GRUPOS DE LIGAO

E CROMOSSOMOS Dcima aula

(T10)

Objetivos
1. Conceituar ligao gnica. 2. Analisar o experimento de Bateson, Saunders e Punnett sobre o fenmeno da ligao incompleta. 3. Explicar a teoria da quiasmatipia de Janssens. 4. Explicar acoplamento e repulso por meio da teoria cromossmica da herana. 5. Conceituar gene pleiotrpico. 6. Descrever o experimento de Curt Stern em que se demonstrou a relao entre permutao e recombinao gnica.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

Era bvio para os geneticistas que aceitavam as hipteses suttonianas, que o esquema mendeEm 1903, quando Sutton deu incio s pesqui- liano original no podia explicar os resultados sas relacionando genes e cromossomos, ele argu- quando um ou mais pares de diferentes alelos estimentava que deveriam haver mais pares de alelos vessem localizados no mesmo par de cromosdo que pares de cromossomos homlogos. Em somos homlogos. um trecho de seu trabalho ele diz: Ns devemos, portanto, admitir que pelo menos alguns cromosACOPLAMENTO E REPULSO somos estejam relacionados um nmero maior Bateson, Saunders e Punnett (1906) no de alelos. Se os cromossomos retm permanentemente as suas individualidades, ento todos os aceitaram a hiptese de Sutton e tiveram grande alelomorfos presentes em um mesmo cromossomo dificuldade para explicar alguns dos seus cruzamentos que no davam as propores devem ser herdados juntos. No se pode ler as publicaes deste extraor- mendelianas esperadas. Eles dizem o seguinte dinrio jovem cientista sem se estarrecer com o sobre isso: Logo no incio da retomada dos expebrilhantismo de suas anlises. Repare no trecho: rimentos de cruzamento, especialmente Correns, os diferentes alelos devem ser herdados juntos havia chamado a ateno para o fenmeno do no caso de os cromossomos reterem sua indivi- acoplamento entre certos caracteres. At aquela dualidade. Suspeita-se que quando a proporo poca, acoplamento completo havia sido mais peculiar que foi denominada acoplamento e comumente encontrado entre os caracteres de repulso foi descoberta, Sutton teria reconhe- natureza fisiolgica semelhante. Exemplos de cido que, de alguma forma, isto estava associado acoplamentos parciais no tinham at ento sido com a presena de diferentes genes no mesmo adequadamente estudados. Eles ento deram um exemplo. Em um dos cromossomo. E que quando o acoplamento no era completo, ele deve ter tambm percebido que experimentos com ervilhas-de-cheiro envolvendo um mecanismo deveria ser pensado para a explicar dois pares de alelos, foi obtida em F2 a proporo a observao de que os cromossomos nem sempre de 11,8 : 1 : 1 : 3,26. Em ervilhas-de-cheiro o estado azul (B) do carter cor da flor dominante retm a sua individualidade.

GENES LIGADOS

92

sobre o vermelho (b), e a forma longa (L) do plen dominante sobre a forma redonda (l). Quando uma planta de flor azul e plen longo era cruzada com uma planta de flor vermelha e plen redondo, todos os indivduos F1 eram do tipo azul-longo. Nada surpreendente at agora. Em F2 observavam-se as propores usuais de 3 plantas de flores azuis para 1 vermelha e de 3 plantas de plen longo para 1 redondo. Isso era esperado pela lei mendeliana da segregao dos fatores. Uma vez que este um cruzamento que envolve dois pares de alelos, o normal esperado pela lei mendeliana da segregao independente seria 9 azuis-longos : 3 azuis-redondos : 3 vermelhas-longos : 1 vermelha-redondo. Ao invs disto observou-se uma proporo fenotpica de 11,8 azuis-longos : 1 azul-redondo : 1 vermelha-longo : 3,26 vermelhas-redondos um resultado que no se encaixa no mendelismo. A figura 28 mostra o cruzamento. O indivduo de flores azuis e plens longos deve ter produzido os quatro tipos de gametas. A fim de se ter certeza que este era o caso, foram feitos cruzamentosteste. Isto , os indivduos F1 foram cruzados com o puro recessivo como mostrado na figura 28. O resultado esperado era 25% de cada um dos quatro fentipos, mas foi obtido um resultado diferente. Os resultados obtidos indicavam que o dibrido estava formando quatro tipos de gameta na proporo de 7BL : 1Bl : 1bL : 7bl. Embora estes no sejam os resultados esperados nos cruzamentos dibridos mendelianos, deve haver alguma regra funcionando, uma vez que, quando os experimentos eram repetidos, Bateson e seus associados sempre observavam os mesmos resultados. As duas regras pareciam ser: 1. Os fentipos mais comuns so aqueles dos parentais originais e eles esto na mesma freqncia - 43,7% cada (resultados mostrados acima para os cruzamentos esquematizados nas figuras 28). 2. As classes recombinantes, azul-redondo e vermelha-longo, aparecem em nmeros muito menores do que o esperado, mas suas freqncias so iguais, 6,3%. De alguma forma os alelos dos parentais originais esto acoplados e so mais freqentes do que o esperado. Embora o acoplamento no seja completo e os alelos dos parentais originais 93

