos resultados obtidos pelos dois mtodos de ensaio, ou seja, avaliar a exatido do mtodo
interno com o de referncia.
As anlises so efetuadas em replicata, utilizando os dois mtodos de ensaio, em separado, sobre
as mesmas amostras, numa faixa restrita de concentraes ou em toda faixa de concentraes em
que se pretende validar o mtodo.
Existem vrias tcnicas para comparar os resultados obtidos por dois mtodos de ensaio, entre as
quais: Testes de Hiptese, Regresso Linear entre os dois mtodos e Planejamento de
Experimentos.
Nota: Ver item 10.1.2 sobre Teste de Hiptese (teste F seguido pelo teste t correspondente).
8.3 Programas Interlaboratoriais
O ABNT ISO/IEC Guia 43-Parte 1 faz distino entre o uso de comparaes interlaboratoriais
para ensaios de proficincia para a determinao do desempenho do laboratrio, e para outros
propsitos tais como: estabelecer a eficcia e a comparabilidade de novos mtodos de ensaio ou
de medio, acompanhar mtodos estabelecidos e determinar as caractersticas de desempenho
de um mtodo, geralmente conhecidos como processos colaborativos.
O processo colaborativo uma forma especial de ensaio para avaliar o desempenho de um
mtodo nas condies normais de trabalho em vrios laboratrios, por meio de ensaio de
amostras homogneas preparadas cuidadosamente.
9 PLANEJAMENTO DA VALIDAO
No planejamento e execuo da validao, sugere-se a seguinte seqncia de trabalho:
Definir a aplicao, objetivo e escopo do mtodo;
Definir os parmetros de validao e critrios de aceitao;
Verificar se as caractersticas de desempenho do equipamento esto compatveis com o
exigido pelo mtodo em estudo;
Qualificar os materiais, por exemplo, padres e reagentes;
Planejar os experimentos de validao;
Fazer um procedimento operacional para validao;
Fazer os experimentos preliminares de validao;
Ajustar os parmetros do mtodo e/ou critrios de aceitao, se necessrio;
06/24
Fazer experimentos completos de validao;

Fazer um procedimento operacional para execuo do mtodo.
Os experimentos e os resultados devem ser documentados e registrados.
10 PARMETROS DE VALIDAO
Os parmetros de validao devem estar claramente declarados no procedimento documentado e
incluir, quando aplicvel:
- Especificidade e Seletividade
- Linearidade
- Faixa de trabalho e Faixa linear de trabalho
- Sensibilidade
- Limite de deteco
- Limite de quantificao
- Exatido e tendncia (bias)
- Preciso
- Robustez
- Incerteza de medio
Os parmetros que necessitam ser calculados durante o processo de validao podem variar de
acordo com o tipo de ensaio como mostra o Quadro 1.
Quadro 1 Parmetros de validao conforme o tipo de ensaio
Tipo de ensaio
Parmetros
Qualitativo
Determinao do
Principal
Componente
Anlise
de
Traos
Propriedades
Fsicas
Preciso
Especificidade/seletivi
dade
Tendncia
/
recuperao
Robustez
Sensibilidade
/
linearidade / faixa de
trabalho
Limite de deteco
Limite de quantificao
Fonte: In-House Method Validation - A guide for Chemical Laboratories LGC / VAM, 2003
10.1 Especificidade e Seletividade
Uma amostra, de maneira geral, consiste dos analitos a serem medidos, da matriz, e de outros
componentes que podem ter algum efeito na medio, mas que no se quer quantificar. A
especificidade e a seletividade esto relacionadas ao evento da deteco. Um mtodo que produz
resposta para apenas um analito chamado especfico. Um mtodo que produz respostas para
vrios analitos, mas que pode distinguir a resposta de um analito da de outros, chamado
seletivo. Entretanto, os termos especificidade e seletividade so freqentemente utilizados
indistintamente ou com diferentes interpretaes.
07/24
Na prtica, diferentes testes de especificidade e seletividade tentam abordar o mesmo problema:

