BASTONETES GRAM NEGATIVOS

Prof. Dr. Flávio Cesar Viani

BACILOS GRAM NEGATIVOS
 FAMÍLIA ENTEROBACTERIACEAE

 Anaeróbio facultativo
 Oxidase Negativa
 Catalase Negativa
 Reduz Nitrato - Nitrito
HABITAT

• Intestino homem e animais

• Distribuição
• Solo
• Água
• Na maioria dos ambientes
MAIOR PREVALÊNCIA (99%)

 Escherichia coli,
 Klebsiella spp.,
 Enterobacter spp.,
 Proteus spp.,
 Providencia spp.,
 Morganella spp.,
 Citrobacter spp.,
 Salmonella spp.,
 Shigella spp.,
 Serratia spp.
 FAMÍLIA ENTEROBACTERIACEAE

• Importância Clínica
• Abcessos
• Pneumonia
• Meningite
• Septicemia
• Infecções intestinais
• Infecções Urinárias
ESCHERICHIA COLI
 ESCHERICHIA COLI

 Características do gênero
 Lactose Positivo
 Motilidade por flagelos
 Crescimento a 37°C
 H2S Negativo
 Produtor de Gás
 Citrato Negativo
 ESCHERICHIA COLI

 Importância Clínica
 Infecções do Trato Urinário (ITU)
 Bacteremia
 Meningite
 Diarréia
 ESCHERICHIA COLI

 Tipos de E. coli diarreiogênicas

 EHEC - E. coli Enterohemorrágica
 Stx
 lesão A/E
 EPEC - E. coli Enteropatogênica
 lesão A/E
 ETEC - E. coli Enterotoxigênica
 Toxinas LT / ST
 EIEC - E. coli Enteroinvasora
 Invasão
SALMONELLA
 SALMONELLA

 Características do Gênero
 Lactose Negativo
 H2S positivo
 Gás positivo
 Citrato positivo
 Espécies
 S. enteríca (7 subspécies)
 S. bongori
 SOROTIPOS

 Typhi – (humano)
 Paratyphi – (humano)
 Typhimurium
 Enteritidis
 ....

EX.: Salmonella Typhimurium

 SALMONELLA

 Habitat
 Ocorre em animais de sangue quente e frio
 Importância Clínica
 Diarréia
 Septicemia
 Fatores de virulência
 LPS
 Invasão
 Viabilidade em fagócitos
 IDENTIFICAÇÃO

 Meios Seletivos
 Caldo Selenito
 Estimula o crescimento de Salmonella
 Caldo Tetrationato
 Estimula o crescimento de Salmonella
 Ágar Mac Conkey
 Inibe Gram positivos
 Estimula bactérias entéricas
 Diferencia Lac + de Lac -
PROVAS BIOQUÍMICAS

 Produção de gás
 Produção de H2S
 Lisina descaboxilase
 Utilização do Citrato (+/-)
 Produção de Indol (-)
SOROLOGIA

 Utilização de Soro específico

SHIGELLA
 SHIGELLA SP

 Diarréia
 Protótipo do patógeno entérico invasivo (≈ EIEC)
 Humanos são os mais importantes reservatórios
conhecidos (intestino grosso)
 ESPÉCIES

 Shigella sp S. dysenteriae (toxina Shiga e pode causar SHU) ,

 S. flexneri (doença periodontal),
 S. boydii, S. sonnei (mais comum)
 Transmissão fecal-oral e fômites
 Menos de 200 bacilos são necessários para a infecção em
indivíduos saudáveis (elevada virulência)
CARACTERÍSTICA
 Lactose negativa
 Citrato negativo
 Urease negativo
 Motilidade negativo
IDENTIFICAÇÃO
Bacilos Gram Negativos Fermentadores da Glicose
ETAPAS PARA IDENTIFICAÇÃO

1. GRAM
2. OXIDASE
3. METABOLISMO FERMENTADOR
4. SÉRIE BIOQUÍMICA
PRINCIPAIS PROVAS PARA ENTEROBACTÉRIA
DE IMPORTÂNCIA CLÍNICA
 1. Fermentação da glicose
 2. Fermentação da lactose
 3. Motilidade
 4. Utilização de citrato
 5. Descarboxilação da lisina
 6. Produção de sulfeto de hidrogênio (H2S)
 7. Produção de gás (CO2)
 8. Oxidase
 9. Produção de indol
 10. Produção de urease
 11. Produção de fenilalanina desaminase ou opção triptofanase
 12. Produção de gelatinase ou opção DNAse
 MEIO SELETIVO DIFERENCIAL
MAC CONKEY

Colônias
Lactose positivas

Colônias
Lactose negativas

Composição: Peptona, lactose, sais biliares, cloreto de sódio, cristal violeta,

agar, vermelho neutro, água.
 Meio Seletivo Diferencial
Eosina-Azul de Metileno

Composição: Peptona, lactose, eosina, azul de metileno, agar, água.

