17/11/2009

EXPRESSO GNICA
Definio: Definio: - Processo que inclui a transcrio e a eventual traduo do RNA em protena; protena; - Envolve protenas, que reagem a sinais ambientais, aumentando ou diminuindo as taxas de expresso de genes especficos; especficos; - Envolve tambm sistemas complexos que garantem a expresso de genes na poca e nas quantidades apropriadas; apropriadas; - Interao entre as seqncias gnicas denominadas de elementos reguladores. reguladores. e outras seqncias

CONTROLE DA EXPRESSO GNICA:

- PROCARIOTOS E EUCARIOTOS

EXPRESSO GNICA
Nveis de Controle: Controle: 1) Modificaes no DNA ou em sua compactao 2) Transcrio 3) Ps-Transcrio Ps4) Traduo 5) Ps-Traduo PsGenes Estruturais: codificam protenas que Estruturais: so usadas no metabolismo e na biossntese, ou que tm um papel estrutural na clula; clula; Genes Reguladores: so genes que cujo Reguladores: produto, seja um RNA ou uma protena, interagem com outras seqncias e afetam sua transcrio ou traduo; traduo; Elementos Regulatrios: seqncias de DNA Regulatrios: que regulam a expresso de outras seqncias. seqncias.

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

Organizao Gnica: Gnica:

Ex.: Ex.: E. coli, bactria que reside no intestino grosso humano. Os humano. nossos hbitos alimentares determinam os nutrientes disponveis para essa bactria. bactria. Mecanismo de compensao da sua inabilidade em alterar o meio externo sendo internamente flexvel. Ex.: Se a glicose est presente, flexvel. Ex.: ela a usa para gerar ATP; se no houver glicose, ela usa lactose, ATP; maltose ou qualquer outro dentre vrios aucares. aucares.

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

Genes de procariotos responsveis por funes vitais, como os que codificam para RNAr, RNAt, enzimas de vias glicolticas, subunidades de DNA Pol, RNA Pol e protenas ribossomais, so constantes); expressos constitutivamente (velocidade e quantidades constantes); Outros genes s so expressos quando seus produtos so necessrios, sua expresso induzida, como so os genes codificantes de enzimas induzida, envolvidas em vias catablicas; catablicas; - Ex.: a presena de uma fonte de carbono no ambiente provoca a Ex.: expresso de genes que codificam enzimas que captam e metabolizam essa fonte de carbono. Quando esta fonte desaparece, os carbono. genes que codificam estas enzimas so desligados. desligados.

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

O processo inverso ao mecanismo de induo o de represso; Ex.: represso; Ex.: Em E. coli, a via metablica (enzimas) de sntese de um aminocido coli, qualquer pode ser desligada se ao meio em que ela se encontra for adicionado o aminocido em questo. questo. Represso Catablica: As bactrias metabolizam glicose Catablica: preferencialmente na presena d l t f i l t de lactose ou outros acares. A t acares. quebra da glicose (gliclise) requer menos energia. Quando a glicose gliclise) energia. est disponvel, os genes que participam do metabolismo de outros acares ficam reprimidos. reprimidos.

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EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

O controle transcricional exercido por cascatas de fatores : -A especificidade da ligao da RNApol nos diferentes promotores dada pela interao com as vrias espcies de fatores (70, 28, 34, etc.) etc. existentes na clula; clula; - A disponibilidade desses fatores para incio da transcrio pode ser uma forma de controle da expresso gnica em nvel de transcrio; transcrio; - Ex.: Bacterifago SPO1 que infecta e se multiplica em B. subtilis. Ex.: SPO1 subtilis. Existem 3 categorias de genes: expresso imediata, intermediria e genes: imediata, tardia; tardia;

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

-Aps a infeco do fago, os genes imediatos so transcritos sob o coli) controle do fator A de B. subtilis (= 70 em E. coli). Um destes genes o gp28 28 cujo produto o fator gp28. - Quando em quantidade suficiente, esse fator permite a expresso dos gp33 gp34 genes intermedirios 33 e 34, que codificam os fatores gp33 e gp34. Estes 34, gp33 fatores formam um complexo gp33 /34, responsvel pela identificao de promotores d genes d expresso t di . t de de tardia tardia.

