COLORAÇÃO DE

GRAM
 HISTÓRICO

• 1884, HANS CRISTIAN GRAM,

DESCOBRUI QUE AS BACTÉRIAS
PODIAM SER DIVIDIDAS EM DOIS
GRANDES GRUPOS, PARTINDO DA
CAPACIDADE QUE TÊM AS
CÉLULAS CORADAS DE
RESISTITEM OU NÃO A UMA
DESCOLORAÇÃO PELO ÁLCOOL.
 •ESSA ACÇÃO, PROVAVELMENTE,
OCORRE PELA MAIOR QUANTIDADE
DE LÍPIDOS NA PARADE CELULAR
DAS BACTÉRIAS.
•A PAREDE DA CÉLULA GRAM
NEGATIVA TEM UM CONTEÚDO
LIPÍDICO MAIS ELEVADO QUE AS
CÉLULAS GRAM POSITIVAS.
 FINALIDADE

É UM MÉTODO USADO PARA

DIFERENCIAR AS BACTÉRIAS:

• GRAM-POSITIVA

• GRAM-NEGATIVA
ESTRUTURA
BACTERIANA
ESTRUTURA BACTERIANA
ESTRUTURA GRAM POSITIVA
Ácido teicoico
Peptideoglicano

Parede
celular

Membrana
citoplasmática

Ácido
lipoteicoico
ESTRUTURA GRAM POSITIVA
Proteínas

Ácido teicóico

Peptideoglicano

Membrana plasmática
ESTRUTURA GRAM POSITIVA
 ESTRUTURA GRAM NEGATIVA
PORINA LIPOSSACARÍDEO

OUTRA MEMBRANA

LIPOPPROTEÍNA
ESPAÇO
PERIPLASMÁTICO
PEPTÍDEOGLICANO

MEMBRANA
CITOPLASMÁTICA
 ESTRUTURA GRAM NEGATIVA

Cadeias centrais
LIPOSSACARÍDEO
Polissacarídeos centrais
Lípido

Peptídeoglicano

Membrana plasmática

Proteína de membrana Espaço periplasmático

ESTRUTURA GRAM NEGATIVA
 DIFERENÇA ENTRE GRAM POSITIVA E
GRAM NEGATIVA
Ácido teicóico Ácido lipoteicóico

polissacarídeos
porinas

Outra membrana

peptídeoglicano

Espaço periplas.
Memb. celular

Proteína

Fosfolípido
 CORANTES E REAGENTES

CRISTAL VIOLETA (VIOLETA

DE METILA).
LUGOL.
ÁLCOOL.
SAFRANINA.
 MÉTODO DA
COLORAÇÃO DE
GRAM
 COLORAÇÃO PRIMÁRIA

 ESFREGAÇO FIXADO COM SOLUÇÃO

DE CRISTAL VIOLETA DURANTE 1
MINUTO.
 LAVAR COM ÁGUA CORRENTE.
 AS CÉLULAS NESTE ESTÁGIO
ADQUIREM TONALIDADE AZUL-ESCURA
OU PÚRPURA.
 MORDENTE

 ESFREGAÇO É COBERTO POR UMA

SOLUÇÃO DE IODO.
IODO
 CRISTAL VIOLETA É FIXADO À CÉLULA
PELO MORDENTE.
 COMPLEXO VIOLETA-IODO É
FORTEMENTE RETIDO POR UM GRUPO
DE BACTÉRIAS.
 DESCOLORAÇÃO

 APLICAR ÁLCOOL ETILÍCO NO ESFREGAÇO.

 A FUNÇÃO DO ÁLCOOL É DESIDRATAR OS
HIDRATOS DE CARBONO EXISTENTES NA
PAREDE CELULAR DE BACTÉRIAS GRAM-
POSITIVAS, RETENDO O CORANTE PRIMÁRIO.
 AS GRAM-NEGATIVAS, ATRAVÉS DA
DISSOLUÇÃO DOS LIPÍDIOS, TÊM A
POROSIDADE OU PERMEABILIDADE DA PAREDE
CELULAR AUMENTADA, EVITANDO QUE O
COMPLEXO CORANTE SEJA RETIDO.
 CONTRASTE
 FUCSINA DILUÍDA OU SAFRANINA CONSTITUI
O CORANTE SECUNDÁRIO.
 SE AS CÉLULAS PERMITEM O DESCORAMENTO
PELO ÁLCCOL, ELAS FIXAM O CORANTE
SECUNDÁRIO NESTA SEGUNDA ETAPA.
 COLORAÇÃO DAS BACTÉRIAS DE ROXO:
GRAM-POSITIVAS.
 COLORAÇÃO DAS BACTÉRIAS DE VERMELHO:
GRAM-NEGATIVAS.
PASSOS PARA COLORAÇÃO DE GRAM
RESULTADOS
RESULTADO
RESULTADO
GRAM POSITIVAS
GRAM NEGATIVAS
CLASSIFICAÇÃO
DAS BACTÉRIAS
 AERÓBIOS
1) COCOS
GRAM-POSITIVOS: Staphylococcus, Streptococcus.
GRAM-NEGATIVOS: Neisseria.

2) BACILOS
GRAM-POSITIVOS: Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria,etc.
GRAM-NEGATIVOS: Enterobactérias (Escherichia, Proteus,
Klebsiella, Salmonella, Shigella), Pseudomonas, Bordetella,
Haemophilus, etc.
 ANAERÓBIOS

1) COCOS
GRAM-POSITIVOS: Peptococcus, etc.
GRAM-NEGATIVOS: Veilonella, etc.

2)BACILOS
GRAM-POSITIVOS: Clostridium, etc.
GRAM-NEGATIVOS: Bacteroides, etc.
 OBSERVAÇÃO

REGRA GERAL:
OS COCOS, COM EXCEPÇÃO DA
Neisseria, SÃO GERALMENTE GRAM
(+).
OS BASTONETES, COM EXCEPÇÃO
DAS CORINEBACTÉRIAS, Listeria,
Bacillus E CLOSTRÍDIOS, GRAM (-).