dos autores Capa: BossaMdia Ltda.

Composio e diagramao: Bruno Moser de Alvarenga Reviso do portugus: Professoras Lcia Goulart & Maria Ceclia S. Silvestre

Esta obra encontra-se integralmente disponvel no stio eletrnico do Laboratrio de Solos da UENF: http://www.uenf.br/Uenf/Pages/CCTA/Lsol/

ISBN 85 - 905835 - 1 -1

FICHA CATALOGRFICA Preparada pela Biblioteca do CCTA / UENF

001/2005

Canellas, Luciano Pasqualoto

Humosfera : tratado preliminar sobre a qumica das substncias hmicas / Luciano Pasqualoto Canellas e Gabriel Arajo Santos. Campos dos Goytacazes : L. P. Canellas , G. A. Santos, 2005. 309 p.: il.

1.Solo 2. Matria orgnica 3. Qumica do solo I. Santos, Gabriel de Arajo II. Tluto.

CDD-

631.417

HUMOSFERA
Tratado preliminar sobre a qumica das substncias hmicas

Luciano Pasqualoto Canellas

Ph.D. Laboratrio de Solos - UENF

Gabriel de A. Santos
Ph.D. Departamento de Solos - UFRRJ Editores

Prefcio
Reunimos aqui as notas das aulas ministradas no curso de dinmica da matria orgnica, caracterizao espectroscpica da matria orgnica e efeitos fisiolgicos de substncias hmicas no perodo compreendido entre 1985-2005, num primeiro tempo na Rural do Rio de Janeiro e, mais recentemente, na UENF de Darcy Ribeiro. Agradecemos a colaborao dos colegas que vem participando dessa caminhada. A nova sociedade em formao tem que competir muito duramente com o passado. Isto se faz sentir no s na conscincia individual onde pesam os resduos de uma educao sistematicamente orientada ao isolamento do indivduo - mas tambm pelo carter mesmo deste perodo de transio, com persistncia das relaes mercantis que corrompem e impedem a mistura dos diferentes domnios - o mineral, o vegetal, o animal, o humano e o csmico. Sculos e sculos de civilizao separaram e catalogaram esses domnios, compartimentando a nossa mente e o mundo, que so unidas aqui e agora numa perspectiva de resistncia anticapitalista e de mudana de pensamento, onde o corpo social se confunde com os minerais, as plantas, os animais e as estrelas, porque se entranha neles atravs da esfera de ao do hmus. Assumimos que tambm h uma representao simblica da condensao de foras de natureza distintas - sociais e naturais - da qual a Agroecologia se alimenta ao absorver e reciclar a matria orgnica. As artrias por onde passa essa nova seiva so as esferas dos laos indissolveis entre Eros e Tanatos, ou seja, entre os vivos e os mortos em transformao, numa marcha da velha para a nova sociedade. a humosfera.

L.P.C & G. de A. S.

Seropdica e Campos dos Goytacazes, primavera de 2005

Agradecimentos CNPq (471910/2003-1) FAPERJ Primeiros Projetos (E26/170.526-2004) International Foundation for Science (IFS-c:3391-1), Stockholm, Sweden Organization for the Prohibition of Chemical Weapons (OPCW), The Hague, Netherlands

Essa obra foi parcialmente financiada pela bolsa de produtividade em pesquisa concedida pelo CNPq a L.P.C. & G. de A. S.

HUMOSFERA Tratado preliminar sobre a qumica das substncias hmicas

Contedo

Um: Extrao, isolamento e anlise de substncias hmicas

Luciano P. Canellas; Fernando Guridi Izquierdo; Ary Carlos Xavier Velloso & Gabriel de Arajo Santos

13

Dois: Modelos estruturais de substncias hmicas

Luciano P. Canellas; Ary Carlos Xavier Velloso & Gabriel de Arajo Santos

34

Trs: Fracionamento da matria orgnica humificada em solos brasileiros

Tony Jarbas Ferreira Cunha, Luciano P. Canellas, Gabriel de A. Santos & Lucedino Paixo Ribeiro

54

Quatro: Energia e as substncias hmicas

Nelson Garcs & Vitali Savich

81

Cinco: Espectroscopia na regio do ultravioleta e do visvel

Luciano P. Canellas & Victor Marcos Rumjanek

126

Seis: Espectroscopia na regio do infravermelho

Luciano P. Canellas & Victor Marcos Rumjanek

143

Sete: Ressonncia magntica nuclear

Victor Marcos Rumjanek

160

Oito: Pirlise acoplada cromatografia gasosa e espectrometria de massas

Luciano P. Canellas

185

Nove: Propriedades redox de substncias hmicas

Marihus Alto Baldotto, Luciano P. Canellas, Maria Cristina Canela & Ary Carlos Xavier Velloso

201

Dez: Bioatividade de substncias hmicas - ao sobre o metabolismo e

desenvolvimento de plantas
Luciano P. Canellas, Daniel B. Zandonadi, Leonardo O. Mdici, Lzaro E. P. Pres, Fbio L. Olivares & Arnoldo R. Faanha
224

Onze: O uso e manejo da matria orgnica humificada sob a perspectiva da

Agroecologia
Luciano P. Canellas, Jader Galba Busato & David Jos Caume
244

Doze: Fundamentos da qumica orgnica

Maria Raquel Garcia

268 287

Treze: Referncias Bibliogrficas

Arnoldo Rocha Faanha - arnoldo@uenf.br Ds. Qumica Fisiolgica Prof. Associado - Laboratrio de Biologia Celular e Tecidual - UENF Ary Carlos Xavier Velloso velloso@uenf.br Livre Docente - Qumica do Solo Prof. Titular - Laboratrio de Solos - UENF Daniel Baslio Zandonadi - daniel@uenf.br Ms. Produo Vegetal Laboratrio de Solos - UENF David Jos Caume caume@uol.com.br Ds. Cincias Sociais Prof. Universidade Federal de Gois Fbio Lopes Olivares fabioliv@uenf.br Ph.D. Cincia do Solo Prof. Associado - Laboratrio de Biologia Celular e Tecidual - UENF Fernando Guridi Izquierdo fguridi@ishu.edu.cu Ph.D. Cincia do Solo Prof. Assistente - Dep. Qumica da Universidad Nacional Agrria de La Habana Gabriel de Arajo Santos - gasantos@ufrrj.br Ph.D. Cincia do Solo - Prof. Titular Dep. Solos - UFRRJ Jader Galba Busato - jbusato@uenf.br Ms. Produo Vegetal - Laboratrio de Solos - UENF Lzaro Eustquio Pereira Peres - lazaropp@esalq.usp.br Ds. Cincias Biolgicas Prof. Dept. Cincias Biolgicas ESALQ Leonardo Oliveira Mdici - lomedice@ufrrj.br Ds. Gentica e melhoramento de plantas Prof. Adj. Dept. Cincias Fisolgicas - UFRRJ Lucedino Paixo Ribeiro in memoriam Prof. Titular Dep. Geoqumica - UFBa Luciano Pasqualoto Canellas - canellas@uenf.br Ph.D. Cincia do Solo Prof. Associado - Laboratrio de Solos - UENF Maria Cristina Canela - mccanela@uenf.br Ds. Qumica Ambiental Profa. Associada Laboratrio de Cincias Qumicas - UENF Maria Raquel Garcia - raquel@uenf.br Ms. Qumica Orgnica Profa. Associada Curso de Farmcia de Campos - FMC Marihus Alto Baldoto - marihus@uenf.br Ms. Cincia do Solo - Laboratrio de Solos - UENF Nelson A. Garcs - Nelsong@yahoo.com Ph.D., Qumica Prof. Titular - Depto. Qumica - Universidad Nacional Agrria de La Habana Tony Jarbas Ferreira Cunha - tony@cpatsa.embrapa.br Ph.D. Cincia do Solo. Pesquisador EMBRAPA semi-rido Victor Marcos Rumjanek rumjanek@ufrrj.br Ph.D. Qumica Orgnica Prof. Adjunto Dep. Qumica - UFRRJ Vitali Savich - in memorian Ph.D. Qumica Prof. Titular

HUMOSFERA
Tratado preliminar sobre a qumica das substncias hmicas

Para Las e Zacheu

E o vento dessa palavra uma expanso da terra

(Helder, H. o corpo o luxo a obra. p.121)

c a p t u l o

Isolamento, purificao e mtodos qumicos de anlise de substncias hmicas

Luciano P. Canellas Fernando Guridi Ary C. X. Velloso Gabriel de A. Santos

O estudo das caractersticas qumicas da matria orgnica humificada requer o seu isolamento do ambiente natural. uma imposio da filosofia da cincia: isolar a parte para compreender o todo. Situaes complexas quando reduzidas simplificao podem gerar modelos abstratos demais para explicar o real. As substncias hmicas existem no solo, na gua e nos sedimentos como um continuum da transformao do ciclo do carbono na Terra e no provavelmente como substncias discretas com estrutura molecular definida. Essa impossibilidade no atrapalha, no entanto, a compreenso de sua funo no ambiente, seu papel importante na regulao das propriedades e da vida do solo. Esse o objetivo dessa unidade: acessar a funcionalidade qumica das substncias hmicas para avaliar a sua capacidade de interagir com os outros elementos da pedosfera. Antes, porm, realizada uma pequena reviso sobre os extratores de matria orgnica do solo. Essa unidade foi baseada no texto original de Piccolo (1993). recomendada a leitura do trabalho original. Extrao das substncias hmicas A caracterizao das propriedades qumicas das substncias hmicas implica o seu isolamento e separao dos constituintes inorgnicos do solo, gua ou sedimentos. O extrator ideal deve retirar completamente as substncias hmicas sem alterar suas caractersticas e deve, ainda, ser usado em qualquer tipo de solo, gua ou sedimento (Stevenson, 1994). Alm destas caractersticas essenciais, preciso adicionar mais duas: o extrator deve ser barato e no deve ser txico s pessoas e ao ambiente. Infelizmente tal extrator no existe. No obstante, pode ser empregada uma srie de diferentes extratores para obteno de substncias hmicas. O primeiro procedimento de que se tem notcia foi o de Archard em 1786 (de acordo com o levantamento de Stevenson, 1994), que, atravs do uso uma soluo alcalina sobre uma turfa , obteve um extrato escuro que, depois de acidificado, produziu um precipitado amorfo e tambm escuro chamado cido hmico (do latim: humus, terra). Na verdade, no se tinha uma soluo1 e sim, uma disperso coloidal. Os componentes apolares presentes na matria orgnica do solo (MOS) podem ser extrados com solventes orgnicos (hexano, acetato de etila, metanol) e os monmeros de unidades bioqumicas como os aminocidos e acares podem ser obtidos atravs da hidrlise cida (Schnitzer & Khan, 1978).
1

Soluo se refere a uma mistura homognea 13

Solues aquosas de base forte como NaOH, KOH ou Na2CO3 0,1 ou 0,5 mol L-1 na razo de solo: extrator de 1:5 at 1:10 (m/v) so eficientes para extrair substncias hmicas do solo com um rendimento de at 2/3 do total da matria orgnica quando usadas de forma seqencial. A Tabela 1.1 mostra uma compilao dos diferentes extratores utilizados, os principais compostos extraveis e uma estimativa de rendimento.
Tabela.1.1. Reagentes empregados na extrao da matria orgnica do solo.
Constituinte Extrator % de substncia orgnica extrada Substncias hmicas Base forte NaOH Na2CO3 Sal neutro Na4P2O7 NaF Sal de cido orgnico Quelato orgnico Acetilacetona 8-hidroxiquinolina cido Frmico Acetona-H2O-HCl at 80% at 30% at 30% at 30% at 30% at 55% at 55% at 20%

Compostos hidrolizveis Amino cido Aminoacares Carboidratos Compostos bioqumicos ligados frao argilosa Compostos bioqumicos livres Graxas, ceras e resinas

HCl 6 M H2SO4 1M

25-45% 5-25%

HF H2O, lcool 80%, acetato de amnio solventes orgnicos

5-10% 1% 2-6%

Adaptado de: Stevenson, F.J. Humus chemistry. Willey,1994. p.35.

Diante da grande diversidade de procedimentos, a International Humic Substances Society (IHSS) recomenda como extrator padro o NaOH na concentrao de 0,5 ou 0,1 mol L-1. A metodologia encontra-se descrita no endereo eletrnico da IHSS (http\www.ihss.gated.edu) e um resumo apresentado a seguir. O tratamento prvio das amostras de solo com HCl diludo remove Ca2+ e outros ctions polivalentes, aumentando a eficincia de extrao da soluo alcalina. Em solos mais intemperizados, com menor contedo de bases, o uso de cido fosfrico (H3PO4 xaroposo, 2 mol L-1) parece ser mais eficiente, j que a capacidade de complexao de Al3+ e Fe3+ pelo fosfato aumentada. No entanto, essa possvel incorporao de fsforo nas substncias hmicas no desprezvel e deve ser levada em conta, principalmente nos estudos relacionados estrutura e a dinmica do P orgnico do solo ( Fr a n c i o s oet al., 1998). Esquema geral de extrao de cidos flvicos e hmicos sugerido pela IHSS: 1) Extrao inicial com HCl 0,1 mol L-1 na razo 1:10 (m/v) (1 g : 10 mL) de terra fina seca ao ar com valor de pH ajustado entre 1-2. A suspenso agitada por uma hora.

14

2) 3) 4) 5) 6) 7)

8) 9) 10) 11)

12) 13)

14) 15)

16) 17) 18)

19) 20)

A separao do sobrenadante do resduo realizada por decantao (centrifugao a baixa velocidade). O sobrenadante guardado para isolamento com resina XAD-8 (Extrato AF-1). O resduo neutralizado com NaOH 1 mol L-1 at pH 7,0 e adicionado NaOH 0,1 mol L-1 sob atmosfera de N2, na razo solo: extrator 1:10 (m/v). A suspenso agitada intermitentemente por pelo menos 4 horas sob atmosfera inerte de N2. O sobrenadante coletado atravs de decantao e/ou centrifugao O sobrenadante acidificado a pH~1 com HCl 6 mol L-1 e a suspenso resfriada e mantida em repouso por 12-16 horas. Os cidos hmicos (precipitado) so separados dos cidos flvicos (sobrenadante Extrato AF-2) por centrifugao. A frao cidos hmicos redissolvida adicionando-se um volume mnimo de KOH 0,1 mol L-1 sob N2. adicionado KCl slido at concentrao 0,3 mol L-1 e o sistema centrifugado em alta velocidade para remoo de slidos suspensos. Os cidos hmicos so reprecipitados como no passo 5. O sobrenadante descartado. O precipitado de cidos hmicos resuspenso em HCl 0,1 mol L-1 HF 0,3 mol L-1 em frasco plstico e agitado temperatura ambiente por uma noite. Os cidos hmicos so centrifugados e repetido o tratamento com HCl:HF se o teor de cinzas permanecer alto (> 1%). Lavagem dos cidos hmicos com HCl 0,01 mol L-1. Transferir os cidos hmicos para membrana de dilise e realizar a dilise contra gua deionizada at teste negativo com AgNO3 ou at a condutividade eltrica da gua no apresentar mudanas. Os cidos hmicos so secos por liofilizao. O sobrenadante do passo 2 passado numa coluna de XAD-8 (0,15 mL de resina por grama de amostra de solo seco) com fluxo de 15 vol da resina por hora). O eludo descartado, a coluna com cido flvico adsorvido lavada com gua destilada (0,65 volume da coluna). A coluna de XAD-8 eluda com 1 volume da coluna de NaOH 0,1 mol L-1, seguida de 2 a 3 volumes da coluna de gua destilada O eludo acidificado imediatamente at pH~1 com HCl 6 mol L-1 e adicionado HF at concentrao final de 0,3 mol L-1. O volume deve ser suficiente para manter os cidos flvicos em soluo. Transferir o sobrenadante do passo 6 (AF-2) atravs da coluna de XAD-8 (1 mL de resina por grama de solo seco). Repetir passos 14 e 15. Combinar os eludos em 15 e 17 e passar a soluo atravs da resina XAD-8 numa coluna de vidro (volume da coluna deve ser 1/5 do volume da amostra). Lavar com gua destilada (volume igual a 0,65 do volume da coluna). Eluir com 1 volume da coluna com NaOH 0,1 mol L-1 seguido de 2 volumes da coluna com gua destilada. Passar atravs de uma resina de troca saturada com H+. Liofilizar o eludo para recuperar os cidos flvicos saturados com H+.

Tratando-se o extrato alcalino com HCl concentrado at pH~1, forada a precipitao da frao de massa molecular relativa e aparentemente mais elevada, os cidos hmicos. A frao das substncias hmicas que permanece solvel representa os cidos flvicos que so compostos por molculas de massa molecular aparente mais baixa que os cidos hmicos e com maior contedo de grupos funcionais cidos. Por fim, as substncias que no so extradas do solo representam a frao humificada fortemente ligada frao mineral do solo, e denominada humina. Os cidos hmicos, flvicos e as huminas podem, ento, ser classificados com base na solubilidade em meio cido ou alcalino. A solvatao dos grupamentos funcionais extrados com soluo de base forte diluda devida
15

ao mecanismo de repulso eletrosttica das cargas negativas presentes nos grupos funcionais cidos da estrutura molecular das substncias hmicas. Esses grupamentos funcionais so dissociados no valor de pH da soluo extratora (geralmente entre 11 e 13). Apesar da grande capacidade de extrao da soluo alcalina, possvel identificar algumas desvantagens associadas ao seu uso, como por exemplo: (i) a dissoluo de slica do material silicatado do solo representa um contaminante no indiferente da amostra de substncias hmicas e (ii) a dissoluo de biopolmeros de tecidos vegetais frescos e a sua incorporao junto ao material humificado. Foi postulado ainda que, em condies alcalinas, pode ocorrer a produo de artefatos na estrutura molecular do material humificado atravs da possibilidade de ocorrncia de reaes de auto-oxidao e de condensao entre grupos nitrogenados dos aminocidos e grupos carboxlicos, aldedos aromticos e compostos do tipo quinonas, que podem dar origem a compostos similares aos das substncias hmicas. Krosshavn et al. (1992) avaliaram o efeito da extrao com NaOH das diferentes fraes humificadas atravs da tcnica de RMN 13C (que ser discutida mais adiante no captulo 7) e no observaram alteraes significativas nas principais regies do espectro. Alm disso, como pode ser observado na Figura 1.1, a soma dos espectros da frao cidos hmicos, flvicos e huminas corresponde ao espectro obtido da matria orgnica do solo sem a extrao, isolamento e purificao das substncias hmicas. Esses dados corroboram e validam o uso do fracionamento qumico como uma ferramenta para anlise qualitativa da matria orgnica.

Figura 1.1. Espectro de RMN 13C CP/MAS da matria orgnica do solo sem extrao (a) e da soma dos espectros dos cidos hmicos, flvicos e huminas (b). Dados obtidos de Krosshavn et al. (1992).

Uma maneira amplamente adotada para a diminuio dos riscos de ocorrncia de reaes de autocondensao consiste em realizar a extrao da matria orgnica sob atmosfera de N2. A troca da atmosfera livre por uma inerte diminui a possibilidade de reao com o O2 dissolvido na soluo. O borbulhamento da soluo alcalina por 15 min suficiente para reduzir a concentrao de O2 livre na soluo. Tan et al. (1991) no observaram efeitos importantes do uso da atmosfera inerte sobre as caractersticas espectroscpicas de cidos hmicos. A Figura 1.2 mostra espectros de RMN 13C obtidos no estado slido de cidos hmicos isolados em atmosfera livre e em N2. Note que as mudanas observadas no so evidentes.
16

Figura 1.2. Espectro de RMN 13CP/MAS de cidos hmicos extrados de solo de clima temperado com NaOH 0,1 mol L -1 sob atmosfera livre (ar) e atmosfera inerte (N2). Adaptado de Tan et al. (1991).

Durante o isolamento de substncias hmicas uma estratgia desenhada para evitar possveis artefatos na estrutura qumica do material hmico, consiste no uso de sais neutros que so extratores mais suaves. Por isso, tais extratores apresentam uma eficincia de extrao bem menor do que a da base forte. O pirofosfato de sdio a pH 7 vem sendo usado como agente complexante de ctions polivalentes que, pela formao de complexos insolveis, permite a solubilizao das SH de acordo com a reao: R (COO)4Ca2 + Na4P2O7 = R(COONa)4 + Ca2P2O7(s) O uso do pirofosfato pode diminuir o fenmeno da auto-oxidao mas extrai material hmico com um contedo maior de silcio e ainda incorpora unidades de fosfato nas estruturas das substncias hmicas (Francioso et al., 1998). O colide de substncias hmicas pode ser fcil e rapidamente extrado com uma mistura de HCl diludo e solvente dipolar aprtico como acetona, dimetilssulfxido ou dimetilformalamida. O mecanismo de extrao baseado na protonao da substncia hmica pelo HCl ao mesmo tempo em que deslocada a ligao H intermolecular das substncias hmicas pelo tomo fortemente eletronegativo do solvente dipolar aprtico. Desse modo, as substncias hmicas so separadas pelo fenmeno da partio qumica. possvel diminuir consideravelmente a quantidade de slica removida junto com as substncias hmicas. , tambm, obtida uma frao hmica que, devido ao mecanismo envolvido no seu isolamento, apresenta caractersticas qumicas mais homogneas e dimenses moleculares menores do que as obtidas com outros extratores (Piccolo et al., 1990). A mistura cido-acetona facilmente separada com um evaporador rotativo em baixas temperaturas. Esse mtodo de extrao utilizado para estudos de fraes com humificao recente. As desvantagens associadas ao emprego da mistura cido solvente dipolar aprtico consistem no baixo rendimento de extrao, alto custo, riscos de contaminao e acidentes com
17

solventes orgnicos de manipulao no muito comum num laboratrio de solos, e as caractersticas funcionais distintas das obtidas com o solvente preconizado pela IHSS. As quantidades e as caractersticas das SH extradas com os extratores mais comuns como NaOH e Na4P2O7, e a distribuio de cidos hmicos e flvicos variam consideravelmente de acordo com o tipo de solo ou de resduo orgnico avaliado. Resultados obtidos com solos de clima subtropical sugerem que o Na4P2O7 pode extrair substncias hmicas de massa molecular mdia maior do que as extradas com NaOH (Dick & et al., 1999). Quanto ao tempo de extrao, a Sociedade Internacional de Substncias Hmicas padronizou o tempo em 12 horas. No entanto, os autores citados anteriormente verificaram que, com quatro horas de extrao, foram isolados 90% das substncias hmicas alcalino solveis foram isolados tanto com base forte como com o sal neutro a pH 7. Purificao das substncias hmicas As substncias hmicas extradas do solo apresentam, normalmente, uma quantidade elevada de impurezas inorgnicas (que podem chegar em alguns casos at 50%), que devem ser eliminadas antes dos estudos de caracterizao. Uma reduo considervel dessas impurezas inorgnicas obtida atravs de redissolues e reprecipitaes sucessivas, modificando-se o pH da suspenso. Particularmente eficiente o tratamento do extrato com soluo diluda da mistura de cido clordrico e fluordrico. Tal eficincia devido capacidade do HF de dissolver os minerais argilosos, formando um complexo gasoso com o Si e, tambm, complexar os ctions polivalentes solveis (e.g., AlF63-, FeF52-) que so liberados pela dissoluo do silicato conforme a reao esquemtica: SiO2 + 4 HF SiF4(g) + 2H2O Depois, a suspenso tratada com uma resina de troca de ctions na forma protonada, reduzindo o teor de cinzas a menos de 1%. No entanto, este mtodo de purificao provoca perdas de material hmico. Foi observada, tambm, uma diminuio da massa molecular mdia das substncias hmicas depois da purificao (Piccolo, 1988). De acordo com Piccolo (1988), a separao de impurezas orgnicas (principalmente biopolmeros), extradas juntamente com as substncias hmicas e no ligadas covalentemente estrutura, pode ser realizada com uso de solventes orgnicos e.g., lcool (para extrair graxas) ou gua quente (para extrair polissacardeos). Os biopolmeros ligados atravs de ligaes covalentes podem ser eliminados pelo tratamento de hidrlise cida com HCl 6 M mediante refluxo. Porm, este tratamento provoca perdas considerveis de material hmico e alteraes significativas na sua estrutura. Todavia, a hidrlise cida no tem efeito relevante sobre o contedo de carbono e hidrognio e de grupos cidos dos cidos hmicos, bem como, sobre a razo E4/E6 (razo entre a absorbncia de uma suspenso de cidos hmicos ou flvicos em 465 nm e 665 nm), que representa um ndice de dimenso molecular (uma discusso sobre a razo E4/E6 pode ser vista no captulo 5). Porm, os efeitos sobre os cidos flvicos so bastante drsticos durante a hidrlise cida com perdas de acidez total, devido s reaes de descarboxilao. A purificao dos cidos flvicos dos contaminantes orgnicos , eficientemente, realizada atravs da resina macroreticulada de adsoro seletiva, como a de polivinilpirrolidona ou a XAD-8 resina macrorreticulada acrlica no inica. Condicionando a coluna de resina a um pH cido (com percolao de HCl diludo) e fazendo-se eluir a soluo cida de cidos flvicos sobre a resina, ocorre a adsoro hidrofbica
18

da frao humificada enquanto que os biopolmeros permanecem hidroflicos e so eludos facilmente. Os cidos flvicos so posteriormente eludos com uma soluo alcalina diluda. Anlise elementar e caracterizao de grupos funcionais oxigenados A qumica das substncias hmicas no solo , ainda, muito pouco compreendida apesar do longo tempo de pesquisa na rea. Sua compreenso o maior desafio colocado hoje para a Qumica do Solo (Sparks, 2001). As substncias hmicas desempenham uma funo importante no ambiente e contempla: efeito sobre estrutura do solo, formao de quelatos com metais pesados, adsoro de pesticidas e outros contaminantes txicos e efeitos sobre o processo de assimilao de nutrientes pelos vegetais. A descrio desses fenmenos exige um detalhamento estrutural das substncias hmicas para que se possa delimitar os marcos da qumica das substncias hmicas. Pode-se indicar que a reatividade das substncias hmicas e, tambm, o seu comportamento em faixas de reao devida sua polifuncionalidade (diversidade de grupos funcionais) e flexibilidade estrutural (no se chegou, ainda, a um consenso sobre o que seria a sua estrutura; uma discusso sobre os modelos estruturais colocada no captulo 2). A anlise da composio elementar das substncias hmicas providencia informaes sobre os seus principais elementos constituintes. A Tabela 1.2, adaptada de Rice & MacCarthy (1991), mostra que os principais elementos presentes nas substncias hmicas so o carbono e o oxignio. O contedo mdio de C nos cidos hmicos de 55,1%, o de O de 35,6%, o de H de 5,0% e o de N de 3,5%. Uma srie de trabalhos com cidos hmicos de clima tropical (Bravard & Rhrigi, 1991; Canellas et al., 2002a, 2002b, 2004) tem apresentado valores de C menores do que a faixa indicada e muito prximos da faixa normalmente encontrada para cidos flvicos, que varia de 35 a 75% (Tabela 1.2). J o contedo de O nos cidos flvicos varia entre 17-55,8%. Os cidos flvicos apresentam um contedo menor de C e N e uma quantidade maior de O do que os cidos hmicos. A anlise elementar das substncias hmicas resulta na ordem de grandeza C>O>H>N>S>P e rpida e facilmente determinada atravs de analisadores elementares disponveis comercialmente. O contedo de O , normalmente, determinado pela diferena entre 100 e o contedo de C,H,N determinados diretamente. Os resultados devem ser corrigidos para umidade (medida aps a secagem das amostras at massa constante a 65oC) e pelo contedo de cinzas residuais (determinado pela queima da amostra em mufla a 700oC por 6 a 8 horas) conforme equao abaixo:
% corrigido = % original x 100 100 (% umidade + % cinzas)

A composio elementar a propriedade mais estvel e fundamental das substncias hmicas. Rice & MacCarthy (1991), atravs da anlise da composio elementar, conseguiram discriminar cidos flvicos, hmicos e huminas e suas diversas origens (solo, gua, turfa e ambiente marinho), revelando uma estreita relao entre o processo de formao das substncias hmicas e a distribuio relativa dos tomos que as compem. A partir da anlise da composio elementar, van Krevelen (1961) desenvolveu um mtodo grfico para estudar o processo de formao do carvo, no qual a razo atmica H/C (obtida atravs da razo entre a concentrao do tomo pela sua massa atmica e.g. H/1 C/12) descrita como uma funo da razo atmica O/C. Esse tipo de grfico conhecido agora como diagrama de van Krevellen, e usado para classificao de carvo e de querognios.
19

Tabela 1.2. Composio elementar mdia das substncias hmicas (%). cidos Flvicos cidos Hmicos Huminas Elemento Mdia C O H N S H/C O/C 46,2 45,6 4,9 2,5 1,2 1,3 0,76 Faixa 35,1-75,70 16,9-55,85 0,43-7,90 0,45-8,16 0,10-3,60 0,77-2,13 0,17-1,14 Mdia 55,1 35,6 5,0 3,5 1,8 1,1 0,5 Faixa 37,18-75,76 7,93-56,60 1,64-11,68 0,50-10,54 0,10-8,30 0,08-1,85 0,08-1,20 Mdia 56,1 34,7 5,5 3,7 0,4 1,17 0,46 Faixa 48,29-61,60 28,80-45,12 14,2-7,28 2,90-6,01 0,10-0,90 0,82-1,72 0,37-0,61

Adaptado de Rice & MaCarthy. Org. Geochem., 17:635-648, 1991.

O diagrama de van Krevellen , freqentemente, usado para ilustrar mudanas na composio elementar de substncias hmicas durante as alteraes na geoqumica do ambiente. Huc & Durand (1977) aplicaram o mtodo grfico para analisar a diagnese de substncias hmicas e Kuwatsuka et al. (1978), para comparar a composio elementar de cidos hmicos com compostos precursores (biopolmeros vegetais) e compostos mais evoludos (carvo). A Figura 1.3 A mostra o diagrama de van Krevellen para substncias hmicas (compilado de Rice & MacCarthy (1991) que analisaram 640 amostras de substncias hmicas nos mais diversos ambientes). J a Figura 1.3B mostra o diagrama para cidos hmicos isolados do horizonte superficial de seis diferentes solos do Estado do Rio de Janeiro. Pode-se inferir que, com o aumento do grau de humificao dos cidos hmicos, aumentam as reaes de descaboxilao e demetilao. Por outro lado, diminuem as reaes de oxidao. A magnitude da relao H/C pode, tambm, ser usada para uma avaliao indireta das propriedades estruturais de substncias hmicas alm inferncias sobre a qualidade e o uso do solo. Um grau mais elevado de aromaticidade ou de insaturao leva a valores relativos de H/C menores.

Figura 1.3. A: Diagrama de van Krevelen para cidos flvicos, hmicos e huminas (Adaptado de Rice & MacCarthy. Org. Geochem 17 (5): 635-648,1991). B: Principais reaes envolvidas na humificao de cidos hmicos isolados do horizonte superficial de seis solos do Rio de Janeiro de acordo com o modelo grfico de van Krevelen. AH-1: Argissolo; AH:2 Luvissolo; AH-3 e AH 4 Chernossolo; AH-5 Latossolo amarelo; Ah-6 Neossolo
20

Da mesma forma, um grau elevado de alifaticidade deve levar a valores maiores para relao H/C. No obstante, essa avaliao indireta da aromaticidade-alifaticiade deve ser realizada com cautela, uma vez que insaturaes presentes em grupos carboxlicos e carbonilas primrias so levados em conta para o estabelecimento da relao H/C, mas no esto envolvidos na aromaticidade/alifaticidade das substncias hmicas. A anlise da relao atmica qualitativamente til dado o elevado grau de correlao (r2 = 0,85) com os valores de aromaticidade avaliados por outros mtodos, salvo algumas excees (Perdue, 1989). Anlise de grupamentos funcionais A anlise dos grupamentos funcionais permite avaliar a reatividade das substncias hmicas. A natureza complexa das substncias hmicas derivada diretamente do grande nmero de diferentes grupos funcionais presentes na sua estrutura. cidos policarboxlicos mostram uma srie de constantes de dissociao que diminui medida que os H+ vo se dissociando. Os fenis substitudos apresentam-se pouco mais dissociados que os no-substitudos. Talvez algum outro grupo cido seja pouco dissociado e reativo devido formao de pontes de H+ inter e intramoleculares e a proteo devido a fatores estricos. Outra dificuldade na determinao quantitativa dos grupos funcionais so: pequena solubilidade dos cidos hmicos em gua ou em solventes orgnicos, a ocorrncia de reaes paralelas e a natureza no estequiomtrica das reaes utilizadas para avaliar acidez. A acidez total das substncias hmicas normalmente determinada indiretamente fazendose reagir uma amostra de substncia hmica com excesso de hidrxido de brio a pH prximo de 13 de modo a permitir a dissociao de todas as funes qumicas, mesmo as mais fracas, fazendo precipitar o sal hmico de brio. O excesso de base que no participa da reao titulado com HCl. Com a diferena obtida com a titulao de uma amostra em branco (Ba(OH)2, sem amostra de substncia hmica), determinada a acidez total: 2 AH + Ba(OH)2 BaH2 + 2H2O Os resultados obtidos com este mtodo so muito variveis e subestimados devido carbonatao da soluo de hidrxido de brio. O CO2 atmosfrico, em equilbrio com a soluo, subtrai OH titulvel para a formao de carbonato de brio. Pode-se determinar diretamente a acidez total das substncias hmicas atravs da titulao do H+ com base forte a pH 7 ou 7,5. Piccolo & Camici (1990) determinaram a acidez da substncia hmica diretamente por titulao potenciomtrica eluindo-as numa resina de troca protnica e os dados foram confrontados com os obtidos pelo mtodo do Ba(OH)2. A acidez determinada com este ltimo mtodo sempre maior do que aquela obtida por titulao devido, provavelmente, incompleta protonao do material hmico que atravessa a resina. Outro mtodo possvel de ser utilizado para a determinao de acidez total implica numa estimativa dos grupos metoxilas (OCH3) que vo se formando durante a metilao da substncia hmica com diazometano (CH2N2), conforme reao a seguir:
RCOOH CH2N 2 OH CH2N 2 RCOOCH3 N 2 OCH3 N2

21

O diazometano reage com o H+ cido de muitos grupos funcionais como COOH, OH fenlico e enlico e grupos N-H. Nesta tcnica, o CH3 separado do oxignio da metoxila, atravs do tratamento com HI dissolvido numa soluo de fenol, de acordo com uma reao de substituio nucleoflica. O iodeto de metila (ICH3) produzido transportado numa corrente de arraste com N2 numa soluo contendo Br que vem produzindo a oxidao at cido perodico (HIO3). Este ltimo reage com iodeto de potssio (KI) e o iodo se reduz a I 2 molecular, que titulado com uma soluo de tiossulfato de sdio (Na2S2O3), utilizando-se amido como indicador, conforme a seqncia de reao: R-OCH3 + HI = ROH + CH3I CH3I + 6Br2 + 6 H2O = HIO3 + 12HBr +CO2 + H2O 2HIO3 + 10KI + 5H2SO4 = 6I2 + 6 H2O + 5K2SO4 I2 + 2Na2S2O3 = 2NaI + Na2S4O6 O diazometano apresenta o inconveniente de no metilar todas as funes H+ cidas, tais como as presentes nos grupos OH unidos em ponte de hidrognio intermoleculares. Alm disso, podem ser produzidos artefatos tais como formao, na presena de metais pesados que agem como catalizadores, de cadeias polimetilnicas de diazometano. Os valores de acidez total por este mtodo so sempre inferiores aos obtidos com o mtodo do Ba(OH)2. O grupo carboxlico (COOH) o principal determinante da acidez das substncias hmicas e, geralmente, estimado atravs do mtodo do acetato de clcio, que reage com H+ trocvel da molcula hmica, de acordo com a reao: 2RCOOH + (CH3COO)2Ca = R(COO)2Ca(s) + 2CH3COOH O cido actico liberado durante a reao titulado com uma base. O acetato de clcio (CH3COO)2Ca - reage com grupos OH cidos superestimando a acidez e o nmero de grupos COOH. Alm disso, a formao de um agregado hmico, atravs de pontes de clcio intermoleculares, pode representar um imbrglio estrico para a troca de clcio e o H+ do grupo carboxlico (mesmo estando facilmente disponvel) fazendo, assim, uma subestimao do teor de COOH. A determinao do nmero total de OH das substncias hmicas , geralmente, efetuada atravs da metilao com sulfato de metila ou, com uma acetilao com anidrido actico. A metilao com sulfato de metila (CH3)2SO4 em soluo alcalina produz um precipitado hmico, que pode ser analisado pelo mtodo de Zeisel (AOAC, 1955). Somente grupos OH alcolico e fenlico so metilados e no COOH. A reao uma substituio nucleoflica sincronizada, de acordo com as reaes: R-OH + NaOH = RO- + Na+ + H2O R-O- + CH3-OSO2O-CH3 = R-OCH3 + CH3-OSO2O O dimetilsulfato capaz de reagir com grupos fenlicos que no so bastante cidos para reagir com o diazometano (CH2N2) e, por este motivo, vem sendo usado para determinar os grupos OH em pontes de hidrognio. Todavia, a soluo alcalina pode promover alguma alterao na estrutura das substncias hmicas.
22

A acetilao de grupos OH com anidrito actico dissolvido em piridina se processa atravs da reao:
CH3 R-OH + CH3 C O O C O CH3 CO OR CH3 CO OH

O ster produzido separado de uma mistura de reao, hidrolizado numa base e o cido actico liberado destilado da mistura de hidrlise acidificada e, finalmente titulado com uma base. Esse mtodo muito fcil de se realizar em laboratrio e os resultados so bastante reproduzveis. Uma interferncia pode acontecer devido provvel acetilao de grupos COOH superestimando o contedo de OH total. A quantidade de grupos OH pode ser estimada pela diferena entre a acidez total e o nmero de grupos COOH. Somente grupos suficientemente cidos podem reagir com Ba(OH)2 e CH2N2. A determinao da acidez total do sistema hidroxiquinona com grupo OH em ponte de H No caso de metilao com diazometano (CH2N2) apresenta dificuldades pela incompleta metilao devida estabilidade da estrutura do anel por meio de ligao H+.
H O H O O O O CH2 H O

Outro problema relacionado determinao de OH fenlico resulta do fato de que certa quantidade de funo alcolica obtida por diferena do nmero de OH. Um mtodo muito comum para a determinao de grupos carbonlicos totais (C=O) nas substncias hmicas baseado na formao de oxima, atravs da reao com hidroxilamina:
C O H
+

NH2OH

C OH

NHOH

C oxima

NOH

H2O

A hidroxilamina que no reage determinada atravs da titulao com cido perclrico ou atravs da polarografia. Uma superestimao do contedo de carbonilas acontece uma vez que a hidroxilamina pode reagir com outros grupos presentes no material hmico, v.g., grupo amino. Uma causa provvel de subestimao acontece porque os grupos quinonas no reagem com a hidroxilamina quando em pontes de hidrognio inter ou intramoleculares. O mtodo descrito acima no distingue os diferentes tipos de carbonilas. Uma estimativa da acidez carboxlica de substncias hmicas pode ser obtida atravs da espectroscopia de infravermelho. Schiavo (2004) titulou a acidez carboxlica, extrada com acetado de clcio, e verificou uma correlao significativa com a absoro de grupos C=O e COOde cidos hmicos isolados de adubos orgnicos e de solos tropicais de floresta nativa e plantada
23

(Figura 1.4).

1,4 1,2 1,0

Y= -0,37+0,28 COOH R =0,96

Absorbncia

0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 1 2 3 4 5 6

COOH total (mol/kg) Ca (OAc)2

Figura 1.4. Correlao entre mtodos de determinao de COOH por titulao (Ca(OAc)2) e por infravermelho

As carbonilas quinnicas podem ser estudadas atravs de reduo seletiva com cloreto de estanho II (SnCl2) numa soluo alcalina ou de FeCl2 numa soluo de trietanolamina, de acordo com o esquema:
Quinona O SnCl2 ou FeCl2 hidroquinona OH
+

2Fe++

2Sn

4+

Trietanolamina

OH

Em ambos os casos, a reao efetuada em atmosfera de N2 e o excesso de Sn2+ ou de Fe , titulado potenciometricamente com soluo de dicromato de potssio. Uma frao considervel de N nas substncias hmicas (cerca de 30%) formada pelos grupos amino livres. Este grupo pode ser determinado com o mtodo do cido nitroso:
2+

NH2 R-CH-COOH + HNO2 R-CO-COOH + N2 + H2O

Entretanto, a presena da lignina ou de outro composto fenlico interfere nesta reao, invalidando os resultados. Outro mtodo inclui a formao do derivado fluorodinitrobenzeno e fenilissocianato, com formao de complexos vermelhos:
24

NO 2 O 2N F
+

NO 2 RNH2 O 2N vermelho NHR HF

NH2CHCOOH N=C=O R

NH2-C-NH2-CH-COOH

NH-C-NH-C=O vermelho

Somente este ltimo mtodo apresenta resultado satisfatrio na determinao de grupos amino nas substncias hmicas. Os dados sobre o contedo de grupamentos funcionais nas substncias hmicas devem ser interpretados com cuidado. No s existe uma grande variedade de mtodos de extrao, fracionamento e purificao mas, tambm, uma mirade de mtodos analticos. Alm disso, complicaes adicionais so decorrentes da baixa solubilidade natural das substncias hmicas em gua. Quase todos mtodos descritos at aqui requerem que as substncias hmicas estejam solveis. Na maioria das vezes, no entanto, elas se encontram no solo em estado slido. Assim, qualquer discusso sobre propriedades qumicas dos cidos hmicos, flvicos ou huminas deve levar em conta seu comportamento em soluo e em estado slido. Se considerarmos as substncias hmicas como um macro-on ou um polieletrlito (uma discusso sobre modelos de estrutura das substncias hmicas ser levada a cabo na unidade 2), a quantidade e a distribuio de carga na molcula define e influencia o seu tamanho, forma e reatividade. De acordo com a postulao de Swifft (1999), as substncias hmicas tm de 4 a 8 grupos carboxlicos carregados (ou potencialmente carregados) para cada 1000 Daltons (Da) de massa, dependendo do grau de oxidao. Isso representa uma densidade de carga elevada para um eletrlito natural, e o desenvolvimento das cargas adquire um papel muito grande na determinao e existncia de interaes intra e intermoleculares. O outro componente determinante da solubilidade resulta de os macro-ons apresentarem flexibilidade estrutural, que permite uma expanso-contrao de acordo com o grau de solvatao, que tambm dependente das foras intra e intermoleculares. No primeiro caso, se todos os stios de uma molcula hmica flexvel esto dissociados (e isso pode acontecer no caso de uma concentrao baixa de humato de sdio num eletrlito muito diludo, e em valores de pH neutro ou alcalino) ocorrem foras de repulso entre as molculas. A molcula se expande e se rearranja para minimizar seu contedo de energia eletrosttica livre. Se mais eletrlito adicionado ao meio, a repulso eletrosttica diminuda e a molcula se contrai. Assim, uma mesma substncia hmica pode ter valores diferentes de massa molecular dependendo do pH ou da fora inica do meio. A diminuio da repulso eletrosttica pode ser obtida atravs da adio de ctions di ou trivalentes. A adio de prtons pelo processo de acidificao tem o mesmo efeito, uma vez que as ligaes formadas so fortes. Quando todos os stios carregados eletricamente so neutralizados, a molcula flexvel pode repelir o solvente e se contrair para um estado mais colapsado. J na considerao dos efeitos intermoleculares na gerao e comportamento das cargas, os fatores que controlam so muito semelhantes aos descritos acima, exceto que agora as foras de repulso so entre molculas diferentes. Quando as molculas, em soluo, so dissociadas, elas desenvolvem cargas de modo significativo. Quando estas molculas carregadas se aproximam uma das outras, elas experimentam as foras de repulso, que podem ser modeladas pela teoria da dupla camada. A extenso da dupla camada difusa pode ser diminuda tanto pela adio de eletrlito aumento
25

da fora inica como pela adio de ctions multivalentes. No limite, quando a concentrao de sal (ou de ctions metlicos) for suficientemente alta, as foras eletrostticas repulsivas so suprimidas e podem ser superadas pelas foras atrativas de curta distncia. Nessas condies, vrias associaes moleculares (tais como coagulao, agregao, floculao) podem tomar lugar e, eventualmente, promover a precipitao das substncias hmicas. Qualquer tentativa de medir as propriedades qumicas das substncias hmicas em soluo pode resultar em iluso, incerteza ou anomalia. Os dados devem ser tratados com bom senso e sempre de forma relativa, comparando-se com alguma amostra de referncia. Experimental Mtodos quantitativos no estudo de grupamentos funcionais das substncias hmicas. Nas substncias hmicas aparecem diferentes grupamentos funcionais, muitos dos quais so ionizveis de acordo com o pH do meio. Nos vrios estudos desenvolvidos para interpretar as diversas funes que desempenham as substncias hmicas nos sistemas naturais, uma parte dos esforos so dedicados quantificao dos grupamentos funcionais ionizveis predominantes nessas substncias. Para avaliar as quantidades desses grupamentos funcionais podem-se utilizar mtodos analticos quantitativos tradicionais. Os grupamentos oxigenados e os nitrogenados tm sido os principais alvos da aplicao dos mtodos quantitativos, pois intervm na estrutura das funes orgnicas que determinam as propriedades mais significativas das substncias hmicas. A quantidade de grupamentos oxigenados, especialmente aqueles que manifestam caractersticas cidas, constitui um dos critrios empregados para diferenciar cidos hmicos dos flvicos. Dada a complexidade da composio estrutural das substncias hmicas, os valores obtidos nas determinaes quantitativas desses grupamentos funcionais apresentam, via de regra, influncia de outras funes orgnicas de natureza qumica semelhante, bem como, efeitos de substituies no composto onde aparecem e das interaes intramoleculares ou intermoleculares. Sabe-se, por exemplo, que nos cidos orgnicos policarboxlicos, a dissociao em todas as carboxilas no acontece simultaneamente, verificando-se vrias etapas de ionizao, cada uma das quais apresenta um pKa particular (que maior segundo avana o grau de dissociao, o que significa que o carter cido diminui). As quantidades relativas dos grupamentos funcionais que caracterizam a estrutura das substncias hmicas modificam-se em funo de diversos fatores. Logicamente, mesmo no caso dos solos, haver diferenas que dependem do tipo de solo, da sua topografia, das condies climticas, da vegetao, do manejo agrcola aplicado, das propriedades fsicas, etc. (Canellas, 1999; Islam & Weil, 2000; Chukov, 2000; Lorenz et al., 2000; Canellas et al.,2001; Bayer et al., 2002; Alvarez-Puebla & Garrido, 2005). Tambm quando se trata de materiais humificados de outras fontes (e.g. gua, sedimentos, resduos orgnicos) ocorrem variaes em funo do material original e das caractersticas do processo de humificao acontecido (Lamin et al.,1998; Ruiz et al., 1999; Landgraf et al.,1999; Guridi, 2000). A seguir aparecem os princpios bsicos dos mtodos quantitativos geralmente usados na caracterizao da composio funcional das substncias hmicas. Em geral os dados obtidos com um mtodo no coincidem exatamente com aqueles oferecidos por outros mtodos. Por isto, na caracterizao quantitativa dos grupamentos funcionais das substncias hmicas, muito
26

importante esclarecer adequadamente qual foi a metodologia utilizada e no devem ser feitas comparaes com outros trabalhos onde os procedimentos de avaliao tenham sido diferentes. Mtodos para avaliar a acidez Acidez total A acidez total definida como o contedo de grupamentos carboxilas mais as hidroxilas de natureza cida. Segundo Stevenson (1994), os procedimentos fundamentais para avaliar a acidez total das substncias hmicas so: o mtodo do hidrxido de brio, o procedimento de metilao e a reao com o diborano (B2H6). Esse autor tambm se refere reao com LiAlH4 como um procedimento potencialmente til ao estudo das substncias hmicas. Mtodo do hidrxido de brio (Ba(OH)2) (Schnitzer & Gupta, 1965) Do ponto de vista analtico, o mtodo classificado como uma titulao potenciomtrica por retrocesso e consiste essencialmente no seguinte: Um volume medido com exatido (mnimo 20,0 mL) de uma dissoluo aproximadamente 0,1 mol L-1 de Ba(OH)2 (pH > 13), adiciona-se numa amostra dissolvida que contenha uma massa conhecida de substncia hmica (entre 50 e 100 mg) dentro dum frasco com tampa. O ar interior do frasco substitudo por N2 e coloca-se a mistura em agitao por 24 horas temperatura ambiente. Paralelamente, realiza-se o mesmo procedimento num outro frasco que apenas contenha um volume idntico da dissoluo do hidrxido de brio, para utiliz-lo como branco. A reao qumica que ocorre entre as substncias hmicas e o hidrxido de brio a substituio dos H+ potenciais dos grupamentos cidos pelo ction Ba2+, representada pela equao geral: 2 RH (aq.) + Ba(OH)2 (aq.) R2Ba (s) + H2O

(considerando-se R como o resduo duma macromolcula hmica que possui um H + ionizvel): Neste mtodo, assume-se que todos os humatos (os sais) de brio so compostos pouco solveis (s vezes isto no assim, introduzindo erros na anlise). Uma filtrao simples posterior, incluindo as lavagens necessrias do slido retido no papel de filtro com gua livre de CO2 (lembrar que o dixido de carbono precipita como carbonato de brio quando est em contacto com o ction Ba2+) permite obter um filtrado onde fica o excesso de Ba(OH)2 que no reagiu. Procede-se, ento, titulao potenciomtrica (utilizando-se o eletrodo de vidro como indicador e um eletrodo de calomelano como referncia, ou, ainda, um eletrodo combinado) com uma dissoluo padro de um cido forte (usualmente HCl em concentrao entre 0,1000 e 0,5000 mol L-1) at pH = 8,4 (Schnitzer, 1972). Essa titulao feita tanto no frasco que contm a amostra quanto no branco. Calcula-se a acidez total a partir da diferena do volume gasto do padro nas titulaes do branco (ser o maior) e da amostra, pois quando multiplicada pela concentrao do cido obtida a quantidade de substncia do hidrxido de brio que reagiu com a massa de substncia hmica utilizada. O resultado numrico obtido at aqui teria como significado (se os volume so reportados em mL) mmol (equivalentes) de grupamentos cidos por unidade de massa de substncia hmica avaliada (mg ou g) de acordo com a frmula acidez total (mmol H+/g de SH) = (VB VSH ) x CA x 1000 / mSH
27

Na qual VB e VSH representam os volumes, em mililitros, da soluo cida padronizada usada para a titulao do branco e da amostra de substncia hmica, respectivamente. CA a concentrao do cido em mol/L e mSH a massa de substncia hmica (em mg) usada na titulao. Daqui em diante, possvel transformar essa informao para outras unidades. Na literatura cientfica, deve-se reportar a massa em kg, pois a unidade indicada pelo Sistema Internacional para essa grandeza. No caso da acidez total das substncias hmicas a unidade mais frequentemente utilizada pelos autores cmol kg-1, embora tambm sejam encontrados dados em mmol kg-1 de substncia hmica (que sero 10 vezes superiores no valor numrico). Em geral, o intervalo dos valores da acidez total em cidos hmicos inferior ao encontrado para os cidos flvicos, tanto no caso dos oriundos do solo quanto dos obtidos a partir das diversas fontes de matria orgnica compostada. Tm-se encontrado relaes lineares entre os valores do coeficiente ptico E4/E6 e a acidez total das substncias hmicas, especialmente nos cidos hmicos. Com o aumento da acidez total, os valores deste coeficiente ptico diminuem. Pela sua simplicidade, o mtodo descrito tem sido o mais usado pelos pesquisadores para a caracterizao da acidez total das substncias hmicas. Processo de metilao O diazometano (CH2N2) reage com uma grande variedade de funes orgnicas que possuam determinadas caractersticas cidas. O mtodo consiste em provocar a metilao dos grupamentos funcionais cidos transformando-os em OCH3 mediante a reao com diazometano, trabalhandose com uma massa exatamente conhecida da substncia hmica que se deseja estudar. Alm do produto metilado (humato de metila), produzido N 2 gasoso. A seguir, executa-se a avaliao dos grupamentos OCH3 adicionados estrutura hmica analisada, utilizando-se um mtodo quantitativo tradicional (mtodo de Zeisel). Esta anlise qumica inclui vrias etapas. Uma breve descrio dessas etapas apresenta-se a continuao. Demetilao mediante reao com HI em meio fenlico como dissolvente: Obtm-se o iodeto de metila (CH3I), que extrado do meio mediante um fluxo de ar livre de CO2, e recolhido em gua de bromo, onde acontece a oxidao do iodeto at periodato, a reduo do dibromo para brometo, e o carbono da metila oxida-se a dixido de carbono gasoso. Reduo do periodato obtido em meio cido: O cido peridico que se forma em meio cido se faz reagir com suficiente iodeto de potssio para reduzi-lo at I 2. Posteriormente, titula-se com uma dissoluo padro de tiossulfato de sdio (Na2S2O3), usando-se amido como indicador (titulao iodomtrica). Mesmo assim, ainda o resultado no definitivo pois inclui os possveis grupamentos metoxilas ( OCH3) existentes na estrutura antes do processo de metilao. Isto quer dizer que necessrio realizar um ensaio em branco com uma massa idntica da substncia avaliada, executando-se, segundo o descrito, a determinao desses grupamentos metoxila prexistentes. Neste procedimento, o produto da multiplicao do volume gasto de tiossulfato (que ser a diferena entre o volume gasto na amostra metilada e na no-metilada ou branco) pela sua concentrao igual quantidade de substncia de grupamentos metilas incorporados na estrutura da substncia hmica. Isto a quantidade de grupamentos cidos originais. Quando no referido clculo utiliza-se o volume em mL, essa quantidade de substncia obtida corresponde-se com mmol. Resta apenas dividir pela massa de substncia hmica analisada, para poder reportar o valor da acidez total, sendo vlidas as consideraes expostas no caso do mtodo do Ba(OH)2. Como se compreende, o procedimento da metilao tem maior complexidade que o mtodo do
28

hidrxido de brio, requer maiores condies de trabalho laboratorial e consome reagentes mais variados. Como j indicado anteriormente, os resultados obtidos mediante estes mtodos no tm, necessariamente, que coincidir no valor numrico especfico, mas sim as tendncias e generalidades referidas para cidos hmicos e cidos flvicos, bem como as variaes no estudo de diferentes tipos de solos, outros materiais orgnicos humificados, sistemas de manejo, etc. Total de grupamentos carboxlicos ( COOH ) Dentre os grupamentos com caractersticas cidas existentes na estrutura das substncias hmicas, as carboxilas so as que apresentam valores de pKa mais baixos (maior carter cido). Mtodo do acetato (Schnitzer & Gupta, 1965) Este mtodo est baseado na capacidade do nion acetato, CH3COO-, de intercambiar o ction acompanhante (normalmente Na ou Ca) pelo H + de outra substncia de natureza cida (ou que possua hidrognios ionizveis numa funo carboxila) em meio aquoso. Como resultado da interao, forma-se o cido actico (CH3COOH), um cido fraco. A quantidade de cido actico produzido titulada com uma base forte. Para a aplicao desse mtodo s substncias hmicas, procede-se aproximadamente como se indica a seguir: Uma massa entre 50 e 100 mg da substncia hmica que se deseja estudar colocada em contato com um volume exato (geralmente 10,0 mL) de um sal de cido actico (acetato de clcio ou de sdio) de concentrao 1 mol L-1 e 40 mL de gua destilada livre de CO2, dentro de um frasco com tampa. Simultaneamente, procede-se da mesma maneira com um outro frasco que ser o branco, e que somente se diferencia do anterior porque no contm a substncia hmica. Essa mistura agitada durante 24 horas temperatura ambiente. Aps a agitao, o contedo de ambos os frascos filtrado e lavado (com gua livre de CO2) e os filtrados obtidos so titulados potenciometricamente (utilizando-se eletrodos iguais titulao do mtodo do hidrxido de brio) com uma dissoluo padro de uma base forte (frequentemente NaOH em concentrao 0,1000 mol L-1) at atingir um valor de pH igual a 9,8. Para calcular a quantidade de grupamentos carboxilas (que teoricamente deve ser igual quantidade de cido actico titulado) multiplica-se a diferena entre os volumes gastos (volume gasto na amostra menos o volume gasto no branco) pela concentrao da base padro. Essa quantidade fica expressa em mmol se o volume estiver em mL, ou mol se for em L. Acidez carboxlica (mmol H+ / g de SH ) = (VSH - VB ) X CB X 1000 / mSH Na qual V SH eVB representam o volume (mL) de base padro usado para a titulao da amostra de substncia hmica e da prova em branco, respectivamente, CB a concentrao da base (mol/ L) e mSH a massa de substncia hmica, em miligramas. Para reportar o contedo de grupamentos carboxila deve-se utilizar a mesma unidade que a acidez total. Isto , haver que dividir a quantidade de grupamentos carboxila pela massa de substncia hmica analisada. Stevenson (1994) indica algumas crticas ao mtodo descrito. Tais crticas consideram principalmente a possibilidade de intercmbio de H+ oriundos de outros grupamentos que no os carboxlicos, bem como, a provvel formao de complexos de Ca2+ (caso fosse utilizado o acetato de clcio) com grupamentos diferentes das carboxilas. Diante destas crticas, alguns autores tm proposto, por exemplo, extrair o cido actico mediante destilao antes da sua titulao (no necessria, ento, a filtrao) e utilizar sempre o acetato de sdio.
29

Embora apresente algumas limitaes como as indicadas anteriormente, este mtodo muito simples, o que o torna o mais utilizado, e vlido para diversos fins das pesquisas segundo os objetivos que se pretendam atingir. Celi et al.(1997) encontraram coincidncia entre os valores das quantidades de grupamentos carboxilas quando comparados o mtodo do acetato com os resultados obtidos apartir de mtodos espectroscpicos. Evangelou et al. (2002) avaliaram a estabilidade dos complexos entre ons metlicos e fraes humificadas usando mtodos potenciomtricos e espectroscpicos. Processo de metilao Para estimar a quantidade de grupamentos carboxila tambm pode ser aplicada a metilao seguida da saponificao para obteno do estearato de metila (RCOOCH 3). Tm-se experimentado vrios procedimentos, mas nem sempre se consegue um processo quantitativo, pois a saponificao uma reao termodinamicamente reversvel. Algumas variantes praticadas incluem a demetilao (perda da OCH3) para obter metanol (CH3OH), e extrao mediante destilao, para depois transform-lo em formaldedo (atravs de uma reao com KMnO4 diludo em meio bsico), o qual finalmente avalia-se por um procedimento colorimtrico tradicional. Alm destes dois mtodos descritos, outras alternativas podem ser empregadas para avaliar a quantidade de grupamentos carboxilas nas substncias hmicas, tais como, mtodo iodimtrico e a descarboxilao com quinolina. Essa ltima, especialmente til para avaliar as carboxilas ligadas a anis aromticos, oferece dados semelhantes aos obtidos mediante o mtodo da troca com os acetatos, o que foi interpretado como sendo conseqncia de que os grupamentos carboxilas predominam nas estruturas aromticas das substncias hmicas. Total de grupamentos hidroxilas ( OH) Para determinar as quantidades totais dos grupamentos hidroxilas, os mtodos de metilao e de acetilao tm sido mais utilizados no estudo das substncias hmicas. A seguir, apresenta-se uma descrio resumida destes mtodos e alguns comentrios encontrados na literatura. Mtodo da metilao Para executar a metilao, usa-se o sulfato de dimetila, (CH3)2SO4. Este reagente somente provoca a metilao nos grupamentos hidroxilas fenlicas e alcolicas. Quando esse procedimento feito em meio alcalino, precisa ser realizado repetidamente, mas se o meio excessivamente bsico, podem acontecer reaes colaterais. Outra alternativa para uma metilao menos drstica incluei: refluxar a substncia hmica estudada com o sulfato de dimetila sobre carbonato de potssio slido, usando-se acetona como dissolvente, ou substituindo a acetona pelo metanol (Leenheer & Noyes, 1989). Aps se obter o precipitado metilado, realiza-se a avaliao das OCH3 mediante o procedimento de Zeisel, que foi exposto j ao tratarmos a metilao para a acidez total. Como dito l, esse procedimento trabalhoso e requer vrias etapas at chegar titulao iodomtrica. Mtodo da acetilao A acetilao aparece como a variante mais amplamente difundida na avaliao do contedo total de grupamentos hidroxilas. A reao feita com o anidrido actico para formar steres de
30

acetato, e pode ser representada atravs da seguinte equao: R OH + (CH3CO)2O R O CO CH3 + CH3COOH (ster) (onde R corresponde tanto a um radical alqulico como a um radical aromtico) Uma massa conhecida da substncia hmica (entre 50 e 100 mg) refluxada durante 2 ou 3 horas com anidrido actico (aproximadamente 5 mL). Aps esfriar a mistura, filtra-se o slido e lva-se com gua destilada. O material seco com vcuo em ambiente contendo P2O5. A seguir, uma parte do produto acetilado (pelo menos 50 mg) refluxado com uma dissoluo aquosa de NaOH (geralmente 25 ml em concentrao 3 mol L-1) durante duas horas em atmosfera de N2. Paralelamente, realiza-se o mesmo procedimento, mas sem a amostra da substncia hmica, para ter um branco ou referncia. Finalmente, ao resultado do refluxado anterior adicionam-se 25 mL de dissoluo aquosa de H2SO4 3 mol L-1 e 25 mL de gua destilada. Esta mistura destilada e posteriormente titulada com dissoluo padro de NaOH (de concentrao prxima a 0,1000 mol L1 ). Sero obtidos dois volume do padro: um deles correspondente amostra (Va) e o outro ao branco (Vb). O contedo de grupamentos acetilas calculado segundo a expresso (Schnitzer, 1972): Contedo de Acetilas (C.A.) em cmol kg-1 = (Va Vb) x c(NaOH) x 106 / mSH Onde, c(NaOH) = concentrao do padro de NaOH e mSH = massa de substncia hmica avaliada em mg. Depois se calcula o contedo de grupamentos hidroxilas segundo: Contedo de hidroxilas (cmol kg-1) = C.A. / 1 (0,042 x C.A.) Grupamentos hidroxilas fenlicas (fen-OH) Na maioria dos trabalhos realizados com substncias hmicas, o contedo de grupamentos hidroxilas ligadas a anis aromticos (fenis) estimado pela diferena entre a acidez total e o contedo de grupamentos carboxilas. Na verdade esse clculo refere-se s hidroxilas de natureza cida. Um outro mtodo que tem sido utilizado para avaliar as hidroxilas fenlicas o mtodo de Ubaldini que consiste em esquentar a substncia hmica com KOH em meio alcolico e depois borbulhar dixido de carbono na mistura aps esfriamento. Assume-se, neste mtodo, que somente os sais potssicos oriundos dos fenis reagiro com o CO2 para formar carbonato de potssio, que titulado posteriormente. Muitas crticas tm sido feitas ao mtodo de Ubaldini pela pouca especificidade da reao e pelos riscos de processos colaterais durante o tratamento com o meio bsico. Mtodos para avaliar outros grupamentos funcionais em substncias hmicas. Grupamentos hidroxilas alcolicas ( -OH ligado a radicais alifticos) O contedo de hidroxilas alcolicas pode, tambm, ser estimado a partir de dados anteriores. Neste caso, o clculo feito com a diferena entre o contedo total de hidroxilas e o contedo de hidroxilas fenlicas (de natureza cida). Porm, nem sempre esse procedimento oferece dados confiveis. Alguns autores tm tentado, sem sucesso, estimar o contedo de grupamentos hidroxilas alcolicas pela diferena entre o valor dos hidrognios ativos obtidos com o mtodo do diborano e a acidez total do mtodo do Ba(OH)2.
31

 possvel estimar as hidroxilas alcolicas subtraindo-as da quantidade total de OH e a diferena entre a acidez total (mtodo da acetilao) e a quantidade de COOH (do mtodo do acetato). Os dados obtidos por quaisquer dessas alternativas devem ser considerados com reserva. Grupamentos carbonilas ( C=0 ) A funo carbonila, do ponto de vista da Qumica Orgnica, apresenta um conjunto de reaes caractersticas, potencialmente teis para serem aplicadas ao estudo das substncias hmicas. Dentre elas, as mais utilizadas com esses fins tm sido as reaes com hidroxilamina, fenilhidrazina e 2,4-dinitrofenilhidrazina. Vrios desses reagentes no excluem a possibilidade de que as funes carbonilas que pertencem s quinonas (cetonas aromticas de particular importncia na estrutura das substncias hmicas) tambm produzam uma reao positiva. Formao de oximas No caso de utilizarmos a hidroxilamina (na prtica uma dissoluo aquosa de cloreto de hidroxilamina), os produtos obtidos da adio na funo carbonila nomeiam-se oximas. Um procedimento vivel para aplicar estes fundamentos ao estudo das substnias hmicas, proposto por Schnitzer (1972) e recomendado por Stevenson (1994), tem sido empregado em muitas pesquisas. As principais etapas so descritas a seguir: Uma massa conhecida da substncia hmica que se deseja estudar (entre 25 e 50 mg) colocada no interior de um frasco com tampa que contenha 5 mL de dissoluo aquosa de 2dimetilaminoetanol em concentrao 0,25 mol L-1 mais 6,3 mL de dissoluo 0,4 mol L-1 de cloreto de hidroxilamina. A mistura do frasco (devidamente tampado) agitada e aquecida em banho maria durante 15 ou 20 minutos. Aps o esfriamento at a temperatura ambiente, a hidroxilamina que no reagiu titulada potenciometricamente (o sistema de eletrodos o mesmo que no mtodo do Ba(OH)2 para avaliar a acidez), usando-se uma dissoluo padro de cido perclrico. Como em outros procedimentos descritos anteriormente, necessrio preparar um branco para realizar as mesmas operaes e utilizando-se idnticas quantidades de todos os reagentes excluindo a amostra da substncia hmica. Esse branco tambm titulado com o cido perclrico. Para obter o valor da quantidade de grupamentos carbonilas deve-se ter em conta que a referida titulao vai oferecer a quantidade de hidroxilamina que no reagiu. Por tanto, o produto da multiplicao da concentrao do cido padro pela diferena entre o volume gasto na titulao do branco (ser o maior) e o volume gasto com a amostra corresponder hidroxilamina em excesso. calculado, ento, o contedo de oxima produzido por diferena entre a quantidade original de hidroxilamina adicionada no frasco antes da reao, e a quantidade dessa substncia que reagiu com o cido. Finalmente, deve-se dividir o valor obtido pela massa de substncia hmica, e realizar as transformaes necessrias nas unidades para reportar a quantidade de grupamentos carbonilas, geralmente expressas en cmol kg-1. Analisandose as quantidades de grupamentos carboxilas de diferentes cidos hmicos com as suas respectivas quantidades de grupamentos carbonilas possvel encontrar uma relao quase linear, o que quer dizer que a dupla ligao carbono-oxignio apresenta-se principalmente sob a forma de COOH.

32

As carbonilas das quinonas Para a estimao da quantidade de grupamentos carbonilas nas quinonas das substncias hmicas tm-se utilizado redues especficas empregando cloreto de estanho (II) e sais do ction Fe2+. Em ambos os casos, o fundamento do proceso consiste na transformao (reduo) da quinona para hidroxiquinona, avaliando o excesso do redutor. Com o SnCl2 possvel executar a reao tanto em meio cido (esquentando durante 4 horas de interao) como em meio alcalino (sob atmosfera de N2 durante 1 hora). Uma massa conhecida de substncia hmica dissolvida em NaOH de concentrao 0,1 mol L-1 (em ausncia de O2 durante uma hora). Depois titula-se potenciometricamente o excesso de Sn2+ com uma disoluo padro de K2Cr2O7 (eletrodo de platina e calomelano). Tambm preparado um branco que exclui somente a massa de substncia hmica avaliada. O tratamento em meio cido considerado muito drstico e pode induzir modificaes na estrutura original da substncia hmica estudada. Geralmente os valores reportados com o uso desse tratamento so significativamente superiores aos obtidos com o tratamento em meio bsico. No caso dos sais de Fe2+ utiliza-se trietanolamina em meio alcalino e o excesso de Fe2+ titulado potenciometricamente em condies semelhantes s descritas para o cloreto de estanho (II) em meio bsico. Grupamentos amino (- NH2) livres. Os estudos espectroscpicos feitos sobre a estrutura dos cidos hmicos e flvicos evidenciam a presena de ligaes NH correspondientes a agrupamentos amino (- NH 2). Para determinar a quantidade de grupamentos amino nas substncias hmicas tm-se utilizado os seguintes procedimentos: a reao com cido nitroso, a formao de derivados orgnicos e, ainda, o tradicional mtodo de determinao colorimtrica com Cu 2+. No caso da reao com cido nitroso os dados obtidos dos contedos de grupamentos amino so muito elevados, atribuveis provavelmente s interferncias de resduos de lignina e outros compostos fenlicos existentes na estrutura das substncias hmicas. A reao com fluordinitrobenzeno para produzir o dinitrofenilderivado do grupamento amino livre (compostos amarelos) uma das alternativas na formao de derivados orgnicos. Ruiz et al. (1999) e Guridi (2000) utilizaram a determinao colorimtrica para avaliar o contedo de NH 2 em cidos hmicos de vermicomposto, obtendo valores entre 5 e 7 mol de N por kg de cido hmico. Como dito para os grupamentos funcionais anteriores, as quantidades de grupamentos amino na estrutura das substncias hmicas varia em funo de diversos factores. Tendo em conta que as aminas classificam como compostos orgnicos com caractersticas bsicas fracas (geralmenre com pK b entre 4 e 6), estes autores consideram possvel a avaliao dos grupamentos NH 2 livres contidos nos cidos hmicos, com uma titulao potenciometrica utilizando-se uma dissoluo padro dum cido forte (por exemplo HCl em concentrao perto de 0,1 mol L-1) at pH= 3, apartir de uma massa conhecida (entre 50 e 100 mg) do cido hmico dissolvida em NaOH 0,1 mol L-1 em ausncia de oxignio, desde que seja feito o procesamento dos dados obtidos, seguindo-se o tratamento da primeira derivada para a faixa de valores de pH entre 6 e 3. Na curva pH / V v.s. V do cido padro, a quantidade de grupamentos amino livres poderia se estimar en funo do volume de cido correspondente largura da altura mdia do mximo que dever aparece na faixa de pH mencionada.
33

c a p t u l o
Modelos estruturais de substncias hmicas
Luciano P. Canellas Ary C. X. Velloso Gabriel de A. Santos

Nenhum desafio na Cincia do Solo passou tanto tempo sem uma resposta: mas o que so mesmo as substncias hmicas? A procura dessa resposta atravessa a histria moderna do conhecimento e carrega consigo um passado controverso e um futuro no previsvel. A busca de uma estrutura para as substncias hmicas tem garantido o emprego de muita gente. Equipamentos cada vez mais caros e sofisticados, cursos de formao de pessoal especializado, publicaes cada vez mais robustas e refinadas. No entanto, a pergunta persiste. Essa unidade refaz o incio do caminho da pesquisa de cidos hmicos e discute os trs principais modelos vigentes para explicar a estrutura das substncias hmicas, o modelo de estrutura macromolecular que considera as substncias hmicas um polieletrlito de cido fraco, o modelo micelar e, por ltimo, o modelo de associao supramolecular de pequenos agregados hmicos. Todas as propostas tm algumas de suas evidncias empricas apresentadas. So realizados, ao longo do texto, comentrios sobre as limitaes do nosso modo de conhecer as coisas. Talvez explique alguma coisa do porque de tanta controvrsia a respeito da estrutura das substncias hmicas. Introduo No h tema mais controverso na rea da Cincia do Solo do que a procura de uma estrutura ou de modelos estruturais para as substncias hmicas. A pesar disso, vrios pesquisadores tm apresentado suas propostas, cada qual com suas evidncias empricas e seus problemas metodolgicos. Se a funcionalidade das substncias hmicas pode ser acessada por uma srie de mtodos qumicos e espectroscpicos (estes ltimos sero vistos mais adiante), a busca de um modelo estrutural constitui, ainda, um desafio. As vrias concepes sobre a estrutura das substncias hmicas podem ser reunidas em trs vertentes principais. A mais aceita pelos pesquisadores que compem a IHSS (entidade que se auto-assume como padronizadora de metodologias de estudo para as substncias hmicas) a viso de que as substncias hmicas so macromolculas de um polieletrlito que tem sua conformao varivel de acordo com as condies da soluo do solo ( e.g. fora inica, pH). Essa concepo trata as substncias hmicas como um colide orgnico que pode ter as suas principais propriedades acessadas, tais como massa molecular, densidade de carga eltrica e acidez. Esse conceito foi popularizado pelos trabalhos de Schnitzer & Khan (1978), Kononova (1982), Stevenson (1994) e de Santos & Camargo (1999). Tem sua defesa nos trabalhos de Clapp, Hayes e Swifft (o nmero 5 do v. 127 da revista Soil Science, 1999 foi dedicado ao tema). Por se tratar de um modelo robusto e explicar macroscopicamente as principais interaes das susbtncias hmicas, tais como capacidade de
34

adsoro e complexao de ons, interao com minerais do solo, ou seja, as principais reaes de interesse agronmico-produtivista foi consolidado como o modelo mais aceito. Outra concepo sobre estrutura foi proposta por Wershaw (1986, 1993) que considerou as substncias hmicas em soluo como pseudo-micelas ou possuidora de estrutura do tipo micelar, com uma parte hidrofbica voltada para o interior e uma parte hidroflica voltada para o exterior. Uma evoluo dessa proposta coincide com as teorias de Piccolo (2002) e colaboradores sobre um arranjamento supra-estrutural de pequenas unidades de substncias hmicas atravs de foras de interao fracas como as de van der Waals e outras ligaes hidrofbicas a pH neutro e de pontes de H+ em valores mais baixos de pH. Esse modelo tem grande utilidade: se olhadas macroscopicamente as macromolculas hmicas formam colides se olhadas microscopicamente possuem muitos microcosmos qumicos (agregados) que, como se ver mais adiante no captulo 4, ajusta a humificao aos parmetros da termodinmica, bem como, justifica a ao direta sobre receptores celulares que desencadeiam algumas das respostas fisiolgicas das substncias hmicas (o que pode ser visto no captulo 10). Nessa unidade, sero abordadas as principais teorias e modelos sobre estrutura das substncias hmicas. Antes, um pouco de histria. Segue uma sntese do trabalho de Michael Susic (www. http://www.fortunecity.com/skyscraper/solomon/1735/history-acesso em setembro 2005). A descrio dos modelos estruturais uma adaptao livre do trabalho de Piccolo (2002 a e b). Aspectos histricos sobre o debate substncias hmicas Nos ltimos 150 anos, um pouco mais ou um pouco menos, foram elucidadas as estruturas dos principais produtos naturais. O exemplo clssico o projeto genoma. J se conhece a seqncia exata de aminocidos que compem o DNA de bactrias como o do amarelinho ( Xyllela fastidiosa). Tem muita gente ocupada com o que fazer da codificao dos genes humanos. O caso das substncias hmicas bem diferente. Alm de um clima favorvel, so necessrias terras frteis para a existncia, sobrevivncia e para a qualidade da vida humana. As civilizaes antigas foram baseadas essencialmente na atividade agrcola. Para estas civilizaes, terras frteis eram responsabilidade dos deuses. O conhecimento sobre o ambiente cresceu vagarosamente, especialmente na Idade Mdia, onde se prestou ateno numa possvel relao entre a obteno de bons rendimentos da produo agrcola e aspectos do ambiente. As diferenas encontradas na produo quando eram usados diversos tipos de resduos provenientes de plantas e estercos animais constituram um objeto bastante bvio para estudo. Portanto, unir a fertilidade das terras com a presena de resduos orgnicos no foi nenhuma surpresa. A necessidade primeira do homem, ou seja, a de obter comida, trouxe o hmus e, mais tarde, as substncias hmicas, para uma posio central na histria da civilizao. A presso para melhorar a agricultura nos sculos XVIII e XIX trouxe nimo para busca do entendimento da qumica do hmus. O conhecimento, desde seu princpio, fundado na observao da natureza e no registro dos resultados dessa observao gerou a abordagem racional da natureza. Seus fundamentos foram consolidados na filosofia do sculo XVIII numa Europa anticlerical e democrtica, baseado na tentativa do homem em compreender sua situao e controlar racionalmente seu desenvolvimento. Somente no final dos anos 1700s e no meio dos 1800s foram descobertas coisas consideradas hoje como muito simples, tais como, a existncia do oxignio, do hidrognio, do gs carbnico e dos gases nobres. Contudo, a pergunta j tinha sido feita: O que so as substncias hmicas? Essa pergunta surgiu muito cedo e com o conhecimento e a tecnologia disponveis na poca,
35

pontos de vista contraditrios foram se consolidando. Esta atitude (o que chamaremos de debate) persistiu mesmo depois da segunda Grande Guerra Mundial quando foi vivido o monstruoso salto tecnolgico proporcionado pela modernizao da indstria e pelos avanos da fsica e da qumica quntica. Os primeiros experimentos com ressonncia magntica nuclear (RMN) em Stantford datam de 1950. O primeiro aparelho comercial de 1956 e j em 1960 se obteve o primeiro espectro de RMN 1H de cidos hmicos. At num acelerador de partculas os cidos hmicos j foram parar (Solomon et al., 2005). Mesmo assim, no foi possvel ainda dissipar as nvoas que obscureceram os horizontes dos tempos mais remotos. O termo hmus significou a reunio de todos os compostos no solo com origem nas plantas. Hmus foi usado pela primeira vez por Wallerius em 17611 para denominar a matria orgnica do solo. Saussure (1802) introduziu esse termo para designar os compostos de colorao escura que depois foram chamados de cidos hmicos. Durante o perodo entre 1630-1750, a pesquisa sobre o princpio vegetal, ou seja, como as plantas cresciam, foi o centro das preocupaes intelectuais (exceto as religiosas). Mesmo antes dessa poca, j se percebia que os solos no tinham a mesma fertilidade, mas ningum soube descobrir porque isto acontecia assim. O botnico Linnaeus (1707-1778) classificou as terras de modo semelhante sua classificao de plantas (apud Waksman, 1936) considerando, principalmente, a colorao do solo, relacionando termos como colorao escura, hmus e terras boas para existncia humana. Quando Wallerius indicou o termo hmus para designar os resduos orgnicos decompostos de plantas e do solo, foi rapidamente postulado que o hmus era a substncia que fazia a planta crescer, a essncia. Foi postulado, tambm, que as plantas cresciam absorvendo o carbono do hmus. Surpreendentemente, esta idia persistiu at os 1800s, mesmo aps Saussure, em 1804, ter demonstrado que as plantas podiam assimilar uma parte do seu carbono atravs do gs carbnico do ar atmosfrico e Leibig, em 1841, ter demonstrado que as plantas podiam crescer na ausncia de hmus. A partir de 1865, cresceu o interesse sobre o papel dos microrganismos no solo. Os trabalhos de Pasteur modificaram rapidamente a forma de enfrentar qualquer problema cientfico e os primeiros trabalhos de microbiologia aplicada ao solo surgiram sob sua influncia. S neste momento o ciclo de carbono vem a ser entendido. O carbono das plantas decomposto pelos microorganismos at gs carbnico e devolvido atmosfera para ser reabsorvido pelas plantas. Como os cidos hmicos so mais refratrios decomposio microbiana, tendem a permanecer na matria orgnica do solo. Assim, os primeiros cientistas no tiveram muita dificuldade para isol-los. Uma vez estabelecido o entendimento dos mecanismos bsicos das ligaes e formao dos compostos orgnicos pela Qumica, ocorreu uma exploso de conhecimentos na rea. Sobre a composio do hmus, os resultados dessa exploso de idias ocorreu ao redor de 1871 com a descoberta das protenas em solos e continuou at ao redor da dcada de 1920, especialmente com os trabalhos de Schreiner & Shorey, que descobriram uma pletora de componentes orgnicos no hmus, tais como, esteris, hidrocarbonetos, glicerdeos, steres (resinas), quitina, celulose, xilano, alcois de acar, lecitina, piridinas, amidas, aminocidos, bases pricas, vanillina, numerosos cidos alifticos e aromticos e carbono elementar. Os cidos nuclicos e as ligninas foram conhecidos somente um tempo atrs, e os hormnios de plantas descobertos muito mais recentemente. Nos anos 1930 a composio do hmus j era bem estudada. De quando o termo hmus foi cunhado at o estabelecimento da sua composio, decorram, aproximadamente, 170
1 Para consulta das referncias dos pesquisadores citados neste texto veja as obras de Waksman (1936), Kononova (1992), Stevenson (1994).