possam sofrer repulso e produzir as classes recombinantes. Esta tendncia de acoplamento para os diferentes alelos foi confirmada no cruzamento de plantas do tipo azul-redondo com plantas do tipo vermelha-longo. Se estas ervilhas estivessem se comportando de acordo com as regras mendelianas, seria esperado que o resultado deste cruzamento fosse exatamente igual ao da figura 28. A nica diferena que os dois pares de alelos esto distribudos diferentemente entre os pais. Os indivduos F1 tem os mesmos fentipo (azullongo) e gentipo (BbLl). Seria esperado ento que o cruzamento de indivduos F1 da figura 28 com o puro recessivo produzisse o mesmo resultado que o do cruzamento mostrado na figura 28. Os resultados, no entanto, foram muito diferentes. Os fentipos azul-longo e vermelha-redondo, que estavam presentes em frequncia 43,7% cada um. Como mostrado na figura 28, cairam agora para 6,3%. As outras duas classes fenotpicas aumentaram de 6,3% para 43,7%, como mostra a figura 28. Bateson, Saunders e Punnet no conseguiram explicar satisfatoriamente os resultados destes cruzamentos. Eles puderam concluir apenas que, em cruzamentos deste tipo, os alelos dos pais estavam acoplados. Este acoplamento, no entanto, no era completo e em uma pequena frao dos gametas havia uma repulso dos dois diferentes alelos. Tal explicao, porm, no faz nada alm de descrever o que de fato acontece. Mais e mais exemplos de acoplamento e repulso continuaram a ser descritos e nada alm de uma descrio formal do fenmeno era possvel. No ano em que Morgan estava para propor uma hiptese satisfatria, Bateson e Vilmorin (1911) escreveram o seguinte (eu modifiquei os smbolos genotpicos de acordo com o que se usa atualmente): Se A, a e B, b representam dois pares de alelomorfos sujeitos acoplamento e repulso, os fatores A e B iro se repelir na gametognese de um indivduo duplo-heterozigtico proveniente de um cruzamento AAbb x aaBB, mas estaro acoplados na gametognese de um duploheterozigtico proveniente de um cruzamento AABB x aabb... Ns no temos at o momento explicao alguma para esta diferena, e tudo o que pode ser dito que nestes casos especiais a distribuio dos caracteres no heterozigoto

A. P Fentipos Gentipos Gametas

azul - longo BB LL BL

vermelho - redondo bb ll bl

Cruzamento - teste Fentipos Gentipos Gametas azul - longo Bb Ll Bl bL X bl vermelho - redondo bb ll bl

BL

Fentipos azul-longo Gentipos Bb Ll Gametas (esperado) 25% (obtido) 43,7%

azul-redondo Bb ll 25% 6,3%

vermelho - longo bb Ll 25% 6,3%

vermelho - redondo bb ll 25% 43,7%

B. P Fentipos Gentipos Gametas

azul - redondo BB ll Bl

vermelho - longo bb LL bL

Cruzamento - teste Fentipos Gentipos Gametas azul - longo Bb Ll Bl bL X bl vermelho - redondo bb ll bl

BL

azul-longo Fentipos Bb Ll Gentipos Gametas (esperado) 25% (obtido) 6,3%

azul-redondo Bb ll 25% 43,7%

vermelho - longo bb Ll 25% 43,7%

vermelho - redondo bb ll 25% 6,3%

Figura 28. Interpretao dos resultados dos experimentos de Bateson e colaboradores com ervilhade-cheiro. (A) Esquema de como se comportaram as plantas F 1 no cruzamento-teste; se houvesse segregao independente as freqncias esperadas seriam de 25% para cada tipo, o que no foi observado. Os tipos azul-longo e vermelho-redondo apareceram, cada um deles, na porcentagem de 43,7%;

do que se conclui que os alelos B e L esto em acoplamento, pois ocorrem nas classes de maior freqncia. Os tipos azul-redondo e vermelho-longo apareceram, cada um na porcentagem de 6,3%. (B) Resultado do cruzamento entre plantas dos tipos azul-redondo e vermelho-longo, em que os alelos B e L esto em repulso, pois ocorrem nas classes de menor freqncia.

influenciada pela maneira como se encontram distribudos nos parentais homozigticos. Bateson e seus colegas no eram adeptos da hiptese de Sutton mas, como veremos, o suttonismo no modificado, tambm no oferecia explicao para esses casos. Aps ver estes resultados, e admitir a falha em propor uma hiptese 94

explicativa, um pesquisador menos persistente poderia ter pensado na possibilidade de abandonar o mendelismo como uma hiptese de aplicao ampla. Muito embora as regras de Mendel se aplicassem a muitos outros cruzamentos, mesmo no caso dos alelos da ervilha-de-cheiro azul versus vermelho e longo versus redondo quando

considerados separadamente. Alm disso, embora misterioso, o fato de terem sido observadas freqncias constantes sugere a existncia de uma mesma causa, a ser descoberta, para explicar estes fatos. Note tambm que na figura 28 os alelos dos parentais originais estavam acoplados. Um processo ordenado, embora no-mendeliano, parecia estar acontecendo. Poderia ser um exemplo das previses de Sutton para o comportamento de diferentes alelos que fazem parte do mesmo cromossomo?