o que se mede o que se pensa que se mede? Entender os diferentes mecanismos que causam
interferncias pode ajudar na estruturao dos testes e achar solues para os problemas
encontrados. A medio pode ser alterada porque os reagentes, matriz da amostra ou outros
componentes alteram a sensibilidade do detector que mede o analito de interesse ou porque estes
compostos afetam diretamente a resposta. O efeito de erros constantes (interferncias) e erros
proporcionais (efeito de matriz) podem ocorrer ao mesmo tempo. Uma vez conhecidos, estes
problemas podem ser superados por meio de adio-padro, anlise de mltiplos componentes
ou por uma mudana no pr-tratamento, separao, ou deteco.
Dependendo da tcnica analtica utilizada, a quantidade relativa da matriz pode diminuir
conforme a amostra processada durante as etapas do ensaio. A matriz est presente nas fases de
amostragem, no pr-tratamento da amostra e nas etapas de preparao. Alguma poro da matriz
entra no sistema de separao e alguns componentes podem ainda estar presentes na fase de
deteco. Os possveis problemas encontrados durante as fases de preparao da amostra afetam
a exatido do mtodo e isto ser abordado neste documento.
10.1.1 Testes de Especificidade
Testes de especificidade necessitam de uma pesquisa cuidadosa do conhecimento disponvel na
rea de aplicao, para que se encontrem todos os componentes que precisam ser testados. Assim
sendo, o analito, a matriz com ou sem analito, matrias-primas do processo, impurezas dos
materiais iniciais ou do processo, subprodutos e produtos de degradao ou metablitos e
reagentes em branco devem todos ser analisados. s vezes se faz necessrio expor todos os
componentes e a matriz a condies extremas (calor, cido, lcali, oxidao, radiao
UV/Visvel, luz fluorescente) para determinar possveis produtos de degradao.
Muito esforo foi dedicado para resolver os problemas de especificidade freqentemente
encontrados com as tcnicas mais comuns de espectrofotometria de UV/Visvel ou de
cromatografia lquida. Comparaes de resultados, variando as condies de medio e anlise
de pureza de sinal, podem ser usados para verificar que nenhum outro componente conhecido ou
desconhecido esteja sendo determinado junto com o analito. Algumas vezes devem-se usar
tcnicas adicionais, como cromatografia de camada fina (CCF) ou espectroscopia de massa
(EM), aps a separao e a coleta do analito. Em particular, isso necessrio em mtodos usados
para avaliar estabilidade. Para este propsito, as amostras utilizadas nos ensaios de condies
extremas, so estudadas cuidadosamente para provar que nenhum produto de degradao
conhecido ou desconhecido possa perturbar o sinal do analito.
Como exemplo, para tcnicas cromatogrficas, alm das comparaes visuais de cromatogramas,
diferentes parmetros devem ser calculados nos cromatogramas para descrever a especificidade
do mtodo. Os parmetros mais importantes so: resoluo, reteno relativa (fator de
separao), fator de capacidade (fator de reteno), fator de simetria e nmero de pratos tericos.
10.1.2 Testes de Seletividade
A matriz da amostra pode conter componentes que interferem no desempenho da medio pelo
detector selecionado, sem causar um sinal visvel no teste de especificidade. Os interferentes
podem aumentar ou reduzir o sinal, e a magnitude do efeito tambm pode depender da
concentrao.
08/24
Vrios testes e suas estatsticas correspondentes podem ser utilizados para o estudo da
seletividade dependendo da disponibilidade do analito, da matriz sem o analito e de amostras de
referncia nas concentraes de interesse. Se a matriz da amostra sem analito ou um grupo
satisfatrio de amostras de referncia esto disponveis, podem ser aplicados os testes F
(Snedecor) de homogeneidade de varincias e o teste t (Student) de comparao de mdias, ou
ento realizada a anlise dos desvios em relao aos valores de referncia. Normalmente, partese da hiptese em que a matriz no afeta o sinal do analito em nveis de concentraes elevados
ou acima da faixa. Preparam-se dois grupos de amostras de teste, um com a matriz e o outro
sem, ambos os grupos com a concentrao do analito idntica em cada nvel de concentrao de
interesse. O nmero de amostras paralelas em cada nvel de concentrao deve ser maior ou
igual a 7 (sete) para permitir o uso adequado dos modelos estatsticos e proporcionar uma
comparao vlida. Primeiro, faz-se o teste F para verificar se as varincias das amostras podem
ser consideradas iguais, calculando-se:
s12
F calclado = s22
(1)
onde s12 e s22 so as varincias de cada amostra, com a maior varincia no numerador. Ao
mesmo tempo, obtm-se o valor de Ftabelado, com (n1-1) graus de liberdade no numerador e (n2-1)
graus de liberdade no denominador; usualmente, adota-se um nvel de confiana de 95%. Tem-se
dois casos:
(I) se F calculado for menor que o F tabelado, as varincias podem ser consideradas iguais, isto
, a matriz no tem um efeito importante sobre a preciso do mtodo na faixa de concentrao
em estudo. Neste caso, os desvios-padro dos grupos de testes podem ser agrupados e a
igualdade das mdias dos dois conjuntos de amostras pode ser testada com a distribuio t de
Student.
Desse modo, calculam-se:
a) x1 e x 2 = mdias das respostas dos analitos em amostras com matriz e sem
matriz, respectivamente, na mesma faixa de concentraes;
b) s1 e s2 = desvios-padro das respostas desses mesmos analitos;
c) o valor:
tcalculado =
(n1 1) s 21 + (n 2 1) s 22
onde s =
(n1 + n 2 2)
2
x1 x2
1
1
s 2 +
n1 n2
(2)
e n1 e n2 so os tamanhos das amostras 1 e 2.
O valor de ttabelado obtido a partir da tabela da distribuio de Student para (n1 + n2 2) graus de
liberdade e a confiana desejada.
(II) se F calculado for maior que o F tabelado, as varincias no podem ser consideradas iguais,
ou seja, a matriz tem um efeito importante sobre a preciso do mtodo na faixa de concentrao
em estudo, e o tcalculado :
09/24
x1 x2
t calculado =
s12
+
n1
(3)
s 22
n2
Neste caso, para a obteno do t tabelado, o nmero de graus de liberdade () igual a:
(s
(s
2
1
2
1
n1 + s 22 n 2
n1
n1 + 1
) + (s
2
2
2
n2
(4)
n2 + 1
-2
Quando interessar somente uma faixa relativamente estreita de concentraes, ou se o erro

