Universidade Federal de Alagoas Instituto de Qumica e Biotecnologia Programa de Ps-graduao em Qumica e Biotecnologia

SEPARAES CROMATOGRFICAS Lista de exerccios

Nome: Isis Torres Souza Prof. Dr. Antnio Euzbio Goulart SantAna

Macei, janeiro de 2011.

LISTA DE EXERCCIOS SKOOG Cap. 24 - INTRODUO S SEPARAES CROMATOGRFICAS 1. Defina: a) Eluio a lavagem de uma amostra atravs da coluna pela adio contnua de novos volumes de solvente. b) Fase mvel a fase utilizada para transportar a amostra em separaes cromatogrficas, que pode ser um lquido, gs ou fluido supercrtico. c) Fase estacionria uma fase fixa, imiscvel com a fase mvel, colocada na coluna ou em uma superfcie slida, atravs da qual a fase mvel forada a passar, seja por fora da gravidade ou pela aplicao de presses superiores mesma. d) Constante de distribuio a razo de partio ou coeficiente de partio, tambm chamada de constante de equilbrio (K), que definida como a razo entre a concentrao molar do soluto na fase estacionria (CE) e a concentrao molar na fase mvel (CM), onde CE diretamente proporcional a CM. e) Tempo de reteno o tempo que o pico do analito demora at atingir o detector aps a injeo da amostra, sendo representado pelo smbolo (TR) f) Fator de reteno um parmetro utilizado para descrever as velocidades de migrao de diferentes analitos nas colunas. g) Fator de separao a relao entre os coeficientes de distribuio de cada um dos elementos. h) Altura do prato definida pela razo entre a varincia ( 2) pelo comprimento (geralmente em centmetros) da coluna empacotada (L). i) Difuso longitudinal um processo de alargamento de banda no qual o analito difunde-se do centro concentrado de uma zona para regies mais diludas frente e atrs do centro da zona, isto , na direo paralela e oposta ao fluxo da fase mvel. j) Difuso por turbulncia quando as molculas de analito alcanam a extremidade final da coluna aps um intervalo de tempo, levando a um alargamento da banda, ou faixa. k) Resoluo de coluna A resoluo de coluna (RE) fornece uma medida quantitativa da sua habilidade em separar dois analitos, podendo ser definida pela multiplicao da variao do tempo necessrio para conduzir o pico de A e B para o final da coluna quando a velocidade da fase mvel for [(TR)B-(TR)A] por dois, dividido pelo somatrio do efeito de reteno de A e B.

l) Eluente O eluente a fase mvel. Sua funo mover-se atravs da fase estacionria arrastando consigo os diversos componentes, de modo a provocar a separao entre eles. 2. Descreva o problema geral da eluio. Na eluio os analitos podem no ser separados devido a uma diferena de polaridade e ficarem retidos na fase estacionria. O uso de gradientes na eluio permite frequentemente a separao de solutos que no podem ser separados por uma operao isocrtica, mesmo com solventes mistos. Ela especialmente eficiente quando os componentes da amostra diferem muito em polaridade. 3. Liste as variveis que levam ao alargamento de zona. - velocidade linear da fase mvel - coeficiente de difuso na fase mvel - coeficiente de difuso na fase estacionria - fator de reteno - dimetro da partcula da fase estacionria - espessura da camada de lquido que recobre a fase estacionria. 4. Qual a diferena entre cromatografia gs-lquido e lquido-lquido? A cromatografia gs-lquido tem como equilbrio a partio entre gs e lquido, enquanto que na cromatografia lquido-lquido a partio ocorre entre lquidos imiscveis. 5. Qual a diferena entre cromatografia lquido-lquido e lquido-slido? A cromatografia lquido-lquido tem como equilbrio a partio ocorre entre lquidos imiscveis enquanto que na cromatografia lquido-slido o tipo de equilbrio a adsoro . 6. Quais so as variveis que provavelmente afetam o valor de para um par de analitos? As constantes de distribuio de duas espcies. 7. Como o fator de reteno de um soluto pode ser manipulado? Uma separao pode ser melhorada de modo significativo pela manipulao do fator de reteno, o que gera um aumento de resoluo. O modo mais fcil de melhorar a resoluo por otimizao de k. Para fases mveis gasosas, k frequentemente pode ser melhorado por aumento de temperatura. Para fases mveis lquidas, mudanas na composio do solvente costumam permitir manipulao de k de modo a obter separaes melhores. 8. Descreva um mtodo para a determinao do nmero de pratos em uma coluna. O nmero de pratos determinado atravs da relao entre o comprimento da coluna empacotada pela altura equivalente a um prato terico. 9. Quais so os efeitos da variao de temperatura sobre os cromatogramas? Os cromatogramas so usualmente obtidos mantendo-se constante a temperatura da coluna. H duas desvantagens da operao isotrmica: - Os picos iniciais so finos e pouco espaados (a resoluo relativamente pequena nesta regio do cromatograma) e os picos do final do cromatograma tendem a ser baixos, largos e muito espaados (resoluo excessiva).