Fentipos Gentipos

azul - longo B L B L

vermelho - redondo b l b l b l

Gametas

B L

Fentipos Gentipos

azul - longo B b l b l

vermelho - redondo b l b l b l

ACOPLAMENTO

E A REPULSO PODEM SER

EXPLICADOS PELA HIPTESE DE

SUTTON ?
Gametas

L B L

Na tentativa de explicarmos os resultados inesperados obtidos nos cruzamentos de ervilhade-cheiro, usaremos a hiptese de Sutton, admitindo que os locos dos genes B e L estejam no mesmo cromossomo e que o parental azullongo do cruzamento da figura 28 seja homozigtico quanto a esses locos. Admitiremos que o outro parental seja homozigtico para b e l. A figura 29 seria, ento, a representao esquemtica para os cruzamentos das figuras 28, de acordo com as idias de Sutton. Segundo este esquema, quando um indivduo da gerao F1 do tipo azul-longo for cruzado com um do tipo vermelha-redondo a descendncia esperada ser constituda por apenas duas classes fenotpicas: azul-longo e vermelha-redondo. Entretanto, no foi isso que foi observado. Lembre-se que os resultados reais foram 43,7% para cada uma dessas duas classes, alm de 6,3% de azul-redondo e 6,3% de vermelha-longo. No haveria possibilidade, entretanto, de qualquer destas classes menos freqentes aparecer se admitssemos o modelo suttoniano representado na figura 29. Assim, a resposta para a questo colocada no incio deste tpico seria No. No entanto, uma modificao na hiptese de Sutton poderia fornecer a resposta. Na fervilhante atividade da Sala das Moscas, Morgan e seus associados estavam descobrindo dezenas de novas moscas mutantes. Estes novos mutantes eram testados, dois a dois, em cruzamentos com outros mutantes. Em muitos casos, os cruzamentos dibridos produziam em F2 a proporo mendeliana esperada de 9:3:3:1 , 95

Fentipos Gentipos

azul - longo B L b l

vermelho - redondo b l b l 50%

esperado

50%

Figura 29. Uma hiptese para explicar os cruzamentos das figuras 28A e 28B, assumindo ligao completa entre os dois genes.

o que indicava que os dois pares de alelos estavam se segregando independentemente. Entre muitos outros pares de mutantes de Drosophila, no entanto, eram observados os fenmenos de acoplamento e repulso que tanto intrigavam Bateson e seus colaboradores. A hiptese de Sutton podia explicar o acoplamento mas no a repulso. Como Morgan j estava convencido da veracidade da hiptese suttoniana de que os genes so parte dos cromossomos, ele imaginou que deveria haver algum mecanismo por meio do qual partes de cromossomos pudessem ser trocadas entre os homlogos. Aqui estava um caso em que os resultados genticos necessitavam de uma explicao citolgica. Para explicar a repulso entre diferentes alelos, podia-se imaginar muitos modos pelos quais partes de cromossomos pudessem ser trocadas. De fato, na poca, no fazia muito tempo, havia sido descrito um fenmeno citolgico que poderia fornecer uma resposta convincente.

fosse a nica maneira aceitvel de se explicar os dados. Esta a apreciao de E. A. Wilson em Em 1909 um ano antes do aparecimento da 1925: Uma interpretao mais apropriada do mosca de olhos brancos - o citologista F. A. fenmeno da permutao foi elaborada por Janssens (1863-1924) descreveu um fenmeno Morgan e colaboradores, inicialmente com base cromossmico que Morgan necessitava para sua na Teoria da Quiasmatipia de Janssens (1909). hiptese. (Fig. 30) Infelizmente, embora correta em princpio, esta Este fenmeno, que ocorre durante a meiose, engenhosa teoria entretanto se apia em uma atualmente denominado permutao (crossing- base citolgica inadequada; na realidade, ela over). Na sinapse os cromossomos homlogos foi originalmente proposta com base em se aproximam, emparelhando-se ao longo de todo interpretaes, hoje consideradas erradas, de seu comprimento. Ambos os cromossomos certos aspectos citolgicos. aparecem duplicados (hoje sabemos que eles j esto duplicados desde a intrfase precedente) e A EXPLICAO DE MORGAN PARA formam uma ttrade de quatro cromtides, que O ACOPLAMENTO E A REPULSO podem ser observadas ao microscpio. A seguir, segundo Janssens, h um consideMorgan (1911) props, em um artigo de rvel enrolamento das cromtides umas sobre as apenas uma pgina, uma nova hiptese que, aps outras e em alguns casos duas das cromtides se ter sido testada muitas vezes, pde ser considequebram em lugares correspondentes. As rada, sem sombra de dvida, como verdadeira. cromtides quebradas se juntam de tal modo que Ele iniciou sua anlise chamando a ateno para um pedao de uma cromtide fica inserido numa o fato de que, embora as excees proporo cromtide homloga e vice-versa. Como resul- 9:3:3:1 tivessem sido verificadas com muita tado, so produzidas novas cromtides que so freqncia, elas no podiam ser explicadas satisverdadeiros mosaicos de segmentos das crom- fatoriamente pela hiptese proposta por Bateson. tides originais. A quebra e unio no puderam Nesse artigo Morgan diz: No lugar de atraes, ser observadas, de modo que este evento perma- repulses, hierarquia e elaborados sistemas de neceu como uma hiptese no testada. acoplamento, eu ouso sugerir uma explicao A teoria da quiasmatipia de Janssens um caso relativamente simples com base nos resultados relativamente comum em cincia, de uma sobre a herana da cor dos olhos, da cor do hiptese, embora correta, ser sustentada por corpo, das mutaes das asas e do fator para dados provavelmente incorretos (a hiptese de feminidade em Drosophila. Se os materiais que McClung sobre a relao entre cromossomos e representam estes fatores esto nos cromossomos sexo um outro exemplo). e se aqueles fatores que se acoplam esto As evidncias em que se baseava a hiptese prximos e em uma ordem linear ento, quando de Janssens deixavam muito a desejar, embora os pares parentais (no heterozigoto) se conjugam

JANSSENS E A

TEORIA DA QUIASMATIPIA

A A

a a

A A

a a

A A

B B

b b

B b

B b

Figura 30. A hiptese da permutao de Janssens. Hoje sabemos que, do ponto de vista citolgico, este modelo est incorreto; pois se sabe que os cromossomos se duplicam antes da sinapse, que o quiasma conseqncia e no causa da permutao, e que o emparelhamento envolve as 4 cromtides e no apenas duas delas.