36

anos, um tempo muito longo para um campo de pesquisa. A elucidao estrutural dos cidos hmicos , no entanto, um desafio para mais tempo. E no por falta de esforo. Numa reviso sobre fracionamento de matria orgnica feita, em 1954, Bremner comenta: A literatura relativa ao fracionamento de matria orgnica to extensa que nenhuma tentativa pde ser feita aqui para revisar os trabalhos antes de 1940. Hoje, com a rede mundial de computadores, essa dificuldade no foi vencida e, inclusive, aumentou. Uma procura rpida no sistema de busca mais popular de artigos cientficos na Universidade brasileira (base de dados da ISI disponibilizada pelo portal da capes www.capes.peridicos.gov.br\webofscience) mostra cerca de 5500 artigos sobre hmus desde 1954 at 2005 na busca com a palavra-chave humic substances. Os primeiros trabalhos registrados sobre cidos hmicos relatam seu isolamento em turfas da Alemanha por Achard em 1786 e de resduos de plantas por Vauquelin em 1797. Saussure e Dbereiner comearam os estudos em solos em 1804 e 1822, respectivamente. Os primeiros resultados de Sprengel foram publicados em 1826. Sprengel extraiu cidos hmicos de solo com o mesmo mtodo que Achard usou para turfa, e este foi, desde ento, o mtodo preferido para extrao dos cidos hmicos. Braconnot em 1819 adicionou cido ao amido e sacarose e obteve um precipitado escuro que se assemelhava aos cidos hmicos do solo. Isto deu incio a um esforo para se preparar o que se chamou ento de ulmin artificial. Foi descoberto que a glicose fornecia o mesmo tipo de produto e, ao redor de 1835, a explicao para a transformao de carboidratos em cidos hmicos sintticos foi realizada por Malguti. Quando a celulose foi transformada em cidos hmicos sintticos em 1839 por Mulder, fundou-se a gnese de cidos hmicos a partir de polissacardeos. O debate ainda est aberto 150 anos depois! Embora houvesse acordo sobre a origem dos cidos hmicos nesse tempo, muito se discutiu sobre a sua classificao. Os cidos hmicos esto presentes em quase todos os recursos naturais (solo, gua, sedimentos) e, alm disso, podem estar em propores diferentes de acordo com o solvente utilizado para a sua extrao. Naturalmente, os diferentes extratos resultaram em solubilidade, cores, texturas e, lgico, suas principais propriedades tambm variaram de acordo com a ocasio. Isto levou inveno de um conjunto de nomes que confundiu sua identidade qumica. A multiplicidade da nomeclatura foi gradualmente abandonada, provavelmente porque jamais se poder chegar a um consenso, uma vez que, cada tipo de solo, horizonte, manancial hdrico de onde eram isoladas as substncias hmicas geravam nomes diferentes para os cidos hmicos. O batismo individual de cada composto foi sendo gradualmente abandonado em favor de denominaes mais genricas tais como substncias hmicas de origem natural e do tipo hmicas para fontes como compostos, vermicompostos, lodos. Ao redor de 1870 duas descobertas tiveram grande impacto na pesquisa sobre a natureza dos cidos hmicos. Primeiro, foi demonstrado que outras combinaes de produtos orgnicos com estruturas to simples quanto tetracloreto de carbono poderiam dar substncias de colorao escura que se assemelhavam aos cidos hmicos naturais. Alm disso, as frmulas qumicas e a composio dos cidos hmicos ficaram to diversas e confusas incorporando carbono, hidrognio e oxignio, mas tambm nitrognio, anidridos, teres, cetonas, hidroxilas, grupos alqulicos, aromticos e furanos sua estrutura levando a uma mirade de produtos diferentes. Esta complexidade, junto com a perda do consenso da origem de polissacardeos, levou idia de que os cidos hmicos eram produtos essencialmente das reaes de sntese e ressntese de microorganismos. A microbiologia era um campo recente e popular na poca e foi aplicada rapidamente ao
37

debate cidos hmicos. Ainda que a presena de cidos hmicos favorecesse a transformao microbiana dos compostos orgnicos, discutiu-se bastante se o conjunto de elementos e grupos orgnicos presentes nos cidos hmicos eram resultados de uma sopa orgnica, algo que poderia ser elaborado atravs de microorganismos. A idia que os cidos hmicos se originavam de polissacardeos foi reavivada fortemente ao redor de 1914 pelos pesquisadores Gortner e Marcusson atravs da descoberta da presena da estrutura de furanos nos cidos hmicos (o mecanismo de quebra de um acar gera diversos tipos de furanos). Fischer & Schrader em 1921 demonstraram que microorganismos consomem os polissacardeos rapidamente. Foi postulado, ento, que era improvvel que os acares no pudessem ser precursores de cidos hmicos. A degradao de ligninas, muito mais lenta, deveria, ento, estar correlacionada com a gerao de cidos hmicos dada a proximidade de suas caractersticas qumicas. Embora com alguma oposio, a teoria da lignina tornou-se hegemnica com o passar do tempo. Evoluiu de modo paralelo a teoria que considerava a protena-lignina como a origem dos cidos hmicos. Muitos investigadores comearam a detectar pequenas quantidades de nitrognio nessas substncias e a postularem explicaes de como o N poderia estar fazendo parte da estrutura dos cidos hmicos. Em 1938, Waksman publicou um livro que virou um clssico chamado Hmus, no qual ele apostou fortemente na alterao microbiana de ligninas como o modo principal de formao de cidos hmicos: Nenhuma outra fase da qumica esteve to confusa como essa do hmus... Waksman enfatizou que o papel das bactrias e as alteraes da matria orgnica por fungos eram importantes na formao de hmus. Bremner, em 1954, acautelado contra as idias de Waksman, declara: Muita informao til relativa matria orgnica do solo foi obtida por mtodos de investigao sem o fracionamento e isolamento de compostos como preconiza o sistema de anlise de Waksman. Geralmente percebido, porm, que tais mtodos so de valor muito limitado e incertos, e que para alcanar algum progresso real na elucidao da natureza qumica da matria orgnica do solo ns temos que voltar ao mtodo de investigao por isolamento usado por Schreiner & Shorey no comeo do sculo. A cincia moderna aprofunda seu dilema: fracionar para conhecer o todo. As substncias hmicas vieram a ser vistas como produtos misteriosos envoltos numa aura de mistrio to complexa que, provavelmente, nunca poderia ser entendida completamente como preza a racionalidade ocidental. A teoria da origem de lignina, por necessidade, deu luz ao conceito que os cidos hmicos so basicamente compostos aromticos em vez de alifticos. Muitos investigadores comearam a s procurar combinaes aromticas nos cidos hmicos consolidando uma idia no senso comum de que os cidos hmicos so, por excelncia, compostos aromticos e, por isso, recalcitrantes a ao biolgica. No entanto, uma reviso estatstica extensa encontrou um grau de aromaticidade mdio de 36% para os cidos hmicos (Mathieu et al., 1999), valor esse bem abaixo do postulado teoricamente no incio do sculo XX. Mesmo assim, at hoje a maior parte dos trabalhos se refere s substncias hmicas como compostos aromticos de colorao escura e recalcitrantes ao biolgica. A nomeclatura tcnica que designa hmus, cidos flvicos e hmicos e as huminas como se compreende hoje foi cunhada por Oden, em 1919. Shapiro foi o reintrodutor de procedimentos experimentais convencionais da qumica orgnica no estudo das substncias hmicas tais como a cromatografia, o infravermelho em soluo e uso de solventes orgnicos na anlise de cidos hmicos. Porm, esse trabalho foi praticamente ignorado, provavelmente porque demonstrou que os cidos hmicos, ou pelo menos a frao solvel em acetato de etila era predominantemente aliftica e no aromtica como postulava o estamento cientfico da poca.
38

Nos anos 50, ficou popular o uso da cromatografia gasosa (CG) e da CG acoplada espectrometria de massas como uma ferramenta para investigar compostos orgnicos. A tcnica foi, inicialmente, de pouca utilidade no caso dos cidos hmicos inalterados, mas produziu-se uma srie sem fim de trabalhos a partir da produo dos derivados dos cidos hmicos atravs de reaes de oxidao. Embora a CG fosse popular, os produtos oxidados foram identificados atravs de mtodos mais convencionais e consistiam, principalmente, de compostos aromticos, especialmente cidos benzo-carboxlicos. Os resultados foram interpretados de forma a confirmar que os cidos hmicos eram compostos essencialmente aromticos, e ento, originados de ligninas. Porm, os estudos de oxidao devem ser realizadas com cuidado. Reuter et al., em 1983, demonstrou uma destas falhas. A quantidade de compostos aromticos produzidos era proporcional severidade das condies de oxidao i.e., um artefato. Em 1966, foi traduzido para o ingls e publicado o livro de M.M. Kononova (ilustre professora do Instituto de Solos de Moscou) sobre substncias hmicas, que reuniu e sintetizou o conhecimento sobre o hmus da Escola Russa (e do Leste Europeu) de matria orgnica. A publicao se tornou muito popular e, somada de Waksman, reforou a teoria da lignina como a principal via de formao das substncias hmicas. Para esse material foi consultada a verso em espanhol do livro de Kononova, que de 1982. No tero final do sculo passado, mais precisamente no incio dos anos 70, a anlise de infravermelho de amostras slidas de cidos hmicos atravs de pastilhas de KBr e as experincias de RMN se tornaram mais comuns no estudo da matria orgnica. Essas tcnicas demonstraram, entretanto, que os cidos hmicos so, essencialmente, alifticos. No incio dos anos 80, muitos investigadores perceberam que a situao da pesquisa sobre os cidos hmicos tinha ficado bastante complicada, mas os problemas foram sentidos de formas diferentes pelos diversos grupos de pesquisa. A Qumica do Hmus, publicado por F.J Stevenson em 1982 (a segunda edio do Humus Chemistry de 1994), nos EUA, consolidou a teoria de origem das substncias hmicas a partir das ligninas como a principal teoria de humificao. Porm, os investigadores nos anos oitenta, baseados em mtodos espectroscpicos cada vez mais sensveis, demonstraram que cidos hmicos consistiam em estruturas predominantemente alifticas e de carter hidrofbico. A ponto de Harvey e colaboradores, em 1984, propor uma origem de cidos hmicos a partir dos cidos graxos. Em contraste com os estudos de oxidao degradativa de cidos hmicos, os estudos de reduo foram bem menos numerosos. A maioria dos produtos de reduo eram compostos alifticos de baixo peso molecular (Dubach et al., 1964; Martin et al., 1987). Com a evidncia sempre crescente obtida durante os anos oitenta sobre a natureza aliftica dos cidos hmicos, a maioria dos pesquisadores veio aceitar que essas substncias tenham pelo menos alguma estrutura de compostos alifticos. A relutncia no abandono de convices cientficas, apesar de uma srie de evidncias to cientficas quanto outras, um fenmeno bastante interessante. Uma possvel explicao est relacionada ao prprio modelo hegemnico de cincia convencional. Este termo foi cunhado por Thomas Kuhn para explicar como a cincia se desenvolve. Para Kuhn (1972), isso se d atravs da construo de paradigmas por disciplinas especializadas que reafirmam mais suas certezas internas e ignoram a complexidade dos problemas que ultrapassam as suas fronteiras. Esse modelo de cincia possui dificuldades para analisar e enfrentar problemas complexos. Os seus fundamentos foram estabelecidos no sculo XVII, baseados num novo e original mtodo de investigao criado e defendido por Francis Bacon que envolvia a descrio matemtica da natureza e o mtodo analtico de raciocnio
39

concebido pelo gnio de Descartes. De acordo com Capra (1989), a clareza dos procedimentos indutivos e de realizar experimentos e extrair deles concluses gerais a serem novamente testadas por novos experimentos consiste, at hoje, no vigor do paradigma cientfico atual e, tambm, na sua grande falha. O mtodo consiste em decompor pensamentos e problemas em suas partes componentes e disp-las em sua ordem lgica. A caracterstica essencial da contribuio de Descartes para o moderno pensamento cientfico a sua fragmentao e reducionismo com o objetivo de dominar e controlar a natureza. Issac Newton convergiu as idias de Bacon e Descartes adequando a abordagem empirista e indutiva do primeiro com a racional e dedutiva do segundo, formulando um procedimento robusto de cincia que culminou com a descrio geral da natureza atravs da concepo mecanicista. As leis gerais de funcionamento do cosmos foram aplicadas com sucesso at na biologia. O todo se fez em pedaos e at o prprio corpo humano foi considerado uma mquina formada por unidades (clula) formadoras de tecidos gerando os rgos, etc. O sucesso monumental desse empreendimento cientfico deriva da exuberncia de seus resultados, da sua facilidade de entendimento e de suas aplicaes prticas alimentando a revoluo industrial. Fragmentando possvel gerar uma cadeia de produo cientfica para cada segmento envolvendo as redes de abastecimento de produtos e servios cada vez mais especializados e sofisticados. A crena na Cincia como fator de progresso dissolveu ideologias aproximando plos distintos (ex-URSS e EUA). As desigualdades sociais geradas pela assimetria tecnolgica e, principalmente, a inconcebvel crise ambiental decorrente da aplicao do conhecimento produzido (desde a possibilidade de exploso do mundo inteiro milhares de vezes por artefatos atmicos at a contaminao de todo manancial de gua doce por contaminao atmosfrica). No entanto, desde o princpio do sculo XX foi demonstrada a fragilidade dessa concepo cientfica. Por exemplo, Albert Einstein, em 1905, desenvolveu um novo modelo de considerar a radiao eletromagntica que se tornaria caracterstico da teoria quntica, a teoria dos fenmenos atmicos que, elaborada 20 anos mais tarde por um conjunto de pesquisadores, aboliu o mtodo cientfico tradicional para descrever que as partculas subatmicas no so coisas, mas interconexo entre coisas e essas coisas por sua vez so interconexo entre outras coisas... (Capra, 1989). Utilizando o exemplo acima, os problemas colocados hoje biologia so devidos ou derivados de sua abordagem estreita e fragmentada. O empenho na dissecao do corpo humano at seus componentes mais elementares levou reunio de uma quantidade assombrosa de conhecimentos acerca de mecanismos celulares e moleculares, mas absolutamente incapazes de descrever aes integrativas, as interaes dos sistemas vivos com a totalidade do ambiente. Essa pequena digresso do texto aqui tem sentido se for colocada novamente a pergunta: o que so, ento, as substncias hmicas? Se tratadas como um processo, termo que designa aqui unidades fsicas e qumicas em interconexes com outras unidades, ou seja, um ambiente complexo, os princpios bsicos da experimentao cientfica vo sempre levar a respostas inconclusivas. O fundamento bsico da cincia da complexidade a termodinmica. De acordo com Capra (1989):... a primeira grande realizao dessa nova cincia foi a descoberta de uma das leis mais fundamentais da fsica, a lei da conservao de energia. Diz essa lei que a energia total envolvida num processo sempre conservada. Pode mudar de forma mais complicada mas nenhuma poro dela se perde. A segunda Lei a da dissipao da energia. Enquanto a energia total envolvida em um processo sempre conservada, a quantidade de energia til diminui, dissipando-se em calor, frico, etc... ( ). H uma certa tendncia nos processos... (...) Quando se juntam gua quente com gua fria o que resulta a gua morna. da mesma forma
40

quando se mistura um saco de areia branca com um saco de areia preta resulta em areia cinza e quanto mais se agita a mistura mais uniforme o cinzento. No veremos as duas espcies de areia se separarem espontaneamente. O que todos os processos tm em comum que avanam em uma certa direo da ordem para a desordem e esta a formulao mais geral da segunda lei da termodinmica. Qualquer sistema fsico isolado avanar espontaneamente na direo de uma desordem sempre crescente. Em meados do sculo XX, para expressar essa direo dos processos fsicos numa forma matemtica precisa, Rudolf Clausius introduziu uma nova quantidade e a chamou de entropia. O termo representa uma combinao de energia e TROPOS termo grego que designa transformao ou evoluo. Assim entropia uma quantidade que mede o grau de evoluo de um sistema fsico. Muito poucos foram os trabalhos que consideraram as substncias hmicas como um processo, um contnuo de transformao das diversas formas de carbono no ambiente. O pensamento ocidental fluiu para a concepo de uma molcula com estrutura discreta. Porm, a aplicao dos conceitos da termodinmica para avaliao de caractersticas estruturais das substncias hmicas tem gerado, s vezes, contradies que so eventualmente ignoradas (uma proposta para o tratamento termodinmico para o fenmeno da humificao se encontra na segunda parte do captulo 4). Os avanos obtidos na descrio dos modelos estruturais levaram em considerao as variveis termodinmicas. Descritas como um processo, as substncias hmicas no poderiam assumir modelos discretos de estrutura. Se descritas num estado inicial e outro final, o caminho percorrido entre os dois estados pouco importa. Esse itinerrio, porm, a essncia do problema, desconsiderada por questes metodolgicas. Como a cincia no possui respostas claras para problemas complexos, a busca de um modelo estrutural discreto poder fracassar. Para a cincia oficial to importante quanto o resultado de uma descoberta o seu processo de investigao um bom mtodo de pesquisa pode ser sempre usado novamente para outras descobertas. Para Sagan (1989) o mtodo cientfico comprovado e verdadeiro. No perfeito, apenas o melhor que temos. Abandon-lo, junto com seus protocolos cticos, o caminho para uma idade das treva. Os avanos obtidos so bvios, por exemplo, mais prudente vacinar uma criana contra a poliomielite do que lev-la a uma rezadeira. A crtica necessria a de que o mtodo cientfico precisa incorporar novas abordagens, uma vez que a metodologia tradicional engessa a cincia e permite avanos somente dentro de limites pr-estabelecidos. Vianna Moog (1954) lembra que preciso no esquecer que a cincia oficial tinha dado cicuta a Scrates e amargurado a velhice de Galileu. Como sugere Moog, ningum deveria esquecerse de que quando Coprnico, Newton, Pasteur, Einstein ou Freud assombraram o mundo e honraram a humanidade, porque haviam se rebelado contra os dogmas da cincia oficial. No obstante, segue a roda-viva da pesquisa e so apresentados agora os principais modelos de substncias hmicas. Estrutura macromolecular De acordo com o modelo de humificao originado das teorias de Waksman e compilado por Stevenson (1994), a humificao o processo pelo qual a biomassa constituda pelas plantas e animais convertida at hmus, um dos passos bsicos do ciclo de carbono na natureza. Compostos orgnicos que fazem parte da planta e dos tecidos dos animais so termodinamicamente instveis na atmosfera oxidante da superfcie da terra. Depois da morte,
41

esses compostos (oriundos de plantas e animais) so convertidos at dixido de carbono e gua por reaes de degradao catalizadas por enzimas associadas aos microrganismos. Entretanto, nem todos os compostos so convertidos imediatamente a dixido de carbono e gua. Uma parte oxidada apenas parcialmente. O resduo da oxidao parcial desses compostos se acumula no solo na forma de hmus. Essa a base da teoria da lignina. As plantas vasculares so de longe o grupo dominante no ambiente terrestre. Os tecidos dessas plantas so constitudos, principalmente, por trs grupos de biopolmeros: celulose, hemicelulose e ligninas. Em menor extenso, polisteres alifticos, amido, protenas, espcies fenlicas macromoleculares e lipdeos. A formao das substncias hmicas foi considerada como uma seqncia de reaes espontneas de heteropolicondensao entre vrios pequenos compostos intermedirios liberados durante a quebra enzimtica das biomacromolculas. As teorias de humificao foram baseadas na observao de que constituintes bioqumicos simples (e.g., aminocidos, fenis, acares) condensados abioticamente (especialmente em condies de altas concentraes e temperaturas) produzem uma reunio extremamente complexa de molculas que exibem, de maneira geral, colorao escura e a maioria das caractersticas fsico-qumicas da matria orgnica do solo, tais como, polifuncionalidade, flexibilidade estrutural e carga lquida negativa. Nas reaes de condensao foram includas as reaes de Maillard (caramelizao) entre carboidratos e aminocidos (ou protenas) para formar produtos escuros, de carter aromtico. Stevenson (1994) considera trs mecanismos bsicos de formao das SH: (i) compostos nitrogenados oriundos da atividade microbiolgica reagem com ligninas modificadas (ii) polifenis so oxidados at quinonas e, posteriormente, condensados atravs de reaes com compostos aminados e (iii) acares reduzidos reagem com compostos aminados evoluindo at macropolmeros de colorao escura e massa molecular elevada. De uma forma bastante simplificada, verifica-se, na reunio das teorias de humificao, dois grandes processos que ocorrem concomitantemente durante a humificao: um processo degradativo onde os biopolmeros so quebrados atravs da ao de enzimas oxidativas secretadas pelos microrganismos num mecanismo biolgico rpido e dependente da presso de oxignio ( PO2). A degradao acompanhada de maneira simultnea pela sntese de novos compostos. O segundo processo referido como processo de condensao abitica que envolve a quebra da ligao de componentes moleculares dos biopolmeros e resntese de produtos macromoleculares atravs de reaes entre as molculas. A oxidao de polihidrxidos benzenos at quinonas e a condensao via reao com grupos aminados at macromolculas o exemplo mais conhecido desse processo. Existe uma srie de razes pelas quais aceito que as substncias hmicas tenham uma estrutura polimrica. conveniente assumir que as substncias hmicas so polmeros mesmo apesar do fato de que estas no sejam produtos da sntese celular como outras biomolculas sem a possibilidade de se identificar um monmero precursor qualquer. A rpida degradao e decomposio no solo dos biopolmeros liberados da lise celular foram processos considerados a partir da perspectiva biolgica. Alm disso, a caracterstica das substncias hmicas de serem refratrias degradao biolgica no solo atribuda, historicamente, sua natureza polimrica (e aromtica). O carbono estabilizado nas substncias hmicas do solo conhecido como possuidor de um longo tempo de residncia no solo (de 250 at mais de 3000 anos). No obstante, Canellas et al. (2002) estimaram ao redor de 12 anos a ciclagem completa de um cido hmico do trpico quente e mido atravs da anlise isotpica (13C). Alm disso, a hiptese tradicional de formao das substncias hmicas atravs da condensao entre aminocidos e
42

componentes da degradao da lignina espalhou a teoria de que as substncias hmicas so polmeros estruturais semelhantes s ligninas. A lignina um polmero disperso numa faixa de massa molecular que varia de <1000 at vrios milhes de Da (Abreu, 1994) e a sua resistncia degradao biolgica no solo tem sido atribuda sua estrutura macromolecular (Amalfitano et al., 1992). Por analogia direta, as substncias hmicas foram consideradas macromolculas. Da mesma forma, outra hiptese clssica de formao das substncias hmicas como a teoria dos polifenis (Flaig, 1988) ou a teoria das reaes de Maillard (Maillard, 1913) reside na mesma lgica que perpetua o paradigma das substncias hmicas como um processo de polimerizao que pode ocorrer em condies de laboratrio. Alm de questes histricas, outro aspecto que tem contribudo muito para a considerao das substncias hmicas como um macropolmero: so as propriedades coloidais das substncias hmicas que so consideradas como anlogas s de um polieletrlito em meio aquoso (Flaig et al., 1975; van Dijk, 1972). A maioria das propriedades dos colides, tais como, processos de floculao e disperso, respostas aos eletrlitos e comportamento de dupla camada tambm foram observadas para as substncias hmicas. Dessa forma pde se transferir, facilmente, para o extrato de substncias hmicas o conceito de macromolculas de elevada massa molecular. Exemplos de estruturas macromoleculares para substncias hmicas so mostradas nas Figuras 2.1 a 2.3. As reaes de troca e de complexao so facilmente descritas sob esse ponto de vista. Apesar de amplamente aceito, o conceito de uma estrutura macromolecular para as substncias hmicas nunca foi demonstrado, sem dvida, em termos qumicos ou fsico-qumicos em extratos obtidos de solos (Piccolo, 2002). As evidncias so mais resultantes de um modelo terico de formao do que de evidncias experimentais. Considerada como uma macromolcula de um polieletrlito de cido fraco, evidente e necessrio que se acesse com acurcia e exatido o tamanho molecular desse polmero. No entanto, a procura de um tamanho molecular mdio um captulo parte nessa histria de pesquisa. Quanto vale um mol de cido hmico? Cameron et al. (1972), atravs de procedimentos convencionais de ultracentrifugao, determinaram a massa molecular mdia de uma srie de cidos hmicos de solos orgnicos, que tambm foram fracionados atravs de cromatografia por excluso de tamanho e por filtrao a presso em membranas de poros de tamanho conhecido. Os dados foram interpretados como a evidncia emprica de uma estrutura macromolecular dos cidos hmicos, com valores de massa molecular variando de 2000 at 1.300.000 Da. Aproximadamente 75% da massa dos cidos hmicos foi menor que 100.000 Da e 25% apresentam valores menores que 10.000 Da. Menos de 20% dos cidos hmicos apresentam massa molecular muito elevada. Mesmo com tamanha disperso de valores, os cidos hmicos foram considerados compostos com estrutura discreta. A crtica ao trabalho de Cameron e colaboradores est escrita no prprio trabalho. Para misturas complexas impossvel predizer um coeficiente de sedimentao confivel. Mais tarde, foi sugerida uma conformao em espiral para a macroestrutura, uma vez verificada a dependncia entre a concentrao de ons, do pH da soluo e a distribuio da massa molecular e o tamanho molecular (Schnitzer & Ghosh, 1979). A origem dessa concepo remonta aos trabalhos sobre substncias hmicas no incio do sculo XX. A sntese desse entendimento sobre a natureza qumica das substncias hmicas foi realizada por Kononova (1966, 1982).

43

Figura 2.1. Modelo de estrutura para cidos hmicos postulados por Shulten & Schnitzer (1989). A, B e C so representao dos espaos vazios na estrutura. Esses espaos podem ser preenchidos por aminocidos, carboidratos ou outras molculas como as portadores de atividade hormonal, por exemplo. Abaixo representado a interao da estrutura hmica com a frao mineral do solo. Adaptado de Schulten H, -R. & Schnitzer, M. Naturwissenschaften, 82: 487-498, 1995. legendas C (azul), O (vermelho) H (branco), N (azul escuro). Modelo construdo a partir de dados de RMN 13C, Pi-CG-EM com software HyperChem.
CHO ( CHOH )4 COOH COOH HO HO OH O
0

ACAR H O O O

COOH R CH N O

H O

O CH O

HOOC HO

COOH

O Na O R CH C NH

N O

O HO

O PEPTIDEO

Figura 2.2. Modelo de estrutura de cidos hmicos postulado por Stevenson (1994)
OH HOOC COOH HOOC HOOC OH HO O O COOH COOH OH

Figura 2.3. Modelo de estrutura para cidos flvicos postulados por Buffle (conforme Stevenson, 1994)

Kononova introduziu o conceito de polmero para as substncias hmicas baseado em propriedades como composio elementar, acidez trocvel, propriedades ticas, propriedades eletroforticas e massa molecular que variavam de acordo com a classe de solo de onde eram extradas as substncias hmicas. Baseando-se nessa concepo, as vrias fraes de substncias hmicas obtidas durante a extrao e fracionamento da matria orgnica do solo, de acordo com sua solubilidade, em meio aquoso alcalino, ou cido, foram imaginadas como parte de uma mistura heterognea de molculas com massa molecular variando de poucos at alguns milhes de Da e exibindo um contnuo de propriedades qumicas. Um esquema ilustrativo desta concepo
44

apresentado na Figura 2.4. Note a evoluo qumica contnua das substncias hmicas As principais modificaes dos resduos vegetais com o processo de degradao incluem o aumento da acidez, da aromaticidade e, ainda, enriquecimento seletivo de unidades metil e metileno nas substncias hmicas (Kononova, 1982).
Substncias hmicas cidos flvicos
Amarelo claro Amarelo escuro

cidos hmicos
marrom Cinza/preto

huminas
preto

---? ---? -----------------------------aumento da intensidade de colorao-------? ---? ---? -----------------------------aumento do grau de polimerizao----------? ---? ----? ---? -----------------------------aumento da massa molecular----------? ---? ---? ---? -----------------------------aumento no contedo de C---------------? ---? -----? ---? -----------------------------diminuio do contedo de O----------? ----? ---? ---? -----------------------------decrscimo na acidez trocvel-----------? ----? ---? ---? -----------------------------decrscimo na solubilidade--------------?

Figura 2.4. Esquema ilustrativo da evoluo contnua das substncias hmicas de acordo com Stevenson (1994). Adaptado para o portugus do stio eletrnico www.ar.wroc.pl/~weber/kwasy2.htm (acesso em setembro de 2005)

Baseando-se na solubilidade das substncias hmicas num extrator, possvel extrair diversos sistemas de polmeros carregados eletricamente (polieletrlitos) com diferentes constantes de dissociao (comportamento de cido fraco) que so avaliados quimicamente atravs de suas propriedades ticas, acidez trocvel, propriedades eletroforticas e distribuio de massa molecular. Assim, para Piccolo (2002), a assuno de que as substncias hmicas so polmeros foi baseada num fundamento histrico (produtos da sntese microbiana a partir da degradao de ligninas e outros biopolmeros) e numa medida fsico-qumica simples (a absorbncia de luz na regio do visvel). Se os valores de massa molecular para as substncias hmicas so uma fonte de confuso, contradio ainda maior existe sobre a forma atribuda estrutura polimrica das substncias hmicas. Forma globular (Visser, 1964), configurao linear flexvel (Mukherjee & Lahiri, 1959), forma elipsiodal (Orlov et al., 1975), polieletrlito esferide (Ghosh & Mukherjee, 1971) e cadeia longa ramificada (Cameron et al., 1972). Ghosh & Schnitzer (1980a) reunificaram esses diferentes pontos de vista atravs da medida da presso de superfcie e viscosidade das substncias hmicas em diferentes pHs e concentrao de eletrlito e adaptando os resultados para relacionar com os desenvolvidos para polmeros verdadeiros. Eles explicaram o comportamento das substncias hmicas (material no carregado a pH baixo e polieletrlito a alto pH) com base na teoria polimrica e estabeleceram uma configurao macromolecular para as substncias hmicas que no nica, mas que varia com o pH e com a fora inica do meio onde as substncias hmicas so dissolvidas. Foi estabelecido que as substncias hmicas so colides esfrico rgidos em concentraes elevadas de amostra e fora inica e a baixo pH enquanto que em pH elevado e em fora inica baixa so polmeros lineares. No entanto, travs de tcnicas de microscopia eletrnica (small-angle X ray scattering) foi possvel observar a formao de agregados de substncias hmicas em soluo com tamanho dependente do pH (Wershaw, 1989). As vrias fraes obtidas por cromatografia por excluso de tamanho foram quimicamente diferentes e as diferenas encontradas no comportamento de agregao foram reflexo da interao de diferentes
45

mecanismos de ligao. Fraes hmicas de diferentes fontes apresentaram propriedades de superfcie ativa (Hayase & Tsubota, 1983), levando formulao de uma alternativa estrutura polimrica em espiral. Wershaw (1989, 1993) props que as substncias hmicas consistiam em agregados ordenados de compostos anfiflicos, principalmente, de polmeros pouco alterados de plantas com segmentos possuindo funes cidas. Nesse modelo, as substncias hmicas so consideradas como agregados unidos por foras hidrofbicas (ligaes - e ligaes de transferncia de cargas) e interaes atravs de pontes de H+. No modelo, a parte hidrofbica se localiza no interior do agregado e a parte hidroflica voltada para a superfcie do agregado. Os agregados ordenados de substncias hmicas no solo foram descritos como semelhante a membranas bipolares envolvendo as partculas minerais do solo ou como uma micela em soluo. O modelo de Wershaw representou uma grande ruptura devido introduo do conceito de agregao de diferentes tamanhos de partculas de constituinte hmicos em contraste com a viso tradicional do polmero linear polidisperso. Estrutura micelar ou pseudo-micelar Foi sugerido que as substncias hmicas constituem uma macroestrutura s aparente e que as propriedades macromoleculares so derivadas de associaes de pequenas espcies moleculares em estruturas micelares ou pseudo-micelares envolvendo associaes fracas de molculas no polares como cidos graxos, longas cadeias alifticas de hidrocarbonetos, steres e compostos similares suberina. A degradao de polmeros de plantas envolve reaes de despolimerizao e oxidao que so catalizadas por enzimas. Polmeros de polissacardeos, como a celulose, so degradados sob reaes de despolimerizao hidroltica enquanto que a lignina degradada, principalmente, por oxidao. Os lipdeos so atacados por hidrlise e oxidao. Os produtos resultantes so, geralmente, fragmentos com grande parte de sua estrutura original preservada. Assim, cidos graxos alifticos, por exemplo, so degradados por mecanismos de -oxidao na qual o grupo cido quebrado no final da cadeia aliftica. produzido um cido graxo com uma cadeia 2 tomos mais curta. Da mesma forma, parece que o principal mecanismo de degradao da lignina a oxidao de um ou dois grupos COH da parte final livre da unidade fenilpropano. A despolimerizao libera, em tese, fragmentos de estrutura pouco alterados. A parte pouco alterada da lignina um fragmento relativamente hidrofbico e o carboxilato no final da unidade se constitui um fragmento hidroflico, gerando uma molcula anfiflica. Alm dos compostos anfiflicos produzidos pela degradao de algumas ligninas algumas unidades do tipo ligninascarboidratos podem estar presentes. A poro carboidratos dessas molculas tem carter hidroflico e a parte lignina hidrofbica. Grupos fenilpropano de ligninas ligados a cadeias de hemicelulose por ligo benzil-ter so exemplos deste tipo de unidade. Esses complexos tm uma massa molecular mdia de 6.000 a 8.000 Da. Os complexos ligninas-carboidratos, bem como outros fragmentos anfiflicos, tm forte tendncia para formar agregados na forma de micelas em soluo aquosa. Uma micela um agregado globular de molculas anfiflicas na qual a parte hidrofbica forma o interior da micela e a parte polar (hidroflica) forma a superfcie exterior. A formao do hmus no solo ocorre quando produtos lixiviados da serrapilheira se movem para o interior do perfil do solo. Esses lixiviados que constituem os componentes anfiflicos dos produtos de degradao e complexos ligninas-carboidratos interagem com as partculas minerais. essa interao em camadas que constitui o hmus do solo. Para Wershaw, a representao diagramtica
46

da estrutura micelar a mostrada na Figura 2.5. O hmus representado como uma membrana revestindo a superfcie de um oxidohidrxido com carga lquida positiva. Alm do filme que reveste a superfcie mineral, os produtos da degradao dos biopolmeros podem co-existir como micelas em soluo. A agregao espontnea de substncias hmicas em agregados micelares foi tambm postulada por outros autores (Engebretson & Wandruszka, 1994; 1997) para justificar o elevado grau de interao das substncias hmicas com compostos orgnicos apolares no solo. Havia uma dificuldade de explicao desses resultados baseada na complexa natureza polimrica das substncias hmicas. O fenmeno da partio qumica pode ser usado facilmente considerandose a parte hidrofbica da micela como um solvente orgnico. A concentrao crtica micelar (CMC) encontrada para as diferentes substncias hmicas varia numa faixa de concentrao bastante elevada (de 1 a 10 g L-1), muito maior do que para compostos com superfcie ativa que produzem uma estrutura micelar regular (Tanford, 1980).
Contra ons carboidratos

Lipdios Grupo polar no ionizado Stios de carga positiva Molcula anfiflica

Estrutura do tipo membrana

Superfcie oxdica

Figura 2.5. Representao esquemtica do modelo micelar para substncias hmicas. Adaptado de Wershaw, R.L. Environ. Sci. Technol. 27: 814-816, 1993.

Apesar de todas estas limitaes, o conceito de agregao das partes hidrofbicas das substncias hmicas pode explicar resultados como o espalhamento da luz (light scattering) encontrado quando da adio de ons Cu++ (Ryan & Webwe, 1982), o aumento na solubilidade de compostos no polares em soluo hmica devida ao fenmeno de partio/adsoro no interior hidrofbico das substncias hmicas (Carter & Suffet, 1982), a liberao de matria hmica atravs de membranas de dilise de material extensivamente dialisado quando realizado o tratamento com compostos anfiflicos como cido actico ou outro eletrlito (De Haan et al., 1987; Nardi et al. 1988). O possvel entendimento do comportamento ambiental das substncias hmicas atravs do modelo de agregao no abalou o paradigma polimrico incluindo novos modelos de estruturas gerados por modelagem computacional alimentada por dados obtidos das tcnicas modernas de espectroscopia (Figura 2.4). Apesar das muitas limitaes inerentes ao mtodo da pirlise das substncias hmicas (Saiz-Jimenez, 1994, 1995; 1996) compostos identificados por espectrometria de massas acoplado pirlise com massa molecular maior que 500 Da foram usados para computar um modelo molecular arbritariamente unido por ligaes covalentes e que produz uma imagem de um polmero ramificado. Essas macromolculas tm sido propostas at hoje como um modelo de substncias hmicas e usadas para explicar seu comportamento no solo (Schulten & Leinweber, 2000). Outros modelos como de Daillo et al. (2003) seguem a mesma lgica de construo (Figura 2.6) e so auto-referendados pela anlise de propriedades espectroscpicas e termodinmicas que, ao mesmo tempo, so tomadas para elaborao do prprio modelo. Um exemplo das possibilidades de simulao encontrado na Figura 2.7. extrada do projeto
47

Virtual Museum of Minerals and Molecules que tem como curadores Barak, P.; Nater, E. e Stiles, C (www.soils.wisc.edu/virtual_museum/index.html)
Caracterizao experimental
Composio elementar, infravermelho, ultravioleta, Cromatografia gasosa aplicada espectrometria de massas, Ressonncia Magntica Nuclear 1H/13C, etc

Elementos
Tipos; contedo

Fragmentos moleculares
Tipos; contedo

Ligaes entre fragmentos moleculares

Tipos; contedo

Elucidao da estrutura assistida por computao

Modelo 3-D

Validao do modelo atravs de propriedades estruturais e termodinmicas

Figura 2.6. Representao esquemtica da construo e gerao de modelos computacionais para a estrutura tridimensional de substncias hmicas. Adaptado de Daillo et al. 2003. (Environm. Sci. Thecnol., 37: 17831793, 2003)

Figura 2.7. Modelo 3-D de cidos hmicos Adaptado www.soils.wisc.edu/virtual_museum/index.html (Virtual Museum of Minerals and Molecules curadores: Barak, P.; Nater,E.; Stiles, C. acesso em setembro de 2005.

Estrutura supramolecular Piccolo e colaboradores (1996) sugeriram que as substncias hmicas consistem na associao de pequenas molculas orgnicas. Agregados ordenados de hmus no solo semelhante s membranas biolgicas bipolares envolvendo partculas minerais, como descrito no modelo de Wershaw, representou um salto no linear sobre a estrutura das SH. A introduo do conceito de agregao de partculas de diferentes tamanhos representou um contraste com a viso macromolecular tradicional. No entanto, a questo do tamanho da molcula continuou sem resposta com a adoo do modelo micelar.
48

A cromatografia por excluso de tamanho tem sido extensivamente aplicada s fraes humificadas para avaliar o tamanho molecular mdio de materiais hmicos (De Nobili et al ., 1989; Wershaw & Aiken, 1985). bem claro que a separao num gel no puramente uma separao por tamanho e um grande nmero de interferncias pode ocorrer, principalmente, a excluso inica e a adsoro. No primeiro processo, foras de repulso eletrosttica entre cargas negativas presentes, tanto nas substncias hmicas dissolvidas, como no gel de dextrano, provocam aumento da velocidade de separao cromatogrfica. No segundo processo, predominam as interaes hidrofbicas entre as substncias hmicas e a fase estacionria retardando a eluio (Lindquist, 1967). Assim, a fora inica da fase mvel usada no processo de separao deve ser suficientemente alta para prevenir interaes eletrostticas, mas no to altas (maiores do que 0,5 mol L-1) para induzir interaes hidrofbicas (Chicz & Regnier, 1990). Tanto a excluso inica (eletrosttica) ou a interao hidrofbica entre o gel e o soluto podem ser adequadamente reduzidas a valores desprezveis utilizando-se procedimentos simples como uso de tampo diludo. Piccolo (2002) props, a partir de dados obtidos de cromatografia por excluso de tamanho, um novo modelo para organizao estrutural das substncias hmicas. Seguese uma breve descrio dos experimentos que levaram ao conceito de arranjamento supraestrutural de compostos hmicos. O aumento da concentrao de substncias hmicas no gel de sephadex-100 em gua mostrou mudanas de picos da faixa de alta para baixa massa molecular (Swiff & Posner, 1971). Nesse experimento, foi descartada a possibilidade de uma retardao da eluio por interao hidrofbica e explicada qualitativamente como uma repulso entre as cargas negativas do sephadex e das substncias hmicas. Os autores assumiram que a repulso poderia ser mais forte com o decrscimo da concentrao de substncias hmicas com a reduo da fora inica contrariando os resultados obtidos. Usando a viso clssica (a do polieletrlito polimrico), foi postulado que a dupla camada carregada eletricamente sobre o soluto e o gel em soluo, resultaria numa molcula efetivamente maior e poros menores no gel. O efeito de repulso de cargas ocorre a longas distncias, levando ao aumento da excluso com o decrscimo da concentrao da amostra. No foi realizada nenhuma medida de densidade de cargas nas diferentes concentraes da amostra ou no gel para corroborar a hiptese. Apesar de poucos e inconclusivos experimentos com gel de excluso por tamanho, foi utilizado tampo de fora inica para suprimir esse efeito (De Nobili et al., 1989; Swift, 1989; Swift & Posner, 1971). A fora inica elevada do tampo reduz o volume das substncias hmicas em soluo favorecendo, termodinamicamente, a associao hidrofbica de molculas hmicas e, invariavelmente, produz cromatogramas com distribuio bimodal. Alm disso, tambm produz aumento na adsoro hidrofbica com a fase slida do gel. A adsoro de substncias hmicas nas colunas tem sido tradicionalmente explicada tanto pela salinidade como pela fora inica. Usando-se tampo fosfato (0,1 mol L-1) com uria (2 mol L-1) e variando o pH de 4,7 at 11,2, foi observado o aumento progressivo do tamanho molecular. A frao de maior tamanho foi obtida com pH 4,7, que apresentou, tambm, considervel quantidade de material hmico adsorvido. Em pH mais baixo foi atribudo um processo de agregao das molculas hmicas, mas foi utilizado o argumento do aumento da repulso eletrnica para a diminuio do tamanho da molcula hmica em pH mais elevado, desconsiderando que a fora inica elevada e a incluso da uria excluem os efeitos eletrostticos das condies experimentais. Hattori
49

(1987) mediu a tenso superficial das substncias hmicas e verificou diminuio com a utilizao de fosfato e uria e aumento com a concentrao da amostra, sugerindo que o aumento da agregao aumenta a atividade de superfcie. Das fraes estudadas, somente a de maior massa teve superfcie ativa, que foi a frao com maior nmero de cadeias alqulicas alifticas. As fraes com baixa atividade de superfcie apresentaram elevado contedo de grupos COOH. As diferentes fraes apresentaram comportamento qumico diferente e sua associao em fraes com superfcie ativa maior foi favorecida pelas foras atrativas dos compostos alifticos. Desta forma, compostos hidrofbicos tm capacidade de aumentar aparentemente o tamanho molecular e tambm produzir compostos mais estveis com o tempo. Piccolo et al. (1996), analisando estes resultados anteriores e empregando a cromatografia de excluso por tamanho para monitorar variaes cromatogrficas de solues alcalinas que foram levadas at pH 2,0 com adio de diferentes cidos orgnicos e inorgnicos, chegaram a uma nova concepo sobre a estrutura das substncias hmicas atravs da anlise da sua distribuio de massa. As condies experimentais foram previamente definidas com o objetivo de reduzir a adsoro de substncias hmicas e a repulso de cargas (tampo Borato: Na2B 4O 7 0,02 mol L-1 a pH 9,2) numa coluna comercial sem manipulao para preenchimento (Biorad P 100 Biogel, 5 100 Kda). Quando o controle com soluo alcalina de substncias hmicas foi cromatografado com o gel no tampo borato, a maioria do material hmico foi eluda com a maior massa molecular possvel. Ao contrrio, quando foram adicionados cidos orgnicos, o pico total de absorbncia foi mudado para volumes de eluio perto do volume total (vt) da coluna, sugerindo massa molecular mdia menor que 25 Kda. cidos minerais no tiveram qualquer efeito ou influncia sobre a performance cromatogrfica das substncias hmicas. A mudana progressiva de baixo para altos volumes foi tambm observada quando os valores de pH foram progressivamente mudados at valores menores com utilizao de cido actico sobre a coluna. O fenmeno foi reversvel (adio de KOH 0,5 mol L -1). O experimento est representado esquematicamente na Figura 2.8. A grande originalidade de Piccolo e colaboradores foi na interpretao desses resultados. Mais do que efeitos de repulso-adsoro, a variao cromatogrfica foi atribuda a um comportamento intrnseco das substncias hmicas. Esse comportamento reflete mais um arranjamento de associao molecular do que de um polmero e ocorrem evidentes mudanas conformacionais durante a cromatografia. O modelo tradicional de substncias hmicas baseado na concepo polimrica macromolecular criticou fortemente os trabalhos de Piccolo resumidos acima (Swift, 1999). No entanto, tais crticas no foram baseadas na reproduo do experimento e sim em bases tericas e na interpretao qualitativa das interaes gel-soluto. Os experimentos foram qualitativamente reproduzidos por Faanha et al. (2002) que, usando sephadex G-200, observaram mudanas no perfil cromatogrfico de cidos hmicos isolados de vermicomposto utilizando-se a exsudao direta de cidos orgnicos pelas plantas numa soluo de cidos hmicos. Os resultados de Piccolo et al. (1996) no podem ser atribudos ao do tampo do cido orgnico e o eluente alcalino porque a quantidade dos diferentes cidos orgnicos variaram 2 ordens de magnitude mas no mudaram a quantidade de volume eludo que permaneceu o mesmo para todos os cidos. O atraso observado na eluio no pode ser atribudo deposio de slidos sobre o gel e subseqente resolubilizao pelo eluente, pois as amostras tratadas permaneceram solveis a baixo pH e foram imediatamente eludas depois da colocao na coluna. No obstante, se isso fosse o caso, a neutralizao
50

progressiva da capacidade de tamponamento do cido pelo eluente alcalino teria causado um recobrimento por fora da coluna numa mistura polidispersa de material hmico e uma banda difusa do menor para o maior volume deveria ser observado (o que no ocorreu, Figura 2.8). Alm disso, o efeito da fora inica no pode ser invocado para justificar a mudana reversvel do pico mostrado na Figura 2.7 porque a eluio numa fora inica como a do tampo borato ou dez vezes mais concentrada produziu a mesmo efeito tanto com adio de cido actico ou KOH. Piccolo et al. (1996), Cozzolino et al. (2001) e Piccolo (2002) consideraram esses resultados como a expresso da natureza associativa das substncias hmicas que se agregam para formar uma estrutura de massa molecular aparentemente elevada. Essa interpretao est de acordo com os resultados prvios que demonstraram o comportamento de associao molecular. Alm disso, observaes de laboratrio tm indicado que, mesmo aps a dilise exaustiva de substncias hmicas , a adio de cidos orgnicos promove a liberao de pequenas molculas (Nardi et al., 1988). Essa frao de baixa massa ou tamanho molecular foram considerdas como produtos de um rearranjamento conformacional e de composio qumica diferente das substncias hmicas.

Figura 2.8. Cromatogramas de excluso por tamanho a baixa presso de cidos hmicos tratados com cido actico e eludos com Na4B2O7 0,02 M a pH 9,2 (I) e com Na4B2O7 0,1 M a pH 9,2 (II). Os cidos hmicos foram tratados antes da eluio como se segue: (A)dissolvido a pH 11,8, (B) titulado com cido actico at pH 6, (C) pH 4,5 (D) pH 3,5, (E) pH 2,0; (F) o material foi levado de pH 2 at 3,5 com KOH, (G) at pH 4,5, (H) at pH 6,0 e (I) at pH 8,5. (J) O ltimo material (pH 8,5) foi seco para eliminar o resduo de cido actico. Adaptado de Piccolo (2002).
51

A grande crtica ao trabalho de Piccolo (1996) a falta de reprodutibilidade que a cromatografia de excluso de tamanho a baixa presso tem. uma condio intrnseca do mtodo. Os dados s podem ser repetidos qualitativamente. Para o aumento da reprodutibilidade Conte & Piccolo (1999) usaram a cromatografia por excluso de tamanho a alta presso. Os resultados anteriores foram obtidos novamente. A luz do modelo micelar, Piccolo et al. (1996) postularam que cidos orgnicos podem penetrar dentro do ncleo hidrofbico da micela enquanto neutralizam as funes cidas com o decrscimo do pH at 2,0. A associao entre os cidos orgnicos e as substncias hmicas podem ocorrer em funo das propriedades anfiflicas dos cidos que, por sua vez, podem reagir tanto com o domnio hidroflico como com o hidrofbico das substncias hmicas. Tais interaes so capazes de romper ligaes fracas que estabilizam a conformao e, conseqentemente, a eluio cromatogrfica separa pequenas unidades do agregado e previne o reagregao que deve ocorrer em condies estticas. Uma viso simplificada do modelo de Piccolo apresentada na Figura 2.9. As evidncias experimentais inequvocas do modelo de estrutura para as susbtncias hmicas foram obtidas por Simpsom (2002) que, usando tcnicas avanadas de ressonncia magntica nuclear (RMN) bidimensionais e com difuso de campo, observaram a variao dos agregados hmicos com a adio de cidos orgnicos diretamente na soluo sem o fracionamento cromatogrfico. Detalhes desse experimento podem ser vistos no captulo 7 sobre RMN. O modelo de arranjamento supraestrutural de substncias hmicas especialmente til para descrever o comportamento ambiental as substncias hmicas bem como os efeitos que elas exercem sobre os organismos vivos, mais precisamente sobre a ao no metabolismo e na bioqumica das plantas. Considerados como um macropolmero ou como uma micela, as susbtncias hmicas apresentam um comportamento coloidal pouco compatvel com a elevada estimulo em sistemas enzimticos e inclusive induo de genes em plantas (Canellas et al., 2002; Quaggiotti et al., 2004). A interao planta-microrganismo pode alterar a estrutura e a conformao das substncias hmicas e pequenas unidades portadoras de bioatividade podem estimular o crescimento e o metabolismo dos organismos. Esse tpico ser abordado adiante com mais detalhas. Por hora, possvel que cada modelo ou interpretao sobre a concepo de estrutura

cidos orgnicos rompimento da estrutura dos cidos hmicos e s t r u t u r a macromolecular

Figura 2.9. Representao esquemtica do modelo supra-estrutural para cidos hmicos concebido por Piccolo (1997)
52

das substncias hmicas se ajuste descrio de um determinado tipo de comportamento qumico e bioqumico. Assim, provavelmente a natureza da estrutura das substncias hmicas no seja do tipo substantiva (no sentido que G. Bachelar, 1996, emprega para o conhecimento), ou seja, uma substncia hmica no , mas est de acordo com o meio em que ela se encontra ou com a vontade do pesquisador. O que queremos dizer que, como fruto de um processo ecolgico complexo, as substncias hmicas no podem ser particularizadas em modelos estruturais discretos, muito embora o uso dos modelos possa colaborar para o estudo da sua funo no ambiente. um problema complexo e, como tal, o debate sobre a estrutura das substncias hmicas e sua relao com a funo desempenhada durar, quem sabe, mais algumas centenas de anos...

53

c a p t u l o

Fracionamento da matria orgnica humificada de solos brasileiros

Tony J. Ferreira Cunha Luciano P. Canellas Gabriel de A. Santos Lucedino P. Ribeiro

A pergunta que, geralmente, feita no primeiro dia do curso sobre matria orgnica : qual o contedo ideal de matria orgnica no solo? A resposta quase sempre frustra o aluno. Nos solos tropicais intemperizados, bem drenados, o contedo de carbono raramente excede 5 % da massa de solo, com valores da mediana em torno de 1%. Mesmo fazendo parte da menor frao slida do solo, suas caractersticas imprimem e ao mesmo tempo refletem as suas propriedades. Foram reunidas aqui as experincias com fracionamento da matria orgnica em alguns solos brasileiros obtidos de artigos publicados, principalmente, na Pesquisa Agropecuria Brasileira e na Revista Brasileira de Cincia do Solo. Como h uma pletora de mtodos de fracionamento, a comparao entre os resultados requer cautela por parte do leitor. Realizaram-se anlises qualitativas sobre a distribuio das fraes humificadas e suas relaes com aspectos de fertilidade do solo. No incio da unidade so tecidos alguns comentrios sobre o uso da matria orgnica como base da fertilidade do solo e da produo da agricultura familiar e os princpios da transformao dos resduos orgnicos adicionados ao solo. Ao final, realizada de forma muito sucinta uma anlise sobre recuperao de teores de matria orgnica com adio de resduos orgnicos. Introduo O contedo de matria orgnica controlado pelos fatores de formao do solo. O clima, o material de origem, o relevo, a atividade biolgica e o tempo condicionam o balano de carbono em sistemas naturais no perturbados. Com o cultivo, ou seja, a perturbao do equilbrio dinmico, as condies para oxidao da matria orgnica so favorecidas e um novo estado de equilbrio alcanado. Porm, geralmente, com menor contedo de matria orgnica no sistema. O direcionamento do fluxo de energia e de matria proveniente da fotossntese para obteno de produtos agrcolas com valor de mercado provoca uma simplificao do ecossistema, reduzindo ao mnimo, com a monocultura, a diversidade de organismos e suas interrelaes. Essa simplificao diminui a qualidade do ambiente. Doran & Parkin (1994) consideraram a qualidade do solo como a capacidade do mesmo em funcionar
54

dentro dos limites de um ecossistema natural ou manejado, a fim de sustentar a produtividade biolgica, manter ou aumentar a qualidade ambiental e promover a sade das plantas e dos animais. Essa conceituao traz implcita uma contradio: manejar um sistema natural alterar sua qualidade ambiental, ou seja, aspectos econmicos (e.g. produo agrcola) so incompatveis com a preservao do ambiente (aspectos ecolgicos). Esse choque de interesses orienta a questo do debate sobre um desenvolvimento sustentado com srias limitaes ou at impossveis dentro dos marcos da economia neoliberal. Um aprofundamento dessa questo ser visto mais adiante no captulo 11 sobre manejo da matria orgnica sob a perspectiva Agroecolgica. Transformao dos resduos orgnicos no solo

Em clima mido e quente os resduos vegetais que chegam ao solo so rapidamente transformados (Dabin, 1981), podendo sofrer seqestro imediato pela frao mineral ou transformao atravs de processos bioqumicos de natureza no clara que levam at a sua estabilizao. Atravs da anlise da matria orgnica de diferentes regies de clima tropical e subtropical do Brasil, Volkoff & Cerri (1988) postularam que os principais fatores que controlam a formao do hmus (tanto hmus como matria orgnica sero utilizados daqui para frente como sinnimos da frao de compostos orgnicos do solo formados pelas substncias hmicas e no-hmicas) so a temperatura, presena ou ausncia de bases e drenagem, ou seja, os fatores que mais influenciam a atividade biolgica. Indicam, ainda, que a presena de bases tem um efeito mais importante do que os outros fatores. Na ausncia de bases, a diferenciao feita, antes de tudo, em funo da drenagem e, em condies bem drenadas, a humificao controlada pelas mudanas de temperatura. Se uma mudana relativa desses fatores altera as fraes que compem a matria orgnica, parece bvio que o estudo das relaes entre as fraes refletiro a intensidade da atividade biolgica sobre o solo. Como o processo de formao da matria orgnica lento, flutuaes no contedo relativo de suas fraes expressam mudanas efetivas de curso duradouro. Em outras palavras, um indicador estvel, conservador. Somente mudanas significativas no sistema em estudo sero refletidas na distribuio dos componentes humificados da matria orgnica. O contedo de matria orgnica foi definido por Kononova (1968) como o produto do balano entre as quantidades relativas formadas e decompostas anualmente somadas ao hmus inicial do solo. Essa reserva de compostos orgnicos reflete, principalmente, o balano entre a produo de biomassa microbiana, a estabilizao dos resduos orgnicos oriundos de plantas e animais e a mineralizao dos compostos orgnicos. A composio qumica dos resduos vegetais, principais precursores da matria orgnica humificada, bastante conhecida. C, H, O, N, P e S compem os tecidos, celulose, hemicelulose, protenas, amido, pectinas, taninos, ligninas e lipdeos totalizam entre 10 a 25% da massa vegetal. Desses constituintes, os principais so a celulose e a hemicelulose (30-65%), as ligninas (8-25%), as protenas e aminocidos (1-5%) que, de acordo com sua distribuio relativa, grau de maturidade, natureza dos tecidos incorporados e atuao dos fatores de clima e solo controlam a velocidade de converso dos compostos de carbono
55

dos resduos da fitomassa para matria orgnica humificada. O coeficiente de humificao dos materiais orgnicos (frao remanescente aps um ano de decomposio) varia com a composio qumica da planta, sendo, via de regra, maior quanto mais elevado o teor de lignina do material, devido sua maior resistncia ao ataque microbiano (Flaig, 1988). A Figura 3.1 mostra os principais constituintes dos vegetais que, ao chegarem ao solo, serviro como substrato para a atividade microbiana e como precursores do processo ecolgico da humificao. A decomposio dos resduos vegetais e animais compreende, em termos tericos, uma fase inicial de perdas constantes e bastante rpidas, preferencialmente de carboidratos. Uma fase posterior corresponde ao perodo de perdas mais lentas dominado pela degradao de compostos insolveis em meio cido. Em termos mdios, as taxas de humificao do carbono fixado pela fotossntese so da ordem de 0,7% (Zech et al., 1997). Nem toda a massa remanescente dos processos de decomposio convertida em hmus e nem todas as substncias hmicas recentemente formadas so retidas no solo. Uma taxa de estabilizao to baixa de carbono no solo comparada s reservas totais de hmus de solos do mundo inteiro (estimadas em 2,5 x 1012 Mg) levou Kononova (1982) a constatar que aproximadamente 1000 anos foram necessrios para a formao dessas reservas. Apesar da grande variabilidade intrnseca dos mtodos de datao de carbono, os valores obtidos para substncias hmicas indicam um tempo mdio algo entre 250-1000 anos. Para ambientes tropicais, esse tempo tende a ser menor. Por exemplo, a partir de dados de delta C13 foi estimada uma taxa de renovao de cidos hmicos de cerca de 13 anos (Canellas et al., 2002b). Alm da relativa estabilizao do hmus, observada a longa durao dos processos de sua formao. A chave dessa questo : em qumica do solo, a avaliao de caractersticas (atributos do solo) requer que o sistema esteja em equilbrio, o que impossvel num sistema aberto como o solo e dependente de tempos geolgicos. A anlise da qualidade do solo a partir de atributos e propriedades qumicas da matria orgnica do solo ser o resultado do processo de sua formao e das mudanas proporcionadas pelo manejo (ou os tratamentos de um experimento) que tero pouca influncia sobre a distribuio relativa dos componentes humificados num perodo curto de tempo. Alteraes na natureza qumica das fraes humificadas implicaro, portanto, mudanas marcantes nas condies ecolgicas e aponta para uma interveno imediata no sentido de se assegurar a qualidade da matria orgnica. Apesar da matria orgnica humificada no solo apresentar-se como um continuum indissocivel de compostos de carbono que vo desde os encontrados em clulas vivas at biomacromolculas pouco ou muito transformadas, possvel separar distintas fraes com base em aspectos qumicos, tais como, solubilidade, densidade e massa molar. As diferentes fraes de carbono orgnico humificado extrado do solo apresentam caractersticas qumicas, fsicas e morfolgicas diferenciadas, e a distribuio destas fraes no solo podem indicar, portanto, a qualidade da matria orgnica. O uso da distribuio relativa das fraes de matria orgnica, como indicador da mudana de manejo do solo ou da qualidade do ambiente, encontra respaldo nos trabalhos de Kononova (1982), Schnitzer & Khan (1978) e Schnitzer (1991).

56

CH(CH2OH) CH

CH2 OH H H OH H O H H OH H O

H OH

OH H H O O
CH(CH2OH) CH CH
OH

CH

A
CH 2OH OC H3 O CH CH

B
CH(CH2OH) CH CH

CH2 OH

OH O OH O
O O

O OH O
O

OH
O

CH3O
OC H3 O CH 2OH CH CH OHCH2 CH CH O

OH

CH3O
O

OH COOH H2CO OH OH
O

CH2O H OH

O OH

CH 2O O CH CH OHCH2 C CH O OC H3 O

CH 2O O

OH OH F OH A H OH O C H OH OH B R

O C O CH 2 (CH2 ) 5 CH (C H2 )5 C O C O

O O CH 2 (C H2 )5 O

(C H2 )8 CH OH

(C H2 )5 CH 2

(C H2 )8 CH OH (C H2 )5 CH 2 O C O (C H2 )14 CH 2

CH OC (CH 2 )14 (C H2 )8 O

OH B OH A H OH O C H OH R
O C O (C H2 )8 CH O C CH CH O

(C H2 )5 CH 2 O

C O

(C H2 )8 (C H2 )14 (C H2 )5 (CH2 )O

Figura 3.1. A: Monmeros de celulose e de hemicelulose. Rede de microfibrilas responsveis pela sustentao da parede celular vegetal. B: Representao esquemtica de uma lignina e suas principais C: Representao esquemtica dos monmeros dos taninos (genericamente conhecidos como os polifenis do solo). D:. Esquema representativo de lipdeos presentes nos tecidos vegetais. Todas as figuras foram adaptadas de Kogel-Knaber, I. Soil Biology & Biochemistry, 34: 139-162, 2002.

A formao das substncias hmicas caracterizada por um processo complexo baseado na sntese e/ou ressntese dos produtos da mineralizao dos compostos orgnicos que chegam ao solo. possvel, teoricamente, simplificar os vrios caminhos da humificao em dois mecanismos: a preservao seletiva de biopolmeros e a policondensao de molculas pequenas (Camargo et al., 1999). Essas transformaes incluem um conjunto de reaes de oxidao, desidratao, hidrlise, descarboxilao e condensao que so influenciadas pelas condies do solo, tais como, tipo de argila, pH e teor de bases (Zech et al., 1997). Assumindo qualquer das vrias possibilidades para o processo de estabilizao
57

dos compostos orgnicos no solo, os cidos hmicos representam a frao intermediria entre a estabilizao dos compostos pela interao com a matria mineral e a ocorrncia de cidos orgnicos oxidados livres na soluo do solo (cidos flvicos livres ou associados). Os cidos hmicos so, portanto, um marcador da direo do processo de humificao e refletem, como tal, tanto a condio de gnese, como de manejo do solo. Solos de ambientes temperados, naturalmente frteis, apresentam teores relativos maiores de cidos hmicos e valores da relao CAH/CAF maiores que 1,0 (Kononova, 1982). J a frao orgnica dos solos tropicais dominada pelas huminas e, tanto a intensa mineralizao dos resduos, como restries edficas atividade biolgica, torna os valores da relao CAH/CAF menores do que 1,0 (Dabin, 1981; Ortega, 1982; Canellas et al., 2000). De acordo com Kononova (1982), a faixa dos valores da relao CAH/CAF para solos temperados varia de 0,7 a 2,5. Para solos tropicais, os valores mdios so mais baixos (Ortega, 1982). De uma forma geral, o baixo contedo de bases trocveis nos solos mais intemperizados diminui a intensidade dos processos de humificao (condensao e sntese). Em conseqncia, a relao CAH/CAF menor. Fracionamento qumico da matria orgnica humificada A Tabela 3.1. apresenta uma possibilidade de interpretao dos dados obtidos a partir do fracionamento qumico da matria orgnica. Note que a interpretao sempre relativa. Isso denota a importncia da contextualizao do estudo da matria orgnica do solo.
Tabela 3.1. Proposta de Interpretao do fracionamento qumico da matria orgnica do solo de acordo com Labrador Moreno (1996). ndice Avaliao um indicador de condensao da matria orgnica solvel. Valores normais superiores a 1. Valores inferiores podem indicar: evoluo limitada da matria orgnica devido a razes edficas ou de manejo; aportes recentes de matria orgnica. Indica a estabilidade estrutural da matria orgnica. Quanto mais elevado o valor melhor; avaliar mais sua evoluo do que os valores absolutos. Avalia o grau de humificao da matria orgnica do solo. Valores normais entre 65 e 92%. Valores inferiores podem indicar: resduos orgnicos recm adicionados ao solo que ainda no tiveram tempo para evoluir; Valores superiores indicam solos empobrecidos sem aportes de matria orgnica.

CAH/CAF

CHUM/(CAH+CAF)

CAH+CAF+CH/CTOTAL

difcil recomendar um valor absoluto de C no solo como sendo o valor ideal, bem como uma concentrao de C em cada uma das fraes humificadas. preciso conhecer o ambiente original, a cultura e o grau de impacto que o agricultor proporciona no ambiente agrcola decorrente de sua necessria atividade. A pesquisa sobre matria orgnica no pode, portanto, perder seu nexo com a histria do ambiente estudado que envolve, alm das questes ambientais de clima, aspectos sociais e econmicos. A maioria dos trabalhos realizados diz respeito a solo e de resduos orgnicos em pases de clima frio. O levantamento sistemtico dos diversos trabalhos realizados com fracionamento da matria orgnica na zona tropical asitica, africana e americana ainda est para ser feito. Segue uma reviso de alguns dos trabalhos realizados com solos brasileiros.
58

Fracionamento qumico da matria orgnica humificada em alguns tipos de solos do Brasil Para elaborao deste tpico foram revisados diversos trabalhos realizados no Brasil sobre fracionamento das substncias hmicas. Muitos trabalhos no puderam ser utilizados para o clculo mdio da distribuio das fraes hmicas por classe de solo, uma vez que os dados foram apresentados em grficos. Outros apresentavam os dados do fracionamento, porm no faziam referncias aos dados qumicos do solo. Alm disso, os trabalhos no seguem uma metodologia padronizada de fracionamento dificultando a anlise dos mesmos. Como se v, limitaes de ordem metodolgica impedem um detalhamento quantitativo mais apurado. No entanto, a anlise qualitativa pode ser realizada sem grandes riscos. Foram coletadas informaes dos diferentes horizontes A analisados em 99 perfis de solo. Essas informaes foram agrupadas nas principais classes de solos, quando possvel, ou em funo do ambiente (hidromrfico ou no, etc.). Dos trabalhos que no apresentaram informaes quantitativas foram coletadas informaes qualitativas com vista ao enriquecimento do presente texto. As fontes de informaes, as diferentes classes de solos estudadas, o mtodo de extrao utilizado e os respectivos contedos de cada frao hmica, podem ser visualizados na Tabela 3.2. Matria orgnica humificada nas principais classes de solos do Brasil Latossolos Os Latossolos so os solos mais representativos da cobertura pedolgica no Brasil, abrangendo cerca de 40% do territrio brasileiro. Diversos estudos foram realizados com vistas ao entendimento e conhecimento da dinmica das fraes hmicas nestes solos em diferentes regies bioclimticas do Brasil. A composio da matria orgnica do horizonte superficial de Latossolos Amarelos licos de textura argilosa a muito argilosa em diferentes regies bioclimticas do Brasil foi estudada por Longo (1982). Os Latossolos da regio de Viosa-MG e do Vale do Jequitinhonha apresentaram teores maiores de cidos hmicos do que o Latossolo da regio Amaznica que apresentou maior teor de cidos flvicos em relao aos demais solos estudados. O autor atribuiu esse resultado ao ciclo mais rpido de mineralizao da matria orgnica em solos sob clima quente e mido como os da Amaznia. Alm disso, a ausncia de contrastes climticos suficientes podem impedir a polimerizao dos precursores hmicos e sua converso em compostos de massa molecular aparentemente mais elevada (Andreux & Becerra, 1975).
Tabela 3.2. Principais classes de solos estudadas, fraes hmicas em % relativa do carbono total, autores e mtodo utilizado na extrao e fracionamento.
Solo Hor. AH AF H AH/AF 3,1 0,3 1,1 0,4 0,8 0,9 SHS/H 0,42 0,39 0,35 0,42 0,43 0,45 Cunha (1998) Dabin Autor Mtodo

----------% do C-------Cambissolo Cambissolo Cambissolo Cambissolo Cambissolo Cambissolo A1 A1 A1 Ap Ap A1 19,6 5,22 12,53 7,18 12,03 13,27 6,36 16,62 11,16 18,77 15,41 15,36 62,39 55,69 67,09 62,45 63,27 63,77

59

Tabela 3.2. Principais classes de solos estudadas, fraes hmicas em % relativa do carbono total, autores e mtodo utilizado na extrao e fracionamento (continuao) Solo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Planossolo Gleissolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Organossolo Organossolo Gleissolo Gleissolo Terra preta Terra preta Terra preta Latossolo Latossolo Gleissolo Neossolo Plintossolo Alissolo Plintossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Cambissolo Cambissolo Cambissolo Cambissolo Hor. A A A A A A A1 A1 A1 A1 A1 Ap Ap Ap Ap Hp Hp Ap Ap A A A A A A A A A A A1 A1 A1 A1 A A A Ap Ap Ap Ap AH 14,3 8,8 9,6 8,7 10,5 12,7 15,9 18,8 13,5 13,99 0,85 0,72 0,3 0,41 0,88 33,2 27,5 42,7 29,6 39,89 34,1 29,74 11,02 20,27 4,81 11,34 18,75 10,16 24,76 1,61 0,37 2,11 16,29 5,27 10,46 6,67 4,29 2,74 2,12 1,78 AF 24,0 33,8 32,7 32,6 31,4 28,5 11,8 14,7 19,6 15,43 2,3 2,7 2,1 2 2,6 39,4 12,8 36,8 45,2 9,28 9,53 1,98 30,14 23,64 18,07 13,4 20,13 15,25 14,76 2,64 3,85 5,9 11,68 20,43 25,58 17,03 4,56 6,47 3,81 3,3 H 61,7 57,4 57,7 58,7 58,1 58,8 61 56,5 58,3 67,35 7,6 6,5 5,8 5,2 7,2 27,4 59,7 20,5 25,2 39,34 56,35 56,94 54,41 58,1 67,46 70,1 56,25 73,3 49,52 5,07 4,87 9,49 18,78 73,62 64,34 76,29 56,93 69,68 38,24 32,65 AH/AF 0,6 0,3 0,3 0,3 0,3 0,4 1,3 1,3 1,3 0,7 0,9 0,4 0,3 0,1 0,2 0,3 0,8 2,1 1,2 0,7 4,3 3,6 15,0 0,4 0,9 0,3 0,8 0,9 0,7 1,7 0,6 0,1 0,4 1,4 0,3 0,4 0,4 0,9 0,4 0,6 SHS/H 0,62 0,74 0,73 0,70 0,72 0,70 0,45 0,59 0,66 Manzatto 0,57 0,44 0,41 0,53 0,41 0,46 0,48 2,65 0,68 3,88 2,97 1,25 0,77 0,56 0,76 0,76 0,34 0,35 0,69 0,35 0,80 0,84 0,87 0,84 Melo 1,49 0,33 0,56 0,31 0,16 0,13 0,16 (1994) Longo (2000) Canellas (2003) Kononova Dabin Schnitzer Volkoff (1976) Dabin Lima (2001) IHSS Conceio (1989) Dabin (1990) Borges (1993) Dabin Dabin Santa Isabel (1988) Dabin Autor Coelho (1991) Mtodo Kononova

60

Tabela 3.2. Principais classes de solos estudadas, fraes hmicas em % relativa do carbono total, autores e mtodo utilizado na extrao e fracionamento (continuao) Solo Latossolo Latossolo Latossolo Argissolo Argissolo Argissolo Planossolo Planossolo Glei Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Terra preta Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Plintossolo Planossolo Argissolo Argissolo Chernossolo Planossolo Luvissolo Luvissolo Hor. A1 A1 Ap Ap Ap Ap A1 A1 Ap Au Au Au Au Au Au Ap Ap Ap Ap Ap Ap Ap Ap Ap Ap Ap Ap A A A A A1 Ap Ap AP Ap Ap Ap Ap AH 10,2 14,3 4,99 0,42 0,29 0,47 2,9 2,78 0,61 25 31 31 35 35 29 26 40 26 45 46 37 25 41 28 26 28 18 22 16 19 25 21 21 16 11 15 17 14 11 AF 12,8 9 41,26 1,48 2,07 3,61 3,65 2,19 2,88 10 21 22 9 13 13 10 11 16 11 17 15 11 8 11 11 8 16 20 21 8 10 36 29 25 24 17 30 23 27 H 65,4 63,5 37,02 52,33 71,43 48,78 39,76 29,91 33,4 51 52 33 41 41 52 49 42 46 41 31 56 61 31 41 43 39 51 43 55 48 51 46 44 46 55 59 61 54 53 AH/AF 0,5 0,8 1,6 0,1 0,3 0,1 0,1 0,8 1,3 0,2 2,5 1,5 1,4 3,9 2,7 2,2 2,6 3,6 1,6 4,1 2,7 2,5 2,3 5,1 2,5 4,7 3,5 1,1 1,1 0,8 2,4 0,6 0,7 0,6 0,5 0,9 0,6 0,6 0,4 SHS/H 0,16 0,35 0,37 1,25 0,04 0,03 0,08 0,16 0,17 0,10 0,69 1,00 1,61 1,07 1,17 0,81 0,73 1,21 0,91 1,37 2,03 0,93 0,59 1,58 0,95 0,85 0,92 0,67 0,98 0,67 0,56 1,24 1,14 0,89 0,64 0,54 0,77 0,69 0,72 Benites (2000) IHSS Cunha (2005) IHSS Autor Cunha (2003) Oliveira (1990) Canellas (2004) Kononova Dabin Mtodo Dabin

61

Tabela 3.2. Principais classes de solos estudadas, fraes hmicas em % relativa do carbono total, autores e mtodo utilizado na extrao e fracionamento (continuao) Solo Neossolo Argissolo Luvissolo Latossolo Latossolo Latossolo Latossolo Cambissolo Nitossolo Nitossolo Latossolo Argissolo Hor. Ap Ap Ap Ap Ap A1 A1 A A1 Ap Ap A AH 16 19 11 12 14 15 12 16 13 11 12 19 AF 24 33 28 35 31 28 41 25 35 34 37 26 H 41 58 56 43 51 47 45 50 46 54 49 43 AH/AF SHS/H 0,7 0,6 0,4 0,3 0,5 0,5 0,3 0,6 0,4 0,3 0,3 0,7 0,98 0,90 0,70 1,09 0,88 0,91 1,18 0,82 1,04 0,83 1,00 1,05 Autor Benites (2000) Mtodo IHSS

AH: cidos hmico; AF: cido flvico; H: humina; AH/AF: razo cido hmico/cido flvico; SHS/H: substncias hmicas solveis/humina;

Estes fatores devem contribuir para que a velocidade de condensao dos precursores hmicos ocorra de forma menos acentuada nos Latossolos da regio Amaznica. A relao AH/AF foi de 1,02, para os Latossolos da regio de Viosa (clima temperado chuvoso mesotrmico) e Vale do Jequitinhonha (clima contrastado em estaes secas e midas) e de 0,66 para os Latossolos da Amaznia (clima mido). Somente para o Latossolo de Viosa foi realizado o estudo em profundidade e foi observado aumento da frao cidos flvicos com a mesma, onde a relao AH/AF diminuiu de 1,02 no horizonte superficial para 0,31 em subsuperfcie. Comparando a composio do hmus de Latossolos Amarelos na Amaznia, sob diferentes coberturas vegetais (capoeira jovem, sob floresta primria e sob capoeira de 35 anos) Manarino et al. (1982), concluram que a matria orgnica humificada do solo sob capoeira jovem se distingue nitidamente daquele do solo sob floresta. Sob capoeira de 35 o fracionamento apresentou resultados muito prximos ao obtido na floresta. Na Amaznia, a maior parte do carbono constituinte da matria orgnica humificada do solo sob floresta natural encontra-se na forma de cidos flvicos livres (30%) e humina (50%). O restante (20%) distribui-se nas fraes alcalino-solveis (cidos hmicos e flvicos ligados), Manarino et al., (1982). De modo geral, foi verificado que, em profundidade, ocorre aumento dos cidos flvicos livres, mas a frao humina manteve-se praticamente constante ao longo do perfil. J as fraes alcalino-solveis diminuram em profundidade. Tanto na serrapilheira como no solo, a razo AH/AF correlacionou-se com os teores de H + e Al+++, ou seja, tanto a serrapilheira como o solo com maior contedo de cidos hmicos so mais cidos. Para os autores, o desmatamento, mesmo seguido por cultura de curta durao, provoca importantes mudanas na dinmica do carbono, resultando numa distribuio diferente do carbono no perfil do solo, numa modificao das caractersticas da matria
62

orgnica humificada e no aumento da acidez do solo. Neste caso, o novo estado hmico no permanente, sendo a matria orgnica possuidora de caractersticas de agente desestabilizador. pouco condensada e cida e se o solo desmatado for mantido sob cultura contnua, seria necessrio limitar a acidificao e a lixiviao utilizando-se plantas de cobertura apropriada. Em Latossolos distrficos da Floresta Amaznica na regio do rio Madeira, Volkoff & Cerri (1981) verificaram que a matria orgnica humificada do horizonte A foi diferente daquela encontrada em profundidade. No horizonte A foi observada a seguinte composio: 50% de carbono na humina, 15% nos cidos flvicos livres e 35% nos alcalino-solveis. J o horizonte B o hmus apresentou: 40% de carbono na forma de humina, 40% nos cidos flvicos livres e 20% nos alcalino-solveis. Nestes solos tanto no horizonte A como no horizonte B a frao alcalino-solvel foi constituda por propores elevadas de cidos flvicos. Apesar dos autores no terem apresentado a razo AH/AF ao longo dos perfis, ficou claro que a frao cidos flvicos foi a dominante em relao frao cidos hmicos ao longo de todo o perfil de solo. A fraca condensao e a rpida renovao so as caractersticas da matria orgnica humificada na superfcie do solo diretamente relacionada com a dinmica da floresta (Volkoff & Cerri. 1981). De modo geral, em solos ferralticos tpicos de clima tropical mido, verifica-se uma dominncia importante dos cidos flvicos sobre os cidos hmicos e a relao AH/AF diminui medida que aumenta a profundidade (Dabin, 1981). Comportamento bastante diferente observado nas fraes hmicas de Latossolos possuidores de horizonte A antrpico (Terra Preta de ndio), quando comparados a outros Latossolos no antropognicos (Cunha, 2005). O horizonte A antrpico bastante enriquecido em bases trocveis, principalmente Ca++, apresenta pH em torno de 6,5, teor elevado de matria orgnica e portanto, elevada fertilidade qumica. O contedo elevado de carbono nos solos antropognicos, mesmo localizados em ambientes favorveis decomposio e lixiviao, pode ser atribudo formao de complexos de alta estabilidade matria orgnica-clcio, ou ainda, prpria composio da matria orgnica rica em carbono pirognico (carvo) adicionado ao solo pela atividade dos povos indgenas pr-colombianos. Um estudo sistemtico deste solo poder indicar o caminho para uma agricultura sustentvel nos trpicos midos e quentes. Uma forte indicao j pode, no entanto, ser obtida com o fracionamento qumico da matria orgnica. A maior parte das substncias hmicas destes solos constituda pela frao humina, sendo a frao cidos hmicos a dominante das fraes alcalino-solveis. A frao cidos hmicos nos solos antropognicos encontra-se num estdio mais avanado de humificao, devido maior concentrao de estruturas estveis (aromticas) e reativas (grupos carboxlicos). Na Tabela 3.3 pode-se observar o maior enriquecimento em cidos hmicos nos Latossolos antropognicos comparados com outros Latossolos do Brasil. Verifica-se tambm um grande predomnio da frao cidos flvicos em relao frao cidos hmicos e uma dominncia da frao humina nos Latossolos no antropognicos. O predomnio da frao cidos hmicos sobre a frao cidos flvicos nos solos antropognicos, ao contrrio do que se observa nos demais solos de terra firme e vrzea da Amaznia, pode ser o resultado de intensa humificao e rpida mineralizao de grandes quantidades de material orgnico rico em N, P, e Ca incorporados ao solo (Zech et al., 1990).
63

Tabela 3.3. distribuio percentual das fraes humificadas em relao ao carbono total de alguns solos brasileiros

Tipo de solo Latossolos Terra Preta do ndio Argissolos Cambissolos Neossolos Organossolos Planossolos Plintossolos Gleissolos Mdia (excluda as terras pretas)
H: humina; AF: cidos flvicos; AH: cidos hmicos

H 44 45 57 57 70 43 43 53 43 51

AF AH % do carbono total 17 10 12 33 10 4 10 8 13 11 26 30 8 6 17 21 24 18 16 13

AH/AF 0,60 2,75 0,40 0,80 0,85 1,16 0,75 1,25 0,77 0,82

Em Latossolos antropognicos sob mata, a frao cidos hmicos foi dominante no horizonte A antrpico e quando sob uso agrcola foi dominante em todo o perfil do solo, inclusive no horizonte Bw, em relao frao cidos flvicos (Figura 3.2). Neste caso, o cultivo favorece a oxidao de fraes humicas menos evoludas e o acmulo relativo de fraes mais estveis (cidos hmicos e humina). Em relao a Latossolos sob cerrado, Volkoff & Cerri (1988), verificaram que a matria orgnica humificada foi composta de aproximadamente 50% de humina e que as fraes alcalino-solveis predominavam sobre os cidos flvicos livres. Em profundidade, a proporo de humina permaneceu constante e a frao cidos flvicos livres predominou sobre as fraes alcalino-solveis. A razo AH/ AF nestes solos foi igual ou inferior a 1, indicando a predominncia de fraes menos evoludas, estando estas relacionadas reao cida dos solos sob cerrado. Em Latossolos em regio semi-rida, Santa-Isabel (1988), verificou que a matria orgnica humificada foi caracterizada pelo enriquecimento em huminas (mais de 60% do carbono total) e que a frao alcalino-solvel foi constituda, principalmente, por compostos orgnicos pouco condensados (cidos flvicos precursores, cidos hmicos marrons e provavelmente cidos hidrossolveis). Ocorre naturalmente uma concentrao maior de cidos hmicos em superfcie (razo AH/AF = 1,35) e diminuio em profundidade (razo AH/AF = 0,27). A maior atividade biolgica em superfcie junto com o maior aporte de resduos orgnicos concorre para a formao de substncias hmicas alcalino solveis mais condensadas.

Figura 3.2. Distribuio das fraes hmicas em perfis de Latossolos Antrpicos da Amaznia, (Cunha, 2005).
64

Em Latossolos Amarelos coesos distrficos de tabuleiro na regio do Recncavo Baiano Cunha et al., (2003b), verificaram que a maior parte do carbono foi encontrada na frao humina, seguida pela frao cidos flvicos, semelhante ao comportamento observado por Santa Isabel (1988). Os valores da razo AH/AF foram sempre menores do que 1 indicando predomnio da frao cidos flvicos sobre a frao cidos hmicos ao longo de todo o perfil de solo. Tambm verificou-se aumento da frao cidos flvicos livres com a profundidade e diminuio da frao humina. Em Latossolos distrficos do Nordeste sob floresta tipo equatorial mida, floresta de altitude com clima mais seco e vegetao de caatinga, foi observado que o contedo de matria orgnica no depende diretamente dos aportes vegetais, mas sim dos fatores climticos tais como, temperatura e umidade (Volkoff, 1977). Sob clima quente e mido os baixos teores de matria orgnica so explicados, sobretudo, pela mineralizao rpida da matria orgnica. Sob clima seco e frio, ao contrrio, ocorre uma diminuio da biodegradao e conseqentemente maior acumulao de matria orgnica. A repartio do hmus em Latossolos distrficos evidenciou que a matria orgnica leve quase inexistente, resultado da pequena persistncia dos produtos vegetais no solo, pois a mesma rpida e totalmente humificada (Volkoff, 1977). A proporo das fraes alcalino-solveis muito grande representando entre 60 a 70% do carbono total do solo. A humina apresenta os menores teores (10 a 20% do carbono total). A repartio do carbono ao longo de 50 a 100 cm de profundidade indicou que os compostos orgnicos percussores da humificao liberados dos restos vegetais na superfcie no eram imediatamente imobilizados e migravam at grandes profundidades. A frao cidos flvicos livres representou entre 1 a 6% do carbono total do solo em superfcie chegando a compor entre 40 - 60% do C em profundidade, conseqentemente houve diminuio da razo AH/AF. Os cidos flvicos livres constituem uma das fraes mais importantes do hmus dos Latossolos distrficos e sua presena est associada presena do Al+++ trocvel (Volkoff, 1977). Em Latossolos distrficos do Nordeste, os restos vegetais so rapidamente mineralizados formando grande quantidade de produtos pr-hmicos solveis. Estes produtos podem migrar para baixo do perfil. A forte humificao, a instabilidade das matrias hmicas formadas, a abundncia e permanncia de fraes de massa molecular aparentemente menos elevada e, ainda, o deslocamento destas fraes mostram que, nos Latossolos distrficos, a matria orgnica pode exercer uma ao importante na mobilizao de elementos minerais. As substncias hmicas mais mveis migram para o horizonte B. A sua acumulao pode explicar o aparecimento de caractersticas estruturais particulares, como uma consistncia mais forte, ligada desorganizao estrutural do horizonte B (Volkoff & Andrade, 1976). Em resumo, na superfcie dos Latossolos, a mineralizao dos detritos vegetais sempre rpida; os produtos pr-hmicos que se formam no decorrer da mineralizao migram facilmente em profundidade; uma proporo varivel desses produtos d origem a cidos flvicos (AFL) que so adsorvidos nas argilas ou retidos sob forma de complexo com o alumnio; o restante precipita e se condensa mais ou menos rapidamente, transformando-se em cidos hmicos e tambm em produtos de massa molecular relativamente mais elevada que vo integrar a humina (Volkoff & Andrade, 1976; Volkoff, 1977). No que diz respeito ao hmus dos Latossolos distrficos este constitudo por duas partes: uma bastante transitria e outra mais permanente. Na primeira, tm-se os cidos hmicos e uma frao da humina herdada. A outra parte formada pelos cidos flvicos e uma outra frao da humina chamada de humina de precipitao. No horizonte A, a humina se renova mais rapidamente que todas as fraes, enquanto que em profundidade ela aparece mais estvel. Os cidos flvicos livres, no horizonte A so, em comparao a outras fraes, os que se renovam mais lentamente e, em profundidade, eles se renovam quase to
65

lentamente quanto a humina (Volkoff et al., 1978). Argissolos e Cambissolos Argissolos e Cambissolos eutrficos, ricos em argila montimorilonita e vermiculita foram estudados por Volkoff et al., (1989). Na parte superior do perfil do Cambissolo argisslico e do Argissolo cmbico, 50 a 60% do carbono foi encontrado na forma de humina, enquanto 40 a 50% nas fraes alcalino-solveis. Na parte inferior dos perfis foi verificado que apenas entre 10 a 20% do carbono constituram a frao alcalino-solvel. A maior parte do carbono foi encontrado na frao humina. Nos dois solos estudados por Volkoff e colaboradores foi verificada pouca quantidade de cidos flvicos livres (menos de 10%). Foi observado, ainda, acmulo de cidos flvicos livres na superfcie; o contedo de cidos alcalino-solveis foi na ordem de 50-60% do carbono total, sendo a maior parte pertencente frao huminas. Em subsuperfcie foram observadas quantidades no negligenciveis de cidos flvicos livres (20% do carbono total). Neste solo a razo AH/AF foi sempre menor do que um. Num Argissolo Vermelho-Amarelo Distrfico submetido a diferentes sistemas de cultivo, foi observado por Saraiva (1987) que a frao cidos flvicos foi trs a quatro vezes maior do que a frao cidos hmicos. O autor verificou que a humina correspondeu a mais da metade do carbono do solo, em todas as situaes analisadas. Comportamento semelhante tambm foi verificado em estudos realizados por Parra (1986) e Nascimento (1989). Em fraes humificadas da matria orgnica de uma toposseqncia no estado do Rio de Janeiro, foi verificado que os perfis situados nos teros superior e mdio da encosta apresentaram maior percentual de humina do que os perfis situados no tero inferior e em geral, menor percentual de cidos hmicos, mesmo nos Argissolos eutrficos (Canellas et al., 2000). O valor da razo AH/AF foi sempre menor do que um em praticamente todos os horizontes dos perfis estudados. Entretanto, observou-se que os valores desta relao aumentaram com a descida na encosta. Estudando a composio da matria orgnica de Cambissolos eutrficos desenvolvidos sob calcrio na regio de Irec-Ba, Cunha & Ribeiro (1998) observaram que a frao humina representou mais de 50% do carbono total. Sob cultivo, os solos apresentaram maiores quantidades de cidos flvicos. Entretanto, esta frao diminuiu em profundidade. No solo sob mata foi observado menor quantidade de cidos flvicos livres e maior de humina. A diminuio em profundidade foi atribuda ao teor elevado de clcio que promove a estabilizao dos compostos orgnicos e transformao imediata dos compostos orgnicos precursores hidrossolveis. A migrao da frao solvel pode ser desfavorecida uma vez que o clcio pode provocar precipitao dos cidos flvicos, que seguida pelas reaes de condensao provocada pela ao de outros ons tais como ferro por exemplo, favorecem a formao de substncias hmicas mais condensadas (Jacquin et al., 1980). A composio mdia do hmus do horizonte superficial de Argissolos e Cambissolos do Brasil pode ser observada nas Tabela 3.3. Pode ser observados o predomnio da frao humina e baixo contedo de cidos hmicos nos Argissolos estudados. A distribuio da frao humificada nos Cambissolos tambm qualitativamente a mesma, ou seja, maior contedo de humina, predominncia de cidos flvicos em relao aos cidos hmicos nas fraes alcalino solveis. Solos com problemas de hidromorfia A natureza da matria orgnica humificada determinada por fatores diretamente ligados ao solo, principalmente presena ou ausncia de nutrientes (Volkoff & Cerri, 1988, 1980, 1981;
66

Volkoff et al., 1984). Em condies de drenagem impedida ou m drenagem (Volkoff & Cerri, 1980) observaram uma proporo elevada de fraes alcalino-solveis com razo AH/AF > 1, e os cidos hmicos com valores baixos para a relao E4/E6 (para ver detalhes da razo E4/E6, consulte o captulo 5) tanto em meio alcalino como nos Gleissolos, como em meio distrfico nos Plintossolos (Volkoff & Cerri, 1981). Foi observada ausncia da frao cidos flvicos livres no Gleissolo, enquanto que no Plintossolo essa frao foi abundante. Isso pode ser um indicativo de que a formao de cidos flvicos livres ocorre em ambientes cidos, ou seja, independe das condies de drenagem (Cerri & Volkoff, 1988). Em relao aos outros solos, os solos hidromrficos apresentam-se relativamente enriquecidos em cidos hmicos. Em Vertissolos, Gleissolos e Planossolos (todos distrficos em superfcie e eutrficos em profundidade) foi verificado que o hmus apresentou composio bastante semelhante (Cerri & Volkoff, 1988). A matria orgnica encontrava-se bastante humificada e aproximadamente 50% do hmus foi constitudo de fraes alcalino-solveis. Os cidos hmicos, no entanto, apresentaram baixa mobilidade eletrofortica e pequena absoro de luz na regio do visvel, o que caracterizou um hmus de elevado grau de maturao. Nesses trs solos foi observada uma pequena quantidade de cidos flvicos. Estes cidos esto geralmente associados a solos distrficos. Em solos de restinga, sob influncia da hidromorfia, Gomes et al., (1998), verificaram em Espodossolos que a frao cidos hmicos foi dominante em relao frao cidos flvicos, e a razo AH/AF foi sempre maior do que 1 ao longo de todos os perfis estudados. Farmer et al. (1983), tambm verificaram em horizontes Bh de Espodossolos hidromrficos que mais de 90% da frao extravel foi composta pela frao cidos hmicos. Cerri & Volkoff (1988) encontraram valores similares para outros Espodossolos. Gomes et al., (1998) verificaram decrscimo da razo AH/AF em profundidade nos perfis de Espodossolos brasileiros e atriburam este comportamento maior mobilidade e menor condensao dos cidos flvicos em relao aos cidos hmicos, permitindo que os cidos flvicos estejam presentes em maiores propores nas partes inferiores dos horizontes Espdicos. Alteraes na matria orgnica de um Espodossolo hidromrfico pelo uso com pastagens cultivadas no Pantanal Mato-grossense foram estudadas por Fernandes et al., (1999). Os autores observaram alteraes nas propores relativas das fraes hmicas em funo da introduo da pastagem. No cerrado nativo predominou a frao cidos flvicos (82% do carbono total); sob pastagem de dez anos, predominou a frao humina (62% do carbono total) em detrimento da frao cidos flvicos, alm de uma pequena diminuio no contedo de cidos hmicos. No solo sob pastagem (20 anos) os cidos flvicos voltaram a predominar novamente, seguido pela frao cidos hmicos e diminuio do contedo de humina diminuiu. Aps 20 anos de cultivo da pastagem foi observado uma reduo de 28% no contedo de carbono na profundidade de 0-40 cm. Essa dinmica de evoluo das fraes hmicas foi atribuda por Fernandes et al., (1999) como uma conseqncia do aumento do contedo de clcio que tem papel importante na formao de humatos de clcio (Oades, 1988). Uma elevao no contedo de clcio pode provocar aumento no contedo das fraes hmicas mais estveis representado pelo aumento da humina observado no solo sob pastagem de dez anos. A diminuio dos teores de clcio no perfil sob pastagem de 20 anos, at valores prximos aos observados no solo sob cerrado nativo, pode ter provocado diminuio do contedo de humina e aumento do contedo de cidos flvicos, frao menos estvel, caracterstica de solos mais cidos (Cerri & Volkoff, 1988). Uma evoluo parecida dos compartimentos hmicos foi observado por Dabin (1982) em solos da Costa do Marfim, onde o cultivo contnuo, durante cinco anos, com uma leguminosa do gnero Pueraria, levou a aumentos nos teores de clcio, acompanhados de aumentos do carbono
67

total e da frao humina. De modo inverso, numa rea contgua submetida a cultivo contnuo com milho foi observada diminuio nos teores de clcio, com predomnio de cidos flvicos na frao hmica. O predomnio da frao cidos flvicos em solos de cerrado tambm foi observado por Andreux & Becerra (1975) estudando reas de savana inundveis na Colmbia sob solos arenosos. Segundo esses autores, nas reas de solos mais arenosos, a alta porosidade favorece o arraste dos precursores hmicos para as camadas mais profundas. Alm disso, a baixa disponibilidade de gua nas camadas superficiais durante a estao seca um fator limitante para a atividade biolgica e, conseqentemente, para a condensao dos precursores da humificao, refletindo em valores baixos da razo AH/AF. Em Organossolos da baixada litornea do Rio de Janeiro Freixo et al. (1997) verificaram que a matria orgnica humificada foi constituda, principalmente, pela frao humina e apenas uma pequena parte pelas fraes alcalino-solveis. Os valores da razo AH/AF foram prximos da unidade. Conceio (1989), estudou solos hidromrficos de elevado teor de matria orgnica (Organossolos e Gleissolos Distrficos) e constatou que o hmus apresentou um contedo relativamente baixo de cidos flvicos livres e de humina e propores mais elevadas de substncias alcalino-solveis principalmente de cidos hmicos. Nos solos orgnicos, a razo AH/AF variou de 2,1 em superfcie at 1,6 em profundidade. No Gleissolo os valores para esta razo foram da ordem de 0,4 em superfcie a 0,7 em profundidade. Freixo et al. (1997) e Valadares (2003), verificaram baixos teores de substncias hmicas alcalino-solveis em outros Organossolos do Estado do Rio de Janeiro. Ambos os trabalhos relatam a predominncia da frao humina na composio da matria orgnica destes solos indicando a necessidade de estudos mais sistemticos sobre o fracionamento qumico da frao humificada dos solos orgnicos. Na regio semi-rida do Rio Grande do Norte a matria orgnica humificada de um Gleissolo eutrfico, rico em argila montmorilonita, apresentou a mesma composio ao longo de todo o perfil do solo (Volkoff & Cerri, 1980). Foi observado um contedo baixo de humina e aumento nas fraes alcalino-solveis, principalmente cidos hmicos extrados com pirofosfato de sdio. Foram encontrados, ainda, valores entre 1 e 2 para a razo AH/AF. Os autores observaram influncia da reao do meio e do tipo de argila sobre a distribuio das fraes humificadas. O meio alcalino e a argila do tipo 2:1 (montmorilonita), favorecem o processo de condensao das substncias hmicas uma vez que esta um processo ecolgico mediado pela atividade biolgica favorecida nestas condies. Em solos degradados de vrzea (Gleissolos distrficos) localizados no Rio de Janeiro Manzatto (1990), observou o domnio da frao humina (60%) sobre as fraes alcalino-solveis (2030%) e cidos flvicos livres (menos de 10%). A concentrao de humina foi atribudo humificao direta dos tecidos lignificados modificados por processos de demetilao, uma vez que as vias de humificao atravs dos mecanismos de insolubilizao e de neossntese microbiana so bastante reduzidas em condies de hidromorfismo (Duchaufour, 1977). A maior parte das fraes alcalino-solveis correspondeu aos cidos hmicos. Uma composio semelhante do hmus de Gleissolos foi descrita por Ortega (1982), que tambm relacionou o alto contedo de humina s condies hidromrficas que limitam os processos de humificao da matria orgnica, dominantes durante a formao desses solos. Por outro lado, Cerri & Volkoff (1988) encontraram propores mais elevadas das fraes alcalino-solveis, menos de 50% da frao humina e proporo muito reduzida de cidos flvicos livres na matria orgnica humificada de Gleissolos eutrficos com argila de atividade alta da ilha do Maraj. Da mesma forma, Conceio (1989) estudando a composio do hmus de Gleissolos licos com argila de atividade alta no Rio de
68