- Com freqncia, compostos com pontos de ebulio elevados no so detectados, particularmente no caso de misturas de compostos desconhecidos com grande faixa de pontos de ebulio. A solubilidade das substncias de alto ponto de ebulio na fase estacionria muito alta, o que faz com que eles permaneam presos na entrada da coluna, especialmente quando a temperatura de operao da coluna relativamente baixa. 10. Por que, em um grfico de altura do prato versus razo, ocorre um mnimo em razes mais baixas na cromatografia lquida do que na cromatografia gasosa? Isso ocorre devido s velocidades de difuso muito maiores nos gases (10 4 vezes maiores do que em lquidos), assim, os mnimos nas curvas que relacionam a altura do prato, H, com a vazo so consideravelmente mais largos na cromatografia gasosa. 11. O que gradiente de eluio? So variaes de fatores de reteno que decorrem de variaes na composio da fase mvel durante a eluio na cromatografia lquida. 12. Os dados abaixo se referem a uma coluna para cromatografia lquida: Comprimento da coluna Vazo VM VE 24,7cm 0,13mL/min 1,37mL 0,164mL

Um cromatograma de uma mistura de espcies A, B, C e D forneceu os seguintes dados: Tempo de reteno, min No retido A B C D 3,1 5,4 13,3 14,1 21,6 Largura do Pico Base (W), min -----0,41 1,07 1,16 1,72

Calcule o nmero de pratos para cada pico. A) = LW/4tR = 24,7 x 0,41/4x 5,4 = 10,13/21,60 = 0,47 H = 2 /L H= (0,47)2/ 24,7 = 0,22/24,7 = 0,0089 cm N = L/H NA= 24,7/0,0089 = 2775 B) = 24,7 x 1,07/ 4x 13,3 = 26,43/53,20 = 0,50 H = (0,5)2/ 24,7 = 0,25/24,7 = 0,0101 NB= 24,7/0,0101 = 2445

C)

= 24,7 x 1,16/4 x 14,1 = 28,65/ 56,40 = 0,51 H = (0,51)2/ 24,7 = 0,26/24,7 = 0,0105 NC = 24,7/0,0105 = 2352

D)

= 24,7 x 1,72/ 4x21,6 = 42,48/86,4 = 0,49 H = (0,49)2 /24,7 = 0,24/24,7 = 0,0097 ND = 24,7/0,0097 = 2546

20. Liste as variveis que levam ao alargamento de zona. Velocidade linear da fase mvel, coeficiente de difuso na fase mvel, coeficiente de difuso na fase estacionria, fator de reteno, dimetro da partcula da fase estacionria e espessura da camada de lquido que recobre a fase estacionria. 21. Qual o efeito sobre um pico de cromatograma da introduo da amostra a uma velocidade muito lenta? A amostra ficar retida mais fortemente, onde o movimento coluna abaixo aumentar a distncia entre os picos.