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[ isto , entram em sinapse] , regies semelhantes ficaro lado a lado. H boas evidncias que apiam a idia de que durante o estgio de estrepsinema [quando a ttrade comea a se separar] os cromossomos homlogos ficam presos em certos pontos, porm quando os cromossomos se separam (quebram) a quebra se d em apenas um plano, como afirma Janssens. Como conseqncia, o material original, para distncias pequenas, ter maiores probabilidades de ficar do mesmo lado da quebra, enquanto que regies mais distantes tero a mesma probabilidade de ficar tanto do mesmo lado como em lados opostos. Como conseqncia, ns encontraremos acoplamento entre certas caractersticas, e pouca ou mesmo nenhuma evidncia de acoplamento entre outras caractersticas; a diferena depender da distncia linear que separa os materiais, que representam os fatores, nos cromossomos. Tal explicao se aplica a todos os fenmenos que eu tenho pessoalmente observado e acredito, ir explicar tambm os demais casos descritos at o momento. Os resultados refletem simplesmente o resultado mecnico da localizao dos materiais nos cromossomos, e do tipo de unio dos cromossomos homlogos, e as propores resultantes no dependeriam tanto do resultado da expresso de um sistema numrico [ como proposto por Bateson], mas simplesmente da localizao relativa dos fatores nos cromossomos. Em vez de segregao independente no sentido mendeliano, ns encontramos associao de fatores que se localizam prximos nos cromossomos. A Citologia fornece o mecanismo necessrio para explicar a evidncia experimental. O termo ligao gnica foi proposto para aqueles casos nos quais genes diferentes esto localizados em um mesmo cromossomo. A permutao, que ocorre durante a meiose, consiste no emparelhamento dos cromossomos homlogos por intermdio da sinapse, na quebra de cromtides no-irms e, finalmente, na religao das cromtides em uma nova condio que resulta em associaes modificadas dos genes. Assim, possvel questionar se seria justo creditar a Thomas Hunt Morgan o esclarecimento de que as intrigantes excees herana mendeliana simples so uma mera conseqncia do fato de que genes podem eventualmente ser 97

partes do mesmo cromossomo e que, s vezes, eles podem ser separados por permutao durante a meiose. Na realidade, isso no pode ser dito. Tudo o que se pode concluir que a ligao poderia ser uma explicao para o acoplamento e que a permutao poderia explicar a repulso. Ns atribumos Morgan a explicao destas importantes idias porque pesquisas posteriores mostraram que sua hiptese estava correta. Este um padro comum na evoluo do conhecimento a respeito dos fenmenos da natureza. As grandes hipteses dos homens intelectualmente privilegiados so aquelas que, eventualmente dentre muitas hipteses concorrentes, foram consideradas verdadeiras pelas pesquisas subseqentes. A percepo que Morgan teve de que a hiptese de Janssens sobre a quebra e a fuso de cromtides em novas combinaes poderia explicar os dados obtidos, no foi imediatamente aceita por outros pesquisadores. Era impossvel uma observao direta da quebra e da fuso. Sturtevant (1959) relembra porque a hiptese de Janssens era to atrativa: A evidncia citolgica no era conclusiva, e a idia no era aceita por todos apesar de estar se tornando claro que apenas desse modo a interpretao cromossmica do mendelismo podia ser salva. Entretanto, havia um modo de testar a hiptese de que a ligao seria uma conseqncia do fato de diferentes genes fazerem parte de um mesmo cromossomo.

GRUPOS DE LIGAO

GNICA E PARES

DE CROMOSSOMOS

Por volta de 1911 no havia mais qualquer dvida de que os cromossomos se encontravam aos pares nos organismos diplides, com exceo dos cromossomos sexuais, onde poderia haver diferenas com relao a essa regra. Como observado anteriormente, Sutton (1903) havia proposto a hiptese de que todos os alelos presentes em um mesmo cromossomo deveriam ser herdados juntos. Se isso fosse verdadeiro, o nmero de grupos de alelos herdados juntos no poderia exceder o nmero de pares de cromossomos homlogos. Essa hiptese poderia ser testada em Drosophila melanogaster, onde um nmero crescente de genes estava sendo descoberto.

D. melanogaster tem 4 pares de cromossomos: trs pares de autossomos e um par de cromossomos sexuais. Na metfase mittica, os autossomos aparecem como dois longos pares em forma de V e um pequeno par puntiforme. O cromossomo X tem a forma de um basto e o Y tem forma de um anzol. (Fig. 31) Nos primeiros meses de trabalho com Drosophila, a equipe liderada por Morgan rapidamente verificou que alguns genes apresentavam ligao e que seu padro de herana sugeria que eles fizessem parte do cromossomo X (Morgan, 1911). Logo a seguir, dois outros grupos de ligao foram caracterizados (Morgan & Lynch,
GRUPO I Regio afetada

1912; Sturtevant, 1913). Pressups-se ento que tais grupos fossem associados aos dois pares de autossomos maiores. Deste modo, haviam sido encontrados apenas trs grupos de ligao, mas existiam quatro pares de cromossomos. Esta discrepncia poderia ser atribuda ao pequeno tamanho do par de autossomos puntiformes, provavelmente constitudo por poucos genes ainda no detectados, ou talvez esse cromossomo fosse completamente destitudo de qualquer loco gnico. O cromossomo Y provavelmente se encaixaria neste ltimo caso. Posteriormente, foi descoberta uma mosca, cuja mutao segregou-se independentemente
GRUPO III Regio Afetada Padro do trax Asas Cor dos olhos Olhos Tamanho do corpo Cor do corpo Tamanho do corpo Olhos