Imediata

Intermediria RNA pol

Tardia

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: - Controle Negativo: Uma protena regulatria atua como repressor, Negativo: repressor, ligandoligando-se ao DNA e inibindo a transcrio; transcrio; - Controle Positivo: Uma protena regulatria atua como ativador, Positivo: ativador, estimulando a transcrio; transcrio; Os repressores unem-se a stios especficos no DNA (stios unemoperadores), operadores), que esto localizados prximos ou sobrepostos regio promotora; promotora; A ligao do repressor no operador impede a ligao e a movimentao da RNA pol; pol; Esta ligao regulada por uma molcula que se une ao repressor mudando sua conformao e sua afinidade pelo operador. operador.

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: - Quando o repressor, que normalmente est ativo, inativado pela molcula permitindo a ao da RNA pol e a transcrio, diz-se que o dizcontrole negativo indutvel; indutvel;

- Quando o repressor, que normalmente est inativo, ativado pela molcula bloqueando a ao da RNA pol e a transcrio, diz-se que o dizcontrole negativo repressvel; repressvel;

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: - Os ativadores unem-se a stios adjacentes ao promotor, aumentando a unemafinidade da RNA pol por ele e favorecendo a transcrio; transcrio;

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

O modelo do Operon: Operon: - Operon: grupo de genes estruturais que so transcritos juntos sob o Operon: controle de um nico promotor. formado pelos genes estruturais, promotor. estruturais, um promotor e um operador. Ex.: Operon Lac, Operon Trp operador. Ex.: - Um gene regulador afeta o funcionamento do operon, mas no considerado parte dele, pois este tem o seu prprio promotor. Ele promotor. traduzido em uma pequena protena reguladora que se liga ao stio operador. operador.

- N controle positivo indutvel, o ativador se un m l ul f rm nd No ntr l positi o indut el, indutvel ti d r une molcula formando um complexo que ento se une ao DNA, favorecendo a transcrio; transcrio;

- No controle positivo repressvel, o ativador se une ao DNA repressvel, favorecendo a transcrio. A ligao da molcula promove a dissociao transcrio. do ativador, impedindo a transcrio. transcrio.

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O Operon Lac (Operon da Lactose): Lactose): -Modelo para o controle gentico do metabolismo de lactose em E. coli descrito em 1961 por Franois Jacob e Jacques Monod; Monod; -Lactose: dissacardeo de difcil difuso atravs da membrana celular Lactose: p p devendo ser transportada ativamente para o interior da clula com o auxlio de uma enzima permease; permease; - Para usar a lactose como fonte de energia, a E. coli deve quebr-la em quebrglicose e galactose, reao catalisada pela enzima -galactosidase. galactose, galactosidase. Esta enzima tambm converte a lactose em alolactose; alolactose; - Uma terceira enzima, a transacetilase, tambm produzida, mas sua transacetilase, produzida, funo no metabolismo da lactose desconhecida. desconhecida.

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

O Operon Lac: Lac: -As trs enzimas, permease, -galactosidase e a transacetilase so codificadas por genes estruturais no Operon Lac de E. coli. coli. - Quando a lactose est ausente no meio na qual a bactria cresce, so produzidas apenas algumas molculas de cada enzima. Entretanto, enzima. quando a lactose adicionada ao meio e a glicose est ausente, a taxa ausente, de sntese de todas as 3 enzimas aumenta cerca de mil vezes dentro de 2 ou 3 min. min. -A -galactosidase codificada pelo gene lacZ, a permease pelo gene lacZ, lacY e a transacetilase pelo gene lacA. lacA. - No Operon Lac os 3 genes tem um promotor nico (P) e so transcritos juntos. Antecedendo o promotor h um gene regulador (lac juntos. I) que tem seu prprio promotor e atua como repressor. repressor.

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

O Operon Lac e a Represso Catablica: Catablica: -A induo do Operon Lac requer tanto a presena da alolactose (indutor) para inativar o repressor, quanto a ausncia de glicose. glicose. - Os nveis de AMPc so controlados pela glicose. O baixo nvel de p g glicose. glicose aumenta a produo do AMPc levando transcrio dos genes do Operon Lac. Lac.

-A represso catablica resulta do controle positivo em resposta glicose. glicose. O controle positivo requer um fator de ativao, como o complexo AMPc + protena ativadora do catabolismo (CAP), que se CAP), liga a um stio perto do promotor e estimula a ligao da RNApol. RNApol.