Janeiro, detectou um predomnio das fraes alcalino-solveis sobre as fraes humina e cidos flvicos livres em propores semelhantes quelas obtidas por Cerri & Volkoff (1988). A proximidade destes resultados foi atribuda presena de argila de atividade alta e de ctions polivalentes (Ca++, Mg++ e Fe+++), que atuam intensificando os processos de condensao e estabilizao dos cidos hmicos desencadeados, provavelmente, no perodo de drenagem sazonal ou artificial. O predomnio da frao cidos flvicos em relao frao cidos hmicos em todo o perfil do um Gleissolo distrfico foi observado por Manzatto (1990). Nesse solo, a razo AH/AF foi maior nos horizonte superficiais (AH/AF= 0,7), enquanto em profundidade a frao cidos flvicos foi mais dominante (AH/AF=0,2). Ortega (1982), tambm observou decrscimo da razo AH/ AF com a profundidade em Gleissolos, com valores mudando de 1,0 em superfcie para 0,7 a 50 cm de profundidade. O autor atribuiu a maior proporo de AH em superfcie melhor aerao do horizonte superficial nos perodos de abaixamento do lenol fretico, que favorece a atividade biolgica e, por conseguinte, a mineralizao da matria orgnica e a produo de compostos fenlicos solveis, os quais por sua vez, atravs de processos de policondensao do origem a frao cidos hmicos (Duchaufour, 1977). A presena de um horizonte glei quase que permanentemente reduzido, torna desfavorvel a sntese de cidos hmicos, podendo contribuir para a formao preferencial de substncias hmicas pouco condensadas e humina em profundidade conforme constatado no estudo realizado por Manzatto (1990). Dessa forma, podemos observar que a presena ou ausncia de hidromorfia modifica a distribuio das fraes hmicas. Martins (1987) verificou que essa distribuio foi idntica nos solos imperfeitamente e moderadamente drenados, porm diferente da encontrada nos solos bem drenados. As diferenas ocorreram, principalmente, na frao cidos hmicos e nos cidos flvicos ligados. Em solo bem drenado foi observado maior contedo de cidos hmicos e menor de cidos flvicos extrados com hidrxido de sdio. Este comportamento sugere o favorecimento da formao de cidos hmicos em detrimento dos cidos flvicos em solos bem drenados, ou seja, de condies fsicas favorveis atividade biolgica. A composio da matria orgnica de Gleissolos degradados foi estudado por Conceio (1989) que observou menor razo AH/AF (0,7) em solos com horizonte A parcialmente decapitado em relao a uma maior razo AH/AF (1,2) em solos onde o horizonte A no se encontrava degradado. Manzatto (1990) observou que o cultivo em Gleissolos promoveu variaes rpidas na distribuio das fraes hmicas ao longo do ciclo da cultura de arroz inundado. Estas consistiram, resumidamente, em aumento na proporo dos cidos hmicos e cidos flvicos livres e diminuio das fraes humina e cidos flvicos ligados, indicando que, alm da mineralizao, a matria orgnica destes solos deve sofrer processos de condesao com o cultivo. No foi verificado efeito da aplicao de doses de calcrio + arao profunda na distribuio das fraes humificadas aps o cultivo. Entretanto, quando a arao no foi seguida pela calagem, a quantidade de cidos flvicos diminui e de humina aumentou, sugerindo que a arao pode favorecer a insolubilizao das fraes mais lbeis. Nas parcelas que receberam apenas doses de calcrio e no foram aradas foi observada uma reduo no contedo de cidos flvicos e aumento da frao humina. Esse comportamento foi atribudo por Manzatto (1990) ao do clcio na formao de agregados estveis insolveis. O papel do clcio na estabilizao das substncias hmicas foi discutido por Duchaufour (1970). A composio do hmus de Organossolos e Gleissolos do sudoeste da Bahia, distrficos e licos, respectivamente, foi estudada por Couto & Resende (1985). Foi observado maior evoluo do hmus nos Organossolos (predomnio de cidos hmicos). Os autores no apresentaram
69

dados quantitativos referentes s diferentes fraes hmicas. Santa-Isabel (1988) observou em Planossolos predomnio da frao humina na composio da matria orgnica. Os cidos flvicos constituram foi a maior parte da frao solvel em todo o perfil. Foi verificado, ainda, baixo teor de cidos flvicos livres. A composio do hmus destes solos foi atribuda presena de hidromorfia que dificulta a evoluo das substncias hmicas. Modificaes no uso do solo proporcionaram mudanas na composio da matria orgnica de um Planossolos hidromrficos somente nos primeiros 5. Foi verificado diminuio no contedo de cidos flvicos nos sistemas sob cultivo, revelando tendncia de maior reduo desta frao nos sistemas com maior revolvimento do solo. A maior parte do carbono total foi encontrado na forma de humina (46-62%), seguida pela frao cidos hmicos (25-40%) e flvicos (7-2%) independente do sistema de manejo. Os sistemas de cultivo do solo com preparo convencional reduziram os teores de carbono total e das fraes cidos hmicos e humina, quando comparado ao solo com cobertura vegetal original. Canellas et al. (2000) verificaram, em ambiente com drenagem limitada, que o impedimento de drenagem encontrado no tero inferior da encosta e o fluxo vertical de gua mais intenso favorecem as reaes de policondensao dos compostos orgnicos, aumentando a relao AH/ AF medida que se descia na encosta, onde ocorrem os Planossolos e Gleissolos. A posio do solo na toposseqncia influencia a dinmica da gua, que por sua vez, condiciona os teores das fraes da matria orgnica, principalmente das fraes cidos flvicos livres e cidos flvicos, que so transportados pelo fluxo lateral e vertical de gua no relevo. A composio mdia do hmus do horizonte superficial de alguns solos sob influencia de hidromorfia pode ser observada na Tabela 3.3. Nos Gleissolos e Planossolos verificou-se o predomnio da frao cidos flvicos sobre a frao cidos hmicos. Nos Organossolos e Plintossolos a frao cidos hmicos predomina sobre a frao cidos flvicos. A frao humina foi a frao com maiores teores nos diferentes solos estudados. Solos de campos de altitude A composio da matria orgnica humificada dos horizontes superficiais de trs solos distrficos de campo de altitude em Minas Gerais, Paran e Santa Catarina (Cambissolo, Chernossolo e Cambissolo hmico, respectivamente), estudados por Volkoff et al., (1984) foi marcada pela ntida acumulao de material humificado. O fracionamento da matria orgnica apresentou as seguintes caractersticas: proporo elevada de cidos flvicos livres (10-20%) e de fraes alcalino-solveis (40%) no horizonte A acompanhado do menor contedo de humina (40%). Foi observado (nos trs solos) aumento dos cidos flvicos livres em profundidade. Em concluso, o hmus desses solos foi constitudo de cidos flvicos e hmicos facilmente extraveis, ou seja, de produtos de pequeno grau de condensao, o que evidencia certa mobilidade das fraes. Uma composio similar foi encontrada em horizontes Bh de Espodossolos (Turenne, 1977) e A de Andossolos (Hetier, 1975) e atribudas existncia de complexos organo-minerais, com o alumnio. Para Volkoff et al. (1984), a participao do alumnio no processo de acumulao do hmus no pode ser negligenciada e, nas condies climticas dos campos de altitude, a temperatura suficientemente baixa diminui a rapidez do processo de mineralizao das substncias hmicas do solo. A maior prevalncia de cidos flvicos nos solos de reao cida pode resultar, em longo prazo, em ambientes menos favorveis atividade microbiana, com concomitante reduo na fertilidade do solo (Silva et al., 2000). Benites et al. (2001) caracterizaram a matria orgnica
70

de Neossolo Litlico, Espodossolo Ferrocrbico e Cambissolo Hmico, todos licos, sob campos de altitude no parque estadual da Serra do Brigadeiro em Minas Gerais. Foi observado teores elevados de cidos flvicos (26% do carbono total) e predomnio da frao humina, principalmente nos horizontes superficiais.. A razo AH/AF diminuiu com o aumento da profundidade em todos os solos estudados. Valores elevados da razo AH/AF (da ordem de 3,2) foram observados apenas no horizonte A do Neossolo Litlico e Espodossolo Ferrocrbico. A composio mdia do hmus do horizonte superficial de Neossolos pode ser observada na Tabela 3.3. Verifica-se o predomnio da frao cidos flvicos sobre a frao cidos hmicos e uma alta percentagem da frao humina. Baseado nos dados desta reviso pode-se concluir que na maior parte dos solos do Brasil, os horizontes superficiais so enriquecidos em humina e em cidos flvicos (exceo para os solos antropognicos e alguns organossolos). Segundo Mendona & Rowell (1994), a predominncia de cidos flvicos deve-se limitao nas reaes de condensao, enquanto a predominncia da humina atribuda rpida insolubilizao dos resduos vegetais que chegam ao solo (Canellas et al., 2003). No que diz respeito distribuio das fraes hmicas no perfil do solo, degradados ou no, observou-se que dos solos estudados apenas 14% destes apresentaram razo AH/AF > 1 no horizonte superficial, no considerando as Terras Pretas. Quando no clculo foram includos os dados provenientes de solos antropognicos a percentagem passou para 35%. Em subsuperfcie, na maioria dos casos que puderam ser analisados, a razo AH/AF foi sempre menor do 1. Em relao frao no extravel, dos 99 solos estudados, apenas 20% destes apresentaram teores mais elevados de alcalino-solveis em relao humina, com valores da razo AH+AF/H > 1 (Conceio, 1989; Lima, 2001; Volkoff & Andrade, 1976). Em alguns solos antropognicos foi observada relao AH/AF maior do que 1 a quase 1,5 m de profundidade (Cunha, 2005). Estes contedos esto relacionados ao horizonte A antrpico, que como mostrado anteriormente, so mais enriquecidos em cidos hmicos. Na Tabela 3.3, pode ser visualizada a composio mdia da distribuio percentual das fraes humificadas da matria orgnica em solos do Brasil. Vale ressaltar que aqui foram computadas todas as classes de solos apresentadas na Tabela 3.2, com exceo dos solos antropognicos, devido s suas caractersticas especiais, e tambm que no se levou em considerao s diferenas entre os mtodos de extrao utilizados, portanto pede-se cautela por parte do leitor na interpretao destes dados. Pode se concluir, que a distribuio da matria orgnica humificada dos solos brasileiros caracterizada pelo elevado contedo da frao insolvel (humina) e a maior parte da frao solvel composta pelos cidos flvicos. Manejo dos solos e fraes hmicas A composio da matria orgnica e as feies estruturais das substncias hmicas podem fornecer informaes para descrever e estabelecer parmetros sobre a capacidade do agroecossistema suportar determinadas prticas agrcolas (Mielniczuck, 1999). O uso da matria orgnica do solo como indicador de qualidade est baseado na premissa de que ela exerce uma importante ao na fertilidade dos solos (afeta propriedades qumicas, fsicas e biolgicas), e suas fraes humificadas so um marcador qumico estvel da historia do solo (Canellas et al., 2004). Apesar de geralmente ser encontrado em menor proporo nos solos brasileiros, os cidos hmicos assumem um papel importante como indicador da qualidade da matria orgnica do solo devido ao fato de que esta frao a que mais sofre alteraes estruturais durante o processo de humificao (Kgel-Knaber et al., 1988). Geralmente, o comportamento espectroscpico da
71

frao cidos flvicos semelhante ao de polissacardeos e a humina pouco modificada devido a sua associao com a frao mineral do solo e sua natureza predominantemente apolar (Zech et al., 1997). Desta maneira a composio do hmus pode ser utilizada como um indicador apropriado dos efeitos do manejo sobre a qualidade do solo (MacCallister & Chien, 2000; Canellas et al., 2003), j que os processos ecolgicos de formao do hmus dependem intensamente da interferncia antrpica. Mudanas marcantes na matria orgnica do solo so observadas com a alterao no uso do solo, tanto do ponto de vista quantitativo quanto do ponto de vista qualitativo (Campbell, 1978; Andreux & Cerri, 1989). De modo geral, os nveis de matria orgnica do solo diminuem quando sistemas nativos so utilizados para o cultivo. Alteraes na temperatura, umidade, aerao, absoro e lixiviao em conseqncia do cultivo (Sanchez, 1976), alm da destruio completa da serrapilheira original, modificam a distribuio e a atividade da fauna e microbiota do solo (Cerri et al., 1985), influenciando assim o tempo de residncia do carbono armazenado no solo e a sua distribuio entre as distintas fraes. A diminuio da adio anual de carbono bem como as altas taxas de decomposio, caractersticas das regies tropicais, ocasionam um declnio do contedo de matria orgnica humificada no solo antes em equilbrio com a vegetao nativa. Detwiller (1986) estimou uma perda de 40% no contedo de carbono com o cultivo agrcola e uma perda de 20% no caso de uso com pastagem. A relao entre a matria orgnica (carbono total) e o equilbrio das fraes hmicas influencia as caractersticas do solo, tais como: estrutura, capacidade de troca catinica e disponibilidade de nutrientes (Dabin, 1982). Alteraes no uso do solo podem, tambm, modificar esse equilbrio (Martins et al., 1990), acarretando conseqncia para as propriedades qumicas, fsicas e biolgicas dos solos. A razo AH/AF foi utilizada por Kononova (1982) com um indicador da qualidade do hmus. O baixo contedo de bases trocveis no solo pode diminuir a intensidade do processo de humificao, isto , as reaes de sntese e condensao qumica e microbiana (Steverson, 1994). Como resultado, espera-se uma menor razo AH/AF em solos mais intemperizados. Avaliando a composio da matria orgnica humificada de um Argissolo Amarelo distrfico em tabuleiros costeiros sob cultivo, Canellas & Faanha (2004) observaram que o contedo de cidos flvicos livres variou de 8 a 10% e com predomnio de cidos flvicos na frao alcalino-solvel. O contedo de cidos hmicos foi sempre menor do que o de cidos flvicos e o mesmo se concentrou na superfcie. Os maiores teores foram observados para a frao humina e a razo AH/AF foi sempre menor que um e diminuiu com a profundidade. Canellas et al., (2004), avaliaram as alteraes no teor e qualidade da matria orgnica de um Argissolo Vermelho-Amarelo na regio de Seropdica-RJ, com a introduo de leguminosa herbceas perenes. Apesar do pequeno tempo de durao do experimento (2 anos) foi observado uma mudana qualitativa significativa com o manejo dos resduos vegetais (no foram observadas mudanas quantitativas). A introduo da cobertura permanente do solo com leguminosas conferiu maior grau de condensao aos cidos hmicos, ou seja, a alterao deu-se em relao a aspectos qualitativos. Avaliando o efeito de longo prazo da preservao da palhada por ocasio da colheita e da adio de vinhaa sobre as propriedades qumicas de um Cambissolo Hplico Ta vrtico (Canellas et al., 2003) observaram que o manejo com cana crua e o com adio de vinhaa aumentaram os teores de macro e micronutrientes, em comparao com o manejo cana queimada e sem adio de vinhaa. A melhoria dos atributos qumicos do solo favoreceu a formao de substncias hmicas alcalino-solveis mais condensadas (cidos hmicos). Parra (1986) observou aps oito anos de cultivo que a maior reduo no teor de matria orgnica na camada de 0-10 cm de um Latossolo Vermelho distrfico submetido ao plantio
72

convencional, refletiu numa maior contribuio relativa dos cidos flvicos e diminuio da percentagem de carbono da frao humina, sugerindo uma tendncia de formao preferencial de cidos flvicos em solos com cultivo mais intenso. O autor encontrou valores da relao AH/ AF em torno de 0,33. O efeito do manejo do solo nas fraes hmicas de um Latossolo Vermelho distrfico foi avaliado por Nascimento (1989) que encontrou valores para a relao AH/AF prximos a 0,3, nos cinco centmetros superficiais, e valores inferiores a 0,5 na camada de 15 a 20 cm. A influncia da vinhaa, da fertilizao mineral e do cultivo nas fraes humificadas da matria orgnica de um Latossolo Vermelho sob cerrado e cultivado por sete anos com milho foi estudada por Coelho (1991). Foi observada uma elevao da frao cidos flvicos em relao s outras fraes hmicas e a aplicao da vinhaa no alterou qualitativamente a distribuio das substncias hmicas do solo. A frao humina representou mais de 50% do carbono total e o solo sob cerrado apresentou os menores teores de cidos flvicos e os maiores de cidos hmicos. Foi observado, ainda, aumento da frao cidos flvicos com a profundidade do solo. O uso de lodo da estao de esgoto num Latossolo Vermelho distrfico cultivado com canade-acar, alterou o contedo das fraes orgnicas, promovendo, principalmente, aumento da frao humina seguida das fraes cidos flvicos e cidos hmicos (Nascimento et al., 1988; Melo et al., 1994). Os autores observaram interconvenes muito rpidas entre as fraes do hmus, influenciadas pelas variaes climticas e pelo estdio de evoluo do sistema radicular da cana-de-acar e seus reflexos sobre a biomassa microbiana do solo. A incorporao de restos culturais ao solo tambm altera a distribuio das fraes humificadas. Albertini (1983) verificou que aumentos de 82 e 27% no carbono das fraes cidos flvicos e hmicos, respectivamente dos 15 aos 31 dias de incubao e diminuio de 13 e 5% nos teores de carbono orgnico total e humina. Foi verificado que a razo AH/AF aumentou sensivelmente at os 105 dias aps o plantio. Tal comportamento foi atribudo condensao de compostos orgnicos mais simples, inclusive os produzidos pelo sistema radicular da cana e pelos microrganismos associados rizosfera. Em solos em vias de degradao, a relao AH/AF diminui medida que a estabilidade estrutural aumenta (Dabin, 1976). Demtrio et al., (1998) estudando os efeitos da adio de diferentes resduos de culturas ao solo sobre a distribuio do carbono das fraes humificadas da matria orgnica, no detectaram alteraes nos teores das fraes alcalino-solveis, mas verificaram uma elevao significativa nos teores da frao humina. Por outro lado, Ceretta et al. (1997), estudando o acmulo de carbono nas fraes hmicas de um Argissolo VermelhoAmarelo sob plantio direto observaram que, na camada mais superficial, a frao humina foi dominante seguida pela frao cidos hmicos e da frao cidos flvicos. Observaram, tambm, que o sistema de plantio direto permitiu o aumento do carbono no solo e que o mesmo promoveu uma distribuio mais uniforme das fraes cidos hmicos e flvicos nos horizontes mais profundos. A razo AH/AF foi sempre maior do que 1 em superfcie. Alteraes na distribuio das fraes humificadas da matria orgnica de horizonte superficial de Latossolo Vermelho-Amarelo e Argissolo Vermelho-Amarelo, ambos distrficos, que receberam o equivalente a 80 t ha-1 de composto de lixo urbano e lodo da estao de tratamento de esgoto foram avaliadas por Canellas et al., (2001). Observou-se, nesse experimento, aumento do contedo de cidos flvicos, com conseqente diminuio da razo AH/AF e da qualidade do hmus. Os autores, apesar de no terem observado mudanas quantitativas no contedo de cidos hmicos, observaram alteraes importantes nas suas caractersticas qumicas que sero discutidas nos captulos cinco at nove. A razo AH/AF dos resduos foi maior do que a observado nos solos e a adio dos resduos conferiu para ambos os solos o carter flvico para a matria orgnica. A
73

predominncia de AF sobre os AH indicativo de caractersticas desfavorveis ao hmus dos resduos orgnicos em relao ao do solo. A retirada da vegetao nativa para introduo de pastagens leva a importantes modificaes na dinmica das substncias hmicas. A influncia da introduo de pastagens nas fraes hmicas de Latossolos distrficos sob Cerrado e da floresta Amaznica foram estudadas por Longo & Espndola (2000). Os autores observaram diminuio nas concentraes de cidos flvicos livres e humina com a mudana da condio de vegetao natural para pastagens, tanto no cerrado como na floresta tropical. As maiores modificaes foram observadas no solo sob floresta, evidenciando o efeito do tipo da cobertura vegetal sobre o teor e sobre a distribuio dos componentes orgnicos em solos tropicais. No foram verificadas diferenas significativas em relao frao cidos hmicos nas duas condies estudadas. A ocorrncia de decrscimo no teor de carbono das fraes mais condensadas depois de instalada nova vegetao tambm foi observada por Ferreira (1977). Longo & Espndola (2000) observaram concentrao das fraes cidos hmicos e humina em superfcie e aumento relativo da frao cidos flvicos em profundidade. Quando foi comparada a distribuio das fraes hmicas entre o solo da regio amaznica e a do cerrado verificaram ntidas diferenas nas duas situaes de manejo (vegetao nativa e pastagem), tendo o solo sob vegetao nativa sob floresta apresentado os maiores valores de cidos hmicos. Para os autores, esta diferena esta relacionada s diferenas fitoclimticas existentes entre as duas regies, o que promoveu, possivelmente, mudanas nos processos de mineralizao e sntese do hmus, pois estes so de natureza predominantemente microbiana. Qualquer fator que afete a atividade dos microrganismos afeta a ecologia da humificao. Marchiori Junior & Melo (2000) estudaram a alterao na composio do hmus de Latossolo Vermelho eutrfico sob mata e submetido diferentes sistemas de manejo. Com a cobertura de mata foram encontrados os maiores valores para a frao humina (74% do carbono total) e o uso agrcola aumentou os teores de cidos hmicos e flvicos na camada de 0 a 10 cm. Tanto sob mata natural como sob cultivo os teores de cidos flvicos foram menores do que os de cidos hmicos, o que sob o ponto de vista da fertilidade do solo pode ser interessante, por colaborar para uma menor lixiviao ou translocao de elementos qumicos da camada arvel para as camadas subsuperficiais (Greenland, 1965). Diferentes sistemas de produo agrcola foram estudados durante seis anos por Souza & Melo (2003) que observaram mudanas na composio da matria orgnica de um Latossolo Vermelho Eutrfico. Os cultivos em sistemas de plantio direto com pousio e cultivo de mucuna preta e feijo guandu no inverno favoreceu o aumento da frao humina nas camadas superficiais do solo. Foi observado tambm que os sistemas de plantio direto de milho em monocultura e sucesso com leguminosas (mucuna preta e feijo guandu) favoreceu a migrao de cidos flvicos para as camadas mais profundas, reduzindo os teores de substncias hmicas alcalinosolveis na camada superficial e tambm a interconverso mais rpida de cidos flvicos em cidos hmicos. Foi verificada diminuio significativa da frao humina com a profundidade. As fontes de matria orgnica quer sejam naturais ou introduzidas no solo, contribuem de forma significativa para a produo do hmus (Primavezi, 1981). Em estudos realizados em reas de cerrado foi observado que, aps a retirada da vegetao e implantao de vrios sistemas de cultivo agrcola, a composio da matria orgnica humificada no foi alterada, ou seja, as grandes mudanas na vegetao no causaram significativas alteraes no hmus do solo (Nascimento et al., 1992). No entanto, a ecologia da humificao foi sustentada pelo aporte massivo de energia ao solo (associada aos adubos qumicos).
74

Clima e as fraes hmicas Dabin (1981) verificou, em condies tropicais, que a matria orgnica humificada formada sob clima mido foi caracterizada pelo aporte importante de resduos vegetais ao solo, os quais so rapidamente transformados, podendo sofrer imobilizao imediata pela frao mineral ou atravs de processos bioqumicos de condensao. Nas reas de clima seco e contrastado, os processos de condensao so dominantes e conduzem ao aparecimento de matria orgnica humificada, sobretudo em solos argilosos. Diversos estudos (Cerri & Volkoff, 1988; Flexor & Volkoff, 1977; Volkoff & Cerri, 1980; Volkoff & Cerri, 1981; Volkoff et al., 1978) em diferentes regies de clima tropical e subtropical do Brasil, evidenciaram que os principais fatores que controlam a formao de matria orgnica humificada nos solos so temperatura, presena ou ausncia de bases e drenagem Esses so tambm os fatores que mais influenciam a atividade biolgica. Segundo os autores, a presena de bases tem um efeito mais importante sobre os demais fatores. Em situaes de baixo contedo de bases trocveis disponveis, a diferenciao feita, antes de tudo, em funo da drenagem e, em condies bem drenadas, esta ditada pelas mudanas climticas, principalmente de temperatura. A influncia de processos pedoclimticos na estabilizao da matria orgnica do solo foi citada por Duchaufour (1977) como uma conseqncia de alternncias sazonais climticas, em particular dos ciclos de umedecimento e secagem do solo que, apesar de intensificar os processos de biodegradao da frao mais lbil da matria orgnica, favorecem a polimerizao dos ncleos aromticos de certos compostos hmicos, os quais sofrem, ao contrrio, uma estabilizao. Comparando o hmus de solos desenvolvidos sob diferentes condies tropicais, Dabin (1981) concluiu que os processos de condensao e mineralizao secundria so dominantes em regies de clima tropical com estao seca bem definida, ocorrendo, sobretudo em solos argilosos. Por outro lado, Volkoff & Cerri (1980), constataram que o hmus da regio semirida do Nordeste, com estao seca bem definida, apresentou pequena evoluo por policondensao, o que poderia estar relacionado durao demasiadamente longa (7 a 8 meses de estao seca) e aos ndices pluviomtricos extremamente baixos, caractersticos desta estao na regio, estabelecendo assim uma condio desfavorvel atividade microbiana. Avaliando posteriormente as variaes da relao E4/E6 da matria orgnica de solos de diferentes regies climticas do Brasil, Volkoff & Cerri (1988) identificaram a ocorrncia de dois estados distintos de condensao dos cidos hmicos: a) grandes molculas frouxas em solos cidos bem drenados, sob floresta na regio amaznica e; b) pequenas molculas densas em solos sob cerrado, solos da regio semi-rida, solos saturados e solos hidromrficos temporariamente inundveis na regio amaznica. Calagem, fertilizao orgnica e substncias hmicas. A calagem exerce importante papel na correo de solos cidos e desta forma interfere tambm na dinmica das substncias hmicas. Em solos submetidos calagem normalmente observada diminuio do contedo da frao cidos hmicos. A diminuio do contedo de cidos hmicos pode estar relacionada diminuio do contedo de alumnio trocvel com a calagem, pois a calagem diminui as formas de alumnio trocvel e aquelas associadas com as molculas orgnicas alm de aumentar o contedo de clcio associado matria orgnica (Mendona & Rowell, 1994). Por esta razo, ela promove desestabilizao das molculas orgnicas, tornando-as mais susceptvel ao ataque microbiano, pois os complexos de clcio
75

com a matria orgnica so mais instveis que aqueles com o alumnio (Canellas et al., 1999). A reduo no contedo das fraes cidos flvicos e hmicos em um Latossolo Vermelho plantado com citrus, com o uso da calagem foi observada por Silva et al., (2000). A diminuio nos contedos de cidos hmicos pode estar relacionada presena de xidos que so abundantes nos Latossolos. Em solos tropicais ricos em xidos e caulinita, a frao cidos hmicos pode ser mais facilmente decomposta que a frao cidos flvicos, favorecendo o surgimento de fraes mais reativas e mais facilmente consumida por microrganismos, pois a adsoro da matria orgnica aos xidos influenciada por grupos carboxlicos, mais abundantes nos cidos flvicos, tornando estes cidos mais resistentes decomposio que os cidos hmicos (Mendona, 1995; Lobartini & Orioli, 1996). Em Latossolo Vermelho-Amarelo variao Uma submetido queima e percolao, Arajo et al. (1995) observou que o aumento do pH pode afetar a dinmica as fraes da matria orgnica do solo, favorecendo a mineralizao da frao cidos hmicos. O efeito da adio de vermicomposto de esterco de curral associado calagem nas fraes humificadas da matria orgnica foi estudado por Yagi et al. (2003), que verificaram que o aumento das doses de vermicomposto provocou diminuio da frao cidos hmicos e humina. Por outro lado, aumentos significativos no contedo de cidos hmicos e flvicos em horizontes superficiais de solo (0-20 cm) foram observados por Rosales et al. (1999) com a aplicao de composto, combinado ou no com fertilizantes minerais indicando que a adio de resduos orgnicos ao solo alteram a dinmica da humificao em direes que dependem de uma rede complexa de interconexes das mais diferentes esferas do ambiente que condicionam a atividade biolgica e, portanto a humificao. Fraes humificadas da matria orgnica e sua relao com a fertilidade Os cidos hmicos so considerados um marcador natural do processo de humificao podendo refletir tanto a condio de formao, como de manejo do solo. Solos naturalmente frteis em ambientes temperados apresentam-se mais enriquecidos em cidos hmicos, onde a razo AH/AF maior do que 1. Por outro lado, nos trpicos, valores menores do que 1 tem sido reportado na literatura cientfica (Dabin, 1981; Canellas et al., 2000; Canellas et al., 2003; Cunha et al., 2003b). Neste ambiente, onde a presena de bases trocveis nos solos baixa, devido ao do intemperismo a que estes solos foram submetidos, espera-se uma menor intensidade dos processos de humificao (condensao e sntese) e como conseqncia, menores teores de cidos hmicos (Canellas et al., 2003). Objetivando-se obter informaes sobre a relao entre fertilidade do solo e contedo de cidos hmicos procedeu-se anlise de correlao, Figura 3.3, entre os valores obtidos nos diferentes estudos (Tabela 3.2) para a saturao por bases (V%) e o contedo de cidos hmicos (% relativa do carbono total), quando possvel, das 99 amostras, haja vista que nem todos os trabalhos revisados apresentaram informaes sobre parmetros de fertilidade. A Figura 3.4 indica ausncia de correlao significativa entre o parmetro de fertilidade do solo (Valor V%) e o contedo de cidos hmicos no conjunto de solos estudados. Este comportamento pode ser atribudo ao fato de que classes de solos diferentes tenham entrado juntas na anlise de correlao. Como a humificao um processo ecolgico seu estudo deve ser particularizado. Para verificar este efeito, realizou-se a anlise de correlao com as diferentes classes de solos em separado, por autor, e desta forma os contedos de cidos hmicos extrados com o mesmo procedimento foram analisados conjuntamente. Foram verificadas correlaes
76

r = 0,07
100

Saturao por bases (Valor V%)

80

60

40

20

0 0 10 20 30 40 50

Teor de cido hmico

Figura 3.3. Correlao entre o contedo de cidos hmicos e valores de saturao por bases em diversas classes de solos do Brasil conforme apresentado na Tabela 3.2.

significativas entre teor de cidos hmicos, razo acido hmico/cido flvico e parmetro de fertilidade do solo (saturao por bases, Ca++ e CTC efetiva), Figura 3.4. Com relao a Terra Preta do ndio Souza et al., (2003) estudou a relao entre as fraes das substncias hmicas e atributos de fertilidade, objetivando entender qual frao se correlacionava mais com as propriedades de fertilidade deste tipo peculiar de solo, e observou que apenas a frao cidos hmicos teve correlao com atributos de fertilidade (CTC, Valor S e Ca++), evidenciando a importncia desta frao hmica na fertilidade desses solos. Cunha (2005), tambm verificou estreita correlao entre parmetros de fertilidade do solo e o contedo de cidos hmicos de solos Antropognicos (Figuras 3.4 e 3.5). Verifica-se a partir da particularizao das anlises de correlaes, que h uma ntida relao entre contedo de cidos hmicos e parmetros de fertilidade do solo (Valor V%, CTC efetiva e Ca++). Canellas et al., (2003) verificaram que o aumento dos teores de cidos hmicos, em reas de cana crua e cana com vinhaa, foram acompanhados da melhoria da fertilidade e da qualidade da matria orgnica do solo com aumento do contedo de substncias hmica alcalino-solveis mais condensadas (cidos hmicos). Devido ao fato de que a frao cidos hmicos a que sofre mais alteraes estruturais durante o processo de humificao, estas podem ser utilizadas como indicador da qualidade da matria orgnica do solo (Kogel-Knaber et al., 1988), e poderia ser utilizada como um ndice de fertilidade do solo para sistemas de agricultura orgnica e/ou agroecolgica. Baseado nos dados das correlaes apresentadas acredita-se que a utilizao dos contedos de cidos hmicos ou mesmo da razo AH/AF como indicador da fertilidade do solo, pode representar uma boa ferramenta para avaliao do potencial produtivo dos solos, ou seja, da sua fertilidade fsica e qumica (ndice de fertilidade). Como no possvel obter-se um nvel ideal ou timo, mito menos uma faixa crtica de concentrao esses indicadores devem ser relativos, ou seja, contrastados com as alteraes observadas in loco na matria orgnica do solo e na capacidade produtiva do sistema.
77

r = 0,95
20 18 16

20 18 16

r = 0,92

Calcio trocvel

14

CTC efetiva

14 12 10 8 6 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44

12 10 8 6 4 2 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18

Teor de cido hmico

Teor de cidos hmicos

50 48

r = 0,94

90 80 70 60 50 40 30 20 10

r = 0,87

44

42 40 38 36 34 32 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44

Saturao por bases (v%)

46

CTC efetiva

10

11

12

13

14

15

16

Teor de cido hmico

Teor de cido hmicos

r = 0,92
16

r = 0,95
13

15

12
14

CTC efetiva

12

CTC efetiva
8 9 10 11 12 13 14 15

13

11

10

11

10

8
9

Teor de cido hmico

7 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5

Teor de acidos hmicos

r = 0,94
13

r = 0,77 p < 0,0001

22

Capacidade de troca de ctions (CTC)

1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5

12

20 18 16 14 12 10 8

CTC efetiva

11

10

Teor de cido hmico

15

20

25

30

35

40

Contedo de cido hmico em % relativa do carbono total

Figura 3.4. Correlao entre teores de cidos hmicos e caractersticas de fertilidade (Dados de Volkoff et al.; 1976; Conceio, 1989; Coelho, 1991; Canellas et al., 2003; Cunha, 2005).
78

Figura 3.5. Correlao entre a razo cido hmico/cidos flvico e a capacidade de troca de ctions (Dados de Cunha, 2005).

Manuteno de matria orgnica no solo (estimativa aproximada) O interesse mais sistemtico e intensivo na adubao orgnica foi despertado pela crise energtica mundial de 1973 onde os fertilizantes qumicos, escassos e caros, tornaram-se de difcil acesso a maioria dos pequenos produtores (FAO, 1977). Foi gerada a necessidade de explorar possibilidades de aumento da produo agrcola com menor dependncia dos fertilizantes qumicos. Entre estas possibilidades, incluiu-se a reciclagem de nutrientes das plantas pela devoluo dos restos das lavouras assim como aporte de compostos e resduos produzidos nas propriedades e de origem industrial ou urbana. No sentido de dar uma noo do quanto formado de matria orgnica estvel anualmente com a adio de diversos resduos orgnicos ao solo segue-se um breve e simplificado roteiro. Assumindo-se que, em termos mdios, entre 1,5 a 2% da matria orgnica estabilizada perdida anualmente via mineralizao, um manejo que vise conservar a matria orgnica do solo deve incorporar anualmente essa quantidade perdida na forma de resduos orgnicos. O modelo que se segue para incorporao de matria orgnica humificada ao solo foi proposto por Labrador Moreno (1996). A partir daqui segue-se uma sntese desse trabalho. Durante a sua evoluo os resduos orgnicos sofrem uma srie de processos pelos quais parte de seus componentes se mineralizam e outra parte se transforma em compostos orgnicos de natureza e complexidade distinta que constituem o hmus do solo. A quantidade de hmus formada em um ano corresponde a:

MOhumificada = K 1 x MOaportada
A relao que caracteriza esse dinamismo chamada de coeficiente isohmico K1 que depende essencialmente, mas no exclusivamente do material orgnico adicionado. De um modo geral quanto maior a quantidade de lignina no material maior a quantidade de hmus formado e quanto maior a quantidade de carboidratos e compostos nitrogenados maior ser a mineralizao. Algumas ordens de magnitude para os valores de K1 se encontram na Tabela 3.4.
79

Tabela 3.4. Valores mdios do coeficiente resduos orgnicos. resduo Esterco de curral curtido Esterco fresco com palha Composto de lixo urbano Palhas (secas)/resduos de colheita Adubo verde
Adaptado de Labrador Moreno (1996)

isohmico (k1)e massa seca de alguns K1 0,40 0,25 0,25 0,15 0,08 Massa seca (%) 25 20 20 80 20

O coeficiente K1 foi definido como a constante de transformao da matria seca aportada e por isso conveniente efetuar os clculos de reposio de matria orgnica em base da matria seca.
H = r .o. x MS x K1 100

onde H a quantidade de hmus gerado pelos resduos adicionados; r.o. quantidade de resduo adicionado em kg ha-1; MS a matria seca dos resduos e K1 o coeficiente isohmico especfico. Assim o aporte de uma tonelada de esterco bem decomposto que contm cerca de 25% de matria seca e com um coeficiente isohmico de 0,40 proporcionar um acrscimo de kg de hmus no solo.
H = 1000 kg ha 1. x 25 x 0,40 = 100 kg ha 1 100

Como se pode observar a quantidade de hmus estvel formado baixa, mas apresenta uma influncia intensa e expressiva no desenvolvimento biolgico (como se ver na unidade seguinte). As perdas de matria orgnica ocorrem naturalmente atravs do processo de mineralizao. As taxas de perda variam geralmente entre 1 e 2% da matria orgnica do solo. Essa taxa de mineralizao secundria ou coeficiente K2 ao contrrio do coeficiente isohmico (K1) depende mais de fatores do ambiente tais como temperatura mdia, precipitao pluviomtrica, pH, contedo de bases do que da qualidade do resduo orgnico. possvel estimar as perdas de matria orgnica, atravs de um clculo simplificado: Considerando i) um solo com 2% de matria orgnica, com uma densidade de 1,5 Mg m3 e uma camada de 0,2 m de profundidade: 10.000 m2 x 1,5 Mg m3 x 0,20 m x 0,02 = 60 Mg de matria orgnica por ha ii) uma perda mdia de 1,5% de matria orgnica por ano: 60 Mg * 0,015 = 900 kg de matria orgnica perdida por ha em um ano. As perdas de matria orgnica podem, ento ser estimadas pela equao: P = prof x densidade x m.o. x K2 onde P corresponde s perdas de matria orgnica em kg/ha; prof= espessura da cada de solo em metros; densidade= densidade do solo em Mg m3 e K2= taxa de mineralizao mdia. Assim, para atender as necessidades de recomposio de matria orgnica nesse exemplo terico necessrio adicionar o correspondente a 9 Mg de esterco curtido/ha, ou 7,5 Mg de palha/ha ou ainda 56 Mg de adubo verde/ha. Esse clculo aproximado tem as suas vantagens de servir como um guia geral, mas desconsidera os processos locais que devem necessariamente ser acompanhados na propriedade e recalibrados para uma atuao local.
80

c a p t u l o
A energia e as substncias hmicas1
Nelson Garcs Prez Vitali Savich

A primeira parte desse trabalho apresenta uma sntese sobre o sistema de conceitos e expresses da termodinmica e da termoqumica aplicada s reaes qumicas. A segunda trata dos aspectos ligados energia das substncias hmicas do ponto de vista de sua formao e evoluo sob a tica da primeira, ou seja, da termodinmica. No objeto da primeira parte um tratamento exaustivo da termodinmica, do equilbrio, dos potenciais qumicos, das dissolues e as expresses particulares das funes termodinmicas nessas condies. Por essa razo, sugerido pelos autores, para a necessria ampliao dos conhecimentos nesses assuntos, que se busque a leitura de material mais especializado sobre a termodinmica, com o objetivo de ajudar na compreenso dos trabalhos que abordam o sistema solo e as substncias hmicas sob tal ponto de vista. Trata-se do primeiro texto em portugus com essa abordagem e algumas das interpretaes dos resultados no concordam necessariamente com as de outros autores. Essa situao favorvel para o aprofundamento do tema, uma vez que a confrontao das idias faz com que o conhecimento se aproxime mais da realidade do fenmeno substncias hmicas. A abordagem energtica das substncias hmicas a base da compreenso do sistema. A interao da matria com a energia d origem s propriedades espectroscpicas dos corpos materiais, objeto de estudo dos prximos captulos. Introduo A forma qumica de movimento dos sistemas materiais caracterizada pela variao no tipo das espcies atmicas, pelo nmero e posio dos tomos e das molculas que interatuam, pela evoluo da energia nessas interaes e, ainda, pela velocidade de suas transformaes no tempo. O modo do movimento intramolecular est ligado a processos qumicos que podem se manifestar como: excitao eletrnica, vibraes de ligaes, rotao de ncleos, vibraes da molcula, ionizao etc. Essa interao com a energia a base do uso das espectroscopias de ultravioleta-visvel, infravermelho, ressonncia nuclear magntica e espectrometria de massas que sero abordadas nos captulos seguintes. Por ora, ser visto que o processo qumico mais simples, a dissociao trmica, produzido quando ocorre o aumento na intensidade das vibraes (amplitude e freqncia) numa molcula. Especialmente as vibraes dos ncleos ao longo da ligao de valncia entre eles que, ao alcanarem uma certa magnitude crtica de energia de vibrao na direo de uma determinada ligao na molcula, produzem a ruptura dessa ligao e
1 O texto foi traduzido do original em espanhol para o portugus por L.P. Canellas que assume a responsabilidade pelos eventuais equvocos. A estada do prof. Garcs no Laboratrio de Solos da UENF foi promovida pelo CNPq.

81

a sua separao em duas espcies independentes. Esse fenmeno denominado movimento fsico de oscilao. Reaes mais complexas, nas quais participam vrias molculas, podem ser consideradas a unio eventual entre elas, ocorrendo um choque das mesmas, o que constitui um complexo pouco estvel e de vida curta, denominado, geralmente, complexo ativado. Este complexo pode transitar por dois caminhos: a) constituir uma nova espcie mais complexa e estvel, b) separar-se novamente nas espcies de partida sem que tenha ocorrido uma reao, ou ainda c) separar-se em novas espcies nas quais ocorreram mudanas ao desenvolverem-se trocas de parte de seus componentes por meio da ruptura e estabelecimento de novas ligaes. Dessa forma, o processo qumico elementar resulta do movimento da (ou das) espcie(s) qumicas (tomos, ons e molculas) quando se manifestam as trocas de energia, de massa e de posio no espao e no tempo. Para a transformao qumica dessas massas considerveis de susbtncia constituda por quantidades de um conjunto de molculas, so necessrios choques entre as molculas e uma troca energtica entre as mesmas. Dessa forma, o processo de reao qumica real est intimamente ligado segunda forma de movimento fsico: o movimento catico dos corpos macroscpicos, denominado movimento trmico. Existem tambm outras manifestaes do movimento qumico, tais como, a radiao eletromagntica, a interao de campos magnticos fracos, a interao de pequenos campos eltricos, a ionizao de tomos e das molculas, os efeitos particulares dos sistemas enzimticos em que molculas com caractersitcas especiais acopladas a sistemas de alta energia molecular provocam processos qumicos em condies aparentemente adversas com grande eficincia, sendo essas a base da vida na Terra. possvel observar que as formas do movimento qumico sempre aparecem associadas a elementos do movimento fsico, tal como deve ocorrer no mundo material, onde todos os sistemas esto integrados e interatuam entre si. Ns separamos os sistemas com o fim de compreend-los e estud-los at conhecermos sua essncia e podermos formular princpios e leis. Estamos ento diante da necessidade, no caso particular das susbtncias hmicas (do solo, do composto, das guas, das rochas sedimentrias depositadas em estruturas geolgicas antigas ou que preparamos para nutrir ou bioestimular as plantas ou os cultivos de microrganismos), de estudar os processos energticos que ocorrem na sua formao, transformao, propriedades e desaparecimento, com o objetivo de caracterizar melhor essa parte do universo material. Elementos da termoqumica A termodinmica relaciona as propriedades da matria com um conjunto, a partir do seu comportamento fsico e qumico. A sua prevalncia como mtodo de anlise est em funo de no serem feitas suposies sobre a estrutura molecular da matria. So avaliadas as trocas macroscpicas observveis, sendo desnecessria qualquer suposio sobre a natureza atmica ou molecular dos mesmos, i.e., das trocas microscpicas que podem haver ocorrido ou estar ocorrendo. Tampouco a termodinmica se ocupar com a velocidade dos movimentos materiais, i.e., com as trocas no tempo. O arrazoado termodinmico est baseado em trs leis e as duas primeiras tm um contedo diretamente aplicvel em nosso trabalho profissional: - A energia do universo constante, no se cria nem se destri; - A entropia do universo est aumentando (teoria do Big Bang e da expanso do universo).
82

As leis da termodinmica so derivadas da experincia cotidiana e dos experimentos que se realizam em nosso planeta, aos quais se somam as observaes do nosso sistema solar e de outros sistemas do universo. Essa comprovao acumulada de muitos anos permite operar, com um sistema de conceitos, leis e suposies matemticas, com grande confiana e certeza obtendo-se resultados diretamente aplicveis a nossa prtica social e cientfica. Posto que o contedo desse texto no vai abarcar a produo material, nem todos os casos de transferncia de energia na forma de calor ou da evoluo de um trabalho, seno somente o estudo de reaes qumicas e a avaliao de alguns sistemas qumicos mais complexos, ns reduzimos o campo geral da termodinmica ao tratamento que nos brindar a sua particularizao na Termoqumica, a qual, definitivamente, est fundamentada pelos logros obtidos do conhecimento da termodinmica (Glasstone 1975, Guerasimov et al. 1971, Kireev 1969, Yavorski & Detlaff, 1988). Sistema, estados de um sistema, funes de estado A termodinmica e, por extenso, a termoqumica estudam os processos que ocorrem numa parte do universo com o objetivo de controlar os parmetros sob os quais se realiza o estudo e evitar as perturbaes. Essa parte do universo denominada sistema, definindo-se processo, como a srie de trocas e interaes que podem ocorrer entre os componentes dessa parte isolada do universo, ou seja, isolada do exterior, i.e., do resto do universo. uma definio ampla que pode ser ilustrada apesar de sua enorme diversidade. Assim, um sistema pode ser organizado num laboratrio, criando-o por meio de um recipiente onde acontecem as reaes; numa biofbrica, o sistema pode ser formado pelos frascos que contm uma plntula em desenvolvimento; num laboratrio farmacutico, pelos reatores, onde se produz uma vacina ou um cultivo de microrganismos. Num objeto natural, pode ser uma parte de um solo, em seu meio, e trazido a fim de imit-lo para o seu devido estudo. A sala de conferncia de uma universidade, constituda pelas paredes, cadeiras, equipamentos, meio de ensino etc um exemplo de sistema. Os sistemas podem estar limitados no espao por um recipiente, uma envoltura ou um limite real ou imaginrio; to ideal quanto convenha ao estudo. Este limite que contm o sistema pode adotar qualquer forma, ser fixo ou mvel, e ainda permitir ou no trocas do universo interior com o universo exterior. Surgem ento vrias possibilidades: - Se os limites no permitem absolutamente nenhuma interao com o exterior, o sistema denominado sistema isolado. - Se os limites permitem a troca de energia com o exterior, mas no a troca de massa, denominado sistema fechado. - Se os limites permitem a troca de energia e de massa com o exterior, denominado de sistema aberto; - se os limites no permitem a troca de energia com o exterior, denominado sistema fechado e adiabtico; -Se os limites permitem a troca de energia com o exterior, mas somente de energia na forma de calor o sistema denominado sistema fechado diatrmico; - possvel tambm que o sistema de estudo conserve uma presso interna constante, e nesse caso, ser denominado sistema isobrico. Quase todos os estudos da termodinmica e da termoqumica que aparecem na literatura referemse a sistemas isolados e fechados, posto que so mais simples de serem tratados. Entretanto, tm sido desenvolvidos mtodos que permitem, apesar de sua complexidade, tratar os sistemas abertos
83

de processos irreversveis. Os sistemas, em sua constituio interna, podem ser homogneos ou heterogneos. So homogneos os que no tm superfcie de separao entre os seus elementos constituintes e, heterogneos os que apresentam esta separao. Exemplos que ilustram sistemas homogneos so o conjunto de gases que podem estar contidos nos poros do solo ou num recipiente de laboratrio, onde esses gases podem reagir. Enquanto um sistema heterogneo pode ser representado pelo conjunto de componentes que formam uma amostra de solo onde coexistem argilas, gua e dixido de carbono. Em alguns casos, a homogeneidade ou heterogeneidade est relacionada com a existncia de diferentes fases fsicas dentro do sistema. Isso se refere presena dos estados slido, lquido e gasoso (os mais freqentes). Um sistema pode ser tambm heterogneo quando existe um mineral primrio ao lado de um mineral secundrio, ambos slidos, embora possuam composio diferente e estrutura com superfcies de contato bem delimitadas. Os sistemas podem tambm ser uniformes ou no uniformes. So sistemas uniformes os que em todos os pontos, tm a mesma composio e no uniformes so os que possuem composio varivel em suas partes componentes. A caracterizao de um estado termodinmico de um sistema pode ser representada mediante avaliao de algumas propriedades. Estas so as variveis de estado ou parmetros de estado, uma vez que, ao variarem as propriedades, o estado do sistema alterado e, por esta razo, so normalmente utilizadas para descrio do estado de um sistema. As variveis de estado que se utilizam para a descrio inicial de um sistema depende da complexidade do mesmo. Para determinar o estado de um sistema simples tal como os homogneos, cuja massa e composio no variam com o tempo, suficiente conhecer a presso P, o volume V e a temperatura T. Em sistemas mais complexos, dependendo de suas caractersticas, podem exigir o conhecimento da concentrao, da massa, da carga eltrica, do potencial eletrosttico, da intensidade do campo magntico e outros. As variveis independentes ou de estado podem, por sua vez, ser classificadas de intensivas ou extensivas, de acordo com a independncia ou dependncia da massa da substncia com a qual se trabalha.

radiao trmica

sistema isolado (a)

qualquer outra radiao

radiao trmica

sistema isolado diatrmico (b)

massa massa

massa

sistema aberto (c)

radiao trmica

Figura. 4.1. Ilustrao de um sistema (a) isolado, que no troca massa nem energia com o meio exterior; (b) fechado troca de massa, mas que pode trocar calor; (c) aberto, que troca massa e energia.
84

- So propriedades intensivas ou independentes da massa: a presso, o ndice de refrao, a temperatura, a densidade, o volume especfico, a capacidade calrica especfica, entre outras. - So propriedades extensivas ou dependentes da massa: o volume, a capacidade calrica, a intensidade do campo magntico, entre outras. As funes de estado, como funes das variveis independentes, so: a energia interna E, a entalpia H, a entropia S, e a energia livre G ou F. Elas podem variar e, por sua vez, com essa variao, influir na magnitude que assumem as demais propriedades. Somente dependem do estado inicial e final do sistema e so independentes do caminho seguido no processo.

Figura. 4. 2: Representao de um sistema nos estados I (de partida) e II (de chegada) com trs processos ou caminhos possveis para a transformao irreversvel

Isto significa que quaisquer das funes de estado podem ser calculadas por meio de: X = X2 X1 (1) Da, num processo cclico que regressa ao estado de partida, a variao de qualquer funo zero. Os processos termodinmicos podem ser produzidos de forma reversvel ou irreversvel. Os processos reversveis ocorrem muito lentamente. Em equilbrio permanente com o meio que o rodeia, cada varivel de estado e as funes de estado correspondentes s variam de forma infinitesimal. Assim, possvel retornar ao ponto de partida sem que ocorram mudanas. Este conceito o que permite enunciar as condies de equilbrio qumico de um sistema. Os processos irreversvel ocorre em pouco tempo, no conserva o equilbrio com o meio e, como o nome indica, uma vez que ocorre no pode retornar ao estado inicial de onde partiu. Na natureza s existem processos reversveis aparentes ou no verdadeiros. Tais processos podem se aproximar tanto quando possvel aproximar de um processo reversvel ideal, porm sempre existir alguma diferena entre o sistema de partida e o sistema de chegada. O equilbrio no qual o processo e a transformao qumica que se supe perfeitamente reversveis ocorrem, na verdade, so tratados como parcialmente reversveis, conforme o tratamento matemtico ao estudo dos sistemas em equilbrio aparente. A energia O movimento a forma de existncia dos sistemas materiais. Se no h movimento, no h matria. Isso comprovado ao observarmos qualquer ponto do Universo. A energia a medida do movimento da matria. A energia no criada nem destruda e isso implica em movimento permanente e que as mudanas que podem ocorrer so de intensidade ou de capacidade. A intensidade vir pela magnitude do movimento e a capacidade pelo tipo de movimento (fsico, qumico, biolgico, social etc.). O movimento adota formas peculiares. Para cada uma dessas formas, o homem tem criado um sistema de medidas. Os sistemas materiais ao interagirem entre si podem trocar massa e energia e a energia trocada
85

possui caractersticas que so definidas pelo sistema de origem. De modo que, ao incorporar-se a outro sistema material, seu estado alterado eadquirem parte das propriedades ou a informao do sistema do qual procedem. Dessa forma, com a multiplicidade cada vez maior e mais complexa de interaes, produz-se a unidade do mundo material em contnuo desenvolvimento. A transmisso do movimento, como troca de energia, pode ser a priori agrupada em dois grupos: 1. O movimento transmitido por meio de choques caticos de espcies atmicas ou moleculares de corpos em contato ou de forma de energia, como as radiaes eletromagnticas, provocam um efeito similar. A energia transmitida dessa forma denominada energia calrica e a forma de medir este movimento. 2. O movimento transmitido diretamente s massas de corpos que interatuam por ao de fatores externos ou internos, como so os campos gravitacionais, os campos magnticos ou eltricos, as mudanas de volume pela de troca de massa, de temperatura ou de presso etc. A medida dessa energia o trabalho que se realiza sobre o sistema. Assim, o movimento ou a energia trocada do ponto de vista da termodinmica o trabalho, que a energia transmitida, produto da interao direta entre os sistemas, enquanto o calor a transferncia de energia devido a existncia de diferenas de temperatura entre os sistemas. Nenhum desses parmetros energticos so funes de estado, uma vez que dependem dos caminhos seguidos do estado inicial at o estado final do sistema. A unidade de energia no Sistema Internacional de Unidade o Joule, cujo smbolo J definido por: J= N m J = m2 kg s-2 Ainda que sejam reportados, em muitos textos e produtos no mercado, dados de energia em calorias ou ainda em quilocalorias, a converso entre estas unidades : 1 cal = 4,1868 J a caloria internacional 1 cal = 4,184 J a caloria termoqumica Energia interna: primeiro princpio da termodinmica A energia interna dos sistemas termodinmicos definida pelo somatrio de todas as energias do sistema material, que contempla desde a energia das massas constitutivas das partculas ou corpos dos sistemas at as energias de ligao entre essas partculas e corpos, tais como: os campos nucleares, os campos das estruturas eletrnicas, as energias de ligao, as energias de organizao dos corpos macroscpicos, as energias de vibrao, rotao e translao das molculas, tomos etc. Porm, no se leva em considerao a energia cintica do corpo em seu conjunto nem a energia relativa sua posio no espao. desse modo, a determinao da magnitude real da energia interna de um sistema uma tarefa quase impossvel, de forma que nunca se reporta a esse tipo de dado em nenhum sistema, apenas pode ser medida a troca de energia interna de um sistema quando o mesmo sofre um processo. A energia interna definida por: E=QW (2) E esta a formulao geral do Primeiro Princpio da Termodinmica, segundo o qual a energia no se cria nem se destri, somente se transforma. Na equao, pode-se observar que o contedo total de energia de um sistema material representado por E igual a Q o calor cedido ou tomado pelo sistema menos o trabalho realizado pelo mesmo. Descreve-se o processo como um fluxo por meio de duas formas de energia.
86

A energia interna, como funo de estado, pode ser calculada pela diferena do estado final menos o estado inicial, de forma que: E = E2 E 1 = Q - W (3) Por definio, E2 sempre maior que E1 e a energia interna cresce e positiva, caso contrrio seria negativa. O calor absorvido pelo sistema marcado com sinal positivo, enquanto o calor cedido descrito pelo sinal negativo. Todo processo ou reao qumica que emite calor ou perde calor denominado exotrmico, enquanto todo processo que absorve calor ou retira calor denominado endotrmico. O trabalho pode ser realizado pelo sistema at o meio exterior ou pode-se realizar o trabalho sobre o sistema a partir do exterior. Quando o sistema realiza trabalho, assinalado com um sinal positivo e quando recebe trabalho assinalado com um sinal negativo. Quando um sistema realiza uma transformao qumica, o trabalho relacionado a essa mudana quase sempre implica uma variao na presso e no volume, dessa forma:
W =

V2

(4)

V1

PdV

E = Q PdV
V1

V2

(5)

Este o caso de um sistema aberto em que se pode variar a presso e o volume Como o subsistema da matria orgnica no solo aberto (tanto como o solo todo o ), as trocas de energia interna que ocorrem esto muito mais relacionadas com a evoluo do calor que com as mudanas de presso e de volume, supondo que estas mudanas ocorrem sobre ou dentro de fases lquidas e/ou slidas, segundo a literatura que se refere aos solos ou que s fontes de substncias orgnicas que vo determinar a formao do hmus. Isso nos permite realizar uma aproximao: a contribuio do calor Q muito maior que a do trabalho W e, por essa razo, a determinao dos calores de reao, seja de formaoseja de decomposio, ser um dado muito importante para a aproximao das trocas de energia interna do sistema. Se quisermos aproximar a determinao de trabalho de estruturao de uma macromolcula das substncias orgnicas e do hmus e ainda indicar sua influncia sobre o meio ao seu redor, haveria que se levar em conta, entre outros dados, a estabilizao fsico-qumica da molcula, a estabilizao frente ao ataque dos microrganismos, a estabilizao mtua com a fase inorgnica, a maior ou menor solubilidade da macromolcula formada, o volume de solvatao ocupado na soluo do solo, tanto ao constituir-se como hidrolizar-se ou romper-se por reao dos microrganismos. Enfim, uma tarefa bem difcil pela quantidade de fatores e de interaes que ocorrem. No entanto, se a reao ocorresse num recipiente ou num meio fechado (um micro-poro dos minerais primrios ou secundrios do solo), no qual o volume permanece constante, poderamos considerar ento:
E = Q PdV
V1

V2

V2 - V 1 = 0

(6)

W=0

E = QV

(7)
87

Como se v, nessas condies, a variao de energia interna igual ao calor evoludo em volume constante. O problema : onde e como se formou determinada substncia orgnica que estvel no solo? Daqui, poderemos ento partir para calcular esse parmetro no sistema estudado. Entalpia A maioria dos processos na natureza ocorre presso constante. Dos processos que o homem desenvolve nos laboratrios e nas indstrias, uma grande parte tambm se realiza presso constante. Quando, num processo, evolui uma quantidade de calor nessas condies, diz-se que esse calor Qp, representando a condio na qual o processo evoluiu. Esta condio evidentemente diferente da existente quando obtivemos Qv. Se tomarmos a eq.5 e aplicarmos a condio de presso constante, obteremos:
E = Q PdV
V1

V2

P = cte. (8) (9) (10) (11)

E = Q P dV
V1

V2

E = Q p P (V2 V1 ) E = Q p P V Q p = E + P V

Isso quer dizer que o calor evoludo presso constante igual a variao da energia interna mais o parmetro da presso, multiplicado pela variao do volume. O parmetro E + P V reconhecido como a Entalpia do sistema representado por H.
H = E + PV
H E
e (12) (13)

H = E + P V Q p

A entalpia do sistema uma funo de estado que depende somente dos estados inicial e final. Nas condies descritas, a variao da entalpia igual a evoluo do calor presso constante. Os sinais com que se identifica a entalpia nos processos so os mesmos que se utilizam com o calor, i.e., se um processo exotrmico e cede calor para o sistema, a entalpia negativa; se um processo endotrmico e toma calor para o sistema, a entalpia positiva. A energia interna e a entalpia dos sistemas so diferentes porque o parmetro D(PV) est presente na sua relao, assim: (14) H = E + (PV )
Entretanto, a reao na qual intervm somente lquidos e slidos sofre uma mudana de volume muito pequena, devido ao fato de que a densidade de todas as substncias condensadas que contm os tomos so similares (caso do hmus). Se as reaes so efetuadas, a presso relativamente baixas como a presso de 1 atmosfera (1013 hPa), (PV) pode-se, sem grandes erros indicar que :

Se, ao contrrio, na reao produzem-se ou consomem-se gases, H e E podem ser muito diferentes, posto que para os gases ideais:
PV = nRT
88

H E

(15)

(16)

(PV ) = nRT

(17)

Ento, a partir da eq.14:

H = E + nRT

(a temperatura constante)

(18)

De acordo com a anlise anterior, dispomos das possibilidades para calcular tanto H como E, na dependncia das condies de existncia do sistema ou do processo que se desenvolve. Se, de outro modo, oferecida a possibilidade de que o processo de formao ou decomposio do hmus ocorra presso constante em fases slidas ou lquidas, podemos, a partir do calor evoludo presso constante, calcular com um erro relativamente pequeno, tanto H como E desse sistema similares.

Figura 4.3. Variao da entalpia de um sistema ao realizar o processo de transformao de reagentes em produtos. esquerda, um processo endotrmico e direita, um processo exotrmico.

De acordo com o que se observa na Figura 4.3., a variao de entalpia pode ser calculada por meio de:
H = H 2 H1
(18)

Se H2 e H1 representam a entalpia total dos produtos e dos reagentes, ento devemos desenvolver a somatria das entalpias de cada substncia componente do sistema para calcularmos o calor total da variao, mas isso veremos mais adiante. Termoqumica A termoqumica, como um ramo particular da termodinmica, trata das mudanas de energia que ocorrem nas reaes qumicas. Os dados termoqumicos se expressam a partir e em relao com a equao qumica corretamente escrita em cada um de seus componentes, ajustada ao nmero de moles que participam dela. Usualmente utiliza-se a variao da entalpia padro (ou tipo), representada por H. Esta a variao da entalpia do sistema, quando os reagentes em seu estado padro so convertidos em produtos tambm em seu estado padro. O estado padro de uma substncia a sua forma mais estvel presso de 1013hPa e temperatura de 298,15 K (25C). Para a reao que representa a formao da gua, teremos: H2(g) + O2(g) = H2O(g) Hf = - 241,8 kJ mol-1 E significa que, quando, um mol de diidrognio gasoso combina com meio mol de dioxignio gasoso, transformando-se em um mol de gua gasosa, liberando 241,8 kJ de calor. A variao da entalpia de formao molar padro de uma substncia representada por Hf em que o sub-ndice f assinala que a reao de formao ocorreu a partir de substncias simples em
89

seu estado padro e foi obtido um mol do produto. Por conveno, a entalpia de formao molar igual a zero nas substncias simples em seu estado padro. Tal como no caso do oxignio na reao anterior. 2 O (g) = O2 (g) Hf = 0,0 kJ mol-1 Ainda que falemos com propriedade, no correto assinalar o valor de 0,0 para esse calor de reao. Pode-se calcular tambm a entalpia de reao de qualquer substncia, conhecendo-se os dados das entalpias de formao (fornecidos para muitas substncias na Tabela 3.1) pela expresso:
0 H 0 = p H 0 f ( p ) r H f (r )

(19)

onde o somatrio do lado esquerdo da equao representa os produtos e o somatrio do lado direito, os reagentes. O termo n o coeficiente estequiomtrico de ajuste dessa substncia na equao qumica. Nesse caso, o smbolo DH corresponde a uma reao qumica em geral, que pode ser de combusto, de hidratao, de sntese, de ionizao e etc. Um exemplo de aplicao pode ser: CH4(g) + 2 O2(g) = CO2(g) + 2 H2O (l) que necesitamos para se conhecer o calor de reao que, nesse caso, a combusto completa do metano. Procurando na Tabela 4.1., encontramos os calores de formao das substncias reagentes e dos produtos: Hf CH4(g) = - 74,9 kJ mol-1 Hf O2(g) = 0,0 kJ mol-1 Hf CO2(g) = - 393,5 kJ mol-1 Hf H2O(l) = -285,8 kJ mol-1 Aplicando-se a eq.19, obteremos: Hc = [(1 . - 393,5) + (2 . 285,8)] - [(1 . - 74,9) + (2 . 0,0)] Hc = - 890,2 kJ mol-1 Isto , a entalpia de combusto do metano foi calculada a partir dos calores de formao de cada substncia presente na equao qumica, que representa a combusto. Leis termoqumicas So denominadas leis termoqumicas os dois enunciados, um de Lavoisier (1780) e outro de Hess (1836). O primeiro enunciado diz: o calor evoludo por uma reao qumica numa direo igual, mas de sinal contrrio ao calor evoludo na direo oposta. Como se v, essa assuno contm o princpio da conservao da energia. Dessa forma, vlido:
Hdireta = Hinversa

Ilustrando este processo H2(g) + I2(g) = 2 HI(g) Hdireta = 26,6 kJ mol-1 2HI(g) = H2(g) + I2(g) Hinversa = - 26,2 kJ mol-1 Esta Lei justifica a assuno que faremos, ao calcular o calor de formao de uma parte da macromolcula que aparece nas Figuras 4.4 e 4.5, no sentido de que para mineralizar a mesma, seja necessrio fornecer a mesma quantidade de energia cedida ao formar-se, mais a energia dos demais

90

processos mencionados. A segunda lei termoqumica ou lei de Hess enuncia que o calor que intervm numa transformao qumica o mesmo, tanto se a reao se processa numa s etapa, como se ela realizada em vrias etapas. Essa assuno permite tratar as equaes das reaes qumicas como equaes matemticas. Isto particularmente til quando as determinaes das entalpias de reaes em laboratrio se tornam difceis, seja por falta das substncias ou dos meios adequados, posto que, neste caso, fazendo-se uso de raes j conhecidas e estudadas, pode-se estruturar teoricamente uma seqncia de reaes que conduzem reao buscada. Ao somar-mos as entalpias conhecidas obteremos a entalpia desejada. Vejamos um exemplo: Se deseja conhecer o calor de reao (formao) do metano, observe a seguinte reao: C(s) + 2H2(g) = CH4(g) H = ?? E dispomos das seguintes reaes de combusto: CH4(g) + 2O2(g) = CO2(g) + 2H2O(l) Hc = -890,2 kJ H2(g) + O2(g) = H2O(l) Hc = -285,8 kJ C(s) + O2(g) = CO2(g) Hc = -393,5 kJ Nessas reaes, procedemos da seguinte forma: invertemos a primeira e conservamos a segunda e a terceira na mesma direo, mas na segunda n, multiplicam-se os dois membros por 2 e, em seguida, procedemos soma das equaes e obtemos:
CO2 (g) + 2 H2O (l) = CH4 (g) + 2 O2 (g) 2 H2 (g) + O2 (g) = 2 H2O (l) C (s) + O2 (g) = CO2 (g) C (s) + 2 H2 (g) = CH4 (g) Hc = 890,2 kJ Hc = -571,6 kJ Hc = -393,5 kJ Hf = -74,9 kJ

___________________________________________________

Dessa forma, se for realizado um trabalho meticuloso com as milhares de publicaes sobre substncias hmicas, nas quais se descrevem reaes e energia, possvel comear a aproximarse de representaes e clculos energticos que nos informem com mais detalhes sobre os processos que ainda no podemos criar ou estudar. Capacidade calrica A capacidade calrica de uma substncia a quantidade de calor necessrio para elevar em um grau Celsisus ou Kelvin um mol da substncia. Posto que o calor no uma funo de estado, a quantidade de calor necessrio para produzir uma mudana depende do caminho que o processo segue. Por isso, utilizam-se diferentes tipos de capacidade calrica, isto , Cp capacidade calrica presso constante e Cv capacidade calrica a volume constante, cujas definies so:
Cp =
Cv =

dQ p dT

dH dT

dQv dE = dT dT

A quantidade de calor necessria para mudar a temperatura de n moles de substncia de T 1 at T 2 dada pela equao de Kirchhoff
91

H 2 H1 = n

T2

T1

C p dT

(20)

H 2 H1 = nC p dT = nC p T
T1

T2

(21) (22)

E 2 E1 = n

T2

T1

Cv dT

E 2 E1 = nCv dT = nCv T
T1

T2

(23)

Em ambos os casos, tanto Cp como Cv, so dados por C produtos - C reagentes. Assim, pode-se observar que, conhecendo-se as capacidades calricas de uma substncia sob estudo e a variao de temperatura, pode-se calcular a variao da entalpia ou da energia interna do sistema, os quais se particularizam para Cp e Cv constantes numa faixa de temperaturas de processo seguido pelo sistema (nas eq.21 e 23). Em muitos casos, este clculo se faz necessrio. Por exemplo, ao longo do ano, a temperatura mdia do solo muda de -15 at 35 C em pases de clima temperado e, nos pases tropicais, pode variar de 10-15C noite para 40 C durante o dia. Assim, torna-se necessrio reportar as condies em que se efetuou um clculo ou determinao, com respeito a todo o solo ou a um de seus componentes, tais como, as substncias hmicas. A possibilidade de determinar a influncia da temperatura em sistemas submetidos a condies de mudana do meio o que oferece a equao de Kirchhoff.
Tabela 4.1: Entalpia molar padro de combusto, DHc, de algumas substncias a 298 K e 1013 hPa.
Substncia H2(g) C(grafite) C(diamante) CO(g) CS2(l) S8(rmbico) S8(monoclnico) H2S(g) NH3(g) CH4(g) C2H6(g) C3H6(g) C3H8(g) C4H10(g) C4H8(g) C5H10(g) C5H12(g) C6H12(g) C6H14(g) C7H14(g) C7H16(g) C8H16(g) C8H18(g)
92

Hc em kJ mol-1 -285.8 -393.5 -395.3 -283.3 -1103.8 -2375.2 -2377.6 -562.3 -316.7 -890.2 -1559.8 -2059 -2220.0 -2878.0 -2719 -3418 -3536 -4035 -4145 -4694 -4854 -4597 -5513

Substncia C2H2(g) C2H4(g) C6H6(l) CH2O(g) C2H4O(g) (CO2H)(s) C2H5OH(l) C12H22O11(s) CH3OH(l) CH3CO2H(l) CH3OCH3(l) C2H5OC2H5(l) CH3COCH3(l) CH3CHO(l) C6H5CO2H(s) C2H5OH(l) CH3COCH5(l) C6H5OH (s) CH3CO2C2H5(l) CS2(g) HCOOH(l)

Hc em kJ mol-1 -1299.6 -1411.3 -3267.7 -564 -1191 -246 -1367 -5643.8 -726.5 -874.4 -1454.4 -2762.7 -1786.6 -1168.0 -3227.7 -1366.7 -2252.0 -3052 -2252 -1103 -255

Tabela 4.2: Entalpia (Hf ), Energia Livre

Substncia Al2O3 (s) AlBr3(s) Au(s) Au(OH)3(s) B(s) B4C(s) BCl3(s) BF3(s) B2H6(g) B2O3(s) Br2(l) C(grafite) CCl4(l) CH4(g) C2H2(g) C2H4(g) C2H6(g) C3H6(g) C4H8(g) C4H10(g) C5H10(g) C5H12(g) C6H6(l) C6H12(g) C6H14(g) C7H16(g) C8H16(g) C8H18(g) Hf (kJ mol-1) -1676,0 -526,5 0,0 -418,5 0,0 -62,3 -395,4 -1110 31,4 -1277 0,0 0 -135,4 -74,9 226,8 52,3 -89,7 20,4 1,2 -134,5 20,9 -146,5 -89,7 -41,7 -167,4 19 -82,9 -208,5 S (J mol-1K-1) 50,9 -505,1 47,7 -290 6,7 27,1 209,3 366,6 232,9 54 152,2 5,7 214,4 186,3 200,9 219,5 229,6 267 307,5 310,1 347,7 348,5 229,6 386,1 386,9 352,8 426,9 463,8 Gf (kJ mol-1) -1582,0 184,1 0,0 121,4 0,0 -61,7 -380,4 -1093,5 82,9 -1184 0,0 0 -64,6 -50,8 209,2 68,1 -32,9 62,4 71,5 -18 78,6 8,2 -32,9 87 0,2 122,1 104,2 17,3

A entropia e a segunda lei da termodinmica A segunda lei da termodinmica interpreta a manifestao dos sistemas materiais de incrementarse o que denominamos entropia. Resumidamente, a segunda lei a tendncia dos sistemas materiais do universo a aumentar a sua entropia. Num processo irreversvel, quando evolui a energia calorfera, ocorre que a temperatura dos corpos postos em contato tem magnitudes distintas entre eles. Diz-se ento que a temperatura o fator intensidade do calor e que tem magnitudes particulares em cada corpo. Um processo reversvel desse tipo s pode ser definido, se a temperatura constante, neste caso, a extenso do processo determinada a partir do fator capacidade de calor. A entropia uma funo de estado que atua como fator de capacidade de calor nos processos isotrmicos reversveis. Em relao a alguns processos e fenmenos observados, a experincia humana tem estabelecido critrios sobre a possibilidade de ocorrncia de processos por si mesmos (espontneos) e os limites possveis dos mesmos. Dessa forma, sabe-se que o calor pode fluir espontaneamente s de um corpo de temperatura superior para outro de temperatura inferior, diminuindo a temperatura do primeiro e aumentando a temperatura do segundo. Quando as temperaturas se igualam, o processo cessa e o equilbrio atingido. Esse mesmo processo, porm, em sentido inverso, o que se observa numa nevasca, s que para ter xito (manter temperatura) deve-se gastar energia de uma fonte externa. Se dois recipientes que contm gases so conectados, o fluxo espontneo dos gases de um recipiente para outro ocorre rapidamente somente se as presses de ambos os recipientes forem diferentes. Isso ocorrer at que as presses se igualem e se atinja o equilbrio (a
93

Tabela 4.2: Entalpia ( Hf), Energia Livre (Gf) de formao molar padro e Entropia (S) molar padro de algumas substncias a 298 K e 1013 hPa (continuao)
Substncia CH 2 O(g) C2 H 4 O(g) (CO 2 H)2 (s) CH 3 OH(l) C6 H 5 OH(s) CH 3 CO 2 C2 H 5 (l) CHCl3 (l) C2 H 5 Cl(g) CCl4 (l) C2 H 5 OH(l) C6 H 12 O6 (glicose) CO(g) CO 2 (g) CO(NH2 )2 (l) CO(NH2 )2 (s) CaCO 3 (s) CaF2 (s) Ca 3 N 2 (s) CaO(s) Ca(OH)2 (s) CaSO 4 (s) Cl2 (g) Cl2 O (g) ClO 2 (g) Cl2 O 7 (l) Cu(s) CuO(s) Fe(s) FeO(s) Fe2 O 3(s) H 2 (g) HBr(g) HCN(g) HCl(g) HF(g) HI(g) HN 3 (l) H 2 O(g) H 2 O(l) H 2 O 2 (l) H 2 S(g) HNO 3 (l) H 2 S(g) H 2 SO 4 (l) KCl(s) KClO 3 (s) K2 SO 4 (s) Mg(s) MgCl2 (s) Mg3 N 2 (s) MgO(s) N 2 (g) NH 3 (g) NHNO 2 (s) NH 4 NO 3 (s) N 2 O(s) NO(g) N 2 O 3 (g) Hf (kJ,mol-1) -115,9 -166,4 -826,9 -238,6 -160,7 -463,4 -131,8 -105 -139,5 -227,7 -1273,0 110,5 -393,3 -333,2 -319,2 -1207,0 -1214,6 -431,8 -635,5 -986,6 -1432,7 0 76,6 105,0 251,0 0 -162,0 0 -264,8 822,2 0 -36,3 135,0 -92,3 -270,7 26,6 294,0 -241,8 -285,8 -187,8 -21,0 -174,1 -20,6 -814 -435,9 -391,2 -1433,7 0 -641,1 -461,1 601,8 0 -46,2 -256,0 -365,4 81,6 90,4 83,3 S (J,mol-1,K -1) 218,7 265,7 120,1 126,8 142,3 759,7 201,8 275,4 214 160,7 197,6 213,6 104,6 173,8 88,7 68,9 105,0 39,7 76,1 107 222,9 266,3 257,1 33,2 42,6 27,3 60,8 87,4 130,6 198,6 113,1 186,8 178,7 206,5 328,0 188,7 70,1 109,6 205,8 155,6 205,7 156,9 82,6 143,0 176 31,8 89,9 87,9 26,9 191,6 192,6 151,0 220,3 210,7 307,0 Gf (kJ,mol-1) -110,1 -133,8 -698,1 -166,2 3,2 470,2 -71,6 -53,1 -139 -174,8 -919,5 -137,5 -394,4 -197,2 -203,8 -1127,7 -1161,9 -368,6 -604,2 -896,8 -1320,3 0 94,2 122,3 0 -129,9 0 -244,3 -740,3 0 -95,2 125,5 -95,2 -272,8 1,8 238,8 -228,6 -237,3 -120,4 -33,8 -80,8 -33,6 690,1 -408,0 -289,9 -1316,4 0 -591,6 -400,9 -569,6 0 -16,7 -183,8 104,0 86,7 140,5

94

Tabela 4.2: Entalpia ( H f ), Energia Livre ( G f ) de formao molar padro e Entropia (S) molar padro de algumas substncias a 298 K e 1013 hPa. (continuao)
Substncia N O 2 (g) N 2 O 4 (g) N i(s) N iO(s) O 2 (g) P C l 3 (g) P C l 5 (g) Pb(s) PbO(s) PbO 2 (s) SO 2 (g) SO 3 (g) SnO(s) Zn(s) ZnO(s) ZnS(s) Na(s) N a C l(s) N a C O 3 (s) N a H C O 3 (s) N a O H ( s) N a 2 SO 4 (s) H f (kJ mol-1 ) 3 2 ,9 9 ,6 0 -239,7 0 3 0 6 ,4 -375,0 0 -219,3 -276,6 -296,9 -395,8 -206,0 0 -350,6 -206,0 0 -411 -1131 -947,7 -426,8 -1384,5 S (J,mol-1 K -1 ) 2 4 0 ,4 3 0 3 ,8 2 5 ,1 3 8 ,0 2 0 5 ,1 3 1 1 ,8 3 5 4 ,6 2 7 ,3 6 6 ,1 7 4 ,9 2 4 8 ,2 2 5 6 ,8 5 6 ,5 4 1 ,6 4 3 ,6 5 7 ,7 51 7 2 ,4 136 1 0 2 ,1 6 4 ,2 1 4 9 ,4 G f ( k J m o l-1 ) 51,8 98,4 0 -211,6 0 -206,3 -305,1 0 -189,1 -218,4 -300,3 -371,1 -256,9 0 -320,7 -201,3 0 -384 -1047,9 -852,1 -382 -1266,8

Tabela 4.3 Energias de ligaes qumicas

Ligao C-H C-H C-H C-H C-F C-Cl C-Cl C-Cl C-Br C-I C-C C-C C-C C=C CC C-O C=O C=O CO H-H H-Cl H-Br H-I Cl-Cl Br-Br Li-Li Na-Na K-K Li-H Na-H K-H C (slido) N N O=O M o lcula alcanos alquenos Alquinos, HCN,CHCl3 Benzeno Fuoretos de alquila Cloretos de alquilo CCl4 e CHCl3 COCl 2 Brometos de alquila Iodetos de alquila Alcanos, (CN)2 RCHO, RRCO Anel bencnico Alquenos Alquinos Alcois teres RCHO, RRCO CO 2 CO H2 HCl HBr HI Cl2 Br 2 Li Na K HLi HNa HK vaporizao N2 O2 Energia kJ mol-1 412,96 415,89 402,92 421,33 317,98 317,15 311,29 264,85 197,48 331,79 350,62 487,02 587,85 822,99 333,05 705,84 799,14 1070,27 412,96 431,79 427,19 362,75 295,39 238,91 189,95 74,48 49,37 242,67 196,65 179,49 74,48 523 711,28 493,71 Ligao C-N CN O-H O-H O-F O-Cl O-O S-H S-Cl S=O S-S N-H N=O N O N-N As-H As-Cl As-Br As-I As-As Se-Cl Li-Cl Na-Cl K-Cl Si-Cl Sn-Cl Br-Cl I-B r Benzeno naftaleno COOH COOR Ponte de H Ponte de H Ponte de H M o lcula aminas, nitroalcanos HCN, (CN)2 H 2O Alcois F2O Cl2 O H 2O 2 H 2S S 2 Cl2 SO 2 S 2 Cl2 NH 3 , aminas Nitroalcanos NO N 2O 4 AsH 3 AsCl3 AsBr 3 AsI 3 As4 SeCl2 LiCl. NaCl KCl SiCl4 SnCl2, SnCl4 BrCl IBr aromaticidade aromaticidade cidos steres HFH HO...H H...N...H Energia kJ mol-1 275,73 869,85 457,73 438,06 188,28 204,60 139,33 363,17 297,06 526,77 288,70 384,93 434,72 625,09 177,82 198,74 252,30 216,73 138,49 63,18 246,86 495,80 408,78 424,26 364,01 317,98 217,99 179,08 159,99 313.80 117,15 100,42 41.84 29,29 8,37

95

esse equilbrio seguir um processo mais lento, o da difuso das partculas dos gases at que se alcance a igualdade de potencial de concentrao das espcies entre os dois recipientes). Quando dois corpos eletricamente carregados so unidos por meio de um condutor, a eletricidade flui do corpo de maior potencial at o corpo de potencial menor, o processo se detm quando se alcana a igualdade dos potenciais eltricos, quer dizer, o equilbrio de potencial eltrico. Para cada processo existe um critrio que determina a direo e o limite (o estado de equilbrio) do processo espontneo. Para a transmisso do calor, a temperatura; para o movimento dos gases entre os recipientes, a presso e a concentrao; para o fluxo da eletricidade, o potencial de carga. Todos eles so fatores de intensidade. O fator de capacidade a entropia. Dessa explicao, pode-se derivar a seguinte afirmao: os processos de interao entre as distintas partes de um sistema podem ocorrer espontaneamente na direo que iguala um fator de intensidade para todas as partes do sistema, quando se chega a calores iguais. Esse o limite para o desenvolvimento espontneo do processo nas condies dadas e, dessa forma, atinge-se a condio de equilbrio. Este mtodo no aplicvel aos sistemas uniformes nem s reaes qumicas homogneas. A mudana de entropia pode ser calculada por meio de:
dSrev =

2 dQ rev

(24)

Num processo isotrmico reversvel ou finito:

Srev = Qrev T Qirrev T

(25)

Para um processo irreversvel como Qrev > Qirrev

Srev >

(26)

Quando um sistema est isolado adiabaticamente e Q = 0 ento: S = 0 e S = 0 Qualquer processo espontneo irreversvel at certo ponto, nesse caso, um processo espontneo isolado de acordo com a eq. 26 ter: S > 0 S > 0 Para um sistema isolado, este o critrio termodinmico de um processo espontneo. Um sistema isolado tende espontaneamente a um estado maior de entropia. Quando um sistema nas condies assinaladas efetua um processo espontneo e alcana um estado de equilbrio, o aumento de entropia mximo. A partir dessas consideraes pode-se definir que sempre que a entropia de um sistema aumento seu sinal, ser positivo e, se diminui seu sinal, ser negativo. Conceitualmente, a segunda lei pode ser descrita que num processo reversvel espontneo, a entropia do sistema constante, enquanto que num processo irreversvel espontneo, a entropia do sistema (do universo) aumenta. Ainda que a termodinmica no faa suposies sobre a estrutura da matria possvel a partir de seus conceitos, a explicao da entropia em termos de propriedades moleculares das substncias. O segundo princpio da termodinmica tem um contedo essencialmente da matemtica estatstica que pode ser aplicado com xito a um sistema com grande nmero de partculas, como um conjunto grande de molculas. A probabilidade de que todas as molculas dos gases que constituem o ar que respira-se dentro de uma sala de aula na universidade (um cubo) se movam uniformemente e se situem na esquina superior do cubo, deixando sem ar para
96

respirar leva probabilidade de existirem milionsimos de segundos num tempo quase infinito, isso porque que as molculas animadas de energia cintica, movendo-se caoticamente, estaro quase todo o tempo ocupando o volume total do cubo. Em fim, a experincia cotidiana indica que mais provvel a existncia de um movimento catico e da distribuio desordenada do que a probabilidade da existncia de um estado ordenado. Quando qualquer sistema termodinmico est em estado de equilbrio macroscpico, seu estado microscpico no tem que estar tambm em equilbrio em cada ponto, uma vez que, microscopicamente, o sistema est em mudana continuamente grande velocidade. Isso deve significar que existem muitos estados microscpicos compatveis com um estado macroscpico. Posto que a entropia mede o nmero de estados microscpicos do sistema, aumenta-o. Assim pode-se dizer que o estado desordenado tem uma entropia mais alta que o estado ordenado. A entropia tem uma tendncia natural para o aumento, i.e., a maior probabilidade de existncia do sistema. A entropia tambm (e da mesma forma que a entalpia) est relacionado com as mudanas de temperatura a partir da significao da eq.24, uma vez que: dQrev = nCp dT De onde se obtm que:
S =

dQrev = nCv dT

(27)

T2

nC p T

T1
T2

dT

(28)

S =

T1

nCv dT T

(29)

Se o intervalo de temperatura pequeno, pode-se consider que Cp e Cv so constantes, ento:

S = nC p ln T2 T1 S = nC
p

ln

T2 T1

(30)

Se Cp e Cv no so constantes, ento h que se conhecer a funo de dependncia com a temperatura. A entropia e a terceira lei da termodinmica A relao entre a entropia e a probabilidade de existncia de um determinado estado indica que o menor valor da entropia ser o de uma substncia cristalina temperatura de zero absoluto. Um cristal perfeito a 0 K s pode ter um estado microscpico, j que cada tomo deve estar em um ponto fixo da rede cristalina e deve ter uma energia mnima. Como no possvel alcanar o zero absoluto de temperatura, a terceira lei da termodinmica anuncia que a entropia de um cristal perfeito tende a zero, ao tender a temperatura de zero absoluto, conforme a assuno de Planck. A importncia da terceira lei reside em tornar possvel a determinao da entropia absoluta de cada elemento e de cada composto a qualquer temperatura. Na Tabela 3.2., aparecem dados desse tipo. Pelos dados de Tabela, pode-se ver que, entre os slidos, as substncias que tm as energias mais baixas so os cristais rgidos e duros, que contm tomos de baixa massa molar. Isso devido ao fato de que a entropia de um cristal tem relao com a amplitude de vibrao dos seus tomos nos
97

pontos de localizao na rede cristalina. Em cristais brandos e de tomos de maior massa molar, a amplitude de vibrao maior e com ela aumenta a entropia. No caso dos gases cujas as espcies qumicas tm a menor interrelao molecular, a distncia maior e os tomos podem vibrar dentro da molcula com maior amplitude e a entropia aumenta ainda mais. Esta situao estabelece uma tendncia na magnitude da entropia dos sistemas materiais. A menor condensao do estado fsico do sistema (slido < lquido < gs) aumenta mais a entropia do sistema e vice-versa. Por outro lado, se, por exemplo, numa reao qumica, a parte de um slido ou de um gs e o produto so dois gases, a entropia aumenta em ambos os casos. Em geral, medida que aumenta a complexidade molecular a entropia aumenta porque, numa substncia complexa, os tomos podem vibrar at a sua posio de equilbrio. Desse modo, como ocorre nos slidos, este movimento contribui para aumentar o nmero de estados microscpicos possveis e com eles a entropia. Tambm ocorre que a capacidade de uma molcula poliatmica de girar ao redor de seu centro de massa contribui para o aumento da entropia desse sistema, tornando maior a contribuio proporo que a molcula se torna mais complexa. A entropia de uma reao pode ser calculada aplicando-se:
S o = pS o ( p ) r S o (r ) (31)

Isso quer dizer que juntando-se a soma das entropias-padro absolutas dos produtos com a soma das entropias-padro absolutas dos reagentes a equao, o resultado similar ao utilizado para o clculo das entalpias. Para uma mudana da magnitude da entropia a partir do valor So = 0 que estabelece a terceira lei, tem-se:
ST S 0 =

C pdT T

(32)

ST =

CP dT T

(33)

Isso quer dizer que o clculo da entropia absoluta a uma determinada temperatura pode ser obtido com a magnitude da capacidade calrica do sistema. Energia livre e espontaneidade O critrio sobre um processo quanto a sua espontaneidade ou no foi baseado at agora na segunda lei da termodinmica, considerando-se a mudana que se produz na entropia do sistema. Esse enfoque leva mais em conta a variao geral da entropia do Universo que a mudana da entropia de um pequeno sistema ao qual se tem acesso. Um sistema qumico uma pequena poro do universo e resulta em que sejam combinadas a primeira e a segunda lei. Considerando-se a conservao da energia e a estrutura do sistema, pode-se obter por meio de uma nova funo de estado, que se denomina energia livre ou, mais explicitamente, energia livre de Gibbs (quando se trabalha com presso e temperatura constantes). A energia livre de um sistema o trabalho mximo que se pode obter s custas da energia interna de um sistema em condies de temperatura e presso constantes. Tambm pode-se definir a energia livre de Helmholtz quando se trabalha a volume e temperaturas constantes, resultando tambm em trabalho mximo sob essas condies:

98

G = H - TS

fazendo-se a diferencial total onde H = Q e T = 0 como T S = Qrev isto d lugar a duas possibilidades:

(34)

G = H T S S T G = Q T S G = Q Qrev 1: 2:
a

Q = Qrev ocorre em processos reversveis a P e T constantes ocorre em processos irreversveis a P e T constantes Q < Qrev

G = 0 G < 0

Em mudanas finitas, possvel avaliar a espontaneidade por: G = 0 processo reversvel (35) G < 0 processo irreversvel (36) possvel tambm expressar matematicamente o trabalho mximo que s obtido de um sistema se as condies de reao so a volume e temperatura constantes. Nesse caso, a expresso : F = E TS Que o potencial isocrico do sistema. Procedendo-se de forma similar ao anterior: Quando:1: Q = Qrev F = 0 F < 0 ocorre em processos reversveis a V e T constantes 2: Q < Qrev ocorre em processos irreversveis a V e T constantes A equao de Gibbs para mudanas finitas fica: G = H - T S (38) Mediante essa equao (denominada equao de Gibbs-Helmholtz), possvel explicar por que nem sempre uma reao exotrmica espontnea e tambm porque uma reao endotrmica pode ser espontnea. As tendncias que se combinam para a real espontaneidade so: a reao qumica, ao ocorrer espontaneamente, deve alcanar um estado de menor contedo energtico e, por sua vez, atingir uma entropia maior. Como pode ser visto na eq.38, se a entropia cresce, seu sinal positivo e ento, no caso de processos exotrmicos, o sinal da entalpia negativo. Com isso, duas magnitudes negativas se somam, o que aumenta a magnitude negativa de G, confirmando-se o carter espontneo e irreversvel do processo. Existem vrias combinaes matemticas de magnitudes entre H e TS e em todos os casos, necessrio levar em considerao a influncia da temperatura, uma vez que, a uma dada temperatura, um processo pode ser reversvel e, em outra, irreversvel. Nas reaes termoqumicas, se associam-se uma entalpia de formao dos compostos com seu estado padro. De forma similar, definida a energia livre de formao por Gf ,que pode ser calculada pela equao de Gibbs-Helmholtz Gf = Hf TSf (39) Onde todas as funes de estado esto avaliadas temperatura padro. Estabelece-se, por definio, que a energia livre de formao molar padro de todos os elementos zero. Um exemplo de aplicao para reaes qumicas pode ser o seguinte: N2(g) + 3 H2(g) = 2 NH3(g)
99

(37)

Que representa a obteno de amnia utilizando-se, como substncias de partida, o dinitrognio e o dihidrognio temperatura padro. Uma vez que no se tem nenhum outro dado de partida, remete-se Tabela 3.2 para a utilizao dos dados reportados para a entalpia e entropia dessas substncias Hf = 2 Hf (NH3(g)) [1 Hf (N2(g)) + 3 Hf (H2(g)) ] Como calores de formao do dinitrognio gasoso e do dihidrognio gaso so = 0, tem-se: Hf = 2 ( -46,2) [1(0) + 3 (0)] kJ = -92,4 kJ Quer dizer, o processo exotrmico No caso da entropia utilizam-se: Sf = 2 Sf (NH3(g)) [1 Sf (N2(g)) + 3 Sf (H2(g)) ] Sf = 2 (0,1926) [1 (0,1916) + 3 (0,1306) ] Sf = - 0,1982 kJ K-1 Quer dizer, o processo com respeito entropia no espontneo. Calcula-se agora a condio geral do sistema com a energia livre de Gibbs: Gf = Hf TSf Gf = -92,4 kJ 298 (- 0,1982) Gf = - 33,30 kJ Calculando a energia de formao molar padro (uma vez que, com a reao mostrada, obtm-se dois moles) Gf = - 33,30 kJ / 2 mol = -16,65 kJ mol-1 O que significa que o processo espontneo a partir da integrao na energia livre, das influncias da entalpia e da entropia. Outro caso pode ser resolvido com os dados da Tabela 3.2 para a energia livres de formao molar padro, quando possvel calcular a mudana da energia livre nas reaes por meio de:
o G o = p G o f ( p ) r G f (r )

(40)

Um exemplo de aplicao pode ser o seguinte: Determinar se a reao de oxidao do SO2(g) at SO3(g) na presena de oxignio espontnea no meio ambiente, possibilitando mais adiante a formao de H2SO4 e de chuva cida, ao combinarem-se com o vapor de gua das nuvens. 2 SO2(g) + O2(g) = 2 SO3(g) G = 2 (Gf SO3(g)) (2 Gf SO2(g) + 1Gf O2(g)) G = 2 (-371,1) [ 2 ( -300,3) + 1 (0) ] G = - 141,6 kJ calculado sobre dois moles G = - 141,6 kJ / 2 mol = -70,8 kJ mol-1 Como pode ser observado, o valor de G negativo , que significa que o processo de formao de SO3(g) espontneo no meio ambiente. A relao da energia livre com o equilbrio qumico pode estabelecer-se por meio de: G = G + RT ln Q como no equilbrio G = 0 (41) Onde Q a relao da composio de produtos sobre reagentes em qualquer ponto. Q se converte em K quando o sistema est exatamente no estado de equilbrio. F = - RT ln Kc (42) aqui Kc est em funo das concentraes molares, onde F a energia livre a V e T constantes.
100

G = - RT ln Kp estando Kp em funo das presses parciais; E a relao entre K p e Kc :

RT n Kc = K p ( ) 101.3

(43)

(44)

onde n : n = np - nr somatrio dos moles de produtos e de reagentes E a equao de Vant Hoff que relaciona a energia evoluda na forma de calor com a condio de equilbrio :
log K p2 K p1 = H 1 1 ( ) 2,3R T2 T1 (45)

Aplicaes ao sistema solo: o caso das substncias hmicas O solo, como todo sistema natural complexo, constitui, do ponto de vista energtico, um sistema termodinmico de grande complexidade. De acordo com as suas caractersticas, ele se comporta como um sistema aberto, se bem que certo que, em alguns processos muito especficos (os quais tm lugar em determinado intervalo de tempo), podem ser tratados como sistema fechado. Por outro lado, a maioria das transformaes no solo cumprem aparentemente as leis dos processos reversveis como, por exemplo, a troca catinica. No obstante, tem sido mostrado que as espcies que trocam no so as mesmas no tempo e a capacidade dos trocadores tambm varia tanto em magnitude como em qualidade. Isso porque o stio onde ocorre a troca nem sempre o mesmo, uma vez que se transformam continuamente. Desse modo, a idia que observados macroscopicamente parecem processos reversveis, mas na realidade no o so. Os elementos que compem o solo avanam sempre numa direo que pode ou degrad-lo ou melhor-lo. por isso que o estudo dos solos, do ponto de vista termodinmico, difcil e alcana uma importncia prtica fundamental. Apesar das interpretaes realizadas a partir dos clculos termodinmicos dos sistemas de solos, estes no so nunca rigorosamente quantitativos. No obstante, estes clculos possuem grande valor para a avaliao de processos, como, por exemplo, o clculo da probabilidade de ocorrncia de uma transformao fsico-qumica ou de uma determinada reao em condies particulares. A termoqumica pode ser utilizada, sob este ponto de vista, para estudar as seguintes questes no solo: 1. Apreciar a fora das ligaes de ons com o complexo adsorvente do solo. 2. Determinar as constantes de troca e de dissociao, assim como a dependncia destas com a temperatura. 3. Determinar a probabilidade de ocorrncia de uma reao numa determinada condio. 4. Selecionar condies qumicas para a ocorrncia de uma transposio. 5. Determinar a possibilidade de migrao de substncias atravs de diferentes perfis de solo. 6.Determinar as condies necessrias para que ocorram transformaes de fase no sistema solo. 7. Estudar a transformao de diferentes sistemas no tempo. 8. Estudar a transformao de diferentes sistemas no espao. 9. Determinar os parmetros termodinmicos das transformaes provocadas pela atividade antrpica sobre o solo.

