Validação de Método

O que é Validação de Método

A validação de metodo é a confirmação por exame e o fornecimento de evidência objectiva de que

as especificações para um uso pretendido são cumpridas, ou seja, A validação de método é o
processo usado para confirmar que o procedimento analítico empregado para um uso específico é
adequado para o uso pretendido (Brown, 2008).

O processo de fornecer evidência documentada de que o método faz o que se destina a fazer
serve para garantir que uma metodologia analítica seja:

 Exato;

 Específico;

 Reprodutível.
Porque precisamos validar métodos

Os resultados analíticos variam:

 Por causa do desvio inevitável durante a medição;

 Por causa da falta de homogeneidade entre as amostras;

 Por causa das interferências;

 Porque as medidas tomadas podem ser diferentes.

N.B: As variações estão sempre presentes, mas a questão principal é: quanta

variação deve ser aceitável como resultado do método utilizado?
Finalidade da Validação do Método

 A validação se preocupa em assegurar que um processo de medição produza

medições válidas;

 os resultados da validação do método podem ser usados ​para julgar a qualidade,

confiabilidade e consistência do método analítico.
ISO 15189: 5.5 Processo de Exame

 Verificação dos procedimentos de exame;

 Validação de procedimentos de exame;

 Incerteza de medição de valores quantitativos medidos.

 Intervalo de referência biologica ou valor de decisão clínica;

 Documentação dos procedimentos de exame.

ISO 15 189: 5.5.1.1 Em geral

 O laboratório deve selecionar os procedimentos de exame que foram validados

para o uso pretendido;

 A identidade das pessoas que realizam atividades nos processos de exame deve
ser registrada;

 Os requisitos especificados (especificações de desempenho) para cada

procedimento de exame devem estar relacionados ao uso pretendido desse
exame.
Verificação do método versus validação

 Validação (ISO15189:3.26): é confirmação, através da disponibilização de evidência

objectiva, de que foram cumpridos os requisitos para uma utlização ou aplicação
pretendida.

 Verificação (ISO15189:3.27), é confirmação, atraves da disponibilização de evidência

objectiva, de que os requisitos especificados foram cumpridos.
5.5.1.2 Verificação dos procedimentos de exame

 Os procedimentos de exame validados ​sem modificação devem ser objecto de verificação independente pelo

laboratório antes de serem introduzidos na rotina;

 O laboratório deve obter as informações do fabricante/ quem desenvolvedor o método, para confirmar as

características de desempenho do procedimento.

 A verificação independente pelo laboratorio deve confirmar, pela obtenção de evidencias objectivas ( na forma de

caracteristicas de desempenho) que o desempenho pretendido para o procedimento de exame foi cumprido.

 O desempenho pretendido para o procedimento de exame confirmadas durante o processo de verificação deve ser

o relevante para a utilização pretendido dos resultados do exame.

 O laboratório deve documentar o procedimento utilizado para a verificação e registo dos resultados obtidos. O

pessoal com autoridade adequada deve rever os resultados da verificação e registar a sua revisão .
Quando fazemos a verificação do Método

A verificação do metodo fazemos quando:

 Há troca de peça no equipamento com uma nova peça, mas semelhante;

 Quando recebemos um novo equipamento;

 Realocação/mudanca de local de equipamentos.

 Quando um instrumento é atualizado com um novo software;

 Quando o calibrador ou controle de qualidade indica que o desempenho de um

método estabelecido está mudando com o tempo.
Validação de procedimentos de exame

 O laboratório deve validar os procedimentos de exame derivados das seguintes

fontes: a) métodos não padronizados; b) métodos projetados ou
desenvolvidos em laboratório; c) métodos padrão utilizados fora do escopo
pretendido; d) métodos validados posteriormente modificados.
 A validação deve ser tão extensa quanto necessário e confirmar, por meio do
fornecimento de evidências objetivas (na forma de características de
desempenho), que os requisitos específicos para o uso pretendido do exame
foram atendidos.
 O laboratório deve documentar o procedimento utilizado para a validação e
registrar os resultados obtidos. A equipe com autoridade deve revisar os
resultados da validação e registrar a revisão.
 Quando forem feitas alterações em um procedimento de exame validado, a
influência de tais alterações deve ser documentada e, quando apropriado, uma
nova validação deve ser realizada
Validação de Método Qualitativo

Os parametros de interesse são: diagnóstico especifico e diagnóstico sensitivo.