ÁGAR SS
 ÁGAR TRÍPLICE AÇÚCAR FERRO - TSI

Utilização apenas da glicose

Produção de H2S
Utilização dos 3 açúcares
Glicose, Lactose e Sacarose
 ENTEROBACTÉRIAS
Urease Citrato

- +

+ -
+ + -
Fenilalamina Desaminase citrato
urease
ENTEROBACTÉRIAS

Positivo Negativo

Descarboxilação de aminoácidos: Lisina, Arginina e Ornitina

ENTEROBACTÉRIAS
MEIO RUGAI
ENTEROBACTÉRIAS

Kit de EPM MILI: Série de 7 testes em 2 tubos para

identificação bioquímica de enterobactérias
+ Citrato
 Produção de gás, H2S, urease, L-triptofano desaminase

 Motilidade, indol, lisina descarboxilase

GRAM NEGATIVOS
Não Fermentadores
DEFINIÇÃO

 Bacilos Gram-negativos não fermentadores (BGN-NF) são microrganismos

aeróbios e incapazes de utilizar carboidratos como fonte de energia através da
fermentação, degradando-os pela via oxidativa.
 A maioria é oxidase positiva e móvel.
BNF DE IMPORTÂNCIA CLÍNICA
 Acinetobacter spp.*
 Achromobacter spp.
 Burkholderia cepacia *
 Methylobacterium spp.
 Pseudomonas aeruginosa *
 Pseudomonas luteola
 Pseudomanas putida
 Pseudomanas pseudomallei *
 Stenotrophomonas spp.*
 Sphingobacterium spp.
Alcaligenes spp.*
Bordetella bronchyseptica
Chryseobacterium (Flavobacterium) spp.*
Moraxella spp.*
Pseudomanas fluorescens
Pseudomanas oryzihabitans
Pseudomonas stutzeri
Roseomonas spp.
Shewanella spp.
Sphingomonas paucimobilis
HABITAT NATURAL

 Meio ambiente
 Encontrados:
 água;
 solo;
 peixes congelados;
 leite cru;
 soluções desinfetantes etc.
AMBIENTE HOSPITALAR

 água de torneira;
 respiradores;
 cateteres de sucção;
 anti-sépticos;
 soros etc.
 IMPORTÂNCIA CLÍNICA

 Oportunistas
 unidades de terapia intensiva;
 pacientes submetidos a procedimentos invasivos;
 unidades de queimados;
 em infecções do trato respiratório de pacientes com fibrose cística
(FC).
INFECÇÃO HOSPITALAR

 Pseudomonas
aeruginosa e Acinetobacter
baumannii estão entre as bactérias
mais isoladas em hemoculturas e
amostras do trato respiratório de
pacientes sob regime de internação
hospitalar.
ISOLAMENTO

 Ágar Sangue / Mac Conkey/ TSA

 Fibrose cística:
 ágar B. cepacia e meios seletivos para Stenotrophomonas maltophilia.
 37º.C 24 – 48h
 FC até 5 dias
TRIAGEM INICIAL

 Características da colônia
 Hemólise
 Crescimento em Mac Conkey
 Produção de corantes
TESTES NECESSÁRIO

 Tubo de OFglicose (com vaselina) Disco de oxidase

 Tubo de OFglicose (sem vaselina) Disco de PYR
 Tubo com lisina Tubo com arginina
 Tubo controle de aminoácidos Caldo TSB para motilidade em lâmina
 Tubo ágar citrato Caldo TSB crescimento 42oc
 Tubo ágar uréia Tubo de caldo indol
 Tubo com ágar esculina Disco de polimixina
 Tubo com TSI Placa de Mac Conkey
 Tubo com gelatina Placa de DNAse
 Tubo com caldo NaCl 6,5%
CRESCIMENTO LENTO
PRODUÇÃO DE PIGMENTOS EM TSA
 COLÔNIAS ISOLADAS

 Meio para diagnóstico presuntivo: Triple Sugar

Iron (TSI), EPM - Mili ou IAL (Rugai modificado);
 Meio sem adição de corantes  Trypticase Soy
Agar (TSA) inclinado ou ágar comum inclinado;
 Meio para verificar o Gram e a motilidade em
lâmina: Trypticase Soy Broth (TSB), ou caldo comum.
 RESISTÊNCIA AOS ANTIMICROBIANOS
 P. aeruginosa produtora de metalo-ß-lactamases: Beta Lactâmicos
 Complexo B. cepacia é intrinsecamente resistente a agentes antimicrobianos,
incluindo ß-lactâmicos, exceto carbapenêmicos.
 Também são intrinsecamente resistentes à polimixina B.
 S. maltophilia é intrinsecamente resistente aos ß-lactâmicos, inclusive
carbapenêmicos, devido à produção de ß-lactamases e baixa permeabilidade
da membrana celular.
 Um dos grandes problemas no ambiente hospitalar é a multi-resistência
apresentada por algumas cepas de Acinetobacter baumannii, alguns sensíveis
apenas à polimixina.
 Chryseobacterium também apresentam resistência à polimixina B
FIM!