FAMA FACULDADE METROPOLITANA DE ANPOLIS

Curso:
Disciplina:
Professor:

Agronomia / Biologia / Eng. Ambiental / Farmcia Perodo:

Visto:
1 Turma:
Botnica / Farmacobotnica
Matutino e Noturno
Aula Prtica
Marcelo Garcez Rodrigues
Data:
05 e 12/02/2014

Aluno(a):

ROTEIRO AULA PRTICA N: 01 ANATOMIA VEGETAL

Noes Bsicas sobre Microtcnica Vegetal
1. INTRODUO:
Ao conjunto de conhecimentos e prticas destinadas a preparar materiais de origem
vegetal para o estudo microscpico, denominamos microtcnica vegetal. Nem sempre fcil
ao pesquisador obter preparaes para o estudo microscpico. Muitas vezes, na preparao de
lminas destinadas microscopia, faz-se necessrio conhecimento de anatomia do vegetal
para a perfeita orientao da pea a ser cortada, segundo a finalidade do estudo.
2. OBJETIVOS:
- Aprender a confeccionar material didtico para posterior utilizao em suas atividades
prticas;
- Aprender a fixar o material botnico, resguardando-o sob a forma de lmina semipermanente.
3. NOES BSICAS:
A microtcnica, como definida por Sass (1940), consiste em 3 atividades bsicas e
importantes:
(1) Preparao dos tecidos vegetais para um estudo microscpico;
(2) O uso correto e hbil do microscpio e instrumentos relacionados para o estudo e
interpretaes detalhadas do material;
(3) Finalmente, anotar e ilustrar os resultados atravs de esquemas.
Para estudos anatmicos, normalmente utiliza-se material vegetal coletado fresco,
que poder ser secionado fresco ou ainda, fixado logo aps a coleta, para sua melhor
conservao. Fixadores so geralmente misturas de reagentes qumicos que promovem a
morte e preservao das clulas, em estado o mais prximo possvel do material in vivo.
Deve-se procurar trabalhar com amostras pequenas, que facilitem a penetrao do fixador,
utilizando-se sempre uma lmina de barbear nova para cort-las. O volume de fixador deve
ser de 20 a 30 vezes o da pea a ser fixada. As principais substncias fixadoras utilizadas so
o formol, cido actico e o lcool (50 ou 70%). Estas substncias podem ser empregadas
isoladamente ou em misturas dependendo dos objetivos do trabalho a ser realizado. Dentre as
inmeras misturas fixadoras existentes a mais amplamente utilizada para fins histolgicos
gerais a conhecida como F.A.A., cuja frmula :
FORMALINA (formol a 40%) ..............................................05 mL
LCOOL 70% .....................................................................90 mL
CIDO ACTICO GLACIAL ...............................................05 mL
Existem casos especficos em que o material deve ser cortado a fresco, isto , sem
estar fixado. Nestes casos, usualmente so realizados testes histoqumicos para a deteco de
diversos componentes estruturais das clulas e seus contedos, com a utilizao de reagentes

especficos para cada caso. Este processo requerido para substncias que se perdem ou se
alteram com a fixao, embora muitas possam tambm ser detectadas em materiais fixados.
Tm-se como exemplos de reagentes o Lugol (deteco de amido), Sudam III e Sudam
IV (deteco de substncias de natureza lipdica, como leos essenciais, cera, etc.), a
floroglucina (deteco de lignina) e o cloreto de zinco iodado (deteco de celulose e amido).
O material fixado e armazenado, dependendo de suas caractersticas e objetivos, pode
ser cortado manualmente com uma lmina de barbear ou navalha, ou ainda ser secionado com
aparelhos especiais denominados micrtomos. Para a utilizao do micrtomo o material deve
ser includo em um bloco (emblocar) de parafina, antes de ser seccionado.

No caso de cortes mo livre, pode ser usado um suporte para segurar e orientar o
material, sendo muito empregada a medula de embaba ou de cenoura (a embaba mais
comum) que dividida em dois semi-cilindros para que o material possa ser colocado entre
ambos de maneira a ser secionado. Isopor e cortia bem macia so recursos tambm utilizados
como suportes na obteno de cortes mo livre. Os cortes obtidos tambm podem ser
armazenados em lcool 70% ou ento corados de vrias maneiras, que tem por finalidade
acentuar os contrastes entre os vrios tipos de clulas e tecidos da planta.
4. TIPOS DE CORTE:
Para visualizarmos as estruturas anatmicas, devermos fazer e manipular os cortes
com cuidado, observando sempre o plano de corte que pode ser:
a. Transversal: Faz-se perpendicularmente ao maior eixo do rgo.

b. Longitudinal: Corte feito paralelamente ao maior eixo do rgo.