Nome

Nome

GRUPO II Regio Afetada

Nome

Abnormal Abdome Bar Olhos Bifid Veias das asas Bow Asas Cherry Cor dos olhos Chrome Cor do corpo Cleft Nervuras das asas Club Asas Depressed Asas Dotted Trax Eosin Cor dos olhos Facet Omatdios Furrowed Olhos Fused Veias das asas Green Cor do corpo Jaunty Asas Lemon Cor do corpo Lethals, 13 Morte Miniature Asas Notch Veias das asas Reduplicated Pernas Ruby Cor dos olhos Rudimentary Asas Sable Cor do corpo Shifted Veias das asas Short Asas Skee Asas Spoon Asas Spot Cor do corpo Tan Antenas Truncate Asas Vermilion Cor dos olhos White Cor dos olhos Yellow Cor do corpo

Antlered Asas Apterous Asas Arc Asas Balloon Veias das asas Black Cor do corpo Blistered Asas Comma Trax Confluent Veias das asas Cream II Cor dos olhos Curved Asas Dachs Pernas Extra vein Veias das asas Fringed Asas Jaunty Asas Limited Faixa abdominal LittlecrossoverCromossomo II Morula Omatdios Olive Cor do corpo Plexus Veias das asas Purple Cor dos olhos Speck Trax Strap Asas Streak Padro do trax Trefoil Padro do trax Truncate Asas Vestigial Asas

Band Beaded Cream III Deformed Dwarf Ebony Giant

Kidney Low crossing -over Cromossomo III Maroon Cor dos olhos Peach Cor dos olhos Pink Cor dos olhos Rough Olhos Safranin Cor dos olhos Sepia Cor dos olhos Sooty Cor do corpo Spineless Cerdas Spread Asas Trident Padro do trax Truncate intensf. Asas Whitehead Cor periocelar White ocelli Ocelos

Nome Bent Eyeless

X X X Y

GRUPO IV Regio Afetada Asas Olhos

Figura 31. Os quatro grupos de ligao gnica de Drosophila melanogaster estabelecidos at 1915. Na poca eram conhecidos mais de oito dezenas de genes distribudos em 4 grupos de ligao. O diagrama abaixo no centro mostra os cromossomos de clulas somticas de machos e fmeas. (Morgan,1915)

98

quando foi cruzada com moscas que apresentavam mutaes pertencentes a qualquer um dos trs grupos de ligao ento conhecidos (Muller, 1914). Deste modo, era altamente provvel que o novo mutante fizesse parte do autossomo puntiforme. Mais tarde foram descobertos outros genes pertencentes a este quarto grupo de ligao gnica. Por volta de 1915 a equipe liderada por Morgan j havia pesquisado os padres de herana de 85 genes. Estes distribuam-se em quatro grupos de ligao, como mostra a figura 31, que tambm apresenta um diagrama dos cromossomos metafsicos. O paralelismo entre o nmero de cromossomos, determinado pela anlise citolgica, e o nmero de grupos de ligao, verificado nos experimentos genticos, foi uma forte evidncia no apenas de que os genes so partes integrantes dos cromossomos mas tambm que genes localizados em um mesmo cromossomo tendem a ser herdados juntos. As informaes contidas na figura 31 nos permitem tirar algumas concluses adicionais. Veja que muitos genes diferentes afetam um mesmo carter: por exemplo, 13 influenciam a cor dos olhos; 33 modificam de algum modo as asas; 10 afetam a cor do corpo. Assim, possvel levantar a seguinte questo: que condies so necessrias para que uma mosca tenha olhos de cor vermelha selvagem ? A resposta que os alelos do tipo selvagem de todos estes 13 genes para cor dos olhos, juntamente com muitos outros descobertos posteriomente, atuem juntos para produzir a cor vermelha dos olhos dos indivduos selvagens. Se um indivduo homozigtico para um alelo mutante de qualquer um destes genes, os olhos no sero vermelhos, mas brancos, ou cor-de-pssego, ou spia, etc. Poderia se pensar na cor vermelha normal dos olhos como o produto final de um conjunto de genes em ao. Se qualquer uma dessas atividades for alterada, a cor do olho ser diferente. importante estar ciente que os olhos dos insetos no variam apenas na cor. H diversos genes que influenciam, por exemplo, a morfologia dos olhos, alguns muito drasticamente como o caso do mutante sem olhos (ou com olhos muito reduzidos) condicionado por alterao de 1 par de alelos (eyeless) localizado no quarto grupo de ligao, ou a mutao olho em forma de barra (Bar), condicionada por uma alterao no cromossomo X. 99

Na denominao dos alelos mutantes, so levados em conta os efeitos mais visveis da mutao, por exemplo, o alelo white-eyed produz olhos brancos. Entretanto, quando moscas homozigticas para essa mutao foram cuidadosamente examinadas verificou-se que tambm a pigmentao dos ocelos e de alguns rgos internos estava alterada. Isso no uma exceo, muitos genes so pleiotrpicos, isto , afetam mais de uma estrutura ou processo. Alguns geneticistas do comeo do sculo chegaram a suspeitar que cada gene afetava, de algum modo, todos os aspectos da estrutura e funo do corpo.