Cap. 25 - CROMATOGRAFIA GASOSA 1. Quais so as diferenas entre cromatografia gs-lquido e gs-slido? A cromatografia gs-lquido baseia-se na partio do analito entre uma fase mvel gasosa e uma fase imobilizada lquida na superfcie de um slido inerte; j o cromatografia gs-slido possui a fase estacionria slida, na qual a reteno dos analitos conseqncia de adsoro fsica, possuindo aplicao limitada devido a reteno semipermanente de molculas polares ou ativas e s marcantes caudas dos picos de eluio. 2. Quais os tipos de misturas so separadas por cromatografia gs-slido? Aquelas que no so retidas por coluna de gs-lquido, como: xido de nitrognio, sulfeto de hidrognio, dissulfeto de carbono, monxido de carbono, dixido de carbono e gases raros. 3. Por que a cromatografia gs-slido no to usada quanto a cromatografia gs-lquido? Devido a reteno semi-permanente de molculas polares ou ativas e s marcantes caudas dos picos de eluio. 4. Defina: a) Volume de reteno o volume de uma determinada substncia retido na coluna, e que diretamente proporcional ao tempo de reteno e a vazo mdia dentro da coluna. b) Volume de reteno corrigido o volume obtido na presso mdia da coluna, a razo entre a presso de entrada e a presso de sada. c) Volume de reteno especfico o volume de reteno obtido atravs da razo entre a diferena dos volumes de reteno corrigidos das respectivas espcies retidas e no retidas, e a massa da fase estacionria, sendo inversamente proporcional a sua temperatura absoluta. 5. Como funciona um medidor de fluxo de bolha de sabo? O gs fica saturado com gua e, a presso deve ser corrigida pela presso do vapor da gua. 6. O que programao de temperatura quando usada em cromatografia? o processo onde a temperatura aumentada durante a anlise, por uma srie de alteraes da temperatura da coluna controladas por um microprocessador. 7. Qual a diferena entre um detector sensvel concentrao e sensvel ao fluxo de massa? Indique que tipo de dispositivo so os seguintes detectores: No detector sensvel ao fluxo de massa a resposta do detector no afetada por alteraes do fluxo de gs de arraste e a alta sensibilidade se mantm mesmo em fluxos muito baixos, alm de causar a destruio da amostra, enquanto o detector sensvel a concentrao no causa a destruio da amostra e sua resposta pode ser afetada por alteraes no fluxo do gs. a) condutividade trmica: hlio e hidrognio b) emisso atmica: plasma de hlio

c) termoinico: fsforo e nitrognio d) captura de eltron: halognios contidos em compostos como pesticidas e bifenilas policloradas, perxidos, quinonas e grupos nitro. e) fotometria de chama: compostos sulfonados e fosforados f) fotoionizao: radiao ultravioleta 8. Descreva o princpio sobre o qual se baseiam cada um dos detectores listados no problema 7. a) condutividade trmica Esse tipo de detector usa um filamento metlico aquecido (fio fino de ouro, platina ou tungstnio), ou alternativamente um termistor um semicondutor de xidos de metal fundidos) para mostrar diferenas de condutividade trmica do gs de arraste (Hlio e Hidrognio so os melhores gases de arraste para usar com estes detectores). b) emisso atmica O gs de arraste (hlio) passa pela coluna capilar e carrega o eluente que passa, ao sair da coluna, por uma cavidade de microondas resfriada com gua onde se produz um plasma de hlio. A temperatura alta do plasma suficiente para decompor a amostra em tomos que, por sua vez, emitem um espectro atmico caracterstico. A radiao resultante focalizada, passa por uma rede de difrao, onde sofre disperso, e continua at um conjunto de diodos mvel. Esta montagem permite a deteco de elementos (exceto hlio, usado como gs de arraste) com sensibilidade muito alta. c) termoinico Baseia-se na queima do ar do efluente da coluna, misturado com hidrognio, com produo de uma chama de energia suficiente para ionizar as molculas de soluto cujos potenciais de ionizao so baixos. Os ons produzidos so coletados por eletrodos e a corrente inica produzida medida. O jato do queimador o eletrodo negativo. O anodo usualmente um filamento ou uma grade que atinge a extremidade da chama. A combusto de misturas de hidrognio e ar produz poucos ons e, assim, quando s o gs de arraste e o hidrognio se queimam, obtm-se um sinal praticamente constante.na presena de compostos que contm carbono, ocorre ionizao e a condutividade eltrica da chama aumenta fortemente d) captura de eltron Esses detectores exploram o fenmeno da recombinao baseado na captura de eltrons por compostos que tm afinidade por eltrons livre. O detector mede, ento, a diminuio e no o aumento da corrente. e) fotometria de chama Faz-se uma mistura de gases da amostra com H e Ar passar pelo queimador e l sofre uma ignio eltrica onde o nmero de ons obtido grosseiramente proporcional ao nmero de tomos de C reduzidos na chama. f) fotoionizao Trata-se de um detector cuja resposta depende do colecionamento de ons e amplificao do sinal em um eletrodo colecionador de carga positiva usando um amplificador convencional de alta impedncia. As molculas orgnicas do eluente so irradiadas ao sair da coluna juntamente com o eluente com luz ultravioleta de alta intensidade.