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

- A ativao do CAP ineficaz nesse sistema se o repressor Lac estiver bloqueando a transcrio; transcrio;

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

O Operon Trp (Operon do Triptofano): Triptofano): - Modelo de controle da biossntese de Triptofano. Triptofano. - O Operon Trp contm 5 genes estruturais (trpE, trpD, trpC, trpB e trpA) que trpA)

produzem componentes de 3 enzimas que convertem corismato em triptofano. triptofano.

- A represso feita pela ligao do prprio triptofano ao repressor, o que torna

o repressor ativo. O repressor ativo liga-se ao operador e impede que a RNApol ativo. ligatranscreva os genes estruturais. g estruturais.

- Entretanto, mesmo que o repressor Lac esteja dissociado do operador, a transcrio no atinge nveis mximos, a menos que CAP esteja ligada ao DNA. DNA.

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EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

-

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

A Atenuao da Transcrio: Transcrio:
-

A Atenuao da Transcrio: Transcrio:

- Mecanismo adicional de regulao da expresso gnica que controla a capacidade da RNApol em continuar o alongamento alm de determinados stios; stios; - Mesmo que a transcrio do Operon Trp tenha sido iniciada ( [ ] de triptofano), essa pode no prosseguir at o stio de trmino; trmino;

- O trmino da transcrio marcado por uma estrutura em forma de grampo; grampo; - Quando necessrio que a traduo ainda ocorra,os prprios p g p p q ribossomos impedem a formao do grampo permitindo que a transcrio continue. continue.

- O stio de atenuao est localizado a 162nt aps o stio de incio da 162nt transcrio. transcrio. Caso o triptofano seja abundante, a maior parte da transcrio termina ali; ali;

EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

RNAs Regulatrios: - RNAs anti-senso: Pequenas molculas de RNA complementares a seqncias particulares nos RNAm que se ligam a estes e inibem a traduo; Evita E ita ligao ao ribossomo ribossomo; Desestabiliza o mRNA susceptvel a endonucleases; Mimetiza um terminador; Regulao Traducional: - Disponibilidade de protenas ribossmicas; tornando-o

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

Caractersticas Gerais:

-A expresso gnica em eucariotos regulada no tempo e no espao. espao. Alguns genes so expressos de maneira especfica para cada tecido. tecido. Outros genes so expressos em um padro temporal especfico durante o d n l im nt . desenvolvimento. desenvolvimento

-Todas as clulas de um organismo levam a mesma informao gentica, mas apenas um subgrupo de genes expresso em cada tipo celular. celular.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

Caractersticas Gerais: - Resposta limitada s mudanas nutricionais e ambientais. ambientais. - Os genes eucariticos no esto organizados em operons. operons. -A estrutura da cromatina afeta a expresso gnica. gnica. - Os ativadores parecem ser mais comuns em clulas eucariticas, embora tanto estes quanto os repressores estejam presentes tambm em clulas procariticas. procariticas.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

Estrutura da Cromatina X Regulao Gnica: Gnica: - O DNA deve se desenrolar das protenas histonas para que ocorra a transcrio atravs: atravs: -Acetilao das histonas: A adio de grupos acetil (CH3CO) s histonas: protenas histonas catalisada pela enzima Acetiltransferase (HAT). Os (HAT). grupos acetil desestabilizam a estrutura do nucleossomo, por neutralizar as cargas positivas das histonas, permitindo que o DNA se separe destas; destas;

ACETILAO

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EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

- Complexos de Remodelagem da Cromatina: Alguns fatores de Cromatina: transcrio e outras protenas regulatrias ligam-se diretamente a stios ligamparticulares no DNA sem acetilar as protenas histonas promovendo o incio da transcrio. transcrio.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

-Desacetilao das histonas: Outras enzimas denominadas desacetilases histonas: (HDAC) removem estes grupamentos acetil e restauram a estrutura compactada da cromatina, reprimindo a transcrio. transcrio. -Metilao do DNA: Fenmeno epigentico* que ocorre pela DNA: epigentico* transferncia de um grupamento metil (CH3) ao carbono 5 da citosina, catalisada por uma enzima DNA metiltransferase. metiltransferase. - Este processo mais comum nas bases citosinas ligadas covalentemente guanina, denominados dinucleotdeos CpG. um CpG. processo associado represso da expresso gnica. gnica. - *Fenmeno epigentico pode ser definido como mudana no material gentico que altera a regulao da expresso gnica de maneira que esta passada para as clulas filhas dentro das clulas somticas, porm no caracterizada como mutao, pois no mutao, envolve mudana na seqncia de DNA. DNA.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