A PROVA CITOLGICA DA PERMUTAO

Muito importante foi o fato de a hiptese de Morgan, de que a permutao seria o mecanismo para explicar a recombinao dos genes ligados, ter sido exaustivamente testada e, caso no tivesse sido confirmada, ela teria sido substituda. A hiptese havia sido proposta para explicar algumas excees herana mendeliana simples; deste modo, o fato de que os resultados corroboravam a hiptese no podia ser usado como apoio validade da hiptese. A prova crucial deveria ser alguma evidncia citolgica para a quebra e a permutao de cromtides homlogas. Supunha-se que tais eventos ocorressem na meiose durante a sinapse e a formao dos bivalentes. O estudo dos cromossomos, naquela poca, era extremamente difcil. O problema se complicava ainda mais pelo fato de os cromossomos homlogos serem aparentemente idnticos, de tal forma que, mesmo se tivesse ocorrido permutao durante a sinapse, as cromtides no dariam evidncia visvel alguma de que elas tinham se quebrado e se permutado. Reflita sobre esta dificuldade e tente imaginar um experimento que pudesse fornecer uma evidncia crtica de que a recombinao entre genes localizados em um mesmo cromossomo fosse resultado da permutao entre cromossomos homlogos. Uma idia seria encontrar uma espcie com cromossomos homlogos diferentes ou torn-los diferentes experimentalmente, uma vez que no possvel obter evidncias quando os homlogos so idnticos. Por volta de 1910 no se sabia como fazer com que os cromossomos ficassem diferentes e a equipe

de drosofilistas aceitava como verdadeira a hiptese da permutao pelo simples fato de que tal hiptese continuava a explicar os dados que estavam sendo obtidos. Na realidade, se passaram quase vinte anos at que Curt Stern (1931) conseguisse obter uma prova citolgica da permutao. Na poca em que Stern iniciou seu trabalho, os geneticistas que trabalhavam com D. melanogaster j tinham um grande nmero de linhagens de mutantes, incluindo vrias contendo aberraes cromossmicas. Algumas destas mutaes haviam surgido espontaneamente nos estoques mantidos na Sala das Moscas, enquanto que outras surgiram nas linhagens expostas intencionalmente ao elemento qumico rdio ou a raios X. Existe uma atitude cooperativa notvel entre os geneticistas que trabalham com espcies de Drosophila, de tal forma que eles constantemente realizam intercmbio de linhagens entre diferentes instituies tanto nos Estados Unidos como em diferentes pases do mundo. Durante muitos anos, a equipe liderada por Morgan, inicialmente sediada na Columbia University e mais tarde, aps 1928, transferida para o California Institute of Technology manteve centenas de linhagens, tanto para uso pela prpria equipe como por qualquer geneticista que as requisitasse. Subseqentemente uma grande coleo passou a ser mantida pela University of Texas em Austin, e atualmente existe o National Drosophila Species Resource Center, mantido financeiramente pela The National Science Foundation, na Bowling Green State University, sediada no estado de Ohio (EUA). Stern construiu linhagens que forneceram o material-teste que ele tanto necessitava, isto , moscas com cromossomos homlogos estrutural e geneticamente diferentes. As fmeas tinham cromossomos X diferentes tanto do ponto de vista estrutural quanto gentico (a figura 32 uma representao simplificada de um dos experimentos cruciais feitos por Stern). Um dos cromossomos X estava partido em dois pedaos; um deles se comportava como um cromossomo independente, enquanto que o outro pedao estava fisicamente ligado a um dos minsculos cromossomos 4. O outro cromossomo X tinha um pedao de cromossomo Y ligado a ele. Estas diferenas estruturais eram to evidentes que era possvel identificar os cromossomos em clulas fixadas e coradas (Fig. 32).

Alm dessas modificaes estruturais, os dois cromossomos X apresentavam marcadores genticos (mutaes). Uma das partes do cromossomo X fragmentado apresentava tanto o alelo recessivo carnation (c), que quando em homozigose produz olhos de cor rubi-escura, como o alelo dominante Bar (B), que transforma os olhos selvagens, quase circulares, em olhos reduzidos em forma de basto. O cromossomo X ligado ao fragmento do Y apresentava, por sua vez, os alelos selvagens C e b, que produzem, respectivamente, olhos vermelhos e com a forma selvagem arredondada. Durante a meiose feminina esperava-se que houvesse permutao entre esses dois locos em algumas clulas mas no em outras. Como conseqncia seriam formados quatro tipos de vulos e cada um deles seria gentica e estruturalmente nico. Se esta fmea fosse cruzada com um macho duplo-recessivo, de olho cor carnation e forma selvagem, os alelos de cada um dos gametas da fmea se expressariam e poderiam ser identificados. A evidncia crtica seria fornecida pelas fmeas da gerao F1, que se distribuiriam em quatro classes fenotpicas. Alm disso, cada classe fenotpica teria cromossomos previsivelmente diferentes. Stern planejou o cruzamento de tal maneira que se a hiptese testada fosse verdadeira os indivduos recombinantes com olhos de cor carnation e de forma selvagem apresentariam 2 cromossomos X de tamanhos normais. A outra classe recombinante apresentaria olhos vermelhos em forma de basto; e suas clulas conteriam um cromossomo X de tamanho normal e outro X pequeno ligado ao fragmento de Y. As outras classes fenotpicas, originadas de vulos norecombinantes, teriam tambm configuraes cromossmicas caractersticas. Stern analisou os cromossomos de cerca de 400 fmeas de todas as quatro classes fenotpicas e verificou que os fentipos correspondiam exatamente s configuraes citolgicas previstas. Esta foi uma demonstrao notvel de que a hiptese de Morgan, de que a permutao citolgica seria a causa da recombinao gnica, estava realmente correta. Em um trabalho publicado algumas semanas antes, Harriet Creighton e Barbara McClintock (1931) demonstraram que, em milho (Zea mays), a permutao tinha uma base citolgica. A metodologia bsica delas foi a mesma utilizada por Stern em seus experimentos com Drosophila.