9. Quais so as principais vantagens e limitaes de cada um dos detectores listados no problema 7? a) condutividade trmica Vantagens sua simplicidade, a larga faixa dinmica linear, a resposta geral tanto a espcies orgnicas como inorgnicas e o carter no-destrutivo da amostra, que permite a coleta dos solutos aps a deteco. Limitaes grande volume, baixa sensibilidade e problemas de contaminao. b) emisso atmica Vantagens pode-se detectar um nmero muito grande de elementos em uma amostra, especificidade caracterstica para detectar de forma simultnea at 6 elementos. Limitaes alto custo e difcil manuteno c) termoinico Vantagens altamente sensvel e estvel, tem resposta rpida e uma faixa de resposta linear muito grande e til para deteco de muitos pesticidas fosforados. Limitaes a amostra destruda na chama, baixos fatores de resposta para certos compostos oxigenados como lcoois e compostos carbonilados. d) captura de eltron Vantagens permite anlise fcil em uma faixa de concentraes muito grande, so altamente sensveis e no alteram a amostra de modo significativo. Limitaes detector no to eficiente como um detector ionizao em chama, suscetibilidade a contaminao. e) fotometria de chama Vantagens muito seletivo para enxofre e fsforo, til na anlise de enxofre em baixa concentrao. bastante resistente e de fcil utilizao. Limitaes resposta no linear e causa a destruio da amostra. f) fotoionizao Vantagens sensibilidade semelhante ao detector ionizao em chama, resposta universal, no precisa de gases auxiliares. Limitaes um dos detectores de desenvolvimento mais recente, o que faz com que existam alguns problemas especialmente no que diz respeito contaminao da janela da lmpada e ao tempo de vida do detector. 10. Qual material da fase estacionria usado na maioria das colunas empacotadas de cromatografia gasosa? siloxano 11. Como diferem as seguintes colunas tubulares abertas? a) colunas PLOT Colunas abertas tubulares com camada porosa em que uma camada muito fina de adsorvente slido depositada de forma homognea na parede interna da coluna b) colunas WCOT So colunas tubulares em que a fase estacionria ligada diretamente parede interna do tubo.