- Metilao de DNA o mecanismo que permite que determinados genes (e no outros) se manifestem dentro de clulas normais especializadas, visto que todas as clulas do corpo trazem a mesma carga gentica. gentica. -O que as diferencia a manifestao de um ou de outro gene durante o desenvolvimento d n l im nt e em t d a sua vida p r desativar g n m toda u id para d ti r genes desnecessrios. desnecessrios. - Em contraste, pequenas pores de DNA, chamadas ilhas CpG, so CpG, comparativamente ricas em nucleotdeos CpG e quase sempre esto livres de metilao. Estas ilhas CpG esto freqentemente localizadas na metilao. regio promotora dos genes humanos e a metilao dentro das ilhas est associada inativao da transcrio do gene correspondente. correspondente.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

- Clulas cancergenas: metilao anormal de DNA desativa genes que cancergenas: normalmente evitariam divises celulares imprprias. imprprias. - Mais de 10% dos genes em alguns tipos de tumor so inativados por 10% metilao. metilao. A resistncia quimioterapia est, na maioria dos casos, ligada ao grau de metilaes anormais em alguns tumores. tumores.

-As alteraes de metilao do DNA em clulas tumorais incluem a perda da metilao em seqncias normalmente metiladas (hipometilao) e o ganho de seqncias metiladas em locais geralmente hipometilao) no metilados (hipermetilao). hipermetilao)

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

- Evidncias sugerem que a metilao do DNA esteja associada desacetilao das histonas. A metilao parece atrair as HDAC, que histonas. removem o grupamento acetil estabilizando a estrutura do nucleossomo reprimindo assim, a expresso gnica. gnica.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

Transcrio X Regulao Gnica: Gnica: -Via seqncias de DNA localizada 5 upstream: Reforadores upstream: (enhancers) e Silenciadores (silencers); (silencers); Os reforadores so elementos reguladores positivos que servem para aumentar o nvel de transcrio basal. Podem estar localizados muito basal. distantes do gene que eles regulam. Alguns podem ser componentes regulam. integrais dos promotores; promotores; Os silenciadores servem para diminuir o nvel de transcrio basal; basal; Os Insuladores ou Isoladores so seqncias de DNA que bloqueiam a propagao da influncia dos reforadores. reforadores.

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EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

Transcrio e Regulao Gnica: Gnica: - Via fatores de transcrio: protenas especiais ou seqncias transcrio: reguladoras presentes nos reforadores e nos promotores. Dividempromotores. Dividemse em duas classes: classes: 1) Fatores Basais de Transcrio: necessrios para a expresso de todos Transcrio: g p p p os genes transcritos pela RNApol II, estando presentes em todas as clulas (Ex.: TFIIA, TFIIB, TFIID); (Ex.: TFIID); 2) Fatores Especficos (Ativadores, Repressores, Co-ativadores e CoCoCorepressores): repressores): responsveis pela expresso de protenas clulaclulaespecficas; especficas; - Estes fatores apresentam domnios funcionais de ligao ao DNA e de ativao da transcrio. transcrio.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

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EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

Protenas de Ligao ao DNA: DNA: Protenas que se ligam a seqncias de DNA e que influenciam sua expresso. expresso. Em geral formam pontes de hidrognio com as bases do DNA ou interagem com o arcabouo acar-fosfato do DNA. acarDNA.

- Apresentam partes funcionais denominadas de domnios, compostos domnios, por 60 a 90 aa que so responsveis pela ligao ao DNA. Dentro dos DNA. domnios existem estruturas caractersticas denominadas motivos. motivos. Motivo Hlice-Giro-Hlice Hlice-Giro- Duas hlices alfa que se ligam ao sulco maior do DNA; DNA; Presentes em clulas procariticas e eucariticas. eucariticas.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

Motivo Zinc Finger - Ala de aa com Zinco na base que se ligam ao sulco maior do DNA; DNA; Presentes em clulas eucariticas; eucariticas; - Descoberto no fator TFIIIA envolvido na transcrio do RNAr 5S pela RNA pol III. III. Motivo Zper de Leucina - Hlices de Leucinas e um brao bsico; bsico; duas leucinas interdigitadas, que se ligam a dois sulcos maiores do DNA; DNA; Presentes em clulas eucariticas. eucariticas.