101

10. Determinar a estabilidade dos processos de formao e a decomposio das substncias orgnicas. Para a soluo dos problemas anteriormente expostos, necessrio calcular algumas funes termodinmicas fundamentais. So oferecidos alguns exemplos de clculos prticos. Exemplo 1.Determina-se o calor de combusto de um composto analisado, a partir do calor de combusto das substncias iniciais e finais. HT = H2 - H1 A energia reticular pode ser calculada pela equao: HU = HMX + HM + HX (46) Onde: HMX = calor de formao do sal HM = calor de formao do ction HX = calor de formao do nion O valor de HMX pode ser calculado a partir do calor de combusto ou pela somatria dos calores de sublimao e ionizao do ction. Entretanto, os valores dos calores de dissociao e eletroafinidade do nion, os quais esto reportados, permitem obter-se tambm os calores individuais de HM e de HX . Estes dados permitem calcular vrios parmetros termoqumicos, a partir dos dados da anlise elementar e dos grupos funcionais da substncia. Exemplo 2. Determinando-se a constante de equilbrio a duas temperaturas, pode se calcular a variao de energia livre ( G) do sistema, por meio de: (3) G = - RT ln K A variao da entalpia pode ser calculada pela expresso:
ln KT 2 = ln KT1 + 1 R
T2

T1

H dT T

(4)

Conhecendo-se a variao de energia livre (G) e da entalpia (H), pode-se calcular a variao de entropia do sistema atravs da equao: G =H - TS (5) Exemplo 3. Clculo do calor de dissoluo de um composto em gua. possvel calcular a energia reticular pela equao: HU = LK + LA L (6) Onde: LK = calor de dissoluo do ction LA = calor de dissoluo do nion L = calor de dissoluo da dissoluo Exemplo 4. determinado experimentalmente o calor de dissoluo de um determinado composto num solvente conhecido e numa determinada temperatura. A partir desse valor, pode-se obter S e calcular G ou, o inverso. Exemplo 5. Com a ajuda da espectroscopia na regio do infravermelho, determina-se a freqncia
102

de vibrao de uma determinada ligao (Pi). A sua temperatura caracterstica pode ser calculada pela equao: Ti = 1,4384 nPi (7) A magnitude H = H H se calcula por H H = H = M/2 RT + RT (8) Onde M = 7 e i = 3n-5 (para molculas diatmicas) M = 8 e i = 3n-6 (para molculas poliatmicas) No estudo de algumas propriedades dos solos, alm desses clculos, fazem-se uso freqente de outros clculos termodinmicos. Alguns que apresentam interesse do ponto de vista prtico so: 1. 2. 3. 4. Onde: E = potencial redox en Volts n = No. de eltrons que intervm na reao Quando so aplicados os clculos termodinmicos, tais como os mostrados acima, necessrio ter em conta uma srie de relaes entre os diferentes parmetros termodinmicos que so de importncia fundamental para uma elaborao e interpretao correta dos resultados: a) Em todo processo termodinmico, a condio que regula o estabelecimento de um equilbrio qumico a obteno do mnimo na variao de energia livre (G). A energia livre est relacionada, por sua vez, com a constante de troca, de dissociao etc., pela equao: G = - RT ln K (10) Supondo que a Temperatura (T) seja igual a 25 C e fazendo-se a converso a log natural, expressando-se em kJ g-1, a equao fica: G = - 5,710 log K (11) Que pela determinao prtica de K, permite apreciar o nvel de probabilidade para que uma reao acontea e, alm disso, o momento em que o sistema alcana o equilbrio. b) A energia livre de Gibbs est relacionada com outros parmetros termodinmicos pela equao: G = H - T S (12)
103

Clculo de energia reticular dos sesquixidos totais. O clculo realizado a partir dos dados de contedos totais do solo e das entalpias dos sesquixidos puros. Clculo de transformao trmica a partir de medio das reas dos picos que se obtm dos termogramas. Clculo da cintica de desidratao e da energia de ativao dos dados da anlise trmico diferencial. Nas reaes redox nas quais se pode determinar o potencial, aplica-se: G = - E . n. 9654,6 kJ (9)

Assim, como se tem duas das funes de estado, possvel calcular a que falta, uma vez que H o calor de formao. Isto possvel de ser calculado se h um caso como: Deseja-se conhecer o calor de formao da substncia orgnica naftaleno C10H8 (s) a partir do grafite e do hidrognio gasoso presso de 1013 hPa, a uma temperatura de 25 C (298 K). Neste caso, obtm-se como dado, a reao de combusto completa de um mol do naftaleno produzindo dixido de carbono e gua lquida segundo: C10H8 (s) + 12 O2 (g) = 10 CO2 (g) + 4 H2O (l) H298 = 5142,23 kJ mol-1 x 0 10 ( 393,8 ) 4 ( -286) kJ mol-1 (calores de formao) Aplicando-se a equao: Hreao = Hcombusto = Hprodutos - Hreagentes Onde a incgnita x o calor de formao do naftaleno 5142,23 = [- 10(393,8) 4(286)] [x + 0] Obtendo-se x = 60,29 kJ/mol como calor de formao do naftaleno. 10 C(s) + 4H2 (g) = C10H8 (s) H = 60,29 kJ/mol
(13)

Em todos os casos em que se estuda um processo natural, necessrio que G obtido seja negativo na reao, uma vez que essa a condio de espontaneidade que ocorre na natureza. Para que isso seja possvel, usual que esta condiocom a magnitude negativa, um valor negativo elevado de H, quer dizer, uma reao muito exotrmica e um valor de S muito positivo. Neste processo, a entropia cresce e o aumento da temperatura contribui como um todo, Para fins prticos, calcula-se H pela expresso:
log H T2 T1 K2 = K 1 19,1588 T1T2 (o calor de reao est expresso em J.mol-1) (14)

Quer dizer, pode-se determinar o calor de reao se so conhecidos numa reao, dois valores da constante de equilbrio a duas temperaturas. c) Determinao da fora de ligao dos ons com o complexo adsorbente do solo. A fora com que ons podem ficar retidos no complexo adsorvente do solo dada pela magnitude da variao da energia livre, o que, por sua vez, est relacionado com as trocas de entalpia e de entropia. Como se ve, a variao de energia G pode ser calculada a partir da determinao da constante de troca. G = -RT log K = 5,710 log K (kJ g-1) A fora da ligao, por sua vez, proporcional ao calor de reaoH. A partir dos valores da entalpia e de K, pode ser calculado, ento, o valor de S no transcurso de uma reao. O valor de K calculado experimentalmente. H se calcula pela eq. (14), medindo-se K em duas temperaturas e, pela aplicao da Eq. 5, calcula-se a variao da entropia do sistema. Por outro lado, a energia de excitao de uma ligao pode ser calculada a partir de dados da espectroscopia de infravermelho, termografia ou de raios-X. Assim, a dependncia da energia com a freqncia caracterstica da absoro dada por: E = (n. 2,85 . 912 . 10-3) 4,184 kJ.mol-1 (n em cm-1) (infravermelho) (15) E = (28551,2/n) 4,184 kJ.mol-1 (n em nm) (U.V. e visvel) (16)
104

O tratamento realizado sobre os aspectos termodinmicos das reaes e interaes qumicas tem por objeto a particularizao dos processos que ocorrem no solo e mais especificamente a matria orgnica e o hmus dos solos. A formao e acumulao da matria orgnica no solo ocorre num sistema aberto que pode trocar constantemente massa e energia. um sistema complexo, heterogneo e no-uniforme, que sofre processos irreversveis ou de equilbrios aparentes, uma vez que composto por uma diversidade de substncias e corpos, tais como: rochas originrias, argilas, silte, areia, gua, dissoluo de diversas substncias, gases, microrganismos, fluxos de energia a partir de diferentes fontes e substncias orgnicas formadas in situ ou ingressadas a partir do exterior. Ao mesmo tempo, todos estes componentes interatuam entre si como um grande sistema ou, ao separar-se arbitrariamente em subsistemas componentes, so influenciados na sua existncia e desenvolvimento no tempo pelo ecossistema no qual se encontram e, ainda mais, pela ao do homem. Esta situao torna particularmente complexo qualquer estudo e dificulta grandemente a obteno de informao totalmente precisa e reproduzvel, tal como ocorre ao se estudarem sistemas num laboratrio ou numa indstria. Os subsistemas desse mundo vivo, em permanente transformao, possuem caractersiticas muito especficas. Eis como exemplo a matria orgnica: ela se forma a partir dos vegetais superiores e inferiores, quer dizer, desde plantas at algas, a partir das folhas, flores, frutos, talos e razes. Os animais que vivem sobre este sistema aportam e incorporam os corpos ao cumprirem o ciclo da vida, junto com as excrees e, no caso dos homens, uma diversidade de produtos que cada dia produzida e que logo colocado no meio como dejeto ou aplica-se como tratamento. Alm disso, os microrganismos na sua diversidade de bactrias, fungos, actinomicetos etc. atuam constantemente na degradao e transformao de toda a matria orgnica viva que entra no sistema convertendo-a em seus corpos, em suas excrees e em seus produtos de biossntese. Por ltimo, o meio inorgnico existente, a partir das rochas e da gua circulante, pe disposio desses processos as superfcies de interao que catalisam as reaes, os metais que podem formar ligaes de estabilizao e proteo, os potenciais de concentrao, eletroqumicos e fsicos que interatuam no meio aquoso para dar como resultado o maravilhoso e surpreendente sistema de vida que forma o solo. Esta situao obriga a tratar o problema de suas formas: macroscopiacamente, observando-se as tendncias do movimento material dos componentes e seu efeito sobre os sistemas biolgicos (e.g., plantas), tratando de representar as leis do movimento por uma explicao aproximada de como deve se comportar e, a partir da, descrever os procedimentos para o seu manejo. Na outra forma, abordando-se cada um de seus subsistemas com procedimento de estudo macroscpicomicroscpico, regulando parte das variveis que os afetam e levando-os a condies-padro que permitam conhecer com maior preciso a sua composio, estrutura, propriedades e funes, enfim, reconstruir o processo inverso das interaes e influncias com o meio que o precede. Dessa forma, o conhecimento desses sistemas alcana um nvel mais avanado. No caso da matria orgnica e do hmus, freqente ocorrerem definies, tais como, so fontes de energia fundamental do solo que asseguram os processos biolgicos, por onde meio dos quais se realiza uma parte importante dos processos de interaes fsico-qumicas que ocorre ali. Este enfoque reproduz a interpretao de que o que se observa dificilmente se pode descrever como acontece. E mais, sob que leis? Para interpretar (conhecer), tal evento necessrio aproximarse da essncia do sistema e dos fenmenos inerentes. S assim pode-se influir sobre um subsistema do solo de forma favorvel. Esta tarefa ser abordada preliminarmente nesse captulo.
105

Algumas aplicaes de clculos de entalpia nas substncias hmicas possvel utilizar os calores de combusto ou entalpias de reaes de diversos sistemas, muito embora os resultados obtidos por essa via apresentem um erro relativamente grande (aprox. 5-10 kJ.mol-1). Devido s imprecises que se cometem na determinao dos calores de combusto, prefervel o uso de calor de formao para o clculo do calor de reao. Os laboratrios de fsicoqumica dispem de bombas calorimtricas para determinar o calor de combusto ou de reao. Se as amostras so puras e de composio conhecida, possvel realizar essas determinaes. Uma parte dos dados tabulados que so mostrados mais adiante foram obtidos assim. possvel, ainda, calcular de forma aproximada os calores de formao a partir dos dados de uma estrutura da molcula, determinando-se todos os tipos de ligaes. O erro que se comete pode chegar at 4-9 kJ. Entretanto, quando existe impossibilidade de usar um mtodo adequado de isolamento, purificao e determinao, pode-se recorrer a tais clculos. Para tornar possvel a realizao desses clculos, necessrio ter disposio dados como os da Tabela 4.4. e tambm as energias necessrias para separar as espcies atmicas do estado em que se encontram as substncias de origem. Nas Figuras 4.4 e 4.5, o clculo realizado para uma parte da macromolcula apresentada.

Figura. 4.4. Representao de uma molcula de substncia hmica com sua distribuio espacial.

Figura. 4.5 Representao da mesma molcula hmica ampliada e com giro vertical de 180

As Figuras 4.4 e 4.5 aparecem como modelos de macromolculas desenvolvidos por Schulten H.-R. & M. Schnitzer (1997). Esses modelos do possibilidade de aplicar os clculos aproximados dos calores de formao Numa pequena parte do modelo macromolecular. Na Figura 4.4, a molcula representada girando-se at direita de forma que se veja uma parte em que, por meio de uma cadeia aliftica, esto ligadas algumas estruturas aromticas e a elas alguns grupos funcionais tpicos. Na Figura 4.5, apresentada a mesma molcula s que agora com giro para a esquerda de forma que so mais visveis outras particularidades dessa estrutura. Com linhas amarelas foram assinaladas onde vai ser realizado um corte ideal, com o objetivo de obter-se um limite da estrutura que vai ser considerada para o clculo do calor de formao, com o uso da Tabela 4.3.
106

Essa estrutura separada do esquema geral : 1- Energia gasta para dispor dos tomos necessrios: C = 40 x 523 kJ mol-1 = 20920 kJ H = 20 x 431,79 kJ mol-1 = 8635,8kJ N = 0,5 x 711,28 kJ mol-1 = 355,64 kJ O = 9,5 x493,71 kJ mol-1 = 4690,25kJ Total = 34601,21kJ 2- Energia cedida na estruturao das ligaes da molcula O-H = 7 x 275,73 kJ mol-1 = 1930,11 C-N = 3 x 275,73 kJ mol-1 = 827,19 C-H = 30 x 412,96 kJ mol -1 = 12388,8 C-H benzeno = 3 x 421,33 kJ mol-1= 1263,99 C-C = 15 x 350,62 kJ mol -1 = 5259,3 C-C arom. = 23 x 587,85 kJ mol -1 = 13520,55 C-O lcool = 7 x 705,84 kJ mol-1 = 4940,88 C=O = 9 x 799,14 kJ mol-1 =7192,26 COOH ressonncia = 4 x 117,15 kJ.mol -1 =468,6 ter = 2 x 705,84 kJ mol -1 = 1411,68 ster = 1 x 100,42 kJ mol-1 =100,42 Aromaticidade Benzeno = 2 x 159,99 kJ mol-1 = 319,98 Aromaticidade Naftaleno = 1 x 313,80 kJ mol-1 = 313,80 ToTal = -49937,56 kJ mol-1 O balano total oferece = Energia gasta Energia de formao = 34601,21- 49937,56 = -15336,35 kJ.mol-1 A energia calculada corresponde a uma frao da macromolcula cuja massa molar de 838 Dalton e frmula C40H40N1O19 , o que significa que em termos mdios -18.30 kJ g -1. A macromolcula das Figuras 4.4 e 4.5 tem uma massa molar de 7753 Dalton e frmula C349H401N26O173S, que est na faixa de cidos flvicos ou de cidos hmicos de formao recente. Se forem utilizadas as massa molar e a energia mdia evoluda na forma de calor de formao, chega-se ao fato de que essa macromolcula pode realizar um aporte como calor de formao de -18.30 kJ g-1 x 7753 g mol-1 = -141879,9 kJ mol-1

107

Ento, supondo que se cumpra a equao de Alievs calcula-se o calor de combusto da mesma frao molecular, o que resultou em -23321,62 kJ g-1 ento a 25C. Como o processo inverso, quer dizer, de estruturao da molcula: S = Qp / T = 23321,62 J g-1/ 298 K = 78,26 J g-1 K -1 Como um mol desta substncia tem uma massa de 838 Dalton S = 78.26 J.g-1 K-1 x 838 g.mol-1 = 65581,88 J.mol-1.K-1 = 65,58 kJ. mol-1 K-1 Pode-se agora calcular a energia livre dessa substncia: G = H - T S G = - 15336,35 kJ.mol-1 - (298 K x 65.58 kJ. mol-1.K-1) G = - 34879,19 kJ. mol-1 Assim, o processo de formao dessa frao da molcula espontneo, isto , termodinamicamente espontneo. Nesse estado, que intervm os microrganismos, acoplando sua atividade de biossntese com o consumo de parte das substncias orgnicas, aportando parte da energia liberada para facilitar a formao das substncias hmicas. Por isso se diz que na natureza o processo espontneo. Se, como conseqncia da estruturao espacial dessa frao, cedida uma quantidade importante de energia ao meio na forma de calor, a estrutura alcanada estabilizada ante ao ataque de agentes exteriores. Decomp-la implica colocar energias equivalentes ainda que mediante sistemas enzimticos que, devido sua especificidade e dependncia de um sistema vivo, no podem atuar com a eficincia normal na decomposio ou transformao dessas substncias, cuja origem est nas mais variadas espcies vegetais, animais e microrganismos. Se a macromolcula alcana uma configurao espacial ainda mais compacta, a estabilidade aumenta devido sua menor distribuio espacial que pode permanecer unida aos metais ou fase slida do solo, por distintos tipos de ligaes. Ento, a estabilidade aumenta ainda mais e o processo de mineralizao dilatado para centenas ou milhares de anos. Este processo descrito, que se aproxima do que ocorre no solo, deve dar lugar a uma estabilizao por cesso de energia que ainda no se tem condies de calcular completamente, devido quantidade de parmetros para serem levados em considerao. No entanto, o somatrio total dever oferecer um balano de energia livre negativa e de uma magnitude elevada. Existem outros procedimentos para clculos de parmetros termodinmicos de susbtncias hmicas. Um dos mais utilizados a partir do conhecimento da composio elementar de uma amostra de substncia orgnica ou hmus do solo. Um clculo aproximado dos calores de combusto pelo mtodo de Alievs (1970), a partir da composio elementar das substncias hmicas, obtido da seguinte maneira: Q = { 90 [C] + 34.4 [H] 50 ( 0,84 [O] 4 [N] ) } 4,184 J g-1 Aplicando-se esta equao aos dados da composio elementar de cidos flvicos e hmicos, foi possvel obter dados tais como os apresentados na Tabela 4.4.
108

Tabela 4.4: Calores de combusto de diferentes substncias do solo (J.g-1) de acordo com Orlov (1985)
Solos Campos de montanha Escuro de montanha M a rrom Castanho Solos de zonas ridas Pradarias de hortos Pradarias Lipdeos mdia para todos os solos 35480 Grupo de substncias hm icas cidos cidos flvicos hmicos Para todos os solos 19497 de 6360 a 11670 com m d ia de 9200 18869 18284 21338 22133 20208 18171 Resduo nohidrolizvel 18870 17573 17071 18242 18912 16945 11623

Fonte: Orlov, 1995.

Dada a estabilidade molecular para o hmus dos solos, reportado um valor mdio de 10.00020.000 J g-1 para a combusto completa no contedo de solo at uma profundidade de 0,20 m. Esta energia corresponde ao calor de reao temperatura ambiente e presso constante, que seria liberada se a mineralizao das substncias hmica ocorresse passo a passo at chegar a CO2. A energia liberada ao meio ou cedida aos microrganismos, durante o processo de mineralizao, um elemento importante para a gerao de energia in situ dentro do solo, o que vai contribuir com o desenvolvimento de todos os processos fsicos, qumicos e biolgicos. No caso de substncias hmicas obtidas por vermicompostagem, a contribuio energtica ao meio vai ser cerca de 70 a 80% inferior devido falta de tempo para atingir a estabilidade qumica-fsica.
Tabela 4.5: Calores mdios de combusto de substncias hmicas isoladas dos principais solos da Rssia (J g-1)
Solos* Pradarias Rendzina negra Sod-podzlico Pardo florestal Gris florestal Solos negros Brunos Solos de zonas ridas Solos Vermelhos Pradarias de montanhas cidos hmicos 18033 18054 17606 18874 18113 19179 19723 19748 18033 18171 cidos himatomelnicos 21640 21271 21368 21368 cidos flvicos 12401 10966 11899 11167 11167 10606 12255 11623

Fonte: Orlov, 1995.*optou-se por manter o nome do solo no original

Aps obter-se a composio elementar das substncias hmicas dos principais solos cubamos, foi calculado o calor de combusto, obtendo-se:
Tabela 4.6. Calores de combusto de substncias hmicas de solos cubanos (J g-1)
Solos Oxisol Cambisol (Ca) Cambisol (H) Mollisol Vertisolo Rendzina vermelha cidos hmicos 19346,69 19498,52 17964,27 18988,38 15449,58 18643,99 cidos flvicos 12122,41 15050,80 13694,59 12999,96 -

Fonte: Garcs & Savich (1975), Garcs (1987). 109

Tabela 4.7. Valores de calores de combusto calculados a partir da anlise da composio elementar de cidos hmicos e flvicos presentes num extrato de substncias hmicas obtido de vermicomposto de esterco bovino
% em massa Amostra C AHM AHB AFM1 AFB1 AFM2 AFB2 46,6 43,9 37,2 35,3 41,5 40,3 H 4,7 4,7 4,5 4,8 5,3 5,4 O 42,4 44,2 48,7 51,2 45,4 47,5 N 3,9 2,7 6,5 5,2 5,5 4,3 -3289,6 -2728,8 -2683,0 -2513,9 -3040,8 -2605,0 Calor de Combusto (J/g)

(Q)

Fonte: Caro (2004).

Dessa forma, conhecendo-se que as variaes na entropia so positivas ao se tornar mais organizado e complexo o sistema, evidente que a variao de energia livre determinar um processo espontneo de decomposio escalonado por cada frao, logo ao passar de um estado de semi-equilbrio como se discutir mais adiante. Clculos a partir de calores de combusto O efeito trmico de uma reao igual a soma dos calores de combusto dos reagentes, tal como est descrito na eq. 19. Os calores de combusto das substncias hmicas podem ser determinados para cada espcie qumica ou para o conjunto da macromolcula por meio de uma bomba calorimtrica e de um processo de oxidao das substncias hmicas. De acordo com Tiurim (1936) (procedimeno I), para a oxidao do hmus por um mol de oxignio atmico (8 g), so necessrios 217-226 J, isso equivalente oxidao de uma substncia hmica com cido crmico, 1 cm3 de soluo 0,1 mol L -1 de dicromato de potssio evolui de 21,7 a 22,6 J. Assim, a reserva de energia no hmus contido num hectare pode ser obtida por: E = (a-b) x 11,1922 n x 2 Onde a-b = quantidade de dicromato utilizado na oxidao do hmus (a amostra, b branco) n= coeficiente para converter a massa da amostra de solo em grama 11,1922 = fator de clculo em g.kJ-1 que corresponde a 1 cm3 de soluo de dicromato 0,1 mol* -1 L o termo mol* L-1 a representao da concentrao molar em equivalentes ou N. Uma vez determinados e calculados os calores de combusto das substncias hmicas, tais como existem numa poro de solo, possvel relacionar outras pores do mesmo solo com metais, por exemplo, lavando o solo com solues preparadas para que exeram efeito de troca catinica.
110

Posteriormente, possvel realizar a oxidao da matria orgnica, calcular os calores de combusto e avaliar o calor de interao entre essas substncias e os metais. Existem algumas equaes empricas para o clculo do calor de combusto, tais como, a frmula de A.V. Frost citado por Orlov (1995) (procedimento 2) H comb = 104,2 nC + 26,05 nH + 13,0 n< + 46,1 n= + 6,5 n=y 3,5 nAl-Ar 6,5 nAr-Ar Onde: nC = nmero de tomos de carbono nH = nmero de tomos de hidrognio n< = nmero de duplas ligaes nas olefinas ou em unio de cadeias laterais com anis n = nmero de ligaes triplas n=y = nmero de ligaes duplas em anis aromticos nAl-Ar = nmero de ligaes entre gruos alqulicos e grupos aromticos nAr-Ar = nmero de ligaes entre grupos aromticos No caso dos solos, nem sempre se dispe de toda a informao necessria para realizar este clculo mas, de modo geral, possvel obter essas informaes sobre as substncias orgnicas ou hmicas do solo. -D.P. Konovalov citado por Orlov (1995) (procedimento 3), props a seguinte equao para o clculo do calor de combusto Hcomb = 48,8 m + 10,5 n + x Onde m = nmero de tomos de oxignio necessrios para a combusto total de toda a substncia n = nmero de moles de gua formada x = constante de correo para a srie homloga dada Os nmeros que aparecem na Tabela 4.8. foram obtidos tendo como base a combusto de carbono das susbtncias orgnicas estudadas (procedimento 1). possvel calcular aproximadamente o calor de combusto das substncias orgnicas a partir das equaes empricas citadas antes. Por exemplo, com a frmula de Frost, h o problema de no se conhecer a proiri a estrutura e a composio da macromolcula, exceto se j existirem dados como os obtidos no modelo molecular de Schulten & Schnitzer (1997), ou ainda, haver determinado a composio elementar para que o clculo seja mais prximo da realidade. Desta forma, possvel reduzir paulatinamente os parmetros dessa equao em funo da informao que possvel dispor. Se s se dispe do conhecimento da quantidade de C e de H, a equao pode ser reduzida a: H = (104,2 C + 26,05 H + 13 n= ) 4,184 kJ mol-1

Para uma composio elementar de C 40H40, obtm-se: H = -21798,64kJ.mol-1 Se no entanto, os dados forem considerados de acordo com Schnitzer & Khan (1972), aproximadamente 2/3 dos tomos de hidrognio nos cidos hmicos so aromticos: 2/3 x 40 H = 27 H supondo que os anis do tipo benzeno tem pelo menos duas posies ocupadas por ligaes com tomos diferentes dos H, ento: 27 H / 4 = 6,75 anis aromticos, similares ao benzeno, tem cada um trs ligaes duplas, ento:
111

6,75 anis x 3 ligaes duplas em cada anel = 20,25 ligaes duplas 20,25 * 13,0 = 263,25 contribuio energtica dessas ligaes, o clculo total ser 13,0 n< = [(2/3 x 40 H) / 4] x 3 x 13,0 x 4,184 = 1101,44 kJ mol-1 Realizando agora o somatrio total da energa cedida na forma de calor de combusto H = -21798,64- 1101,44 = -22900,08 kJ mol-1 Ao comparar este dado com o obtido pelo clculo feito anteriormente, conhecendo-se toda a estrutura e o gasto para dispor dos elementos qumicos necessrios, a partir de seu estado natural, observa-se que, embora o calor de formao obtido tenha sido de -15336,35 kJ mol-1, o calor de combusto o supera em mais de 6000 kJ.mol-1 . Utilizando-se agora a equao de Konovalov, citado por Orlov (1995), conhece-se o nmero de moles de tomos de oxignio necessrios para a combusto total da substncias (m) e de moles de gua formados (n) uma vez que: H = (48,8 m + 10,5 n + x) 4,184 kJ mol-1

Para a reao 3 C + 2 K2Cr2O7 + 8 H2SO4 = 2Cr2(SO4)3 + 2 K2SO4 + 8 H2O + 3 CO2 So consumidos seis moles de oxignio atmico e produzidos oito moles de gua ao queimar trs moles de carbono. Numa reao similar de combusto de C40H40 sero produzidos 80 moles de oxignio atmico e 106,66 moles de gua e a equao de Konovalov oferece, sem considerar o termo x H = (48,8 * 80 + 10,5 * 106.66) 4,184 = 21020,12 kJ.mol-1 Valor de energia prximo do obtido anteriormente pelo outro mtodo e que cai na faixa dos calores de combusto reportados por Orlov e neste trablho nas Tabelas 4.6, 4.7 e 4.8.
Tabela 4.8: Calores de combusto da materia orgnica de solos de Cuba
Procedimento Parmetro Calor de combusto dos AHs a partir de sua acidez, kJ g-1 de cido calor de combusto da matria orgnica dos solos, kJ 100g-1 Calor de combusto do resduo no hidrolizvel, KJ 100g -1 solo Calor de combusto da matria orgnica deslocada, KJ 100g -1 solo Calor de reao pela retirada de M.O. por Na4P2O7 em kJ.100g -1 solo Magnitude do parmetro para os solos Oxisol Cambisol Mollisol Redzina vermelha 13.22 132.63 69.87

I I I

13,56 66.94 31.80

13,43 47.70 23.85

12.97 53.56 26.78

25.52

18.40

14.64

38.91

9.62

5.44

12.13

23.85

Fonte: Garcs & Savich (1975) 112

Clculos alternativos de calores de formao O efeito trmico de uma reao pode ser calculado pela eq.19 e, com ela, pode-se observar que a reao ser exotrmica (-), se a soma das entalpias dos reagentes maior que a dos produtos, e ser endotrmica (+), se a soma dos reagentes menor do que a dos produtos. O calor de formao de uma substncia gasosa pode ser calculado pela equao abaixo (procedimento 4): H = (ni i )inicial + Si (Qsub )i (ni i )produtos Onde ni = nmero de ligaes da substncia estudada ei = energia de ruptura da ligao Si = nmero de moles de cada elemento slido Qsub = calores de sublimao dos elementos slidos por mol Os calores de formao do composto orgnico (no estado gasoso ideal), segundo o mtodo proposto por Anderson, Bayer & Watson, citado, por Orlov (1969), so calculados somando-se as correes para os grupos e ligaes especficas, levando-se em conta os calores de formao dos principais grupos O calor de formao calculado pela seguinte equao (procedimento 5)

H f = i i + H A
Onde Hf = o calor- padro de formao da substncia no estado gasoso, baseando-se na aditividade da ligao HA = soma dos calores de formao dos tomos gasosos que so gerados da decomposio total da substncia. i = nmero de ligaes i i = energia da ligao do tipo i Nos hidrocarbonetos o calor de formao pode ser calculado a partir da frmula (procedimento 6)
EC H H m = nQCO 2 + m m Q H 2O QC + nQ A + QD 2 2

Onde QCO2 = calor de formao do CO2 QH2O = calor de formao da gua QA = calor de atomizao do carbono QC = calor de combusto da substncia QD = calor de dissociao da molcula de hidrognio n e m = coeficientes estequiomtricos ou moles que intervm na reao. Para calcular a entalpia de formao de lcoois que tem mais de trs tomos de carbono, pode ser
113

utilizada a frmula (procedimento 7)

H 298 = (8,28 + 1,0n )4,184 kJ mol

Onde n = nmero de tomos de carbono na molcula de lcool A entalpia de formao de um lcool tem um valor mais negativo que a entalpia de formao de um hidrocarboneto equivalente em 131,34 kJ mol-1 De acordo com Karma & Sher, citados por Orlov (1969), a entalpia de combusto pode ser determinada pela frmula (procedimento 8):

Hc = 26,05n + W1
Onde Hc = entalpia de combusto a determinar n = nmero de eltrons que participam no processo de substituio W = constante emprica que leva em considerao o desvio da distribuio eletrnica no modelo inicial (nos compostos aromticos simples e hidrocarbonetos saturados W=0) De acordo com esta proposta, necessrio determinar, por via calorimtrica, o calor de combusto e, em seguida, avaliar W. A partir da, para substncias hmicas similares a determinao de Hc simplificada. possvel calcular ?H a partir do calor de combusto (procedimento 9):
H = E + n RT

Onde n = variao do nmero de moles das substncias gasosas na reao E = variao da energia interna no processo da reao Para calcular os calores de formao de hidrocarbonetos a partir dos incrementos segundo Rossini, Prozen & DJonson, citados por Orlov (1969), aplica-se a frmula (procedimento 10):
H f 298 [g1 (CH 2 )m H ] = ( A + Bm + )4,184 kJ mol

Onde
(CH2 )m H = significa um radical alquil normal, metil, etil, etc. unido ao grupo final (metil, vinil).

A = constante caracterstica para um grupo final qualquer B = incremento para o grupo CH2 que representa em si uma magnitude constante para todas as sries alquil, no depende-se de g d = magnitude final no muito grande para os membros inferiores da srie; tem o valor mximo a m=0 e a m>4, igual a zero. Clculo a partir das constantes de troca O mtodo de determinao de entalpias, a partir das constantes de troca, baseado na suposio
114

da independncia da entalpia, com respeito a temperatura numa faixa determinada. Praticamente, a determinao compreende as seguintes operaes (procedimento 11): 1- Determinar a constante de equilbrio em diferentes temperaturas 2- Traar o grfico da dependncia da constante de equilbrio com respeito temperatura nas coordenadas log Kp vs 1/T, onde a temperatura se expressa em graus Kelvin. Neste grfico,e obtm-se uma linha reta cuja pendente ~e:
H p 4,5758

Tambm se pode realizar o clculo pela eq.44 (procedimento 12): A partir desse ponto estabelece-se a relao entre a tendncia geral dos sistemas naturais de realizar processos irreversveis e o aumento da entropia com a existncia das substncias hmicas no solo. O elemento mais importante, constante e sustentado pela observao de geraes humanas, que o processo de formao das substncias hmicas, a partir das substncias orgnicas que entram no solo ou que se formam dentro do solo, ocorre continuamente, quer dizer, um processo espontneo. Esse processo, ao ser enfocado a distncia, pode ser qualificado como reversvel, uma vez que as substncias hmicas formadas se degradam (mineralizao secundria). Depois de um tempo, o processo recomeado da biossntese de novas substncias orgnicas, as quais, ao cumprirem um ciclo de permanncia nos sistemas biolgicos, so excretadas e depositadas no solo, formando substncias hmicas novamente. de se supor que, em perodos grandes de tempo, durante os quais existiu a estabilidade da crosta terrestre e do clima, em determinadas zonas do planeta, a estruturao de substncias hmicas alcanou um equilbrio que geralmente se denomina de bioestase de um solo. Todavia, os movimentos da crosta terrestre, as mudanas de clima e outros fatores fizeram que se produzissem grandes mudanas no planeta que alteraram o estado de equilbrio. Os processos recomeam em outro stio ou no mesmo sob outras condies, de forma que saltar de um estado de equilbrio ou semi-equilbrio para estados de desordem. Esses processos so visveis em nosso perodo histrico de existncia. Para isso basta observar as grandes mudanas que continuamente ocorrem no clima (secas, grandes chuvas), que arrastam, para os rios, lagos e mares, as capas de solo formadas durante milnios, depositandoas como sedimentos, mencionando apenas um dos fatores de mudana. Ao observar o processo de humificao e acumulao de matria orgnica em detalhes, possvel se chegar rapidamente concluso de que o processo de sua formao a existncia da vida no planeta e que se produzir-se- indefinidamente. Entretanto, visto dessa forma, ter-se- ento a certeza de que existem sistemas diversos que se sucedem uns aos outros com componentes semelhantes, mas diferentes entre si, e que cumprem as leis de desenvolvimento dos sistemas materiais, crescente e em espiral. Pode-se ento chegar concluso de que os processos que do lugar formao das substncias hmicas so espontneos e irreversveis, enquanto o conjunto de objetos e substncias que constituem cada sistema, o qual est delimitado por um perodo de tempo no-absoluto, porm, relativo: o que mede o percurso da vida e das mudanas no planeta. De acordo com o exposto anteriormente, se os processos que possibilitam a existncia do hmus so espontneos e irreversveis, ento a entropia desses sistemas ter que ser maior que zero, isto , crescente.
115

 possvel que algum fique chocado com a particularizao que foi realizada para a formao do hmus com respeito aos dados termodinmicos, conhecendo-se que esse processo est indissoluvelmente ligado existncia dos demais componentes do ecossistema, o que os tornam muito complexos e variados. Entretanto, como no possvel ter-se um controle fino da informao de todos os componentes desse sistema, prefere-se a abstrao, reduzindo o sistema e estudando at esse ponto, de forma a esclarecer as regularidades que lhe so caractersticas. Eis algumas propostas de especialistas sobre o estudo do hmus: Stevenson (1994) descreve o processo geral de formao das substncias hmicas resumido na Figura 4.6.

Teoria geral de formao das SH

Resduos de plantas

Transformao por microrganismos

Acares e polifenis

Compostos amino

Produtos da decomposio da lignina

QUINONAS

Ligninas modificadas

QUINONAS

SUBSTNCIAS HMICAS

Figura 4. 6: Esquema proposto por F.J. Stevenson sobre o processo de formao de substncias hmicas

Na Figura 4.6, o processo de humificao iniciado com os resduos das plantas degradados pela ao dos microrganismos at a unidades menores que aparecem representadas por acares, polifenis etc, isto , parte-se de substncias altamente organizadas que tm origem em objetos biolgicos vivos, produz-se uma degradao a estruturas muito mais simples e particulares e, logo, se produz uma ressntese ou recombinao que vai dar lugar a uma estrutura novamente complexa com um nvel superior de organizao em relao ao estado intermedirio e uma diversidade de composio maior do que a que existia no incio. Isso porque agora so integrados objetos e substncias de plantas, animais e microrganismos e solo (Baldock & Skjemstad, 2000; Claus, 2004; Piccolo, 2002; Swift, 2001) Este processo, sob o qual aumenta a complexidade e a diversidade molecular, tem uma entropia positiva. Por outro lado, no se produz uma macromolcula de uma substncia hmica, mas uma infinita quantidade de macromolculas com caractersticas similares, em que cada uma tem feies prprias. Este fenmeno parece contribuir para um incremento da entropia pela quantidade de microestados que incorpora. Alexandrova (1970) props o esquema que aparece na Figura 4.7, no qual so estabelecidos trs processos de estruturao e degradao das substncias de elevada massa molar, procedentes de sistemas biolgicos.

116

Decomposio
Decresce a massa molar Aumenta a aromaticidade Sistemas de cidos do hmus contendo N

Consumo por organismos oxidao Abertura de anis

Produtos da decomposio de alta massa molecular

Oxidao decomposio de AH AF AF AF AFAF Oxidao, desintegrao Decresce a massa molar

oxidao Abertura de anis

Mineralizao rpida

Estado I

Estado II
Promoo da humificao e da condensao

Estado III
Decomposio gradual e lenta

Neoformao de cidos do hmus

Figura 4.7. Esquema proposto por Alexandrova sobre as transformaes e caractersticas das susbtncias orgtncias para chegar at as susbtncias hmicas e sua mineralizao.

De acordo com Alexandrova, as biomolculas oriundas dos sistemas biolgicos vivos so maiores do que as que se humificam e do lugar neoformao de substncias hmicas que, posteriormente, formam o hmus estvel de massa molar relativamente menor que os biopolmeros, com molculas de cidos hmicos (maiores) e de cidos flvicos (menores), caracterizados por um grau maior de oxidao, um ncleo, maior carter aromtico, maior condensao e interaes com o meio ambiente no Estado II. O Estado III o estado da degradao at chegar mineralizao que ocorre lentamente. Esta proposta tem alguns pontos de coincidncia com a realizada por Stevenson, mas as discrepncias so maiores, sobretudo, por estabelecer etapas com resultados e estabilizao relativa, mediante as quais se pode transitar mudando gradualmente a existncia das substncias hmicas com interaes estabilizadoras. A nossa interpretao dessa descrio pode ser representada como: Vida degradao reorganizao-mistura estabilizao aglutinao decomposio base de nova vida Assim, de uma qualidade se passa a outra qualidade que contm elementos da anterior, mas distinta, assegurando sempre a nova vida e a circulao de massa e de energia.
117

Produtos da mineralizao

Formao cida N

Formao de sais, precipitao, soro

Vida

Vida

D humificao

B A E Degradao mineralizao evoluo

Figura 4. 8: Esquema representativo da idia de evoluo da energia ao longo do processo de humificao: VidaA: degradao at espcies moleculares mais simples; Vida-B: degradao at agrupamentos moleculare;, C: reorganizao-mistura-estabilizao de SH; C-D: semi-equilibrio, estruturao complexa de substncias hmicas; E: mineralizao; D-Vida: aporte de espcies moleculares vida; E-Vida: aporte de estruturas atmicas vida.

A partir do ponto de vista da entropia, as molculas iniciais se degradam e transformam-se com certa rapidez, at a estrutura mais simples e, com isso, o processo adquire entropia positiva. A continuao do processo o de reacomodao para estruturar molculas estveis, mas com uma composio diversa e mista em relao s originrias. como alcanar um equilbrio relativo onde a entropia tende a zero e, por ltimo, comea o processo de mineralizao ou destruio, liberando ao meio centenas de componentes, num processo espontneo e irreversvel, durante o qual a entropia volta a aumentar. De acordo com isso, possvel relacionar as mudanas na entropia que vo ocorrendo com as etapas pelas quais os componentes vo transitando, aspecto que est ainda por ser realizado. O esquema (proposto por Pauli, 1967) da Figura 4.9 contm uma concepo de estrutura:

Figura 4.9: Esquema representativo de Pauli sobre os nveis de complexidade que alcanam as susbtncias hmicas ao interatuar entre si e com o meio ambiente (adaptao de Frimmel & Christman, 1988).
118

Anos depois, Orlov (1995) ofereceu uma explicao sobre o significado das massas moleculares, determinadas por diversos mtodos, e a interpretao sobre a estrutura complexa das substncais hmicas. Esse trabalho uma ampliao e aprofundamento das idias de Pauli. Como pode ser visto, a partcula com que se tem o primeiro contato uma estrutura complexa, constituda por uma multiplicidade de microestados do sistema que vem alcanando estruturas superiores peloincremento de tamanho das macromolculas, pela diversidade de estruturas a que so vinculadas, pela sua condensao e aglutinao sucessiva e pela participao de minerais e ons de metais na saturao de determinadas ligaes. Uma concepo da entropia do ponto de vista estatstico determina que, a maior quantidade de microestados corresponde maior tendncia para o incremento da estabilidade do sistema, isto , um incremento da entropia.
Clculos da variao da energia livre G e a entropia S no desenvolvimento de uma reao

Existem vrias possibilidades para realizar estes clculos e, entre elas, est a determinao de constantes de troca ou de equilbrio (K) a 298 K de um sistema de substncias orgnicas ou hmicas do solo utilizando as eqs. 41 ou 42 (procedimento 13). Essa eq. De forma simplificada pode ser escrita como: G = 5,707 log K kJ.mol-1 de ons Aplicando o logaritmo negativo a ambos os membros da equao, obtem-se:
G = 5,707 pK kJ.mol-1 de ons
a partir do pK da substncia

H que destacar que a magnitude de G calculada a partir das constantes termodinmicas de equilbrio e que um clculo, a partir das constantes estequiomtricas, pode induzir a alguns erros, isto , de acordo com a tcnica recomendada, a variao de energia livre calculada como uma aproximao. Uma vez obtido o valor de G, possvel aplicar a equao eq.38 (procedimento 14) e calcular a entropia do sistema sob essas condies.
S = ( -DG + DH) / T

Mtodo do estado de transio ou do complexo ativado (Kireev, 1969) Para uma reao do tipo A+B = [A.B]* = C + D reagentes complexo produtos ativado possvel notar que a constante de velocidade da reao est vinculada ao potencial F, isto , a diferena de potenciais V e T constantes, entre o complexo ativado e as substncias reagentes de forma
RT k = e N oh
F RT

(46)

Onde: k = constante de velocidade da reao

119

F*= energia livre de Helmholtz No o nmero de Avogadro = 6,02 . 1023 espcies mol-1 h a constante de Planck = 6,6237 x 10-34 J s Como o complexo ativado se encontra em equilbrio estatsitico com as substncias reagentes, possvel que: F* = EA* T S* Que so as funes termodinmicas na ativao, DEA* troca de energia interna no estado ativado. E, ento, possvel expressar:
RT k = e N oh
S R

E RT

(47)

e tambm,
RT PZ = e N oh
S R

(48)

Ou ainda:
k = PZ x e
E RT

(49)

Esta ltima eq. denominada equao de Arrhenius onde E* a energia interna; P. o fator de probabilidade ou fator estrico das colises; e Z, as colises efetivas. possvel observar que um aumento da entropia conduzir a um aumento da probabilidade das colises energticas e estericamente efetivas, o que significa que no s influi na velocidade de reao como na energia de ativao fornecida ou, ainda, sobre ambos fatores simultaneamente. Em termos estritos E* = EA* + RT mas como EA* >> RT, pode-se supor, como uma aproximao, que EA* = E*. Se a velocidade da reao expressa em unidades de presso e no de concentraes, ento, no lugar de F* e EA*, as equaes anteriores devero ser expressas em funo de G* e H*. Essas magnitudes podero ser consideradas como funes termodinmicas, pelo menos de forma aproximada. Agora, em condies de calcular a magnitude da entropia, caso se conhea a magnitude de K e de E*, coisa que pode ser feita com xito por vrios mtodos, por exemplo, ao realizar a anlise trmica de ATG das amostras de substncias hmicas, pode-se calcular a energia de ativao de cada processo e as constantes de velocidade relativas e absolutas de cada processo endo ou exotrmico como alguns exemplos a seguir. Utilizando o clculo da eq.47 obteremos:
S = R ln k 0 R ln RT E + N 0h T

Na Tabela 4.9, aparecem dados da anlise termogravimtrica (ATG) de substncias hmicas de um Oxisol de Cuba, em que foi calculada a variao da entropia nessas condies. Turner & Schnitzer (1962); Chernikov & Konchits (1978), Chernikov & Kasatirov (1977).
120

Tabela 4. 9: Parmetros cinticos e termodinmicos de cidos hmicos de um Oxisol obtidos por meio de de ATG. (Garcs, 1987)
Experimental Reao 1 2 3 / T (mg/K) 0.24 0.41 0.48 TM (K) 358 563 663 T (K) 53 58 173 E* (kJ/mol) 47,1 106,3 149,4 kO (s) 1,98.108 1,74.1011 6,6.104 Calculado K 0.442 0.403 0.135 O (mg) 5.44 10.17 35.49 S* (J/K.mol) 43,94 153,8 66,04

Onde: / TM T E* k0 K 0 S* T = variao da massa de reao com mudana de temperatura = temperatura do mximo de reao = incremento de temperatura no exoefeito = energia de ativao = constante especfica de velocidade = constante geral de velocidade = massa transformada na combusto = entropia de ativao do processo

Os processos que ocorreram do ponto de vista fsico foram: 1. Perdas de gua e ruptura de algumas ligaes fracas de cadeias alifticas 2. Combusto da periferia das substncias hmicas. 3. Combusto do ncleo das substncias hmicas. Essa informao corrobora com o fato de o processo, ao levar as substncias reagentes at o complexo ativado possibilita um incremento de entropia devido ao enfraquecimento das ligaes, aumentando a amplitude e a quantidade dos movimentos atmicos e moleculares, o que permite que o nmero de microestados provveis seja aumentado. Se a partir do procedimento descrito antes se determina a entalpia da ativao, por H = k A ,, onde K a constante do equipamento para cada temperatura de efeito trmico ou para uma faixa de temperaturas medidas, e A a rea sob a curva ATG, ento, pode-se calcular a energia livre de ativao que evoluiu mediante G = H - T S Mangrich e colaboradores (2000), estudando os cidos hmicos obtidos de vermicomposto pela anlise trmica, obtiveram dados como os que aparecem na Tabela 4.10. Os autores analisaram a energia cedida em duas faixas de temperatura nas quais ocorrem os exoefeitos e as maiores perdas de massa correspondentes ruptura de ligaes intramoleculares, no primeiro evento e ruptura de ligaes intermoleculares no segundo. Assim, tal fato no deve corresponder exatamente ao que est ocorrendo, uma vez que as ligaes intramoleculares possuem energias ao redor de 400 kJ mol -1 , enquanto as ligaes intermoleculares tm entre 4 e 40 kJ.mol-1. Desta forma, no possvel que haja necessidade de temperatura muito mais elevada para romper ligaes mais fracas. prefervel ento assinalar o primeiro evento de perda como combusto e ruptura de ligaes das cadeias alifticas e o segundo como perda devido destruio de estruturas aromticas ou ncleos dos cidos hmicos.
121

Tabela 4.10: Anlise trmica de cidos hmicos isolados de vermicomposto por meio de Calorimetria Diferencial.
Amostras Efeitos trmicos faixa de T ?H Perda de massa % faixa de T ?H Perda de massa % faixa de T ?H Perda de massa % faixa de T ?H Perda de massa % Dado C J.g-1 a b C J.g-1 a b C J.g-1 a b C J.g-1 a 300 C 160-350 -1574 36,3 55,0 160-384 -1399 32 49,2 160-390 -1209 33,5 51,5 160-350 -892 27,3 500 C 350-600 -3034 29,7 45,0 384-600 -3526 33 50,8 390-600 -3270 31,5 48,5 350-600 -2516 27,9

Ovinos-HA

Ovinos-HA

Caprinos-HA

Coelhos-HA

49,5

50,5

a- com base na massa total b-com base na massa de S.H.

Os dados mostram que, em todos os casos, as entalpias de combusto das partes centrais so at trs vezes superiores s entalpias das partes perifricas. Por outro lado, de acordo com as perdas de massa, as entalpias esto em equilbrio relativo com as partes externas das macromolculas em relao s partes internas mais estveis, coincidindo com a anlise dos dados de Kuerk (2004). Este trabalho um exemplo das possibilidades que possuem as tcnicas de anlise trmica pelo vnculo que oferecem com os dados termodinmicos. Outros processos de mudanas de energia em reaes de substncias hmicas podem ser calculados a partir de algumas determinaes analticas, preparando-se adequadamente as condies de estudo. Um exemplo pode ser observado com os dados na Tabela 4.11. As fontes de energia que mudam continuamente com o solo Posto que o solo um sistema aberto, todo o ecossistema atua continuamente sobre ele e, por sua vez, o solo influi em algumas das caractersticas do ecossistema. Dessa forma, as fontes de energia que mais tm influncia nos processos so: - As mudanas de temperatura do meio ambiente que podem aumentar ou diminuir significativamente a temperatura do solo. Isso se manifesta em nosso planeta de forma regular com as estaes do ano nas regies continentais e insulares, de acordo com a latitude assim como pelas mudanas que produzem os eventos vulcnicos eruptivos e os incndios na vegetao. - As transformaes energticas, que provocam o vento e a gua ao, moverem massas e destruir partculas e componentes com a sua ao. - A recepo da radiao eletromagntica do sol numa ampla gama de comprimentos de onda os quais podem interagir com seus componentes. - As trocas de energia como conseqncia da atividade tectnica do planeta. - A recepo de radiao csmica que atua a longo prazo. - O aporte energtico provocado pela atividade antropognica de todo tipo sobre a superfcie ou em todo o perfil do solo, acentuada pela atividade industrial e queima dos combustveis
122

Tabela 4.11: Determinao da variao de G da matria orgnica dos solos no desenvolvimento da reao (g de AH).
Parmetro Condies 25,9-61,5 pH Variao de G na titulao redox dos AH G = E . 2 . 1280,30 E em Volt pH pH 0,7 6,0 10,0 5,02 3,35 1,67 2,09 1,67 1,55 0,084 9,4 11,7 53,47 66.57 1,84 0,38 6,98 10,2 39,72 58.04 23,4-59,8 25,1-58,6 6,69 5,44 2,09 1,26 2,09 1,72 -1,26 7,15 12,7 40,68 72.26 Magnitude do parmetro para os solos Oxisol Cambisol H Mollisol Renzina Vermelha 25,1-54.0 1,67 -0,84 10,2 11,1 58.04 63.16

Variao de G na dissipao de H+ dos AH a partir pK a 30 C (kJ)

kJ

Variao de G dissoluo de complexos G = E. 2 . 129,70 kJ

pH 0,7-6,0 pH 6,0-10 na Solveis em gua Solveis em Na OH pK pK G G H2O NaOH H2O NaOH

Variao de G na dissoluo de complexos na dissociao de H+ G = 5,69 pK kJ pH = pK + log sal / cido pH =pK + log resto / soluo

AH = cidos hmicos,

Garcs y Savich (1975)

fsseis aumentando o efeito estufa. - O aporte energtico constante em toda a biota que atua sobre ou dentro do solo liberando, na sua atividade, grandes quantidades de energia. - A liberao de energia como produto das transformaes radioativas dos elementos fissionveis que esto contidos nos minerais, os quais so parte dos componentes do solo. - O aporte energtico eventual que provoca a cada sobre o planeta de grandes meteoritos ou outros corpos csmicos que podem produzir eventos catastrficos para todo o planeta com mudanas quali e quantitativas de todos os seus componentes. - A quantidade de energia armazenada nas susbtncias orgnicas dos sistemas biolgicos que comeam a ceder em forma de cascata no processo de humificao-mineralizao at em sistemas que comeam a estruturar-se, que armazenam energia em forma de ligaes atmicas e moleculares at a estruturao de macromolculas hmicas e, logo, ao sistema estvel, na interao com os demais componentes do solo. Como possvel apreciar nessa relao, so muitas as fontes que podem influir de forma mais ou menos significativa na entrada ou sada de energia do solo, produzindo transformaes importantes. A explicao de cada uma delas pode ser encontrada na literatura e muito ampla. Aqui, limita-se a um exemplo a partir de dados especializados.

123

Figura 4.10: Representao de estado dos eltrons nas susbtncias hmicas proposta por Ziechmann no livro de Friemmel & Christman (1988).

O esquema proposto por Ziechmann trata de ilustrar a idia sobre a formao das substncias hmicas: - Como conseqncia da entrada de energia e da energia evoluda internamente entre as estruturas, produzido da periferia das substncias hmicas um incremento de energia at as estruturas internas (denominada por outros autores de ncleo) que, como pode ser observado, muda as propores e estrutura dos estados eletrnicos. Por exemplo, os eltrons aumentam, bem como as ligaes covalentes e os estados tripletes dos eltrons. Por outro lado, diminuem relativamente a energia de ionizao, a afinidade eletrnica, e as transies e-dac que se referem ao desaparecimento ou desativao de radicais livres e do mesomerismo intermolecular. - Um fator importante dessas mudanas a temperatura do sistema (em equilbrio com o meio) ao longo do processo de formao, posto que um parmetro que forma uma parte indispensvel do processo de conformao e estabilizao. Esta pode ser, entre outras, a razo no s da diminuio da atividade dos microrganismos, mas seno tambm a deteno dos processos de sntese e degradao nos pases temperados durante o inverno. Tem sido comprovado que a temperatura ambiente so obtidas substncias hmicas com baixas concnetraes de radicais livres. - A incorporao de energia pelas radiaes eletromagnticas quando as substncias hmicas so irradiadas. Por exemplo, Ziechman & Kress (1977) irradiaram substncias hmicas com uma lmpada de mercrio de 1000 W sem mudar a temperatura ambiente e observaram a formao de radicais p e de estados tripletes dos eltrons e quando interrompida a irradiao, foi observada a formao de ligaes covalentes Por fim, chega-se com estes dados, concluso de que o estado das substncias hmicas est mudando continuamente, no somente como conseqncia da atividade dos microrganismos, mas tambm porque so produzidas continuamente transformaes importantes sobre as mesmas ao mudarem, ou atuarem componentes fsico-qumicos do meio, tais como, a temperatura e as radiaes eletromagnticas. Disso, resulta outro elemento que ratifica a idia de que o estado aparente de equilbrio que alcana o solo e seus componentes no mais que um estado estacionrio por meio
124

do qual vai evoluindo lentamente e que somente, quando acumuladas as transformaes qualitativas suficientes, produzida a mudana qualitativa do mesmo. Para concluir preciso insistir em dois elementos bsicos: 1) Todos os sistemas materiais podem ser descritos em seus aspectos mais gerais a partir das quantidades e tipos de massas envolvidos com o fluxo de energia presente. A partir desta base, que se constri o edifcio da cincia com as particularidades que explicam com mais detalhes a existncia, as caractersticas, as propriedades e as interaes mltiplas que um sistema pode realizar internamente ou com os sistemas adjacentes. Quando os estudos dessa integralidade so realizados e podem ser generalizados mediante princpios e leis, ento, que se aproxima da verdade e pode-se dizer que o conhecimento acumulado a cincia constituda. Por considerar correta esta afirmao, no se pode abandonar ou desejar uma melhor oportunidade para o estudo energtico dos sistemas do solo, e que devem ao menos se relacionar com o fluxo de energia, com parmetros especficos de transformao dos sistemas. Esta tarefa ainda est por ser feita. 2) Em todo sistema qumico (como so as substncias hmicas dos solos), h quatro nveis de conhecimento que so necessrios atingir para se poder aproximar da sua explicao: composio, estrutura, propriedades e funo. Para estudar os elementos que compem cada um deles, necessrio aplicar uma grande diversidade de mtodos analticos, matemticos, de interpretao e generalizao. Esta a nica forma de no acumular informao diversa (aparentemente muito valiosa), mas no relacionada, nem sistematizada, que no final das contas, no ajuda a dar explicaes coerentes do sistema sob estudo. necessrio observar o sistema material de longe: como est constitudo, como se manifesta, quais so suas tendncias de desenvolvimento e decidir como abordar algumas de suas partes de perto (o particular) mas sempre trabalhando em forma de sistema. Se o mundo material uma unidade diversa em permanente transformao mediante contnuas interaes entre as suas partes, os mtodos que podem explic-loa devem reproduzir esta realidade.

125

c a p t u l o
Espectroscopia na regio do Ultravioleta-Visvel
Luciano P. Canellas Victor M. Rumjanek

A introduo da anlise de espectroscopia de UV-VIS nos anos 1930 foi um marco fundamental na qumica analtica. As vantagens de uma anlise no-destrutiva e a capacidade de anlise de um grande nmero de amostras num tempo reduzido revelaram uma poderosa ferramenta para a qumica orgnica no diagnstico de molculas, sem a necessidade de compreenso de uma base terica ampla. A anlise de UV construiu o caminho para as outras tcnicas espectroscpicas. Apesar de representar um salto histrico, hoje raramente a espectroscopia de UV-VIS usada como o principal mtodo na anlise estrutural. Porm, apresenta a vantagem da simplicidade, do baixo custo dos equipamentos que esto disponveis em quase todos os laboratrios e da rapidez de resultados. Alm disso, junto com a espectroscopia de fluorescncia, possvel, na regio do UV-VIS, avaliar uma srie de caractersticas importantes das substncias hmicas, tais como, grau de humificao, capacidade de complexao, constantes de dissociao entre outras. A espectroscopia na regio UV-VIS muito til para a introduo dos princpios da espectroscopia de absoro. Introduo Apesar de hoje a espectroscopia de UV-VIS no ser isoladamente responsvel pela elucidao de modelos estruturais ou de reatividade qumica, o uso da propriedade da absoro da luz nessa regio foi a primeira responsvel pela criao do conceito de grau de maturao de substncias hmicas, grau de humificao ou ainda grau de evoluo qumica. So da dcada de 1950 os primeiros trabalhos relacionando colorao escura com evoluo das substncias hmicas. Hoje, novos conceitos foram incorporados com o desenvolvimento de outras tcnicas espectroscpicas, porm h uma persistncia do uso da relao E4/E6 e consolidao do uso da fluorescncia como uma tcnica sensvel para avaliar tanto o grau de humificao como a capacidade das substncias hmicas em formar complexos com ons. Segue uma descrio do fenmeno da absoro de luz que comum aos outros mtodos espectroscpicos e, por isso, de alguma utilidade. Absoro de radiao eletromagntica na regio do UV-VIS A Figura 5.1 mostra parte do espectro eletromagntico com as correspondentes freqncias e comprimentos de onda. A regio do espectro de ultravioleta, interessante do ponto de vista estrutural, vai de cerca de 200 nm a 380 nm, tambm chamada de UV prximo.
comprimento de onda () 10 nm 200 nm UV vcuo UV prximo 106 cm-1 nmero de onda (cm-1) IV prximo 380 nm IV/microondas vibrao e rotao rotao 760 nm moleculares molecular

Visvel 400 cm-1 200 cm-1 3x10-2 cm-1

5x104 cm-1

2.6x104 cm-1

4000 cm-1

Figura 5.1 Espectro eletromagntico.

126

A energia total de uma molcula a soma de suas energias eletrnica, vibracional e rotacional. A energia de uma determinada radiao eletromagntica relaciona-se com sua freqncia (ou com seu comprimento de onda), pela equao,
E = h = hc /

onde h a constante de Planck, c a velocidade da luz e e so respectivamente a freqncia e o comprimento de onda da radiao. A energia absorvida na regio do UV prximo produz uma transferncia dos eltrons de um orbital molecular ocupado (geralmente no-ligante n ou ligante ) para um orbital no-ocupado antiligante, * ou *. Assim, a transferncia de um eltron no-ligante n para um orbital antiligante * representada por
n *

A Figura 5.2 mostra as diferentes transies com suas energias aproximadas. Como possvel observar, uma transio n- * requer menos energia do que uma transio - *. Conseqentemente, uma transio n-* ocorre quando h absoro de radiao UV com um comprimento de onda maior do que aquele de uma radiao que produz uma transio -*.
anti-ligante (*) anti-ligante (*) E no ligante n ligante ligante
Figura 5.2. Transies eletrnicas e seus nveis energticos

A energia em excesso no estado excitado pode produzir a quebra de uma ligao ou a ionizao da molcula ou ainda pode ser reemitida como luz ou calor. A liberao como luz produz fluorescncia ou fosforescncia. Uma vez que a absoro de luz UV quantizada, cada transio deveria fornecer uma linha bem definida, o que no ocorre, pois cada nvel eletrnico possui vrios subnveis vibracionais e assim, so obtidas bandas de absoro. As duas caractersticas importantes de um espectro de UV so a posio da banda e sua intensidade. A posio da banda corresponde ao comprimento de onda cuja energia corresponde quela necessria para a transio. A intensidade da banda depende de dois fatores: a probabilidade da transio ocorrer e a diferena de energia entre os nveis fundamental e excitado. A equao que d a intensidade da absoro a derivada da lei de Lambert-Beer, que expressa por,
A = log I0 = kcl I

onde Io e I correspondem intensidade de luz que incide sobre a amostra e a que transmitida depois de atravessar a amostra, respectivamente; k uma constante caracterstica da amostra, c a concentrao da amostra; e l o caminho tico atravs da amostra; e A a absorbncia da amostra. Quando c expressa em mol L-1 e l expresso em cm, a equao torna-se,
A = cl

onde chamada de absortividade molar. Geralmente, a intensidade de uma determinada banda expressa pela absortividade molar na mxima absoro, max ou log max. Se a transio possui um valor elevado de , da ordem de grandeza de 104, esta transio tem alta probabilidade de ocorrer
127

e diz-se que ela permitida. Ao contrrio, se a transio possui um valor baixo de , da ordem de 102, diz-se que a transio proibida, pois tem baixa probabilidade de ocorrer. Evidentemente, para a comparao de , as anlises devem ser realizadas com o mesmo solvente e em solues de mesma molaridade. Aumentando-se a quantidade de amostra, naturalmente aumenta a capacidade de absorver a radiao incidente. O grupo insaturado que responsvel pela absoro de UV chamado de cromforo. Estes so a ligao dupla C=C, o anel aromtico e a ligao dupla C=O. Substituintes que aumentam o valor da absortividade molar de um cromforo bsico provocam o efeito hipercrmico e os que diminuem a absortividade molar provocam o efeito hipocrmico. A Tabela 5.1 fornece alguns exemplos de compostos orgnicos e suas absores caractersticas. A incluso de ligaes adicionais e o grau de extenso da conjugao aproximam cada vez mais os nveis de energia entre o orbital do estado fundamental e o excitado. Como resultado, o comprimento de onda da radiao requerido para a excitao se torna maior com o aumento do grau de conjugao (comparar o etileno e o benzeno). Sistemas aromticos e heteroaromticos so geralmente utilizados para exemplificar sistemas conjugados e tais estruturas so cromforos particularmente teis. Os eltrons no-ligantes de heterotomos, tais como, N, O e S tambm esto envolvidos na ressonncia e podem estender a conjugao desses sistemas. Auxocromos so grupos, tais como, OR, NR2, NO2 ou CO2R, que so capazes de aumentar o max de um cromforo bsico.
Tabela 5.1 Compostos orgnicos e suas absores na faixa de UV.

composto orgnico transio eletrnica

max (nm)
150 185 193 224 165 217 150 188 270 180 200 255 210 370

max

Etano gua Metanol Hexano 1 tiol Etileno Buta 1,3, dieno Acetona

Benzeno

Fenol

* n * n * n * * * * n * n * * * * * *

700 500 126 10000 21000 1860 15 60000 8000 215 6200 1450

O espectro ilustrativo da Figura 5.3 mostra como o aumento da conjugao aumenta o comprimento de onda de mxima absoro.

Figura 5.3. Efeito da extenso de conjugao sobre a absoro no UV.

128

Efeito do solvente O solvente pode afetar a posio do comprimento de onda de mxima absoro (max). O princpio de Frank-Condon diz que, durante a excitao eletrnica, os tomos no se movem, mas os eltrons, incluindo os do solvente, sofrem reorganizao. A maioria das transies leva a excitao onde estas so mais polarizadas que no estado fundamental. Se o solvente polar, o estado excitado pode ser estabilizado mais facilmente pelas interaes dipolo-dipolo do que o estado fundamental. A reduo da diferena de energia entre os orbitais resulta num aumento do max entre 10-50 nm para o etanol, quando comparado com o hexano. Tal mudana chamada de deslocamento batocrmico ou deslocamento para o vermelho onde o max se move em direo faixa vermelha do espectro eletromagntico. As excees so as absores devido s transies n* de grupos carbonilas que, no estado fundamental, apresentam ligao hidrognio com os solventes mais fortes do que no estado excitado. Neste caso, a diferena entre o estado fundamental e excitado aumenta, e a transio requer mais energia. Assim, h um deslocamento para menores, chamado deslocamento hipsocrmico, que pode chegar a 15 nm em solventes que podem formar ligaes hidrognio, comparadas com solventes apolares. Esse deslocamento hipsocrmico tambm chamado de deslocamento para o azul (menores comprimentos de onda). O espectro de UV-VIS e os espectrmetros Os espectrmetros mais modernos so de feixe duplo, como representado na Figura 5.4.
espelho rotatrio de setores (separador de feixes) monocromador fonte referncia amostra espelho espelho rotatrio de setores (recombinador de feixes) fotomultiplicador ou arranjo de diodos espelho

Figura 5.4. Esquema representativo de um equipamento de UV-VIS de feixe duplo.

A fonte de radiao eletromagntica na faixa de UV (180 a 350 nm) uma lmpada de deutrio e para a faixa do visvel (350 a 700 nm), utilizada uma lmpada comum de tungstnio. Como o vidro absorve radiao UV, utilizam-se clulas feitas de quartzo. Os espectrofotmetros de absoro na regio do UV-VIS so dispersivos, sendo que, normalmente, o elemento de disperso uma grade de difrao. A grade um componente ptico que contm uma srie de ranhuras, que so justamente os elementos responsveis pela difrao. A resoluo do espectrmetro diretamente proporcional ao nmero de ranhuras da grade. A deteco da absoro dos diferentes comprimentos de onda pode ser feita de duas maneiras: alguns aparelhos utilizam um tubo fotomultiplicador e os mais modernos utilizam um arranjo de diodos. Um tubo fotomultiplicador formado por um tubo de vidro ou de quartzo sob vcuo, no qual existe um conjunto de placas metlicas interligadas. A principal vantagem do arranjo de diodos a rapidez na anlise, j que, com o arranjo, a leitura de todos os comprimentos de onda feita simultaneamente. A luz, emitida pela fonte, passa primeiro por um monocromador, que separa a luz em seus
129

diferentes comprimentos de onda. A luz monocromtica passa por um espelho tico e separada em dois feixes de igual intensidade. Um passa pela amostra e outro pela clula de referncia contendo solvente puro. O sinal de absoro produzido pelo feixe de referncia subtrado automaticamente do sinal de absoro da clula da amostra e o resultado corresponde absoro pela amostra. O espectro da amostra geralmente obtido em uma soluo diluda. Aplicao de espectroscopia UV-VIS matria orgnica de solos A aplicao da espectroscopia na regio do UV-VIS no estudo das substncias hmicas proporcionou avanos significativos no estudo da humificao e de suas reaes. As propriedades ticas da matria orgnica humificada tm sido utilizadas para discriminar diferenas na reatividade, origem, tamanho molecular e grau de humificao (Kononova, 1966) e efeitos do manejo sobre a qualidade da matria orgnica (Schnitzer, 1971; Slepetine & Slepetys, 2005). Espectros UV-VIS de substncias hmicas apresentam pouca definio: a absoro decresce linearmente com o aumento do comprimento de onda, fornecendo pouca informao estrutural. Um espectro de UV-VIS tpico de cidos hmicos mostrado na Figura 5.5.

Figura 5.5. Espectros de UV-VIS de cidos hmicos isolados de lodo de estao de tratamento de esgoto e de composto de resduo domiciliar urbano.

Independentemente da origem das substncias hmicas, espectros UV-VIS so bastante similares devido presena de ligaes e de conjugaes na molcula que promovem a sobreposio na absoro de energia. Entretanto, no espectro apresentado na Figura 5.5, os cidos hmicos apresentam um ombro de absoro centrado em 280 nm. Ghosh & Schnitzer (1979) tambm observaram um ombro de absoro centrado na regio de 250 - 270 nm nos espectros de UVVIS, que foi atribudo absoro de estruturas do tipo quinonas. O principal parmetro utilizado na anlise por espectroscopia de UV-VIS em substncias hmicas a razo entre a absorbncia em 465 nm e 665 nm de solues aquosas diludas de cidos hmicos e flvicos. Essa razo chamada de E4/E6 e independente da concentrao de substncias hmicas em soluo, mas varia de acordo com o pH e com a classe do solo de onde foi isolado o material hmico. Kononova (1966) encontrou valores para a relao E 4/E6 de cidos hmicos isolados de Podzol, prximos de 5,0 e, entre 3 e 3,5, para Chernossolos. Assim, Kononova postulou que o valor da relao E4/E6 estaria relacionado ao grau de condensao dos constituintes aromticos. Segundo a teoria da lignina para o processo de humificao, quanto maior o grau de evoluo da matria orgnica humificada, maior o nmero de unidades aromticas presentes.
130

Valores elevados para a relao E4/E6 refletiriam de forma contrria, menor grau de condensao e presena em propores maiores dos componentes alifticos. O uso da razo E4/E6 na inferncia de propriedades estruturais de substncias hmicas est baseado no fato de que a queda da absorbncia, com o aumento do comprimento de onda, seria proporcional diminuio de conjugao nos diferentes sistemas orgnicos. A relao E4/E6 uma medida da inclinao da reta, formada entre a absorbncia em 465 nm e em 665 nm. Sistemas com conjugao mais estendida apresentam maior absoro no azul (465 nm). A relao E4/E6 reflete qualitativamente a inclinao da reta A vs , com a vantagem de ser independente do teor de carbono em soluo. O espalhamento da luz por uma soluo diluda de macromolculas ou partculas coloidais est intimamente relacionado com a massa, tamanho e interao entre as espcies solveis. Normalmente, a intensidade de luz espalhada em vrios ngulos de um feixe monocromtico, que atravessa a soluo, medida por um fotmetro especialmente elaborado para isso. Doty & Steiner (Apud Gosh & Schnitzer, 1979) demonstraram que pode ser obtida uma informao equivalente a partir da medida de transmisso em vrios comprimentos de onda. Para isso, eles formularam a seguinte equao,
d log A = 4 d log

onde A a absorbncia da suspenso; o comprimento de onda da luz transmitida; e um parmetro derivado da funo b/0, onde b a maior dimenso da partcula e 0 o comprimento de onda da luz incidente.
Latossolo Amarelo Neossolo Ltico 0,3 0,25 0,2 A 0,15 0,1 0,05 0 460 0 2,65 -0,4
E4/E6= 4,58 E4/E6= 7,26

Latossolo Amarelo Neossolo Ltico

2,7

2,75

2,8

2,85

-0,8 log A -1,2

inclinao

-1,6

AH= -4,3 AH= -5,5

560 (nm)

660

-2 log

Figura 5.6. Espectro na regio do visvel (A) e transformado em log A vs log l (B) de cidos hmicos isolados da camada superficial de um Neossolo Ltico e de um Latossolo Amarelo Coeso Tpico.

Em geral aumenta com o aumento de b/0. Chen e colaboradores (1977) validaram a aplicao desse postulado para cidos hmicos e flvicos em soluo, uma vez que observaram que as fraes humificadas de menor massa molecular produziam menor inclinao na reta log A vs log , ou seja, o aumento na inclinao na reta (ou decrscimo de ) correspondeu ao aumento da partcula. A relao entre a inclinao dessa reta e a relao E4/E6 dada por,
d log A log E 4 log E 6 log(E 4 /E 6 ) = inclinao = = = 6,435 log(E 4 / E 6 ) d log log 465 log 665 0,1554
131

O parmetro de inclinao da reta calculado dessa forma uma funo direta da partcula em suspenso. Dessa forma, a inclinao pode ser relacionada com a distribuio de massa/tamanho ou grau de associao das subunidades estruturais no arranjo supramolecular proposto por Piccolo (2002). A Figura 5.6A apresenta valores de absorbncia de luz incidente entre 465 nm e 665 nm para cidos hmicos isolados de um Latossolo Amarelo Coeso, tpico de solos de tabuleiro, e para um Neossolo Ltico de formao recente. A inclinao da queda de absorbncia bem maior para os cidos hmicos isolados do Neossolo Ltico e refletida no menor valor para a relao E4/E5. A inclinao da reta log A vs log (Figura 5.6B) tambm maior (-4.3) em relao do Latossolo Amarelo (-5.5), sugerindo substncias hmicas de tamanho mais elevado no solo recmformado. Kononova (1966) e depois Schnitzer & Khan (1978) propuseram uma relao inversa entre a razo E4/E6 e o grau de condensao de anis aromticos nas substncias hmicas. As razes dessa inferncia esto comentadas no captulo sobre os modelos estruturais de substncias hmicas e as postulaes sobre as suas vias de formao. Como subproduto direto da transformao da lignina, as substncias hmicas iriam apresentar contedo maior de anis aromticos com o aumento do grau de humificao. Como os valores de E4/E6 para substncias hmicas so menores para solos com maior grau de evoluo foi cunhada a sentena: quanto menor o valor da relao E4/E6 maior o grau de aromaticidade das substncias hmicas. Ainda em 1977, Chen e colaboradores argumentaram contra essa assuno medindo indiretamente a aromaticidade ou ramificao de biopolmeros utilizando medidas viscosimtricas e no encontrando qualquer relao com valores de E4/E5. A Figura 5.7 foi construda a partir de valores da razo E4/E6 para cidos hmicos de vrios solos tropicais e de valores obtidos do grau de aromaticidade por RMN 13C (que reflete a proporo de C em anis aromticos e em olefinas no material hmico). Demonstra tambm a ausncia de uma relao entre valores E4/E6 e o grau de condensao aromtica das substncias hmicas.
100 grau de aromaticida de (%)

50

0 2 2,5 3 3,5 4 4,5 Relao E4/E 6

Figura 5.7. Correlao entre valores de relao E4/E6 e grau de aromaticidade de cidos hmicos obtidos por RMN 13C. Adaptado de Canellas et. al. (2000, 2002 e 2003).

Entretanto, os valores de E4/E6 apresentaram forte correlao com valores de viscosidade (-0,95**), contedo de C (-0,73**) e de O (0,82**), de acidez total (0,62*) e de grupos COOH (0,62*). quase impossvel a obteno de espectros de UV-VIS para cromforos individuais na matria orgnica em soluo, pois os cromforos esto presentes em grande nmero e so de vrios tipos. Alm disso, as vibraes internas, as rotaes moleculares e as interaes entre as molculas
132

alargam as bandas de absoro nos espectros de substncias hmicas e somente alguns picos especficos so apontados ocasionalmente. No entanto, uma tentativa de utilizar a espectroscopia de UV, para obteno de parmetros estruturais de substncias hmicas, foi realizada por Korshin e colaboradores (1997). Essa tentativa est baseada no estudo da absorbncia de uma molcula simples, o benzeno. No benzeno, eltrons no estado fundamental (A0) absorvem quanta de luz e so promovidos ao orbital antiligante * na transio A0E que ocorre pela absoro da luz em 180 nm, conhecida como banda de excitao local (EL). A banda de absoro muito intensa ( = 60 000 cm2mol-1). A transio do benzeno, conhecida como A B (segundo estado excitado), chamada de transio benzenide (Banda K) e tem menor intensidade ( = 7400 cm2mol-1). A transio proibida onde a absoro de luz tem lugar devido a perturbaes vibracionais para o sistema eletrnico . A terceira banda de absoro corresponde transio AB2, centrada em 253 nm, e apresenta a menor intensidade ( =204 cm2mol-1), pois muito forte a proibio quanto-mecnica. A banda em 253 nm caracterstica de espectros de compostos aromticos e sempre chamada banda de transferncia de eltrons (TE). A intensidade das bandas de TE afetada pela presena de grupos funcionais polares nos anis como hidroxilas, carbonilas, carboxilas de cidos ou steres que aumentam a absortividade molar. Ao contrrio, grupos no-polares, tais como, cadeias alifticas, no aumentam a intensidade de absoro, com permanecendo abaixo de 300 cm2mol-1. A energia de um quantum de luz inversamente proporcional ao comprimento de onda,
E = 1240

em eltrons-volt (eV); E = 28636 em Kcal mol-1 ou E = 119809 em KJ mol 1

para em nm. Assim, para a matria orgnica dissolvida, o espectro de UV representa a sobreposio das bandas de excitao local (EL), das bandas B e das bandas de transferncia de eltrons (TE), em que cada uma contribuio de todos os cromforos presentes. Korshin e colaboradores (1997) postulam que, apesar da sobreposio das bandas EL, B e TE, elas no perdem sua identidade e podem ser analisadas por UV. Desta maneira, mesmo sendo as bandas geradas por absores individuais numerosas, os limites de cada banda (EL, B ou TE) excedem qualquer banda individual. Em termos gerais, possvel dizer que para compostos aromticos individuais, a razo entre as bandas TE (253 nm) e Bz (203 nm) baixa para qualquer composto benznico no-substitudo (0,027), aumentando com o grau de substituio por OH, C=O, CO2H, especialmente por steres carboxlicos, com valores acima de 0,4. A relao ATE/ABz pode ento ser usada como um indicador da reatividade das molculas e de sua tendncia de participao em reaes como as de complexao ou adsoro, uma vez que os valores da relao ATE/ABz so menores para compostos com anis aromticos com baixo grau de substituio ou parcialmente substitudos por grupos alifticos mais apolares, enquanto a substituio, por grupos funcionais como OH, C=O, CO2H, aumenta os valores da relao ATE/ABz. possvel ento obter, com a espectroscopia de UV, um bom indicador da hidrofilicidade ou hidrofobicidade das substncias hmicas. Assim, o valor da razo ATE/ABz para a soluo de cidos hmicos isolados de um Neossolo Ltico, maior (1,01) do que o obtido para cidos hmicos isolados de um Latossolo Amarelo Coeso tpico (0,87), o que demonstra um possvel grau mais elevado de substituio nos anis aromticos, por grupos polares, no material humificado isolado do solo de formao mais recente. Espectroscopia de fluorescncia A matria orgnica dissolvida apresenta propriedades ticas e uma parte desse material absorve radiao luminosa e a reemite parcialmente sob a forma de fluorescncia. Essa
133

propriedade relevante nos sistemas orgnicos que apresentam conjugao (ligaes ) e torna essa espectroscopia especialmente importante para a anlise de humificao e da capacidade de interao com metais. A reviso de Sierra et al. (1996) indica que a fluorescncia foi usada pela primeira vez no estudo da matria orgnica como uma sonda para a avaliao do comportamento e do destino da frao fluorescente do carbono orgnico dissolvido em guas. Nos primeiros trabalhos, a fluorescncia foi utilizada de forma quantitativa. Com o avano das tcnicas, os aspectos estruturais das molculas (posio de mxima emisso, bandas de espectros de excitao, sincronizados e medidas de rendimento quntico) puderam ser aplicados. A identificao dos fluorforos responsveis pela fluorescncia de substncias hmicas ainda difcil. Alm disso, as propriedades de fluorescncia so dependentes de uma srie de parmetros, tais como, massa molar, concentrao, pH, fora inica, temperatura, potencial redox e origem das substncias hmicas. O estudo das relaes entre as propriedades de fluorescncia e estes parmetros pode, portanto, fornecer informaes indiretas sobre as caractersticas moleculares e a qumica das substncias hmicas. A absoro de um quantum de luz promove a passagem dos eltrons para nveis superiores de energia. Durante o retorno para o estado fundamental, uma parte da energia absorvida reemitida, sendo este fenmeno conhecido como luminescncia. Se a energia reemitida a partir do primeiro estado singlete excitado (S1), o fenmeno corresponde fluorescncia. A fluorescncia de um composto depende da sua estrutura molecular e est quase sempre associada ao sistema eletrnico Os eltrons envolvidos numa ligao esto, geralmente, fortemente presos, sendo necessrio fornecer muito mais energia para levar esses eltrons a ocuparem um orbital molecular vazio. Assim, os espectros produzidos por transies s p situamse na zona de comprimento de ondas mais curtos do espectro eletromagntico. Os eltrons , ao contrrio, esto mais livres que os eltrons s. O espectro de emisso correspondente se situa na regio de comprimentos de onda mais longo. A transio de um singleto singleto associado a uma absoro de um quantum de luz pode resultar na transferncia de um eltron p de valncia para um orbital antiligante * ou da transferncia de um mesmo orbital de eltrons n de heterotomos. Esses processos so altamente provveis em sistemas moleculares, contendo tomos com pares de eltrons livres, tais como, O, N ou sistemas conjugados com alto grau de ressonncia i.e. com eltrons deslocalizados, como no caso das substncias hmicas. Com o aumento da conjugao decorrente da formao de compostos aromticos e incorporao de N, a energia necessria para o fenmeno da fluorescncia diminui e o espectro se desloca para os comprimentos de onda maiores. A extenso de sistemas , o grau de substituio por heterotomos e o tipo e o nmero de grupos substituintes afetam a intensidade de fluorescncia e o comprimento de onda de emisso. Entre os fatores externos passveis de influenciar a emisso de fluorescncia, esto a temperatura, os efeitos dos substituintes e o solvente. Um aumento da temperatura se traduz por um aumento da probabilidade de colises no estado excitado, aumentando as converses internas e, em conseqncia, uma diminuio da eficcia de fluorescncia. No que concerne aos grupos substituintes, os grupos doadores de eltrons aumentam a eficincia de emisso de fluorescncia, enquanto os retiradores de eltrons reduzem a intensidade da mesma. Existem vrias formas de interferncia na espectroscopia de fluorescncia e o grau de perturbao do espectro de emisso de fluorescncia varia devido presena de fenmenos de difuso de luz: a difuso Rayleigh, a difuso Tyndall e a difuso Raman. As duas primeiras so difuses do tipo elstico, isto , sem mudana no comprimento de onda da luz incidente.
134

A Raman, por outro lado, uma difuso inelstica, acompanhada de um deslocamento de um determinado comprimento de onda. A difuso Rayleigh provocada pela presena, sobre o trajeto do raio luminoso incidente, de partculas de tamanho muito inferior ao comprimento de onda da luz incidente, como as molculas de gua, por exemplo. A difuso Tyndall provocada por suspenses de dimenses coloidais. Finalmente, a banda Raman provm da difuso, pelas molculas do solvente, de uma parte da luz incidente (menos de 1%) e sua posio relativa depende da natureza das molculas do solvente utilizado. O comportamento geral de fluorescncia de uma molcula resulta do efeito cumulativo, dependente de vrios componentes estruturais da molcula e o espectro observado em qualquer dos trs modos de fluorescncia consiste na soma dos espectros individuais dos diferentes fluorforos responsveis presentes no composto. Assim, dada a heterogeneidade das substncias hmicas, a espectroscopia de fluorescncia pode ser usada como um critrio de diagnstico para distinguir esses materiais, baseado na natureza qumica das substncias hmicas, gnese e origem. Entretanto, Senesi et. al. (1991) sugerem que a complexidade qumica e estrutural das substncias hmicas so um obstculo provavelmente insupervel para a identificao direta das estruturas individuais responsveis pela fluorescncia. Trs tipos principais de espectros podem ser obtidos para cada amostra, em funo do tipo de informao desejada: o espectro de emisso, o espectro de excitao e o espectro de excitao/ emisso sincronizado. O espectro de emisso Para registrar o espectro de emisso de um composto, irradia-se a amostra com um comprimento de onda de excitao fixo e mede-se a intensidade da luz reemitida, numa faixa espectral definida. O comprimento de onda de excitao ideal para registrar um espectro de emisso de um composto fluorescente determinado, , em geral, escolhido em funo de seu espectro de absoro. Na maior parte dos casos, este comprimento de onda corresponde ao mximo de absoro. Os espectros de emisso das substncias hmicas so geralmente caracterizados por uma banda larga de absoro, com intensidade relativa e comprimento mximo de absoro, que varia numa faixa limitada para substncias hmicas de mesma natureza e origem, mas altamente dependente do material hmico estudado. O ombro de absoro entre 410 415 nm corresponde ao efeito de difuso Raman da gua. O espectro de excitao Para registrar um espectro de excitao, faz-se variar o comprimento de onda da excitao enquanto o comprimento de onda de observao (emisso) mantido constante. O comprimento de onda de observao ideal aquele que corresponde posio do mximo do espectro de emisso do composto considerado. Para um composto puro, a forma do espectro de excitao corrigido deve ser similar, se no idntica, quela de seu espectro de absoro, independentemente do comprimento de onda de observao, se todos os estados excitados produzidos pela absoro se transformarem, por converso interna, at o nvel vibracional mais baixo do primeiro estado singleto excitado. O espectro de excitao das substncias hmicas apresenta maior resoluo que os de emisso e so caracterizados por um nmero de picos e ombros de absoro localizados em trs regies: longo (480-440 nm); intermedirio (400-380 nm); e curto (360-300 nm). Os cidos hmicos de turfas e sedimentos apresentam mximos na regio
135

de comprimento longo de onda. Senesi et. al. (1991) observaram cinco classes distintas de espectro. Os espectros do tipo I foram caracterizados por comprimentos de ondas altos, tanto de emisso (>520 nm) como de excitao (>465 nm). cidos hmicos isolados de turfas, leonardita e da maioria dos solos estudados por Senesi foram classificados como tipo II, com um comprimento alto para o mximo de absoro no modo de emisso (520-500 nm) e dois picos muito prximos de excitao (450 nm e 465 nm). Alguns cidos hmicos de solos apresentam uma pequena modificao na caracterstica de absoro no modo de emisso em comprimentos um pouco menores (500-460 nm) e um mximo do pico de excitao em comprimentos maiores de onda (450 460 nm). cidos hmicos originados de fungos de solo e os isolados de vermicomposto e de turfas foram agrupados no tipo IV de fluorescncia que corresponde presena de mximo de absoro em comprimentos menores (470-440 nm) e pico de maior absoro na excitao em 395-385 nm. Por ltimo, o tipo V corresponde s caractersticas de absoro de cidos hmicos isolados de lodo de esgoto com comprimento mximo de emisso na faixa mais curta (<440 nm) e mximo de excitao comparado aos cidos hmicos do tipo IV i.e. (entorno de 390 nm) acompanhado de um pico de absoro tpico em comprimento mais baixo de onda (cerca de 340 nm). O espectro sincronizado Os espectros sincronizados so obtidos pela varredura simultnea de uma faixa espectral de comprimentos de onda de excitao e de emisso, apresentando um intervalo () constante entre eles. Esta tcnica tem sido utilizada para estudar misturas de fluorforos e, em alguns casos, espectros bem resolvidos puderam ser obtidos a partir de misturas para as quais, por espectrofluorimetria convencional, obtinham-se espectros com bandas sobrepostas. O intervalo () a ser utilizado para um determinado composto , em geral, escolhido empiricamente. Quando o espectro de excitao e o de emisso so simtricos, o melhor () aquele que representa o intervalo, expresso em comprimentos de onda, entre os mximos de excitao e de emisso. Teoricamente, os espectros sincronizados de substncias hmicas deveriam apresentar melhor resoluo do que os obtidos pelo modo convencional. No entanto, isso no foi observado para todos os tipos de cidos hmicos estudados por Senesi et al. (1991). A fluorescncia um mtodo de anlise relativamente simples, muito sensvel e no destrutivo que se aplica a numerosas molculas. Apesar dessas vantagens, muitos laboratrios hesitam ainda em utilizar esse mtodo por falta de calibrao entre os resultados obtidos com diferentes instrumentos. Para determinar as caractersticas prprias de fluorescncia de uma molcula necessrio corrigir o espectro de excitao pela variao, com o comprimento de onda, da intensidade da fonte de excitao e tambm pela variao da transmisso do monocromador de excitao. Para a emisso, aplica-se uma correo para a variao de resposta do monocromador de emisso e do fotomultiplicador, com o comprimento de onda. Estas correes so fundamentais, se os resultados obtidos por diferentes instrumentos fossem comparados entre si ou ainda para o estudo das propriedades de fluorescncia de um determinado composto como, por exemplo, o rendimento quntico. Unidades estruturais responsveis pela fluorescncia de substncias hmicas Embora a complexidade das substncias hmicas no permita uma identificao inequvoca dos fluorforos presentes, possvel, com o uso de hipteses e comparaes, sugerir a natureza qumica dos principais fluorforos. O aumento da extenso do sistema de eltrons e a presena de vrios grupamentos
136

funcionais contendo O e N tm o efeito de diminuir a diferena de energia entre o estado fundamental e o primeiro estado singlete excitado, alterando a absoro de energia para comprimentos onda de maiores, enquanto a presena de carbonilas e/ou carboxilas diminuem a intensidade relativa de fluorescncia. Comprimentos de onda maiores e baixa intensidade de fluorescncia podem estar associados com a presena de anis aromticos linearmente condensados, tendo como substituintes grupos retiradores de eltrons, tais como, carbonila/ carboxila e/ou grupos insaturados com alto grau de conjugao. Comprimentos de onda menores e elevada intensidade relativa de fluorescncia podem ser um indicativo de componentes estruturais mais simples, menor grau de policondensao aromtica e menor nvel de conjugao dos fluorforos. A presena de substituintes doadores de eltrons, tais como hidroxilas, metoxilas ou grupo amino, aumenta a intensidade relativa de fluorescncia devido ao aumento da probabilidade de transio entre o estado fundamental e o primeiro estado excitado. A Tabela 5.2, adaptada de Senesi et. al. (1991), mostra algumas unidades estruturais isoladas que apresentam elevada intensidade relativa de fluorescncia.
Tabela 5.2 Principais fluorforos e mximos de absoro correspondentes (Adaptado de Senesi et al., 1991)
COOCH3 OH

salicilato de metila em max. 448 nm ex c max. 302, 366 nm

xantonas e hidroxixantonas em max. 410 nm exc max. 314 nm

COOH OH

cido saliclico em max. 410 nm exc max. 314 nm

flavonas e isoflavonides em max. 415-475 nm exc max. 313-365 nm

C OOH

OH
COOH

cido 3-hidroxibenzico em max. 423 nm exc max. 314 nm

OH

hidroquinolinas em max. 450 nm exc max. 350 nm -naftol (ionizado) em max. 460 nm ex c max. 350 nm cumarinas no substitudas em max. 454 nm exc max. 376 nm hidroximetoxi em max. 400-475 nm exc max. 320-343 nm

OH OH

cido protocatecico em max. 455 nm exc max. 340, 370 nm

CH CHC O OH

OH

cido 3-hidroxicinmico em max. 407 nm exc max. 310 nm

cido cafeico em max. 440 nm exc max. 350 nm derivados de bases de Schiff em max. 470 nm ex c max. 360-90 nm

CHCHCOOH

O H

O C H

C H C H C O O H

OCH 3 OH

cido ferlico em max. 410 nm exc max. 314 nm

137

Muito dos compostos apresentados na tabela so considerados precursores das substncias hmicas. A Figura 5.8 mostra um espectro tpico de substncias hmicas de baixa massa molecular com uma srie de ombros de absoro na regio de menor comprimento de onda.