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Creighton e McClintock desenvolveram linhagens de milho gentica e citologicamente diferentes em relao ao cromossomo 9. A

evidncia que elas obtiveram foi a presena de configuraes citolgicas previsveis, nas plantas com diferentes fentipos.

Y P
c B C b

c b

Permutao
c
21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21

C B

Ausncia de permutao

c b C B
21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21

F1
B b b b b b b
21 21 21 21

Carnation bar

Vermelho normal

Carnation normal

Indivduos resultantes de vulos no-permutados

Indivduos resultantes de vulos permutados

Figura 32. Prova citolgica da permutao obtida por Stern (1931).

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21 21 21 21

Gametas

Descendncia no-utilizada

C B

Vermelho bar

21 21 21 21

21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21

21 21 21 21 21 21 21 21

21 21 21 21 21 21 21 21

21 21 21 21 21 21 21

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases numeradas de 1 a 8 usando o termo mais apropriado dentre os arrolados abaixo: (a) acoplamento (b) ligao incompleta (c) ligao gnica (d) recombinao (e) herana ligada ao sexo (f) herana limitada ao sexo (g) grupo de ligao gnica (h) repulso 1. ( ) qualquer processo que ocorre em uma clula diplide e produz combinaes gnicas ou cromossmicas no encontradas naquela clula ou nos seus progenitores. 2. A condio na qual um indivduo duploheterozigtico (Ab/ aB), recebeu de cada um dos pais, um alelo mutante de um dos genes associado a um alelo selvagem do outro denominada ( ) ou arranjo trans. 3. ( ) ou arranjo cis a condio presente em um indivduo duplo-heterozigtico (AB/ab), no qual os 2 alelos mutantes associados so provenientes de um de seus progenitores, e os seus respectivos alelos selvagens, do outro. 4. A expresso de uma caracterstica (por exemplo, produo de ovos ou de leite) restrita apenas um dos sexos denominada ( ). 5. Os genes localizados no segmento do cromossomo X sem homologia com o cromossomo Y seguem um padro de herana denominado ( ). 6. A ( ) verificada por Bateson, Saunders e Punnett em seus experimentos com ervilha-decheiro, consistia na ocorrncia, em uma pequena frao dos gametas, do fenmeno da repulso (no esperada) dos dois alelos que estavam em acoplamento nos progenitores, produzindo assim uma certa porcentagem de recombinantes. 7. A tendncia de certos genes serem herdados juntos, denominada ( ) resulta do fato deles estarem localizados no mesmo cromossomo. 8. Um ( ) um conjunto de locos gnicos fisicamente conectados e que, portanto, no se segregam independentemente. Equivale a um cromossomo. Preencha os espaos em branco nas frases numeradas de 9 a 16 usando o termo mais apropriado dentre os listados abaixo : (a) permutao (b) bivalente (c) quiasma (d) gene pleiotrpico (e) cromossomo X (f) cromossomo Y (g) sinapse (h) marcador gentico (i) aberrao cromossmica 9. ( ) um processo pelo qual ocorre troca de pedaos correspondentes entre cromossomos homlogos. Este processo pode resultar na produo de indivduos recombinantes. 10. ( ) o emparelhamento ntimo dos cromossomos homlogos durante uma fase (prfase) da meiose, e que resulta em uma estrutura denominada ttrade. 11. Um alelo usado como uma sonda para seguir o destino de um gene ou cromossomo em um experimento denominado ( ). 12. Durante a meiose ocorre uma associao entre os cromossomos homlogos duplicados, a qual resulta em um feixe de 4 de cromtides que denominado ( ). 13. Uma alterao estrutural ou numrica dos cromossomos denominada ( ). 14. ( ) aquele que influencia mais de uma caracterstica. 15. ( ) uma estrutura em forma de cruz, observada entre cromtides homlogas durante a meiose, e que resulta de um processo denominado ( ). 16. ( ) o par do cromossomo X no sexo masculino de muitas espcies. 17. ( ) um cromossomo que geralmente ocorre em dose dupla nas fmeas e simples nos machos de muitas espcies (por exemplo, nos mamferos) e est relacionado com a determinao do sexo. Preencha os espaos em branco nas frases numeradas de 18 a 21 usando o termo mais apropriado dentre os arrolados abaixo : (a) cromossomos homlogos (b) cromtides homlogas (c) cromtides-irms (d) genes duplicados

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18. ( ) so aqueles que se emparelham durante a meiose e geralmente so semelhantes no tamanho e na forma. Eles contm os mesmos locos gnicos e, em cada par, um tem origem paterna e o outro, materna. 19. ( ) so os pares de filamentos que resultam da auto-duplicao de cromossomos homlogos. 20. Dois pares idnticos de alelos em um indivduo diplide so chamados de ( ). 21. ( ) so os pares de filamentos idnticos, unidos pelos centrmeros, que resultam da autoduplicao de um cromossomo, durante o processo de diviso celular .

esfricos e vermelhos : 1 esfricos e amarelos : 1 oblongos e vermelhos : 1 oblongos e amarelos. Estes resultados sugerem ( ) entre os alelos que determinam a cor e aqueles que determinam a forma dos frutos. 25. Um indivduo duplo-heterozigtico (AaBb) para dois pares de alelos que determinam duas caractersticas cruzado com um duplorecessivo (aabb ) e produz apenas dois tipos de descendentes, na proporo 1 dominante para a primeira das caractersticas e recessivo para a segunda : 1 recessivo para a primeira e dominante para a segunda. Estes resultados so indicativos de ( ) entre os alelos A e b e entre a e B.