analtico devido a uma possvel dependncia com a concentrao for desprezvel, o teste t
denominado com dados pareados pode ser utilizado para verificar efeitos de matriz. Nesse
caso, tem-se:
x n
t calculado = d
sd
(5)
onde:
[(d
n
(d i1 d i 2 )
i =1
xd =
(6)
sd =
i =1
i1
d i2 ) x d
n 1
(7)
Nas equaes, x d = mdia das diferenas entre as respostas dos pares de analitos;
d i1 , d i 2 = respostas do analito para o par de amostras com matriz e sem matriz; s d = desvio
padro das diferenas e n = nmero de pares. O valor de t tabelado obtido da distribuio t de
Student com (n-1) graus de liberdade e a confiana desejada.
Se o valor de t calculado for menor que o t tabelado, pode-se concluir que a matriz no afeta o
ensaio. Se o valor de t for maior que o t tabelado, pode-se concluir que a matriz tem um efeito
estatisticamente significante sobre o resultado do ensaio.
Se a matriz sem o analito no estiver disponvel, a seletividade pode ser testada comparando-se
as inclinaes das curvas de adio padro. Isto feito preparando-se dois grupos de amostras
que contenham a mesma adio de analito para cada nvel de concentrao. Um grupo inclui a
matriz da amostra (contendo um nvel bsico do analito) e o outro grupo no inclui a matriz de
amostra. Os resultados destas amostras podem ser representados em um mesmo grfico em
funo da concentrao de analito adicionado. Se as inclinaes destas duas curvas de regresso
linear forem as mesmas, o nico efeito de matriz presente a interferncia natural causada pelo
nvel bsico do analito.
Outros testes so encontrados na literatura e podem ser bastante teis para a aplicao dos dados
dos laboratrios.
10/24
10.2 Linearidade
Linearidade a habilidade de um mtodo analtico em produzir resultados que sejam diretamente
proporcionais concentrao do analito em amostras, em uma dada faixa de concentrao. A
quantificao requer que se conhea a dependncia entre a resposta medida e a concentrao do
analito. A linearidade obtida por padronizao interna ou externa e formulada como expresso
matemtica usada para o clculo da concentrao do analito a ser determinado na amostra real.
A equao da reta que relaciona as duas variveis :
y = ax + b
(8)
Onde:
y = resposta medida (absorbncia, altura ou rea do pico, etc.);
x = concentrao;
a = inclinao da curva de calibrao = sensibilidade;
b = interseo com o eixo y, quando x = 0.
A linearidade de um mtodo pode ser observada pelo grfico dos resultados dos ensaios em
funo da concentrao do analito ou ento calculada a partir da equao da regresso linear,
determinada pelo mtodo dos mnimos quadrados.
O coeficiente de correlao linear (r) freqentemente usado para indicar o quanto pode ser
considerada adequada a reta como modelo matemtico.
Nota: Convm avaliar a homocedasticidade(homogeneidade de variveis)
Como os desvios da linearidade so muitas vezes difceis de serem detectados visualmente,
pode-se verificar a sua adequao por meio do clculo dos resduos entre os valores medidos e os
valores calculados a partir da equao de regresso. Calcula-se o valor de t por:
t calculado =
resduo
sr n
(9)
onde:
resduo = |xmedido xcalculado|
sr = desvio padro dos resduos
n = nmero de pontos
Se o valor de t calculado para um ponto duvidoso de uma curva de calibrao for menor ou igual
ao valor de t unilateral, para a confiana desejada e (n-1) graus de liberdade, considera-se que o
ponto pertence curva e a faixa at ele linear:
A maioria dos equipamentos de deteco existentes estabelece a sua faixa dinmica linear.
necessrio, entretanto, verificar at que ponto a faixa de concentrao do analito coincide com a
faixa dinmica linear e assegurar que nenhum outro fenmeno tenha impacto indesejvel na
resposta.
Alguns procedimentos analticos no demonstram linearidade mesmo aps qualquer
transformao. Nesses casos, a resposta analtica pode ser descrita por uma funo adequada da
concentrao do analito na amostra.
10.3 Faixa de Trabalho e Faixa Linear de Trabalho
Para qualquer mtodo quantitativo, existe uma faixa de concentraes do analito ou valores da
propriedade no qual o mtodo pode ser aplicado.
11/24
No limite inferior da faixa de concentrao, os fatores limitantes so os valores dos limites de

deteco e de quantificao. No limite superior, os fatores limitantes dependem do sistema de
resposta do equipamento de medio.
Dentro da faixa de trabalho pode existir uma faixa de resposta linear e dentro desta, a resposta do
sinal ter uma relao linear com o analito ou valor da propriedade. A extenso dessa faixa pode
ser estabelecida durante a avaliao da faixa de trabalho.
A faixa linear de trabalho de um mtodo de ensaio o intervalo entre os nveis inferior e superior
de concentrao do analito no qual foi demonstrado ser possvel a determinao com a preciso,
exatido e linearidade exigidas, sob as condies especificadas para o ensaio. A faixa linear
definida como a faixa de concentraes na qual a sensibilidade pode ser considerada constante e
normalmente expressa nas mesmas unidades do resultado obtido pelo mtodo analtico.
10.3.1 Escolha da faixa de trabalho
Todo experimento de determinao da faixa de trabalho iniciado pela escolha de uma faixa
preliminar. A faixa de trabalho deve cobrir a faixa de aplicao para a qual o ensaio vai ser
usado. A concentrao mais esperada da amostra deve, sempre que possvel, se situar no centro
da faixa de trabalho. Os valores medidos obtidos tm que estar linearmente correlacionados s
concentraes. Isto requer que os valores medidos prximos ao limite inferior da faixa de
trabalho possam ser distinguidos dos brancos dos mtodos. Esse limite inferior deve, portanto,
ser igual ou maior do que o limite de deteco do mtodo. As etapas de diluio e concentrao
devem ser praticadas sem o risco de introduzir erros sistemticos. A varincia dos valores
informados deve ser independente da concentrao. Esta independncia deve ser verificada por
um teste estatstico para a linearidade.
Em geral, sero necessrios vrios pontos de calibrao, de preferncia mais que seis, para
determinar a faixa de trabalho. Na Tabela 1, so apresentadas as metodologias para determinao
das faixas de trabalho e linear.
A relao da resposta do instrumento para a concentrao no tem que ser perfeitamente linear
para um mtodo ser efetivo, mas neste caso, a curva de calibrao deve ser preparada
diariamente.
A faixa de trabalho e a faixa linear podem ser diferentes para cada tipo de amostra, devido ao
efeito das interferncias provenientes da matriz.
12/24
Tabela 1 - Mtodos para determinao da Faixa de Trabalho e Faixa Linear.

N de
Matriz
Procedimento
Replicatas
Etapa (1):
- Branco com adio de Objetivo: identificar inicialmente, por observao
concentraes variadas do visual, a faixa linear aproximada e os limites superior
e inferior da faixa de trabalho.
7 (sete) analito ou,
- Branco da amostra com - Colocar no eixo x as concentraes do analito e no
adio
de
concentraes eixo do y as respostas das medies.
variadas do analito.
- Ir para a etapa (2).
Obs.:
preparar
diferentes
concentraes
de
modo
independente e no alquotas
da mesma soluo me.
Etapa (2):
- Materiais de referncia Objetivo: determinar a faixa de trabalho e confirmar a
(diferentes concentraes), na linearidade.
- Colocar no eixo x as concentraes do analito e no
7 (sete) na faixa linear
eixo do y as respostas das medies.
ou
faixa linear
- Branco da amostra com - Verificar visualmente a existncia de dispersos que
adio
de
concentraes possam interferir na regresso (antes de remover os
variadas do analito, na faixa dispersos fazer determinaes nas proximidades das
concentraes).
linear.
- Calcular os coeficientes da reta de regresso.
- Calcular e fazer o grfico dos valores dos resduos
para cada valor de x (resduo a diferena entre o
valor observado e o valor calculado pela equao da
reta de regresso). A distribuio aleatria em torno
da linha reta confirma a linearidade.
- Ir para a etapa (3).
Etapa (3):
- Branco da amostra com Objetivo: determinar o Limite de Quantificao (LQ),
adio
de
concentraes que efetivamente forma o limite mais baixo da faixa
7 (sete)
variadas do analito, prximas de trabalho.
- Expressar o LQ como a concentrao mais baixa
ao LD
do analito que pode ser determinada com um nvel
aceitvel de incerteza.
Observaes:
Branco = gua reagente
Branco da amostra = matriz da amostra sem o analito de interesse
10.4 Sensibilidade
Sensibilidade um parmetro que demonstra a variao da resposta em funo da concentrao
do analito. Pode ser expressa pela inclinao da reta de regresso de calibrao, conforme a
equao (10) e determinada simultaneamente com os testes de linearidade.
S=
dx
dc
Onde:
S = sensibilidade;
dx = variao da resposta;
dc = variao da concentrao.
(10)
13/24
A sensibilidade depende da natureza do analito e da tcnica de deteco utilizada.