Figura 5.8 - Espectro de emisso de fluorescncia de um cido hmico isolado de torta de filtro com excitao fixa em 465 nm.

Aplicaes de fluorescncia ao estudo da matria orgnica A espectroscopia de fluorescncia permite diferenciar, rapidamente, as diversas fraes humificadas do solo, uma vez que o comprimento mximo de emisso e excitao se encontram em faixas de maiores para os AH em relao aos AF. Haytase & Tsubota (1985) conseguiram uma clara diferenciao entre AH e AF, sendo os AH portadores de grupos aromticos em cadeias mais condensadas. Os espectros sincronizados permitem, de acordo com Sierra et al. (2005), obter inclusive uma espcie de impresso digital para as diferentes substncias hmicas. As molculas com menor faixa de distribuio de massa molecular apresentam maior intensidade de fluorescncia. Assim, foi possvel correlacionar a diminuio da intensidade de fluorescncia em menores com o aumento da evoluo da matria orgnica humificada. O processo de compostagem de resduos orgnicos pode ser analisado como um modelo otimizado do processo natural de humificao da matria orgnica. Nesse sentido, Mikki et al. (1997), avaliando a compostagem por meio da fluorescncia de AH, observaram uma diminuio de intensidade de fluorescncia com o aumento do tempo de compostagem. O pico mximo do espectro de emisso apresentava-se em comprimentos de onda maiores. O espectro de excitao confirmou o aumento da humificao com a compostagem, uma vez que foi observado incremento na intensidade dos picos intermedirios e dos de maior comprimento de onda. Alm disso, os espectros eram bem mais simplificados medida que aumentava o grau de maturao dos AH, apresentando menor nmero de ombros de absoro. Os resultados foram explicados como reflexo do aumento da policondensao e da conjugao de estruturas insaturadas nos AH, bem como da maior uniformidade entre os fluorforos presentes. Esses resultados foram qualitativamente repetidos por uma srie de autores. Segundo Millori et al. (2000), o fenmeno de fluorescncia baseado na emisso de luz quando ativado por radiao UV ou VIS de baixo . A transio singleto-singleto associada absoro de um quantum de luz resulta na transferncia de eltrons de valncia da molcula para o orbital antiligante *
138

ou na transferncia, para o mesmo orbital, no caso de eltrons n de heterotomos, caso presentes. provvel ocorrer a fluorescncia se existirem, ento, tomos com pares de eltrons livres, tais como, O e N, grupos aromticos e ligaes duplas conjugadas com grau elevado de ressonncia (deslocalizao eletrnica). No caso das susbtncias hmicas, quando aumenta a conjugao das ligaes duplas (e.g. aumento de anis aromticos) e o teor de heterotomos (e.g., N), a energia decresce e a absoro muda para maiores . Assim, Milori et al. (2000), ao excitarem as substncias a 465 nm, observaram que a intensidade de fluorescncia correspondia ao incremento de fluorforos tpicos de materiais mais humificados. Milori et al. (2002) relacionaram, ento, a intensidade do espectro de emisso obtido com cidos hmicos excitados em comprimento de onda no azul (465 nm), com o grau de humificao em reas cultivadas no sistema de plantio direto. Constatou-se uma alta correlao entre a emisso de fluorescncia e o contedo de radicais livres do tipo semiquinona obtidos por ressonncia paramagntica de eltrons. A facilidade de operao e a simplicidade de obteno dos espectros credenciam a espectroscopia de fluorescncia como uma ferramenta muito til para a obteno do grau de humificao das susbtncias hmicas. O problema est mais associado definio do grau de humificao do que obteno dos espectros de fluorescncia. Rosa et al. (2005) definiram a humificao como o processo de transformao da matria macroorgnica morfologicamente identificvel at compostos amorfos que, como regra geral, envolvem mudanas na composio qumica por meio da oxidao preferencial de polissacardeos, preservao seletiva de compostos orgnicos mais recalcitrantes degradao biolgica, tais como, ligninas e polifenis e, ainda, incorporao de compostos orgnicos de origem microbiolgica. Grupamentos fenlicos formados durante o processo de decomposio da matria orgnica podem produzir estruturas do tipo quinonas, mediante reaes de oxidao. Essas estruturas so precursoras dos radicais livres do tipo semiquinonas que causam fluorescncia e que, teoricamente, deve ser intensificada com o estgio mais avanado de humificao. Rosa et al. (2005) observaram alto grau de correlao entre a rea do espectro de emisso, com excitao fixa em 465 nm, e o contedo de radicais livres em cidos hmicos isolados de solos da Amaznia brasileira. Alm da abordagem proposta por Milori et al. (2002) para avaliar o grau de humificao das susbtncias hmicas, existem outros mtodos envolvendo a espectroscopia de fluorescncia. O mtodo proposto por Zsolnay e colaboradores (1999) fornece um espectro de emisso na faixa de 350 a 650 nm, com excitao fixa em 240 nm. O pressuposto do mtodo que com o aumento da humificao, ocorre aumento do contedo de grupamentos fluorforos, e a intensidade do espectro de emisso tende a aumentar para as regies de maior comprimento de onda. Assim, Zsolnay e colaboradores (1999) dividiram o espectro de emisso em quatro regies, calculando a razo entre a intensidade de fluorescncia do ltimo quarto de emisso (570-641 nm) pela intensidade do primeiro quarto de emisso (356 e 432 nm), o que fornece uma relao denominada A4/A1, onde os valores maiores correspondem a um maior grau de humificao. Outra maneira de determinar o grau de humificao por fluorescncia diz respeito ao uso do modo sincronizado de fluorescncia (= em- exc= 55 nm). Segundo Milori, por meio deste mtodo, conhecido como de Kalbitz e colaboradores (1999), o espectro sincronizado de fluorescncia de substncias hmicas apresenta dois picos entre 360 e 400 nm e um ombro ao redor de 470 nm. A mudana no perfil de fluorescncia corresponde a uma mudana no grau de humificao. Por exemplo, o material humificado com maior grau de evoluo sofreria uma mudana na intensidade de fluorescncia para comprimentos de onda
139

maiores, associados possvel presena de compostos aromticos com maior grau de substituio ou de sistemas insaturados com maior extenso de conjugao. Desse modo, a razo da intensidade de fluorescncia entre 400 e 360 nm ou 470 e 360 nm pode ser usada para medir o grau de humificao. O uso do mtodo de determinao do grau de humificao preconizado por Milori e colaboradores (2002) apresenta algumas vantagens quanto facilidade de obteno do espectro e simplicidade da teoria. A Figura 5.9 mostra a intensidade de fluorescncia na espectroscopia de emisso, com excitao fixa no azul (465 nm) de cidos hmicos isolados da camada superficial de um Argissolo com diferentes coberturas vegetais. Os valores da intensidade de fluorescncia foram correlacionados com os valores da relao E4/E6 e acidez total (Canellas et al. 2004).

Figura 5.9. Intensidade de fluorescncia de cidos hmicos isolados da camada superficial (0-0,05 m) de um Argissolo Vermelho Amarelo coberto com floresta secundria (capoeira), capim colonio ou com leguminosa perene (siratro). Adaptao de Canellas et. al. (2004).

O grau de humificao de cidos hmicos isolados de solos da Reserva Biolgica Unio em Rio das Ostras-RJ, um reduto de preservao de remanescente da Mata Atlntica, foi estudado por Miranda (2005). Diversos mtodos foram empregados (composio e relaes atmicas, acidez total, E4/E6, espectroscopia de infravermelho), porm o que permitiu discriminar os AH com mais preciso foi a espectroscopia de emisso de fluorescncia com excitao fxa em 465 nm (A465nm). O grau de humificao diminui com a profundidade do solo, como observado por Rosa et al. (2005). Alm disso, nas reas com cobertura vegetal original da Mata Atlntica, a A465nm foi maior em relao aos AH isolados de plantios abandonados de eucaliptos dentro da reserva biolgica, como pode ser observado na Figura 5.10. Alm da possibilidade de avaliar o grau de humificao das substncias hmicas, a espectroscopia de fluorescncia particularmente til para avaliar a interao dessas substncias com ons e compostos orgnicos apolares. A irradiao de susbtncias hmicas com luz UV pode provocar mudana na distribuio de tamanho molecular pela ciso de cadeias (Allen, 1976) e flexibilidade molecular (Ranby & Rabek, 1975) com a formao de ligaes duplas. A mudana provocada pela fotlise por UV pode ser usada para estimar a influncia da massa molecular e da flexibilidade sobre a interao de AH com compostos orgnicos no-polares dissolvidos. A espectroscopia de fluorescncia a tcnica indicada para esse tipo de estudos (Engebretson & von Wandruszka, 1994; Engebretson et al., 1996).
140

12000 0-10 cm 10000 8000 u.a. f 6000 4000 2000 0 stio-1 stio-2 stio-1 st io-2 10-20 cm

Mat a At lntica

Eucalipto

Figura 5.10. Intensidade de emisso de fluorescncia com exitao fxa em 465 nm (A465nm) em unidades adimencionais de fluorescncia (u.a.f.) em dois stios de Mata Atlntica e com plantios abandonados de eucaliptos. Adaptao de Miranda (2005).

Wandruszka & Engebretson (1997) verificaram que, com a fotlise provocada pela radiao UV, ocorre uma ciso nas cadeias das substncias hmicas em soluo, indicando uma tendncia de reduzir a capacidade de associao dessas pequenas unidades hidrofbicas, envolvendo a quebra de ligaes co-valentes e dissociao de conglomerados hmicos devido dissociao das ligaes H. Esse fenmeno foi observadopor meio da cromatografia por excluso de tamanho. Um ndice de associao para os AH foi proposto a partir da espectroscopia de fluorescncia. A interao de susbtncias hmicas com ctions metlicos foi estudada por Miano et al. (1988), Senesi (1990) e Cabaniss (1992). A Figura 5.11 mostra um espectro de emisso de fluorescncia de AH tratados com diferentes doses de Al3+. A formao do complexo implicou diminuio proporcional da intensidade de fluorescncia.

141

Figura 5.11. Espectro de emisso de AH isolado de vermicomposto (A) e com adio de AlCl3 nas concentraes de 10-5M (B) e 10-1M (C)

Finalmente, mesmo que a espectroscopia na regio de UV-VIS no concorra isoladamente para a elucidao da estrutura das susbtncias hmicas, devido facilidade de utilizao, ela no deve ser menosprezada, uma vez que vrios processos qumicos e bioqumicos que ocorrem na humificao podem ser monitorados por essa tcnica espectroscpica.

142

c a p t u l o

Espectroscopia na regio do infravermelho

Luciano P. Canellas Victor Marcos Rumjanek

Os princpios da espectroscopia de absoro na regio do infravermelho (IV) so os mesmos da espectroscopia na regio do UV-VIS, exceto que, na regio do IV, a quantidade de energia suficiente para provocar somente movimentos vibracionais nas ligaes entre os tomos. A absoro da radiao na regio do infravermelho pela matria corresponde energia de vibrao e rotao associada a uma ligao co-valente. Existem dois tipos de vibraes moleculares: os estiramentos axiais (), que compreendem o movimento rtmico de expanso e contrao ao longo do eixo da ligao, de forma que a distncia interatmica varie alternadamente, e as deformaes angulares (), ou seja, as variaes no ngulo da ligao entre os tomos. Se as vibraes moleculares (estiramentos e/ou deformaes) resultarem na alterao rtmica do momento dipolar da molcula, possvel a absoro no IV convencional. Portanto, as ligaes que apresentam diferena de polaridade so visveis na regio do infravermelho. A espectroscopia de IV bastante til para o estudo de grupamentos funcionais oxigenados nas substncias hmicas incluindo a avaliao de stios de ligao, capacidade de complexao, capacidade de troca de ctions e do processo de humificao da matria orgnica do solo. Introduo Diferentemente das poucas bandas de absoro observadas na regio do ultravioleta e do visvel para substncias hmicas, o espectro de infravermelho fornece maior quantidade de bandas de absoro mais bem definidas. Algumas dessas bandas so de difcil atribuio inequvoca, ou seja, o reconhecimento da funo qumica, responsvel pela absoro, difcil dada a complexidade intrnseca do material hmico e das numerosas sobreposies que podem ocorrer. Contudo, as bandas que podem ser assinaladas fornecem um conjunto de informaes estruturais relevantes sobre as substncias hmicas e sua reatividade. A faixa normalmente utilizada para anlise de compostos orgnicos por infravermelho se estende de 400 cm-1 a 4.000 cm-1, numa regio que compreende parte da radiao infravermelha prxima (10.000 a 1.000 cm-1) e parte da faixa de infravermelho distante (1.000 a 10 cm-1). Teoria A radiao infravermelha distante, assim chamada, pela alta energia, absorvida por molculas orgnicas e a energia convertida em rotao molecular. Esta absoro quantizada e, assim, os sinais de absoro so linhas discretas. Por outro lado, a radiao infravermelha de mais baixa
143

energia, ou IV prximo, tambm absorvida pelas molculas orgnicas, mas transformada em vibrao. Estas absores tambm so quantizadas, mas os espectros vibracionais apresentam-se como uma srie de bandas mais largas, pois uma nica mudana de nvel vibracional acompanhada de vrias mudanas na energia rotacional. H dois modos fundamentais de vibrao das molculas: o estiramento, onde a distncia entre dois tomos da molcula aumenta ou diminui, mas os tomos permanecem no mesmo eixo de ligao, e as deformaes, em que a posio do tomo muda em relao ao eixo original da ligao. _ As posies das bandas num espectro de IV so dadas em nmero de onda cuja unidade o centmetro recproco, cm-1. Antigamente, era usado o comprimento de onda, , e a unidade usada era o . Cabe ressaltar que o nmero de onda diretamente proporcional energia necessria para cada vibrao diferente. O nmero de onda erroneamente chamado de freqncia, . O erro ocorre, pois o nmero de onda proporcional a 1/ enquanto a freqncia proporcional a c/, onde c a velocidade da luz. O espectro de infravermelho consiste na representao grfica da correlao entre a intensidade de absorbncia (A), ou transmitncia (T), e a energia da radiao de IV, expressa _ em nmero de ondas . A relao entre A e T dada pela equao,
A = log 1 T

A posio de uma banda de absoro depende das massas relativas dos tomos, das constantes de fora da ligao e da geometria dos tomos envolvidos numa ligao. No entanto, a absoro s ocorre se houver uma variao rtmica no momento dipolar da ligao. O campo eltrico alternante, que produzido pela mudana de distribuio de carga, ocorre com a vibrao e acopla a vibrao molecular ao campo eltrico oscilante da radiao eletromagntica. A equao abaixo, derivada da lei de Hooke, descreve a absoro na espectroscopia IV de uma ligao entre dois tomos,
=

1 2c

f m1m 2 m1 + m 2

onde o nmero de onda, c a velocidade da luz no vcuo, f a constante de fora da ligao e m1 e m2 so as massas dos tomos envolvidos na ligao. Assim, a posio da banda de absoro relativa ao estiramento de uma ligao C-H pode ser calculada da seguinte forma:
f =500 M m-1 = 5,0 x 102 kg s-2 (1N = 1 kg m s-2)
mcarbono= 20 x 10-27 kg e mhidrognio= 1,6 x 10-27 kg
_

= 9,3 x 1013 s-1 (Hz) ~ 2950 cm-1

Este clculo no leva em considerao a influncia dos outros tomos da molcula. Clculos mais elaborados levam esses efeitos em considerao, mas no so contemplados neste captulo.
144

Modos de vibrao moleculares

Uma molcula no-linear que contm n tomos tem 3n-6 vibraes fundamentais que podem ser responsveis pela absoro de luz na regio do infravermelho. Para que uma determinada vibrao resulte em absoro, deve causar variao no momento dipolar da molcula. Algumas entre as vrias vibraes de estiramento e deformao de uma ligao esto representadas esquematicamente na Figura 6.1.

vibraes de estiramento

estiramento simtrico ~ 2853 cm-1

estiramento assimtrico ~ 2926 cm-1

vibraes de deformao

deformao simtrica ~ 1465 cm-1

deformao assimtrica ~ 720 cm-1

deformao simtrica ~ 1350-1150 cm-1

deformao assimtrica ~ 1350-1150 cm-1

no plano

fora do plano

Figura 6.1. Esquema representativo das vibraes num grupamento CH2 (+ e significam vibraes perpendiculares ao plano do papel)

Efeitos da estrutura sobre a posio das bandas de absoro Segundo a equao derivada da lei de Hooke, a posio de uma banda de absoro depende basicamente da fora da ligao e das massas dos tomos que formam esta ligao. Assim, se aumentamos a fora da ligao, aumenta o nmero de onda. Ligaes duplas (1900-1500 cm-1) e triplas (2300-2200 cm-1) requerem progressivamente mais energia para vibrar do que uma ligao simples (1300-800 cm-1). As diferentes carbonilas das funes orgnicas tambm absorvem energia em diferentes nmeros de onda. Segundo o esquema a seguir,
145

R O G A

R O G B

R G

se o substituinte da carbonila um grupo retirador de eltrons (A), muito eletronegativo, a ligao dupla C=O encurtada, conseqentemente tornando-se mais forte, e a posio da banda em nmero de onda alto (mais energia necessria para vibrar a ligao). Se, ao contrrio, o grupamento doador de eltrons (B), h a possibilidade de ressonncia, e a deslocalizao dos eltrons reduz o carter de ligao dupla de C=O, enfraquecendo-a e, assim, a absoro se d em nmero de onda menor. Estes efeitos esto resumidos na Tabela 6.1.
Tabela 6.1 Efeito do substituinte numa carbonila sobre a posio de absoro.
Efeito retirador de G G F Cl Br OH OR Efeito doador de G G NH2 SR C=O (cm-1) 1695-1650 1720-1690 C=O (cm-1) 1869 1815-1785 1812 1760 1750-1735

Quanto menor a massa reduzida de uma ligao, mantida a fora da ligao, mais energia necessria para a sua vibrao. Desta maneira, uma ligao C-C possui uma banda de absoro em 1300-800 cm-1, enquanto uma ligao C-H absorve em 2900 cm-1. Finalmente, a possibilidade de formao de ligao hidrognio afeta a posio da banda de absoro de uma ligao X-H, onde X um elemento muito eletronegativo, pois a ligao hidrognio

H Z

enfraquece a ligao XH. A Tabela 6.2 resume estes efeitos, para X= O.

Tabela 6.2 Efeito de ligao hidrognio sobre a banda de absoro de O-H

Reduo de freqncia em cm-1 Fora da ligao Ligao Ligao intramolecular intermolecular X H Z fraca mdia forte 300 >500 <100 100-300 >300

Os espectros na regio de IV de cidos hmicos so relativamente simples, quando comparados aos das substncias puras, possuindo poucas bandas de absoro e geralmente alargadas. A complexidade do ambiente qumico que envolve os grupamentos funcionais dos cidos hmicos, cada
146

um caracterizado por uma constante de fora diferente para cada ligao, tem como resultado final uma srie de sobreposies de bandas de absoro. A mistura complexa de unidades orgnicas que caracterizam o material hmico acaba simplificando o espectro de infravermelho. A espectroscopia, nessa regio eletromagntica, apresenta limitaes para a caracterizao estrutural, mas pode ser muito til no indicativo da presena e do comportamento dos grupamentos funcionais, principalmente os oxigenados. Stevenson (1994) classificou os espectros de substncias hmicas em trs tipos, sendo os AH enquadrados em espectros do tipo 1 e 3. - Os espectros de tipo 1 so caracterizados por bandas de absoro fortes e evidentes em 3400 cm-1, 2900 cm-1, 1720 cm-1, 1600 cm-1 e 1200 cm-1. A absoro na regio de 1600 cm-1 possui intensidade semelhante a absoro em 1200 cm-1. - Os espectros do tipo 2 so caractersticos de molculas hmicas de menor massa molecular (cidos flvicos) e, alm dessas absores, apresentam uma absoro muito intensa em 1720 cm-1 - Os espectros do tipo 3 apresentam as mesmas absores caractersticas dos espectros do tipo 1, porm a absoro em 2900 cm-1 mais intensa e, alm disso, ocorre o aparecimento de uma absoro forte em 1540 cm-1. Os principais sistemas de ligaes que apresentam absoro no infravermelho das substncias hmicas so descritos a seguir: Sistemas C-H Os estiramentos axiais () de ligaes C-H encontram-se na regio entre 3000 cm-1 e 2800 cm-1. O estiramento axial simtrico ( s) e assimtrico (as) de sistemas CH2 alifticos est situado em 2926 cm-1 e 2853 cm-1 e os dos sistemas do tipo CH3 em 2962 cm-1 e 2872 cm-1, respectivamente. As deformaes angulares simtricas ( s) e assimtricas ( as) da metila esto na regio de 1735 cm-1 e 1450 cm-1 e as do metileno em 1350 cm-1 e 1150 cm-1, respectivamente. Na regio de freqncia mais baixa so encontradas as deformaes angulares fora do plano (900 a 675 cm-1) e no plano (1300 a 1000 cm-1) de C-H, em anel aromtico. Sistemas C-O A absoro de energia de sistemas C-O por AH est centrada na regio de 1250 cm-1 e corresponde ao as de C-O em polissacardeos. Estiramento axial de C-O em lcoois e fenis do origem a uma banda de absoro forte em 1260 a 1000 cm-1. O sistema C-O-C de steres, epxidos e perxidos tem s centrada na regio de 1150-1085 cm-1. As vibraes axiais de sistemas C-O presentes em cidos carboxlicos absorvem energia na regio de 1320 a 1210 cm-1. Sistemas C=C A absoro de energia decorrente das vibraes axiais dos sistemas C=C de olefinas encontrada na regio de 1667 a 1640 cm-1. As duplas ligaes conjugadas de anis aromticos apresentam deformao angular fora do plano entre 675 e 900 cm-1 e, no plano, entre 1000 e 1300 cm-1. Sistemas C=O O sistema C=O presente em cetonas, cidos carboxlicos, aldedos, steres carboxlicos, lactonas e amidas apresenta absoro de energia devido aos estiramentos axiais no eixo da ligao na regio que vai de 1870 a 1540 cm-1. A posio dessa absoro influenciada pelos efeitos eletrnicos (ambiente qumico) em torno da ligao. A absoro de uma cetona aliftica saturada est centrada em 1715 cm-1. Substituies por grupamentos que exeram efeito indutivo sobre a ligao encurtam o comprimento da ligao e deslocam a absoro para um nmero de onda maior. J para grupamentos que facilitam a deslocalizao dos eltrons , ressonncia ou conjugao, o carter da ligao C=O
147

 reduzido, e a absoro da energia ocorre numa regio de menor nmero de onda. Sistemas C=O, em cetonas, absorvem energia em 1720 cm-1. A formao de pontes de H aumenta o comprimento de onda, deslocando a absoro para regio em torno de 1760 cm-1. Sistemas C=O de quinonas, que esto em ressonncia com o anel, tm absoro em 1690 a 1655 cm-1, muito prximo da regio de absoro do on enolato (COO-). Sistemas O-H As absores decorrentes dos estiramentos axiais de O-H em cidos carboxlicos so bem caractersticas, com uma banda de absoro larga e intensa centrada em 3300 cm-1. Em lcoois e fenis sem a ocorrncia de interao intermolecular (ponte de hidrognio), a absoro do estiramento axial encontra-se entre 3650 a 3585 cm-1. A formao de pontes de hidrognio desloca a absoro para regies de menor energia situadas entre 3550 e 3200 cm-1. As deformaes angulares no plano de ligaes C-O de lcoois e fenis tm absoro em 1420 a 1330 cm-1, e a de grupos carboxlicos entre 1440 a 1395 cm-1. O modo mais fcil de interpretar um espectro de IV-TF de substncias hmicas por meio da observao da inspeo de algumas regies do espectro. Regio de absoro 3700 3100 cm-1 (OH, NH e CH) As bandas de absoro na regio de 3700 3100 cm-1 so normalmente devido a vrias vibraes de estiramento OH e NH. Os grupos NH2 podem produzir um dubleto com separao de aproximadamente 70 cm-1, quase sempre sobreposto no material hmico. Os compostos contendo OH incluem gua, lccois e fenis. Os grupos OH ligados apresentam uma banda de absoro bem mais alargada. Os centros de absoro podem mudar para comprimentos maiores de onda e se tornarem mais agudos, se as ligaes H + forem rompidas. Os grupos C=C-H apresentam vibrao de estiramento nessa regio perto de 3300 cm-1.
Nmero de onda (cm -1 ) 3.640 - 3.610 Grupo funcional O-H (livre) Observaes Banda de absoro fina, mais forte quando medida em soluo diluda. 3.600 - 3.500: Banda fina resultante de ligaes dimricas.

3.600 - 3.200

3.200 - 2.500

O-H (associado/ponte 3.400 - 3.200: Banda forte, larga, resultante da associao de H) polimrica. A intensidade da banda depende da concentrao. Ligao hidrognio intramolecular com C=O, NO 2 : Banda larga, de intensidade normalmente fraca e a frequncia O-H (quelado) inversamente proporcional fora da ligao. a) NH 2 livre em aminas primrias b) aminas primrias alifticas: ~ 3.500 c) aminas aromticas: ~ 3.400 d) NH 2 livre em amidas: 3.500 - 3.400 e) NH 2 associado em aminas primrias f) aminas alifticas e aromticas: 3.400 - 3.100 g) NH 2 associado em amidas: 3.350 - 3.100 h) NH livre em aminas secundrias: aminas primrias alifticas: 3.350 - 3.300 aminas aromticas: ~ 3.450 pirris, indis: ~ 3.490 NH livre em amidas: 3.460 - 3.420 NH associado em aminas secundrias: 3.400 - 3.100 NH associado em amidas: 3.320 - 3.070 Confirmado pela presena de uma banda de 2.260 - 2.100 (C C).

3.500 - 3.070

N-H

~ 3.300

C-H de alcinos

148

Regio de absoro 3000 3100 cm-1 (Arilas, olefinas) As vibraes de estiramento de olefinas, anis aromticos e anis de trs membros absorvem na regio acima de 3000 cm-1.
Nmero de onda (cm-1) 3.080 - 3.020 ~ 3.030 Grupo funcional C-H de alcenos C-H de aromticos Observaes Muitas vezes obscurecida pela sobreposio

Regio de absoro 3000 2700 cm-1 (CH aliftico) Na regio abaixo de 3000 cm-1 so encontradas as vibraes de estiramento C-H. Grupos CH2 e CH3 alifticos podem apresentar um dubleto com separao de aproximadamente 80 cm-1 com um ligeira diferena de freqncia (CH3 aliftico com estiramento assimtrico em 2962 e simtrico em 2872 cm-1 e CH2 com estiramento assimtrico em 2962 e simtrico em 2853 cm-1). Em amidas tercirias, os grupos CH2 e CH3 perto do nitrognio absorvem ao redor de 2800 cm-1. Muitos aldedos podem absorvem em 2730 cm-1.
Nmero de onda (cm-1) 2.960 - 2.850 2.820 e 2.720 Grupo funcional C-H alifticos C-H de aldedos Observaes CH3, CH2 (carbonos prim. e sec.): 2.960 - 2.850 CH (carbono terc.): 2.890 - 2.880

Regio de absoro 1900 1550 cm-1 (carbonila, carboxila, carboxilados, amidas, quinonas) Compostos carbonlicos absorvem fortemente nessa regio. Grupos carboxlicos em steres saturados absorvem em 1740 cm-1; aldedos perto de 1725 cm-1 e cetonas, em 1715 cm-1. A conjugao pode diminuir cerca de 20 cm-1 a absoro do grupo funcional. cidos carboxlicos absorvem perto de 1700 cm-1 e amidas, em 1660 cm-1. Sais do cido carboxlico absorvem ao redor de 1600 cm-1. Compostos contendo grupos C=C absorvem na regio de 1550 cm-1. A maioria das olefinas absorve em 1680 1600 cm 1 e os compostos contendo C=N absorvem entre 1690 1630 cm-1. O grupo NH 2 tem freqncia de absoro da vibrao de deformao em 1660-1590 cm-1. O grupo de NH 2+ absorve perto de 1600 e NH 3 em 1600 e 1520 cm-1. A gua (H2O) absorve perto de 1640 cm-1.
Nmero de onda (cm-1) 2.275 - 2.250 2.260 - 2.200 2.260 - 2.100 ~ 2.260 2.175 - 2.140 2.160 - 2.120 ~ 2.150 2.140 - 1.990 ~ 1950 Grupo funcional N=C=O (isocianatos) C N (nitrilas) Observaes Banda de forte intensidade. a) Nitrilas conjugadas: 2.235 - 2.210 b) Nitrilas no-conjugadas: 2.260 - 2.240 Pode estar ausente em acetilenos simtricos.

C C N N (sais de diaznio) SC N (tiocianatos) -N=N=N (azidas) C=C=O (cetenas) N=C=S (isotiocianatos) C=C=C (alenos)

Banda larga e intensa. Duas bandas para alenos terminais ou ligados a grupos de efeito -I.

149

Regio de absoro 1620 1420 cm-1 (Aromticos e heteroaromticos) Anis aromticos so caracterizados por bandas de absoro perto de 1600, 1580, 1500 e 1460 que tem intensidades diferentes de acordo o substituinte.
Nmero de onda (cm-1) 1.760 e 1.710 1.750 - 1.740 1.740 - 1.720 1.720 - 1.700 Grupo funcional C=O de c. carboxlicos C=O de steres C=O de aldedos C=O de cetonas Observaes O monmero tem banda de ~ 1.760 e o dmero, ~ 1.710. s vezes no se observa essa banda em solventes polares. Absoro sujeita a efeitos de conjugao e de efeito indutivo. Absoro sujeita a efeitos de conjugao e de efeito indutivo. Somente para cetonas acclicas (dialquil-cetonas). a) Amidas no substitudas - livres: ~ 1.690 - associadas: ~ 1.650 Efeito de conjugao ou efeitos indutivos causam deslocamento de cerca de 15 cm-1 para freqncia mais alta. Em amidas cclicas a freqncia aumentada em cerca de 40 cm-1 por unidade de decrscimo do tamanho do anel. b) Amidas N-substitudas: 1.700 - 1.630 c) Amidas N,N-substitudas: 1.670 - 1.630 Apresentam uma nica banda. Intensidade usualmente de fraca a mdia. As bandas esto ausentes em alcenos simtricos. A presena de uma ou duas bandas adicionais de 1.650 - 1.600 ocorre em alcenos conjugados.

1.700 - 1.630

C=O de amidas

1.675 - 1.645

C=C

Regio de absoro 1500 1250 cm-1 (CH2 e CH3) Na regio de 1500-1400 cm-1, so encontradas as vibraes de deformao CH2 e CH3. A deformao assimtrica de CH3 tem centro de absoro em 1480 1 e a simtrica em 1380 -1;j a deformao assimtrica de CH2 tem centro em 1467 cm-1. A eletronegatividade do substituinte desloca estes centros de absoro para perto de 1450 cm-1 para O-CH3, 1375 cm-1 para C-CH3 e 1265 cm 1 para Si-CH3.
Nmero de onda (cm-1) 1.600, 1.580, 1.500 e 1.450 Grupo funcional Observaes Vibraes de ncleos aromticos. A banda de 1.580 intensa quando o grupo fenila conjugado com insaturaes ou mesmo ligado a tomos com pares de eltrons livres. A banda de 1.450 geralmente obscurecida e a banda de 1.500 normalmente mais forte. Banda mdia a forte, correspondente deformao angular simtrica no plano. Bandas fortes de deformao axial assimtrica e simtrica, respectivamente. Ambas esto sujeitas a efeitos de conjugao. (a banda cai -30cm-1). Banda fraca de deformao angular, muitas vezes obscurecida pela banda de 1.560 de aromticos. Esta banda tambm usada para caracterizar aminas e amidas secundrias.

C=C de aromticos

1.590 - 1.550 1.560 e 1.350

NH2 NO2

1.580 - 1495

N-H

150

Regio de 1350 1150 cm-1 ( CH2 e CH) Podem ocorrer picos mltiplos de absoro em 1340-1190 cm-1devido a vibrao de grupos CH2 presentes em cadeias lineares de hidrocarbonetos.
Nmero de onda (cm-1) 1.470 - 1.430 ~ 1.420 1.390 - 1.370 CH2 CH2 adjacente a carbonila CH3 Grupo funcional Observaes Deformao angular de -(CH2)n- sendo que para n > 3 a banda aparece na regio por volta de 720 (deformao angular de cadeia). Deformao angular. Deformao angular. Em caso de dimetil geminal, a banda aparecer como um duplete. a) C-F: 1.400-1.000 b) C-Cl: 800-600 c) C-Br: 750-500 d) C-I: ~ 500 Bandas intensas de deformao axial assimtrica e simtrica, respectivamente. Aparecem duas bandas de deformao axial, devido ao acoplamento da deformao angular no plano da ligao O-H e a deformao axial de C-O.

1.400 - 500 1.350 - 1.310 e 1.140 - 1.200 1.420 e 1.300 - 1.200

C-X (X = halognio)

SO2 (sulfona) C-O de c. carboxlicos

Regio de 1300-1000 cm-1 (polissacardeos) Nessa regio, ocorrem fortes bandas de absoro devido a estiramentos da ligao C-O. Bandas de absoro na regio de 1300-1150 cm 1 devido a C-O que podem variar de acordo com a ressonncia i.e. teres, fenis, fenil ter. teres saturados absorvem energia perto de 1125 cm-1 e lcoois absorvem em 1200/1000 cm-1. A regio entre 1100 e 830 cm-1 tpica de estiramentos de SiO presentes nos contaminantes silicatados do material hmico.
Nmero de onda (cm-1) 1.300 - 1.050 Grupo funcional C-O de steres Observaes a) steres saturados: 1.300 - 1.050 b) steres insaturados e aromticos: 2 bandas (1.300 - 1.250 e 1.200 - 1.050) a) teres alifticos: 1.070 - 1.150 b) teres aromticos e vinlicos: 2 bandas (1.200 - 1.275 e 1.020 - 1.075) a) lcool prim: ~ 1.050 b) lcool sec: ~ 1.100 a) lcool terc: ~ 1.150 a) Fenis: ~ 1.200

1.275 - 1.020

C-O de teres

1.200 - 1.050 1.340 - 1250 1.280 - 1.180 1.060 - 1.040

C-O de lcoois e fenis C-N de aromticos C-N de alifticos S=O (sulfxido) RCH=CH2

990 - 910

Esta banda deslocada de 10 a 20 cm-1 para freqncia mais baixa por efeito de conjugao. Grupos metileno na posio alfa do origem a uma banda de ~ 1.415. Deformao angular fora do plano.

151

Regio entre 900-700 cm-1 (deformao CH de aromticos) Esta regio tpica da deformao no plano e fora do plano de CH de grupos aromticos.
Nmero de onda Grupo funcional (cm-1) 970 - 960 -CH=CH~ 920 895 - 885 840 - 790 730 - 675 770 - 730 e 710 - 690 770 - 735 O-H R2C=CH2 R2C=CHR -CH=CHObservaes Banda larga (deformao angular) de mdia intensidade, devido deformao angular fora do plano da C=O de c. carboxlicos.

810 - 750 e 710 - 690 860 - 800 900 - 860

790 - 730 ~ 720

C-H fora do plano. C-H fora do plano. Deformao angular de 5 H adjacentes Anel aromtico (anis monossubstitudos). Deformao angular de 4 H adjacentes (anis ortossubstitudos). Outros exemplos: Anel aromtico piridina ortossubstituda , naftalenos no substitudos em um dos anis. Deformao angular de 3 H adjacentes (anis metassubstitudos e 1,2,3-trissubstitudos). Anel aromtico Outros exemplos: naftalenos monossubstitudos na posio alfa. 2 H adjacentes (anis parassubstitudos e Anel aromtico 1,2,3,4-tetrassubstitudos). H isolado: pode estar presente no benzeno Anel aromtico metadissubstitudo, alm de outros aromticos. A banda tem intensidade fraca. Deformao angular. Grupos etila e propila a) Etila: 790 - 720 b) Propila: 745 - 730 -(CH2)n- (para n > 3) Deformao angular de cadeia.

As principais atribuies das absores na regio do infravermelho, para os principais grupos funcionais presentes em amostras de substncias hmicas descritos anteriormente, esto resumidas na Tabela 6.3. Estas atribuies foram baseadas nos trabalhos de Coultrup et al. (1964); Barnerjee & Mukherjee (1972); Bellamy (1975); Griffth & Schnitzer (1975); Sposito et al. (1976); Boyd et al. (1979); Piccolo & Stevenson (1994); Prasad & Sinha (1983); MacCarthy & Rice (1985); Lobartini & Tan (1988); Inbar et al. (1989); Bloom & Leenher (1989); Capriel et al. (1992); Barros et al. (1994); Stevenson (1994); Cereta et al. (1999).

152

Tabela 6.3. Principais funes qumicas e regio de absoro no infravermelho

Funes lcool primrio secundrio tercirio aromtico aminas secundrias (CH2-OH) (CH-OH) (C-OH) estiramento 3330-3640 (OH) 1075-1000 (C-O) 3330-3640 (OH) 1125-1090 (C-O) 3330-3640 (OH) 1210-1180 (C-O) 1260-1180 (C-O) deformao

metila metileno amidas amida mono subst. amida dissubst. aldedos alif. aldedos aromticos cetonas alifticas cetonas aromticas cidos carboxlicos

(CH2-NH-CH2) (CH-NH-CH) (O-NH-R) CH3-C CH2-C (CO-NH2) CO-NH-R CO-NR2 CH2-CO

as2962/s2872 as2962/s2853

as1460/ as1380 as1467

1725-1705 1700-1640 3000 (OH) 1740-1680 (C=O) 1315-1280 (C-O) 1650-1550 sim (forte) 1140-1350 as (fraca) 1260-1230 (acetato) 1140-1085 1310-1210 960

1440-1395 (OH no plano) 960-875 (OH fora plano)

carboxila ionizada steres ter Si-O

C-O-C alif C-O-C arom.

Obteno do espectro e os espectrmetros Como vidro e quartzo absorvem fortemente a luz infravermelha, as celas de amostras so confeccionadas com haletos de metais e a Tabela 6.3. fornece os principais materiais e as correspondentes faixas de transparncia.
Tabela 6.4 Faixas de transmisso de materiais de celas de amostra

Material fluoreto de ltio fluoreto de clcio cloreto de sdio brometo de potssio brometo de csio

Faixa de Transparncia (cm-1) 4000-1695 4167-1299 5000-649 1111-385 1111-385

A fonte de luz infravermelha mais utilizada o filamento de Nerst, que um basto moldado contendo uma mistura de xido de trio, zircnio e rbio. Pode ainda ser usado um filamento de
153

Nicromo em um suporte de cermica ou ento o Globar, que um cilindro feito de carbeto de silcio. Estes materiais so aquecidos por processos eltricos at 2000oC, emitindo assim radiao infravermelha. A Figura 6.2 mostra um esquema de um espectrmetro de IV tpico.

Figura 6.2. Esquema de um espectrmetro de IV com rede de difrao.

O feixe de IV dividido em dois, um para a amostra e outro para a referncia. O espelho semicircular ora deixa transmitir o feixe de referncia e ora, o feixe da amostra. Assim, os feixes de referncia e de amostra so combinados em um s, com uma freqncia igual de rotao do espelho semicircular. Quando os feixes so de intensidade igual, o detector no registra diferena entre eles, e a absorbncia igual a 0% (ou T=100%). Os feixes combinados so focalizados na rede de difrao e dispersados em suas vrias freqncias que so ento focalizadas no detector. Quando h diferena entre o comprimento de onda (ou nmero de onda) do feixe da referncia e da amostra, um sinal eltrico enviado para o registrador que acusa uma absoro. O detector um dispositivo que mede a energia radiante pelo seu efeito trmico. Os espectrmetros mais recentes utilizam a tcnica de espectrometria de IV com transformada de Fourier, baseada na interferometria (Figura 6.3). Nesta tcnica, o feixe contendo todos os nmeros de onda dividido em dois e um refletido por um espelho fixo e o outro, por um espelho mvel. As diferenas entre os nmeros de onda dos dois feixes produzem interferncias construtivas ou destrutivas. O resultado de uma variao total de nmeros de onda uma srie de oscilaes da intensidade do sinal em funo do tempo, chamada interferograma. A operao matemtica de transformada de Fourier ento aplicada, convertendo o interferograma em um espectro que fornece a intensidade do sinal em funo do nmero de onda. Este mtodo possui uma srie de vantagens em relao ao mtodo tradicional. Uma vez que no h uma rede de difrao, todos os comprimentos de onda atravessam a amostra simultaneamente, o que diminui o tempo de anlise para menos de um segundo (o mtodo tradicional fornece um espectro aps alguns minutos). Como os dados podem ser armazenados em um computador, vrios espectros da amostra podem ser somados, o que aumenta a razo sinal/rudo, conseqentemente aumentando a sensibilidade do mtodo.
154

Figura 6.3 Espectrmetro de IV com transformada de Fourier

Os espectros podem ser obtidos com amostras slidas, lquidas e gasosas. A amostra deve ser livre de gua, pois esta absorve fortemente perto de 3710 cm-1 e em 1630 cm-1. A forma mais usual de obter um espectro de infravermelho de substncia hmica a partir de amostras slidas, confeccionando-se uma pastilha por meio da mistura da amostra com KBr (triturao em conjunto da amostra com o KBr) e prensagem alta presso sob vcuo. O objetivo a obteno de uma pastilha transparente que corresponde a uma soluo slida de material hmico em brometo de potssio. Substncias hmicas ou quaisquer outras de massa molecular elevada ou aparentemente elevada e que contenham muitos grupamentos funcionais geralmente resultam em espectros de baixa resoluo. Aplicaes de espectrometria de IV anlise da matria orgnica de solos (MOS) Muitas bandas de absoro que os compostos orgnicos apresentam na regio do infravermelho no podem ser interpretadas com segurana. Esse o caso das substncias hmicas. A recomendao para o caso de material hmico o uso do modo comparativo, ou seja, sempre confrontar um espectro com outro, gerando mais informaes sobre os processos ocorridos no
155

material do que sobre a determinao estrutural. A mais poderosa aplicao da espectroscopia de infravermelho, no caso do estudo da humificao, sem dvida, a possibilidade de estabelecer com segurana a identidade de duas ou mais amostras e verificar diferenas naturais ou provocadas pelo manejo, na qualidade de substncias hmicas isoladas de solos diferentes (efeitos de processos pedogenticos) ou de mesmo solo (efeito de manejo). A Figura 6.4 mostra os espectros na regio de infravermelho de cidos hmicos isolados de uma seqncia caracterstica de solos da regio Norte Fluminense. possvel observar similaridades nos AH isolados de solos com a mesma pedognese.

Figura 6.4. Espectros de infravermelho com transformada de Fourier de cidos hmicos isolados do horizonte superficial de uma seqncia de solos tpica do Norte do Rio de Janeiro. Luvissolo Crmico Plico abrptico (AH-1), Argissolo Vermelho Amarelo Distrfico (AH-2), Chernossolo Argilvico rtico vrtico (AH-3), Chernossolo Rndzico Saproltico tpico (AH-4), Latossolo Amarelo Coeso tpico (AH-5) e Neossolo Litlico Eutrfico tpico (AH-6).
156

A Figura 6.5. mostra efeito da adio de lodo da estao de tratamento de esgoto e de composto de lixo urbano em amostras de um Argissolo e de um Latossolo.

Figura 6.5. Espectros de infravermelho (cm-1) de cidos hmicos de composto de resduos slidos urbanos (A), de lodo da estao de tratamento de esgoto (B), de Latossolo Vermelho-Amarelo sem (C) e com a adio dos resduos (D e E) e de Argissolo Vermelho-Amarelo sem (F) e com a adio dos resduos (G e H). Adaptado de Canellas et al. (2001).

A incorporao de residuos modificou a identidade qumica dos AH do solo. A regio do infravermelho pode ser til para verificar o progresso de muitas reaes qumicas. A formao de derivados hmicos, a partir da acetilao com anidrido actico em piridina ou a metilao com diazometano pode ser monitorada por meio do aumento da absoro em 1720 cm-1 com aparecimento do estiramento de carbonila (C=O) e do estiramento C-H de metilas em 2950 cm1 (CH3), respectivamente, e a diminuio da absoro devido ao estiramento de hidroxilas em 3420 cm-1 (O-H). As diferenas nos espectros dos derivados hmicos podem ser observadas na Figura 6.6.
157

Figura 6.6. Espectros de infravermelho de cidos hmicos isolados de vermicomposto (AHV) e de seus derivados acetilados (AHVact.) e metilados (AHVmet.). Surge uma absoro intensa em 1741 cm-1 e h diminuio da absoro devido O-H com centro em 3370 cm-1, depois das reaes de acetilao com anidrido actico e o aparecimento da absoro intensa em 1730 cm-1 e o aumento da absoro em 2942 cm-1, com a metilao com diazometano.

O interesse crescente na caracterizao qumica das substncias hmicas tem base na sua influncia marcante sobre a solubilidade e mobilidade de metais-traos no solo e na complexao de nutrientes. A capacidade das substncias hmicas de interagir com metais normalmente atribuda ao elevado contedo de grupamentos funcionais contendo oxignio, tais como, carboxilas (CO2H), carbonilas (CO) e hidroxilas (OH). Esses grupamentos funcionais apresentam absoro marcante na regio de infravermelho devido grande diferena no momento dipolar que torna esta espectroscopia especial para o estudo da interao desses grupamentos com metais, fornecendo mais informaes do que a RMN 13C, por exemplo. Piccolo & Stevenson (1982) verificaram um aumento crescente na absoro entre 3450 e 3000 cm-1 com uma forte banda de absoro centrada em 3420 cm-1 com a adio crescente de Cu++, Pb++ e Ca++, sugerindo que parte dessa absoro em 3420 cm-1 devida gua de hidratao do complexo a seguir.

COO M(H2O)n O
A principal diferena ente os trs ons metlicos estudados por Piccolo & Stevenson (1982) foi o ombro de absoro menos pronunciado para Cu++ e Pb++ do que para Ca++ em 3280 cm-1, indicando o possvel envolvimento de estruturas do tipo salicilato na complexao com cobre e
158

chumbo. A mudana do centro de absoro de 3500 para 3200 cm-1, com a formao do complexo cido flvico Zn, foi observada por Tan et al. (1971) e por Prasad & Sinha (1983), com a formao de complexo com Zn e Cu, sugerindo ligao coordenada co-valente entre os ons metlicos e os grupos O-H. A formao de complexos saturados com metais pode produzir o completo desaparecimento da banda de absoro em 1725 cm-1 e em 1230 cm-1, enquanto aparecem bandas de absoro adicionais em 1600 e 1400 cm-1. Essas bandas de absoro podem ser atribudas ao estiramento assimtrico de grupos COO-. O incompleto desaparecimento da absoro em 1720 cm-1 sugere que poucos grupos COO- podem estar participando da formao do complexo. A absoro em 1660-1600 cm-1 pode estar associada a cetonas conjugadas que, de acordo com Piccolo & Stevenson (1982), podem formar complexos com ons de metais de transio:
O C O C M OH C O C 2+ 1/2 M O C O C
+

M OH C O C 2+ 1/2 M O C O C
+

O grupo C=O em cetonas conjugadas tem sua absoro mudada para regio de menor energia entre 1620-1610 cm-1 e 1390-1309 cm-1 com a formao do complexo C-O-M e C=O-M. A vibrao de estiramento assimtrico de COO- (1630-1575 cm-1) na formao de complexos com metais pesados tem sua freqncia mudada para 1650 1620 cm-1 e tem sido usada para estabelecimento da natureza da ligao inica-covalente do complexo metal-carboxilato. O aparecimento de bandas de absoro na regio de 1070 cm-1 pode indicar que os polissacardeos presentes nas substncias hmicas podem estar envolvidos na reao com o metal, proporcionando oscilaes simtricas na valncia dos grupos O-O-C. ndices relativos de hidrofobicidade e de condensao de substncias hmicas podem ser obtidos pela anlise de espectros de IV-TF, desde que observadas algumas restries. Como a anlise semiquantitativa, os espectros devem ser obtidos nas mesmas condies, ou seja, mesma quantidade de amostra e de KBr, e os espectros devem ser gravados no modo de absorbncia e a linha base de absoro corrigida (A=O em 4000 cm-1, 2000 cm-1 e 860 cm-1). Inbar et al. (1989) acompanharam o processo de compostagem pelos ndices relativos obtidos pela razo entre a absorbncia de grupos polares e apolares (ndice de hidrofobicidade) e a razo entre a absorbncia de grupos alifticos e aromticos (ndice de condensao). Freixo et al. (2002) aplicaram com sucesso essa metodologia para anlise de matria orgnica leve e dentro de agregados, indicando que materiais orgnicos mais hidrofbicos concorrem para a formao dos agregados do solo. Canellas et al. (2004) estudaram o efeito da cobertura do solo com leguminosas perenes sobre a qualidade da matria orgnica de um Argissolo Vermelho Amarelo em diferentes profundidades. A cobertura com Kudzu (M. atropurpureum) favoreceu o desenvolvimento de caractersticas de hidrofobicidade nos cidos hmicos, bem como, maior grau de condensao, avaliados por meio da espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier. Os valores obtidos foram comparados com os da cobertura de mata secundria e de gramneas ( P. maximum). A utilidade e o potencial de uso da espectroscopia na regio de infravermelho bastante amplo. Adiciona-se ainda como vantagem o custo dos equipamentos, que so bem menores dos que o de espectrmetros de massa e os de ressonncia nuclear magntica.
159

c a p t u l o
Ressonncia Magntica Nuclear
Victor M. Rumjanek

A matria orgnica do solo (MOS) tem uma srie de funes no meio ambiente, que incluem a fertilidade, reciclagem de nutrientes e de carbono, especiao de metais e transporte de poluentes. No entanto, devido sua natureza extremamente complexa, sua caracterizao sempre foi um desafio aos qumicos analticos. Um dos problemas cruciais que, mesmo que os componentes individuais da MOS pudessem ser separados, gerar modelos estruturais seria muito difcil, pois as propriedades que emergem da interao destes componentes seria eliminada. Conseqentemente, a tcnica de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN) torna-se extremamente til nesse caso, especialmente porque nos ltimos anos houve um desenvolvimento muito rpido, tanto de tcnicas como de acessrios, capazes de auxiliar grandemente na anlise de MOS. Este captulo descreve os princpios bsicos que regem a RMN bem como diversas aplicaes de diferentes tcnicas, com o intuito de extrair dados qualitativos e quantitativos sobre a MOS. Introduo Apesar da Ressonncia Magntica Nuclear (RMN) ser uma tcnica de caracterizao estrutural relativamente recente, ela tambm uma das mais poderosas e versteis. Durante o perodo que vai do final dos anos 50 at o presente tem havido avanos considerveis, e uma medida de sua importncia pode ser avaliada pela concesso de quatro prmios Nobel para pesquisadores envolvidos com a qumica de RMN. O texto que se segue apenas uma breve descrio das bases fsicas e qumicas do fenmeno de RMN, elaborado de tal modo que o leitor formado em Cincias Agrrias possa entend-lo e avaliar suas aplicaes no campo da pesquisa de matria orgnica do solo (MOS). No final do livro so fornecidas referncias de textos mais completos sobre o assunto, bem como de trabalhos importantes de reviso da rea especfica de RMN aplicada matria orgnica. importante lembrar que o campo da pesquisa de MOS por RMN vem se desenvolvendo com uma rapidez notvel e novas tcnicas so constantemente descritas na literatura e, portanto, a discusso que se segue ao fim deste captulo tem como objetivo maior introduzir o leitor na rea e no o de ser uma reviso sobre este assunto. Propriedades dos Ncleos que Geram Sinal de Ressonncia Magntica Todos os ncleos dos elementos qumicos possuem carga eltrica. Em alguns casos, esta carga pode girar em torno do eixo nuclear, e este movimento de precesso pode ser descrito atravs do nmero de spin I. A precesso do ncleo produz um campo magntico cuja magnitude representada pela grandeza momento magntico nuclear, . Analisando o tomo de 12C, constata-se que seu nmero de massa (A=12) e seu nmero atmico (Z=6) so pares. Neste caso, h uma distribuio simtrica de carga e massa e assim o ncleo se comporta como uma esfera esttica, sendo que a carga est distribuda uniformemente sobre toda a sua superfcie. Deste modo, no h movimento de carga e o spin nuclear I=0 e tambm o momento magntico nuclear = 0. Uma vez que estas grandezas so nulas, no possvel para o tomo de 12C gerar um sinal de RMN, bem como todos os outros ncleos que possuem A e Z pares (Tabela 7.1).
160

Tabela 7.1. Propriedades de alguns ncleos

A Z par par mpar par ou mpar par mpar mpar par ou mpar

forma I Q Ncleos

0 0 0 C O 24 Mg 28 Si 32 S
16 12

?0
1/2 0 H C 15 N 19 F 31 P 107 Ag
13 1 2 6

?0
1 D Li 14 N 2
36

?0
4
40 134

3 >0
10 22

3/2
7

5/2 <0 O Mg 27 Al 55 Mn 67 Zn
25 17

7/2 Ca V 59 Co 139 La
51 43

98

Cl Co

B Na

K Cs

Li Na 35 Cl 37 Cl 39 K 53 Cr 63 Cu 65 Cu
23

Por outro lado, tomos como o 1H e o 13C possuem nmero de massa mpar e, como a distribuio de massa assimtrica, eles possuem momento angular diferente de zero e seu I=1/2. Conseqentemente, este movimento gera um campo magntico e assim 0. Alguns outros ncleos importantes encontram-se nesta situao, tais como 15N, 19F e 31P. Uma vez que estes ncleos apresentam momento magntico diferente de zero, eles so capazes de gerar um sinal de RMN e sero, portanto, o objeto principal de estudo neste captulo. Como a distribuio de cargas eltricas nos dois tipos de ncleos analisados at agora esfrica, ou seja, o campo eletrosttico idntico em todas as direes, o momento quadrupolar (eQ) destes ncleos nulo. Apesar dos ncleos que sero estudados mais a fundo possurem eQ=0, cabe mencionar esta grandeza pois o eQ, quando diferente de zero, pode dificultar a observao de um determinado ncleo. Finalmente, h ainda ncleos que se comportam como elipsides em revoluo. Nestes, a distribuio de cargas eletrostticas no uniforme e portanto eQ0 (por conveno eQ>0 para elipsides que giram em torno de seu eixo longitudinal e eQ<0 para corpos que se movimentam em torno de seu eixo menor) (Tabela 7.1). Orientaes dos Ncleos em Campos Magnticos Como foi dito anteriormente, os ncleos mais importantes para os estudos descritos neste captulo possuem I=1/2. Quando estes se encontram na ausncia de um campo magntico, orientam-se ao acaso. Na presena de um campo magntico, os ncleos tendem a orientar-se em relao ao vetor que representa este campo magntico, assumindo dois estados possveis de energia: alinhado com o vetor campo e de menor energia ( ) e no alinhado com o campo e de maior energia () (Figura 7.1).
0

E ( )

B0 = 0

E = hB0 = h

B0 0

Figura 7.1 Diagrama de Energia para Ncleos com I = 1/2

161

No caso de ncleos com I>1/2 possvel um nmero maior de orientaes em relao a um campo magntico. Este nmero dado pela frmula n=2I+1. Assim, quando o ncleo de 17O (I= 7/2) encontra-se em um campo magntico, ele possui 8 orientaes diferentes em relao a este campo, sendo quatro de maior energia (no alinhados) e quatro de menor energia (alinhados com o campo magntico). Sensibilidade e Receptividade em RMN A eficcia da anlise de um determinado ncleo em RMN depende de uma srie de fatores. Assim, para 13C e 1H tem-se,
13C / 1H = 6,728 x 107/26,759 x 107 = 0,251

A sensibilidade dos vrios ncleos para determinao por RMN caracteriza-se pela intensidade do fenmeno em condies experimentais idnticas e proporcional a
I +1 I2 3

onde , como j foi definido no comeo do texto, o momento magntico do ncleo e I o seu spin. Tem-se ento para 13C e 1H,
sensibilidade de 13C/sensibilidade de 1H = ( 13C / 1H )3 = 0,015

Outro fator importante a abundncia natural de cada nucldeo e, novamente para os ncleos de 13C e 1H tem-se que,
abundncia natural de 13C/abundncia natural de 1H = 1,1% 99,9% = 0,011

Finalmente, conjugando todos estes fatores obtm-se a receptividade relativa de ncleos para estudos de RMN. Desta maneira, para os ncleos usados como exemplo,
receptividade de 13C/receptividade de 1H = 0,015 x 0,011 = 1,65 x 10 - 4

Apesar da receptividade de 13C ser relativamente muito baixa, a anlise deste ncleo pode ser feita sem maiores problemas. No entanto, em algumas instncias, a receptividade e as concentraes dos compostos a serem analisados so to baixas que os estudos utilizando abundncia natural so muito dificultados. Nestes casos, como por exemplo o 15N, pode recorrer-se ao enriquecimento isotpico para facilitar sua observao. O Fenmeno de Ressonncia A distribuio dos ncleos com I=1/2 entre os dois estados de energia possveis se d de acordo com a equao de Boltzmann,
E N = e kT N

onde N e N so as populaes dos estados menos energtico e mais energticos, respectivamente; representa a diferena de energia entre os estados, a constante de Boltzmann e T a temperatura absoluta. Portanto, a uma determinada temperatura haver um pequeno excesso de ncleos no estado de mais baixa energia em relao ao estado de mais alta energia. Este excesso to maior quanto for a diferena de energia entre os estados. Utilizando o 1H como exemplo,
162

num campo magntico de um aparelho de porte mdio (9,39 x 103 Gauss) a 300 K tem-se que
N = 1,0000066 N

Como pode ser visto no diagrama da Fig. 7.1, a diferena de energia entre os dois estados

E = hB 0
onde a chamada constante giromagntica, que uma caracterstica de cada ncleo; B0 o campo magntico aplicado e h simplesmente h / 2 Ocorre que a diferena de energia tambm pode ser definida como
E = h

onde h a constante de Planck e v a freqncia correspondente quela diferena de energia. Igualando as equaes,
hB 0 = h

tem-se que
= B 0 / 2

Esta equao indica que se um conjunto de ncleos colocado em um campo magntico B0 , possvel transportar os ncleos em excesso (estado de mais baixa energia) at o estado de energia mais alta fornecendo energia correspondente a uma radiao eletromagntica cuja freqncia v. Quando isto ocorre, diz-se que h o fenmeno de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN). Por este motivo, esta relao conhecida como equao fundamental da Ressonncia Magntica Nuclear e v chamada de freqncia de Larmor. A Tabela 7.2 mostra alguns exemplos de ncleos e suas respectivas freqncias de RMN.
Tabela 7.2. Propriedades magnticas de ncleos importantes para o experimento de RMN
Ncleo H C 15 N 19 F 31 P
13 1

Momento magntico ( ) 2,7927 0,7021 -0,2829 2,6273 1,1316

Constante giromagntica ( ) 2,675 0,673 -0,271 2,517 1,083

Freqncia de RMN () num campo de 9.39 T (em MHz) 400,13 100,61 40,56 376,49 161,97

Receptividade relativa a 1H 1,00 1,6 x 10-4 3,6 x 10-6 0,782 0,062

Abundncia natural (%) 99,98 1,01 0,37 100,0 100,0

Observando-se a Figura 7.1, nota-se que, medida que o campo magntico aumenta, h um aumento proporcional na diferena de energia entre os estados energticos. Este, por sua vez, provoca um aumento no excesso de ncleos no estado de mais baixa energia (vide equao de Boltzmann). Como o sinal de RMN diretamente proporcional ao nmero de ncleos no estado de menor energia, chega-se concluso de que quanto mais forte o campo magntico, mais intenso o sinal de RMN e assim explica-se a busca por aparelhos cada vez mais potentes. interessante notar que, segundo a equao fundamental da RMN, todos os ncleos dos diferentes tomos de 1H, ou qualquer outro tomo que se esteja observando, entrariam em ressonncia na mesma freqncia, j que a equao envolve apenas constantes. Caso esta fosse a realidade, todos os compostos forneceriam o mesmo espectro de RMN! Felizmente a situao
163

no to simples, pois ocorre que em torno dos diferentes ncleos dos tomos que compem uma molcula h eltrons em movimento e estes geram um campo magntico prprio e de sentido oposto ao campo magntico gerado pelos ncleos. Assim, h uma interao entre estes dois campos de sentidos opostos, gerando o chamado campo magntico local, e como estes campos magnticos locais variam, dependendo do ambiente de cada tomo, as freqncias de ressonncia destes ncleos tambm variam. Esta situao pode ser melhor compreendida observando-se a representao da molcula de etanol na Figura 7.2. Como pode se observar, os tomos de 1H que esto mais afastados do tomo de oxignio (mais eletronegativo) possuem uma alta densidade eletrnica o que acarreta, por sua vez, um forte campo magntico B. medida que os tomos de hidrognio se aproximam cada vez mais do tomo de oxignio, suas densidades eletrnicas diminuem progressivamente acarretando campos magnticos B cada vez mais fracos. Assim, trs campos magnticos locais diferentes so gerados e, portanto, haver trs freqncias diferentes de ressonncia, uma para cada tipo de hidrognio do etanol. Os valores destas freqncias so chamados de deslocamentos qumicos. Quando a densidade eletrnica em torno do ncleo de 1H alta, diz-se que este ncleo sofre proteo e a constante de proteo, no caso do 1H chamada de constante de proteo diamagntica (dia), alta. Por outro lado, medida que a densidade eletrnica diminui, a constante de proteo tambm diminui, e o ncleo de 1H, conseqentemente, torna-se cada vez mais desprotegido.

B0 B' B' H C C H H O H H

H B'

Figura 7.2. Representao da molcula de etanol com os campos magnticos B gerados pelas diferentes densidades eletrnicas sobre os tomos de 1H.

Natureza do Sinal de RMN e os Espectrmetros Como j foi visto no item anterior, ao submeter-se uma amostra a um campo magntico, h um pequeno excesso de ncleos no estado menos energtico () em relao ao estado mais energtico (). Estes ncleos precessam, da mesma maneira que um peo de madeira precessa quando sofre a ao do campo gravitacional da Terra. Se fornecermos uma quantidade de energia (na forma de radiofreqncia) relativa diferena entre estes dois estados, possvel transferir os ncleos em excesso para o estado . Assim, estes ncleos entram em ressonncia e a energia referente a este processo captada por um receptor de radiofreqncia (RF) e transformada num sinal (Figura 7.3).
164

B0

amostra

im

U U
amplificador transmissor de radiofreqncia receptor de radiofreqncia

Figura 7.3 Diagrama esquemtico de um espectrmetro de RMN.

H duas tcnicas possveis para se observar um sinal de RMN: onda contnua (OC) e pulso com transformada de Fourier (PTF). Durante o registro de um espectro obtido por OC, a freqncia de um transmissor de RF fraca variada continuamente. O vetor M, referente magnetizao total (Figura 7.4a), que a soma dos momentos nucleares individuais , desvia-se de sua posio de equilbrio no eixo z durante a ressonncia (=B0) e induz uma corrente no receptor de RF (Figura. 7.4b) que transformada num sinal (Figura. 7.4c). Aps a ressonncia (>B0), o vetor M retorna sua posio original, num processo chamado de relaxao.
b
z x

c
y

M z

a
x y

sinal de OC

receptor de radiofreqncia

transmissor de radiofreqncia

pulso de radiofreqncia

d
z x y

transformada de Fourier

t receptor de radiofreqncia

Figura 7.4. Gerao de sinal em espectroscopia OC e PTF

Quando se utiliza a tcnica de PTF, todos os diferentes ncleos com seus respectivos so excitados ao mesmo tempo, por meio de um potente pulso de RF que contm todas as diferentes freqncias de ressonncia daqueles ncleos (>B0) e o resultado que o vetor M tambm se desvia de sua posio original, induzindo uma corrente no receptor de RF (Figura 7.4d). Como cada ncleo possui um tempo de relaxao diferente, obtm-se um grfico das intensidades de todos os sinais dos diferentes ncleos em funo do tempo (Figura 7.4e). Esta funo chamada de FID (do ingls Free Induction Decay). Ao processar-se esta funo, atravs de uma operao
165

matemtica conhecida por transformada de Fourier, obtm-se um espectro de RMN , que reflete a intensidade dos sinais em funo das freqncias (Figura 7.4c). Ambos os espectrmetros so constitudos dos mesmos componentes, com a diferena que o de PFT acoplado a um computador que realiza a operao de transformada de Fourier. Os espectrmetros de OC possuem campos magnticos de at 2,3 Tesla (correspondente a uma freqncia de ressonncia para o 1H de 100 MHz) e uma das vantagens dos espectrmetros de PTF , exatamente, a da possibilidade de se obter campos magnticos mais fortes (o aparelho comercial mais potente hoje o de 900 MHz). Estes campos magnticos so conseguidos com bobinas de material supercondutor. Tendo em mente o fato de que quanto maior a fora do campo magntico do aparelho, ao aumentar-se a fora do campo magntico, aumenta-se a sensibilidade do aparelho. Como os espectrmetros de PTF possuem um computador acoplado, pode-se somar (ou realizar qualquer outra operao matemtica sobre) espectros e com isso diminuir a razo sinal/ rudo, o que indiretamente torna-se um aumento de sensibilidade. Uma outra vantagem dos espectrmetros de PTF o tempo reduzido de anlise quando comparado a um aparelho de OC. Nos prximos itens sero investigados os principais parmetros de um espectro de RMN de 1H e mais frente de outros ncleos importantes. Tempos de Relaxao Relaxao o fenmeno atravs do qual os ncleos no estado excitado voltam ao estado original. Observando-se a Figura 7.4d, nota-se que aps a aplicao de um pulso, a magnetizao total afasta-se do eixo z, gerando uma componente no plano x-y (o vetor magnetizao precessa em torno do eixo z). O tempo que leva para a componente no eixo z retornar ao original chamado de tempo de relaxao longitudinal (T1) e o tempo que leva para a componente no plano x-y retornar a zero chama-se tempo de relaxao transversal (T2). O tempo T1, tambm chamado tempo de relaxao spin-rede, muito maior do que T2, tambm conhecido por tempo de relaxao spin-spin. O conhecimento de T1 importante, pois ele se correlaciona com parmetros estruturais, em especial, com a mobilidade das molculas. Por sua vez, T2 est diretamente ligado largura do sinal pela equao,
= 1 T2

onde n a largura do sinal a meia altura. T2 pequeno para substncias rgidas (estado slido) e longo para molculas com grande mobilidade (lquidos e amostras em soluo). Deslocamentos Qumicos de 1H Utilizando qualquer uma das duas tcnicas descritas no item anterior e uma amostra de etanol, obtm-se o espectro da Figura 7.5, onde se confirma a presena de trs tipos diferentes de 1 H (comparar com a Figura 7.2).

Figura 7.5. Espectro de RMN de 1H do etanol

166

Os diferentes parmetros que so analisados num espectro de RMN sero discutidos nos prximos itens, utilizando o espectro de etanol da Figura 7.5. A discusso da proteo relativa de ncleos individuais de 1H, dominada pela constante de proteo diamagntica, dia, indica que pode se elaborar um sistema de medio do deslocamento qumico e que estes deslocamentos variam com a estrutura qumica. A medida de deslocamentos qumicos em freqncias no usada, pois diferentes espectrmetros operam com diferentes campos B0 e, de acordo com a equao fundamental da RMN, as freqncias de ressonncia dos diferentes ncleos variam com B0. Assim, mede-se a posio do sinal de ressonncia em relao ao de um composto referncia ou padro. No caso de RMN de 1H ou de 13C este composto o tetrametilsilano, Si(CH3)4 (TMS). Como j foi dito, uma vez que os valores das freqncias de ressonncia n dependem do campo magntico do aparelho, uma unidade adimensional foi definida para o deslocamento qumico que definida por:

substncia referncia 0

Nesta equao, 0 representa a freqncia do espectrmetro utilizado (por exemplo, 250 MHz) e para a escala de so usadas partes por milho (ppm). Assim, para os sinais do etanol, so encontrados os valores de 3,8; 2,2 e 1,5 ppm, independentemente de que aparelho foi usado para obter-se o espectro. A relao entre as escalas de freqncias em Hz ou em ppm mostrada na Figura 7.6.

14

12

10

-2

-4

ppm ()

1400 1200 1000 800 600

400 200

-200 -400 Hz (100 MHz)

3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

-500 -1000 Hz (250 MHz)

Figura 7.6. Relao entre escalas de deslocamento qumico

O tetrametilsilano (TMS) mencionado anteriormente fornece um sinal nico, com uma freqncia diferente da maioria dos ncleos de 1H ou 13C e tem, portanto, sua freqncia de ressonncia assinalada como 0 na escala . Uma vez que estabeleceu-se a escala , possvel a partir de agora assinalar hidrognios numa estrutura qumica a regies definidas do espectro. As principais funes orgnicas com seus respectivos valores de esto descritas na Figura 7.7.
TMS

CH2 CH
H

O CH

aromticos NH2 amida OH fenol 8 7 6

alcenos RS RO RX OH lcool 5 4 3 RSi NH2 amina 2 1 0

COOH (at 13 ppm) 11 10 9

-1

Figura 7.7. Principais funes orgnicas e seus deslocamentos qumicos de 1H.

167

J foi visto, utilizando a molcula de etanol, que a densidade eletrnica em torno de ncleos de 1H capaz de alterar o deslocamento qumico destes ncleos. Assim, se a densidade eletrnica aumenta, o deslocamento qumico diminui (CH3, =1,5) e, ao contrrio, se a densidade eletrnica diminui, o deslocamento qumico aumenta (CH2, =3,5). Este fenmeno geral e outro exemplo pode ser observado na srie,
CH3-H CH3-I CH3-Br CH3-Cl CH3-F

0.13

1.98

2.45

2.84

4.13

Cabe ressaltar ainda que o efeito indutivo observado nestes exemplos aditivo e tambm se perde com a distncia, como pode ser observado no prprio exemplo do etanol. H um outro fator de importncia que influencia o deslocamento qumico. A Figura 7.8 mostra a molcula de benzeno e o campo magntico formado pelo movimento circular dos eltrons que formam as ligaes . Este campo magntico faz com que a molcula de benzeno ( e os compostos aromticos em geral) possua duas regies diferentes: uma em que h um efeito de proteo (representado por +), ou seja, menores deslocamentos qumicos para tomos de 1H que ali se encontram e outra, de desproteo (representado por -), onde os hidrognios tem deslocamento qumicos mais altos. Como o campo magntico em torno da molcula de benzeno varia conforme o local analisado, diz-se que h um efeito de anisotropia magntica e por extenso, diz-se que a molcula de benzeno (e dos outros compostos aromticos) magneticamente anisotrpica.
B0

+
H H

+
B

Figura 7.8. Campo magntico gerado pelos eltrons na molcula de benzeno (A) que do origem a regies de proteo (+) e desproteo (-) (B). A seta mostra o plano de circulao dos eltrons

Similarmente ao que ocorre com as molculas dos compostos aromticos, h outras ocasies em que se observa a anisotropia magntica. Assim, na Figura 7.9 esto representados grupos ou ligaes mais comuns em que o movimento dos eltrons faz com que seja gerado um campo magntico que, por sua vez, torna estes grupos ou ligaes magneticamente anisotrpicos, dando origem a regies de proteo (+) ou de desproteo (-).
H H

+
C

+ + +

H H Hax

R H

+
C O

+ C C

Heq

+H

Figura 7.9. Efeito de anisotropia magntica em algumas ligaes importantes. As setas indicam o plano de circulao dos eltrons das ligaes.
168

Deslocamentos Qumicos de

13

Como foi mencionado anteriormente, a constante de proteo dominante no caso de 1H dia. Entretanto, no caso de 13C (ou qualquer outro tomo que possua eltrons 2p), a constante de proteo dominante a chamada paramagntica, para e assim ela que influencia os deslocamentos qumicos de 13C e dos outros ncleos que possuem eltrons 2p. A grande diferena que existe que, no caso do 1H, o aumento da constante de proteo dia acarreta uma diminuio de deslocamento qumico enquanto que no caso do 13C (e dos outros ncleos que possuem eltrons 2p), o aumento da constante de proteo para leva a um aumento do deslocamento qumico. Segundo a equao abaixo,
3 para E 1r2 p Q AA

a constante de proteo paramagntica aumenta com a diminuio da energia mdia de excitao eletrnica E e tambm com o inverso do cubo da distncia dos eltrons 2p ao ncleo r2p . A constante de proteo paramagntica tambm aumenta com o aumento do termo QAA, que representa basicamente a ordem de ligao. Assim, por exemplo, a relao da proteo com a energia de excitao est de acordo com o fato de que os compostos carbonlicos apresentam deslocamentos qumicos maiores ( C > 170 ppm, transio n-p* com E 7 eV) do que aqueles de alcenos ou compostos aromticos (C 100-150 ppm, transio -* com E 8 eV) ou de alcanos (C < 50 ppm, transio s-s* com E 10 eV). As principais classes de compostos orgnicos, com seus respectivos deslocamentos qumicos de 13C, esto descritas na Figura 7.10.
TMS

cetonas aldedos COOH amidas COOR urias

C C

N S

C Cl heteroaromticos 5-membros 6 aromticos O S alcenos 220 200 180 160 140 120 acares

Hal

alcanos 100 80 60 40 20 0

Figura 7.10. Deslocamentos qumicos de 13C das principais classes de compostos orgnicos

O termo r2 p afetado basicamente por efeitos que variam a densidade eletrnica e o resultado semelhante quele encontrado para o tomo de 1H. Assim, a Tabela 7.3 mostra os efeitos de alguns substituintes na posio 1 do pentano sobre os deslocamentos qumicos de 13C.
169

Tabela 7.3 Deslocamentos qumicos de 13C dados pelo substituinte em 1-X-pentanos (em relao ao n-pentano: C1 = 13.7, C = 22.6 e C = 34.5).
2
3

Substituinte X F Cl Br COOH NO2 CH3 NH2

C1 70.1 30.6 19.3 20.5 61.6 9.3 29.7

C2 8.0 10.0 10.1 2.3 3.1 9.4 11.2

C3 -6.7 -5.3 -4.1 -2.7 -4.6 -2.5 -5.0

Note-se que os ncleos C1 e C2 apresentam deslocamentos qumicos correspondentes a uma diminuio de densidade eletrnica produzida pelos substituintes eletronegativos, como esperado. Entretanto, os ncleos C3 sofrem uma proteo, que causada por outros efeitos cujo estudo foge ao propsito deste texto. Finalmente, o efeito da ordem de ligao (QAA) pode ser observado na srie abaixo.
H3C 6.5
31

CH3

H2C 123.5

CH2

H2C

C 212.4

CH2

Deslocamentos qumicos de

Os efeitos estruturais sobre os deslocamentos qumicos de 31P so semelhantes aos j descritos para o tomo de 13C. A Figura 7.11 mostra as principais classes de compostos orgnicos de fsforo e seus deslocamentos qumicos.
H3PO4 85%

fosfonatos fosfatos fosfato monosteres fosfato disteres pirofosfatos polifosfatos

20

15

10

0
31

-5

-10

-15

-20

Figura 7.11. Deslocamentos qumicos de P de algumas classes de compostos fosforados.

Deslocamentos Qumicos de
15

15

A anlise por RMN de N grandemente dificultada pelo fato de que, tanto sua abundncia natural como as concentraes de compostos de nitrognio na MOS so baixas. Ainda assim, na Figura 7.12 so apresentados os deslocamentos de algumas funes nitrogenadas importantes.
170

NH3 purinas pirimidinas aminocidos em peptdeos amidas nitrilas nitrato urias 0

nitroso nitritos

800 700 600 500 400 300 200 100

Figura 7.12. Principais deslocamentos qumicos de 15N.

Acoplamentos de spins Apesar do fato de que em anlises de MOS o principal parmetro analisado seja o deslocamento qumico, segue-se uma breve descrio sobre uma outra caracterstica do espectro de RMN de 1H, que pode ser observada na Figura 7.2, que o nmero de linhas de cada sinal referente a cada tipo de hidrognio do etanol. O nmero de linhas de cada sinal chamado de multiplicidade do sinal. Assim, os hidrognios da metila do origem a um sinal que tem 3 linhas enquanto que o sinal do metileno possue 4 linhas. Este fenmeno chamado de acoplamento de spins e ele ocorre devido a uma interao magntica, atravs das ligaes qumicas, entre ncleos de 1H que so diferentes. Como a Figura 7.13 mostra, para os hidrognios de um grupo metileno, o momento magntico do ncleo A causa uma pequena polarizao dos eltrons da ligao que transmitida atravs do entrosamento dos orbitais at o ncleo X.

HA C

HX

momento magntico nuclear polarizao magntica do eltron

Figura 7.13 . Representao esquemtica da interao spin-spin atravs dos eltrons de ligao num grupo CH2.

Como conseqncia, dependendo do estado do spin de A, o campo magntico em torno de X varia e o seu sinal dividido em duas linhas, formando um dubleto. O mesmo efeito ocorre para o ncleo A e assim, seu sinal tambm um dubleto. Para ncleos com I = , a multiplicidade do sinal igual a n + 1, onde n o nmero de ncleos no grupo vizinho. Para saber a multiplicidade de um determinado sinal, pode-se usar o
171

tringulo de Pascal abaixo:

n=0 1 2 3 4 5 1 1 5 1 4 10 1 3 6 10 1 2 3 4 5 1 1 1 1 1 1

Os ndices do tringulo de Pascal fornecem a intensidade relativa das linhas de um sinal. Assim, se no h ncleos vizinhos (n = 0), o sinal um singleto. Se h, por exemplo, trs ncleos vizinhos, o sinal um quarteto com linhas de intensidade relativa 1:3:3:1. A separao entre as linhas chamada de constante de acoplamento (J) e dada em Hz. O valor desta constante d uma medida da eficincia do acoplamento, que por sua vez, est relacionada, em termos gerais, com a distncia entre os dois ncleos. Finalmente, a constante de acoplamento entre HA e HX tem o mesmo valor daquela entre HX e HA. Cabe ressaltar ainda que diferentes ncleos de spin podem acoplar entre si. Assim, ncleos de 1 H acoplam com ncleos de 13C. No entanto, no espectro de RMN de 1H s se observam acoplamentos entre ncleos de hidrognio, pois a abundncia natural do ncleo de 13C de apenas 1% e assim a probabilidade de um ncleo de 13C encontrar-se vizinho a um ncleo de 1H tambm baixa. Seguindo este raciocnio, possvel observar num espectro de RMN de 1H, o acoplamento dos tomos de hidrognio com tomos de 31P ou 19F, j que estes so abundantes. No caso de um espectro de RMN de 13C, geralmente no se vem os acoplamentos (possveis) com os tomos de hidrognio, pois estes acoplamentos so eliminados, atravs da irradiao de todos os ncleos de 1H com uma segunda fonte de radiofreqncia, por motivos de clareza do espectro. As constantes de acoplamento entre ncleos de hidrognio (JH,H) variam, em termos absolutos, de 0 a 15 Hz enquanto que os valores absolutos de JC-H encontram-se na faixa de 0 a 250 Hz. Devido ao fato de que amostras de MOS so geralmente muito complexas e com sinais relativamente largos, em geral no se observam nos espectros de RMN os acoplamentos discutidos neste item. Integrao dos sinais Foi mencionado anteriormente que a intensidade do sinal de RMN proporcional ao nmero de tomos que geram aquele determinado sinal. Um integrador eletrnico no aparelho de RMN produz uma curva para cada sinal e as alturas das curvas indicam, para o exemplo do etanol da Figura 7.5, uma razo de 1:2:3. Cabe ressaltar que apenas o nmero relativo de tomos determinado pela integrao. Assim, o malonato de etila abaixo tambm fornece a mesma razo de nmero de tomos de hidrognio.
H C H COOCH2CH3 malonato de etila razo entre as integraes: 1:2:3
172

COOCH2CH3

A integrao de sinais muito importante para a anlise quantitativa. Os espectros de RMN de 13 C tambm podem ser integrados, desde que sejam utilizadas tcnicas apropriadas que sero mencionadas mais tarde. Estado fsico da amostra A dissoluo de uma amostra em um solvente (geralmente deuterado, tanto para evitar que o sinal do solvente, presente em grande quantidade, perturbe a anlise do espectro como tambm por requisitos tcnicos) tem como vantagem o fato de que o movimento Browniano elimina as causas de alargamento de sinais, alm do fato de que, num sistema lquido, os processos de relaxao so mais favorveis obteno de sinais finos. Conseqentemente, o estado lquido o estado predominante no qual as anlises de RMN so feitas. Entretanto, no que diz respeito rea de MOS, as anlises no estado slido so muito mais comuns devido aos seguintes fatores: - ausncia de efeitos do solvente, - menor tempo de aquisio dos espectros, - possibilidade de anlise de fraes insolveis, tais como huminas e carbono pirognico, - maior estabilidade das amostras no estado slido, - ausncia de limites de concentrao e - possibilidade de anlise de amostras ntegras de solos. A principal desvantagem das anlises no estado slido o alargamento dos sinais devido ao fato de que amostras slidas possuem tempos de relaxao T2 menores. Cabe relembrar que quanto maior a fora do campo magntico de um espectrmetro, maiores so a resoluo e a sensibilidade. Enquanto isso benfico para as anlises em soluo, os estudos no estado slido so dificultados por campos muito fortes, pois so requeridas maiores velocidades de rotao da amostra e isso s pode ser conseguido com menores rotores, que por sua vez exigem menores quantidades de amostra o que acarreta uma sensibilidade menor. H um consenso geral de que anlises de RMN de 1H (ncleo abundante e alta sensibilidade) so geralmente feitas em soluo enquanto que as anlises de 13C (ncleo de baixa abundncia e sensibilidade) so feitas no estado slido, pelos motivos expostos acima. Finalmente, as anlises de 31P (ncleo abundante e sensibilidade razovel) so feitas em ambos os estados, sendo que em soluo, como mencionado acima, obtm-se maior resoluo. As ocasies em que as anlises de 13C so realizadas no estado lquido so aquelas em que tcnicas bidimensionais (descritas mais frente) so empregadas. Anlises no estado slido Uma vez que as anlises de RMN de 13C de material orgnico extrado de solos so geralmente feitas no estado slido e que a quantificao requer cuidados especiais, segue-se uma breve descrio das principais tcnicas. MAS sigla em ingls de Rotao no ngulo Mgico. Numa molcula esfrica, o deslocamento qumico independente de sua orientao no campo magntico. No entanto, se a molcula assimtrica (caso, por exemplo, de MOS), o deslocamento qumico passa a depender da orientao e sinais muito largos so obtidos. Quando se realiza a anlise em soluo, o movimento rpido das molculas elimina este problema. A dependncia do deslocamento qumico com a orientao uma funo, entre outros fatores, da expresso 3 cos2 1, em que o ngulo entre as molculas e o campo magntico do aparelho. Quando o ngulo igual a 54,7o o termo acima se anula e assim, se todas as molculas pudessem ser posicionadas de acordo com este ngulo, a resoluo do
173

espectro aumentaria. Este ngulo denominado ngulo mgico. Evidentemente no possvel colocar todas as molculas nesta posio. No entanto, pode-se fazer com que a orientao mdia das molculas seja aquela, fazendo com que a amostra gire rapidamente num ngulo de 54,7 em relao ao campo magntico. Em anlises no estado slido, a amostra ento colocada num tubo que por sua vez posto dentro de um rotor especial que gira a velocidades na faixa de R = 5 a 15 kHz. Todas as anlises no estado slido utilizam necessariamente esta tcnica. CP sigla em ingls para Polarizao Cruzada. Esta tcnica utilizada para anlises de 13C, pois como este ncleo pouco abundante, utilizando-se a CP, observam-se os tomos de 13C atravs dos tomos de 1H aos quais aqueles esto ligados e assim a sensibilidade aumentada. Entretanto, o aumento de sensibilidade contrabalanado por uma perda na qualidade da quantificao das diferentes funes orgnicas presentes na MOS. DP sigla em ingls de Polarizao Direta, tambm conhecida como decaimento de Bloch (Bloch decay). Esta tcnica uma alternativa CP, pois a quantificao por DP mais confivel, porm sua sensibilidade menor. TOSS sigla em ingls de Supresso Total de Bandas Laterais. Um dos efeitos da rotao da amostra o aparecimento de bandas laterais nos espectros e esta tcnica as elimina. RESTORE sigla em ingls de Restaurao de Espectros por Edio de TC-H e T Um Rho (T1rH) e s vezes denominada contagem de spins. Esta uma tcnica que envolve a combinao de trs espectros de CP-MAS em diferentes condies que fornecem, em tese, um espectro verdadeiramente quantitativo. RAMP sigla em ingls de Amplitude em Rampas. uma tcnica utilizada para corrigir possveis erros na quantificao dos diferentes sinais. A Figura 7.14 d uma idia da melhora conseguida na anlise do aminocido glicina no estado slido pela aplicao de algumas tcnicas descritas acima.