 Diagnostico Sensitivo: é a probabilidade que um teste pode ser positivo dando um

paciente a condição (Sn=positive);

 Diagnostico especifico: é a probabillidade que um teste pode ser negative dando o

paciente sem a condição (Sn=negative).
Como fazer a verificação/ validação do método qualitativo

 Para requeremos verificação no minimo deve-se ter 10 amostra negative e 10

amostras positivas, ambos conhecidos (quanto maior amostra melhor será);

 Para validação no minimo deve-se ter 50 amostras positivas e 50 amostras

negativas

N.B.: Para mesmo laboratorio pode considerar correndo duas vezes as amostras
usando diferentes analistas, e em seguida analisa os resultados de acordo com
Tabela de contigencia:
Tabela de Contigência
Exercise
 A validation of Biocare pregnancy control kit was conducted at your laboratory. 500
pregnant mothers were tested and 479 results came out positive and others negative. A total
of 506 women who were not pregnant were tested and a total of 490 results were negative
and others were positive.
 The acceptability criteria for both Diagnostic sensitivity and diagnostic specificity on 98%.
 Use a contingency table to calculate the validation results.
 What would be your decision after obtaining the validation results?
Critério de aceitabilidade do Método Qualitativo

 Cabe ao laboratório determinar os critérios de aceitabilidade dos resultados.

 Os critérios de aceitabilidade são definidos antes de examinar as amostras.

 Geralmente, alguns laboratórios podem definir seus critérios de aceitabilidade da

seguinte forma

 Sensibilidade: > 95%

 Especificidade: > 95%

N.B: Obrservar limites definidos pelo fabricante (=> limites definidos pelo fabricante)
Validação de métodos quantitativos
 Precisão de medição
 Repetibilidade
 Precisão intermediária
 Veracidade/precisão da medição
 Medição de Intervalo/Linearidade
 Especificidade analítica,
 Incluindo substâncias interferentes,
 Sensibilidade analítica/limite de detecção
 Limite de quantificação

 Incerteza de medição
Conceitos

 Repetibilidade:A repetibilidade é um valor quantitativo que indica o desacordo entre um

conjunto de medições replicadas, quando todas as medições são feitas em condições
idênticas (ou dentro de uma única execução de um procedimento).

 Precisão intermediária (reprodutibilidade intralaboratorial):A precisão dentro do

laboratório é um valor quantitativo que indica o desacordo entre as medições replicadas
ao longo de um tempo mais longo.

 Reprodutibilidade: Um conjunto de condições que inclui diferentes localizações,

operadores, sistemas de medição ou mesmo métodos no mesmo objecto ou em objectos
semelhantes.
Materiais para experimentos de precisão

Os materiais aceitáveis ​para experimentos de precisão incluem: amostras de

controle (além daquelas usadas para avaliar se o ensaio está no controle),
calibradores, amostras de pacientes previamente analisadas,ou materiais
adequados que tenham um valor conhecido.

N.B: Os materiais devem ser representativos das amostras de teste em termos de

concentração de matriz e analito, homogeneidade e estabilidade. Também é
importante medir a precisão nos limites superior e inferior do intervalo de medição.
Verificação do Desempenho de Precisão

A precisão pode ser relatada como:

 um desvio padrão (SD); ou

 um coeficiente de variação (CV%).

 Em ambos os casos, o valor médio também deve ser relatado.

N.B: Valores crescentes do desvio padrão ou coeficiente de variação indicam uma

imprecisão crescente das medições.
Estudo de Validação de Precisão

 Um mínimo de 20 dias de operação aceitáveis ​é geralmente aceitável para

estudos de validação de precisão

 Analise duas execuções por dia (totalizando 40 execuções)

 Dentro de cada corrida, analise duas alíquotas de material de teste para cada
concentração usada.

 Separe as corridas realizadas a cada dia por um mínimo de duas horas.

Cálculo de repetibilidade de Sr
O desvio padrão de uma série de resultados experimentais é uma medida da
repetibilidade do experimento que produz resultados. Quanto menor for o
resultado da repetibilidade, maior é a repetibilidade e maior é a
confiabilidade do resultado.
Limites de precisão

 Ao realizar a validação de precisão,

é necessário estabelecer os limites
de precisão.