10.5 Limite de Deteco
Quando so realizadas medidas em amostras com baixos nveis do analito ou de uma
propriedade, como por exemplo, anlise de traos, importante saber qual o menor valor de
concentrao do analito ou da propriedade que pode ser detectado pelo mtodo.
A importncia desta determinao e os problemas associados a ela advm do fato de que a
probabilidade de deteco no muda rapidamente de zero para um quando seu limiar
ultrapassado. Os problemas tm sido investigados estatisticamente e diversos critrios de deciso
tm sido propostos. Muitas controvrsias so originadas devido ao fato de no haver atualmente
uma concordncia da terminologia aplicvel. O termo limite de deteco no aceito por
todos, apesar de ser usado em alguns documentos setoriais.
O limite de deteco do equipamento (LDE) definido como a concentrao do analito que
produz um sinal de trs a cinco vezes a razo sinal/rudo do equipamento.
O limite de deteco do mtodo (LD) definido como a concentrao mnima de uma substncia
medida e declarada com 95% ou 99% de confiana de que a concentrao do analito maior que
zero. O LD determinado por meio de anlise completa de uma dada matriz contendo o analito.
O procedimento de determinao do LD aplicado a uma grande variedade de tipos de amostras,
desde a gua reagente (branco) at guas residurias, todas contendo o analito. O LD para um
procedimento analtico pode variar em funo do tipo da amostra. fundamental assegurar-se de
que todas as etapas de processamento do mtodo analtico sejam includas na determinao desse
limite de deteco.
Para a validao de um mtodo analtico, normalmente suficiente fornecer uma indicao do
nvel em que a deteco do analito comea a ficar problemtica., ou seja, Branco + 3s e 0 +
3s , considerando anlise de sete ou mais amostras de branco e de brancos com adio,
respectivamente.
Na Tabela 2 so apresentadas as metodologias para as medies quantitativas do limite de
deteco.
Tabela 2 - Determinao de Limite de Deteco (LD)
N de
Replicatas
7
Matriz
Clculos
Branco da amostra LD = X + t.s onde:

X = mdia dos valores dos
brancos da amostra;
t a abcissa da distribuio de
Student,
dependente
do
tamanho da amostra e do grau
de confiana e,
s = desvio padro dos brancos
da amostra.
Ou
Branco da amostra LD = 0 + t.s
com adio da onde:
menor
t a abcissa da distribuio de
concentrao
Student,
dependente
do
aceitvel do analito tamanho da amostra e do grau
de confiana e,
da amostra, com adio.
Observaes
A mdia e o desvio padro
dos brancos da amostra so
dependentes da matriz..
Vlido somente quando os
valores
dos
brancos
apresentarem um desvio
padro diferente de zero.
A menor concentrao
aceitvel aquela tida como
a concentrao mais baixa
para a qual um grau aceitvel
de incerteza pode ser
alcanado.
14/24
Calcular a varincia (s2 ) e o desvio padro (s) das medies em replicata e calcular o LD como a
seguir:
LDM = t ( n 1, 1 ) . ( s )
(11)
Por exemplo, no caso de se analisar 7 alquotas, temos 7-1 = 6 graus de liberdade de uma matriz
de branco da amostra com adio da menor concentrao aceitvel do analito. Para esses graus
de liberdade, o valor de t unilateral, para 99% de confiana 3,143. O LD ser igual a 3,143
vezes o desvio padro.
O mtodo analtico deve ser especificado e o LD para cada analito deve ser expresso nas
unidades apropriadas, de acordo com o preconizado no mtodo analtico. A matriz da amostra
usada para determinar o LD deve ser identificada.
10.6 Limite de Quantificao
O Limite de Quantificao a menor concentrao do analito que pode ser determinada com um
nvel aceitvel de exatido e preciso. Pode ser considerado como sendo a concentrao do
analito correspondente ao valor da mdia do branco mais 5, 6 ou 10 desvios-padro. Algumas
vezes tambm denominado Limite de Determinao. Na prtica, corresponde normalmente
ao padro de calibrao de menor concentrao (excluindo o branco). Este limite, aps ter sido
determinado, deve ser testado para averiguar se a exatido e a preciso conseguidas so
satisfatrias. A Tabela 3 apresenta um resumo do mtodo de determinao do Limite de
Quantificao. A diferena entre os Limites de Deteco e de Quantificao a ordem de
grandeza das incertezas associadas
Tabela 3 Determinao do Limite de Quantificao (LQ)
N Replicatas
Matriz
Determinao
Branco da amostra
7
LQ = X + 5s ou LQ = X + 6s
Branco com adio de

concentraes variadas
do analito, prximas ao
LD
ou LQ = X + 10s, onde:
X = mdia dos valores dos brancos
- Medir, uma vez cada, 7 replicatas independentes a
cada nvel de concentrao.
- Calcular o desvio padro s do valor do analito, para
cada concentrao.
- Fazer o grfico s versus concentrao e atribuir um
valor para o LQ, por inspeo.
- Expressar o LQ como a concentrao mais baixa do
analito que pode ser determinada com um nvel
aceitvel de confiana.
10.7 Exatido e Tendncia (bias)