Figura 7.14. Espectros de 13C de glicina no estado slido: (a) sem desacoplamento de hidrognio; (b) com desacoplamento de hidrognio; (c) com desacoplamento de hidrognio e CP; (d) CPMAS (nR = 1 kHz); (e) CPMAS (nR = 3 kHz); (f) CPMAS (nR = 5 kHz); (g) CPMAS (nR = 5 kHz) e TOSS. Adaptado de Evans 1995.
174

Tcnicas unidimensionais Alm dos espectros normais de 1H, 13C e 31P, outras tcnicas podem ser utilizadas nas anlises de MOS. As principais so: DEPT sigla do ingls Distortionless Enhacement by Polarization Tansfer. Esta tcnica envolve a transferncia de polarizao do hidrognio para os tomos de carbono aos quais aqueles se encontram ligados. Assim, possvel observar os tomos de carbono utilizando as populaes de ncleos de 1H. A principal vantagem desta tcnica o aumento de sensibilidade. Evidentemente, s os tomos de carbono que possuem tomos de hidrognio ligados que so observados. Os espectros separam os sinais de CH, CH2 e CH3. Uma tcnica alternativa que gera o mesmo tipo de resultado a INEPT. PENDANT - sigla do ingls Polarization ENhacement During Attached Nucleus Testing. Esta tcnica alternativa possui a mesma sensibilidade de DEPT, porm, possvel observar-se tambm os tomos de carbono quaternrios (aqueles que no tem tomos de hidrognio ligados a eles). Tcnicas bidimensionais Devido ao fato de que as amostras de MOS so geralmente muito complexas, mesmo no estado lquido a resoluo dos espectros baixa e assim, a disperso dos dados em uma segunda dimenso muito vantajosa. As tcnicas bidimensionais podem ser divididas em trs classes diferentes: 1. Experimentos homonucleares Existem dois experimentos bsicos nesta classe. Um o chamado COSY (do ingls COrrelation SpectroscopY) em que feita a correlao entre todos os tomos de hidrognio que acoplam entre si. Em geral, possvel observar-se apenas acoplamentos entre tomos de hidrognio que esto distantes entre si duas (2J) ou trs (3J) ligaes. A outra tcnica, mais poderosa ainda, chamada de TOCSY (do ingls TOtal Correlation SpectroscopY). Atravs de seu uso possvel observar o acoplamento entre todos os tomos de hidrognio de uma cadeia alqulica at que esta seja interrompida por um tomo de carbono quaternrio. 2. Experimentos heteronucleares Estes experimentos possibilitam correlacionar tomos diferentes, mas que esto ligados entre si. Assim, possvel obter espectros com correlaes entre 1H/13C, 1H/15N ou 1H/31P. A tcnica chamada HSQC (do ingls Heteronuclear Single Quantum Coherence) permite observar qualquer uma das correlaes mencionadas acima, com a ressalva de que somente so observados os pares de tomos que esto diretamente ligados entre si (1JX-H). Esta tcnica, portanto, s permite a observao de tomos de carbono que tenham tomos de hidrognio ligados a ele. Uma tcnica que fornece resultados muito semelhantes a de HMQC (do ingls Heteronuclear Multiple Quantum Coherence). As vantagens destas tcnicas so a maior resoluo dos sinais que esto superpostos no espectro de 1H, atravs da maior disperso de sinais de 13C, 15N ou 31P e aumento de sensibilidade. Quando uma alta resoluo necessria pode-se usar a tcnica alternativa HETCOR (do ingls Heteronuclear Correlation). Em contrapartida, as tcnicas de HSQC, HMQC e HMBC fornecem um ganho de sensibilidade da ordem de 30 para 13C e de 300 para 15N. Uma modificao introduzida na HSQC transforma-a num outro experimento, chamado HMBC (do ingls Heteronuclear Multiple Bond Correlation) e atravs deste possvel observar acoplamentos heteronucleares atravs de duas(2JX-H) ou trs ligaes (3JX-H). Assim, possvel observar um tomo de carbono quaternrio, atravs de seu acoplamento com tomos de hidrognio
175

que esto ligados aos tomos de carbono vizinhos. 3. Experimentos de difuso Estudos recentes mostram que substncias hmicas resultam da agregao de vrias classes de compostos orgnicos, tais como acares, aminocidos, steres e teres alifticos e aromticos. Numerosos estudos mostram que h uma correlao direta entre o peso molecular e os coeficientes de difuso para uma variedade de espcies orgnicas e estas correlaes so descritas por equaes empricas. Baseado nestas observaes foi desenvolvido um experimento bidimensional chamado DOSY (do ingls Diffusion Ordered SpectroscopY), em que observam-se deslocamentos qumicos em um eixo e no outro eixo encontram-se os respectivos coeficientes de difuso. Comparando-se os deslocamentos qumicos e os coeficientes de difuso com os de diferentes padres, possvel identificar vrias classes de compostos no agregado. Aplicaes de RMN anlise da matria orgnica de solos (MOS) A primeira anlise de MOS envolvendo RMN foi descrita por Barton & Schnitzer (1963), que avaliaram um cido hmico metilado atravs de RMN de 1H. No entanto, somente nos ltimos 20 anos que a unio de magnetos supercondutores cada vez mais potentes com o desenvolvimento de muitas das tcnicas descritas nos itens anteriores, possibilitou a intensificao do uso de RMN aplicada matria orgnica extrada de solos. Devido ao fato de que as amostras de MOS so muito complexas, sua anlise requer tcnicas e acessrios especficos, alm de pesquisadores que se dediquem a esta rea, e no Brasil esta situao mais crtica ainda, o que explica, em parte, que o primeiro estudo realizado seja relativamente recente (Ceretta 1995). As anlises de MOS por RMN envolvem a identificao e quantificao dos diferentes grupos funcionais presentes. O ncleo ideal para estes estudos o 13C, j que est uniformemente distribudo. No entanto, devido sua baixa abundncia natural, as anlises so muito demoradas, requerendo s vezes, mais de 24 horas. Assim, um grande nmero de estudos tem sido realizado com 1H e 31P. Recentemente foram publicadas revises que focalizam vrios aspectos da tcnica de RMN. Cook (2004) fez uma excelente anlise dos diferentes mtodos aplicveis aos estudos por 1H e 13 C, focalizando principalmente as diferentes tcnicas de quantificao, concluindo que os avanos no desenvolvimento de tcnicas e acessrios continuar pelos prximos anos, especialmente se os fabricantes derem-se conta de que existe um mercado para espectrmetros dedicados pesquisa de MOS. Outra oportunidade de expanso citada pelo autor o incio do emprego de tcnicas chamadas hifenadas, ou seja, o acoplamento de tcnicas de extrao e separao ao uso de RMN, como, por exemplo, CLAE-RMN (cromatografia lquida de alta eficincia-RMN) ou CLAEEFS-RMN (cromatografia lquida de alta eficincia-extrao na fase slida-RMN), utilizadas em um estudo feito por Simpson et al. (2004). Conte et al. (2004) elaboraram uma reviso detalhada sobre o uso de RMN de 13C concluindo com uma srie de procedimentos a serem seguidos a fim de obter quantificaes confiveis. No que diz respeito quantificao, Smernik (2005) investigou extensivamente os mtodos disponveis para anlise de MOS, utilizando um espectrmetro de 200 MHz e um outro de 400 MHz, e observou que no h diferena, em termos de resoluo, entre os dois. Isto ocorre, pois apesar de um campo mais potente fornecer um sinal mais intenso, ele exige maiores velocidades de rotao da amostra o que, por sua vez, acarreta uma diminuio da intensidade do sinal. Mais
176

ainda, a quantificao por ambos (200 MHz CP-MAS a 5 kHz e 400 MHz CP-MAS a 10 kHz) fornece praticamente os mesmos resultados. Smernik observou ainda que a intensidade dos sinais em espectros obtidos com Bloch decay (BD) ou polarizao direta no foi afetada pelo aumento na velocidade de rotao da amostra, confirmando-a assim como uma tcnica mais robusta do que CP. Canellas et al. (2001a) estudaram, atravs de RMN de 13C em soluo, as modificaes advindas da adio de resduos de origem urbana (lodo de estao de tratamento de esgoto e composto de lixo) e concluram que h uma diminuio de carbono alqulico e um aumento de carbono de polissacardeos (Figura 7.15). Numa publicao posterior, Canellas et al. (2002a) descreveram o uso de RMN de 13C aliado pirlise seguida de cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas (CG/EM) para avaliar as modificaes sofridas pelos cidos hmicos isolados de outras amostras de solos com adio de resduos urbanos e foi constatado um aumento na quantidade relativa de polissacardeos e aminocidos naquelas amostras tratadas com resduos orgnicos. Este aumento parece ser devido incorporao de microorganismos (Beyer et al. 1996).

Figura 7.15. Espectros de RMN de 13C dos cidos hmicos isolados de Argissolo (A), Argissolo com adio de composto (B) e lodo (C), de Latossolo (D), Latossolo com adio de composto (E) e lodo (F) e de composto de resduos slidos urbanos (G) e lodo de estao de tratamento de esgoto (H).

Em um estudo semelhante, Canellas et al. (2002b) investigaram as caractersticas de cidos hmicos extrados de um Argissolo e de um Latossolo com cultivo de cana-de-acar e eucalipto e a anlise dos grupos funcionais por RMN de 13C em soluo mostrou que a quantificao deste grupos pode servir como um importante indicador da tendncia da humificao, quando foi observado uma diminuio do contedo de C alqulico e um aumento de C aromtico de acordo com a profundidade. Um dos problemas nas anlises por RMN de 13C, especialmente no caso de cidos hmicos isolados de solos de zonas tropicais com predomnio de minerais de argila o considervel teor de Fe, que causa um alargamento dos sinais devido ao seu paramagnetismo, alm de poder alterar o tempo de relaxao, que por sua vez altera a intensidade relativa dos sinais. O problema
177

 ainda mais acentuado pelo fato de que o isolamento dos cidos hmicos envolve a acidificao da amostra de solo, o que causa a degradao dos minerais de Fe, aumentando ainda mais sua concentrao na soluo de cido hmico. Alguns tratamentos prvios da amostra foram descritos e Canellas et al. (2001b) observaram uma melhora considervel na resoluo aps a adio de uma soluo 0,03 M de KCl (Figura 7.16).

Figura 7.16 Espectros de RMN de 13C de cido hmico extrado de resduo orgnico slido de origem urbana sem (a) e com (b) adio de KCl 0,03 M antes da precipitao do cido hmico em meio cido.

Alternativamente, pode ser usada uma soluo de HF 10% (Gonalves et al. 2003) e mais recentemente, Schilling e Cooper (2004) investigaram as diferenas no tratamento de amostras de solos minerais com HF/BF3 2%, ditionito de sdio 4% ou SnCl 2 0,05 M, concluindo que o primeiro tratamento o que d melhores resultados. Dick et al. (2002) investigaram cidos hmicos isolados de carves de diferentes ranks. medida que o rank aumenta, isto , que ele matura, o contedo de C aumenta ao passo que o contedo de O diminui e este comportamento tambm observado nos respectivos cidos hmicos. Atravs de RMN de 13C no estado slido, foi possvel observar que as amostras apresentaram altos teores de C aromtico, e baixos teores de C carboxlico, em contraste com amostras de cidos hmicos extrados de solos. Finalmente, as amostras de baixo rank apresentaram uma abundncia mais elevada de grupos O-alquil-C quando comparada s de alto rank, o que foi justificado por uma possvel preservao de carboidratos nos carves de baixo rank. Prez et al. (2004) utilizaram a RMN de 13C no estado slido para caracterizar cidos hmicos isolados de um Latossolo sob diferentes condies de cultivo e no cultivado, concluindo que os cidos hmicos do solo no cultivado apresentava o menor contedo de C
178

aromtico, corroborando as observaes de Mathieu et al. (1999). O uso de tcnicas bidimensionais, com seu aumento considervel de resoluo, decorrente de um espalhamento maior dos sinais, foi muito bem ilustrado por Mao et al. (2001). A Figura 7.17 mostra uma comparao entre os espectros 1D e 2D HETCOR (numa dimenso -1H e na outra -13C) de um cido hmico isolado de turfa. Alm de ser possvel uma caracterizao mais bem detalhada, os autores utilizaram algumas tcnicas de edio e foram capazes de observar que grupos metila ligados a tomos de carbono (C-CH3) esto prximos tanto de tomos de carbono alifticos quanto de tomos de grupos O-alquil, porm nunca prximos de C aromticos. Os grupos OCH 3 esto conectados diretamente aos anis aromticos, como tpico em lignina. Como resultado, concluram que cerca de 1/3 dos grupos C-O aromticos no so fenlicos. Utilizando este tipo de informao, possvel aperfeioar o modelo estrutural dos cidos hmicos. Outros pesquisadores utilizaram-se da maior resoluo de tcnicas bidimensionais na caracterizao da MOS e alguns outros exemplos so os trabalhos de Cook et al. (2003), Mao et al . (2003b), Simpson et al. (2004), onde podem ser encontradas mais algumas referncias sobre estas tcnicas. Mesmo a utilizao de tcnicas bidimensionais no elimina, como pode ser observado na Figura 7.16, o problema da superposio de sinais num espectro de RMN de MOS. Fazendo-se valer do aumento de resoluo que uma dimenso adicional proporciona, Simpson et al. (2003) foram capazes de obter uma caracterizao com grande detalhe, utilizando RMN tridimensional. A Figura 7.17 mostra os espectros unidimensional de 1H e bidimensional 1H-13C HMQC de um cido flvico isolado do horizonte superficial de um solo de floresta de pinheiros.

Figura 7.17. Espectros de RMN de 13C de cido hmico isolado de turfa: 1D (a) e 2D HETCOR (b) e (c). Adaptado de Mao et al. 2001.
179

Figura 7.17. Espectro de RMN de 1H de cido flvico isolado de solo de floresta de pinheiros (i) e espectro bidimensional 1H-13C HMQC da mesma amostra. Adaptado de Simpson et al. 2003.

Pode-se observar, mesmo no espectro bidimensional, uma considervel superposio de sinais. A Figura 7.18 mostra todo o cubo de um experimento 3D de HMQC-TOCSY em que o eixo x tem as freqncias de 13C (F1) e os eixos y e z contm as freqncias de 1H (F2 e F3).

Figura 7.18. Espectro 3D HMQC-TOCSY de cido flvico isolado de solo de floresta de pinheiros. Adaptado de Simpson et al. 2003.
180

A informao de TOCSY (correlao entre os tomos de hidrognio que acoplam entre si ao longo de uma cadeia alqulica) est contida no plano y-z (F2-F3) e os dados de HMQC (correlao entre 1H e 13C conectados entre si) esto contidos no plano x-y (F1-F3). O plano x-z (F1-F2) contm informao tanto de HMQC quanto de TOCSY. Fazendo cortes no cubo, criam-se espectros 2D que contm informaes importantes sobre acoplamentos e deslocamentos qumicos. Especialmente interessantes so os cortes atravs do plano F1-F2. Assim, para criar um corte, escolhe-se um ponto qualquer no eixo F3 (1H). A Figura 7.19 mostra um corte F1-F2 atravs do maior sinal de 1H, que resulta de unidades CH2 de cadeias alqulicas longas (Simpson et al. 2001) e est em 1.3 ppm.

Figura 7.19. Espectro 2D produzido por um corte F1-F2 atravs do espectro 3D HMQC-TOCSY em 1.3 ppm do eixo F3 (1H) da Figura 17. As letras nas manchas correspondem s estruturas C-H das cadeias alifticas i-iii. Adaptado de Simpson et al. 2003.

O corte F1-F2 resultante produz um espectro bidimensional em que as manchas descrevem os deslocamentos dos tomos de 1H e 13C das unidades CH2 e de todas as outras unidades com as quais elas acoplam. Assim, a interpretao fica muito mais fcil, pois o corte possui somente informaes de estruturas que contm uma cadeia alqulica longa, havendo uma superposio espectral muito menor do que no espectro 2D HMQC padro (comparar com a Figura 7.17ii). A MOS tem sido caracterizada, atravs dos anos, como uma estrutura de alto peso molecular com ligaes cruzadas de macromolculas. No entanto, atravs da tcnica de DOSY, Simpson (2002) foi capaz de demonstrar que, pelo menos para as amostras estudadas, as substncias hmicas so, na realidade, associaes ou agregados de molculas de menores pesos moleculares que podem ser rompidos pela adio de cido. A Figura 7.20 mostra os espectros de DOSY, em duas concentraes diferentes, de um cido hmico isolado de turfa.
181

Figura 7.20. Espectros de DOSY de cido hmico isolado de turfa em concentrao de 5mg/ml (A) e 133 mg/ ml (B) e aps adio de 5ml de cido actico (C e D). Adaptado de Simpson 2002.

Em ambas as concentraes de cido hmico, os componentes da mistura exibem coeficientes de difuso semelhantes, indicando que existem associaes entre os vrios componentes. Entretanto, a adio de cido actico, que promove a desagregao de materiais hmicos (Piccolo 2002), resulta na formao de bandas discretas de difuso que esto correlacionadas com deslocamentos qumicos consistentes as espcies mais abundantes nestas misturas, ou seja, lignina, polissacardeos e peptdeos (ver tambm Piccolo et al. 2003). Aps a desagregao com cido actico, os coeficientes de difuso mdios para cada uma das espcies podem ser calculados (Figura 7.20D). Finalmente, os tamanhos moleculares podem ser extrapolados a partir da comparao destes coeficientes com padres e os resultados estimam pesos moleculares na regio de 200-600, 2000-2500 e ~1000 Da, respectivamente. Este resultado muito significante, pois a degradao de material vegetal, especialmente em ambientes de floresta, resulta na formao de cidos orgnicos. Estes cidos podem, por sua vez, auxiliar a dissociao de material hmico que pode ento ser levado aos horizontes inferiores, no se acumulando nos horizontes superficiais, como ocorre em campos cultivados ou reas de pastagem. A RMN de 31P foi usada pela primeira vez num extrato de solo por Newman & Tate (1980) e desde ento tem auxiliado enormemente no conhecimento sobre os compostos orgnicos de
182

fsforo na MOS. Canellas et al. (2004) investigaram a MOS extrada de um Argissolo (duas profundidades diferentes) cultivado com leguminosas herbceas perenes (kudzu, Pueraria phaseoloides e siratro, Macroptilium atropurpureum) . Em reas adjacentes ao experimento foram coletadas amostras do mesmo solo sob cobertura de floresta tropical secundria (capoeira) e capim-colonio ( Panicum maximum). A Figura 7.21 mostra os espectros de RMN de 31P obtidos a partir destas amostras (por restries de espao, somente os espectros das amostras referentes s leguminosas so mostrados). Atravs da identificao (Cade-Menun e Preston 1996) e quantificao dos diferentes compostos orgnicos de fsforo foi possvel observar que os fosfatos em ligaes monosteres so predominantes em todas as amostras de solo e os fosfatos em ligaes disteres so acumulados na camada superficial do solo sob floresta secundria. Mais ainda, foi possvel observar um aumento considervel na razo Pdister /Pmonoster com a permanncia dos resduos das leguminosas no solo. Este fato importante, pois representa um aumento de compostos fosforados mais lbeis, o que, por sua vez, est de acordo com observaes prvias (Alvey et al. 2001, Daroub et al. 2001 e Phiri et al. 2001) de que a disponibilidade de P aumenta com a rotao no solo com leguminosas.

Figura 7.21. Espectros de RMN de 31P de extratos alcalinos de Argissolo (0-5 e 5-10 cm) cultivado com kudzu (Pueraria phaseoloides) e siratro (Macroptilium atropurpureum). A: sem remoo da parte area da leguminosa do solo; B: com remoo da parte area da leguminosa do solo.
183

A anlise de 31P pode ser dificultada pelo fato de que durante o processo de extrao da MOS, ons paramagnticos como Fe e Mn, que esto comumente associados aos compostos de P, tambm so extrados. Estes ons causam alargamento dos sinais gerando incertezas tanto nos seus assinalamentos quanto em suas integraes. A fim de minimizar estes efeitos, o uso de alguns agentes quelantes tais como Chelex (Ray et al. 1990) ou Chelex em conjunto com gua ou hidrxido de sdio (Cade-Menun e Preston 1996 e Cade-Menun et al. 2002). Apesar de forncer bons resultados, estes procedimentos so caros e demorados, alm do fato de que h a possibilidade de polifosfatos serem removidos da soluo. McDowell e Stewart (2005) desenvolveram um mtodo que envolve o uso de Ca-EDTA/ditionito de sdio, que libera o P ligado a Fe sob condies brandas (pH 7,5) sem remover o P orgnico. Utilizando este tratamento, os pesquisadores obtiveram maior definio quanto ao nmero e distribuio dos sinais. Recentemente, Cade-Menun (2005a e 2005b) elaborou duas excelentes revises sobre o emprego de RMN de 31P aplicada MOS. Os estudos de MOS atravs de RMN de 15N so mais raros devido baixa abundncia natural deste elemento. Assim, geralmente envolvem a dinmica do nitrognio no solo atravs do enriquecimento com 15N. Como exemplo, pode ser citado o trabalho de Tinoco et al. (2004) em que foram avaliadas as diferentes formas de C e N nas fraes hmicas de um solo mineral de aluvio. Um composto foi preparado a partir de resduo de lixo urbano, palha de trigo e K15NO3. Aps 80 dias de incubao, o composto foi adicionado ao solo e aps mais 80 dias de incubao, foi feita a anlise das diversas fraes do solo. A espectrometria de RMN de 15N revelou, para todas as fraes um sinal intenso em 70 ppm, assinalado a estruturas amdicas. Os espectros mostraram ainda um sinal em 370 ppm, que corresponde ao conjunto mineral solvel disponvel, o que sugere que a maior parte do 15N adicionado foi transformado em metablitos microbiais que contm nitrognio. Os espectros, tanto do composto quanto das fraes de solo, no mostraram evidncias de produo de novas formas de N (heterociclos, por exemplo) durante a transformao no solo. Estes resultados esto de acordo com os estudos de outros autores (Almendros et al. 1991 e Schulten et al. 1998) e indicam uma estabilizao eficiente de estruturas que contm aminocidos nas substncias hmicas.

184

c a p t u l o
Pirlise acoplada cromatografia gasosaespectrometria de massas
Luciano P. Canellas

O uso da pirlise acoplada cromatografia gasosa - espectrometria de massas uma tcnica poderosa na identificao das unidades estruturais das substncias hmicas. A identificao de compostos por espectrometria de massas baseada nos mecanismos qumicos de fragmentao de uma substncia orgnica. As rotas de fragmentao so caractersticas dos grupamentos funcionais das molculas, e os fragmentos produzidos com a ionizao do composto servem de pista para a identificao das unidades formadoras dos agregados hmicos. Devido pouca volatilidade do material hmico e ao intrincado problema do que seja o seu tamanho molecular, a espectrometria de massas geralmente usada com a fragmentao prvia das substncias hmicas, conseguida com o uso da pirlise, ou seja, a transferncia rpida de calor na ausncia de oxignio. Os fragmentos obtidos com a agitao trmica so separados por meio da cromatografia gasosa e analisados pela relao entre a sua massa e a sua carga (m/z). Os caminhos da fragmentao so bastante duros e enfrentados com dificuldade at para um qumico experiente, o que no o caso dos agrnomos e estudantes de agronomia, que, hoje em dia, raramente tm contato com a mecnica de reaes orgnicas durante o curso. recomendada a leitura do livro Introducin a la espectrometria de masa de sustancias orgnicas dos Profs. Otto R. Gotllieb, Raimundo Braz-Filho, Afrnio A. Cordeiro e Jos Wilson de Alencar. Trata-se de um trabalho com vrios exemplos sobre a fragmentao dos mais diferentes compostos orgnicos. Para salvao da lavoura, hoje os equipamentos contam, na maioria dos casos, com um arsenal de espectros de massas guardados nas livrarias eletrnicas, fornecidas pelos fabricantes dos equipamentos e dos programas computacionais. A busca nas colees eletrnicas por similaridade com o espectro obtido facilita muito a vida do pesquisador menos relacionado com a qumica orgnica avanada. Alm das dificuldades tericas inerentes espectrometria de massas, cabe ressaltar o elevado custo dos equipamentos envolvidos na tcnica (dependendo do modo de ionizao da amostra) podem superar em muito o preo dos equipamentos de RMN. No obstante, os resultados obtidos com a EM aliados aos fornecidos pela RMN tm colocado o problema da determinao estrutural das substncias hmicas numa esfera muito alm da imaginada antes do advento das espectroscopias. Introduo A pirlise analtica no tcnica ideal para a investigao da estrutura dos materiais macromoleculares complexos, tais como, as susbtncias hmicas, porm a melhor tcnica
185

para revelar a origem das unidades estruturais (Saiz-Jimenez, 1994). A pirlise caracterizada pela degradao trmica de materiais em atmosfera inerte, diferente da combusto, na qual a matria queimada na presena do oxignio atmosfrico. Na tcnica de pirlise, quando uma macromolcula absorve energia trmica por meio da transferncia rpida de calor, ocorre a distribuio da energia ao longo da molcula promovendo a vibrao do eixo das ligaes. A relaxao dessa vibrao acontece com a quebra, homoltica ou heteroltica, das ligaes mais fracas. Os fragmentos so removidos rapidamente, separados com o uso da cromatografia gasosa e depois identificados pela espectrometria de massas. De acordo com Bracdweel et al. (1989), a pirlise pode ser realizada dentro do forno ou em pirolisadores especficos. Na pirlise com o uso de forno, a amostra de substncias hmicas colocada rapidamente com ajuda de um dispositivo mecnico numa zona quente mantida na temperatura de pirlise. Neste mtodo, preciso um volume grande de amostra e a taxa de transferncia de energia trmica pequena. O volume de fragmentos produzidos tambm pequeno, o que, nesse caso, apresenta uma vantagem na deteco direta por espectrometria de massas. J nos filamentos pirolisadores, so usadas outras fontes de energia trmica. Existem dois tipos de filamentos utilizados em pirlise. O primeiro trata-se do filamento aquecido por uma corrente de calor (resistncia) temperatura de pirlise. A taxa de aquecimento varivel e a amostra colocada numa cubeta de quartzo prximo ao filamento e a temperatura aumentada na ordem de 600 ms. O outro mtodo disponvel o uso de pirolisador com filamento ferromagntico, que aquecido por induo de calor por meio de uma bobina de radiofrequncia em taxas que variam de 5 a 150 ms. A temperatura final determinada pelo Curie Point do material, acima do qual, a energia magntica no efetivamente absorvida. A escolha do tipo de metal que compe o filamento (Fe, Co ou Ni) determina a temperatura de pirlise. Existem, ainda, pirolisadores a laser, com os quais a amostra alcana a temperatura de pirlise em tempos muito baixos (na ordem de 1 ms). Porm, o plasma produzido pelo laser pode dar lugar a uma srie muito complicada de composio fotoltica, originando fragmentos muito pequenos. A pirlise por Curie Point normalmente a mais utilizada pois apresenta algumas vantagens, tais como, alta sensibilidade, boa reprodutibilidade e facilidade de automao. A composio dos produtos da pirlise depende diretamente da temperatura de pirlise. A faixa de temperatura utilizada para as substncias hmicas est na ordem de 500 a 700 oC, quando se obtm energia suficiente para aumentar a vibrao de uma estrutura orgnica com ligaes co-valentes e provocar sua volatilizao e fragmentao. Para as substncias hmicas de origem tropical, Marbot (1999) encontrou uma temperatura tima de 400 oC, sugerindo que o teste de temperatura de pirlise deve ser feito antes do processamento das amostras. O principal problema envolvido no desenvolvimento de pirolisadores est relacionado retirada dos fragmentos imediatamente aps a quebra das ligaes, com o objetivo de se evitarem as reaes secundrias e a formao de outros produtos, gerando artefatos e dificultando a identificao da origem das unidades estruturais. A acelerao dos fragmentos conseguida com uma diferena de potencial aplicada e, ainda, com o uso de alto vcuo. A amostra slida colocada no filamento aquecido sofre vaporizao e ionizada, ou seja, h a formao e emisso de ons. A razo do nmero de fragmentos ionizados formados (n+) e
186

o nmero de fragmentos neutros (n0) depende da temperatura, da natureza do suporte da amostra e de sua matriz. A eficincia da ionizao dada pela equao: n+/n0= Aexp
[(W-I)/kT]

onde W uma funo de trabalho (energia necessria para remover um eltron da superfcie) do suporte do material; I a energia da primeira ionizao da amostra; k a constante de Boltzmann; e T a temperatura absoluta do suporte. W e I so expressos em eV. A eficincia da ionizao maior se W for grande e I, pequeno. O principal incoveniente da anlise de pirlise que o espectro obtido corresponde a uma mistura bastante complicada de produtos da amostra, o que torna extraordinariamente complexa, e, muitas vezes, impossvel a identificao de boa parte dos fragmentos produzidos. Aps a quebra das macromolculas pela pirlise, a anlise dos fragmentos pode ser realizada diretamente por espectrometria de massas (EM) (Tcnica de injeo direta e ionizao suave dos fragmentos da pirlise desenvolvida por Schulten et al. 1973) ou com a ajuda da separao cromatogrfica dos produtos da pirlise. Vrias empresas oferecem o conjunto cromatgrafo a gs (CG) acoplado pela interface com o pirolisador e com deteco dos fragmentos por EM. Geralmente, so utilizadas colunas de slica fundida e temperaturas elevadas no forno do cromatgrafo. A separao dos produtos da pirlise com a CG baseada no fato de que a velocidade de arraste do fragmento pelo gs uma funo de seu peso molecular (lei da difuso de Graham ). Com isso, espcies de menor peso molecular so removidas primeiro com a passagem do gs. Com a separao dos fragmentos, os picos de separao revelados pelo cromatograma so identificados pela EM. Com o uso de uma fonte ionizante (o mais comum um feixe eletrnico de energia), os produtos da pirlise, separados no tempo pela cromatografia gasosa, so fragmentados em diferentes ons com uma relao massa:carga (m/z) especfica. O evento mais simples que pode ocorrer a retirada de um eltron do fragmento pelo feixe eletrnico e a formao de um radical positivo (m.+) (o ponto simples indica a presena de um eltron desemparelhado). Este fragmento decomposto em fragmentos inicos menores (ons m/z). Os fragmentos so detectados por um analisador de massas. Nos espectrmetros de massas mais recentes, o analizador composto por quatro eletrodos metlicos, dispostos perpendicularmente entre si e conectados diagonalmente. Cada par de eletrodo recebe uma combinao de voltagem de radiofreqncia (rf) e uma corrente contnua (cc) de amplitude crescente. Um par recebe rf a uma voltagem e cc + e outro recebe a rf com diferena de fase de 180o e cc -. Aplicando-se relaes adequadas de rf/cc, possvel fazer atravessar pelo analisador somente ons com uma relao massa carga especfica. Depois de analisados, os fragmentos so registrados e o espectro de massas gravado (Constantin & Schnell, 1990). A ionizao pelo impacto de eltrons promove, via de regra, uma fragmentao muito grande dos produtos da pirlise impedindo, na maior parte das vezes, a obteno do on molecular e, com isso, no permitindo a identificao dos fragmentos. Por essa razo, h uma corrida tecnolgica pelo desenvolvimento de mtodos suaves de ionizao, tais como, dessoro de campo, ionizao por campo, ionizao orgnica etc, que encarecem cada vez mais os equipamentos. Uma anlise desses modernos mtodos de ionizao foge do escopo desse captulo. O espectro de massas um grfico contendo as massas dos fragmentos carregados positivamente com as suas concentraes relativas. O pico mais intenso chamado de pico
187

base e tem sua intensidade arbitrada em 100%. H ainda os picos de ons metaestveis, correspondentes aos ons metaestveis formados depois da passagem do fragmento pela cmara de ionizao e, geralmente, com um valor m/z no-integral. possvel, ainda, a existncia de picos secundrios decorrentes da reao entre ons formados e a molcula. A intensidade desses picos dependente da extenso dessas reaes paralelas. A transferncia de um prton para os ons moleculares e a formao do on quase molecular o exemplo mais importante (Gottlieb et al ., 1983) O reconhecimento dos caminhos e mecanismos de fragmentao e dos rearranjos atmicos numa molcula orgnica a base da correlao entre a seqncia de fragmentao e a estrutura das substncias. Uma reviso importante desse assunto encontrada em Gottlieb et al. (1983) e referncia obrigatria para o estudo de fragmentao. A fragmentao de uma molcula iniciada com a sua ionizao. A fonte ionizante mais comum um feixe de eltrons a 70eV (ionizao por impacto de eltrons). Existem outros tipos de ionizao mais suaves, comentados anteriormente, como por exemplo, a dessoro de campo, na qual uma amostra dessorvida de uma superfcie ionizada (formada por microagulhas de Si e C) pela passagem de um campo eltrico forte com diferena de potencial de 5 a 10 KW entre dois eletrodos, ou, pelo bombardeamento da amostra com tomos neutros (tcnica FAB, faster atom bombardment ) ou ainda pela ionizao conhecida como electronspray. Essas fontes de ionizao permitem uma fragmentao menor das amostras e, no caso de molculas orgnicas maiores, detectar o on molecular, ou seja, a massa da molcula inteira menos um eltron. No entanto, tornam os aparelhos de EM excepcionalmente caros. Com a ionizao do fragmento, pode ocorrer uma quebra homoltica ou heteroltica de uma ligao simples do fragmento. Na quebra homoltica, s um eltron move-se independentemente, gerando fragmentos que so um ction (nmero par de eltrons) e um radical livre (com nmero mpar de eltrons).

CH3

CH2

CH3

CH2

R + CH3

Na quebra heteroltica, um par de eltrons se move em direo carga:

CH3

CH2

CH2

Br

CH3

CH2

CH2 + Br

Os produtos tambm so um ction e um radical. A quebra de uma ligao est associada fora dessa ligao, possibilidade de transio e estabilidade dos fragmentos formados. Nas Tabelas 8.1 e 8.2 (extradas de Golttlieb et al., 1983), encontram-se os principais fragmentos com significado estrutural num composto orgnico.
188

Tabela 8.1. Possveis significados estruturais das massas de fragmentos (Gottlieb et al., 1983)
Massa 1 2 3 4 14 15 16 17 18 19 20 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 Significado estrutural 1H 2H 3H 4H CH2 CH3 CH4, O OH H2 O F HF C2H2 C2H3, HCN C2H4, CO, N2 C2H5, CHO C2H6, CH2O, NO., H2NCH2. CH3O CH3OH FCH2 H2 S Cl. HCl Massa 39 40 41 42 43 44 45 46 47 49 57 58 59 60 61 69 70 71 72 79 85 127 Significado estrutural CH3H3 CH3H4 CH3H5 C3H6, CH2CO C3H7., CH3CO., HNCO C3H8, CO2, C2H4NH2+, CONH2., CH3CHO CH2H5O, COOH NO2. FC2H4., CH3S ClCH2. C2HSCO., C4H9. C3H8N. CH, CH3COO. (CH)2COH CH3CO2H, O2NCH2. C5H9., C3H5CO C5H10 C5H11., CH3CO2CH2+ C2O3 Br C6H13., C4H9CO., C3H5CO2. I

Os principais produtos obtidos com a pirlise de cidos hmicos e flvicos foram compilados por Marbot (1999) como: fenis; derivados de carboidratos (furanos); cidos graxos e seus steres; hidrocarbonetos aromticos (alquilbenzeno, naftaleno, antraceno); hidrocarbonetos saturados e insaturados, lineares ou ramificados, cclicos e acclicos, bem como os compostos nitrogenados e sulfurados. De acordo com a reviso feita por Saiz-Jimenez (1994), a pirlise acoplada cromatografia gasosa/espectrometria de massas (P-CG/EM) foi utilizada pela primeira vez por Simmonds et al. (1969), em amostras do deserto da Califrmia, com a perspectiva de utilizao da tcnica numa misso exploratria em Marte. Foi constatada a possibilidade de utilizao da tcnica para estudos da matria orgnica do solo, em aspectos relacionados com a geoqumica, determinao estrutural e ecologia da humificao (Schulten, 1993) Na Tabela 8.3, encontram-se os principais produtos obtidos da pirlise de extratos orgnicos de cidos hmicos, flvicos e do horizonte Ap de um Haplaquooll e, na Figura 8.1, encontram-se as principais estruturas encontradas (Schulten & Schnitzer, 1992; 1993). As principais unidades estruturais dos cidos hmicos determinadas por P-CG/EM foram constitudas por grupamentos alquil e aril. Na anlise dos grupamentos alquil obtidos do extrato hexnico de cidos hmicos, Schnitzer & Schulten (1989) observaram a presena na srie de nalcanos com razo massa: carga (m/z) de 240 (C17), 576 (C41), 842 (C60) e 884 (C63). O componente mais abundante foi m/z 368 (C24). Na srie homloga de n-cidos graxos foi sugerida a presena de m/z 256 (C16), 312 (C20), 326 (C21), 340 (C22), 368 (C24), 396 (C26), 410 (C29), 424 (C29), 452
189

(C31) e 480 (C33) e seus respectivos steres monomricos, com ons moleculares de m/z entre 676 a 704. Estudando a composio qumica de trs tipos de hmus florestais (do tipo mull, moder, mor), Hempfling & Schulten (1990) observaram que a qualidade da fonte de matria orgnica influenciam as condies qumicas do hmus formado. Foram encontrados polissacardeos, ligninas, protenas, lipdios, polifenis e polmeros alifticos. No hmus do tipo mor, formado principalmente por resduos de gimnospermas, o comportamento trmico foi diferenciado, observando-se uma faixa de temperatura maior de evaporao e degradao trmica, revelando maior heterogeneidade nos tipos de ligaes e, possivelmente, maior interao fsica da matria orgnica com as partculas minerais. Ainda conforme estes autores, os produtos da pirlise de baixo peso molecular foram semelhantes para todos tipos de hmus estudados, sendo que, no mor, subunidades de sirilgil foram mais abundantes.
Tabela 8.2. Possveis significados estruturais dos picos (m/z) dos espectros de massas de compostos orgnicos (Gottlieb et al., 1983)
m/z(1) 30 + 14 (n-1) 31 + 14 (n-1) 45 + 14 (n-1) 47 + 14 (n-1) 61 + 14 (n-1) 29 43 + 14 (n-1) 44 45 74 60 59 41 + 14 (n-1) 15 +14 (n-1) 28 + 14 (n-2) 41 + 14 (n-3) 26, 39 50, 51 52, 65 76, 77 26, 39 65, 91 105 149
(1) n= 1, 2, 3 etc. 190

Estrutura compostos alifticos CnH2n=NH2+ CnH2n=OH+ CnH2n=OCvH2v-1 CnH2n=SH+ CnH2n=S CvH2v-1 HCO CnH2n+1CO+ H2N-CO+ HO-CO+ CH2=C(OMe)++OH CH2=C(OH)+.OH CH2=C(NH2)+. CnH2n+1CN+. CnH2n+1 CnH2n(n>2) CnH2n-1(n>3) compostos aromticos C2H2++; C3H3 C4H2++; C4H3+ C4H4++; C5H5+ C6H4+.; C6H5+ C2H2+.; C3H3+ C5H5+; C7H7+ C6H5CO+ C6H4(CO)2OH+

origem amina lcool/ter ter tiol/tioter tioter aldedo cetona amida cido ster metlico cido amida nitrila alcanos alcenos alcenos benzeno

derivado do benzil derivado do benzoil derivado do oftaloil

Tabela 8.4. Principais produtos da pirlise de extratos orgnicos de cidos hmicos, flvicos e do horizonte Ap de um Haplaquooll. (Adaptao de Schnitzer & Schulten, 1995)
Componentes n alcanos n-alcenos n-cidos graxos n-lcoois Diis Esteris n-alquil-monosteres n-alquil-disteres n-alquil-tristeres cidos diicos cidos hmicos C17-C101 C22-C51 C15-C33 Nd C16,C24, C31, C32 C28-C29 C40-C68 C65-C66 C75-C93 Nd cidos flvicos C20-C74 Nd C16-C34 Nd C24 C27-C29 C44-C68 C56-C66 Nd Nd Solo C17-C34 C8 C14-C30 C29 nd nd C38-C52 nd nd C18, C26

CH3

(CH2)n

CH3

Alcanos

CH2

CH

(CH2)n H

CH3

Olefinas

(CH2)n

CH3

Alquilbenzenos

N R2

pirris metil substitudos

(CH2)n CH3 R2

CH3

metil-alquil-benzenos

N R CH3

piridinas metil substitudas

benzenos metil substitudos indenos metil substitudos CH3 CH3

OH fenis metil substitudos

OH OCH3 metxi fenis metil substitudos R2 R5

O R2 furanos metil susbtitudos

Figura 8.1. Principais unidades estruturais de AH observadas por pirlise acoplada a cromatografia gasosa e espectrometria de massas (Schulten & Schnitzer, 1992).
191

A tcnica termodegradativa tem-se constitudo uma ferramenta importante na avaliao de contaminao das terras agrcolas por poluentes e na avaliao das mudanas qualitativas da matria orgnica do solo, submetida a diferentes tipos de manejo. Leeuw et al. (1986) detectaram a presena de hidrocarbonetos policclicos aromticos, compostos com enxofre e poliestirenos em solos da Holanda. Canellas et al. (2000) estudaram a composio das unidades estruturais de cidos hmicos isolados de matria orgnica de origem urbana (composto de lixo domicliar urbano e lodo da estao de tratamento de esgoto) por meio da P-CG/EM. Os cromatogramas dos produtos da pirlise (Figura 8.2) foram bastante diferentes, dependentes da fonte de matria orgnica de onde os cidos hmicos foram isolados. A lista dos produtos da pirlise identificados com a espectrometria de massas se encontra na Tabela 8.4.

Figura 8.2. Cromatograma dos produtos da pirlise de cidos hmicos extrados do composto de resduos slidos (A) e de cidos hmicos extrados do lodo da estao de tratamento de esgotos (B).

Na regio de C alqulicos foram identificados compostos com longas cadeias alqulicas (m/z 270 e 185), principalmente de 2-metil hexadecano (m/z 192). Os compostos com fragmentos de razo massa:carga maior foram predominantes nos cidos hmicos isolados do lodo de esgoto (m/z 541, 549, 555, 556, 559, 563, 578 e 590) e correspondem ao padro de fragmentao de mono e diaril steres com cadeia alqulica longa. Resultados semelhantes foram encontrados por Leinweber et al. (1996), em solos com adio recente de lodos da estao de tratamento de esgotos, ou seja, a presena de cidos graxos em maior quantidade nos cidos hmicos.
192

Nos cidos hmicos isolados do composto de lixo urbano, foi mais intensa a presena dos cidos octadecanico (m/z 284), heptadecanico (m/z 282) e palmtico (m/z 256), enquanto, nos cidos hmicos isolados do lodo de esgoto, predominaram os cidos hexanico (m/z 120) e limoneno (m/ z 136), ou seja, cidos graxos de cadeia mais curta. A presena de cidos graxos volteis segundo Keeling et al. (1994), pode ser indicativo de algum grau de anaerobiose nos estgios iniciais da compostagem dos resduos. De acordo com Khan & Schnitzer (1972) a tendncia, com a maturao dos AH, o desaparecimento dos cidos graxos e a permanncia de alcanos na regio de C alqulicos.
Tabela 8. 4. Anlise por pirlise cromatografia gasosa/espectrometria de massas (P-CG/EM) de cidos hmicos extrados do composto de resduo urbano (AH-CRSU) e de lodo da estao de tratamento de esgoto (AH-LETE). Adaptado de Canellas et al., 1999a)
pico 2 1 13 3 5 27 10 8 7 18 19 4 9 6 12 23 16 24 25 26 22 35 28 14 15 33 21 20 31 30 32 38 29 45 41 39 37 42 TR 5,35 4,89 11,21 5,87 7,3 15,91 9,62 8,8 8,13 12,37 12,57 6,89 9,23 7,84 10,98 13,93 11,72 14,4 14,53 15,22 13,55 20,49 16,02 11,42 11,52 19,13 13,32 13,06 18,56 18,38 19 21,75 17,51 24,5 22,75 22,29 21,23 23,27 ** * * * * * * * *** *** ** * ** *** ** ** * * ** ***** ** * ***** ** ** * ** * ** AH LETE *** ** * * * **** * * AH CRSU ** ** * ** * **** * * * * * *** * * * * * * *** ** * ** ** * * ***** ** * ***** ** * ***** ** ** ** ***** * possvel atribuio Metilbenzeno monmeros de ligninas Dimetilpirrol derivado do imidazol 2,5-Furandiona lcool furfurlico Heptanol Estireno Xileno pirrol 2-carboxialdedo dimetil piridina Furfural Metilfenol no identificado Diidroxibenzeno 1,2-propadienil benzeno propenil 2-benzeno cido hexanico metil furfural 4-metoxi fenol (guaiacol) no identificado cido heptanico Escatol tetraidroquinolina 2-metilbenzoxazol hidroxiacetofenona Limoneno derivado do naftaleno cresol (metil guaiacol) 1,4-dimetoxibenzeno 3,5-diidroxi-2-metilpiranona Diidrohexose no identificado dimetilisopropilbenzeno 1-(2-hidroxi-5-metilfenil)-etanona 5-metil- 2-(1-metiletil)fenol 4-etil- 2-metoxifenol 2,6-dimetxi fenol m/z (observados acima de 50% de intensidade do espectro) 92, 91, 77 94, 67, 41, 39, 28 95, 60, 39, 27 97, 84, 54, 26 98, 54, 26 98, 68, 53, 39 98, 68, 40, 27 104, 78, 77, 51 106, 91, 77, 65 95, 94, 66, 39, 28 107, 77, 67, 27 98, 96, 67, 39 108, 107, 93,80, 54 93, 66, 39 110, 109, 51, 27 116, 115 42, 27 118, 117, 78, 65 116, 105, 73, 60 120, 107, 90, 77 124, 109, 95, 81 127, 113, 110, 97,, 67, 58, 41, 29 130, 115, 73, 60 132, 99, 56, 28, 133, 94, 66, 39 133, 97, 54, 26 120, 91, 51, 27 136, 93, 65, 68, 43 142, 138, 57, 41 138, 122, 94, 95, 77,55 138, 123, 95, 77 126, 98, 97, 109, 98, 69,41, 29 144, 98, 69, 29 148, 122, 115, 107, 91, 85, 73, 60 148, 105, 57, 43 150, 135, 107, 77 150, 135, 107, 77 152, 137, 122, 91 154, 139, 111, 65

193

Tabela 8. 4. Cont. pico 44 46 40 47 34 43 57 55 48 50 52 49 53 36 56 59 63 62 64 65 66 67 61 70 17 60 68 69 71 54 72 51 58 73 84 75 81 79 80 83 86 76 11 78 77 85 82 74 TR 23,88 26,15 22,39 27,3 19,46 23,34 34,5 32,93 28,3 29,1 32,01 28,74 32,19 20,72 33,55 35,17 37,61 37,18 38,13 39,29 39,49 40,01 36,25 43,18 11,93 35,79 41,71 42,07 44,44 32,67 49,03 40,01 34,99 6,13 16,76 25,93 18,25 21,42 40,65 14,17 36,76 46,25 10,13 16,77 14,3 33,04 24,49 7,03 ** ** * * * * ** *** ** ** ** ** * * * ** ** ** ** ** ** ** ** ** ** ** ** * ** * * * ** * * AH LETE * * ***** ** * * * * * * * **** * * ***** ** *** ***** ***** * * * *** * * * * *** * * ** ** *** ***** ***** * * * ** AH CRSU * *** * * * * possvel atribuio dimetil naftaleno eugenol (alil guaiacol) cido 1, 2 dicarboxlico benzeno Acetovanilona ftalato de dioctila cido decanico aldedo coniferlico n-olefinas lcool coniferlico acetato de guaiacila n-olefinas n-alcano 2-metilhexadecano metoxipirocatecol cido tetradecanico metil dodecil benzeno cido hexadecanico cido hexadecanico ramificado cido palmtico n-alcanos n-alcanos n-alcanos ftalato de neo-butila no identificado n-alcanos n-alcanos heptadeceno(8)-1-cido carbnico cido octadecanico alquil monosteres e srie homloga/ insaturado derivados da-Galactose cidos graxos (C22) n-cidos graxos (C23) Tocoferol alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alcenos (C39) alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alcenos (C40) alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga alquil monosteres e srie homloga m/z (observados acima de 50% de intensidade do espectro) 160, 73, 60, 29 164, 149,121, 77 166, 148, 104, 76 166, 99, 71, 57, 43 390, 278, 83, 76 172, 155, 73, 60 178, 150, 71, 57 194, 179, 57, 41 180, 137, 94, 77 180, 165, 137, 91, 65 182, 181, 55, 41 74, 60, 41, 29 240, 192, 99, 43 140, 125, 97, 51 228, 73, 60, 43 242, 73, 55, 41, 29 254, 236, 55, 41 256, 73, 60, 43, 29 256, 129, 60, 43, 29 268, 241, 57, 43, 29 268, 241, 57, 41, 29 270, 256, 43, 57, 43 224,223,149, 122, 41 280, 256, 236, 67, 55, 29 282, 281, 84, 55, 29 282, 281, 83, 73, 43, 29 282, 264, 83, 69, 55, 29 284, 241, 83, 73, 43, 29 316, 281, 257, 225, 208, 180, 166, 152, 124, 96, 70, 41, 28 327, 135, 136, 73, 60 346, 331, 283, 71, 57, 43 356, 281, 221, 84, 73, 28 430, 242, 73, 43 514, 473, 119, 87, 43 542, 504, 452, 90, 51 546, 510, 368, 168, 550, 544, 109, 69, 29 552, 527, 69, 41 554, 508, 105, 71, 57 555, 508, 112, 85, 28 556, 481, 110, 97, 41 560, 474, 69, 41 564, 550, 68, 39 578, 180, 117, 92, 41 582, 498, 104, 85, 28 590,511,469,439,387,355,318,265,203,186,130,93,38 592, 506, 130, 74, 18 598, 551, 108, 80, 41

* intensidade no cromatograma entre 5-10%, **10-20%, ***20-30%, ****30-50%, *****acima de 50% 194

Por meio dos fragmentos e suas respectivas intensidades relativas, o reconhecimento por similaridade, na biblioteca Nist, permitiu observar nos cidos hmicos isolados da matria orgnica de origem urbana, a presena de ftalato de dioctila e ftalato de neobutila (sinal do picograma mais intenso nos cidos hmicos obtidos do composto de lixo). Foi descartada a hiptese de contaminao na manipulao das amostras uma vez que todos os frascos e equipamentos eram de vidro ou metal. A presena de ftalatos em resduos de origem urbana foi observada por Ziogou et al. (1986). Apesar de alguns microrganismos e plantas sintetizarem ftalatos, a principal fonte a produo industrial de plsticos. Analisando a decomposio de ftalatos nos solos Inman et al. (1984), por meio da incubao de cido ftlico, monobutilftalato e dibutilftalato marcados com 14C, observaram que a maior parte dos compostos degradada at 14 CO2 como resultado da atividade microbiana que realiza a hidrlise do ster butlico e quebra do anel aromtico. O grupo carboxila liberado como CO2 durante a quebra do anel ou depois de metabolizado (depois da degradao de succinato ou piruvato). A principal enzima responsvel por essa atividade a esterase que tem seu pleno funcionamento em condies de pH prximas da neutralidade. Uma parte do carbono dos ftalatos pode ser incorporada na biomassa microbiana e tambm retida na matria orgnica estvel do solo. A identificao da incorporao de fragmentos de ftalatos de dioctila na estrutura dos AH estudados, atravs de reaes qumicas ou enzimticas, corrobora esta hiptese e, se usada com cuidado, pode indicar o grau de contaminao da atividade humana no solo. Na regio de carbonos aromticos, foram identificados em maior quantidade, nos cidos hmicos isolados do lodo da estao de tratamento de esgoto, os compostos derivados do naftaleno (dimetil naftaleno, m/z 160), derivados do benzeno (metildodecilbenzeno, m/z 242) e dimetilisopropilbenzeno (m/z 148). Os compostos derivados do benzeno presentes nos produtos da pirlise dos cidos hmicos do composto de lixo apresentaram fragmentos de menor massa, tais como m-xileno, tolueno (m/z 93), propenilbenzeno (m/z 117), 1,2propadienilbenzeno (m/z 116). Estes compostos foram identificados tambm por Schnitzer & Schulten (1982) como parte dos compostos aromticos de cidos hmicos extrados de solos de clima temperados. Uma srie de compostos derivados da lignina foram identificados a partir da fragmentao dos produtos volteis da pirlise dos cidos hmicos, como os monmeros (m/z 108) e os compostos cresol (m/z 108), acetovanilona (m/z 166), lcool coniferlico (m/z 180), aldedo coniferlico (m/z 178) e tocoferol (m/z 429). Essa anlise sugere que mesmo para matria orgnica de origem urbana a transformao de ligninas um importante mecanismo de formao de substncias hmicas. Como representantes dos compostos oxiaromticos mais intensos nos cidos hmicos do lodo, foram encontrados picos caractersticos de fenis substitudos, principalmente 4-metoxifenol (m/z 124), 2-metoxi, 4 metilfenol (m/z 138), 4-etil-2-metoxifenol (m/z 152). Os AH-CRSU no apresentaram pico de on molecular m/z154 caracterstico de 2,6 dimetoxifenol. Nos carbonos oxigenados foi observada uma srie de furanos (m/z 107) substitudos, caractersticos da degradao de carboidratos, principalmente metilfurano aldedo (m/z 120), 2metanolfurano (m/z 98), 2,5-furanodiona (m/z 98). No AH-LETE, foram encontrados fragmentos constituintes de unidades de galactose (m/z 327) que no se encontrame presentes nos AH-CRSU. A presena de compostos derivados das ligninas, de fenis e de furanos na estrutura dos cidos hmicos mostra que as vias de formao das substncias hmicas em solos descritas em Stevenson (1994), so vlidas tambm para a evoluo da matria orgnica de resduos de origem urbana. A alterao de compostos lignificados, as reaes de condensao de polifenis e a neossntese microbiana de compostos so as principais vias de formao dessas substncias hmicas.
195

Os picos obtidos da pirlise de grupos nitrogenados revelaram a predominncia de compostos nitrogenados heterocclicos nas unidades estruturais dos cidos hmicos, principalmente os derivados do imidazol (m/z 97), pirrol (m/z 94), pirris substitudos (2,3 ou 2,4 ou 2,5 dimetilpirrol m/z 95), 1-H- pirrol 2- carboxialdedo (m/z 107), tetraidroquinolina (m/z 133), 2-metilbenzoxazol (C8H7NO, m/z 133) e piridinas substitudas (dimetilpiridina, m/z 107). Apesar de a anlise de RMN 13 C indicar a presena de N-aminocidos, a identificao de N-heterocclico na estrutura dos cidos hmicos, aliada presena de cidos graxos de cadeia alqulica longa e seus respectivos steres, mostra tambm a pouca evoluo desses AH. Estes compostos representam uma reserva importante de nitrognio, quando adicionado ao solo, visto que sua transformao em N-mineral, disponvel s plantas, possvel com a evoluo dos AH. Foram tambm encontrados, na estrutura dos AH da matria orgnica de origem urbana, cidos benzocarboxlicos (cido 1,2-benzodicarboxlico, m/z 166) e pico de maior intensidade nos AH-LETE de bis metil-propil cido 1,2 benzocarboxlico. Ambos os cidos apresentaram funo cetona 1- (2-hidrxi-5-metilfenil) etanona (m/z 150). A presena desses grupamentos pode ser uma evidncia que permite justificar a maior acidez determinada nos cidos hmicos isolados do lodo de esgoto e a maior rea integrada na regio de C 165-180 ppm na espectroscopia de RMN 13C-CP/MAS. Os cidos hmicos extrados do lodo da estao de tratamento de esgotos apresentaram, na composio dos produtos volteis resultante da pirlise, maior quantidade de mono e diaril steres de massa mais elevada. A presena de cidos graxos na estrutura dos AH indica um possvel estgio inicial de evoluo destas substncias. Os nalcanos presentes na estrutura dos cidos hmicos isolados do lodo de esgoto, so de cadeia mais curta dos que os presentes nos cidos hmicos isolados do composto de lixo. Foram incorporados, na estrutura dos AH, fragmentos de ftalatos de dioctila, provavelmente devido contaminao da matria orgnica pelos plsticos existentes na matria prima dos resduos. Os compostos aromticos presentes nos cidos hmicos, isolados do lodo de esgoto, so oriundos, principalmente, de derivados do naftaleno e do benzeno, com substituio por cadeias alifticas maiores do que as dos cidos hmicos isolados do composto de lixo. Os compostos nitrogenados presentes so essencialmente heteroaromticos e os oxigenados so furanos substitudos originados pela degradao de carboidratos. Os compostos oxiaromticos predominantes so os fenis substitudos. A anlise de compostos nitrogenados, presentes nas substncias hmicas, foi realizada por Schulten et al. (1995) por meio da P-CG/EM com detector seletivo para compostos nitrogenados. Mais de 50 produtos contendo N foram identificados, sendo os principais: pirris, imidazis, piridinas, pirimidinas, indis, quino-indis, N derivados de benzenos, alquil nitrilas e aminas alifticas. Canellas et al. (1999) detalharam, a partir do trabalho original de Schulten et al. (1995), com o uso da P-CG-EM, a estrutura dos compostos nitrogenados nos cidos hmicos. Os resultados (Tabela 8.5 e Figura 8.3) indicam que a acumulao de nitrognio nos cidos hmicos se d preferencialmente pela formao de estruturas heterocclicas, o que contribui sobremaneira para a estabilidade estrutural das substncias hmicas. Todos os compostos heterocclicos nitrogenados encontrados nos cidos hmicos so naturais e derivados do metabolismo secundrio de plantas ou sintetizados por microrganismos. O escatol um alcalide derivado do triptofano, responsvel pelo odor caracterstico de esterco. A tetraidroquinolina derivada do cido antranlico pela incorporao de malonil ou acetilcoenzima A, seguida de hidrogenao das ligaes duplas. A dimetilpiridina (no possvel identificar o padro de substituio) produto da condensao do glicerol com cido asprtico, seguido de reao de descarboxilao e alquilao.(Geissman & Crout, 1969).
196

Tabela 8.5. Anlise por pirlise cromatografia gasosa / espectrometria de massas (P-CG/EM) dos compostos heterocclicos nitrogenados, presentes nos cidos hmicos, extrados de composto de resduo urbano (AHCRSU). (1) (2)
TR min m/z atribuio 5,87 11,21 11,42 11,52 12,37 12,57 16,02 97, 84, 54, 26 95, 60, 39, 27 133, 94, 66, 39 133, 97, 54, 26 95, 94, 66, 39, 28 107, 77, 67, 27 133, 99, 56, 28 derivado do imidazol Dimetilpirrol Tetraidroquinolina 2-metilbenzoxazol pirrol 2-carboxialdedo dimetilpiridina Escatol

(1) TR: tempo de reteno do composto obtido pela pirlise dos cidos hmicos na coluna cromatogrfica; (2) m/z: razo massa/carga dos principais fragmentos obtidos com a espectrometria de massa
CH3 N (7) O N R CH3 CH3 CH3 N - Heterocclico N (6) (4) (5) N CH3 N H CH3 (3) N (2) (1) H N

N H O

Figura 8.3. Principais estruturas dos compostos heterocclicos nitrogenados encontrados em cidos hmicos extrados de composto de resduo slido urbano. (1)- escatol; (2)- derivados do imidazol; (3)- dimetilpirrol; (4)- tetraidroquinolina; (5)- pirrol 2-carboxialdedo; (6)-dimetilpiridina; (7)- 2- metilbenzoxazol (Adaptado de Canellas et al., 1999b)

Os pirris (compostos 3 e 5) so provenientes da ornitina, aps a ciclizao e oxidao da cadeia lateral. A formao do pirrol 2-carboxialdedo requer ainda a alquilao do anel pirrlico formado por ao do NADP. O 2-metilbenzoxazol gerado, provavelmente, a partir do cido antranlico que oxidado (formando um xido nitrogenado) e ciclizado. A obteno de derivados imidazlicos ocorre pela policondensao do cido ciandrico (Torssell, 1983). A incorporao de compostos heterocclicos nitrogenados, na estrutura de cidos hmicos, vem sendo postulada como uma conseqncia de reaes de condensao, como as preconizadas por Schnitzer (1981) e mostradas na Figura 8.4.
197

OH OH OH OH (1) OH OH OH (2) NH2 O2 OH O N N O + NH3 OH NH2 OH OH O2 N O O

OH

OH OH (3) NH2 O2 NH2 n

O O

OH OH NH

OH OH NH

OH OH

NH

Figura 8.4. Formao de compostos heterocclicos nitrogenados em substncias hmicas, de acordo com Schnitzer (1981). 1 um mol de 4-aminocatecol reage com outro mol do mesmo composto para formar um derivado da fenazina; 2 e 3- condensao em condies oxidativas de 3-aminocatecol para formao de polmeros.

Ainda conforme Schnitzer (1981), estes compostos so responsveis em sua maioria pela frao hidrolizvel de N chamada de no-determinada ou no-identificada. J para Stevenson (1994), a incorporao de N nas substncias hmicas, seja em cidos hmicos ou em cidos flvicos, ocorre de cinco formas: como grupo amino livre, como grupo NH-, =N- em cadeias abertas, como parte de anis heterocclicos, unindo radicais livres do tipo quinonas e como aminocidos ligados a formas aromticas, de modo que no seja liberado durante o ataque cido da hidrlise. Em trabalho posterior, Canellas et al. (2002), verificaram, por meio do estudo de P-CG/EM, o efeito sobre as unidades estruturais dos cidos hmicos do tratamento de dois solos tropicais intemperizados (Argissolo Vermelho-Amarelo e Latossolo Vermelho-Amarelo), com o equivalente a 80 Mg de lodo de esgoto ou de composto de lixo por hectare. Devido presena de um nmero bastante elevado de fragmentos obtidos nos cromatogramas (Figura 8.5) aps a pirlise dos cidos hmicos, somente os principais picos foram assinalados. Foram caracterizados sete grupos de produtos nominados de derivados da lignica (L), devivados de carboidratos (C), compostos nitrogenados (N), compostos aromticos (Ar) compostos alifticos (Al) e derivados do ftalato (Pht). A atribuio dos principais compostos obtidos nos cromatogramas foi realizada pela comparao direta com a base de dados Nist library, com grau de similaridade na fragmentao acima de 90 %, e o caminho de fragmentao foi testado para estabelecer consistncia na determinao da estrutura. Esse mtodo no inequvoco mas representava na poca (e ainda hoje) o estado da arte na anlise por espectrometria de massas (Davies et al., 2001). Derivados de ligninas, tais como, guaiacil, coniferil, creosol e tocoferol, foram encontrados nos cidos hmicos. Os produtos formados mais abundantes foram os derivados dos
198

carboidratos, como metil furfural e furfuraldedo entre outro furanos, encontrados em menor proporo. A origem dos furanos nos cidos hmicos est relacionada degradao de polissacardeos pela atividade microbiana (Hayes et al. 1989). Os fenis mais abundantes foram o metil fenol, e etil metxi fenol, e os compostos aromticos mais abundantes foram os dihidroxibenzeno, propenil benzeno, metil benzeno, naftaleno e xileno. As unidades estruturais alifticas, em maiores propores, foram os alcanos e longas cadeias de alquil monosteres. A Figura 8.5 mostra a mudana no cromatograma dos cidos hmicos extrados do Argissolo e do Latossolo com a adio dos resduos orgnicos de origem urbana ,e a Figura 8.6 apresenta a abundncia relativa dos principais compostos obtidos nos cromatogramas dos produtos da pirlise. Nos cidos hmicos isolados do Argissolo tratado com os resduos orgnicos de origem urbana ,foi observado um decrscimo na quantidade de fenis de produtos derivados da degradao de polissacardeos, tais como furanos e seus derivados. J para o Latossolo, foi observado um comportamento qumico diferente, ou seja, aumento de fenis e furanos. Isso sugere que a incorporao de novas estruturas provenientes de adubos orgnicos, nos cidos hmicos de solo, ocorre e bastante dependente dos atributos qumicos e fsicos, como o teor de argila e metais. O elevado contedo de argila, por exemplo, tende a preservar mais intactas as estruturas provenientes dos resduos. Isso particularmente notado para os compostos de natureza aliftica.

Figura 8.5. Perfil cromatogrfico dos fragmentos da pirlise de cidos hmicos isolados de um Latossolo Vermelho Amarelo (A), incubados com a dose equivalente a 80 Mg ha-1 de lodo da estao de tratamento de esgoto (B), de composto de resduo domiciliar urbano (C) e de um Argissolo (D), incubado com os resduos orgnicos de origem urbana (E) e (F) (adaptao de Canellas et al., 2002).
199

Figura 8.6. Abundncia relativa de compostos aromticos, derivados do furano, compostos fenlicos e de alifticos nos cromatogramas dos produtos da pirlise de cidos hmicos, extrados de um Latossolo e de um Argissolo incubados com o equivalente a 80 Mg de resduos orgnicos de origem urbana ha-1. A abundncia relativa foi calculada considerando o valor 1 para a rea do pico, no cromatograma do AH, isolados das amostras de solo sem a adio dos resduos. Abreviaes: AC: argissolo + composto de lixo urbano; AL: argissolo + lodo da estao de tratamento de esgoto; LC: latossolo + composto de lixo urbano; LL: Latossolo + lodo da estao de tratamento de esgoto (adaptao de Canellas et al., 2000)

A anlise de pirlise, acoplada cromatografia gasosa-espectrometria de massas, permite compor um mapa das unidades estruturais das substncias hmicas, delimitar as origens dessas unidades (i.e., de quais biopolmeros so originadas) e ainda identificar mudanas na sua composio pelo uso e manejo do solo. possvel ainda, conhecendo-se os cdigos dessa cartografia qumica validar ou negar os inmeros modelos de estrutura qumica (captulo 2) e aproximar as variveis termodinmicas (captulo 4) com a realidade. Em conjunto com as demais espectroscopias, compe hoje o arsenal de ferramentas disponveis para caracterizao das substncias hmicas e gerao de seus modelos (captulo2). O comportamento e a reativiadade das substncias hmicas no ambiente podem ser acessados pelo emprego das tcnicas espectroscpicas.
200

c a p t u l o
Propriedades redox de cidos hmicos
Marihus A. Baldotto Luciano P. Canellas Maria Cristina Canela Ary C. X. Velloso Os processos de oxidao da matria orgnica so os principais responsveis pelo controle do balano de carbono no solo, assunto de grande interesse cientfico, com implicaes na geoqumica, pedologia, agricultura, oceanografia, limnologia etc. O estado redox do sistema solo predominantemente governado pela atividade do oxignio. De forma geral, solos bem aerados apresentam-se com baixa atividade de eltrons e, na medida em que a porosidade do solo preenchida pela gua, ocorre diminuio da disponibilidade de oxignio e o conseqente aumento na disponibilidade de eltrons. Muitos solos encontram-se alagados ou saturados com gua permanentemente ou, pelo menos, durante alguns meses do ano. A matria orgnica a principal fonte de eltrons para as reaes redox, gerando energia para o desenvolvimento da biota. Depois de uma introduo geral aos processos, este captulo aborda as propriedades redox de cidos hmicos que, por sua vez, podem ser utilizadas como um marcador da qualidade da matria orgnica humificada Introduo As reaes qumicas so classificadas como de oxidao e reduo (oxirreduo ou redox) quando nelas ocorre a transferncia de eltrons entre as espcies qumicas envolvidas. Denominase oxidao a transferncia de eltrons de uma espcie qumica (agente redutor) a outra (agente oxidante). O doador tem seu nmero de oxidao (NOX) aumentado e se oxida. Por outro lado, o ganho de eltrons conhecido como reduo. Nesse caso, h diminuio do NOX da espcie qumica. A tendncia de uma espcie qumica em doar eltrons medida pelo respectivo potencial de oxidao e a quantidade de eltrons transferidos por unidade de massa de uma determinada substncia (molc kg-1), que denominada capacidade de oxidao (COx.). Quanto maior o valor desse potencial e da capacidade de oxidao, maior ser a tendncia dessa espcie em ceder eltrons (ou seu poder redutor). Por analogia, o potencial de reduo mede a tendncia de uma espcie em ganhar eltrons, e a capacidade de reduo a quantidade de eltrons recebidos, que, quanto maiores, maior ser o poder oxidante desta espcie aceptora de eltrons. Na determinao dos potenciais de oxidao e/ou de reduo, convencionou-se como eletrodo padro o eletrodo de hidrognio, atribuindo-lhe o valor zero nas condies-padro. Os potenciais dos demais elementos so calculados em relao ao que se convencionou potencial padro. A Unio Internacional de Qumica Pura e Aplicada (IUPAC) indica que as semi-reaes redox sejam escritas como redues. Assim, o potencial redox (E) a propriedade redox associada qualitativamente s equaes de reduo nestas reaes qumicas. Os principais elementos qumicos afetados pelas reaes redox so: C, N, O, S, Mn e Fe. Nos solos contaminados podem-se, ainda, acrescentar As, Se, Cr, Hg e Pb. Quando se estudam as
201

reaes redox em sistemas naturais deve-se estar ciente de que as concentraes das espcies reduzveis ou oxidveis podem situar-se bem distantes daquelas previstas pela termodinmica. Isso acontece, porque muitas reaes redox so lentas ou nunca atingem o equilbrio. Assim, por exemplo, nos sistemas aquticos, e mesmo nos solos, existe uma diferena marcante no ambiente redox entre a superfcie em contato com o O2 da atmosfera e as camadas mais profundas desses sistemas. Entre tais camadas, acontecem numerosas zonas intermedirias resultantes de misturas ou difuses imperfeitas que, somadas s complicaes resultantes das variadas atividades biolgicas, produzem um sistema redox global, que difere das previses para os efeitos redox dos subsistemas isoladamente. Portanto, um equilbrio perfeito no atingido (Stumm & Morgan, 1996). A matria orgnica constitui a principal fonte de eltrons para as reaes redox nos solos Ao acoplar o inverso da semi-reao de reduo da matria orgnica, representada simplificadamente por CH2O, semi-reao de reduo do oxignio, tem-se:
CH2O(aq) + H2O = CO2 (g) + 4H+ (aq) + 4e- (aq) O2 + 4H+ (aq) + 4e- (aq) = 2H2O CH2O + O2 = CO2 (g) + H2O + energia (1) (2) (3)

Em solos bem drenados, a decomposio da matria orgnica realizada por uma diversidade de microrganismos. Devido elevada energia liberada durante a respirao aerbia desses microrganismos, a decomposio do substrato e a sntese de material celular acontecem rapidamente. A maior parte da matria orgnica desaparece como CO2, deixando um resduo bastante resistente, formado principalmente de lignina alterada e de espcies oxidadas, como CO2H e acmulo de radicais do tipo quinona, precursores da humificao. Na decomposio aerbia existe uma forte demanda por nutrientes, especialmente nitrognio. Em condies anaerbias, resultante da depleo do O2 , aps o alagamento do solo, ou mesmo em microsstios anxicos, como no interior dos microporos saturados por gua, os microrganismos aerbios, diminuem drasticamente sua atividade, tornam-se quiescentes ou morrem. Os microrganismos facultativos e anaerbios ento proliferam, usando os compostos de carbono como substrato e compostos de N(V), Mn(IV), Fe(III) e S(VI), para transferir seus eltrons provenientes da respirao. Nos sistemas alagados, a decomposio da matria orgnica acontece quase inteiramente pelo trabalho de microrganismos anaerbios e/ou facultativos. Como as bactrias anaerbias operam num nvel de energia bem menor que as aerbias, tanto a decomposio como a assimilao so bem mais lentas nos sistemas submersos. Esse fato ilustrado pela acumulao de resduos de plantas em pntanos e em sedimentos submersos. A diferena fundamental entre decomposio aerbia e anaerbia reside na natureza dos produtos finais. Assim, as condies redox intermedirias em solos situam-se entre dois extremos: - solos bem drenados: CO2 , NO-3 , SO2-4 e resduos resistentes futura decomposio (hmus). - solos alagados: CO2 , H2 , CH4 , NH3 , N 2 , H2S , mercaptanas e resduos parcialmente humificados. At a formao do metablito-chave cido pirvico (CH3COCOOH), o metabolismo dos carboidratos , provavelmente, o mesmo em condies aerbias e anaerbias. Na ausncia do O2 os prtons e eltrons, formados durante tal processo, so transferidos para as espcies oxidadas do solo ou, ento, para os metablitos orgnicos. A transformao do cido pirvico em condies anaerbias leva formao de uma srie de substncias orgnicas instveis (etanol, cido frmico, cido actico, cido propinico, cido butrico), seguida de evoluo de CO2 , CH4, H2, C2H2 . Quando o O2 e os receptadores secundrios esto ausentes, os microrganismos do solo (ou de
202

outros sistemas) podem, ainda, extrair alguma energia dos compostos orgnicos pela fermentao. Essas reaes liberam ~ 10% de energia. Isso significa que os produtos (etanol, metano etc) retm cerca de 90% da energia. Resumindo:
Receptor inorgnico Respirao aerbia : O2 funcionando como receptor terminal de eltrons Respirao anaerbia : espcies oxidadas do solo (receptores secundrios): NO3, Mn (IV), Fe(III), funcionando como receptor terminal de eltrons fermentao : (CH2O)n = n/2 CO2 + n/2 CH4 (CH2O)n = C2H5OH + CO2

Receptor orgnico

Propriedades redox Considerando que a variao de energia livre de uma reao redox de natureza eltrica, as seguintes equaes podem ser obtidas de acordo com a primeira e segunda leis da termodinmica, que abordam a variao de energia de uma reao ? G = ? G + RT ln Q (4) e ?G=-nFE (5) onde, ? G = variao de energia livre de Gibbs da reao; ? G = variao de energia livre padro da reao, quando todos os reagentes e produtos esto em seu estado padro; R = constante dos gases, igual a 1,987 cal K-1 mol-1; T = temperatura em Kelvin, que a 25C igual a 298,15 K; n = mol de eltrons transferidos na reao; F = constante de Faraday, igual a 23,061 kcal V-1 mol-1; E = potencial da cela para a reao; E = potencial padro para a reao da meia cela. Para a obteno de Q (quociente da atividade de produtos e reagentes), considera-se a reao geral dada abaixo:
nAOx + mBRed = pARed + qBOx
(6)

considerando tambm a velocidade de reversibilidade da reao

1 nAOx + mB Re d pARe d + qBOx

(7) (8)

2 pARe d + qBOx nAOx + mBRe d

As taxas de reaes so proporcionais aos produtos e reagentes, de acordo com as seguintes relaes:
V1 ~ (AOx )n (BRed )m V2 ~ (ARed )p (BOx )q
(9) (10)
203

Introduzidas nas equaes anteriores as constantes de proporcionalidade k1 e k2, o equilbrio atingido quando as taxas de reao so iguais, ou seja: V1 = V 2 e assim:
k1 (AOx )n (BRed )m = k 2 (ARed )p (BOx )q
ou
k1 (A Red )p ( BOx )q = K k 2 ( AOx )n ( BRe d )m

(11)

(12)

(13)

que define uma nova constante, denominada constante de equilbrio da reao (Q). Quando os produtos e reagentes esto em seu estado padro, Q definida como K e a equao 4 pode ser reescrita como:
G = G + RT ln K (14)

Como no equilbrio ? G = 0:
G = - RT ln K (15)

Substituindo os valores apropriados de R e T e aplicando log:

G = (0,001987 kcal grau - 1) (298,15 graus) (2,303 log K )
G = 1,364 log K

(16) (17)

Combinando as equaes 5 e 14,

- n F E = 1,364 log K log K = 16,91 n E

(18) (19)

E ainda,
E = 0,05916 log K n

(20)

Sendo assim, K, G e E0 indicam a atividade a variao da energia livre e a direo de uma reao redox. Conceito de pe De maneira anloga atividade de prtons, definida como - log (H+), a atividade de eltrons pode ser expressa em termos de - log (e-). Dessa maneira, os eltrons podem ser tratados como os demais reagentes e produtos, permitindo que uma nica constante de equilbrio defina simultaneamente os equilbrios qumico e eletroqumico. Consideremos a semi-reao redox simples:
Ox + ne - = Red (21) (22)

log K = log

(Re d ) n log( e ) (Ox )

204

Por definio: - log (e-) = pe 1/n log k =pe Portanto,

pE = pE0 1 (Red) log n (Ox) (25)
o

(23) (24)

Quando (Ox) = (Red): pE = pE0

(26)

Valores elevados de pE favorecem a existncia de espcies pobres em eltrons (i.e., oxidadas), assim como valores elevados de pH favorecem a existncia de espcies pobres em prtons (i.e., bases). Valores baixos de pE favorecem a existncia de espcies ricas em eltrons (ou reduzidas), assim como valores baixos de pH favorecem espcies ricas em prtons (i.e., cidos). Porm, o pE se diferencia do pH por adotar valores negativos. Esse fato resulta da diferena na conveno estabelecida para a interpretao das medidas de pE e pH, realizadas em clulas eletroqumicas. Como no caso do pH, pE no apresenta unidades. Usualmente, os valores de pE no so encontrados na literatura, pois o pE , geralmente, obtido de forma indireta por mtodos eletromtricos, que medem a fora eletromotriz (f.e.m.) do sistema redox em relao ao sistema padro que, por definio, o do hidrognio. Tais mtodos, portanto, especificam uma diferena de potencial entre eletrodos em termos da f.e.m. da cela, dada em Volts. A relao entre essas propriedades eletroqumicas dada a seguir. Relao entre EH e pe Combinando as equaes 20 e 25, pode-se escrever:
pE = EH 0,05916

(27)

quando EH expresso em Volts (V) e, a mesma relao tambm pode ser dada por:
0 EH = 0,05916 pE

(28)

Assim, o pE indica a tendncia de oxidao e reduo em um sistema. Utilizando as equaes 23 e 26, obtm-se a Equao de Nernst:
0 EH = EH +

0,05916 log Q n

(29)

A Equao de Nernst prediz que o potencial de semireao mudar 59,16 mV, a cada mudana, em dez vezes na concentrao de uma substncia envolvida na reao redox, envolvendo um eltron. Para n eltrons, a variao ser (59,16/n) mV por mudana de dez vezes na concentrao de
205

uma das substncias da reao redox. Essas predies se cumprem em meios diludos, no s do on eletroativo, mas de todas as espcies inicas presentes. Este valor provm do coeficiente angular (declividade da reta) da regio linear da curva obtida, relacionando-se os potenciais, por exemplo, da meia reao Ag+|Ag, calculados pela equao de Nernst e concentrao de Ag+ no meio (Figura 9.1). Quanto maior a carga do on, mais baixa a concentrao deve ser para as relaes serem consideradas aceitveis.

Figura 9.1. Potenciais Padro e Formal (Medido) de meias reaes, de acordo com a resposta concentrao. Adaptao de Stumm & Morgan (1996). No possvel determinar experimentalmente um potencial absoluto, mas sim em relao semi-reao de reduo do hidrognio que, por conveno, o eletrodo primrio ou padro, em que o potencial redox e a variao de energia livre padro da reao so iguais a zero (a constante de equilbrio igual a uma unidade). Os potencimetros medem a fora eletromotriz (f.e.m.) gerada pela diferena de potencial eletroqumico entre dois eletrodos, sendo um eletrodo o de referncia e o outro, sensvel. Os eletrodos podem ser construdos de modo a permitirem reao redox entre um metal e uma soluo especfica. Em contato com a soluo, os metais tendem a se oxidarem, liberando os ctions correspondentes em soluo, enquanto os eltrons livres ficam na placa metlica. Se um dos metais utilizados possuirem maior tendncia a sofrer oxidao em relao ao outro, haver no sistema um fluxo de eltrons, a partir do metal com maior tendncia oxidao para o de menor tendncia, gerando a f.e.m.. A f.e.m. pode ser detectada pelo potencimetro acoplado entre o anodo (doador de e-) e o cadoto (aceptor) no circuito eltrico (sistema em que o eltron flui do anodo para o cadoto, por um condutor). Essa fora uma corrente eltrica gerada pelo catodo, suficiente para impedir o fluxo de eltrons vindos do anodo. A f.e.m. medida em Volt (V), grandeza que pode ser representada por:
V = Joule Coulomb

(30)

A passagem de 1 coulomb (C) capaz de realizar o trabalho de 1 joule (J). A f.e.m. est relacionada com a atividade de ctions em soluo, pela equao de Nernst. Portanto, a f.e.m. varia apenas com as atividades dos ons em soluo, uma vez que E, R, T e F so constantes. Os instrumentos so construdos de modo que a atividade de um dos ons em soluo seja conhecida (eletrodo de referncia). Assim, a f.e.m. passa a ser funo apenas da atividade do outro on, que a varivel desconhecida (eletrodo sensvel).
206

Eletrodos Os eletrodos de referncia possuem potencial padro fixo, sendo que os eletrodos primrios possuem um metal em equilbrio com seus ons, embora, geralmente, sejam utilizados padres secundrios em relao ao eletrodo padro de hidrognio. Dessa forma, so construdos eletrodos nos quais um metal est em equilbrio com uma soluo saturada de um sal pouco solvel. Os eletrodos mais comuns so o prata, cloreto de prata (Ag, AgCl) e o eletrodo de calomelano (Hg2Cl2, Hg). No eletrodo AgCl, Ag, as equaes abaixo podem ser estabelecidas: Ag = Ag + + e(s) +

Ag + Cl = AgCl(s) Ag (s) + Cl- = AgCl(s) + e-

(32) (33) (34)

Neste caso, segundo a Equao de Nernst:

E = E 0,05916 ( AgCl ) log n ( Ag )(Cl )

(35)

Como, (AgCl) = (Ag) = 1,0, a equao se apresenta:

E = E 0,05916 log 1 (Cl )

(36)

O potencial depende apenas da atividade de cloreto (Cl-) em soluo, que mantida constante por meio de soluo KCl saturada em contato com o metal, conferindo aos eletrodos potencial constante e conhecido (referncia). Geralmente, o eletrodo sensvel a reaes redox associado ao eletrodo AgCl, Ag o eletrodo de platina (Pt). O potencial lido na cela pode ser desmenbrado em:
f.e.m.cela = EReferncia - ESensvel
(37)

Diagramas pe x pH Em princpio, possvel predizer reaes de oxidao e reduo em sistemas naturais usando diagramas de equilbrio pE x pH (ou EH x pH). Sendo a gua o meio principal para essas reaes, torna-se necessrio definir os limites de estabilidade termodinmica da mesma. O oxidante mais forte geralmente encontrado na gua o oxignio molecular (O2). Oxidantes mais fortes que o O2 no persistem na gua, porque reagem com a ela para liberar O2. O redutor mais forte encontrado na gua o H2. Redutores mais fortes que o H2 no persistem na gua porque reagem com a mesma para liberar H2. A gua age, assim, nivelando a fora dos oxidantes no sistema. O diagrama da Figura 9.2 mostra a relao entre os vrios pares redox esquematicamente. Os doadores de eltrons so mostrados esquerda, e o aceptores conjugados direita. Cada par redox representado pela energia livre de um eltron, na forma reduzida do par, relativa energia livre do eltron ao on de hidrognio (e assim em H 2). A Figura indica que a gua sofre oxidao e reduo. S as substncias que aparecem entre as reaes, determinam o campo de estabilidade da gua, sero estveis em soluo aquosa em ambas as formas, oxidadas e reduzidas.
207

Figura 9.2. Diagrama de energia livre de eltrons para solues aquosas. Adaptao de Lower (1977).

Para o equilbrio entre o oxignio molecular e a gua:

O2
(g)

+ 4H +

(aq)

+ 4e -

(aq)

= 2H 2 O

(l)

log K = 83,10

(37) (38)

K =

PO 2 (H + )4 (e )4

(H 2O )2

pE = 20,78 + 1 log PO2 pH 4 pE + pH = 20,78 + 1 log PO2 4

(39) (40)

Assumindo a presso parcial de oxignio (PO2) igual a 1atm (condio de mxima oxidao):
pE = 20,78 - pH

(41) (42)

ou, pE + pH = 20,78 (limite superior de estabilidade da gua) Para o equilbrio entre a gua e o H2 , tem-se a equao de reduo:
2H 2 O 2OH 2H
+ (l)

+ 2e + 2e
-

(aq)

= H2 = H2

(g)

+ 2OH
(l)

(aq)

(aq)

+ 2H +
(aq)

(aq)

= 2H 2 O

(aq)

(g) , com

log K = 0

(43) (44) (45)

K=

(H ) (e )2

+ 2

PH 2

(47)

208

pE =

PH 1 log + 2 2 (H )2
1 log PH2 + log (H+ ) 2 1 log PH2 2

(47)

pE =

(48)

pE = pH

(49)

Assumindo PH2 = 1 atm (condio de mxima reduo) pe = -pH ou pE + pH = 0 (limite inferior de estabilidade da gua) (50)

A oxidao e a reduo da gua situam os limites de oxidao e reduo dos sistemas naturais. O estado redox do sistema solo pode ser expresso em termos de pe+pH, bem como em termos de presso parcial de O2 ou H2. Os valores mais freqentemente encontrados em sistemas naturais aparecem no interior do crculo.As presses parciais de O2 e H2 permanecem fixas para um dado valor de pE + pH. Amplitude de pe em solos Para ilustrar a amplitude de pE em solos, apresentado um diagrama pE vs pH (Figura 9.3). J se viu que do mesmo modo que a acidez expressa quantitativamente como pH = - log (H+), a capacidade redox de um sistema pode ser expressa em pe = - log (e-).

Figura 9.3. Diagrama pE versus pH observado para solos (os pontos formando a rea destacada representam os resultados experimentais). Adaptao de Baas Becking et al., (1960)

Na Figura 9.3, a amplitude de pE em solos indicada pela poro hachurada. O grfico mostra os domnios das atividades de eltrons e de prtons que tm sido observados em diversos solos. O maior valor de pE encontrado um pouco maior do que +13,0 e o menor, prximo a 6,0. A seqncia de reduo tambm refletida na sucesso de microrganismos: aerbios, aerbios facultativos e estritamente anaerbios. O curso, a velocidade e a grandeza da variao de pe dependem da qualidade (labilidade) e quantidade de matria orgnica, da natureza e quantidade de receptores secundrios de e-, da temperatura, da durao do alagamento e dos processos catalticos envolvidos. Essa amplitude de pE pode ser divida em trs partes, de acordo com a Tabela 9.1:
209

Tabela 9.1. Amplitude de pE (e de pE + pH) em solos e o estado redox correspondente.