c) colunas SCOT So colunas tubulares em que uma camada de suporte slido depositadana parede interna do tubo e recoberta com a fase estacionria. 12. O que so colunas tubulares abertas de megadimetro? Por que so usadas? So colunas que apresentam capilares de 530 m, sua eficincia no to boa quanto as colunas de dimetros menores, mas so significativamente melhores que as colunas empacotadas. So utilizadas por tolerarem tamanho de amostras similiares aos das colunas empacotadas. 13. Quais as vantagens de colunas capilares de slica fundida comparadas com colunas de metal ou vidro? Por serem feitos de slica purificada, os capilares de slica fundida contm quantidades mnimas de xidos metlicos, seus capilares possuem paredes mais finas do que os correspondentes em vidro. Os tubos ganham resistncia com recobrimento protetores de polimidas. Apresentam maior resistncia fsica, reatividade muito mais baixa com relao aos componentes da amostra e flexibilidade. 14. Que propriedades devem ter a fase estacionria lquida para a cromatografia? Devem ter baixa volatilidade, estabilidade trmica, inrcia qumica e caractersticas de solvente. 15. Por que as fases estacionrias de cromatografia gasosa so ligadas ou contm ligaes cruzadas? O que significam esses termos? Para que elas tenham uma maior durabilidade, podendo ser lavada com um solvente quando o filme se torna contaminado. As fases estacionrias ligadas envolvem a fixao de uma camada monomolecular da fase estacionria superfcie de slica da coluna atravs de uma reao qumica. As ligaes cruzadas a incorporao de um perxido ao lquido original. 16. Qual o efeito de espessura do filme da fase estacionria sobre a cromatografia gasosa? A espessura do filme afeta primariamente o carter e a capacidade de reteno da coluna. Filmes espessos so usados com analitos altamente volteis porque estes filmes retm solutos por tempo mais longo, permitindo assim um tempo maior para que a separao ocorra. Filmes finos so teis para separar espcies de baixa volatilidade em um perodo de tempo razovel. 17. O que so ndices de reteno? Descreva como so determinados. O ndice de reteno um parmetro para a identificao de solutos em cromatogramas. Pode ser obtido de um cromatograma de uma mistura deste soluto com, pelo menos, dois alcanos normais com tempos de reteno do soluto em estudo. Isto , alcanos normais so os padres sobre os quais se baseiam a escala de ndice de reteno. 18. Como um cromatograma obtido normalmente em GC/MS? E em GC/IR? GC/MS O cromatograma pode ser de corrente inica total (um grfico da soma de todas as correntes inicas em funo do tempo) ou cromatograma de corrente inica selecionada (um grfico de correntes inicas para um ou poucos ons em funo dotempo). O cromatograma de massa pode aparecer na tela do osciloscpio ou em um grfico em tempo real.

GC/IR a varredura disparada pela sada de um detector de pico cromatogrfico no-destrutivo e comea depois de um breve retardo que permite ao componente deslocar-se da regio do detector para cela de infravermelho. Os dados espectroscpicos so digitalizados, armazenados em um computador e depois impressos.

Cap. 26 - CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA 1. Liste os tipos de substncias s quais so mais aplicveis os seguintes tipos de cromatografia: a) gs-lquido As substncias que so pouco volteis e termicamente estveis. b) partio lquida Inicos e no-inicos, polares, de massa molecular baixa a moderadamente baixa. c) partio em fase reversa Compostos polares. d) troca inica Substncias inicas. e) permeao em gel Compostos de alta massa molecular que so solveis em solventes no polares. f) filtrao em gel Compostos polares de alta massa molecular. g) gs-slido Gases de baixa massa molecular. h) adsoro lquida Compostos no-polares e com massas molares menores que 5000. i) par inico Espcies inicas. 2. Descreva trs mtodos genricos para melhorar a resoluo na cromatografia de partio. Pode-se melhorar a resoluo da coluna, aumentando o nmero de pratos por reduo da altura dos pratos (H); outra forma, aumentando a temperatura, o que causa um aumento de k; para melhorar , altera-se a composio qumica da fase estacionria. Temperatura - Quando se mantm a temperatura constante aumenta a reteno das substncias e consequentemente o processo cromatogrfico. Pratos tericos para uma separao mais eficiente o prato deve ter um dimetro mnimo de cerca de 5mm, para um trabalho qualitativo, e menor para anlise quantitativa. Fase mvel- em cromatografia em coluna, a vazo deve ser mnima, no podendo estar abaixo da fase estacionria, utilizando-se solventes orgnicos, isoladamente ou uma mistura destes, tendo uma polaridade prxima a da substancia em anlise, para uma melhor resoluo. 3. Descreva um modo de manipular o fator de reteno de um soluto na cromatografia de partio. O fator de reteno k, pode ser alterado variando-se a temperatura ou a composio da fase mvel, ou seja, o ndice de polaridade do solvente.