EXPRESSO GNICA e LOCUS MULTIGNICOS

Em eucariotos muitos genes esto organizados em locus multignicos, em que os mesmos so coordenadamente regulados durante a diferenciao e desenvolvimento; desenvolvimento; Ex.: Ex.: Genes de globina: a regio de controle do locus (LCR), exerce globina: (LCR), controle na expresso destes genes visto que: que: 1) Seqncias reguladoras presentes em promotores e reforadores no so suficientes para controlar a expresso; expresso; 2) Delees na regio 5upstream do gene da -globina inativam a expresso do locus; locus; 3) Presena de stios hipersensveis DNase* na regio 5upstream do gene da -globina; globina;

Regies transcricionalmente ativas (cromatina frouxa) so mais sensveis degradao pela DNase, sendo este um bom parmetro na identificao de genes ativos. ativos.

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EXPRESSO GNICA e LOCUS MULTIGNICOS

A expresso dos genes de globina determinada no somente pelo seus promotores, mas tambm pelo LCR localizado a montante do 1 gene do cluster (-globina); globina); A regio LCR, marcada por stios hipersensveis a DNase, permite o acesso de protenas regulatrias possam se ligar e ativar a transcrio dos genes; genes;

EXPRESSO GNICA COORDENADA

Vrios genes eucariticos podem ser ativados pelo mesmo estmulo; estmulo; Ex.: Ex.: As protenas de choque trmico (heat-shock - hsp) ajudam a evitar heathsp) danos contra agentes estressantes (calor) so produzidas por 20 genes diferentes que so expressos coordenadamente, embora no estejam agrupados como operons. operons. Os genes de expresso coordenada so capazes de responder ao mesmo estmulo pois tm seqncias regulatrias em comum nos seus promotores e reforadores. Estas so denominadas elementos de reforadores. resposta; resposta;

Embrio

Fetal

Adulto

EXPRESSO GNICA COORDENADA

EXPRESSO GNICA COORDENADA

Outros elementos de resposta so encontrados antecedendo o gene da metalotionena e tambm contribuem para aumentar a transcrio; transcrio;

Um nico gene pode ser regulado por vrios elementos de resposta diferentes. diferentes.

Ex.: Ex.: O gene da metalotionena, que codifica uma protena que se liga a metalotionena, metais pesados e os remove das clulas. A presena de metais pesados clulas. estimula a transcrio. transcrio.

GREGRE- Elemento de resposta a hormnios glicocorticide (TGGTACAAAATGTTCT) MREMRE- Elemento de resposta a metais TRETRE- Elemento de resposta a steres de forbol (TGACTCA) BLEBLE- Elemento de resposta basal

Nos elementos de resposta existem seqncias consenso curtas, onde, aps estmulo especfico, se ligam as protenas regulatrias para ativar a transcrio gnica. gnica.

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

PsPs-Transcrio X Regulao Gnica: Gnica: - Os genes eucariticos podem ser regulados por meio do controle do processamento do RNAm: RNAm: stios alternativos de splicing do RNAm (a seleo de stios splicing alternativos de corte leva produo de protenas diferentes); p p diferentes); ) stios alternativos de poliadenilao do RNAm (idem); (idem); controle do transporte do RNAm para o citoplasma (translocao); translocao) controle citoplasmtico da estabilidade (degradao por ribonucleases) do RNAm; RNAm;

EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

PsPs-Transcrio X Regulao Gnica: Gnica: silenciamento do RNA: iniciado por molculas bifilamentares de RNA RNA: que so cortadas e processadas. O pequenos RNA interferentes processadas. (RNAsi), ligam-se seqncias complementares do RNAm causando ligamcorte e decomposio; decomposio; - O RNAsi podem estimular a metilao d seqncias complementares Os A d l l de l no DNA. DNA.

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EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

Traduo e Ps-Traduo X Regulao PsGnica: Gnica: Disponibilidade dos componentes necessrios maquinaria da traduo (ribossomos, fatores de iniciao e alongamento, aminoacil RNAt); RNAt); Disponibilidade de protenas que se p p q ligam nas pontas 5 e 3 do RNAm (CAP binding proteins e PoliA binding proteins) proteins); Aps a traduo as protenas eucariticas passam por uma seleo alternativa de vias de processamento: processamento: clivagem proteoltica, remoo da seqncia sinal, modificaes covalentes (acetilao, fosforilao, metilao) e especificidade de degradao. degradao.