Exatido do mtodo definida como sendo a concordncia entre o resultado de um ensaio e o
valor de referncia aceito como convencionalmente verdadeiro. Os processos normalmente
utilizados para avaliar a exatido de um mtodo so, entre outros: uso de materiais de referncia,
participao em comparaes interlaboratoriais e realizao de ensaios de recuperao.
A exatido, quando aplicada a uma srie de resultados de ensaio, implica numa combinao de
componentes de erros aleatrios e sistemticos.
15/24
A determinao da tendncia total com relao aos valores de referncia apropriados

importante no estabelecimento da rastreabilidade aos padres reconhecidos. A tendncia pode
valorobservado
.
ser expressa como recuperao analtica, definida como
valoresperado
Esta tendncia deve ser corrigida ou demonstrada ser desprezvel, mas em ambos os casos, a
incerteza associada com a determinao da tendncia permanece como um componente
essencial da incerteza global.
10.7.1 Materiais de referncia certificados (MRC)
Sempre que possvel, os materiais de referncia certificados devem ser utilizados no processo de
validao de um mtodo de ensaio. Um MRC possui um valor de concentrao, ou outra
grandeza, para cada parmetro e uma incerteza associada. muito importante, portanto, que o
fornecimento desses MRC seja realizado por organismos reconhecidos e confiveis (como por
exemplo: NIST, LGC, etc).
O uso correto dos MRC consiste na sua anlise para avaliar o desempenho do laboratrio.
Quando o valor obtido no estiver dentro do intervalo da regio de aceitao para o valor
certificado, o laboratrio deve procurar as causas desse desvio e procurar elimin-las.
Na avaliao da exatido utilizando um material de referncia, os valores obtidos pelo
laboratrio mdia e o desvio padro de uma srie de ensaios em replicata devem ser
comparados com os valores certificados do material de referncia. Para esta comparao podem
ser utilizados diversos critrios de deciso, entre os quais:
erro relativo;
teste de hipteses;
ndice z (z Score), e
erro normalizado.
Nos processos de comparao, caso no se alcancem as condies satisfatrias, deve ser efetuado
um plano de aes corretivas para verificar as causas e reavaliar o ensaio.
10.7.1.1 Erro relativo
Uma forma de avaliar a exatido do mtodo por meio do clculo do erro relativo (ER),
expresso em percentagem por meio da expresso:
ER =
X lab X v
. 100
Xv
(12)
Onde:
Xlab = valor obtido experimentalmente ou mdia aritmtica de valores obtidos
Xv = valor aceito como verdadeiro (valor certificado do MRC)
10.7.1.2 Teste de hiptese
Vide descrio do teste no item 10.1.2 deste documento.
10.7.1.3 ndice Z (Z score)
O ndice Z tambm um modo de avaliar o desempenho do laboratrio, utilizando MRC.
Z=
( X lab X v )
s
(13)
Onde:
Xlab = valor obtido pelo laboratrio;
Xv = valor aceito como verdadeiro (valor certificado do MRC);
s = desvio-padro do ensaio de proficincia.
A avaliao pode ser feita (ISO Guia 43) de acordo com o seguinte critrio de deciso:
|Z| 2 => resultado satisfatrio;
2 < |Z| 3 => resultado questionvel;
|Z| > 3 => resultado insatisfatrio.
16/24
10.7.1.4 Erro normalizado

Caso o laboratrio calcule a incerteza do seu resultado (Ulab), o valor verdadeiro (Xv) deve estar
dentro do intervalo Xlab. incerteza expandida. Quando isso no acontece, esse intervalo pode
estar subestimado. Nesses casos empregado o conceito de erro normalizado (En):
En =
( X lab X v )
2
2
U lab
+ U ref
(14)
Onde:
Uref incerteza associada ao valor verdadeiro
Se | En | 1, ento pode-se considerar que o resultado do laboratrio seja adequado.
10.7.2 Recuperao
A recuperao do analito pode ser estimada pela anlise de amostras adicionadas com
quantidades conhecidas do mesmo (spike). As amostras podem ser adicionadas com o analito em
pelo menos trs diferentes concentraes, por exemplo, prximo ao limite de deteco, prximo
concentrao mxima permissvel e em uma concentrao prxima mdia da faixa de uso do
mtodo. A limitao deste procedimento a de que o analito adicionado no est
necessariamente na mesma forma que a presente na amostra. A presena de analitos adicionados
em uma forma mais facilmente detectvel pode ocasionar avaliaes excessivamente otimistas
da recuperao.
A recuperao calculada segundo:
C C2
100
(15)
Recuperao (%) = 1
C3
onde: C1 = concentrao determinada na amostra adicionada,
C2 = concentrao determinada na amostra no adicionada,
C3 = concentrao adicionada.
10.8 Preciso
Preciso um termo geral para avaliar a disperso de resultados entre ensaios independentes,
repetidos de uma mesma amostra, amostras semelhantes ou padres, em condies definidas.
normalmente determinada para circunstncias especficas de medio e as duas formas mais
comuns de express-la so por meio da repetitividade e a reprodutibilidade, sendo usualmente
expressas pelo desvio-padro.
Ambas repetitividade e reprodutibilidade, so geralmente dependentes da concentrao do
analito e, deste modo, devem ser determinadas para um diferente nmero de concentraes e, em
casos relevantes, a relao entre preciso e a concentrao do analito deve ser estabelecida. O
desvio padro relativo (DPR) ou coeficiente de variao (CV%) pode ser mais til neste caso,
pois foi normalizado com base na concentrao e deste modo ele praticamente constante ao
longo da faixa de interesse, contanto que esta no seja muito grande:
DPR = DP/CMD x 100
Onde:
DP = desvio padro;
CMD = concentrao mdia determinada
17/24
10.8.1 Repetitividade
o grau de concordncia entre os resultados de medies sucessivas de um mesmo mensurando,
efetuadas sob as mesmas condies de medio, chamadas de condies de repetitividade, a
seguir:
Mesmo procedimento de medio;
Mesmo observador;
Mesmo instrumento usado sob mesmas condies;
Mesmo local, e
Repeties em curto espao de tempo.
A repetitividade pode ser expressa quantitativamente em termos da caracterstica da disperso
dos resultados e pode ser determinada por meio da anlise de padres, material de referncia ou
adio a branco em vrias concentraes na faixa de trabalho. Sugere-se 7 ou mais repeties
para o clculo do desvio padro para cada concentrao, chamado desvio padro de
repetitividade.
10.8.1.1 Limite de repetitividade r
A partir do desvio padro dos resultados dos ensaios sob condio de repetitividade
aconselhvel calcular o limite de repetitividade r que capacita o analista a decidir se a
diferena entre anlises duplicatas de uma amostra, determinada sob condies de repetitividade,
significante.
O limite de repetitividade (r) dado por:
r = t 2 . Sr
(16)
ou, para um nvel de significncia de 95%:

r = 2,8 . S r
(17)
sendo: S r = desvio-padro de repetitividade associada aos resultados considerados;