Estado redox Solos xicos (oxidados) Solos subxicos (suboxidados) Solos anxicos (reduzidos) pe (pH 7,0) >5 2a5 <2 pe+pH >12 9 a 12 <9

Os solos subxicos diferem dos xicos por apresentarem valores de pe suficientemente baixos para que ocorra depleo de O2, porm, so baixos o bastante para a depleo dos ons SO42-. Na soluo do solo com pE + pH abaixo de 18, os eltrons passam a existir em quantidade suficiente para a reduo de O2 (g) a H2O. Abaixo de pe + pH =12, o oxignio deixa de ser estvel. Acima de pe + pH = 12, o oxignio consumido nos processos de respirao aerbia. Em valores de pe + pH < 15, h atividade de eltrons para a reduo de NO3- a NO2-, N2 , N2O , ou NH4+. A desnitrificao constitui um caso especial de nitrato-respirao, em que N 2 e N2O so produzidos. Valores de pe + pH entre 14 e 12, indicam quantidades suficientes de eltrons para a reduo de Fe e Mn nas fases slidas. A reduo do Fe somente acontece aps o consumo de O2 e NO3- . A reduo do Mn (IV) pode, entretanto, iniciar-se na presena de nitrato. As redues de Fe (II) e Mn (IV) so caractersticas de ambientes subxicos. Abaixo de pe + pH 9, o solo torna-se anxico e, quando pe + pH <7, existe disponibilidade de eltrons para a reduo de sulfato, que catalisada por uma variedade de bactrias anaerbias. Como resultado da reduo, aparecem H2S, HS-, S2O32-. Como j mostrado, a seqncia de reaes qumicas para a reduo de O, N, Mn, Fe e S (induzida pelas mudanas de pE) corresponde tambm a uma seqncia ecolgica de microrganismos (catalisadores biolgicos que mediam essas reaes). Os microrganismos aerbios (que utilizam O2 para oxidar a matria orgnica) no se desenvolvem abaixo de pe + pH 12.
Tabela 9.2. Seqncia de reduo em solos neutros
Semi-reaes de reduo O2(g) + H+(aq) + e-(aq) = H2O(l) NO3- + H +(aq) + e-(aq) = NO2-(aq) + H2O(l) NO3- + 6/5 H+(aq) + e-(aq) = 1/10 N2 (g) + 3/5 H2O(l) 1/8 NO3- + 5/4 H+(aq) + e-(aq) = 1/8 NH4+(aq) + 3/8 H2O(l) MnO2(s) + 2H+(aq) + e-(aq) = Mn2+(aq) + H2O(l) Fe(OH)3(s) + 2H+(aq) + e-(aq) = Fe2+(aq) + 3H2O(l) FeOOH (s) + 2H+(aq) + e-(aq) = Fe2+(aq) + 2H2O(l) 1/8 SO42-(aq) + 9/8 H+(aq) + e-(aq) = 1/8 HS-(aq) + H2O(l) SO42-(aq) + 5/4 H+(aq) + e-(aq) = 1/8 S2O3-(aq) + 5/8 H2O(l) 1/8 SO42-(aq) + 5/4 H+(aq) + e-(aq) = 1/8 H2S(aq) + H2O(l) Faixa de (pE+pH) 12,0 18,0

10,4 15,5

10,4 13,8

8,7 12,0

4,5 7,0

Adaptao de Stumm & Morgan (1996).

As bactrias denitrificadoras, na maior parte dos casos, desenvolvem-se entre pe + pH 17 e 7. As bactrias responsveis pela reduo do sulfato no proliferam em pe + pH acima de 9. Esses exemplos mostram que os diagramas pe-pH retratam os domnios de estabilidade tanto para as espcies qumicas como para espcies microbianas (Stumm & Morgan, 1996).

210

Processos oxidativos envolvendo a matria orgnica A oxidao uma forma de transformar biopolmeros oriundos de microrganismos, plantas e animais em outras molculas mais simples, para que estas possam ser assimiladas de modo mais harmonioso nos ciclos da natureza. A oxidao pode ser completa ou parcial. Na maioria das vezes, a oxidao acontece de modo incompleto, e os subprodutos sero os substratos para as reaes de humificao da matria orgnica. No entanto, a oxidao total (tambm chamada de mineralizao) de um composto orgnico gera, como produto final, dixido de carbono, gua e ons inorgnicos, sendo o processo responsvel pela disponibilizao de nutrientes s plantas. Processos biolgicos oxidativos Os microrganismos so capazes de realizar uma srie de reaes qumicas ainda difcil de sintetizar em laboratrio pelo homem moderno e sua tecnologia evoluda. Tome-se a fotossntese, por exemplo, um processo no qual a luz absorvida convertida em energia qumica pela molcula de clorofila. De forma resumida, tem-se: CO2 + H2O = {CH2O} + O2 (51)

onde {CH2O} representa a nova biomassa produzida neste processo, que requer energia (? G = + 475 kJ mol-1). A reao inversa, ou seja, a degradao da matria orgnica (oxidao ou respirao) libera a mesma quantidade de energia (? G = - 475 kJ mol-1), fundamental ao sustento da vida (Taiz & Zeiger, 1991): {CH2O} + O2 = CO2 + H 2O + energia (52)

Existem, tamm, fungos com habilidade de sintetizar enzimas com capacidade de degradar as ligninas. Esse complexo formado majoritariamente pelas enzimas lignina peroxidase, mangans peroxidase e lacases que, genericamente, formam as fenoloxidases. Essas enzimas oxidam seus substratos, pela reduo de um eltron, para a formao de um radical catinico. Estes fungos caracterizam-se por serem bons produtores de lacase, fenoloxidase dependente de cobre. Esta enzima lignoltica tem a capacidade de catalisar reaes de demetilao, que um passo inicial e importante para os processos de biodegradao de cadeias polimricas, com subsequente decomposio de macromolculas de lignina pelo rompimento de anis aromticos e ligaes Ca - Cb em estruturas fenlicas. Em processos de oxidao de muitos compostos (principalmente de compostos fenlicos), a lacase apresenta especificidade para um grande nmero de compostos xenobiticos e efluentes industriais. O tratamento biolgico de esgoto domstico outro exemplo do uso de consrcios de microrganismos que realizam o excelente trabalho de oxidar e/ou reduzir matria orgnica a um menor custo e alta eficincia, quando comparado a qualquer outro processo qumico. A oxidao da matria orgnica mediada biologicamente vem sendo explorada pelo homem desde os primrdios da civilizao e a base da adubao orgnica. Por meio de uma srie de processos aerbios de oxidao, que usam o O2 atmosfrico como receptor de eltrons na oxidao de molculas orgnicas liberando ons inorgnicos necessrios ao metabolismo celular. A compostagem uma das prticas mais antigas da agronomia, que usa racionalmente o conjunto de reaes de oxidao de compostos orgnicos durante o processo de estabilizao da matria orgnica.
211

Figura 9.4. Representao esquemtica da evoluo dos resduos orgnicos. A oxidao da matria orgnica mediada por microrganismos fonte de energia para a microbiota e o incio do processo de humificao.

A formao do composto ou adubo orgnico compostado nada mais do que a biodegradao induzida e controlada que conduz estabilizao da matria orgnica. Ocorre, no final do processo, a diminuio da atividade biolgica pela exausto dos estoques de nutrientes e competio entre espcies de agentes decompositores. Como conseqncia, h a transformao dos componentes orgnicos com a diminuio do contedo de carbono e oxirreduo dos elementos qumicos para formas orgnicas lbeis. A compostagem realiza-se em duas fases: a primeira, quando ocorrem as reaes bioqumicas de oxidao mais intensas, predominantemente termoflicas. A segunda fase ou fase de maturao (mesoflica) mais lenta e quando ocorre o processo de estabilizao dos slidos e a humificao. Existem vrios mtodos de compostagem, entre eles: a) Compostagem artesanal: em pilhas ou leiras a cu aberto, misturadas por processo manual, para a aerao das camadas interiores, mantendo sob relativo controle as condies de temperatura e umidade dos materiais. b) Compostagem com reviramento mecnico: as pilhas so reviradas com equipamentos, p-carregadeira, ou equipamentos especficos para reviramento de leiras. c) Compostagem em pilhas estticas com aerao forada: tambm conhecido como Mtodo de Beltsville, consiste em fazer injetar ar em pilhas estticas, com controle do tempo da aerao. A injeo de O2 nas leiras de compostagem realizada por meio de compressores. Com isto, supre-se a demanda de oxignio em intervalos regulares durante todo o dia, em perodos de 30 dias. d) Compostagem em recintos fechados com aerao forada: neste mtodo, os resduos a compostar ficam em recintos confinados (fechados), em containers, tubules ou silos, sendo mantida a aerao. A diferena entre o mtodo anterior est no isolamento ambiental do processo. Todos esses mtodos so caracterizados pela necessidade de aerao. Como um processo oxidativo e aerbico, depende de oxignio para se realizar. A demanda por oxignio atinge o seu pico mximo durante a fase de oxidao (da esse nome) do processo. Assim, o processo de compostagem a acelerao, por meio do fornecimento de condies timas do processo de humificao, que ocorre naturalmente em sistemas naturais, como solos e sedimentos aquticos. A acelerao do processo de oxidao de resduos orgnicos ricos em ligninas e formao de material hmico foi estudada por Budziak et al. (2004). As ligninas so um polmero derivado de grupos fenilpropanides denominados C6C3 ou, simplesmente unidades C9, repetidas de forma regular, que tm sua origem na polimerizao desidrogenativa do lcool coniferlico. A compostagem de resduos de madeira um modelo interessante para o estudo do processo de humificao j que uma parte considervel da matria orgnica humificada do solo, iem mdia cerca de 36% da estrutura
212

dos cidos hmicos devido a compostos aromticos e parece ser constituda pela unio e ressntese de polmeros complexos de hidroxifenis, cidos hidroxibenzicos e outras substncias aromticas, ligadas a peptdeos, compostos aminoacares, cidos graxos, parede celular e fragmento protoplasmtico microbiano, e possivelmente outros constituintes. Estruturas condensadas de anis aromticos e partes de lignina e molculas de melanina podem tambm integrar com as estruturas humificadas. As ligninas so formadas a partir de trs precursores bsicos, que so os lcoois p-cumarlico, coniferlico e sinaplico. Algumas ligninas consistem de polmeros fenilpropanides, da parede celular, altamente condensados e muito resistentes degradao. Eles so compostos de unidades p-hidroxifenila (H), guaiacila (G) e siringila (S) (Figura 9.5), em propores diferentes, de acordo com sua origem. Durante a degradao de lignina e celulose, simultaneamente, os grupos metoxlicos de ligninas so removidos, gerando grupos aromticos ricos em hidroxilas, produzidos abundantemente na forma orto-di-hidroxi (catecol).

Figura 9.5. Alguns precurssores e componentes da lignina

O mecanismo de podrido parda envolve a ao da qumica de Fenton (Fe+2 + H2O2) para a produo de nions e radicais hidroxilas. A reatividade deste tipo de sistema foi observada em 1894 por Fenton, mas a utilidade destas reaes no era reconhecida at os anos 1930, quando o mecanismo foi elucidado. O reagente de Fenton , por si s, um agente oxidante mais forte do que H2O2. Ele capaz de oxidar di-hidrognio e substratos orgnicos que s vezes resistem oxidao. Ele tambm foi usado para iniciar reaes de polimerizao. A reao total :
2Fe2+ (aq) + H2O2 + 2H 2Fe3+
(aq)

2H2O

(53)

Esta reao, entretanto, no explica o aumento na habilidade oxidante deste sistema. Hoje se sabe que a espcie responsvel pela elevada potncia oxidativa o radical hidroxila (OH), que se forma quando ons ferroso ou frrico interagem com o perxido em soluo aquosa.
213

Por meio dos dados obtidos com a ressonncia paramagntica de eltrons (EPR), Budziak et al. (2004) concluram que os radicais livres orgnicos, formados durante a compostagem da serragem de madeira, correspondem a orto-semiquinonas, formadas na ciso homoltica: f -O-CH3 f -O + CH3. Assim, um dos processos qumicos ligados formao de cidos hmicos, durante a compostagem, est relacionado quebra de ligao f O-CH3 por ciso homoltica com formao de dois radicais livres orgnicos, f O e CH3. As possveis estruturas de orto-semiquinonas formadas reagem entre si, produzindo aumento da cadeia orgnica aromtica, ou com H, para formar um grupo fenlico. Os radicais livres, CH3, devem formar metano, gs liberado em pequenas quantidades no processo de compostagem, por reao com o H. A formao de espcies reativas aromticas estabilizadas, com capacidade de oxidao, aumentam com o grau de humificao da matria orgnica.

Figura 9.6. Semiquinonas produzidas pela reduo de quinonas ou pela oxidao de para e orto-difenis. Adaptao de Budziak et al. (2004).

Redues microbiolgicas de cidos hmicos

As reaes redox que, normalmente, ocorrem em todos os solos dizem respeito diretamente aos processos de acumulao e reatividade da matria orgnica humificada e, por conseguinte, afeta toda a qumica a fertilidade e a biologia (mais especificamente a microbiota do solo e produo vegetal). Um exemplo do papel dos cidos hmicos (AH) ,como agentes redox no sistema solo, a reduo de Fe(III) a Fe(II), que um processo essencial para a nutrio celular, uma vez que esse elemento predominantemente assimilado na forma reduzida. Os estudos indicam que os AH so mediadores da reduo microbiolgica do Fe(III), ou seja, os grupos quinona oxidados presentes nos AH so reduzidos por microrganismos e ento reduzem Fe (II), oxidando-se novamente (Szilgyi, 1971, 1973, 1974; Lovley, 1996, 1997; Lovley et al., 1998, 2000). A reduo microbiana de AH no s tem conseqncias para o ciclo do ferro, mas tambm no destino de poluentes orgnicos e inorgnicos no ambiente, tais como, mobilizao e reteno de metais txicos e hidrocarbonetos (Coates et al., 1998; Kappler et al., 2004; Keum & Li,
214

2004). Os grupos funcionais quinonas, presentes em concentrao elevada nas substncias hmicas, so os principais responsveis pela atividade redox dos AH (Lovley et al., 1998; Hernandez e Newman, 2001; Saab & Martin-Neto, 2003). Sistemas aromticos, com resduos de quinona, tambm so sugeridos por Chen et al. (2003). Os grupos quinonas poderiam atuar como mediadores na transferncia de eltrons para os contaminantes (Martin-Neto et al., 1994). H evidncia de que grupos quinonas da MOS poderiam mediar a degradao de solventes clorados e nitroaromticos em solues aquosas (Dunnivant et al., 1992) e reduzir o tetracloreto de carbono, cromato etc, por microrganismos redutores de Fe3+ (Fredrickson et al., 1996; Lovley, 1997; Lovley et al., 1998; Lovley et al., 2000; Kim e Picardal, 1999; Ramos-Tejada et al., 2003). Os potenciais termodinmicos so favorveis para a maioria dos grupos quinonas atuarem como transportadores de eltrons para contaminantes, como nitrobenzenos e tetracloretos de carbono (An et al., 1996; Tratnyek & Macalady, 2000; Medien & Zahran, 2001). Utilizando uma quinona sinttica, antraquinona-2,6-dissulfonato (AQDS), Scott et al. (1998) conseguiram estimular a reduo de Fe3+ de maneira similar obtida com AH. Os microrganismos podem conservar energia para seu crescimento, via transporte de eltrons para o aceptor AQDS, resultando em antrahidroquinona-2,6-dissulfonato, em estado reduzido (AHQDS), que pode, abioticamente, mediar a reduo frrica, por meio da transferncia de eltrons, regenerando AQDS, oxidada. Quando microrganismos so cultivados em meio contendo AQDS e Fe3+, tambm so aptos a transferirem eltrons para AH. Devido a essa capacidade de atuar como agente oxidante e redutor continuamente (Fukushima & Tatsumi, 1999), onde os grupos quinona exercem papel fundamental, os AH poderiam estar presentes, mesmo em baixas concentraes, para mediar uma substancial quantidade de reaes de reduo de Fe3+ para Fe2+ nos sistemas naturais, sobretudo, nos solos. Este fato contribuiria de maneira significativa para a geoqumica deste e de outros metais, alm de participar diretamente do fluxo de eltrons no ecossistema em geral (Motheo & Pinhedo, 2000; Kukkadapu et al., 2001; Hernandez & Newman, 2001; Marschner & Kablutz, 2003).

Propriedades redox dos AH e grau de humificao A concentrao de radicais livres nos AH est associada ecologia de sua formao e, obviamente, natureza dos processos bioqumicos e qumicos envolvidos na sua gnese. O contedo de radicais livres do tipo semiquinona pode ser obtido pela espectroscopia paramagtica eletrnica (EPR) (Rex, 1960) e utilizado para caracterizar qualitativamente a frao humificada do solo. Uma srie de estudos tm obtido alto grau de correlao entre o contedo de radicais livres do tipo semi-quinonas com o grau de humificao da matria orgnica (Milori et al., 2002; Saab et al., 2003). A base desses trabalhos consiste na observao de uma relao direta entre o aumento do grau de humificao e o aumento da concentrao de radicais livres na matria orgnica humificada. De acordo com Zech et al. (1997), a humificao dos resduos orgnicos pde ser observada por RMN 13C, acompanhada pelo aumento do contedo de C-carboxlicos, alqulicos e aromticos e diminuio de C ligado a polissacardeos. Com o aumento da humificao, de forma geral, ocorre o acmulo de estruturas complexas e aromticas que se estabilizam em radicais livres do tipo quinonas e, portanto, a sua concentrao est associada ao avano da humificao (Milori et al., 2002). No entanto, acessar as caractersticas de reatividade e humificao da matria orgnica por EPR envolve uma tcnica complexa e equipamentos caros
215

(Milori et al., 2002). Cientes da importncia do envolvimento das SH em reaes redox nos sistemas naturais vistos anteriormente e da possibilidade de avaliar a qualidade da matria orgnica utilizando as suas propriedades redox, Struyk & Sposito (2001) desenvolveram os princpios tericos para a determinao da capacidade de oxidao das SH, por meio de um mtodo que consiste na titulao redox das SH. Titulao redox de cidos hmicos As titulaes redox so realizadas pela oxidao dos AH com I2 (iodimetria), sob atmosfera inerte (Struyk & Sposito, 2001). A soluo oxidante, para cada titulao, padronizada, utilizandose tiosulfato de sdio, de acordo com as reaes propostas por Bard et al. (1985):
2S 2O 3 2 - (aq) S 4 O 6 2 - + 2e I2 (aq) + 2e - 2I 2S 2 O 3 2 - (aq) + I2 (aq) S 4 O 6 2 - + 2I (55) (56) (57)

O frasco para a titulao iodimtrica um frasco hermtico, mantido temperatura de 25C por meio de fluxo de gua contnuo, proporcionado, pelo acoplamento ao frasco, de equipamento de banho que controla a presso do fluxo e a temperatura da gua. A tampa do frasco preparada para acomodar, usando silicone para a vedao, um eletrodo combinado para pH (vidro e AgCl/Cl) ) e um eletrodo redox combinado AgCl/Cl e Pt, alm de um tubo para entrada de gs argnio (Ar) e uma microbureta (Figura 9.7).
A B

F D E

Figura 9.7. Esquema de titulao redox. A. Microbureta; B. Tubo para entrada de Ar; C. Eletrodo de Pt acoplado a eletrodo de referncia AgCl, Ag; D. Agitador magntico; E e F. Respectivamente, entrada e sada de gua a 25C.

Para cada titulao o pHmetro deve ser calibrado, utilizando solues tampes a pH 4 e pH 7. O eletrodo redox de Pt (eletrodo de referncia KCl 1 mol L-1, AgClAg) calibrado com tampo redox frrico-ferroso. A soluo preparada com sulfato ferroso amoniacal 0,100 mol L-1 (39,21 g L1 de Fe(NH4)(SO4)2 . 6H2O), sulfato frrico de amnio 0,100 mol L-1 12H2O) e H2SO4 1,00 mol L-1 (56,2 mL L-1 de H2SO4 concentrado). A leitura de EH = 439 mV+/-2 indica o correto funcionamento do eletrodo de Pt (Light, 1972). Em cada titulao, 125 mL de soluo tampo fosfato (NaHPO4 . 0,05 mol L-1 e Na2HPO4 . H2O 0,05 mol L-1) e KCl 0,05 mol L-1 so adicionados ao frasco e, em seguida, o pH ajustado com HCl ou NaOH para pH 5 ou 7. A soluo deve ser purgada com Ar por 60 minutos para a depleo de O2. Acrescenta-se AH soluo, para a obteno de uma concentrao na suspenso de 50 mg L-1 (6,25 mg AH suspensos em 125 mL de KCl 0,05 mol L-1 e soluo tampo fosfato 0,05
216

mol L-1). A suspenso novamente borbulhada com Ar durante 30 minutos. Em seguida, a suspenso anxida novamente ajustada a pH 5,00 ou 7,00 com HCl ou NaOH para o incio da titulao. De acordo com Stumm & Morgan (1996), o eletrodo de Pt no afetado pela adsoro de AH e a titulao pode ser realizada com o eletrodo imerso na suspenso, realizando-se a leitura da f.e.m.cela quando a variao for igual ou menor a 2,0 mV minuto-1. Na titulao, so utilizados incrementos de 2 L de soluo 0,025 mol kg-1 de I2 (mol kg-1 = molinidade) e, aps cada incremento de titulante, a soluo agitada (agitador magntico) e borbulhada com Ar por mais 30 segundos, para facilitar a homogeneizao do titulado. Em seguida, so obtidas as leituras da f.e.m. cela e de pH, quando a oscilao da leitura inferior a 2,0 mV minuto1 , usualmente aps 10 a15 minutos. O final da titulao redox de AH atingido quando valores constants de f.e.m.cela so registrados com a adio de oxidante (Figura 9.7). Cada titulao requer aproximadamente 2,5 a 5 horas. Os valores obtidos com a titulao redox dos AH so analisados de acordo com estudo desenvolvido inicialmente por Struyk & Sposito (2001). Os valores de f.e.m.cela, medidos durante as titulaes redox podem ser diretamente relacionados ao potencial formal do eletrodo padro (FEH) de acordo com a equao: f.e.m.cela = FEH (HAox, HAred) FEH (AgClAg) (58)

onde FEH (AgCl, Ag) = 222 mV o potencial padro do eletrodo de referncia (AgClAg a 25 C), relativo ao eletrodo padro de hidrognio e FEH (HAox, HAred) o potencial de eletrodo formal da meia-cela AH, medido sob condies onde a relao de concentraes analticas de reagentes e produtos, conforme indicado na equao de Nernst exatamente igual a unidade e as concentraes de outras espcies no sistema so cuidadosamente especificadas. A transferncia de eltronsm associada oxidao dos AH, medida com o eletrodo de Pt, a partir da concomitante reao de reduo no eletrodo de referncia AgCl, Ag. Os dados da titulao consistem na f.e.m.cela como funo da concentrao de eltrons doados pelos AH (molc kg-1). Sendo titulada uma suspenso de AH, conveniente expressar o valor da capacidade de oxidao, como o nmero de mols de I2 que so reduzidos por kg de AH na reao, cuja equao pode ser descrita como:
molckg 1 = 2molc molinidade x densidade da soluo de I2 x mol Ic massa AH (59)

As curvas de titulao so obtidas com o grfico da f.e.m.cela (mV) em funo da capacidade de oxidao de AH (molc kg-1). O ponto de inflexo obtido determinando-se a segunda derivada da funo. O ponto de inflexo, obtido para cada curva de titulao, utilizado para a determinao da f.e.m.cela (eixo das ordenadas) e a capacidade de oxidao (eixo das abscissas). A titulao de amostras em branco, sem AH, no devem apresentar capacidade de oxidao mensurvel na regio do ponto de inflexo em nenhum dos AH estudados. No grfico a seguir (Figura 9.8), encontram-se as titulaes redox iodimtricas, realizadas a pH 5,0 e pH 7,0, para amostras de AH isolado de vermicomposto. As curvas de titulao foram tipicamente semelhantes s apresentadas por Struyk & Sposito (2001).
217

600 500

f.e.m., mV

400 300 200 100 0 2 4 6 8

-1

10

CAPACIDADE DE OXIDAO, molc kg AH Vermicomposto pH 7,0

AH Vermicomposto pH 5,0

Figura 9.8. Titulao redox para cidos hmicos (50 mg L-1) obtidos de vermicomposto, suspensos em KCl 0,05 mol L-1 e soluo tampo fosfato 0,05 mol L-1 a pH 5,00 e 7,00.

No ponto de inflexo, seguindo a equao de Nernst (Stumm & Morgan, 1996; Struyk & Sposito, 2001): f.e.m.cela = FEH (AHoxAHred) (q/n) 0,05916 pH E em relao ao eletrodo AgCl, Ag: f.e.m.cela = FEH (AHox, AHred) (q/n) 0,05916 pH EH (AgCl, Ag) Substituindo os dados da titulao redox do AH de vermicomposto a pH 5,0: 0,451 = FEH (AHox, AHred) (0,34) 0,5916 (5) 0,222
F

(60)

(61) (62) (63) (64)

EH (AHox, AHred) = 0,773 V

correspondendo reao de reduo global (Sposito, 1989): AHox + ne- + qH+ = AHred

com AHox e AHred representando as formas oxidada e reduzida de AH (que podem ser espcies inicas), respectivamente. A relao q/n o nmero de moles de prtons por moles de eltrons, transferidos durante a oxidao de 1 mol de AH, que pode ser calculada utilizando-se os valores da femcela, obtidos para dois valores de pH, por meio da equao:
q f .e.m.( pH ) = n 0,05916
0,451 0,411 0,05916 = 0,34 (q /n ) = 2 (65)

(66)

onde ? f.e.m. (pH) a mudana na f.e.m.cela por unidade de pH alterado na soluo de titulado no ponto de inflexo. A um determinado valor de pH, substituindo o valor da relao q/n e o valor de f.e.m.cela substitudo na equao apresentada, possvel calcular o valor do potencial formal de eltrodo (FEH) para a meia cela redox de AH (AHOx,AHRed). Este potencial de eletrodo formal pode ser convertido na constante de equilbrio condicional, por meio da seguinte relao (Stumm & Morgan, 1996):
218

logK c =

E0 H 0,05916

(67)

onde Kc a constante de equilbrio condicional a 298 K, correspondendo reao de reduo genrica para um eltron transferido (Struyk & Sposito, 2001), mAgenteox + (q/n)H+ + e- = pAgentered (68) No caso do AH obtido do vermicomposto (Figura 9.8), log Kc = 0,773/0,05916 = 13,1 (69)

Usando a equao genrica apresentada anteriormente, uma comparao entre pE para pares de redox no ambiente pode ser feita para avaliar uma seqncia de reduo natural, definida Stumm & Morgan (1996), como redox ladder: pec = log Kc (q/n) pH e, para a titulao redox do AH isolado do vermicomposto (Figura 9.8): pe = 13,1 (0,34) (7) = 10,7 (71) (70)

A curva de titulao redox obtida com AH isolado de vermicomposto foi similar s reportadas por Struyk & Sposito (2001), sendo, portanto, verificados um ntido ponto de inflexo e pequenos saltos ao longo da curva de tiulao. Estes autores assumiram a inflexo da curva como o ponto de equivalncia da titulao potenciomtrica e associaram os pequenos saltos presena de resduos de Fe nos AH, no removidos pelo processo de purificao, recomendado pela IHSS (Tabela 9.4).
Tabela 9.4. Dados da titulao potenciomtrica de cido hmico obtido de vermicomposto.

COx. pH 5 pH7 ------- molc kg-1 -----4,39 5,88

Dados da Titulao Potenciomtrica (1) f.e.m. F q/n EH (2) log Kc pH 5 pH 7 ------ mV -----V451 411 0,34 773 13,1

pec(3)

10,7

(1)

Calculado como descrito na seo Titulao Redox de cidos Hmicos; (2) a pH 5,0 ; (3) a pH 7,0.

O aumento da COx com o pH, nas condies deste estudo, poderia ser atribudo, alm da prpria definio da equao de Nernst, s mudanas conformacionais indicadas por Piccolo (2001), ou seja, ocorre alterao da estrutura das SH em resposta aos aumentos de pH, resultando em maior capacidade de oxidao. Tanto nos AH padres da IHSS, estudados por Struyk & Sposito, quanto nos AH isolados do vermicomposto, a sua reao de oxidao transferiu ao I2 (aq), aproximadamente um prton para cada trs eltrons, ou relao q/n (sendo q prtons e n eltrons) igual a 0,34. No entanto, outros
219

trabalhos reportam a relao q/n mais ampla, em tornode 0,75 (Osterberg & Shirshova, 1977; Mathiessen, 1995), sugerindo que os AH diferem, no s em quantidade de eltrons transferveis, mas tambm quanto sua qualidade redutora. O uso da COx na avaliao da qualidade das substncias hmicas Em um Cambissolo cultivado por longo tempo com cana-de-acar com 55 anos de preservao do palhio por ocasio da colheita, Canellas et al. (2003) observaram o acmulo na frao AH e a melhoria nas caractersitcas de fertilidade do solo. As curvas de titulao redox foram utilizadas para avaliar a qualidade dos AH (Figuras 9.9 e 9.10). Os AH isolados do solo, sob cana crua apresentaram a capacidade de oxidao superior aos extrados da rea sob cana queimada, em am,bas as profundidades do solo estudadas e para os dois valores de pH utilizados na titulao potenciomtrica. Isoladamente, o aumento do pH do titulado de 5 para 7 promoveu elevao de 75%, em mdia, na COx dos AH isolados.
600 600

500 f.e.m., mV f.e.m., mV 0 1 2 3 4

-1

500

400

400

300

300

200 5 CAPACIDADE DE OXIDAO, molc kg

Cana Crua 0-0,20 m

200 0 1 2 3 4
-1

CAPACIDADE DE OXIDAO, molc kg

Cana Crua 0,20-0,40 m

Cana Queimada 0-0,20 m

Cana Queimada 0,20-0,40 m

Figura 9.9. Titulaes redox para cidos hmicos (50 mg L-1) obtidos de solos sob cana-de-acar aps 55 anos utilizando ou no a queima da palha para a colheita, suspensos em KCl 0,05 mol L-1 e soluo tampo fosfato 0,05 mol L-1 a pH 5,00. Adaptado de Baldotto et al. (2003).

500
500

f.e.m., mV

400
f.e.m., mV 400

300

300

200 0 2 4 6 CAPACIDADE DE OXIDAO, molc kg-1

Cana Crua 0-0,20 m Cana Queimada 0-0,20 m

200

2 4 6 CAPACIDADE DE OXIDAO, molc kg-1

Cana Crua 0,20-0,40 m Cana Queimada 0,20-0,40 m

Figura 9.10. Curvas de titulao redox de cidos hmicos (50 mg L -1) obtidos de solos sob cana-de-acar aps 55 anos utilizando ou no a queima da palha para a colheita, suspensos em KCl 0,05 mol L -1 e soluo tampo fosfato 0,05 mol L-1 a pH 7,00. Adaptao de Baldotto et al. (2003). 220

Tabela 9.5. Dados da titulao potenciomtrica de cidos hmicos, obtidos de solos sob cana-de-acar aps 55 anos, utilizando (CQ) ou no (CC) a queima da palha para a colheita.

Dados da Titulao Potenciomtrica (1) Manejo COx f.e.m. q/n pH 5 pH7 pH 5 pH 7 ------- molc kg-1 ----------- mV ----0 0,20 m CC CQ 2,42 A 1,01 B 4,55 A 1,64 B 391 A 380 B 343 A 334 B 0,41 A 0,39 A

EH (2) -V-

log Kc

pec(3)

0,733 A 0,717 B

12,3 A 12,2 A

9,5 A 9,4 A

0,20 0,40 m CC CQ 2,02 A 1,22 B 3,42 A 2,02 B 390 A 394 A 336 A 342 A 0,47 A 0,44 A 0,747 A 0,746 A 12,6 A 12,6 A 9,4 A 9,5 A

(1) Calculado como descrito na seo Titulao Redox de cidos Hmicos; (2) a pH 5,0 ; (3) a pH 7,0; Mdias na coluna, acompanhadas de letras diferentes, em cada profundidade do solo, apresentaram contrastes significativos, para o teste de Tukey (P<0,05). Adaptado de Baldotto et al. (2003).

Em mdia, os incrementos na capacidade de oxidao dos AH obtidos da rea de cana-deacar manejada sem a queima na colheita sobre o solo cultivado com cana queimada, foram de 140 e de 170 % (0-0,20 m), e de 66 e de 69 % (0,20-0,40 m), para as titulaes a pH 5 e a pH 7, respectivamente (Tabela 9.5). Uma comparao entre os valores das propriedades redox de alguns pares comuns nos sistemas naturais constitui-se na sequncia redox (Stumm & Morgan, 1996), como pode ser observado na Tabela 9.6.
Tabela 9.6. Propriedades redox de algums pares comuns em sistemas naturais.
Pares Redox O2 + H ++ e- = H 2O MnO 2 + 2H + + e- = Mn2+ + H 2 O H + e- = H 2 1/3 AH ox+1/3 H ++ e - = 1/3 AH red * Fe3 + e- = Fe2+ Hg2++2e-= Hg2 2+ Fe(OH)3 + 3H ++3e- = Fe2+ + 3H 2 O Mn4++ 2e- = Mn2+
(1)

E H V 0,35 0,76 0,00 0,74* 0,77 0,91 1,06 1,51

log Kc 20,8 12,8 0,0 12,7* 13,0 15,4 53,8 51,1

? G
kcal mol -28,37 -17,46 0,00 -17,35* -17,70 -21,01 -73,38 -69,60
-1

pE (1) 15,6 12,8 0,0 9,5* 13,0 15,4 17,9 25,5

Calculado a pH 5,0. * Mdias dos valores obtidos por Baldotto et al., (2003).

Os valores obtidos para o par redox AHOx, AHRed, utilizando-se as amostras isoladas do Cambissolo sob cana-deacar, indicam que o poder redutor dos AH seria suficiente para reduzir metais txicos como o Hg (II), alm de Fe(III) e Mn (IV) da fase slida. Assim, os resultados indicam que os AH estudados encontram-se, no ambiente, no estado reduzido (AHRed), entretanto, o ambiente em que ocorre a humificao influencia o poder redutor dos AH (Figura 9.11).
221

Figura 9.11. Diagrama pE-pH com pares redox de importncia ambiental. Os valores para AH so mdias dos AH estudados por Baldotto et al. (2003).

Foram obtidos coeficientes de correlao linear significativos entre a capacidade de oxidao dos AH e as principais caractersitcas qumicas da matria humificada e das propriedades qumicas do solo em geral (Tabela 9.6). Os AH com menor tamanho/conformao mais aberta, estimada pela maior relao E4/E6, mostraram maior poder redutor. O efeito do fogo e a transformaes da MOS puderam ser separados do manejo da cana-de-acar sem a queima e com incorporao da palha, por meio desta relao foi menor nos AH obtidos na rea de cana queimada.
Tabela 9.7. Coeficientes de correlao linear de Pearson entre a capacidade de oxidao dos cidos hmicos e as demais variveis estudadas

COx pH 5 pH 7

CTC 0.96 * 0.95 *

C 0.95 * 0.95 *

AH 0.92 * 0.91 *

Variveis COOH OH 0.92 * 0.99 ** 0.90 * 0.99 **

Q 0.90 * 0.93 *

O/C 0.99 ** 0.99 **

E4/E6 0.93 * 0.90 *

** e * = significativo a 1 e 5 % de probabilidade, respectivamente.

A capacidade de transferir eltrons dos AH destes solos est relacionada sua capacidade de reter ctions, indicando a importncia desta propriedade para estudo do hmus, no que diz respeito ao entendimento do fluxo de eltrons e previso da dinmica de cargas negativa dos solos tropicais. Segundo Almendros et al. (2003), o efeito do fogo na MOS, alm de diminuir sua CTC por meio da diminuio dos grupos funcionais oxigenados, promove transformaes nas SH, menor reatividade e resistncia nova degradao microbiana, limitando reaes qumicas importantes na gerao de cargas no solo. O manejo em cana crua tambm contribuiu para a diminuio do ponto de carga protnica lquida zero (PCPLZ), deslocando o equilbrio de cargas. Seus valores se correlacionaram com o poder redutor dos AH, alm dos grupos cidos dos AH estudados na ocasio. Estas melhorias na fertilidade do solo tambm foram atribudas por Canellas et al. (2003), que estudaram a humificao da MOS, nestas mesmas reas, a um aumento nos teores de SH alcalino solveis mais condensadas no manejo com cana crua.
222

A COx dos AH se relaciona estreitamente com os teores de grupos funcionais oxigenados e quinonas, e estas ltimas vm sendo indicadas como as principais responsveis pelas propriedades redox das SH (Struyk & Sposito, 2001). No entanto, no est ainda bem entendido como ocorre a resultante dos valores mensurados para COx, uma vez que, em se tratando de SH, sem estrutura discreta definida (Piccolo, 2002), os resultados obtidos seriam compostos por valores de vrios grupos doadores ou de rearranjos das suas molculas para a transferncia de eltrons, resultando em um valor mdio de uma mistura de pares redox presentes nas SH. A COx dos AH foi correlacionada significativamente com atributos de fertilidade do solo e caractersticas da matria orgnica. Alm disso, seu baixo custo e facilidade de obteno a credencia como um bom indicador da qualidade da matria orgnica humificada do solo.

223

c a p t u l o
Bioatividade de substncias hmicas ao sobre o desenvolvimento e metabolismo das plantas
Luciano P. Canellas Daniel B. Zandonadi Leonardo O. Mdici Lzaro E. P. Peres Fbio L. Olivares Arnoldo R. Faanha

10

As substncias hmicas esto presentes nos solos, nas guas e nos sedimentos. Alm de influenciar as caractersticas fsicas, qumicas e microbiolgicas desses compartimentos, podem afetar diretamente o metabolismo e o crescimento das plantas. Os mecanismos dessa ao s agora comeam a ser elucidados. Neste captulo d-se ateno especial capacidade dos cidos hmicos estimularem o crescimento e o desenvolvimento do sistema radicular das plantas. Alm de indiretamente favorecer os processos de absoro de ons mediante a formao de complexos organometlicos solvei. As substncias hmicas ativam rotas bioqumicas especficas tal como fazem alguns hormnios vegetais. Nossos antepassados identificaram, no hmus, uma fora vital capaz de condensar as propriedades de diferentes domnios da natureza (o mineral, o csmico, o vegetal e o animal) e orientar as foras responsveis pelas boas colheitas. Com o avano do conhecimento, foi possvel identificar uma conversa efetiva entre as plantas e a matria orgnica humificada. Os cdigos desse dilogo comeam a ser decifrados e envolvem o reconhecimento de rotas especficas de sinalizao celular. O estudo da bioatividade das substncias hmicas pode fornecer uma parte importante da base cientfica necessria para o desenvolvimento de novas formas de cultivo, baseadas na adaptao das plantas ao ambiente e no uso e manejo da matria orgnica. Introduo O processo civilizatrio pode, de acordo com Ribeiro (1998), vir a ser compreendido como a histria da criao das tcnicas produtivas, que so a base natural de toda organizao especfica da sociedade. Nesse contexto, Ribeiro indica o primeiro processo civilizatrio como o correspondente Revoluo Agrcola, que se desencadeou originalmente, h cerca de 10 mil anos, sobre os povos da Mesopotmia e do Egito e se repetiu, mais tarde, por efeito da difuso ou como desenvolvimentos independentes, na ndia (6000 a.c.), na China (5000 a.c.), na Europa (4500 a.C.), na frica tropical (3000 a.C.) e nas Amricas (2500 a.C.) (Ribeiro, 1998, p.81). A revoluo tecnolgica que proporcionou o surgimento da agricultura (e depois o pastoreio) conduziu o primeiro processo civilizatrio configurando um novo modo de vida. Hordas de caadores e coletores organizaram-se em aldeias agrcolas indiferenciadas (no-estratificadas em classe), e puderam se reproduzir social e economicamente com certo controle sobre o ambiente:

224

Antes da Revoluo Agrcola, o homem vivera em pequenos bandos mveis de coletores de razes e frutos, de caadores e pescadores, rigidamente condicionados ao ritmo das estaes, engordando nas quadras da fartura e emagrecendo nos perodos de penria (Ribeiro, 1998, p.82). A agricultura foi, portanto, a revoluo que permitiu uma ruptura com a estrutura nmade pr-histrica e o desenvolvimento de novas ordens socioculturais. Desde suas origens, o sucesso da atividade agrcola esteve associado utilizao de materiais orgnicos como fertilizantes. Aproveitando as cheias dos rios ou utilizando o esterco de animais para adubar as colheitas, nossos antepassados manejaram a matria orgnica, e com isso, permitiram condies para acumulao de alimentos e reproduo social. Evidncias do conhecimento sobre hmus remontam s origens do Homem, h cerca de 10.000 anos! (uma pequena sntese desse debate pode ser visto na primeira parte do captulo 2, sobre os modelos estruturais de substncias hmicas). Aqui enfatiza-se que, muito alm de fornecer nutrientes s plantas e condicionar as propriedades qumicas, fsicas e microbiolgicas do ambiente, a matria orgnica humificada estabelece uma inter-relao ntima e complexa com a planta e seu metabolismo. Durante milhes de anos de evoluo, as plantas interagiram dinmica e continuamente com o componente orgnico do solo desenvolvendo novas rotas de sinalizao celular, mudanas genticas e bioqumicas inicialmente importantes para a diversificao e disseminao das plantas no planeta que, posteriormente, passaria a assumir um papel fundamental na adaptao das plantas do ambiente selvagem para o domesticado que teve curso com o desenvolvimento da agricultura. A matria orgnica do solo um sistema complexo integrado por diversos componentes, cujo dinamismo est ligado incorporao de resduos vegetais, animais e microbianos ao solo e transformao e evoluo destes, mediadas pela interao de vrios processos ecolgicos sucessivos (Labrador Moreno, 1996). A maior parte do carbono orgnico da superfcie do planeta (entre 85 e 95%) encontra-se na matria orgnica humificada, ou seja, nas substncias hmicas (Hayes & Malcom, 2001). Alm de fornecer nutrientes para as plantas por meio da mineralizao (processo definido genericamente como a transformao das formas orgnicas dos elementos em formas inicas atravs da ao das enzimas dos microrganismos), as substncias hmicas tambm podem estimular diretamente o desenvolvimento e o metabolismo das plantas atravs de mecanismos ainda no totalmente elucidados. O crescimento, o padro de formao e a diferenciao dos rgos vegetais so etapas do desenvolvimento vegetal alteradas freqentemente pelas substncias hmicas. Tais alteraes devem, obrigatoriamente, emergir de mudanas no metabolismo vegetal, mas os alvos bioqumicos e moleculares alterados por estas substncias somente agora comeam a ser explorados. As mudanas metablicas que precedem cada evento relacionado ao desenvolvimento so estudadas para que seja possvel entend-las e direcion-las de acordo com a convenincia do Homem. Essa interveno na Natureza (com o objetivo de obter-se uma produo primria mais eficiente) a chave para o desenvolvimento dos processos tecnolgicos. Portanto, o mapeamento dessa regulao (que pode ser realizado em nveis moleculares, celulares e bioqumicos) a base cartogrfica para se percorrer um novo itinerrio tecnolgico. Como se ver mais adiante no captulo 11, ao se percorrer esse itinerrio, novas prticas de produo agrcola devero ser engendradas com fundamento numa episteme radicalmente distinta daquela que balizou os pacotes tecnolgicos da Revoluo Verde. Novas prticas, novos conhecimentos calcados numa perspectiva holstica e sistmica do processo de produo agropecuria na multidisciplinaridade, na preocupao ambiental como premissa, na otimizao dos recursos disponveis na prpria unidade de produo (a matria orgnica, por exemplo), na
225

participao dos agricultores e na valorizao de seus saberes empricos. A construo de um modelo de desenvolvimento ambientalmente saudvel e socialmente justo uma alternativa histrica que passa, necessariamente, pela reafirmao de novas formas de construo do conhecimento. Esse o desafio que se coloca aos adeptos da formas agroecolgicas de produo na agricultura. Uma parte desse desafio passa pela elucidao do papel das substncias hmicas no metabolismo das plantas. Ao das substncias hmicas sobre o crescimento vegetal Nas revises de Vaughan & Malcolm (1985), Chen & Aviad (1990) e de Nardi et al. (2002) sobre os efeitos fisiolgicos das substncias hmicas, grande parte dos trabalhos citados relatam estmulos de promoo do crescimento radicular de diversas plantas. A morfologia radicular muito sensvel s propriedades qumicas e fsicas do solo. Na germinao, a radcula a primeira estrutura que emerge da semente, desempenhando as duas funes primrias da raiz: a fixao e a absoro. gua e ons inorgnicos absorvidos pela raiz so transportados, pelo xilema, para a parte area da planta. O sistema radicular possui uma atividade intensa que modifica o solo do seu entorno, pela exsudao de vrios compostos que concorrem para o aumento da mobilidade de nutrientes, imobilizao de ons txicos e selecionamento da microflora (McCully, 1999). Por sua vez, o solo da rizosfera contm substncias orgnicas (humificadas ou no) que podem estimular a atividade radicular num dilogo, cujas implicaes sero abordadas no final deste captulo, numa hiptese para a bioatividade das substncias hmicas. Por ora, v-se que existe muita diferena entre os tipos de razes. A primeira raiz da planta origina-se do embrio e usualmente chamada de raiz primria. Nas gimnospermas, magnoliideas e eudicotiledneas, a raiz primria, denominada raiz pivotante, cresce diretamente para baixo, dando origem as ramificaes, ou razes laterais. Este tipo de sistema radicular, chamado de sistema radicular pivotante e caracteriza-se por uma raiz principal bem desenvolvida (Raven et al. 1999). As monocotiledneas apresentam sistema radicular fasciculado, a raiz primria no se diferencia. Este sistema se divide em dois sistemas de diferentes origens e predominncias durante o desenvolvimento da planta: o sistema seminal e o sistema nodal. O sistema seminal, composto pela raiz primria e suas ramificaes, indispensvel para o estabelecimento da plntula, e o fraco desenvolvimento deste sistema resulta em efeitos adversos para o crescimento da planta ao longo do seu ciclo vital. Ainda persiste a idia de que o sistema seminal de gramneas temporrio e entra em senescncia aps o estabelecimento do sistema nodal (freqentemente denominado sistema permanente). Muitos trabalhos tm mostrado que esta idia incorreta. Alm de indispensvel para a plntula, o sistema seminal desempenha um papel contnuo no desenvolvimento da planta. O sistema seminal supre um quinto de toda a gua usada pelo milho cultivado no solo (Raven et al. 1999). A quantidade de gua suprida pelo sistema seminal diminui aps o florescimento, mas aumenta novamente durante o enchimento dos gros. A despeito de sua aparente insignificncia, as razes finas (razes laterais com menos de 0,8 mm de dimetro) so os principais stios de absoro de gua do sistema radicular. As razes finas possuem mais de 30 vezes o comprimento total dos eixos principais. Elas possuem a superfcie oito vezes maior que a raiz-me e coletam oito vezes mais gua. As substncias hmicas atuam sobre a morfologia radicular, por exemplo, aumentando o nmero de razes mais finas ou de plos radiculares. Tais mudanas morfolgicas induzem, tambm, mudanas
226

fisiolgicas. Por exemplo, uma maior eficincia de absoro de nutrientes confere maior capacidade de produo de biomassa sob condies de limitao de nutrientes do meio conferindo maior tolerncia aos estresses nutricionais (Pinton et al., 1999). O nmero e o crescimento de razes finas so estimulados pela ao de cidos hmicos (Canellas et al., 2002). A mudana do paradigma dominante de modificar o ambiente, para atender s necessidades dos cultivares, pode ser contraposto pela alternativa de adaptar a planta ao ambiente natural (Arajo, 2000) que, em conjunto com o conhecimento dos efeitos da matria orgnica humificada sobre o crescimento e desenvolvimento vegetal, pode ser estratgico para o desenvolvimento de sistemas agrcolas sustentveis. O crescimento vegetal pode ser definido como o aumento irreversvel de tamanho que ocorre nas plantas, em conseqncia no apenas da diviso celular, mas tambm do elongamento celular. J o desenvolvimento se constitui em uma srie de fenmenos que vo acontecendo enquanto a planta cresce e que culminam com a maturidade sexual. A soma de ambos os processos (crescimento e desenvolvimento) recebe o nome de ontognese, que o conjunto de fenmenos que levam formao de um indivduo adulto de uma espcie. Nas razes, cada clula passa por uma srie ordenada de fases de crescimento. A clula cbica produzida na regio meristemtica ou meristema de uma planta em desenvolvimento, tem muitos pequenos pr-vacolos que, durante o desenvolvimento, fundem-se num s grande vacolo central. A clula aumenta de tamanho seguindo a turgescncia vacuolar pela produo de mais material da parede celular, do citoplasma e dos vrios tipos de organelas celulares. A diferenciao ocorre, geralmente, junto com a elongao celular mas, algumas vezes, segue-se a este. As clulas externas da raiz, por exemplo, adotam uma de duas formas finais: ou se achatam e funcionam como clulas epidrmicas, ou se diferenciam em plos, consistindo de uma extenso celular alongada com grande capacidade de absoro de gua e sais minerais. Durante a rpida fase de crescimento dessas clulas, o ncleo quase sempre se situa na extremidade do plo (regio de grande atividade metablica). Os plos absorventes tm vida curta, mas so produzidos em grande quantidade medida que a ponta da raiz se aprofunda no solo. Os plos absorventes aumentam bastante a rea da raiz em contacto com o solo, e sua membrana plasmtica possui maior capacidade de absoro que as clulas epidrmicas no-diferenciadas. Os tecidos centrais da raiz diferenciam-se nos elementos vasculares. A velocidade do crescimento de uma planta depende tanto do gentipo como do ambiente, cujos elementos exercem controle efetivo sobre o crescimento das plantas. Por sua vez, as substncias hmicas atuam em vrias esferas do ambiente solo. Por exemplo, o estresse hdrico, via de regra, retarda o crescimento. Quantidades reduzidas de nitrognio, potssio, fsforo ou de qualquer elemento essencial retardam o crescimento ou podem matar a planta da mesma forma que os elementos txicos em quantidades elevadas, tais como, metais pesados e Al 3+ . A formao natural ou no de camadas adensadas no solo dificultam o crescimento radicular. Esses fatores so indiretamente afetados pela presena das substncias hmicas. O processo de mineralizao libera nutrientes para as plantas; por meio de seus grupamentos funcionais, as substncias hmicas providenciam uma grande quantidade de ligantes estveis para a formao de complexos com ctions metlicos; um resumo dos efeitos das substncias hmicas sobre as propriedades do solo pode ser observado na Tabela 10.1, adaptada de Rocha & Rosa (2003).
227

Alm dos elementos do ambiente (luz, temperatura, gua, nutrientes), uma planta requer outras substncias qumicas para o seu crescimento. Essas substncias, chamadas hormnios, so produzidas numa parte do organismo e transportadas para outra, onde promovero algum efeito especial. Geralmente, so necessrias somente em quantidades excepcionalmente pequenas. Na maioria dos casos, so produzidas pela prpria planta. Foram caracterizadas vrias molculas com atividade hormonal, destacando-se: auxinas, giberelinas citocininas, etileno, cido abicsico, brassinoesterides, cidos jasmnicos. No recente a concepo de que as substncias hmicas podem regular o desenvolvimento das plantas (Bottomley, 1917) como se fossem hormnios. Porm, tal verso foi contida pela concepo da estrutura macromolecular das substncias hmicas que tornava um anacronismo uma macromolcula recalcitrante ser capaz de atuar como um hormnio, ligandose a receptores celulares especficos (esse debate foi realizado no capitulo 2 sobre os modelos estruturais de substncias hmicas).

Tabela 10.1. Propriedades gerais das substncias hmicas e efeitos causados no solo
Substncias hmicas Apresentam colorao variando de amarelo at escuro Reteno de gua Podem reter gua at 20 vezes a sua massa Unio de partculas Cimentam partculas do solo, formando slidas agregados formam complexos especficos (Cu++, Mn++, Complexao Zn++, Al+++) e no-especficos (Ca ++, Cd++) Insolubilidade em Devido sua associao com argilas e sais de gua ctions di e trivalentes Tm funo tamponante em amplos intervalos Efeito tampo de pH A acidez total das fraes isoladas do hmus Troca de ons varia de 300 a 1400 cmolesc kg-1 A decomposio da matria orgnica libera ons Mineralizao e molculas (CO2, NH4+, NO3-, PO4-3 e SO4-2) Cor Propriedade Efeitos no solo Interferncia no matiz e no croma do solo; reteno de calor Proteo contra eroso; armazenamento de gua no solo Formao de estrutura no solo; porosidade do solo; densidade do solo Detoxificao de ons txicos (Al +++), aumenta a mobilidade de ons Perde-se pouca matria orgnica perdida com a gua de percolao Ajuda a manter o equilbrio da soluo do solo Responsveis pela capacidade de troca de ctions e de nions no solo Fornecimento de nutrientes para o crescimento das plantas

(Adaptado de Rocha & Rosa, 2003).

Os efeitos diretos das substncias hmicas sobre o metabolismo das plantas que resultariam em maior crescimento e desenvolvimento radiculares foram resumidos por Nannipieri et al. (1983), como resultado da: i) Influncia positiva sobre o transporte de ons facilitando a absoro; ii) Aumento da respirao e da velocidade das reaes enzimticas do ciclo de Krebs, resultando na maior produo de ATP; iii) Aumento no contedo de clorofila; iv) Aumento na sntese de cidos nuclicos; v) Efeitos sobre a sntese protica; vi) Aumento ou inibio da atividade de vrias enzimas; Vrios trabalhos tm demonstrado inequivocadamente que a formao do complexo ligante-hmico com on metlico (geralmente, nutriente essencial em quantidades-trao)
228

favorece a absoro de ons e, por consequncia, o crescimento e o desenvolvimento das razes. Numa srie de trabalhos, o aumento da eficincia da absoro de Fe, na presena dos mais diversos tipos e concentraes de substncias hmicas j foi obtido (Pinton et al., 1998; Pinton et al., 1999a; Chen & Aviad, 1990). Da mesma forma, com nitrato (Vaughan et al. , 1985; Piccolo et al. , 1992; Pinton et al. , 1999b; Nardi et al. , 1991; Quaggitoti et al. , 2004), enxofre e outros ons. A Tabela 10.2 traz um resumo de alguns resultados com esse vis de pesquisa. As respostas observadas para o incremento de absoro de ctions, na maior parte dos casos, so positivas, enquanto as respostas referentes reduo da absoro dizem respeito aos nions, mais precisamente, Cl- e dois casos de PO43- (Tabela 10.2). Por outro lado, uma viso diferente para esses fenmenos de absoro foi buscada por Visser (Visser, 1982; Samsom & Visser, 1989). As substncias hmicas, por apresentarem superfcie ativa, tm uma ao surfactante. Assim, o poder detergente das substncias hmicas poderia aumentar a permeabilidade das membranas biolgicas que so barreiras seletivas em relao entrada e sada de ons da soluo do solo. Com a membrana mais permevel, a barreira seletiva pode ser fragilizada, concorrendo, em parte, para maior entrada de ons (Samsom & Visser, 1989). Por outro lado, com a perda da seletividade, as sadas de ons tambm seriam facilitadas. A seletividade das membranas biolgicas uma propriedade essencial para a homeostase e o crescimento celular e, portanto, os efeitos surfactantes no devem ser responsveis pelo aumento do crescimento in vivo uma vez que a funo de barreira seletiva das membranas, responsvel pela manuteno da estabilidade e homeostase celular, no levada em considerao (Canellas et al. , 2002; Faanha et al. , 2002). Alm disso, cabe aqui uma pergunta: como tratar os resultados obtidos em meio axnico, sem nutrientes, com razes expostas a um tempo curto (poucos minutos), diferentes concentraes de substncias hmicas com baixo teor de cinzas (<1%) e a observao de um rpido crescimento radicular (Ramos et al., 2005)? Uma srie de trabalhos foi conduzida a partir dos anos 1960 com o objetivo de avaliar o efeito de substncias hmicas sobre os mais distintos tipos de enzimas e de atividade enzimticas. A tnica geral desses experimentos consistia no isolamento das enzimas (a maior parte pelos mtodos de extrao ou por eletroforese) e na reao da enzima com o seu substrato especfico na ausncia (controle) e na presena de diferentes doses de substncias hmicas. Neste captulo, este tipo de ensaio ser tratado como experimentos in vitro . Algumas das enzimas analisadas foram categorizadas na Tabela 10.3, segundo os respectivos eventos metablicos em que participam. possvel perceber que a ao dos cidos hmicos envolve estmulos relacionados hidrlise e converso de acares, proteo contra radicais livres e pelo metabolismo do fosfato. Mas possvel seguir mais adiante implementando um exerccio de compilao desses dados, buscando um sentido fisiolgico unificador, at chegar a uma rota metablica (mesmo que essencialmente especulativa), para a ao destas substncias. Um modelo que poderia adequar-se aos dados descreveria uma ao ordenada na qual os cidos hmicos ativariam a fosforilao oxidativa, gerando assim a energia necessria (sob forma de sntese de ATP) para as modificaes da arquitetura radicular e para o amento da capacidade de absoro ativa de nutrientes. Paralelamente, ocorreria uma regulao dos sistemas de proteo da clula contra radicais livres, os quais poderiam ter seus nveis celulares aumentados pela sobrecarga dos sistemas de sntese de ATP mitocondriais. Vrias enzimas da via do
229

catabolismo de acares e protenas transportadoras so reguladas por eventos de fosforilao e defosforilao, que poderiam estar relacionados ativao tanto de fosforilases quanto de fosfatases especficas. Todavia, esses experimentos esto sujeitos a crticas: em condies naturais, os sistemas enzimticos esto protegidos dentro da clula do contato direto com a disperso coloidal contendo as substncias hmicas do solo. Talvez isso explique a aparente contradio dos dados da Tabela 10.3 que mostra inibio das enzimas glicolticas e ativao das oxidases da cadeia respiratria mitocondrial. Assim, ensaios in vitro no refletem a ao efetiva que ocorreria em nvel celular, exceto se houvesse um livre acesso das substncias ao citoplasma. Um modo simples de responder tal questo constitui a experimentao in vivo, definida aqui como tratamento das plantas ou rgos das plantas com substncias hmicas, seguida da anlise de alteraes dos eventos bioqumicos proporcionados pelo tratamento. Apesar dos ensaios in vivo, possurem claras limitaes em termos de simulao do fenmeno natural, incorporam alguma vantagem em relao aos experimentos in vitro, ao desconsiderar os efeitos de massa e de ao surfactante das concentraes elevadas de substncias hmicas nos meios de reao. Cabe ressaltar aqui que o teor de substncias hmicas em soluo, geralmente, muito baixo no solo (Stevenson, 1994). Mas qual seriam os principais alvos bioqumicos envolvidos na ao de promoo do enraizamento observado pelas substncias hmicas? Essa capacidade de estimular o crescimento e a atividade enzimtica foi definida aqui como a bioatividade das substncias hmicas. Ento, seria possvel obter-se um marcador bioqumico da atividade das substncias hmicas? Como as membranas biolgicas das clulas epidrmicas radiculares so a primeira fronteira entre o organismo vivo (raiz) e a soluo do solo, as protenas transmembranares seriam alvos naturais para tal pesquisa. Nas membranas celulares, esto localizadas diferentes tipos de enzimas (inclusive algumas multifuncionais), diversos tipos de protenas transportadoras e receptores de sinais. Dentre estas, inmeras entidades proticas, que por suas funes especficas, poderiam estar diretamente implicadas na percepo e respostas subseqentes da clula vegetal a fatores ambientais, como as substncias hmicas. Neste contexto, destacam-se os receptores hormonais e os sistemas primrios de transporte de ons. Especula-se que existam vrios receptores com diversidade de especificidade e de ao, mas, como sua abundncia na membrana parece ser minoritria frente aos transportadores e dado que poucas destas molculas foram identificados at ento, no existem evidncias ou estudos sobre a identificao de possveis receptores celulares para substncias hmicas. Por outro lado, os sistemas primrios de transporte de H + da clula vegetal so representados por uma famlia multignica de H +-ATPases do tipo P, caracterizadas como protenas muito abundantes (consistindo de 1 10% da protena da membrana plasmtica). A atividade destas enzimas influencia no s o funcionamento dos transportadores secundrios (uniporteres, simporteres e antiporteres) como tambm o funcionamento de canais e de receptores dependentes do potencial de membrana mantido principalmente pelo gradiente eletroqumico de H +, gerado por estas bombas. E talvez por isso, vrias evidncias tm demonstrado que a H+-ATPase de membrana plasmtica est diretamente implicada nas respostas da planta s substncias hmicas.

230

Tabela 10.2: Efeito de cidos hmicos sobre a absoro de ons (> aumento em relao ao controle; < diminuio em relao ao controle; - sem resposta).

231

232

Bioatividade das substncias hmicas Antes de serem abordados os efeitos fisiolgicos promovidos pelos AH, necessrio discutir a importncia e as funes das bombas de H+, localizadas na membrana plasmtica e na membrana vacuolar (tonoplasto), responsveis pela gerao do gradiente eletroqumico que energiza os transportadores de ons e molculas, utilizados na absoro de nutrientes pelas clulas. As bombas de H+ so responsveis, ainda, pela acidificao do apoplasto e pela turgescncia vacuolar, condies necessrias para a expanso celular. O papel da H+-ATPase de membrana plasmtica e o mecanismo do crescimento cido A H+-ATPase de membrana plasmtica exerce um papel central no crescimento das clulas vegetais e em sua nutrio mineral. Essa enzima funciona como uma bomba de H+ acionada pela hidrlise de ATP, sendo responsvel pelo transporte primrio de H+ do interior da clula para o apoplasto e, conseqentemente, pela formao do gradiente de H+, gerado atravs da membrana plasmtica. Este gradiente eletroqumico energiza o transporte secundrio de ons e outros metablitos contra um gradiente de concentrao. Vrios dos principais micro e macronutrientes vegetais se encontram em baixas concentraes (nano ou micromolares) na soluo do solo e precisam ser transportados para o interior celular onde esto centenas de vezes mais concentrados. Para isto, existem na membrana plasmtica vrias protenas transportadoras especficas capazes de acoplar a dissipao do(s) componente(s) eltrico e/ou qumico do gradiente de H+, geradas pelas bombas ao co-transporte dos H+ com estes ons. De fato, o principal papel imputado H+-ATPase de membrana plasmtica na fisiologia das plantas, sempre foi o de ativar o transporte secundrio de ons (Sondergdard et al., 2004). A absoro de ons da soluo do solo pode acontecer contra ou a favor de um gradiente de concentrao e, em qualquer dos casos, o gradiente de H + pode exercer forte influncia, quer seja energizando o transporte ativo pelos transportadores tipo simporte, uniporte ou antiporte, quer seja regulando a abertura e o fechamento de alguns canais responsveis pelo transporte passivo de ons (Figura. 10.1). Alm dos ons, o gradiente eletroqumico de H+ tambm fornece a energia necessria para o transporte de alguns compostos orgnicos (Maathuis et al., 2003). Um exemplo j bem caracterizado o do transportador de sacarose envolvido no transporte de acar do apoplasto para os vasos do floema (Morsomme & Boutry, 2000). A H+-ATPase a bomba de ons da membrana plasmtica mais importante nas clulas vegetais e fngicas (Palmgren, 1991). A caracterstica comum das ATPases do tipo P a formao de um intermedirio fosforilado (da a classificao Tipo P PO42-), identificvel durante o ciclo cataltico da enzima, na qual o fosfato terminal do ATP transferido a um resduo aspartato na protena (Figura 10.1C). O ortovanadato (HVO42-) um anlogo do fosfato que inibe fortemente esse tipo de ATPase por competio pelo stio de fosforilao (Sze, 1985). A H+-ATPase do tipo P presente na membrana plasmtica de clulas vegetais e fngicas, composta por uma nica cadeia polipeptdica com aproximadamente 100 kDa (Serrano, 1989). A reduo do pH do apoplasto dependente da atividade das H+-ATPases que acoplam o transporte de H+, atravs da membrana plasmtica, hidrlise de ATP. Alm de gerar o gradiente eletroqumico necessrio para o transporte de ons e outros metablitos atravs das membranas, esta enzima participa de outras funes essenciais ao crescimento da planta, tais como, tolerncia salinidade e regulao do pH intracelular (Palmgren, 1991; Morsomme & Boutry, 2000; Sondergaard et al., 2004). Para ocorrer o crescimento vegetal, preciso, tambm, que as clulas se expandam fisicamente
233

e, ao mesmo tempo, mantenham sua integridade mecnica devido alta presso de turgor. Nesse sentido, a ao combinada do vacolo com a parede celular gera o turgor, a fora motriz para a tenso hidrulica e para o crescimento (Marty, 1999). A expanso celular favorecida pela ao de algumas enzimas especficas (e.g., expansinas) que em pH menor ou igual a 4,5, promovem o aumento da plasticidade da parede celular pela liberao momentnea de pequenos segmentos da matriz de glucanos ligados s microfibrilas de celulose (Cosgrove, 1998; 2000).

Raiz

A
H+

+ + ++ - - - CANAIS

gua nions

ATP

ADP + Pi

ctions

uniporte

simporte
CARREADORES

antiporte

Figura 10.1. Transporte de nutrientes na raiz. A: a H+-ATPase est sempre ativa nas interfaces entre a rota simplasto e apoplasto (Sondergaard et al., 2004). B: Os nutrientes podem ser transportados tanto por protenascanais quanto por protenas carreadoras (transporte primrio e secundrio atravs da membrana plasmtica, Morssome & Boutry, 2000). C: topologia predita para a H+-ATPase.
234

O papel das bombas de H+ do tonoplasto Os vacolos das clulas vegetais so organelas multifuncionais que possuem um papel central no desenvolvimento celular. So compartimentos lticos que tambm funcionam como reservatrios de ons e metablitos. So imprescindveis para o processo de detoxificao e homeostase celular, pois esto envolvidos nas respostas da clula ao ambiente e fatores biticos promotores de estresses (Marty, 1999). Provavelmente, o papel mais importante do vacolo central o de aumentar o tamanho da clula (Taiz, 1992). Segundo esse autor, de maneira geral, as clulas vegetais sofrem um aumento de volume entre 10 a 20 vezes durante a expanso celular. A maior parte deste aumento promovido pela absoro de gua. As funes que o vacolo desempenha so dependentes das protenas presentes na membrana vacuolar (tonoplasto) (Figura 10.2). O movimento de ons e gua a favor do potencial osmtico alcanado devido presena de canais especficos, principalmente, aquaporinas (Maurel, 1997). O fluxo de ons, gua e metablitos, atravs do tonoplasto, so cruciais para a expanso da clula e o crescimento da planta, transduo de sinais, homeostase e operao das vias metablicas (Sze et al., 1992).

ATP

PP i

P AT -X GS

H+ Bombas H
+

Transportadores

Canais

VACOLO CITOPLASMA

Figura 10.2. Processos de transporte no tonoplasto: modelo de transportadores A: bombas de H+ primrias; B: transportadores secundrios de H+; C: canais (Adaptao de Marty, 1999).

O tonoplasto regula o trnsito de ons e metablitos entre o citosol e o vacolo, de maneira anloga regulao realizada pela membrana plasmtica no controle da absoro e excreo da clula. Porm, o tonoplasto possui duas enzimas que fornecem energia para os processos de transporte: a H+-ATPase vacuolar (V-ATPase ou ATPases do tipo V, Figura 10.3) e a H+-pirofosfatase vacuolar (H +-PPase ou V-PPase) (Rea & Sanders, 1987). De acordo com o modelo quimiosmtico de transporte de soluto dependente de energia, a fora prton motora, gerada tanto pela H+-ATPase quanto pela H +-PPase, pode ser usada para conduzir o transporte secundrio de solutos (Rea & Sanders, 1987; Taiz, 1992; Maeshima, 2000). A presena das duas bombas (V-ATPase e H +-PPase) na mesma membrana tem sido questo de controvrsia. Postula-se que o papel principal da V-ATPase seria o da manuteno do gradiente
235

eletroqumico de H+, enquanto a H+-PPase atuaria como um sistema auxiliar de bombeamento de H+ (Taiz, 1992) (Figuras 10.4). A H+-PPase a principal bomba de H+ do vacolo em sementes e tecidos mais jovens, enquanto a V-ATPase a principal responsvel pelo bombeamento de H+ em tecidos mais maduros (Faanha & De Meis, 1998; Maeshima, 2000). A V-ATPase pertence a uma famlia de bombas de H + dependentes de ATP responsvel pela acidificao de compartimentos intracelulares nas clulas eucariticas (Wang et al. , 1986; Sze et al. , 1992; Kawasaki-Nishi et al. , 2003). As V-ATPases so enzimas heteromultimricas constitudas de um complexo perifrico cataltico (V1) e de um complexo integral transmembranceo responsvel pela translocao de ons (V 0) (Sze et al. , 1992; Huss et al. , 2002). As V-ATPase so inibidas por diferentes substncias: os ons nitrato parecem interagir com o dommio protognico, levando-o a ser menos sensvel hidrlise de ATP no stio cataltico (Tu et al. , 1987); os antibiticos bafilomocina A1 (White, 1994) e concanamicina A - este mais efetivo - inibem de maneira especfica a V-ATPase (Huss et al. , 2002). Ambos os inibidores se ligam no domnio V0 da V-ATPase. A bafilomicina interage com a parte hidrofbica (V0) da V-ATPase e a concanamicina liga-se subunidade c, tambm localizada no domnio V0. As V-ATPases possuem outras funes, alm da acidificao do vacolo, e so consideradas as bombas de H+ mais versteis existentes na natureza. A H+-PPase tambm promove reduo do pH e torna o potencial, no interior das vesculas, positivo (Wang et al. , 1987). Segundo Maeshima (2000), esta enzima possui trs caractersticas peculiares: (i) Consiste em um polipeptdio com massa molecular de cerca de 80 kDa; (ii) utiliza o pirofosfato inorgnico (PP i) como substrato de baixo custo energtico; (iii) coexiste com a H+-ATPase numa mesma membrana vacuolar nas clulas vegetais (Rea & Sanders, 1987; Maeshima 2000) (Figura 10.2). A atividade da H +-PPase inibida por fluoretos (Maeshima & Yoshida, 1989).

Figura 10.3. Mecanismo de rotao proposto para o transporte de prtons dependente de ATP promovido

pela V-ATPase: A hidrlise de ATP no domnio V1 parece levar a rotao do eixo central (composto pelas subunidades D e F), o qual em resposta leva a rotao do anel proteolipdico composto pelas subunidades c, c e c , localizados na subunidade V0 (Adaptado de Kawasaki-Nish et al., 2003).
236

Figura 10.4. Produo de PPi e ATP e a relao com a H+-ATPase e H+-PPase da membrana vacuolar. O PPi fornecido com um subproduto da biossntese de macromolculas, tais com RNAs, protenas e celulos e -oxidao de cidos graxos (Adaptaoo de Maeshima, 2000).

Efeitos das substncias hmicas sobre as bombas de H+ e o crescimento vegetal O estudo da ao direta das substncias hmicas sobre o metabolismo e o crescimento das plantas tem se concentrado, principalmente, na ao dos cidos flvicos, frao hmica considerada de menor massa molecular (Vaughan & Malcolm, 1985). O fato de uma substncia to grande como os cidos hmicos (na ordem de micrmetros) (Cameron et al., 1972) atravessar poros ou espaos aparentes no apoplasto (na ordem de nanmetros) no era concebido. No entanto este panorama tem mudado ultimamente com a concepo emergente do arranjamento supra-estrutural de substncias hmicas. Este modelo preconiza que compostos de reconhecida capacidade de regulao e estimulao do crescimento vegetal (hormnios vegetais, por exemplo) possam estar fracamente unidos supra-estrutura das substncias hmicas. Assim sendo, podem ser liberados para a soluo do solo, por uma simples variao de pH na interface das razes decorrente, por exemplo, da exsudao de cidos orgnicos como experimentado por Faanha et al. (2002). Varanini et al. (1993) verificaram, por meio de ensaios in vitro, um estmulo na atividade da H+-ATPase de membrana plasmtica (MP) por SH de baixo peso molecular. Sabe-se, no entanto, que AH podem promover o desenvolvimento vegetal na mesma proporo quando no superior aos cidos flvicos (Vaughan & Malcolm, 1985). Faanha et al. (2002) e Canellas et al., (2002) observaram alteraes significativas na arquitetura radicular de plantas tratadas com cidos hmicos. Foi observado um forte estmulo no crescimento radicular, nmero de stios de mitose, nmero de razes emergidas e rea superficial. O crescimento radicular foi acompanhado da estimulao da atividade da H+-ATPase de MP e da sua sntese. Um resumo desses resultados apresentado na Figura 10.5
237

Figura 10.5 Efeito de cidos hmicos (AH) sobre a morfologia radicular (A e B) e sobre a H+-ATPase de membrana plasmtica de vesculas isoladas de razes de milho (C, D e E): Efeito de concentraes diferentes de AH sobre o comprimento (barra mais clara) e sobre a rea superficial da raiz (barra mais escura) (A); Efeito dos AH (barras mais escuras) sobre o padro de crescimento radicular quantificado pelo nmero de stios de razes laterais (B); efeito estimulatrio dos AH sobre a hidrlise de ATP (C) e transporte de prtons (C) sensveis a vanadato da H+-ATPase de membrana plasmtica. As linhas pontilhadas representam a adio de AH no meio; wersten blot de membranas plasmticas isoladas de razes de plntulas de milho tratadas (AH) ou no (Con) com AH (E). (Adaptado de Canellas et al., 2002).

Zandonadi et al. (2006) verificaram tambm estmulo de cidos hmicos sobre a atividade de bombas de H+ localizadas no tonoplasto. At ento, a possibilidade de cidos hmicos penetrarem no interior celular e exercer qualquer tipo de regulao de enzimas transmembranares do tonoplasto parecia limitada pela concepo de estrutura macromolecular das substncias hmicas (discutidas no captulo 2). Zandonadi et al. (2003) obtiveram diferentes fraes de AH isolados de vermicomposto, pelo uso da cromatografia por excluso de tamanho, e verificaram que o estmulo sobre a H+-ATPase de membrana plasmtica menor para cada uma das fraes (tanto de alto como de baixa massa molecular), sugerindo que, mais do que o tamanho molecular, a conformao e a mobilizao de subunidades funcionais parecem estar relacionadas com o aumento observado na atividade desta enzima, promovido pelos AH no fracionados. Pode-se estar lidando com um fenmeno complexo no qual a atividade de estimulao do enraizamento, por parte de componentes hmicos individuais mais homogneos (como os obtidos com a cromatografia por excluso de tamanho) parece no ter o mesmo efeito do que a mistura completa e heterognea de todas as fraes (AH no-fracionados), sugerindo que a bioatividade das SH pode emergir da interao ou da ao sinrgica destes componentes. A busca de uma relao entre estrutura-atividade de
238

substncias hmicas foi levada a cabo inicialmente por Schnitzer & Poapst (1967) e, mais tarde, por Piccolo et al. (1992), que correlacionaram o teor de grupos cidos (principalmente COOH) com o crescimento radicular. Apesar de matematicamente ser encontrada uma relao significativa, o contedo de H+, livres em soluo per si explicaria pouco a ao das substncias hmicas em eventos metablicos associados ao crescimento radicular. Produziu-se, ento, derivados acetilados (com anidrido actico em piridina) e metilados (diazometano em metanol) (detalhes dessas reaes podem ser vistas no captulo 1) de cidos hmicos isolados de vermicomposto e no foi encontrado relao entre o contedo de H+ livres e a estimulao na H+-ATPase, isolada de membrana plasmtica de plntulas de milho tratadas com os cidos hmicos e seus derivados. Uma parte desse experimento mostrada nas Tabelas 10.4. e 10.5.
Tabela 10.4 Acidez total, carboxlica e fenlica (obtida por diferena) dos cidos hmicos isolados de vermicomposto (AHV) e de seus derivados metilados (Met) e acetilados (OAc).

cidos hmicos AHV AHVMet AHVOAc

Acidez total (cmol Kg-1) 666 86 158

Acidez carboxlica (cmol Kg-1) 496 32 87

Acidez fenlica (cmol Kg-1) 170 54 71

Tabela 10.5. Bioatividade dos cidos hmicos isolados de vermicomposto (AHV) e de seus derivados metilados (Met) e acetilados (OAc), avaliada pelo efeito sobre o desenvolvimento radicular (massa, rea e comprimento radicular total) e da atividade vanadato-sensvel da H +-ATPase da frao microssomal, isoladas de razes de plntulas de milho, crescidas por 7 dias em soluo com concentrao de 20 mg C de AH L-1 em ClCa2 2 mM
Desenvolvimento radicular T r a t a m e n t os Massa (mg) controle AHV AHVMet AHVOAc F CV 24,2 (100%) C 39,6 (164%) AB 42,2 (174%) A 30,6 (126%) BC 7,25** 15,33 rea (u.a) 33.312 (100%) C Comprimento total (u.a) 5.364 (100%) B 10.089 (188%) A 11.244 (210%) A 8.684 (163%) A 4,108** 22,4 Atividade vanadato sensvel da H+ATPase da frao microsomal (mol Pi mg ptn-1 min-1) 0,64 (100%) B 2,72 (453%) A 2,43 (405%) A 2,98 (497%) A 10,12** 6,54

56.669 (170%) AB 58.205 (175%) A 45.925 (138%) AB 4,427** 18,64

Mdias seguidas de letras diferentes so estatisticamente diferentes pelo teste de Tukey (P<0,05). A rea e o comprimento radicular foram obtidos pela anlise da imagem digitalizada das razes (300 dpi, 1bite, modo preto & branco) pelo programa computacional Delta T-Scan. U.A. representam unidades arbitrrias de rea e comprimento

Muscolo et al. (1998) verificaram que SH de baixo peso molecular apresentaram atividade tpica e equivalente a do cido 3-indol actico (AIA), podendo operar estimulando a produo endgena desse fitormnio ou inibir as oxidases responsveis pela sua degradao (Mato et al., 1972). Faanha et al. (2002) verificaram estmulo na sntese da H +-ATPase de membrana, promovida por AH, e indicaram as bombas de H + como importantes marcadores bioqumicos da bioatividade das substncias hmicas. Esses autores acreditam que subunidades estruturais de AH poderiam acessar receptores na superfcie ou no interior da membrana plasmtica das clulas das razes,
239

sntese de H+-ATPase de membrana plasmtica isoladas de razes de milho correlacionada presena de auxina (AIA) em cidos hmicos, com a alterao no padro de desenvolvimento radicular. Confirmando essas constataes, Quaggiotti et al. (2004) ratificaram a presena de AIA na estrutura de SH por meio de um ensaio imunolgico. Foi demonstrado que fraes hmicas de baixo peso molecular estimulam a absoro de nitrato, possivelmente pelo aumento da isoforma Mha2 da H+ATPase de membrana plasmtica. Os trabalhos acima mencionados explicitam a notria estimulao que as SH, especialmente AH e AF, exercem sobre o desenvolvimento de razes de plntulas e sua possvel associao com a induo da expresso da enzima que representa o sistema primrio de transporte de H+ da membrana plasmtica e, conseqentemente, da hidrlise de ATP e do transporte de H + estudados, principalmente em vesculas microssomais. O aumento na atividade das bombas de H+ parece favorecer a induo da emisso de plos radiculares, de razes laterais finas, o que resultaria, principalmente, no aumento na rea superficial do sistema radicular (Figura 10.6). A Figura 10.6 apresenta, esquematicamente, um postulado sobre a bioatividade das SH. A teoria baseia-se num processo em que grupamentos com atividade auxnica, presentes no arranjamento supraestrutural, ou nos agregados hmicos, poderiam ser liberados em funo da exsudao de cidos orgnicos (e.g., cido actico) que notoriamente promove o rompimento das interaes entre os componentes das SH. Essa dissociao causa maior mobilidade dos componentes da complexa e heterognea mistura de substncias hmicas, como observado por Simpsom (2002) no seu experimento com RMN em difuso de campo. Entre esses componentes mais lbeis, esto os compostos nitrogenados, do tipo auxinas, que podem sensibilizar receptores especficos na membrana plasmtica, desencadeando cascatas de sinalizao que culminariam com a ativao da transcrio dos genes que codificam as isoformas especficas da H+-ATPase de membrana plasmtica, que so superexpressas na superfcie das clulas radiculares (observe a Figura 10.5E). O transporte de H+ em direo ao apoplasto compensado pela entrada de ctions atravs da membrana para o interior da clula, causando, assim, os efeitos secundrios da auxina (e.g., aumento do turgor e crescimento celular). Ambos os processos levam a um aumento da atividade de enzimas que torna a parede celular mais plstica, facilitando o elongamento celular (Teoria do crescimento cido - Hager et al., 1971). Os AH podem estar envolvidos nessas rotas de estimulao do bombeamento de H+, mediado pela H+-ATPase de membrana plasmtica. O arranjo supramolecular dos cidos hmicos sofre mudanas estruturais induzidas pelos exsudatos radiculares, liberando subunidades bioativas com atividade axnica que sensibilizariam receptores tanto na membrana plasmtica quanto no citoplasma, desencadeando respostas tpicas da ao deste fitormnio. A exsudao radicular de cidos orgnicos bem como a entrada de IAA na clula vegetal so processos que tm sido descritos como dependentes da atividade da H+ATPase de membrana plasmtica. A ativao desta bomba de H + seria, ento, um evento inicial que desencadearia processos sinrgicos de liberao de cidos orgnicos da clula vegetal que, por sua vez, induziriam a liberao de IAA presente na macroestrutura dos AH, e ento estas molculas teriam sua entrada na clula potencializada. A ativao da ATPase levaria, em ltima instncia, ao aumento da absoro de nutrientes, da expanso celular, e participaria ainda de eventos de sinalizao, via modulao, de canais dependentes do potencial de membrana. Neste contexto, as molculas de AH se apresentam como reservatrios interativos de molculas com atividade auxnicas, capazes de liberar tais molculas durante um dilogo qumico/bioqumico com as razes.
240

cidos orgnicos cidos hmicos (exudatos radiculares)

Sub-unidades bioativas
COOH

H OO

N H

Auxina

Citosol
N H

Ncleo

RNAm

Membrana plasmtica Parede celular

Figura 10.6. Interao de molculas bioativas derivadas de cidos hmicos (AH) com atividade auxnicas

sobre a clula vegetal: O arranjamento supra-estrutural dos AH (Piccolo, 2002) pode ser rompido pelos cidos orgnicos exsudados pelas razes (Taiz & Ziegler, 1992). Pequenas unidades estruturais portadoras de atividade hormonal como, por exemplo, substncias do tipo auxinas (j foi observado que uma srie de compostos orgnicos apresenta atividade similar das auxinas). Existem dois principais modelos para extruso de H+ induzida por auxina (AIA): (1) A hiptese de sntese, ou pr-transcripcional, que prev a expresso de genes induzidos por auxina que codificam a sntese de H+-ATPases. A induo da sntese da H+ATPase ocorreria mediante cascata de sinalizao desencadeada pela ligao do IAA a receptores citoplasmticos TIR1 (Dharmasiri et al., 2005; Observe esquerda uma fotomicrografia de imunomarcao fluorescente da seo transversal de razes de milho, com imagem de sinal amplificado, evidenciando agregados de partculas de AH no lmem de vasos do protoxilema. Aumento de 750X.); (2) A hiptese de ativao ps-transcripcional da H+-ATPase que se baseia na ligao do IAA a receptores ABP1 Ruck et al., 1993; Napier et al., 2002) (localizada na superfcie celular ou na face interna da membrana plasmtica), os quais interagem com a H+-ATPase, estimulando o bombeamento de H+ e atuando diretamente sobre a enzima. Ambos os modelos podem ocorrer simultaneamente ou de forma alternada numa mesma clula e existem evidncias que indicam a possibilidade de tanto os receptores ABP1 quanto os TIR1 poderem induzir regulaes, tanto pr quanto ps-transcripcionais, nas membranas celularesl.
241

OOH

OO H

OO H
H OO
OOH

2 H
+

COOH

ABP1

N H

ATP
COOH

ADP + Pi

A possibilidade de confirmar uma hiptese dessa natureza surgiu com o desenvolvimento de plantas mutantes e transgnicas. A utilizao de plantas mutantes insensveis ou supersensveis a ao de um determinado hormnio uma alternativa segura para a compreenso das vias de sinalizao envolvidas no controle de uma determinada resposta fisiolgica (Coenem et al., 2002). Dessa maneira, busca-se um mutante bem caracterizado quanto sua alterao na resposta auxina no que concerne dependncia deste hormnio no processo chamado crescimento cido. O tomateiro mutante diageotropica (dgt) foi bem caracterizado quanto sua resistncia a auxina (Kelly & Bradford, 1986; Muday et al., 1995). Kelly & Bradford (1986) demonstraram a reduo da sntese de etileno e do alongamento de hipoctilos de tomate dgt. Coenem et al. (2002) comprovaram que a extruso de H+, induzida por auxina, em tomate dgt reduzida. Apesar da importncia deste modelo para o entendimento da maneira pela qual as substncias hmicas poderiam agir no nvel de sinalizao celular, no h relato da utilizao de mutantes para a determinao da bioatividade de substncias hmicas. Em trabalho recente, mutantes de tomateiro porte micro (MT) com a mutao dgt, e razes transformadas geneticamente, supersensveis a auxinas ( eg. MT8196), foram testados na presena de cidos hmicos (Zandonadi, 2006). Os AH, assim como as auxinas, no induziram o elongamento de pecolos de tomate dgt (Fig 10.7 A), como ocorre nos pecolos de plantas-controle, indicando que parte da ao dos AH, neste fenmeno, est relacionada com o efeito promovido pela auxina. Alm disso, o processo de diferenciao observado pela quantificao das razes emergidas tambm corrobora a confirmao do efeito auxnico dos cidos hmicos sobre o processo de enraizamento de tomateiro (Fig. 10.7 B). A atividade e o transporte de H+ das principais bombas da membrana plasmtica e do tonoplasto tambm foram monitorados (Fig 10.8). Um passo fundamental para o aumento da extensibilidade da parede celular, necessrio ao processo de expanso, a ativao e sntese de H+-ATPase de membrana plasmtica e este processo pode ser desencadeado pela ao da auxina (Hager et al., 1991; Frias et al., 1996). A H+-ATPase de membrana plasmtica foi estimulada nas plantas de tomate MT. Nas plantas mutantes insensveis auxina no foi observado qualquer estmulo significativo sobre a bomba. Por outro lado, nas razes transgnicas supersensveis auxina, tratadas com cidos hmicos, o aumento da atividade da extruso de H+ foi ainda maior do que nas razes de plantas com gentipo MT. Os resultados obtidos permitiram afirmar que o modo de ao dos cidos hmicos dependente, pelo menos em parte, da via de transduo de sinal de auxina.

103,5 103,0 102,5 % Controle 102,0 101,5 101,0 100,5 100,0 99,5 0 20 40 60

60 razes 50 40 30 ramif.

MT dgt

20 10 0 MT MTAH dgt dgtAH MT8196 MT8196AH

cido Hmico (ppm)

Figura 10.7. Expanso de pecolos de MT (sensveis auxina) e dgt (pouco sensveis auxina) na presena de concentraes crescentes de cidos hmicos (A). Nmero de razes e ramificao das razes laterais de tomate MT (sensvel a auxina), dgt (pouco sensveis auxina) e MT8196 (supersensveis auxina) na presena de 20 mg CAH L-1 (B).
242

dgt mol Pi mg -1 min -1 5,00 4,00

dgtAH

MT

MTAH

MT8196

MT8196AH

dgt 50 40 V0 30 20 10 0

dgtAH

MT

MTAH

MT8196

MT8196AH

3,00 2,00 1,00 0,00

Figura 10.8. Atividade hidroltica da H+-ATPase de membrana plasmtica e velocidade inicial (V0) do transporte de H+ de vesculas isoladas de razes MT (sensveis auxina), dgt (pouco sensveiz auxina) e MT8196 (supersensveis auxina) cultivadas ou no na presena de cidos hmicos (20 mg CAH L-1).

O modelo exposto aqui para explicar a bioatividade das substncias hmicas entra, algumas vezes, em conflito com as teorias mais comumente usadas para justificar o efeito de promoo do desenvolvimento radicular de plantas, seja devido concepo estrutural das substncias hmicas, seja por atribuir planta (e exsudao de cidos orgnicos) um protagonismo pouco descrito. De acordo com Bachelar (1996), nosso esprito tem a tendncia irresistvel de considerar como mais clara a idia utilizada com mais freqncia. Chega um momento, afirma Bachelar, em que se prefere que se confirme o saber adquirido quilo que o contradiz. O conhecimento cientfico adquirido pelo esforo cientfico pode declinar se, conforme Ribeiro (1998), caso no se difundam surtos de inovaes culturais que promovam a dinamizao da vida como conseqncia do desenvolvimento das evolues tecnolgicas. O poder transformador das idias, da capacidade de construo de uma nova ordem tecnolgica, mediante a elaborao e disseminao de um novo ofcio de agricultura, deve ser colocado junto ao esforo cultural e educacional necessrios para a construo de alternativas ao processo civilizatrio em curso. Como se ver mais adiante no captulo 11, a Agroecologia pode gerar as novas bases epistemolgicas necessrias a esse novo projeto de desenvolvimento. O estudo e o reconhecimento dos alvos bioqumicos da ao fisiolgica das SH adquire um sentido estratgico no uso e manejo da matria orgnica nos sistemas agroecolgicos. Uma agricultura baseada no respeito ao ambiente e em relaes sociais justas necessita tambm de uma base cientfica para a sua sustentao. A compreenso da bioatividade dos compostos hmicos uma pequena parte desse mar de conhecimentos que est para ser sistematizado e construdo.