4. Como pode ser manipulado o fator de separao para (a) cromatografia gasosa e (b) cromatografia lquida? Na cromatografia gasosa pela temperatura, e na cromatografia lquida alterando a composio da fase mvel. 5. No preparo de um gradiente de benzeno/acetona para HPLC em coluna de alumina, desejvel aumentar ou diminuir a proporo de benzeno conforme a coluna eluda? Aumentar a proporo de benzeno. Isto encurtaria o tempo de separao sem sacrifcio na resoluo dos primeiros picos. 6. Defina os seguintes termos: a) borbulhamento So sistemas nos quais os gases dissolvidos interferem formando bolhas na coluna e no sistema de deteco. b) eluio isocrtica a eluio processada com um nico solvente ou com uma mistura de solventes em propores iguais e concentraes constantes, ou seja, a composio do solvente mantida constante ao longo da eluio. c) eluio com gradiente aquela na qual a composio do solvente alterada continuamente ou em uma srie de etapas, com o objetivo de aumentar a fora do eluente. d) injeo por fluxo interrompido Na injeo com interrupo de fluxo, a vazo do solvente interrompida, uma conexo no ponto da coluna removida e a amostra injetada diretamente na cabea da coluna. Ento, a conexo recolocada e o bombeamento, reiniciado. e) fase estacionria pelicular So polmeros sintticos com tamanho varivel entre 2 a 5m, utilizado no empacotamento juntamente com slica, em coluna cromatogrfica. f) alargamento extra-coluna O alargamento de banda extra-coluna ocorre conforme o soluto carregado atravs de tubos abertos como os do sistema de injeo, da regio do detector e da tubulao de conexo dos vrios componentes do sistema. g) fase estacionria em modo reverso O recheio da fase estacionria apolar. Na cromatografia de modo reverso, usa-se slicas modificadas, polmeros apolares, do tipo polissiloxanos com cadeias laterais variadas (C8, C14, C16, C18). h) fase estacionria em modo normal O recheio da fase estacionria muito polar. A fase estacionria polar, sendo constituda por slica pura ou modificada (com aminopropil, diol ou ciano). i) detector de propriedades do sistema como um todo (no-seletivos) ndice de refrao, infravermerlho, espalhamento de luz. j) detector de propriedade solvente (seletivos) Eletroqumico, polarmetro e dicrosmo circular, espectrometria de massa, R.M.N., fluorescncia, UV-vis.

8. O que uma pr-coluna em cromatografia de partio? uma coluna pequena, introduzida antes da coluna analtica para aumentar sua durao por remoo de material particulado, de contaminantes dos solventes, e de contaminantes da amostra que se ligam irreversivelmente a fase estacionria. 9. De que modo so similares a cromatografia de partio em fase normal e a cromatografia de adsoro? Na escolha de sistemas de solventes, isto , em ambas so escolhidas dois solventes compaveis, um muito forte e o outro muito fraco. 10. Liste as caractersticas desejveis de detectores para HPLC. Boa estabilidade e reprodutibilidade, uma resposta linear para solutos que se estenda por vrias ordens de grandeza, tenha uma resposta rpida, alta confiabilidade e de fcil uso e no destruir a amostra. 11. Descreva algumas tcnicas que so usadas na interface de um cromatgrafo de lquido com um espectrmetro de massa. Em uma o eluente da coluna dividido, e apenas uma frao introduzida diretamente no espectrmetro de massas. Em outra o eluente depositado sobre uma correia contnua ou sobre um fio que se move e transporta o solvente e o analito para uma cmera aquecida para remoo do primeiro por vaporizao. 12. Liste as diferenas nas propriedades e regras das fases mveis em cromatografia lquida e gasosa. Como estas diferenas influem nas caractersticas dos dois mtodos? Para HPLC o ndice de reteno varia de acordo com a polaridade do solvente, enquanto que na cromatografia gasosa, varia de acordo com o ponto de ebulio de solvente. Em cromatografia liquida a eficcia de uma coluna varia de acordo com o numero de pratos tericos, quanto maior o numero de pratos melhor a sua eficincia. Em GC no existem pratos tericos. Como o fator de seletividade varia de acordo com o fator de reteno, no caso da CL se a amostra a ser analisada for polar, o eluente consequentemente ter que ser polar para que ocorra uma melhor separao. Em GC como a separao ocorre em funo do ponto de ebulio do solvente e da volutilidade da amostra, lembrando que o solvente no pose ser sensvel a degradao trmica, quanto maior o PE do solvente, maior ser a sua eficincia na separao. 13. Em uma coluna de partio de fase normal, encontrou-se um soluto com tempo de reteno de 29,1min, enquanto a amostra no-retida tinha tempo de reteno de 1,05min quando a fase mvel era 50% em volume de clorofrmio e 50% de n-hexano. Calcule (a) k para o soluto e (b) uma composio de solvente que traga k a um valor em torno de 10. a) k= (tR tM)/tM k = 29,1-1,05 / 1,05 = 26,76 b) PAB = PA + PB P = 0,50x4,1 + 0,50x0,1 = 2,10 k2 / k1 = 10(P2 P1)/2 10/26,76 = 10 (P2 2,10)/2 Log 0,37 = log 10 (P2 2,10)/2