Quando o rgo cilndrico, o corte longitudinal pode ser:
Tangencial, tangente ao raio cilindro;

Radial, passando pelo dimetro ou raio.

c. Paradrmico: paralelo superfcie do rgo e superficial. Utilizado

principalmente em estudos dos tecidos de revestimento (folhas).

5. PREPARAO MICROSCPICA:
No caso de lminas permanentes, o material corado desidratado em srie etlica
(bateria de lcool etlico em concentraes crescentes at o absoluto), transferido para uma
mistura de lcool absoluto e xilol na proporo 1:1 e, finalmente, para o xilol puro, sendo
ento montados em blsamo de Canad (oleoresina natural) ou em resinas sintticas (que so
os meios de incluso mais empregados) entre lmina e lamnula.
Nas lminas semi-permanentes, as seces no so desidratadas aps a colorao,
sendo ento montadas em um meio hidratado (gua, gelatina glicerinada, glicerina, corante)
vedando-se a preparao com esmalte incolor.
Os corantes so empregados em combinaes duplas ou triplas, que permitem
diferenciar os tecidos e identificar diversas estruturas e organelas.
6. TCNICA GERAL PARA MONTAGEM DE LMINAS:
1) COLETAR: escolha a parte do vegetal que voc quer trabalhar e o ambiente onde
ocorre;
2) FIXAR COM F.A.A.: corte o caule ou raiz em pedaes de +/- 2 cm de
comprimento, coloque em um vidro, rotule e adicione F.A.A. Deixe por 48 horas. No caso de
folhas, pode ser inteira;
3) CONSERVAR: despreze o F.A.A. e coloque o material em lcool 70% uma
semana, troque o lcool e deixe at fazer os cortes. Pode-se fazer a fixao diretamente em
lcool 70%;
4) CORTAR: coloque um pouco de gua em um vidro de relgio. Com uma lmina
nova v fazendo cortes bem finos (quase transparentes);

5) HIDRATAR: se o material estiver fixado, antes da clarificao, procede-se a

hidratao das seces at gua destilada (deixar os cortes por 10 minutos no lcool 50%,
30% e 10%, sucessivamente, at chegar em gua pura);
6) CLAREAR: adicione aos cortes com gua, um pouco de hipoclorito de sdio 10 ou
50% at clarear (+/- 20 minutos);
7) LAVAR: lavar em gua por 3 vezes;
8) CORAR: corar com o primeiro corante (cerca de 3 minutos); lavar em seguida com
gua (por 3 vezes); corar com o segundo corante (3 minutos); lavar em gua (por 3 vezes).
Escolha os melhores cortes para montar as lminas.
9) PESCAR: com um pincel v retirando os cortes e colocando nas lminas (+/- 3
cortes por lmina); adicione uma gota de glicerina 50% lamnula. Verifique se no ficou
nenhuma bolha de ar, se tiver ficado faa desaparecer a bolha.
10) VEDAGEM: vede os bordos da lamnula com esmalte incolor. Deixe um dos
lados sem vedar. Depois de seco acrescente com o auxlio de uma pipeta o lquido de incluso
(a glicerina, ou ainda, resina ou, em ltimo caso, gua). Vede este lado tambm. Espere secar
e aplique outra camada. Espere 24 horas, se no aparecerem bolhas s guardar as lminas
em caixas apropriadas. Caso apaream bolhas, retire sob a lamnula. Vede novamente.
11) IDENTIFICAO: depois de pronta a lmina, identifique-a com uma etiqueta,
colocando a data, seu nome, nome da espcie, tipo de corte e corante utilizado.
LEMBRE-SE: Lminas e lamnulas devem estar perfeitamente limpas.
Uma boa lmina, onde se faz uma boa observao, deve apresentar as seguintes
caractersticas:
1. No ter bolhas de ar, pois estas se apresentam escuras ao microscpio;
2. No conter excesso de material o que dificulta a focalizao;
3. Deve ter lquido bem distribudo em toda a extenso entre lmina e lamnula;
4. A lamnula no deve estar flutuando, o excesso de lquido tira-se com papel
absorvente;
5. Nunca deve ter lquido sob a lmina para evitar que a platina fique molhada,
dificultando os movimentos de avano do charriot, o que pode danificar o
microscpio.
7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:
SASS, J.E. Elemente of Botanical Microtechnique. New York: MacGraw-Hill Book, 1940.
OLIVEIRA; F. de; AKISUE, G. Fundamentos de Farmacobotnica e de Morfologia Vegetal.
3 ed. So Paulo: Atheneu, 2009.