 O que se traduz em:

Coêficiente de Correlação

A correlação procura entender é como

uma variável se comporta em um cenário
onde outra está variando, visando
identificar se existe alguma relação entre
a variabilidade de ambas. Embora não
implique em causalidade, o coeficiente
de correlação exprime em números essa
relação, ou seja, quantifica a relação
entre as variáveis.
Regressão linear

 A regressão linear é um procedimento

estatístico projetado para mostrar uma
relação linear entre duas variáveis ​(ou
seja, X e Y), com base na equação para
uma linha reta

 A regressão é usada para mostrar uma

relação entre os valores X e Y, bem como
para prever os valores Y (Y') que
correspondem aos valores X críticos (Xc)
Regressão linear
Erro total

 Definição: É a propriedade duma medição única de um resultado em relação a um

valor verdadeiro. O Erro Total é estimado a partir da medição de amostras
controlo.

 Combinação de erros aleatórios, detetados no controlo de qualidade interno

(imprecisão- cv%), e os erros sistemáticos, detetados pela avaliação externa da
qualidade (exatidão-bias) expressa numa escala nominal.
Erro Total

 Erros aleatorios: afetam a precisao

(reprodutibilidade) dos resultados, podem
quantificar-se pelo desvio padrão e pode ser
reduzido (ex. Leituras fotometricas, pipetagem,
pesagem, etc).

 Erros Sistematicos: afetam a exatidão, podem

quantificar-se pela diferença entre o verdadeiro valor
e o valor médio obtido e pode ser corrigidos e por
vezes praticamente eliminados (ex. Calibração).
Erro Total
Estimativa do Erro Total
Cálculo da Média quadrática CV%
Cálculo da Média quadrática Bias%
Erro total

A determinação do erro total pode ser utilizada na:

 Seleção de novos métodos e/ou sistemas analíticos;

 Avaliação de desempenho de métodos analíticos;

 Avaliação dos resultados do controlo de qualidade interno;

 Avaliação dos resultados de ensaios de avaliação externa

Incerteza de medição ( ISO 15189:2014)

5.5.1.4 Incerteza de medição dos valores quantitativos medidos

 O laboratório deve determiner a incerteza da medição, para cada procedimentos de medição
na fase de exame, utiliizada para reporter os valores quantitativos de amostras dos utentes.
O laboratório deve definer os requisites de desempenho para a incerteza da medição de
cada procedimento de medição e rever regularmente as estimativas da incerteza da
medição.
Incerteza de medição

Incerteza de medição é o parâmetro associado ao resultado da medição, que caracteriza a dispersão de

valores onde o valor verdadeiro se pode encontrar. A incerteza da medição não implica dúvida sobre a
validade de uma medição, pelo contrário, o conhecimento da incerteza implica maior confiança na validade de
um resultado de medição.

Onde:

X - valor medido;

U - incerteza de medição.
Tipos de Incerteza de médição

 Incerteza do tipo A: as estimativas são baseadas em cálculos estatísticos de

uma série de observações (frequentemente testes repetidos do mesmo material);
eles são caracterizados como um desvio padrão. Por exemplo, uma estimativa de
repetibilidade baseada em medições de amostras replicadas.

 Incerteza do tipo B: as estimativas são baseadas em distribuições de

probabilidade assumidas, experiência ou outras informações; eles também podem
ser caracterizados como desvios padrão. Por exemplo, um certificado de
calibração declarando que uma balança tem precisão de 0,1 grama.
Porquê calcular a incerteza da medição

 Laboratórios de medição de referência para obter / manter a acreditação de

acordo com as normas ISO 17025: 2018 e ISO 15195: 2005;

 Laboratório clínico para obter a acreditação de acordo com a ISO NP EN 15189:

2014;

 Permite descrever o desempenho do método

 Permite avaliar o impacto clínico ou contribuição de cada resultado analítico

individual
Cálculo da Incerteza

Resultado Incerteza Val. Referência

[Ureia]= 34 mg/dl ± 3 mg/dl 10 a 50 mg/dl

[Glicose]= 5 mmol/l 10%

Estimativa da Incerteza

 Para um nível de confiança aproximadamente de 95% K=2; e 99% k=3.

 Utilizar no minimo 6 meses de CQI para avaliação do SD e CV%;

 Utilizar pelo menos 2 níveis de controlo.
FIM