-0,43 = p2 2,10/2 2(-0,43) + 2,10 =p2 P2 = 1,24 1,24 = x . 4,1 + (1-x) 0,1 1,24 = 4,1x + 0,1 0,1x 1,24 0,1 = 4x X= 1,14/4= 0,29 ou 29% de n-hexano e y = 100 x y= 100 29 = 71% de CHCl3 14. A mistura de solventes no problema 28-13 no permite uma separao satisfatria dos dois solutos. Sugira como a fase mvel deve ser alterada para melhorar a resoluo. 15. Sugira um tipo de cromatografia lquida que seja adequada para separar a)

e Cromatografia por adsoro. c) Ba2+ e Sr2+ Cromatografia de troca inica. e) Glicosdeos de alta massa molecular. Filtrao em gel 16. O que uma coluna supressora e por que empregada? Uma coluna supressora de eluente uma coluna empacotada com uma segunda resina de troca inica que converte os ons do solvente a espcies moleculares de ionizao limitada, sem afetar os ons do analito. Sem a coluna supressora, a condutividade dos componentes da fase mvel tende a sobrepujar a dos ons do analito, reduzindo a sensibilidade do detector. 17. Em uma coluna de slica gel, encontrou-se um composto com tempo de reteno de 28 min quando a fase mvel era tolueno. Que solvente, tetracloreto de carbono ou clorofrmio, aparentemente diminuiria o tempo de reteno? Explique. K = 28 min FM= tolueno CCl4 ou CHCl3 diminuiria o K O clorofrmio pode ser mais polar, provavelmente eluiria mais rpido esta substancia, j que estamos tratando de uma fase estacionria apolar (slica gel) e o tolueno um eluente de baixa polaridade, dessa forma, aumentando a polaridade do eluente, reduziria o tempo de reteno. 18. Para uma separao de fase normal, preveja a ordem da eluio de: a) n-hexano, n-hexanol, benzeno.

n-hexano > benzeno > n-hexanol b) acetato de etila, ter dietlico, nitrobutano. ter dietlico > acetato de etila > nitrobutano 19. Para uma separao em fase reversa, preveja a ordem de eluio dos solutos no problema 28-18. a) n-hexanol > benzeno > n-hexano b) nitrobutano > acetato de etila > ter dietlico 21. O que um cromatograma de massa e como pode ser obtido? O cromatograma de massa um grfico em funo do tempo (ou do volume da fase mvel adicionada) para anlise qualitativa quanto para a quantitativa. obtido a partir de um detector, colocado no final da coluna, contudo, o mesmo deve responder a concentrao do soluto.