Caso o laboratrio obtenha mais de dois resultados, o limite de repetitividade (r) calculado de
acordo com a Norma ISO 5725-6.
Nota: Convm avaliar a homocedasticidade(homogeneidade de variveis)
10.8.2 Reprodutibilidade
o grau de concordncia entre os resultados das medies de um mesmo mensurando, efetuadas
sob condies variadas de medio.
Embora a reprodutibilidade no seja um componente de validao de mtodo executado por um
nico laboratrio, considerada importante quando um laboratrio busca a verificao do
desempenho dos seus mtodos em relao aos dados de validao obtidos por meio de
comparao interlaboratorial.
Preciso sob condies de reprodutibilidade, por exemplo, onde resultados dos ensaios so
obtidos com o mesmo mtodo, variando-se laboratrios, operadores ou equipamentos
denominada preciso intermediria (ver 10.8.3).
A partir do desvio padro obtido sob condies de reprodutibilidade possvel calcular o limite
de reprodutibilidade R, o qual permite ao analista decidir se a diferena entre os valores da
duplicata das amostras analisadas sob condies de reprodutibilidade significante.
18/24
10.8.2.1 Limite de reprodutibilidade R

Do mesmo modo que para repetitividade, o limite de reprodutibilidade (R), dado por:
R = t 2 . SR
(18)
ou, para um nvel de significncia de 95%:

R = 2,8 . S R2
(19)
sendo: S R2 - varincia de reprodutibilidade associada aos resultados considerados, para cada

laboratrio;
O clculo da reprodutibilidade efetuado para cada nvel, separadamente, aps eliminao dos
valores dispersos (ISO 5725-2, ASTM E178)
10.8.3 Preciso intermediria
A preciso intermediria, tambm denominada de reprodutibilidade interna, refere-se preciso
avaliada sobre a mesma amostra, amostras idnticas ou padres, utilizando o mesmo mtodo, no
mesmo laboratrio, mas definindo exatamente quais as condies a variar (uma ou mais), tais
como:
diferentes analistas;
diferentes equipamentos;
diferentes tempos.
Esta medida de preciso reconhecida como a mais representativa da variabilidade dos
resultados em um laboratrio e, como tal, mais aconselhvel de usar.
Para determinar a preciso intermediria de um mtodo, efetuam-se n medies em replicata,
ou em ensaio nico, sobre a amostra, nas condies pr-definidas, pois existem vrios mtodos
de estudar este tipo de preciso. Quando aplicvel, este procedimento repetido sobre outras
amostras, abrangendo outros nveis de concentrao.
Na maioria dos casos, o valor de preciso intermediria funo do nvel de concentrao do
ensaio e o seu clculo efetuado, preferencialmente, a partir dos resultados obtidos, aps
eliminao dos resultados dispersos. A visualizao grfica dos valores tambm pode ser til
para identificar a existncia de valores dispersos.
Dependendo do ensaio e do tipo de aplicao do estudo da preciso intermediria, existem vrios
mtodos para determinao e controle desse parmetro de qualidade, tais como:
por meio de grfico de controle de amplitude, que podero ser aplicados para
replicatas de amostra e para padres estveis ao longo do tempo;
por meio da expresso:
Si ( j , k ) =
1
t (n 1)
(y
t
j =1 k =1
jk
yj
(20)
Onde: Si( ) - desvio padro de preciso intermediria (onde os smbolos relativos s condies
intermedirias de preciso podem aparecer entre parnteses, ex: Si (T.O.) significa tempo e
operadores diferentes)
t total de amostras ensaiadas (no confundir com o t de Student);
n total de ensaios efetuados por amostra;
j n da amostra, j = 1, t
k n do ensaio da amostra j, k = 1, n
yjk valor do resultado k para a amostra j
y j - representa a mdia aritmtica dos resultados da amostra j.
19/24
Nesse caso, a determinao da preciso feita por meio de t valores de n ensaios de amostras ou
padres. A preciso intermediria baseia-se na disperso entre ensaios. recomendado que o
valor t (n-1), seja, pelo menos, igual a 15.
Quando n = 2 a equao (17) toma a forma:
Si ( j , k ) =
1 t
. ( y j1 y j 2 ) 2
2.t j =1
(21)
Onde: y j1 - primeiro resultado obtido para a amostra j;

y j 2 - segundo resultado obtido para a amostra j
Um mtodo simplificado para estimar a preciso intermediria baseia-se na execuo de n
medies (n 15), em condies pr-definidas, sobre:
uma mesma amostra;
amostras supostamente idnticas;
padres.
A estimativa da preciso internediria Si ( ), neste caso, dada por:
Si ( j , k ) =
1 n
( yk
n 1 k =1
y)2
(22)
em que Si ( ) o desvio padro de preciso intermediria relativo a esse grupo, onde os smbolos
relativos s condies intermedirias de preciso podem aparecer entre parntesis (Ex: Si (T.O)
significa tempo e Operadores diferentes). Este mtodo revela-se menos eficiente quando
comparado com os anteriores.
Onde:
n n de amostras / padres;
y k - cada resultado obtido;
y - representa a mdia aritmtica de cada resultado obtido.
Recomenda-se a leitura da Norma ISO 5725-3 para aprofundar conhecimento nesta rea. Na
Norma ISO 5725-6 so expostos vrios exemplos prticos de estimativa e controle da preciso
intermediria, por meio de grficos de controle.
Na Tabela 4, est apresentado um resumo da determinao da repetitividade, reprodutibilidade e
preciso intermediria.
20/24
Tabela 4 Repetitividade e Reprodutibilidade