PARTE B : L IGANDO CONCEITOS E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para responder s questes de 22 a 25: a. ligao incompleta b. ligao gnica do tipo cis c. ligao gnica do tipo trans d. segregao independente 22. Um indivduo duplo-heterozigtico (AaBb) para dois pares de alelos que determinam duas caractersticas cruzado com um duplorecessivo (aabb) e produz apenas dois tipos de descendentes, na proporo 1 : 1, ou com fentipo dominante para ambas as caractersticas ou apenas com fentipo recessivo. Estes resultados so indicativos de ( ) entre os alelos A e B e entre a e b . 23. O cruzamento de drosfilas de cerdas longas e ausncia de olhos (AAbb) com drosfilas de cerdas curtas e presena de olhos ( aaBB ) produziu apenas descendentes de cerdas longas e com presena de olhos (AaBb). Do cruzamento-teste efetuado com os indivduos da gerao F1 foram produzidas 4 classes fenotpicas na seguinte proporo: 1 (presena de cerdas longas e de olhos) : 99 (presena de cerdas longas, ausncia de olhos) : 99 (presena de cerdas curtas e de olhos) : 1 (presena de cerdas curtas, ausncia de olhos). Estes resultados so indicativos de ( ) entre os alelos A e b e entre a e B. 24. O cruzamento entre plantas de uma variedade de tomate de frutos esfricos e amarelos (AAbb) com plantas de outra variedade de frutos oblongos e vermelhos (aaBB) produz apenas tomates esfricos e vermelhos (AaBb). O cruzamento-teste realizado com indivduos da gerao F1 produz 4 classes fenotpicas : 1

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

26. O que levou Bateson, Saunders e Punnett a concluir que os genes para cor da flor e para forma do gro-de-plen em ervilha-de-cheiro se comportavam de acordo com o esperado pela primeira lei de Mendel, mas no de acordo com o esperado pela segunda lei? 27. O cruzamento entre plantas duplo-homozigticas de ervilha-de-cheiro do tipo azul-longo com plantas do tipo vermelho-redondo produz apenas plantas com fentipo igual s primeiras. O cruzamento-teste da gerao F1 produz 4 classes fenotpicas na seguinte proporo 6,9 azul-longo: 1 azul-redondo: 1 vermelho-longo: 6,9 vermelho-redondo. Se a gerao parental for contituda por indivduos azul-redondo X vermelho-longo o resultado do cruzamentoteste da gerao F1 ser: 1 azul-longo: 6,9 azulredondo: 6,9 vermelho-longo: 1 vermelhoredondo. Como Bateson, Saunders e Punnett explicaram as diferenas nestas propores entre os descendentes dos cruzamentos-testes do indivduos duplo-heterozigticos dos dois tipos de cruzamentos? 28. Drosfilas com gentipo AaBb cruzadas com outras com gentipo aabb. geralmente produzem descendentes na seguinte proporo genotpica : 9 AaBb: 9 aabb: 1 Aabb: 1 aaBb. Entretanto, de um cruzamento-teste de uma fmea duplo-heterozigtica nasceram descendentes na seguinte proporo genotpica : 1 AaBb: 1 aabb: 9 Aabb : 9 aaBb.Proponha uma hiptese para explicar o resultado do primeiro cruzamento e outra para explicar o resultado obtido no cruzamento com a ltima fmea.

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29. Drosfilas duplo-homozigticas de asas vestigiais e cor castanha foram cruzadas com outras, de uma linhagem tambm duplohomozigtica, de asas longas e cor cinza e produziram apenas descendentes de asas longas e corpos castanhos. Dos cruzamentosteste realizados com as moscas da gerao F1 foram obtidas moscas com a seguinte proporo fenotpica: 1 (asas vestigiais-corpo castanho): 1 (asas vestigiais-corpo cinza): 1 (asas longas-corpo castanho): 1 (asas longas corpo cinza). Baseado nestes resultados responda: a) Qual o gentipo de cada um dos fentipos envolvidos no experimento acima? b)Quais fentipos so parentais? c) Quais fentipos so recombinantes? d)Qual a porcentagem de fentipos parentais? e) Qual a porcentagem de fentipos recombinantes? 30. Drosfilas duplo-homozigticas de asas vestigiais e cor castanha foram cruzadas com outras, de uma linhagem tambm duplohomozigtica, de asas longas e cor preta e produziram apenas descendentes de asas longas e corpos castanhos. Dos cruzamentosteste realizados com as fmeas da gerao F1,

foram obtidas moscas com a seguinte proporo fenotpica: 4,6 (asas vestigiais-corpo castanho): 1 (asas vestigiais-corpo preto): 1 (asas longas-corpo castanho): 4,6 (asas longascorpo preto). Baseado nestes resultados responda: a) Qual o gentipo de cada um dos fentipos envolvidos no experimento acima? b) Quais fentipos so parentais? c) Quais fentipos so recombinantes? d) Qual a porcentagem de fentipos parentais? e) Qual a porcentagem de fentipos recombinantes? f) A que podem ser atribudas as diferenas observadas nos resultados dos cruzamentosteste dos experimentos detalhados nas perguntas 28 e 29? g) Nos dois casos ocorre segregao independente? Justifique. Entretanto, nos cruzamentos-testes de machos F1, foram obtidos apenas 2 classes em F2 : 1 (asas vestigiais - corpo castanho) : 1 (asas longas - corpo preto). Tais resultados mostram que h uma diferena essencial na formao dos gametas masculinos e femininos em D. melanogaster. Que diferena essa?

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