Cap. 29 - CROMATOGRAFIA EM FLUIDO SUPERCRTICO 1. Defina: a) temperatura crtica e presso crtica de um gs. A temperatura crtica a temperatura acima da qual no pode existir uma fase lquida distinta, independente da presso. : a presso de vapor de uma substncia na sua temperatura crtica. b) fluido supercrtico. uma substncia com temperaturas e presses acima da temperatura e presso crtica. Os fluidos supercrticos so substncias que tm densidades, viscosidades e outras propriedades que so intermedirias entre as da substncia nos seus estados lquido e gasoso. 2. Quais propriedades de um fluido supercrtico so importantes em cromatografia? Viscosidade, densidade e coeficiente de difuso. 3. Como os equipamentos de cromatografia em fluido supercrtico diferem dos de HPLC? H duas importantes diferenas entre os instrumentos de HPLC e FSC. Primeiro necessrio um forno para termostatizar a coluna, para controle preciso da temperatura da fase mvel. Segundo, usado como restritor, ou um dispositivo de contrapresso, para manter a presso na coluna no nvel desejado e converter o eluente de um fluido supercrtico a um gs para transfer~encia para o detector. 4. Descreva o efeito da presso sobre cromatogramas em fluido supercrtico. Alteraes na presso, aumenta a densidade da fase mvel e tm efeito no fator de reteno, k. Esse aumento na densidade, aumenta a forca de solvente da fase mvel o que encurta o tempo de eluio dos eluentes. Quando aumenta-se a presso, aumenta a densidade da fase mvel, consequentemente aumentando o poder do solvente e reduzindo o tempo de eluio. Deve-se levar em considerao que o aumento da presso deve ser linear. 5. Liste algumas das propriedades vantajosas de CO2 supercrtico como fase mvel em separaes cromatogrficas. Excelente solvente para vrias molculas orgnicas no-polares, transmite no ultravioleta, inodoro, no-toxico, disponvel e barato. 6. Compare a cromatografia em fluido supercrtico com os mtodos de cromatografia em coluna. Este tipo de cromatografia combina algumas das caractersticas tanto da cromatografia lquida quanto da gasosa. inerentemente mais rpida que a cromatografia lquida devido a viscosidade mais baixa. 7. Preveja para o CO2 supercrtico, o efeito que as seguintes alteraes tero sobre o tempo de eluio em um experimento de SFC: a) Aumento da vazo ( temperatura e presso constantes) Um aumento na vazo, altera o fator de reteno, k, o que resulta num menor tempo para a eluio.

b) Aumento da presso ( temperatura e vazo constantes) Um aumento na presso eleva a densidade do fluido, o que causa um aumento do poder de solvente da fase mvel, e encurta o tempo de eluio dos eluentes. 8. Para extraes em fluido supercrtico, diferencie entre: a) processos em linha e fora de linha. Na coleta fora de linha, os analitos so coletados por imerso do restritor em alguns mililitros de solvente e deixando o fluido supercrtico gasoso escapar para atmosfera. Os analitos adsorvidos so ento eludos com pequeno volume de solvente lquido. Em qualquer caso, os analitos separados so identificados por mtodos pticos, eletroqumicos ou cromatogrficos. No mtodo de linha, o eluente do restritor, aps despressurizao, transferido diretamente para um sistema cromatogrfico. As principais vantagens do sistema em linha a eliminao do manuseio das amostras entre a extrao e a medida, e a melhora potencial da sensibilidade devido a no-diluio do analito. b) extraes esttica e dinmica. Extrao dinmica, a vlvula entre a clula de extrao e o restritor permanece aberta de modo que a amostra suprida continuamente com fluido supercrtico fresco e o material extrado flui no recipiente de coleta no qual ocorre a despressurizao. No modo extrao esttica, a vlvula entre a clula de extrao e o restritor fechada e a clula de extrao pressurizada em condies estticas. Aps um perodo adequado, a vlvula de sada aberta e o contedo da clula transferido atravs do restritor por um fluxo dinmico do fluido quem vem da bomba. 9. Enumere as vantagens de extraes em fluido supercrtico sobre as extraes com lquidos. A SIF geralmente rpida, a fora de solvente de um fluido supercrtico pode ser modificado por alteraes na presso e, em menor extenso na temperatura. Recuperao de analitos mais simples. Fluidos SC so baratos, inertes, no-txicos. Pode ser descartado aps a extrao, deixando que ele evapore na atmosfera. 10. Como geralmente so recuperados os analitos aps uma extrao em fluido supercrtico? Um fluido supercrtico pode ser separado do analito simplesmente por diminuio da presso.