Analisar:
Repeties
Padres,
materiais
de (independentes)
referncia ou amostras
branco fortificadas a vrias
concentraes ao longo da
faixa de trabalho
a) Mesmo analista,
7
equipamento, laboratrio,
perodo curto
b) Analistas e equipamentos
7
diferentes, mesmo
laboratrio, perodo
estendido (preciso
intermediria)
c) Analistas, equipamentos e
7
laboratrios diferentes,
perodo estendido
O qu calcular a partir Comentrios

dos dados ?
Determinar o desviopadro (s) de cada

concentrao
concentrao
Determinar o desvio-padro
da repetitividade de cada
concentrao.
da reprodutibilidade
intralaboratorial de cada
concentrao.

concentrao
da reprodutibilidade
interlaboratorial de cada
concentrao.
Requer estudo colaborativo
10.8.4 Comparao da preciso entre mtodos

Considerando a exatido dos mtodos adequada, quando se pretende avaliar se dois mtodos (A
e B) tem diferenas significativas entre si, em termos de preciso, pode-se recorrer ao teste F.
Este baseia-se no clculo da razo entre as varincias dos dois mtodos (Fcalc = SA2/SB2),
colocando-se a maior no numerador, de modo que a razo seja maior ou igual a um. Em seguida,
compara-se este valor obtido com o valor tabelado de F. Se Fcalculado Ftabelaado, os dois mtodos
no apresentam diferenas significativas entre si, relativamente s suas precises.
10.9 Robustez
A robustez de um mtodo de ensaio mede a sensibilidade que este apresenta face a pequenas
variaes. Um mtodo diz-se robusto se revelar praticamente insensvel a pequenas variaes
que possam ocorrer quando esse est sendo executado.
Para determinar a robustez de um mtodo de ensaio, pode-se recorrer ao teste de Youden. Tratase de um teste que permite no s avaliar a robustez do mtodo, como tambm ordenar a
influncia de cada uma das variaes nos resultados finais, indicando qual o tipo de influncia de
cada uma dessas variaes. Convm salientar que quanto maior for a robustez de um mtodo,
maior ser a confiana desse relacionamento sua preciso.
Nesse mtodo so realizados 8 ensaios, separados para determinar os efeitos da variao das 7
diferentes etapas, no procedimento analtico. As oito medies podem ser realizadas numa
ordem aleatria. Para ilustrar, a Tabela 5 mostra um exemplo dos efeitos das alteraes nos
fatores a serem determinados.
21/24
Tabela 5. Exemplo de variao nos fatores para a determinao da robustez

Fator
Nominal
Variao
Tempo de agitao
10 min.
12 min.
Tamanho da amostra
5g
10g
Concentrao cida
1M
1,1M
Temperatura de aquecimento
100C
95C
Tempo de aquecimento
5 min.
10 min.
Agitao
sim
No
PH
6,0
6,5
Fonte: APHA, AWWA, WEF. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater,
21st Edition, 2005
Para a determinao da robustez, denominar os fatores nominais por letras maisculas, de A a G
e a variao, por letra minsculas. Preparar uma tabela idntica Tabela 6.
Tabela 6. Matriz dos fatores para determinao da robustez do mtodo
Valor do fator
Combinao ensaiada
1
2
3
4
5
6
7
8
A ou a
A
A
A
A
a
a
a
a
B ou b
B
B
b
b
B
B
b
b
C ou c
C
c
C
c
C
c
C
c
D ou d
D
D
d
d
d
d
D
D
E ou e
E
e
E
e
e
E
e
E
F ou f
F
f
f
F
F
f
f
F
G ou g
G
g
g
G
g
G
G
g
Resultado
S
t
u
v
w
x
y
z
Fonte: APHA, AWWA, WEF. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater,
21st Edition, 2005
Se a combinao 1 for ensaiada, o resultado ser s. Se a combinao 2 for ensaiada ser t e assim
sucessivamente at que todas as 8 combinaes tenham sido ensaiadas. Para determinar a
variao de um fator, encontrar os 4 valores correspondentes s letras maisculas e as 4
minsculas e comparar as mdias dos dois grupos. Por exemplo, ao calcular as alteraes de C
s+u+w+ y
t+v+x+z
para c, usar os resultados:
e
.
4
4
No caso acima, o efeito do fator C/c ser:
Efeito C/c =
s+u+w+ y t +v+ x+ z
4
4
Calcular todos os 7 pares para obter 7 diferenas, que podem ser ordenados para revelar aqueles
com efeito significante no resultado.
Se forem investigados menos que sete fatores, eliminar simplesmente as colunas excedentes.
Entretanto, para cada situao, consultar um estatstico para avaliar a variabilidade da medio
Aps crtica dos resultados obtidos, fazer um controle mais rigoroso dos fatores de maior
influncia.
Se no houver diferena significativa, calcular a mdia e o desvio padro dos 8 resultados, de s
at z. O desvio padro uma estimativa realista da preciso do mtodo.
22/24
10.10 Incerteza de Medio

Os estudos de validao produzem dados de desempenho global do mtodo e fatores de
influncia individuais que podem ser aplicados estimativa da incerteza de medio associada
aos resultados do mtodo em rotina.
Informaes detalhadas sobre incerteza de medio podem ser encontradas nos documentos
listados no item 4 - Documentos de Referncia.
11 DOCUMENTAO DE MTODOS VALIDADOS
Todos os dados relevantes no estudo de validao de um mtodo, como o planejamento,
experimentos e resultados obtidos, devem ser documentados e registrados de forma a possibilitar
a rastreabilidade de todo o processo. Documentaes que registrem etapas da validao so
necessrias tambm para fins de avaliao e podem ser exigidas por razes contratuais ou at
mesmo por organismos regulamentadores.
Depois de cumpridas todas as etapas do processo de validao, importante elaborar o
procedimento operacional de forma que o mtodo possa ser implementado de maneira clara e
sem ambigidades. A documentao apropriada auxilia na aplicao consistente do mtodo,
possibilitando a sua execuo conforme descrito; caso contrrio o desempenho real do mtodo
no ir corresponder quele previsto nos dados de validao. Portanto, a documentao deve
minimizar a introduo de variao acidental no mtodo.
prefervel que, ao se escrever um mtodo de ensaio, as informaes sejam descritas, tanto
quanto possvel, na ordem em que o usurio vai precisar delas. No se pode assumir que todos
iro entender como funciona o mtodo com a mesma profundidade do tcnico que o desenvolveu
e documentou. Uma maneira prtica de testar a documentao pedir a um outro tcnico
competente para ler com ateno o procedimento e executar o ensaio. Se corresponder ao
esperado, ento provvel que o mtodo possa ser utilizado por vrios tcnicos com resultados
consistentes. Caso contrrio pode ser necessrio reescrever o procedimento com mais detalhes
para evitar ambigidades.
Os mtodos documentados formam uma parte importante do sistema da qualidade do laboratrio
e devem estar sujeitos a um controle eficaz de documentos, assegurando desse modo que
somente mtodos e procedimentos validados sejam utilizados. O mtodo documentado deve
informar quando foi autorizado para uso.
Convm que um procedimento de ensaio seja coerente, claro, correto e to completo quanto
necessrio, dentro dos limites estabelecidos pelo seu campo de aplicao. Um formato
padronizado assegura que nenhum ponto importante foi esquecido, que as informaes a serem
includas no procedimento so fornecidas sempre na mesma ordem e que qualquer assunto
desejado pode ser encontrado rapidamente.
Na padronizao do formato dos mtodos validados, sugere-se utilizar a ABNT ISO/IEC
Diretiva Parte 3, a Norma ISO 78/2, alm dos requisitos da NBR ISO/IEC 17025 para a
sistemtica de controle de documentos do laboratrio.
12 ITENS REVISADOS
Reviso 01
Includo texto complementando o item 11.1.2 e introduzindo os itens 11.2 e 11.2.1 (incio),
que foram inadvertidamente suprimidos na edio da reviso anterior.
Reviso 02
Reviso geral do documento.
------------MOD-SEGEQ-002 - Rev. 00 - Apr.JUL/06 - Pag.02/02
23/24
ANEXO RELAO DOS PARTICIPANTES DA ELABORAO DESTE DOCUMENTO
De forma a auxiliar aos laboratrios de ensaios qumicos, especialmente os postulantes

acreditao, na tarefa de validar os mtodos por eles desenvolvidos, a Diviso de
Credenciamento de Laboratrios (DICLA) da CGCRE/INMETRO reuniu a sua Comisso
Tcnica de Qumica (CT-05), congregando especialistas, abaixo listados, que dedicaram o seu
tempo de trabalho elaborao e reviso deste Documento.
A DICLA agradece pela contribuio prestada no apoio ao fortalecimento da atividade de
acreditao de laboratrios.
Snia Elisa Pereira (Coordenadora do trabalho)
Instituto Nacional de Tecnologia - INT
Suzana Saboia de Moura
INMETRO / Diviso de Credenciamento de Laboratrios
Eduardo Castello Branco T. Guimares
UERJ / LABCON
Margareth Westin D. de Azevedo
CETEC - Fundao Centro Tecnolgico de Minas Gerais
Lina Yamachita Oliveras
CIENTEC/RS
Tnia Simes
EMBRAPA / CTAA
Alfredo Rodrigues de Oliveira
Hidroqumica
Vanderla de Souza
INMETRO / Diviso de Metrologia Qumica
Albert Hartmann
Millennium Chemicals
Lcia Helena Noanta de Souza
PETROBRAS / CENPES
Vera Harcar
Rede de Tecnologia do Rio de Janeiro
Srgio Motta
SENAI / CETIND
Hlio Lionel
Especialista em Qumica do Petrleo
Kikue Higashi
Especialista em Qumica Ambiental

Paulo Afonso Lopes da Silva
Ph. D., Estatstico
Reginaldo Ramos
Walderez Bindilatti
Qumica
__________________________
Membros do Grupo Tcnico responsvel pela reviso 02:
Eduardo Castello Branco T. Guimares (Coordenador do trabalho)
UERJ / LABCON
Akie Kawakami vila
FIOCRUZ / Biomanguinhos
Alfredo Rodriguez de Oliveira
Ilse Maria Guilhermino Lemos
Especialista em Qumica do Petrleo
Kikue Higashi
Olga Benrio Ramos Leal
Patrcia Ritter Martins
PETROBRAS / CENPES
Com a colaborao de:
Paulo Afonso
Ph. D., Estatstico
Renata M. Borges
24/24

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Normalizao e Qualidade Industrial

ORIENTAO SOBRE VALIDAO DE

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RESOLUO RE n 899, de 29/05/03, da ANVISA Guia para Validao de Mtodos

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VALIDAO DE MTODOS (ABNT NBR ISO/IEC 17025)

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Fazer experimentos completos de validao;

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Na prtica, diferentes testes de especificidade e seletividade tentam abordar o mesmo problema:

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e n1 e n2 so os tamanhos das amostras 1 e 2.

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Neste caso, para a obteno do t tabelado, o nmero de graus de liberdade () igual a:

Quando interessar somente uma faixa relativamente estreita de concentraes, ou se o erro

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No limite inferior da faixa de concentrao, os fatores limitantes so os valores dos limites de

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Tabela 1 - Mtodos para determinao da Faixa de Trabalho e Faixa Linear.

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A sensibilidade depende da natureza do analito e da tcnica de deteco utilizada.

Branco da amostra LD = X + t.s onde:

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Branco com adio de

10.7 Exatido e Tendncia (bias)

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A determinao da tendncia total com relao aos valores de referncia apropriados

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10.7.1.4 Erro normalizado

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ou, para um nvel de significncia de 95%:

sendo: S r = desvio-padro de repetitividade associada aos resultados considerados;

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10.8.2.1 Limite de reprodutibilidade R

ou, para um nvel de significncia de 95%:

sendo: S R2 - varincia de reprodutibilidade associada aos resultados considerados, para cada

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Onde: y j1 - primeiro resultado obtido para a amostra j;

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