243

c a p t u l o
O uso e manejo da matria orgnica humificada sob a perspectiva da Agroecologia
Luciano P. Canellas Jader G. Busato David J. Caume

11

A idia central apresentada neste captulo, que fecha o ciclo deste estudo, a de que a matria orgnica do solo pode ser adotada como um indicador mensurvel para avaliar, relativamente, a qualidade e a sade do ambiente de produo agrcola. O contedo e a qualidade da matria orgnica do solo so um reflexo da histria social do seu uso e das condies ecolgicas de sua formao. Como tal, seu manejo no pode ser desvinculado de fatores e compromissos ideolgicos que condicionam uma determinada ao, mesmo que isso possa soar estranho entre os profissionais da tcnica agronmica. Tendo em conta a Agroecologia como uma Cincia (ou disciplina cientfica) e o solo como seu elemento fundamental, na qual o homem se encontra com a natureza e neste ambiente so processados os fluxos de massa e energia estudados no Captulo 4 busca-se, agora, discutir as inter-relaes entre os modos de produo (caracterizado pela dominao social e pelo conjunto de tcnicas necessrias para obter um determinado produto agrcola) e os parmetros de qualidade da matria orgnica. Mais do que um valor quantitativo inicial e um final timo ou desejvel, o importante nesse indicador o processo, como a qualidade da matria orgnica melhorada e quais as conseqncias desse processo para a emancipao dos agricultores. Para tanto, fundamenta-se, na primeira parte do texto, as bases conceituais dos sistemas Agroecolgicos e, numa segunda parte,so mostrados exemplos de reflexos de prticas de manejo do solo que resultam em aumento da qualidade do mesmo. Somente as prticas de manejo isoladas do contexto mais amplo no refletem uma nova opo de produo e sim, a adaptao do modelo tradicional de Agronomia a presses ecologistas superficiais e reducionistas. Essa crtica aparece tambm na primeira parte do texto. Procura-se ainda utilizar parmetros universais para a avaliao das prticas que possam ter, depois de contextualizadas, utilidade para um determinado sistema Agroecolgico. Para isso usa-se o conceito de que o aumento de contedo de matria orgnica alcalino solvel condensada representa, em termos comparativos com as outras fraes humificadas solveis, um aumento terico do nvel de entropia. Isso posto, pode-se dizer tambm que ao realizar a sntese abrangente da totalidade da relao do homem com o mundo pelo vis da Agroecologia um indicativo que a estrutura dessa relao perpassa pela ideologia. Mesmo mediando todos os processos ecolgicos que ocorrem no solo pela regulao do fluxo de massa e energia, a matria orgnica, ou melhor, seu contedo, no pode ser usado como indicador de processos sem que isso implique debruar-se sobre questes filosficas, econmicas e polticas, mesmo que seja difcil ou pouco importante, como sugere a tecnologia agrcola convencional.
Introduo

Uma srie de trabalhos anteriores j demonstrou bem as conseqncias do processo modernizador da agricultura brasileira levada a cabo aps o golpe militar de 19641 . De acordo com a viso liberal (ainda hegemnica), a chave da superao do atraso e da
1

. Ver, por exemplo, MARTINE, George e GARCIA, Ronaldo Coutinho. Os impactos sociais da modernizao agrcola. So Paulo, Caets, 1987.

244

misria no campo seria a adoo de tecnologias modernas compatveis com o tardio avano industrial no Brasil. Para essa concepo, s a tecnologia capaz de promover o bem-estar social, uma vez que o aumento da tecnologia igual maior produo e, portanto, maior produtividade e rentabilidade. Os adeptos do chamado produtivismo tiveram a cincia e a tcnica como suportes nessa empreitada. Os problemas de produo deveriam ser resolvidos com gerao de novas e mais tecnologias (adubos mais eficientes, novas sementes, agrotxicos inteligentes etc) nos laboratrios das Universidades e da EMBRAPA (Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria, que no por acaso foi criada em 1972 no auge do perodo modernizador). As conseqncias sociais e ambientais desse modelo so, ainda hoje, sentidas dramaticamente. O processo de modernizao foi seletivo e excludente, gerando desigualdades sociais com uma envergadura pouco comparvel na histria moderna. Durante os anos 1960-1980, migraram, do campo para a periferia das grandes cidades, uma quantidade de brasileiros equivalente ao total da ento populao da Argentina. Os ganhos de produo e produtividade, porm, no foram compatveis com os recursos investidos. A Figura 11.1 apresenta, j para a dcada de 1990, o crescimento do consumo de fertilizantes destinados lavoura de gros e a produo bruta da mesma (tanto o consumo como a produo medidos em toneladas Mg). So evidentes as contradies da concepo produtivista que promete que, quantos maiores forem as aplicaes de adubos, maiores sero as quantidades produzidas.
16

14

12

10

1991

1992

1993

1994

1995

1996

1997

1998

1999

Figura 11. 1. Evoluo da produo mdia de gros no Brasil ( n em Mg ha-1) durante a dcada de 90 e consumo de fertilizantes ( l em milhes de Mg). Fonte: IBGE Produo Agrcola Municipal (perodo 1992/99) e Levantamento Sistemtico da ProduoAgrcola (1991/99) e ANDA

Alm da tragdia social representada pelos milhes de brasileiros miserveis no campo, o passivo ambiental deixado pelo projeto modernizador alarmante. As reas de solos degradados no Brasil no representam uma mancha cartogrfica, mas uma enorme sombra que paira sobre os futuros brasileiros (e que pode ser observada: Embrapa, 2001). A crtica ao modelo modernizador da agricultura, implantado nas dcadas de 1960-1970 pelos sucessivos governos militares, apoiava-se em uma anlise de vis marxista que, se por um lado, apontava para as implicaes sociais dolorosas do processo de conformao dos complexos agroindustriais brasileiros (Graziano da Silva, 19812 ), por outro, desconsiderava sua lgica ambiental insustentvel e, principalmente, ignorava e desqualificava modelos alternativos de produo agropecuria. Predominava uma abordagem, politicamente crtica, todavia fundada nos mesmos pressupostos epistmicos do iderio da revoluo verde: produtivismo, determinismo histrico e economicismo.
GRAZIANO DA SILVA, Jos. A modernizao dolorosa: estrutura agrria, fronteira agrcola e trabalhadores rurais no Brasil. Rio de Janeiro, Zahar, 1981. 245
2

A crtica marxista ao modelo modernizador questionava as relaes de produo engendradas pelo modo de produo capitalista, sem, no entanto, discutir as foras produtivas (a tecnologia) colocadas em ao. Para os marxistas, as foras produtivas esto determinadas de maneira absoluta pelas relaes de produo sendo que qualquer transformao nas bases tcnicas de produo pressupe a revoluo social. A superao do capitalismo considerada historicamente necessria porque, supostamente, as relaes sociais de produo bloqueariam o pleno desenvolvimento das foras produtivas3 . ... o caminho no o de negar (cegamente) o papel do progresso tcnico no aumento de produtividade e sim o de questionar diretamente o modo de apropriao de seus frutos e o sistema que o sanciona. (Kageyama & Graziano da Silva, 1983: 221-2224 ). No fortuito que o capitalismo contemporneo e a experincia do socialismo real tenham adotado as mesmas formas de produo agropecuria, ambos ratificaram a crena absoluta na cincia e na tecnologia como promotoras do progresso e mobilizadas como instrumentos fundamentais na edificao de uma agricultura produtivista e destruidora dos recursos naturais. Nessa perspectiva, o pensamento liberal e sua crtica marxista esto enraizados no mesmo pressuposto histrico de que o desenvolvimento econmico e o bem-estar social dependem da capacidade da agricultura transformar sua base tcnica no sentido de incorporar de forma crescente os meios de produo de origem industrial. Ratifica-se um iderio comum de primazia da indstria sobre a agricultura, do paradigma kautskiano da industrializao da agricultura5 como processo inerente ao desenvolvimento das foras produtivas e, no limite, de viabilizao do prprio capitalismo na medida em que constitui a prpria reproduo da Natureza pelo capital. O progresso tecnolgico seria o mecanismo utilizado pelo capital para enfrentar a questo do monoplio da propriedade da terra e os limites impostos pela Natureza racionalidade econmica capitalista: o capital fabrica a terra (por meio dos fertilizantes qumicos), otimiza a potencialidade produtiva de plantas e animais ( melhoramento gentico) e visa anular os elementos nocivos produo (pelos agrotxicos ou defensivos agrcolas). Ambos os enfoques, portanto, representam a tradio iluminista que interpreta a tecnologia unicamente na sua dimenso material, econmica. O pensamento liberal (especialmente em sua vertente neoclssica) encara o desenvolvimento cientfico-tecnolgico como uma esfera totalmente independente das relaes sociais, autnoma em relao ao poder, ao capital, s classes sociais. A tecnologia, nesses termos, seria uma espcie de deus ex-machina que paira sobre a sociedade e tem a fantstica capacidade de produzir o bem-estar de toda a sociedade. Preso ao que se podera denominar determinismo tecnolgico, o pensamento liberal analisa o desenvolvimento cientficotecnolgico como algo que se d num vazio de relaes sociais, num territrio neutro. O pensamento clssico marxista (especialmente em seu vis estruturalista), por sua vez, vincula a tecnologia s relaes sociais de produo vigentes em uma determinada sociedade, porm no a entende como instrumento de dominao social; nesse sentido, a tecnologia no consistiria um objeto passvel
Em certa fase de seu desenvolvimento, as foras produtivas da sociedade entram em contradio com as relaes de produo existentes, ou, o que no mais que sua expresso jurdica, com as relaes de propriedade no seio das quais elas se haviam desenvolvido at ento. De formas evolutivas que eram, essas relaes convertem-se em entraves. Abrese, ento, uma era de revoluo social. MARX, Karl. O capital: crtica da economia poltica (livro 1). Rio de Janeiro, Civilizao Brasileira, 1971, p. 41. 4 KAGEYAMA, ngela, GRAZIANO DA SILVA, Jos. Produtividade e emprego na agricultura brasileira. In: BELUZZO, Luiz Gonzaga. Desenvolvimento capitalista no Brasil. So Paulo, Brasiliense, 1983. 5 A industrializao da agricultura implica, do ponto de vista das relaes sociais, a superao histrica do modo de produo campons e a consagrao da agricultura capitalista de grande escala como forma superior de produo. 246
3

de disputa a luta se daria, exclusivamente, pela apropriao das riquezas produzidas pelo desenvolvimento das foras produtivas. Ou seja, uma perspectiva economicista e evolucionista impede de visualizar os caminhos trilhados pela Cincia e Tecnologia como espao possvel de confronto de interesses dos diferentes grupos e classes sociais. As propostas de uma tecnologia alternativa, ainda que bem intencionadas, so consideradas, pelas anlises marxistas, como historicamente superadas e supostamente conservadoras, porque advogariam no o progresso, mas a reproduo de um campesinato inexoravelmente fadado ao desaparecimento. Assim, para as perspectivas modernizadoras de desenvolvimento agrcola marxista e liberal no se justifica a luta social por outro modelo tecnolgico, seja porque a tecnologia socialmente neutra, seja porque, em nome do evolucionismo histrico, os agricultores familiares esto condenados a desaparecer (Caume, 19926). No entanto, no incio dos anos 1980, as conseqncias sociais, econmicas e ecolgicas da modernizao conservadora da agricultura brasileira provocaram uma sensvel reorientao da crtica a esse modelo de desenvolvimento agrcola. Os movimentos ecologistas ganharam visibilidade social e poltica e os chamados custos da modernizao colocaram em questo as prprias bases tcnicas do processo de produo agrcola. Expandiam-se as propostas por uma agricultura alternativa, orgnica, ecolgica, natural, biodinmica, apropriada... aliceradas em bases tcnicas radicalmente distintas daquelas orientadoras do paradigma de industrializao da agricultura. Esses movimentos sociais e ambientalistas, em sua heterogeneidade, muito auxiliaram a complexificar as anlises do processo de produo na agropecuria, medida que criaram as condies de possibilidade para uma discursividade que coloca em questo no apenas os efeitos nocivos da aplicao intensiva de tecnologia (o que a prpria crtica marxista j fazia), mas tambm o carter multidimensional da Cincia e, conseqentemente, da Tecnologia. Ainda que muitos fizessem uma anlise maniquesta e doutrinria da Cincia e da Tecnologia, negando suas potenciais contribuies para a sociedade e advogando um culto apologtico e idealizado do passado campons e de sua suposta idlica relao com a Natureza, ajudaram a construir um novo olhar sobre os processos de produo de Cincia e Tecnologia. Voluntria ou involuntariamente, promoveram a politizao dos processos de produo, difuso e consumo de tecnologia agropecuria, instituindo-os como espaos de disputa e conflito entre os diferentes grupos e classes sociais que compem o espao agrrio brasileiro. Vertentes da crtica ecologista modernizao conservadora apontaram para uma crise da perspectiva determinista no avano da Cincia e da Pesquisa Agropecuria e indicaram que no h um caminho nico, inexorvel e que o tipo de tecnologia e os fins que se deseja alcanar so histrica e socialmente determinados. Isto , que a tecnologia um produto das lutas sociais, dos diferentes interesses que se expressam no conjunto da sociedade, das diferentes capacidades de influncia, do poder poltico. Como afirma Vilma Figueiredo (1989, p. 117 ): o campo de disputa pela satisfao de necessidades variadas um campo de conflitos, de exerccio de poder. esse o campo da produo, da difuso e do consumo de tecnologias. No h, nele, uma direo universal e preestabelecida. Rompendo com o fatalismo determinista das abordagens neoclssicas e marxistas do
CAUME, David J. A construo social de um outro ofcio de agricultor: as estratgias tecnolgicas de reroduo social do campesinato. Porto Alegre, Dissertao de Mestrado em Sociologia/UFRGS, 1992. 7 FIGUEIREDO, Vilma. A produo social da tecnologia. So Paulo, EPU, 1989. 247
6

desenvolvimento agrcola, seus crticos acreditam que no s h possibilidade de viabilizao da agricultura familiar nas economias capitalistas contemporneas, como tambm a possibilidade da luta pela redefinio do padro tecnolgico hegemnica na agricultura. Nessa perspectiva, a construo da Agroecologia como cincia componente importante dos objetivos polticos de se combater o processo de marginalizao social a que historicamente foi relegada a agricultura familiar no Brasil. O campo tecnolgico e cientfico , portanto, um espao de confrontos: o tipo de cincia e tecnologia gerado e difundido e as necessidades sociais a serem contempladas por esses meios tecnolgicos dependem da correlao de foras entre os diferentes grupos e classes sociais interessados8 . Isso, contudo, no quer dizer que as ofertas tecnolgicas sejam determinadas exclusivamente pela dimenso poltica; o leque de alternativas tecnolgicas amplo, todavia, limitado pelas possibilidades propiciadas pela Cincia, uma vez que, em grande parte, o produto tecnolgico resultado da aplicao de conhecimentos cientficos. A legitimao da Agroecologia como disciplina cientfica, no apenas como movimento social de reivindicao por um outro modelo de produo agrcola (Almeida, 19989 ), representa a afirmao de distintos interesses no campo da cincia e pesquisa agropecuria: a busca por uma agricultura ambientalmente sustentvel e a reproduo da agricultura familiar como forma social de produo importante em nosso modelo de desenvolvimento agrcola. O desafio da Agroecologia edificar novas prticas de produo agrcola que tenham como fundamento uma episteme radicalmente distinta daquela que balizou os pacotes tecnolgicos da Revoluo Verde e do paradigma da industrializao da agricultura. Novas prticas, novos conhecimentos calcados numa perspectiva holstica e sistmica do processo de produo agropecuria, na multidisciplinaridade, na preocupao ambiental como premissa, na otimizao dos recursos disponveis na prpria unidade de produo (a matria orgnica, por exemplo), na participao dos agricultores e na valorizao de seus saberes empricos. A construo de um modelo de desenvolvimento ambientalmente saudvel e socialmente justo uma alternativa histrica e passa, necessariamente, pela reafirmao de novas e outras formas de construo do conhecimento. Esse o desafio que se coloca aos adeptos da formas agroecolgicas de produo na agricultura. A Agroecologia como cincia uma perspectiva de gerao de novos (e necessrios) conhecimentos para o manejo dos solos Aqui, longe de uma discusso de flego sobre a Agroecologia, remete-se a uma conceituao bsica para que seja feita a contextualizao necessria da importncia do manejo do solo nos sistemas Agroecolgicos. Assim, de acordo com a sntese de Caporal & Costabeber10 : Agroecologia tem sido reafirmada como uma cincia ou disciplina cientfica, ou seja, um campo de conhecimento de carter multidisciplinar que apresenta uma srie de princpios, conceitos e metodologias que nos permitem estudar, analisar, dirigir, desenhar e avaliar o agroecossistema.
8 As recentes disputas no Governo Lula pela direo da EMBRAPA (Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria) entre pesquisadores politicamente vinculados agricultura familiar e pesquisadores vinculados aos interesses da agricultura patronal expressam com bastante evidncia esse espao de conflitos no processo de gerao de pesquisa agropecuria no Brasil. 9 ALMEIDA, Jalcione. Da ideologia do progresso idia de desenvolvimento (rural) sustentvel. In: ALMEIDA, Jalcione, NAVARRO, Zander (orgs.). Reconstruindo a agricultura. Porto Alegre, Editora da Universidade/UFRGS, 1998. 10 Caporal, F.R. & CostaBeber, J.A. Agroecologia: enfoque cientfico e estratgico. EMATER-RS, Porto Alegre, 2002. 4p.

248

Tratada como uma Cincia, a Agroecologia deve apresentar, portanto, pressupostos universais para tratar das realidades particulares. O papel da Cincia e das disciplinas cientficas no somente catalogar e descobrir fatos e sim de envolver a descoberta de princpios que subjazem e conectam os fenmenos naturais com os sociais. Assim, a Agroecologia um dos elos possveis entre a filosofia e a ideologia. Sua episteme provm de cinco domnios distintos, representados esquematicamente na Figura 11.2.
Dimenso

Econmica

Poltica

Ideolgica

Ecolgica

Cultural/Educativa

Agroecologia

Fortalecimento da capacidade econmica e autonomia para resistir presses que determinam a sua marginalizao e perda da prpria condio de agricultores

Instrumento de luta poltica de enfrentamento do processo de excluso social atravs da reforma agrria: evitar a expropriao do agricultor/agricultora assentado e garantir sua permanncia no campo

A dinmica do progresso tcnico est sempre impregnada de um contedo poltico. A tecnologia no mais apresentada como um processo neutro capaz de beneficiar a todos igualmente

Afetar o mnimo o ambiente de produo; na maioria dos casos recuperar a degradao promovida pelo latifndio monocultor e escravista

Revalorizao e aprofundamento do saber do agricultor. As solues propostas, em geral, se encontram na vasta e diversificada experincia dos prprios produtores

Figura 11.2 Dimenses e bases epistemolgicas da Agroecologia. Adaptao de Caume (1992) (que utiliza o termo Agricultura Alternativa)

O conhecimento que consiste na apropriao do objeto pelo pensamento, por meio de metodologia apropriada, a obteno de uma percepo clara, de representao completa, de definio e anlise dos fenmenos naturais o que pode ser definido como conhecimento cientfico. A Cincia pode, portanto, ser definida como uma representao da realidade, um quadro abstrato, codificado, mas fiel realidade, porque obtido dentro de regras estritas. O que particulariza a Agroecologia dentro das Cincias Agrrias que essa realidade um produto social e no natural, gerando, portanto, uma nova episteme com uma metodologia inovadora e distinta da metodologia cientfica tradicional. Essa inovao consiste em basicamente trs pressupostos bsicos: 1. A necessidade de compreenso do sistema a ser estudado como um sistema complexo, impossvel de ser isolado, uma vez que o objeto de estudo agroecolgico so as inter-relaes entre os seus distintos componentes. Disso decorrem dois fatos: o primeiro a necessidade de imerso do pesquisador no problema e no seu distanciamento. A anlise agroecolgica s possvel a partir da anlise de um processo que no pode ser pontuado ou descontextualizado do territrio e das pessoas que vivem nele. Por isso, mais importante do que o ponto de partida (Ho)11 ou de
11 Por exemplo, para o manejo agroecolgico do solo a anlise de solo feita num laboratrio de rotina no representa o ponto de partida para o manejo da fertilidade. Nessa perspectiva ela informa nada ou muito pouco sobre as potencialidades de seu uso, a capacidade de suportar as distintas relaes ecolgicas e os processos qumicos e biolgicos necessrios para a ciclagem da matria orgnica e dos nutrientes.

249

chegada, o que interessa o processo decorrente da ao investigadora do cientista. As estratgias de pesquisa adotadas devem representar, portanto, a teoria da Agroecologia. 2. A ao de investigao em Agroecologia s adquire sentido se servir para o resgate da cultura e do conhecimento local e, como tal, no pode ser desvinculado de uma ao educativa decorrente da anlise do processo agroecolgico em observao. Essa ao educativa no deve resultar do ato do pesquisador ensinar algo para os membros da comunidade e sim do possvel choque cultural entre o pesquisador e a comunidade. O produto dessa disputa deve resultar (necessariamente, por convico terica) no resgate e na valorizao de um conhecimento que precisa evoluir. possvel, apesar de costurado em panos diferentes, um nvel de conjuno entre o saber emprico e o saber cientfico. O saber prtico decorrente da atividade de agriculturar no deve ser supervalorizado, pois por si s no garante um grau necessrio de conhecimento para superao de determinado problema. To pouco o cientfico que desconsidera o modo de agricultar. 3. Os experimentos Agroecolgicos so totalizantes. Quer dizer, no possvel estabelecer um campo experimental com parcelas e repeties de um modo controle de cultivo, constitudo pela agricultura convencional, e um tratamento agroecolgico para comparao, situao to corriqueira na estatstica experimental. Os experimentos em Agroecologia expressam o resultado da participao da comunidade, das pessoas envolvidas e da interao com o ambiente de produo. A Agroecologia uma cincia eminentemente emprica cujo conhecimento cientfico depende da observao e da experincia tida com (e no sobre) os objetos e fenmenos do mundo real. O fundamento matemtico utilizado para descrever as experincias agroecolgicas provm da estatstica no-paramtrica: componentes principais, hierarquizao, anlise de grupos etc. A estratgia metodolgica para tanto foi bem apresentada por Claro (2001) e constitui as Unidades Expriementais Participativas (UEP) em Agroecologia, que consiste, em outras palavras, no conceito emprestado das cincias sociais chamado estudo de caso. A UEP deve ser estudada de forma holstica, de forma mais completa possvel, com o objetivo de apreender e descrever a complexidade de um caso concreto. Assim, atravs do mergulho profundo e exaustivo em um objeto delimitado (a UEP no nosso caso), o estudo de caso possibilita a penetrao na realidade social, no conseguida pela anlise estatstica (Goldenberg, 2001) A deduo das propriedades que descrevem os diferentes processos nos sistemas agroecolgicos idealizada como um produto coletivo, oriundo da sistematizao da experincia e no da habilidade intelectual de um nico investigador. Embora, na prtica, tem-se observado, pelo menos nos primeiros momentos, uma imposio do discurso acadmico. Os objetos de pesquisa em Agroecologia so, portanto, abstraes, mas abstraes susceptveis de serem vinculadas, segundo procedimentos regulados por constataes dos nossos sentidos, realidade. As cincias empricas so, ento, formadas por observao da natureza e por teorias e hipteses que podem (e devem) ser confrontadas. O que particulariza a Agroecologia com Cincia a necessidade de uma maior nfase ao conhecimento, anlise e interpretao das complexas relaes existentes entre as pessoas, os cultivos, o solo, a gua e os animais. Ou seja, mais do que um hbrido entre as cincias naturais e as sociais, a Agroecologia refunda, por necessidade, uma nova metodologia de pesquisa. Definida, ento, como o manejo ecolgico dos recursos naturais mediante formas de ao social coletiva que apresentam alternativas atual crise civilizatria12, ela se insere em uma
12 Sevilla-Guzman, E. La agroecologia como estratgia de transformao social. Texto disponvel na rede mundial de computadores www.agroeco.org/br (acesso em set.2005)

250

cosmoviso (universalidade), e os problemas levantados por ela so gerados a partir do enfoque indissocivel da prxis13 do pesquisador. As tcnicas e os conhecimentos so vinculados claramente a uma perspectiva ideolgica. Nesse sentido, Sevilla-Guzmn14 aponta que o enfoque agroecolgico pode se credenciar como uma resposta lgica do neoliberalismo e globalizao econmica, bem como aos cnones da cincia convencional, cuja crise epistemolgica est dando lugar a uma nova epistemologia, participativa e de carter poltico. E continua: A natureza do sistema de dominao poltica em que se encontram as experincias produtivas, que se articulam com a sociedade civil para gerar essas redes de solidariedade tem muito que ver com o curso seguido pelas estratgias agroecolgicas em sua busca de insero nas polticas agrcolas. Em geral, pode-se dizer, que na situao atual, os cursis da ao Agroecolgica necessitam romper os marcos legais para desenvolver seus objetivos; que dizer que as redes produtivas geradas devem culminar em formas de ao social coletivas pretendendo adquirir a natureza de movimentos sociais. No toa que o principal movimento social rural latinoamericano (o MST) adota a Agroecologia como sua base de ao tcnica, uma vez que possvel inserir no pensamento Agroecolgico um modo de produo agropecuria, capaz de superar o modo de produo capitalista, incorporando na sua base filosfica, conceitos relacionados recuperao e `a manuteno do ambiente de produo pela gerao de novas tecnologias de produo. E essas novas e necessrias tecnologias de produo no so (e no tem porque ser) sinnimos de atraso, de baixo nvel tecnolgico. Genro-Filho15 (1981) fez uma crtica da negao da tecnologia por alguns movimentos verdes. A nova viso de desenvolvimento no pode ser inspiradas na modorrenta aldeia da idade mdia nem na inspida comunidade rural do passado e sim no mundo moderno mesmo, atravs dos computadores, dos meios eletrnicos de comunicao, do aumento progressivo do tempo livre, que hoje servem para nos oprimir, controlar e imbecilizar, que devemos procurar a base objetiva para um futuro que seja melhor e possvel. Com isso, indica-se que as opes tecnolgicas oriundas da Agroecologia no se remetem a uma agricultura do binmio tacape-borduna mas sim com instrumentos tecnolgicos necessrios para a superao da crise capitalista de produo, quaisquer que sejam eles, eletrnicos, mecnicos, biolgicos. As tcnicas espectroscpicas e as modernas formas de biologia molecular podem elucidar mecanismos de interao da matria orgnica com os genes das plantas, como visto no captulo 10. Porm, o uso de tecnologias no ir fornecer per si combustvel para superao do modo de produo. Um raro (e belo) exemplo desse entendimento a produo agrcola brasileira. A rea agrcola cultivada no Brasil de cerca 55 milhes ha, de acordo com as estimativas oficiais do Ministrio da Agricultura. A evoluo da rea produzida (em milhes de ha) e da produo de gros (em Mg ha1 ) na dcada de 90, para as diferentes regies do Brasil, mostrada na Tabela 11.1. De acordo com o Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica (IBGE, www.ibge.gov.br\indicadores sociais), o Brasil produziu, em mdia, 75 milhes de toneladas de gros por ano nesse perodo. Esse nmero quatro vezes menor do que a mdia da produo em pases com condies climticas e de solo iguais ou piores, como Tailndia ou Costa Rica (FAO, www.incra.gov.br/fao).
13 14

Utiliza-se aqui a prxis no sentido marxiano: a indissociabilidade entre a teoria e a prtica. Sevilla-Guzmam, E. obra cit. 15 Genro-Filho, A. Ecologismo e Marxismo: dois pesos e duas medidas. Porto Alegre, Tche, 1986. p.49-80. 251

A rea total foi reduzida em 3,6%, com um aumento mdio de 10,5% na produo de gros. A populao no perodo aumentou em 34%. Mas o mais impressionante que o consumo mdio de fertilizantes nesse perodo aumentou de 9,3 milhes de toneladas para 13,7 um acrscimo de cerca de 50% (veja a Figura 11.1). Porm, a renda mdia de todos os agricultores no perodo diminuiu 49%. Ou seja, o acrscimo significativo do consumo de fertilizantes (exemplo de alta tecnologia) no foi acompanhado pelo aumento de produo e, pelo contrrio, foi acompanhado pela queda na renda do agricultor. O levantamento do Instituto de Pesquisa Econmica Aplicada (www.ipea.gov.br\radar brasil 2005), informa que 22 milhes de pessoas passam fome no Pas e outros 54 milhes alimentam-se de forma precria. Desses 22 milhes que passam fome, a metade vive no meio rural. No estudo, foram consideradas pobres as famlias com renda domiciliar per capita inferior a meio salriomnimo por ms, o equivalente a R$ 120 em 2003. Na mesma linha, 21,9 milhes eram considerados indigentes por viverem com menos de um quarto de salrio-mnimo por ms, R$ 60 poca. Se alguns elos da cadeia do agronegcio andam bem das pernas, como o voltado para a comercializao de insumos e de produtos no mercado externo e exportao, a maior parte dos produtores amarga seguidos prejuzos. H um componente ideolgico na formulao agricultura moderna = eficincia econmica, eficincia tcnica, produtividade, conhecimento cientfico, superao da fome. J a agricultura familiar taxada como improdutiva, indolente, parasitria e com falta de conhecimentos.
Tabela 11. 1. rea cultivada em milhes de hectares (ha) e produo de gros em milhes de toneladas (Mg) nas diferentes regies do Brasil durante a dcada de 90.

ano 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999

nordeste ha Mg 7.0 3.5 4.5 3.3 8.2 7.1 7.9 6.6 7.8 6.7 7.8 6.6 4.4 3.8 5.8 6.2

ha 0.9 1.1 1.2 1.2 1.3 1.3 1.4 1.5

norte Mg 1.1 1.4 1.6 1.7 1.8 1.8 2.0 2.3

sul ha Mg 15.3 35.6 15.0 36.5 14.7 36.0 14.6 39.5 14.5 34.7 14.4 36.2 14.3 36.7 14.1 37.1

sudeste ha Mg 6.2 12.5 5.8 12.3 5.9 11.9 5.6 12.5 5.1 11.2 5.0 12.4 4.7 11.3 4.9 11.9

centro-oeste ha Mg 6.7 14.6 6.8 15.1 7.7 18.3 7.8 18.8 7.0 18.2 7.2 19.3 7.9 20.5 8.5 24.0

Fonte: IBGE Produo Agrcola Municipal (perodo 1973/96) e Levantamento Sistemtico da Produo Agrcola (1997/99).

As pequenas propriedades empregam 77% das pessoas, ocupadas na atividade agrcola, com 13 milhes de trabalhadores familiares e mais de 1 milho de assalariados, e detm 52% de toda a frota nacional de tratores. Em todos os produtos agrcolas, com exceo da cana-de-acar e da laranja, a pequena propriedade tem ndices de produo superiores aos das grandes propriedades. Apenas alguns exemplos: na produo de leite, os pequenos respondem com 71,5% do total e as grandes propriedades com 1,9%; na de sunos, os trabalhadores rurais respondem por 87,1% e os latifndios com apenas 1,7%; na produo de caf, a pequena propriedade corresponde a 70% da produo. Muito embora a produo de gros de uma forma geral tenha aumentado consideravelmente, a produtividade caiu. Avanou sobre as novas fronteiras agrcolas. E mais, os custos de produo aumentaram. Segundo o BNDES, o custo de produo relativo aos insumos empregados na lavoura
252

da soja, por exemplo, na dcada de 1990, foi de 24% para sementes, 16% para herbicidas, 7% para inseticidas e 51% para os corretivos e fertilizantes. Ou de outra forma, mais de 50% do custo atribudo aos insumos utilizados na nutrio mineral das plantas. E com um agravante: a soja no Brasil no utiliza adubao nitrogenada. O entendimento do senso comum de que tecnologia agrcola avanada representada pela monocultura- adubos qumicos-agrotxicos-mecanizao agrcola precisa de uma reformulao de ordem simblica. Quem sabe, passar a associar adubao orgnica com produtos naturais estimuladores do metabolismo vegetal equilbrio ecolgico entre os organismos e convvio com pragas e doenas automao dos processos justia social e renda. A argumentao, nesse ponto a favor da promoo da agricultura familiar, mostra que essa tese est longe de ser uma ideologia em defesa dos pobres do campo, cujo contedo seria anti-histrico e antieconmico. Por incrvel que parea, nas sociedades onde predominou o padro de desenvolvimento baseado na agricultura familiar (Europa e Estados Unidos) enquadrada por polticas comerciais, financeiras e de fomento foram criadas condies para maior gerao de riqueza16 . O fracasso das polticas pblicas na Questo Agrria e nas prticas agrcolas inadequadas preconizadas pela modernizao contribuiu para uma presso maior sobre a terra. O uso excessivo de fertilizantes e outros produtos qumicos concorre para a degradao do solo e a poluio da gua. A lgica da produo agrcola a explorao ao mximo dos recursos naturais, incluindo a explorao acima da capacidade ecolgica do meio. O declnio e a estagnao da produo, bem como os aumentos exponenciais dos custos, so decorrentes, pelo menos em parte, da degradao do ambiente de produo, principalmente vrios fatores relacionados ao solo. O saudoso Prof. Altir Corra, da antiga Escola Nacional de Agricultura, hoje Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, alertava, nas suas famosas colunas, que a estimativa mais conservadora indica que o Brasil perde, anualmente, por efeito da eroso hdrica, cerca de 2 a 2,5 bilhes de toneladas de solo17 . Ou seja, para cada kg de gro produzido, 10 kg de terras so perdidos por eroso (Sparovek e Valques Filho, 1994). A tendncia geral do sistema convencional produzir degradando o cerne da fertilidade do solo, a sua matria orgnica, responsvel pelo condicionamento de todas as propriedades fsicas, qumicas e biolgicas. O aspecto chave do modelo de desenvolvimento rural sustentvel a compreenso do papel do solo e do seu uso. No como nas dcadas entre 1960-1980, quando o solo foi considerado um substrato fsico para o crescimento das plantas; nem como na dcada de 1990, considerado um organismo vivo, sob a tica biolgica dos Departamentos de Solos; e sim, um elo entre as relaes sociais decorrentes da produo e a emancipao dos agricultores, objeto tpico da ao agroecolgica. Na dinmica do trabalho agroecolgico, trs perguntas-chave devem ser realizadas, de acordo com Sevilla- Guzmn: 1. Como deve ser levado a cabo o manejo dos recursos naturais para chegarmos a agroecossistemas sustentveis? 2. Por que o manejo escolhido deve ser levado a cabo dessa forma e no de outra? 3. Para quem resultariam os benefcios desse tipo de manejo? Assim, passo a passo, so estabelecidos trs nveis: primeiro relacionado ao desenho tecnolgico/agronmico do agroecossistema (a interveno); o segundo num nvel metodolgico; e o terceiro, epistemolgico.
Mazoyer & Roudart, 1997. Histoire ds Agricultures di Monde; du nolitiqye la crise contemporaine. Ed Seuil. Uma parte das crnicas e artigos do Prof. Altir continua disponvel no stio eletrnico do Centro Nacional de Pesquisa em Solos da EMBRAPA (www.cnps.embrapa.br)
17 16

253

Assumindo essas premissas como necessrias, qualquer opo ou desenho agroecolgico deve levar em conta o contedo e a qualidade da matria orgnica do solo, uma vez que esta depende intimamente de fatores ecolgicos abiticos (temperatura, pluviosidade, relevo, material geolgico de origem do solo), fatores biticos (macro e microrganismos) e, principalmente ossociais (o modo de produo). Dessa forma, quando Altieri18 indica os processos agroecolgicos que devem ser otimizados pelas novas tecnologias, todos tm reflexo direto e indireto sobre a matria orgnica do solo (Tabela 11.2). As tecnologias desenvolvidas para o processo de produo sustentada tm, como aspecto central o fortalecimento da organizao poltica e social das comunidades de agricultores, pela valorizao de seus conhecimentos sobre a natureza e da sua cultura de modo geral. Isso implica, para o ambiente de produo, o manejo da matria orgnica do solo. Essa relao ntima e complexa denominada aqui esfera de influncia da matria orgnica sobre as propriedades qumicas, fsicas e biolgicas do solo, bem como, o reflexo do modo de produo utilizado.

Tabela 11.2. Processos agroecolgicos otimizados pelo uso de tecnologias agroecolgicas

Acumulao de matria orgnica e ciclagem de nutrientes Atividade Biolgica do Solo Mecanismo de controle natural de pragas e doenas Conservao e regenerao dos recursos solo, gua e germoplasma Aumento geral da biodiversidade e sinergismo entre os componentes do Agroecossistema
Simbolicamente, a terra deixa de ser um substrato fsico no qual so depositados plantas e outros insumos necessrios para a produo agrcola para ser, como afirma Caume (1992) o momento primordial da natureza e do homem. A terra no se limita produo de mercadorias, mas tambm envolve laos emocionais, transcedentais e espirituais. A terra o lugar da vida Um local de conexo csmica profunda, pois exceo do hidrognio, todos os tomos que compem os minerais e a matria orgnica foram fabricados em estrelas vermelhas gigantes h milhares de anos-luz no espao e a bilhes de anos no tempo. A matria estelar circula entre os diversos compartimentos da terra, carregando consigo o esprito (da palavra latina que significa respirar o ar, logo, a matria) capaz de levar a emoo diante da expresso imediata dessa conjuno entre animais, minerais, plantas, matria csmica e pensamento, contido nos fluxos de massa e energia da matria orgnica ou do hmus. Para Marx19 , cada progresso da agricultura capitalista um progresso no somente na arte de explorar o trabalhador, mas tambm na arte de depenar o solo, cada progresso na arte de aumentar a fertilidade por um certo tempo torna-se um progresso na runa das fontes duradouras da Fertilidade.
18

19

Altieri, M. Agriculture, Ecosystems and Environment 93: 124, 2002. Marx, K. O Capital. Livro I, ltima seo do captulo XV. Civilizao Brasileira, 1974.

254

As fontes duradouras da fertilidade do solo provm da ao da Humosfera que pode unificar as quatro principais dimenses da Agroecologia vistas anteriormente.
U M O S F E R A
Valorizao do saber do agricultor

Relaes sociais justas Armazenamento de gua Manejo do Solo sob Nutrio de plantas perspectiva agroecolgica

Resgate da cultura local Uso mltiplo da terra; estabilidade e maior produtividade fsica

Diminuio das perdas por eroso

As prticas no so isoladas Viso sistmica - complexa

Bioestimulao de plantas; efeitos diretos sobre metabolismo das plantas

Solo um organismo vivo adaptao do ambiente para a produo Matria Orgnica -preservar; - manter; -Aumentar a qualidade; Modificao das propriedades qumicas, fsicas e biolgicas do solo

Reduo de custos; reduo de insumos; reduo de riscos;

H U M O S F E

A R

Figura 11.3. A humosfera e sua ao

A metodologia de anlise de ao da esfera de influncia da matria orgnica sob essa perspectiva ainda est para ser concluda, uma vez que so misturados aspectos particulares de vrias reas do conhecimento (Figura 11.3). Isso no impede, no entanto, que se proponha hoje algo mais concreto. Utilizar somente um indicador, um parmetro para avaliar a humosfera a prpria negao conceitual desta. Numa Escolha de Sofia em relao ao recurso solo e seu manejo a limitao ao uso de um indicador difcil mas no impossvel. Assumem-se os riscos dessa opo. Sob uma tica universalista, indica-se a ubiqidade das substncias hmicas. Elas esto presentes nos solos, nas guas e nos sedimentos. A sua formao decorrente da ao direta de todos os processos ecolgicos que ocorrem no solo, implicando a rpida decomposio dos resduos orgnicos que chegam ao solo pelos micro e macrorganismos, pela sntese e ressntese bioqumica de novos compostos e pela sua estabilizao qumica e, posteriormente, fsica, com a frao mineral do solo. A velocidade e a direo desses processos so dirigidas por fatores abiticos (temperatura, pluviosidade, radiao solar, quantidade de ons), biticos (ecologia de macro e microrganismos) e pela ao humana e suas prticas sociais. Por exemplo, ao direcionar o fluxo energtico da fotossntese para a obteno de um produto agrcola com valor de mercado, a atividade agrcola simplifica uma rede complexa de inter-relaes biolgicas, que ocorreriam naturalmente, a fim de artificializar um sistema, rompendo um equilbrio prvio. Para sustentao dessa simplificao, so necessrios aportes macios de massa e energia, implicando a degradao de sistemas vizinhos com repercusses globais. Assim, se a ciclagem de nutrientes interrompida pela agricultura
255

convencional, lana-se mo de adubos e fertilizantes solveis, oriundos de jazidas minerais ou de fabricao sinttica; se o equilbrio da ecologia dos microrganismos que retiram do carbono a sua energia rompido, as pragas e doenas devem ser necessariamente controladas por pesticidas e, assim, por diante. A perturbao do ambiente natural leva ento diminuio da quantidade de matria orgnica e reduo da sua qualidade. Se a dinmica do processo de humificao alterado devido ao modo de produo e suas fraes que so, por definio, quimicamente estveis, pode-se indicar que essa alterao corresponde a um indicador do modo de produo desenvolvido no agrossistema. E mais, como observado no Captulo 4, a formao de substncias hmicas representa um sistema qumico complexo que pode ser analisado pelas leis universais da Termodinmica e da Termoqumica. A produo de substncias hmicas alcalino-solveis mais condensadas (i.e., os cidos hmicos) representa a formao de um sistema de substncias termodinamicamente mais estveis do que o dos cidos flvicos, isto significa que ocorre um aumento terico da entropia, uma vez que as ligaes de estabilizao de suas unidades estruturais (agregados) do arranjamento supraestrutural de Piccolo (2002), ou as micelas de Wershaw (1993) e, ainda, uma macromolcula mais heterognea e complexa do que os cidos flvicos representam um aumento do nmero de microsstios de interaes fracas, de natureza predominantemente hidrofbica. Em relao aos cidos flvicos, os cidos hmicos representam, ento, sistemas qumicos mais estveis. As implicaes ecolgicas regidas por fundamentos universais so a base da observao emprica de que os solos naturalmente mais frteis tm uma relao cidos hmicos/cidos flvicos maior do que os de menor fertilidade natural. Movimentos de agricultura que providenciem acrscimos relativos nos valores da AH/AF refletiro em melhorias na qualidade da matria orgnica. Como a matria orgnica um reflexo da histria social e ecolgica do uso e da formao do solo, encerra-se um ciclo indicador comum. Segue-se uma rpida anlise das principais prticas de conservao e recuperao do solo e seus efeitos sobre o contedo e a qualidade da matria orgnica. A contextualizao dessas prticas, sob a perspectiva da Agroecologia, no s imperativa, como tambm deve ser observada pelo leitor. Sem isso, obtm-se um copia/cola (copy/save) de tecnologias, sem atender s trs questes-chave levantadas por Sevilla-Guzman, na adoo das opes de tecnologias geradas pela Agroecologia. Humosfera um aspecto-chave para a Agroecologia O solo a base de todo o processo produtivo do planeta. Trata-se de um componente importante e bem organizado da natureza, ajustado a mltiplas funes de um equilbrio dinmico (Andrade, 2001). Sua composio variada e dependente de fatores e processos de formao (ecolgicos), bem como do manejo e utilizao a que submetido (sociais). Nas reas de uso intenso do solo, ao contrrio de sistemas naturais, a interveno do homem ocasiona maior exportao de produtos primrios que so necessrios para a manuteno do sistema, novos aportes de massa e energia na forma de insumos (fertilizantes, pesticidas, etc.). Como a qualidade do solo envolve sua avaliao correlacionando-a com o seu uso especfico, tornou-se imprescindvel o monitoramento desse recurso para que modificaes no seu manejo possam ser sugeridas com o objetivo de reduzir sua degradao. A pontualizao desse monitoramento tornou-se a ferramenta da agricultura moderna para intervir no sistema. Assim, se uma planta necessita de nutrientes, analisa-se a soluo do solo e, dependendo dos nveis encontrados, recomenda-se ou no a adio desse nutriente na forma de adubo qumico solvel.
256

As conseqncias dessa viso reducionista foram comentadas na primeira parte deste texto. Embora no haja ainda um sistema de avaliao que seja aceito sem contestao, possvel eleger um conjunto de variveis qumicas, fsicas e biolgicas que, acompanhadas ao longo do tempo, seja capaz de detectar alteraes da qualidade do solo em funo do manejo. Como nas regies tropicais a atuao dos fatores e processos de formao condicionou, de forma geral, a presena de solos em avanado estdio de intemperismo, todo o sistema dependente e influenciado pela matria orgnica do solo (MOS). consenso entre os pesquisadores que este componente pode ser usado como indicador da qualidade de solo. Isso se deve ao fato da MOS ser sensvel s prticas de manejo adotadas (o itinerrio tecnolgico de Caume, 1992), assumindo o papel de maior determinante ecolgico na sustentabilidade da atividade agrcola (Stevenson, 1994). Porm, como no existe um nvel crtico de MOS, nem um compartimento que possa ser utilizado isoladamente para refletir a qualidade do ambiente solo, o uso da matria orgnica como indicador no adquire sentido para a agricultura moderna, pois seu manejo no pode ser descontextualizado da atividade do agricultor e do modo de se fazer agricultura. De outra forma, apesar de muitos trabalhos terem sido realizados correlacionando parmetros qumicos de solo, produtividade das culturas e contedo de matria orgnica, ainda no foi possvel recomendar ou estabelecer um pacote tecnolgico para recomposio dos teores ou mesmo de adubao orgnica uma vez que o manejo depende basicamente do agricultor (aspectos sociais) e das condies ecolgicas da sua atividade, determinando uma anlise complexa, porm, bastante particular, quase caso a caso, tornando pouco fecundo qualquer tipo de generalizao. Como o agricultor que entende sua propriedade e ele que diariamente entra em contato com as foras da natureza que comandam a dinmica dos compostos orgnicos, um determinado manejo de matria orgnica pode ou no ter resultado em funo dessa estranha conjuno (para o tcnico): a experincia do agricultor e a previso cientfica. Apesar dessas dificuldades, possvel estabelecer um guia para o pessoal tcnico que atua no manejo dos solos sob a perpectiva Agroecolgica, que sirva como referencial de qualidade da matria orgnica. At que se adquira experincia suficiente, uma anlise de laboratrio (to valorizada pelas tcnicas agronmicas) pode reforar as decises tomadas pelo novo tcnico e legitimar a viso de agricultura proposta pela Agroecologia. Assim, o uso da MOS, como indicador da qualidade do solo, adquire um carter de legitimao de uma prtica discursiva baseada na premissa de que a frao humificada da matria orgnica um marcador qumico estvel da histria do solo (sofre influncia dos fatores de formao do solo, como: tempo, material de origem, clima e ao antrpica) (Canellas et al., 2004). A predominncia de uma ou outra frao indica o estdio de um processo ecolgico global, mas que, com certo cuidado, pode ser particularizado. Ao percorrer-se (e acompanhar-se), o caminho das diversas fraes, durante vrios estdios da agricultura, pode-se obter (do itinerrio das fraes humificadas) um mapa dos fluxos de massa e energia no solo e, pelo menos de certo modo, relacion-los com as opes tecnolgicas adotadas num determinado modo de agricultura. O norte dessa cartografia deve ser a superao da pobreza no campo e a adoo ao ofcio de agricultor baseado, nas dimenses agroecolgicas (Figura 11.2). O primeiro passo para a atividade agrcola o de cultivar o solo. Para isso, derruba-se a vegetao original. A substituio de sistemas florestais naturais por cultivos agrcolas altera o contedo e a qualidade de matria orgnica, bem como a distribuio das fraes humificadas do solo (Borges & Kiehl, 1996; Bayer et al., 2002; Spaccini et al., 2005; Schnitzer et al., 2005). A exposio do solo, provocada pela remoo da cobertura original, acelera a ao dos agentes erosivos (gua, vento). O aumento da aerao do solo, promovida pelo uso de implementos, pode estimular a decomposio biolgica e reduzir o contedo de C total. Alm disso, a remoo de partes das plantas, pela colheita ou queima do resduo vegetal, diminui a ciclagem de nutrientes,
257

com tendncia reduo do C do solo. A intensidade dessa transformao est relacionada forma com que os sistemas agrcolas so manejados. A avaliao qualitativa da MOS pode ser realizada mediante a distribuio do carbono em fraes separadas quimicamente (Dabin, 1981). Com base na solubilidade em solues cidas e alcalinas, podem ser obtidos cidos hmicos, cidos flvicos e huminas. Os cidos hmicos compem uma mistura heterognea de molculas com grande variao de massa molecular, que representam, macroscopicamente, um arranjamento supramolecular, unido por interaes eletrostticas, pontes de hidrognio e, principalmente, interaes hidrofbicas fracas (Piccolo, 2002). Esse arranjameno em pequenos agregados forma um aglomerado hmico, que, por sua vez, pode colapsar em funo das condies da soluo (e.g., pH baixo e fora inica elevada promovem a floculao da frao de cidos hmicos). J nos cidos flvicos, as pequenas unidades moleculares so to carregadas eletricamente que afastam a possibilidade de um arranjamento supra-estrutural desenvolvido, no permitindo, portanto, a sua floculao com a alterao das condies do meio. Os cidos flvicos apresentam contedo elevado de grupos carboxlicos e fenlicos e,com isso, uma capacidade de troca de ctions (CTC) muito maior quando comparada dos cidos hmicos. Essa instabilidade qumica provocada pela elevada relao carga/massa acentua a reatividade da frao flvica, tornando-a uma frao ativa nos processos de hidrlise de minerais e no transporte de ons, pela formao de complexos solveis entre o ligante orgnico e os ons metlicos, protagonizando os processos de intemperismo e de formao dos solos altamente intemperizados. Portanto, e de acordo com a termoqumica (como visto no captulo 4), a frao de cidos flvicos dotada, teoricamente, de um contedo menor de entropia (as dificuldades dos clculos foram expostas no captulo 4). Nos solos intemperizados, a predominncia dos cidos flvicos pode ser explicada pela rapidez de transformao dos resduos orgnicos e pela complexao dessas fraes pelos xidos de Fe e Al, o que resulta em maior preservao e proteo dessas molculas ao ataque microbiano (Mendona & Rowell, 1994). A longo prazo, a maior prevalncia dos cidos flvicos pode resultar em perdas substanciais de matria orgnica via gua percolada e em ambiente de solo menos favorvel atividade microbiana, com concomitante reduo da fertilidade do solo (Silva et al., 2000). A quantificao das substncias hmicas presentes no solo pode, ento, ganhar importncia, uma vez que o material hmico indica a direo de um processo ecolgico (previso termodinmica) alm de apresentar cargas eltricas, radicais livres e uma mirade de grupamentos funcionais que por sua vez, participam das principais reaes do solo: complexao, hidrlise, redox e troca (Canellas et al., 1999; Rivero et al., 2004). Essa interpretao permite utilizar as fraes humificadas como indicador da qualidade da MOS. Mais especificamente, a relao entre o C na frao cidos hmicos e o C nos cidos flvicos (CAH/AF) pode ser utilizada como um ndice ou relao de humificao (Kononova, 1982; Pizauro Jr & Melo, 1995; Stevenson, 1994). Enquanto os solos naturalmente frteis de climas temperados possuem valores de CAH/AF maiores que a unidade (Kononova, 1982), os solos submetidos ao clima tropical, normalmente cidos e pobres em bases apresentam valores dessa relao inferiores a 1 (Canellas et al., 2000). As mudanas no contedo de C das fraes humificadas, alm das mudanas estruturais dos cidos hmicos, podem servir de indicadores na avaliao do impacto do manejo utilizado nas reas de produo agrcola. Modificaes provocadas pelo uso do solo sobre as caractersticas das substncias humificadas j foram retratadas em diferentes condies. Entretanto, poucos so os trabalhos que tm abordado os efeitos de manejos Agroecolgicos sobre as propriedades da MOS.

258

A matria orgnica em sistemas agroecolgicos O solo mais do que o receptculo final dos resduos orgnicos de origem vegetal, animal e dos produtos das transformaes destes (Siqueira & Moreira, 2001). o momento primordial do encontro do homem com a natureza, como exposto anteriormente. o local onde se processam as trocas de matria e energia com o meio, alcanando um equilbrio entre ganho e perda de matria e energia. sobre ele e nele que se processam as relaes do agricultor com a natureza. Nos trpicos, a introduo de sistemas agrcolas em reas com vegetao nativa resulta, geralmente, numa rpida perda do carbono orgnico (Scholes & Breemen, 1997), implicando na degradao da qualidade do solo. Algumas atividades como o revolvimento constante do solo, a retirada dos restos culturais e a utilizao de uma ou de poucas espcies vegetais na rea de cultivo podem afetar tanto a composio quanto a quantidade do material orgnico depositado. Embora o estudo sobre as fraes humificadas do solo tenha se intensificado nos ltimos anos, poucos trabalhos buscaram avaliar o efeito da substituio de reas florestais por cultivos agrcolas. Spaccini et al. (2005) observaram um decrscimo progressivo no contedo das fraes humificadas a partir da substituio de florestas por cultivos. Esse decrscimo pode ser atribudo oxidao biolgica do material orgnico, previamente protegido nos agregados do solo e que so destrudos pelo uso de implementos. A atividade agrcola afeta principalmente o contedo relativo de cidos hmicos e, em menor proporo, de cidos flvicos e huminas. Como os cidos hmicos participam da maioria das reaes que ocorrem no solo, favorecendo inclusive a agregao e a estabilidade de agregados pela formao de complexos organominerais (Oades, 1984), a reduo da sua concentrao pode afetar de forma considervel as propriedades do solo. Ainda que a quantificao da MOS seja um procedimento simples e rotineiramente realizado em laboratrios de fertilidade do solo, a anlise de seus resultados requer uma outra racionalidade diferente da normalmente encontrada nesses recintos. Avaliar a qualidade da matria orgnica requer equipamentos e tcnicas sofisticadas e profissionais altamente especializados, o que representa, de certa forma, um limite para a Agroecologia que disputa esse espao na produo e gerao de conhecimentos. Prticas de manejo que tendem a favorecer o compartimento orgnico do solo devem ser exaustivamente avaliadas e difundidas. Os resultados de algumas dessas prticas, de uso comum em sistemas agroecolgicos, sero brevemente discutidos neste captulo e, embora a anlise de um ou outro aspecto de forma isolada possa no ser a melhor forma de avaliao podero, de outra forma, facilitar a compreenso do sistema em sua totalidade.

Adubao orgnica A observao de os estercos dos animais conterem o alimento da vida remete ao perodo aristoteliano: observando o vio das videiras crescidas em reas estrumadas, Aristteles formulou que as plantas tinham pequenos subintestinos que se alimentam dos produtos no utilizados dos animais. Porm, anterior a esse perodo a observao emprica de que as terras escuras eram mais frteis. O processo civilizatrio ocorreu sobre esses stios. Portanto, no surpresa encontrar, na agricultura familiar, o esterco curtido (composto) dos animais como a principal fonte de adubao da terra. O processo modernizador tratou de adubar a planta. No sistema solo, o processo de fornecimento de nutrientes pela adubao orgnica distinto
259

daqueles em que os adubos industriais so empregados. Na adubao convencional, so empregados compostos de alta solubilidade e concentrao. As formulaes e as quantidades de adubos a serem utilizadas so desenvolvidas, buscando fornecer somente o que as plantas necessitam para produzir. O solo tratado simplesmente como um substrato produtivo e no como um ambiente complexo e dinmico, onde ocorrem milhares de reaes. Como os solos tropicais so, em sua maioria, altamente intemperizados e alguns eletropositivos, grande parte dos fertilizantes inorgnicos aplicados est ligado fortemente aos constituintes minerais ou se perde pela lixiviao. Isto ocorre porque, para alguns elementos, como o fsforo os solos, podem ser drenos mais fortes do que as plantas. Os nutrientes perdidos por lixiviao e pela eroso, provocada pelo constante revolvimento do solo, so potencialmente poluidores e podem provocar a eutrofizao dos cursos dgua. Este fenmeno consiste no enriquecimento das guas em nutrientes, gerando o crescimento excessivo de algas e diminuindo a concentrao de oxignio. Alm dos impactos ao ambiente, a adubao industrial cria um vnculo entre produtores e empresas, geralmente transnacionais, que possuem, como nico e exclusivo objetivo, o lucro. Nos modelos de adubao orgnica. a dinmica diferente. Se, na utilizao dos adubos industriais, o objetivo suprir as plantas, a adubao orgnica busca o equilbrio entre os diferentes constituintes do solo. A disponibilizao dos nutrientes contidos nos compostos e resduos lenta, o que permite a reduo das perdas. Alm disso, observa-se o aumento da populao de minhocas, insetos, fungos e bactrias benficas ao solo. Esses organismos vivem associados s razes e podem ser teis s plantas mediante processos simbinticos ou mesmo pela mineralizao dos resduos. Outro fato que merece destaque a melhoria das propriedades fsicas do solo, permitindo um melhor desenvolvimento radicular e consequentemente em melhor desenvolvimento vegetal. Uma das formas de adubao orgnica mais empregada a aplicao de compostos de origem animal e vegetal. A compostagem um processo natural de decomposio dos resduos de diferentes origens, que mediado por uma infinidade de organismos. Tem por objetivo acelerar a estabilizao da matria orgnica, permitindo que o material resultante possa ser utilizado como condicionador de solo e fornecedor de nutrientes. Durante o processo da compostagem, os microrganismos utilizam a matria orgnica como fonte de energia, nutrientes e carbono. A partir de ento, ocorrem diversas reaes bioqumicas, formando como resultado final, gs carbnico, calor e material orgnico, normalmente de alta qualidade para o uso agrcola. Restos de cultivos, lixo e lodo de estao de tratamento e dejetos da criao de animais podem ser o material a ser compostado. Os nutrientes presentes no produto final da compostagem so liberados de forma lenta e gradual, diferentemente do que ocorre com os adubos sintticos. A utilizao de composto de lixo urbano e de lodos da estao de tratamento de esgoto, com finalidade agrcola, pode ser prejudical se forem encontrados metais pesados e microrganismos patognicos nas fontes de matria orgnica ou no produto final, o composto. Como esses elementos esto presentes em pilhas, borrachas, tintas e baterias, lixo hospitalar, h necessidade de uma seleo prvia do material a ser compostado, alm de um rigoroso monitoramento. De maneira geral, o processo de compostagem envolve duas fases distintas. A primeira, denominada bioestabilizao, ocorre at aproximadamente 50 dias de compostagem e caracterizada pela reduo progressiva da temperatura do material aps atingir um pico aproximado de 70 C. Organismos patognicos encontrados nos resduos urbanos, como salmonelas, so eliminados nesta fase pelo calor gerado pelo prprio processo biolgico. A fase seguinte denominada maturao e dura aproximadamente 30 dias. O gradiente de estabilizao de um composto pode ser avaliado com base na relao C/N na
260

fase slida, nos ndices de humificao e por meio de anlises qumicas e espectroscpicas. O entendimento das transformaes da matria orgnica, durante o processo de compostagem, e a avaliao das propriedades do composto estabilizado so essenciais para o sucesso da aplicao (Hsu & Lo, 1999). De maneira geral, o material a ser compostado apresenta menores teores de cidos hmicos e maiores nveis de cidos flvicos no incio do processo. medida que se avana no processo, so observados aumento nos teores de cidos hmicos e decrscimo nos de cidos flvicos. Com aproximadamente 30 dias de compostagem, o contedo de substncias hmicas no material orgnico pode passar de 28%, no momento da instalao, para 44%. O contedo de cidos hmicos tambm aumenta durante o processo de compostagem, passando de 4,6 para 6,0% nos primeiros 18 dias, atingindo 21% no final do processo. O aumento do nvel de cidos hmicos representa o gradiente de humificao e maturidade do composto (Hsu & Lo, 1999). A aplicao de compostos pode aumentar a produtividade das culturas, a capacidade de troca de ctions, o teor de nutrientes disponveis e melhorar as caractersticas da matria orgnica humificada. Alm do efeito imediato, a aplicao de compostos orgnicos possui efeito residual, podendo beneficiar culturas subseqentes. Santos et al. (2001) estudaram o efeito da aplicao de composto orgnico, na presena e ausncia de adubo mineral, sobre o crescimento e produo de alface. A produo de matria fresca e de matria seca cresceram linearmente com o incremento das doses de adubo orgnico. Observou-se aumento na produo com doses crescentes de adubo orgnico, o que foi atribudo melhoria das caractersticas qumicas e fsico-qumicas do solo. Houve efeito residual da adubao da hortalia com composto orgnico, o que no foi verificado na adubao mineral. A vermicompostagem tambm uma prtica muito utilizada para acelerar a estabilizao da matria orgnica dos resduos orgnicos. As minhocas atuam como aceleradores do processo de decomposio. O povoamento das pilhas de composto com as minhocas deve ser realizado com pelo menos 45 dias aps iniciado o processo, para evitar as elevadas temperaturas dos momentos iniciais da decomposio. De forma semelhante ao observado na aplicao de compostos os benefcios da aplicao de vermicomposto vo desde o fornecimento de nutrientes at as melhorias de caractersticas fsicas e biolgicas do solo. Yagi et al., (2003) aplicaram doses equivalentes a 0, 14, 28, 56 e 70 ton ha-1 de vermicomposto de esterco bovino e observaram correlao direta entre a dose do fertilizante orgnico e os teores de P, Mg, K, Ca e o aumento linear no contedo da MOS. Aumentos significativos no contedo de C nas fraes humificadas tambm foram relatados a partir da aplicao de vermicomposto. Embora a aplicao de resduos de origem animal diretamente no solo seja uma prtica comum dos agricultores localizados prximos das granjas de criao a utilizao contnua desses dejetos necessita de uma avaliao constante. A anlise do perfil do solo e das guas subterrneas deve ser feita rotineiramente nessas situaes visando evitar nveis que possam comprometer a qualidade desses compartimentos. Em reas de produo de sunos, o grande volume produzido de rejeitos necessita de destino adequado. Muitos agricultores utilizam esse material diretamente nas lavouras com a finalidade de fornecimentos de nutrientes. As caractersticas qumicas de um Argissolo Vermelho-Amarelo, cultivado com diferentes espcies forrageiras, foram modificadas com a adio de esterco lquido de sunos na taxa mdia equivalente a 800 Kg ha-1 d-1. O uso de doses elevadas desse dejeto in natura (entre 20 e 40 m3 ha-1) promove a eutrofizao do solo, principalmente em relao ao P, que teve seu contedo aumentado em at 6710% (Ceretta et al., 2003). Durigon et al. (2002) avaliaram a aplicao de esterco lquido de sunos em doses que variaram de 0, 20 e 40 m3 ha-1, na produo de matria seca de pastagem. A aplicao de 20 m3 ha-1, em
261

intervalos de 45 a 60 dias, foi mais eficiente para o suprimento de nutrientes s plantas. Aos 8,3 meses de experimento, o incremento da produo acumulada de matria seca foi de 44 e 70% com o uso das doses 20 e 40 m3 ha-1, respectivamente. Com o passar do tempo, o efeito residual foi assumindo maior contribuio, tendo os acrscimos atingido 109 e 155% ao final de 48 meses de experimento. O esterco bovino talvez seja o material mais costumeiramente utilizado como adubo orgnico. A partir da aplicao de diferentes doses de esterco bovino, Silva et al. (2004) observaram a influncia desse material sobre o teor de gua disponvel e sobre a reteno de umidade do solo, com aumentos lineares de tais caractersticas. A aplicao do esterco tambm alterou, de forma linear, o teor de P no solo, aumentou o nmero de espigas empalhadas comercializveis e o rendimento de gros. Embora o uso de fertilizantes orgnicos tenha respaldo, em grande parte, nos experimentos, o perodo de conduo desses trabalhos, de forma geral, curto. Isso certamente influencia os resultados obtidos. Como j dito, o solo um sistema aberto, com troca de energia com o meio. Muitas reaes que ocorrem nesse sistema demandam tempo para que possam ser estabelecidas. Mesmo que associar equilbrio num sistema aberto possa parecer equivocado, o estabelecimento de experimentos de longa durao pode permitir a obteno de resultados de maior confiabilidade. Alguns centros de pesquisa conseguiram, entretanto, preservar o manejo orgnico em reas experimentais a longo prazo. Nardi et al. (2004), por exemplo, avaliaram o efeito de 40 anos de aplicao de fertilizantes orgnicos, mineral e mistura de orgnico com mineral sobre as propriedades da MOS. Neste trabalho, o comportamento de algumas propriedades do solo foi acompanhado aps receber, durante 12 anos, um tratamento especfico. A aplicao de estrume lquido e slido, de fertilizantes minerais e da associao de fertilizantes orgnico e mineral foi avaliada. Todos os tratamentos alteraram o contedo de C orgnico total do solo. O maior contedo de carbono orgnico total, entretanto, foi observado no tratamento com aplicao esterco (37654 Kg C ha-1), inferior somente ao tratamento-controle que consistiu em uma rea de vegetao sem cultivo comercial. J nos tratamentos sem a aplicao de material orgnico, o contedo foi bastante inferior, na ordem de 21795 Kg C ha-1. Alm dos resduos de origem animal, a aplicao de matria orgnica de origem industrial e urbana pode ser tambm de interesse para a agricultura. A utilizao desses materiais justificada pela necessidade de encontrar um destino apropriado para sua reciclagem (Canellas et al., 2001), evitando-se o risco do armazenamento de grandes quantidades de lixos e dejetos e impacto ocasionado pela emisso desse material nos cursos de gua. A indstria sucro-alcooleira proporciona grande impacto sobre o ambiente, seja pela monocultura de reas extensas, uso intensivo de agroqumicos, seja pela produo de dejetos. Por exemplo, para cada litro de lcool produzido, so gerados entre 10 a 15 litros de vinhaa. A presso ambiental condicionou o uso agrcola dos dejetos dessa indstria e uma srie de trabalhos foram conduzidos para a sua avaliao. A aplicao de vinhaa durante 35 anos em reas de cultivo de cana-de-acar, na regio Norte Fluminense, foi avaliada por Canellas et al. (2003) e Busato (2004). Como resultado, observou-se aumento nos teores de macro e micronutrientes, com melhora nos atributos qumicos do solo, favorecendo a formao de substncias alcalino-solveis mais polimerizadas (Canellas et al., 2003). Nas camadas subsuperficiais (0,20-0,40 m), o valor da relao CAH/AF aumentou de 0,21 na rea sem aplicao de vinhaa, para 0,49, na rea que recebeu o resduo (Canellas et al., 2003). A aplicao de vinhaa aumentou em 48% o contedo total de P na amostra de 0-0,20 m de profundidade, com aumento do contedo de P na frao lbil (Busato, 2004). Quando os cidos hmicos foram avaliados pela espectroscopia de ressonncia magntica nuclear
262

(RMN 31P) observou-se que a adio de vinhaa alterou a participao e a distribuio das formas orgnicas de P, com acmulo de formas mineralizadas com facilidade. Outra forma de adubao com resduos ocorre aplicando composto de lixo urbano. Grande parte dos resduos domiciliares composta de matria orgnica, e quando no tratadas de maneira adequada, torna-se poluidores em potencial, principalmente dos corpos hdricos. O tratamento e a posterior destinao adequada desses materiais so, portanto, uma necessidade da sociedade. Nos solos cidos, o composto de lixo urbano promoveu aumentos nos teores de potssio, clcio e magnsio, em mdia, de 195%, 200% e 86%, respectivamente; e elevao da CTC em 42% (Abreu Jr et al., 2001). A aplicao anual de cinco doses (0, 37, 74, 148 e 444 Mg ha-1) de composto orgnico obtido em uma estao de tratamento de gua de Porto Rico, durante um perodo de trs anos , aumentou significantemente a relao CAH/CAF das fraes humificadas, indicando um aumento no C associado com a frao cido hmico (Rivero et al., 2004) e, conseqentemente, melhoria na qualidade da MOS. Entretanto, Canellas et al. (2001) observaram que a aplicao equivalente a 80 ton ha-1 de lodo da estao de tratamento de esgoto e composto de lixo urbano no solo promoveu aumento no contedo de cidos flvicos. Isto implica na diminuio da relao CAH/AF na qualidade do hmus do solo. A baixa qualidade do material aplicado foi responsvel pelo decrscimo na qualidade da matria orgnica humificada. A qualidade do material incorporado ao solo limita, portanto, sua utilizao em larga escala. O uso agrcola do composto de lixo s pode ser vivel do ponto de vista tcnico, social e ambiental se suas caractersticas qumicas no possibilitarem alteraes que comprometam a qualidade do solo, das guas e dos produtos resultantes. Os resultados de pesquisa com adubao orgnica no Brasil, apesar de promissores, so, ainda, escassos e normalmente constitudos por experimentos de curta durao. Alm disso, normalmente o ganho social obtido nos processos que utilizam alternativas ecolgicas no so contabilizados. A interferncia, de maneira menos agressiva, no ambiente, o progresso construtivo e participativo de aprendizagem e a fortificao das associaes e cooperativas so crditos de uma ideologia que inclui o homem como parte do sistema de produo. O uso intensivo de estercos, compostos, vermicompostos encontra um obstculo na quantidade e no volume que deve ser transportado at as lavouras. um trabalho penoso com gasto elevado de energia e que, dependendo da distncia entre a fonte dos estercos e a lavoura a ser adubada, muitas vezes, pode no estar em conformidade com a racionalidade do agricultor familiar (uma autoexplorao adicional de sua fora de trabalho pode no compensar a adoo de determinada prtica), mesmo sabendose dos benefcios ou dos prejuzos ao no adot-la. Parte, portanto, para adoo de outra racionalidade, a produo de matria orgnica in situ, ou seja, no mesmo local da lavoura. A adubao verde o carro chefe dessa proposta. Adubao verde Diferente da agricultura convencional, a Agroecologia preconiza o cultivo de diversas espcies ao mesmo tempo na unidade fsica de produo. A prtica da adubao verde consiste na utilizao de plantas estabelecidas em rotao, sucesso ou consrcio com cultivos, sendo os resduos depositados mantidos em superfcie ou incorporados ao solo (Calegari & Vieira, 1999). Esta uma forma de fornecer elementos essenciais por meio da reciclagem de material orgnico verde, pela utilizao de determinadas plantas cultivadas especificamente para essa finalidade. O uso de leguminosas e de plantas de outras famlias, consideradas adubos verde, pode melhorar a
263

produtividade das culturas, a fertilidade do solo e a qualidade da matria orgnica (Pizauro Jr & Melo, 1995; Espndola, 2001; Brito, 2003; Canellas et al., 2004). Muitas espcies de leguminosas possuem a capacidade de formar relaes simbinticas com bactrias dos gneros Rhizobium e Bradyrhizobuim. Como resultado desta associao ocorre a fixao do N2 atmosfrico. O N atmosfrico pode tambm ser fixado, ou seja, transformado para NH 3, por meio de processos industriais como o de Harber-Bosch. Parte significativa dos fertilizantes nitrogenados usados nos sistemas agrcolas obtida por estes mecanismos (Siqueira & Moreira, 2001). Entretanto, para que isso ocorra, necessrio que grande quantidade de energia, para romper a ligao tripla que une os tomos de N, seja utilizada, o que encarece sobremaneira o processo. Alm disso, a fonte de energia utilizada de origem fssil, portanto, limitada. A dinmica de decomposio e a liberao dos nutrientes dos resduos podem variar de acordo com a qualidade da fitomassa produzida pelas espcies de adubos verdes (Brito, 2003). Espcies leguminosas como feijo-de-porco ( Canavalia eusiformes ), amendoim forrageiro ( Arachis pintoi), cudzu tropical ( Pueraria phaseoloides ) e siratro ( Macroptilium artropurpureum ) apresentam grande potencial de produo de matria seca e podem alterar as caractersticas qumicas do solo, tais como, pH e os teores de alumnio (Espndola, 2001). Os teores de C e N microbianos, C orgnico e N total e fraes de C orgnico do solo podem ser aumentados quando essas plantas so introduzidas nas reas de cultivo (Duda et al., 2003). A qualidade da matria orgnica de um Argissolo Vermelho Amarelo, localizado em Seropdica, RJ, cultivado com diferentes espcies de leguminosas herbceas perenes: amendoim forrageiro (Arachis pintoi), cudzu tropical (Pueraria phaseoloides) e siratro (Macroptilium atropurpureum), foi avaliada por Canellas et al. (2004). O uso das leguminosas no alterou o contedo de C orgnico total do solo, mas promoveu o acmulo de cidos hmicos na camada superficial. Apesar do pouco tempo de implementao do experimento (28 meses), os autores verificaram a incorporao significativa de C e N dos resduos orgnicos das leguminosas na frao cidos hmicos, conferindo maior grau de condensao quando avaliados pelas anlises da composio elementar, espectroscopia de infravermelho e fluorescncia. A incorporao da parte area de plantas de sorgo ou lab labe reduziu significativamente os teores de C na frao huminas (Pizauro Jr et al., 1995). Esta frao se caracteriza por ser a menos reativa e que normalmente compe o maior contedo do material humificado dos solos tropicais, independentemente da cobertura e do manejo do solo. Participaes superiores a 50% na composio da matria orgnica humificada so freqentemente observadas (Borges & Kiehl, 1996; Yagi et al., 2003). A ntima relao entre essa frao e os minerais do solo pode explicar tal fenmeno, tornando exata mais persistente no solo. Alm dos benefcios nas propriedades qumicas do solo, diversos autores citam a melhoria das condies fsicas e biolgicas e proteo do solo contra processos erosivos, quando plantas utilizadas como adubao verde so introduzidas nas reas de cultura (Primavesi, 1987; Espndola 2001; Brito, 2003). O melhor aproveitamento espacial, principalmente para aqueles proprietrios de pequenas unidades de produo, e a possibilidade da obteno de mais de um produto na mesma rea diminuem a dependncia que se cria com os monocultivos. Isso torna a propriedade mais eficiente do ponto de vista econmico e auxilia a diminuio de problemas agronmicos.
264

Preservao dos restos culturais A utilizao intensa de mquinas e equipamentos agrcolas, como arados e grades, nos solos tropicais tornou-se uma atividade obrigatria aps a revoluo verde. Para manter os nveis elevados de produtividade, os produtores efetuavam o revolvimento do solo para incorporar corretivos e adubos solveis. Entretanto, o estoque de matria orgnica decresce rapidamente aps esse revolvimento. A oxidao da matria orgnica e as perdas ocorridas em funo da exposio do solo aos agentes erosivos conduzem ao empobrecimento do mesmo, tanto no aspecto de fertilidade (CTC), quanto nas propriedades fsicas e biolgicas diretamente correlacionadas matria orgnica. A utilizao de arados e grades pesadas tambm favorece o aumento da concentrao de cidos flvicos e huminas e a diminuio do contedo de cidos hmicos, o que caracteriza a diminuio da qualidade da matria orgnica do solo (Cunha et al., 2001). A manuteno ou recuperao dos teores de matria orgnica e da capacidade produtiva podem ser alcanadas pela utilizao de mtodos de preparo com pequeno ou nenhum revolvimento e por sistemas de cultura com alta adio de resduos vegetais. Isto propicia menores taxas de perda e maiores taxas de adio de matria orgnica ao sistema solo, aumento da infiltrao e do armazenamento de gua no solo, acmulo de nutrientes e aumento da atividade biolgica (Bayer & Mielniczuk, 1999). Ainda que tal procedimento no se enquadre nos moldes dos sistemas agroecolgicos, pois utiliza herbicidas como dessecantes foliares para a formao da palha e toda a base da agricultura convencional, como inseticidas, fungicidas, organismos geneticamente modificados, o sistema de plantio direto tradicional um exemplo de manejo que permite o acmulo e a manuteno da MOS. Essa prtica agrcola se caracteriza pela manuteno da cobertura do solo durante todo o ano, mantendo-se os resduos vegetais na superfcie e o seu revolvimento realizado somente na linha de semeadura (Vargas et al., 2004). uma forma de cultivo em que se utiliza o menor revolvimento possvel do solo, uma vez que o plantio feito em pequenos sulcos sob a palhada, utilizando-se maquinrio especialmente desenvolvido. A maior conservao do solo, o menor desgaste de equipamentos, a economia de combustvel e a melhoria das condies para o desenvolvimento das plantas so benefcios obtidos com essa prtica. Associados ao plantio direto, muitos produtores utilizam outros manejos conservacionistas, como a rotao de culturas. Neste caso, h a alternncia de cultivos de plantas de famlias diferentes em uma mesma rea, de acordo com uma seqncia estabelecida anteriormente. Os diferentes sistemas radiculares de cada cultura, ora fasciculado, ora pivotante, e os nveis diferenciados de exigncia para cada planta, contribuem para um melhor ambiente no solo. Dependendo do sistema de cultura utilizado, o plantio direto pode promover aumento do C total do solo nas camadas superficiais, mesmo em um pequeno perodo de conduo (Bayer et al., 2004). Principalmente nas camadas superficiais, possvel obter-se maior estabilidade estrutural, o que, aliada manuteno dos resduos culturais na superfcie do solo, tm proporcionado maior proteo contra o impacto direto das gotas de chuva, permitindo reduzir a perda de gua por escoamento superficial (Roth & Vieira, 1983). Os estoques de C na matria orgnica, associados aos minerais e nas substncias hmicas aumentaram na ordem de 34% e 38%, respectivamente, no sistema de plantio direto em comparao ao plantio convencional, em um Latossolo Bruno do estado de Santa Catarina (Bayer et al., 2002). O ambiente menos oxidativo formado a partir da deposio da palha favoreceu preservao das fraes lbeis e humificadas da matria orgnica, contribuindo para a recuperao

265

da qualidade do solo e do ambiente. Mesmo que, em algumas situaes, o contedo de C orgnico total do solo no seja alterado pelo plantio direto, as fraes que a compem podem sofrer mudanas considerveis. O C solvel em gua (C AS) reflete o estdio inicial de degradao dos resduos orgnicos incorporados ao solo, nos quais os materiais insolveis sofrem hidrlise, dando origem a intermedirios solveis em gua, como aminocidos, mono e dissacardeos. O baixo teor de C SA pode significar dificuldade no ataque inicial de enzimas advindas dos microrganismos ou que o estdio inicial de sntese de enzimas j se encontra avanado (Souza & Melo, 2003). Na avaliao de diferentes sistemas de cultivo, esses autores verificaram que o plantio convencional de milho no vero (arao e gradagem), com pousio no inverno, foi o que apresentou menor valor de C solvel em gua (C SA) na camada de 0,0,5-0,10 m. J quando o plantio direto de milho foi associado ao cultivo de crotalria (Crotalria juncea) no inverno, houve aumento significante de C SA na mesma camada. O efeito desse sistema sobre C SA pode estar associado ao efeito das razes e seus exsudados, aumentando o C SA, alm da presena dos resduos da cultura. Somente 10% das substncias hmicas se encontravam na forma de cidos flvicos, indicando um estdio mais avanado de estabilizao do material pela humificao. Os valores de cidos hmicos foram mais elevados no sistema de plantio direto de milho com pousio no inverno, na camada de 0-0,05 m. Neste tratamento, o efeito observado para cidos flvicos e cidos hmicos parece indicar maior mineralizao da matria orgnica. A maior relao C/N dos cidos flvicos em relao aos cidos hmicos mostra maior incorporao de N nas fraes mais estveis da SH do solo. A concentrao de radicais livres semiquinona (RLS) tem sido correlacionada ao grau de humificao da MOS (Schnitzer & Levesque, 1979). Bayer et al, (2002b), utilizaram a ressonncia paramagntica eletrnica (EPR) para avaliar a concentrao de RLS em cidos hmicos extrados de um Argissolo Vermelho, sob diferentes sistemas de preparo de solo e de culturas. O sistema que utilizou rotao de culturas associado ao plantio direto, durante nove anos, apresentou menor grau de humificao dos cidos hmicos quando comparado ao do plantio convencional. O sistema de preparo do solo teve efeito preponderante na diminuio do grau de humificao dos cidos hmicos. Avaliao semelhante foi realizada em fraes granulomtricas da camada superficial (0-25 mm) de um Cambissolo hmico, em Lages (SC), cujos sistemas de preparo do solo foram: preparo convencional, preparo reduzido e plantio direto (Bayer et al., 2003). O plantio direto promoveu diminuio no grau de humificao da matria orgnica, em comparao aos solos manejados sob preparo reduzido e preparo convencional. A frao granulomtrica 20-2 mm apresentou a concentrao mais alta de RLS e a menor largura de linha do sinal de EPR, o queconfirma o maior grau de humificao da matria orgnica e/ou a maior interao da matria orgnica com a frao mineral, comparativamente aos demais tamanhos de partculas. Outro exemplo de manuteno e preservao da MOS, em cultivos que preservam o material vegetal, o das lavouras de cana-de-acar que no utilizam a queima da palha em pr-colheita. Nas reas canavieiras, a prtica da queima da palhada tem o objetivo de facilitar as operaes de corte e carregamento da produo e diminuir a incidncia de acidentes de trabalho (Oliveira et al., 1999; Timm, 2002). O impacto do fogo, nas reas de cultivo de cana, implacvel e resulta em diferentes prejuzos ambientais. A depauperao dos solos, a emisso de C para a atmosfera, a destruio da fauna e os riscos de acidentes em rodovias prximas s reas de queimadas so exemplos desses prejuzos. Uma grande quantidade de material particulado slido tambm emitida para a atmosfera, ocasionando doenas respiratrias nas comunidades que residem em regies canavieiras. Alm disso, o fogo destri um ciclo biolgico e impede que o material orgnico que
266

seria depositado no solo seja, transformado, pela ao microbiana em material humificado. imprescindvel que a agricultura atual no utilize o fogo como recurso de rotina. Pesquisadores e agricultores devem desenvolver, em conjunto, modelos apropriados para evitar as queimadas. O maior aporte de nutrientes obtidos pela preservao da palhada pode contribuir para a diminuio do uso de fertilizantes industriais, beneficiar a atividade microbiana, elevar a capacidade de troca de ctions e permitir maior agregao das partculas do solo (Ripoli & Villanova, 1992; Sparoveck, 1997). Gama (2002), estudando manejo de cultura canavieira com e sem a queima da palha no nordeste do Estado do Paran, concluiu que o procedimento sem a destruio do material vegetal apresenta vantagens como a reduo da capacidade de adsoro de P e o aumento da quantidade de P orgnico total. Resultados semelhantes foram observados por Canellas et al. (2003), que estudaram a preservao da palha por longo tempo (55 anos) na regio de Campos dos Goytacazes RJ. Nessa regio, os pequenos fornecedores de cana-de-acar so responsveis por quase 60% da cana processada pelas usinas. Uma estratgia de reproduo desses pequenos agricultores que se encontram fortemente subordinados lgica das Usinas a preservao da fertilidade natural do solo (com a manuteno da palhada) e a diminuio dos custos de produo, no utilizando agrotxicos (principalmente herbicidas e inseticidas). Tanto a concentrao, quanto as caractersticas fsicas e qumicas dos cidos hmicos so modificadas quando a palha deixada no campo. Em amostras coletadas na camada de 0-0,20 m, a relao CAH/AF passou de 0,42, na rea onde a cana foi queimada, para 0,94 onde houve a preservao da palha, provando que essa prtica melhora a qualidade da MOS pelo aumento do contedo de substncias hmicas alcalinosolveis (Canellas et al., 2003). As caractersticas espectroscpicas dos cidos hmicos tambm so alteradas de maneira drstica quando h preservao da palha por longo perodo, com acmulo de formas de P orgnico facilmente mineralizvel (Busato, 2004). O sistema de colheita de cana-de-acar sem a queima tambm pode provocar alteraes nas propriedades fsicas dos solos. Em um experimento com cinco anos de cultivo sem a queima foi verificado que a preservao da palha da cana favoreceu a conservao dos agregados do solo (Ceddia et al., 1998). No sistema de cana queimada, foram observados maiores valores de densidade do solo, reduo do dimetro mdio ponderado dos agregados estveis, diminuio da porosidade total na camada superficial e menor velocidade instantnea de infiltrao de gua. Ficou evidenciado que a queima dos restos da cultura proporcionou maior compactao superficial do solo, relacionada diminuio do tamanho e quantidade de agregados. Utilizar os recursos naturais de forma adequada, mais do que uma tendncia, uma necessidade humana. O desenvolvimento de modelos agrcolas sustentveis passa necessariamente pela adoo de alternativas que preservam a matria orgnica do solo. H ainda muitas dvidas sobre a melhor forma de utilizao dos solos dos trpicos, por isso, a avaliao da MOS imprescindvel para que prticas mais adequadas sejam incentivadas e difundidas.

267

c a p t u l o
Fundamentos da qumica orgnica
Maria Raquel Garcia Vega O objetivo deste captulo apresentar de forma simplificada os fundamentos da qumica orgnica para facilitar o reconhecimento dos grupos funcionais que, por sua vez, podem interagir intra e/ou intermolecularmente (sinergicamente ou no) para produzir as reaes qumicas da matria orgnica no solo. Devido importncia dos grupos funcionais na reatividade da matria orgnica, os tpicos foram organizados por funcionalidade, comeando pelos compostos mais simples (alcanos) at chegar aos compostos mais complexos. Antes, porm, necessria uma noo sobre estrutura, hibridizao, eletronegatividade, polaridade, tipos de ligaes e de possveis reaes em qumica orgnica, para o melhor entendimento das interaes intra e intermoleculares. No feita a abordagem mecanstica das reaes apresentadas. Optou-se por mostrar o qu da qumica destes compostos e no o porqu. Entretanto, no final do captulo, fornecida a bibliografia necessria para o aprofundamento dos temas tratados

12

Introduo Os fundamentos da qumica orgnica datam da metade do sculo XVIII, com a evoluo da arte dos alquimistas para uma cincia moderna. O incio se deu pela observao de diferenas (ento inexplicveis) entre substncias obtidas de organismos vivos e aquelas derivadas dos minerais. Os compostos extrados das plantas e dos animais eram muito difceis de isolar e purificar e, mesmo quando puros, eram difceis de manusear e apresentavam, ainda, maior tendncia decomposio que a dos compostos extrados dos minerais. Em 1770, o qumico sueco T. Bergman foi o primeiro a expressar a diferena entre substncias orgnicas e inorgnicas. O termo qumica orgnica logo passou a denominar a qumica dos compostos encontrados em organismos vivos. Surgiu, na poca, a Teoria da Fora Vital como explicao para as diferenas de comportamento entre os compostos orgnicos e os inorgnicos. Atribua-se uma fora vital contida nestes compostos por se originarem de organismos vivos. Conseqentemente, os qumicos, daquela poca, acreditavam que os compostos orgnicos no podiam ser preparados nem manipulados no laboratrio (como no caso dos compostos inorgnicos). Esta concepo foi abandonada quando, em 1828, Friedrich Wohler descobriu que era possvel converter o sal inorgnico cianato de amnio na substncia orgnica j conhecida como uria, que havia sido previamente encontrada na urina humana. Hoje a qumica unificada. Os mesmos princpios que explicam os compostos inorgnicos mais simples tambm explicam os compostos orgnicos mais complexos. A nica caracterstica que distingue os compostos orgnicos que todos contm o elemento carbono . Entretanto, a diviso entre qumica orgnica e inorgnica, que comeou por razes histricas
268

foi mantida devido convenincia prtica para favorecer a compreenso dos estudantes. A qumica orgnica , ento, o estudo dos compostos de carbono. Outros elementos comumente presentes em compostos orgnicos so hidrognio, nitrognio, oxignio, fsforo, enxofre e cloro. Todo organismo vivo constitudo por compostos orgnicos que por meio de uma complexa linguagem, possibilitam o funcionamento da natureza. Buscando uma analogia, pode-se utilizar a comunicao oral dos seres humanos em que h os fonemas que, unidos de forma especfica, formam os sons das palavras e estas juntas formam um vocabulrio capaz de expressar uma idia, toda uma cultura e suas regras de convivncia. Assim, a linguagem qumica formada por cerca de 90 elementos que do origem a TODOS os materiais conhecidos desde rochas at seres vivos. So os tomos que, unidos de acordo com suas caractersticas, principalmente eletrnicas, formam molculas e estas, por sua vez, todo o mundo material tomos, molculas e ligaes qumicas Como os tomos se unem? Como os eltrons esto distribudos em um tomo? De acordo com o modelo da mecnica quntica de um tomo, o comportamento de um eltron especfico em um tomo pode ser descrito pela expresso matemtica denominada equao de onda (a mesma usada para descrever o movimento das ondas em fludos). A soluo de uma equao de onda denominada funo de onda, ou orbital, e descrita pela letra grega psi, . Quando o quadrado da funo de onda 2 expresso num espao tridimensional, o orbital descreve o volume do espao em volta do ncleo onde os eltrons tm maior probabilidade de serem encontrados. Quais as formas de um orbital? Existem quatro tipos diferentes de orbitais, denominados s, p, d e f. Na qumica orgnica, os orbitais mais importantes so s e p. Os orbitais s so esfricos, com o ncleo em seu centro; orbitais p tm forma de halteres (Figura 12.1)

Figura 12.1. Orbitais eletrnicos: 1 Orbital s e 3 Orbitais p (px, py, p z)

Os orbitais atmicos localizam-se em vrios nveis de energia ou camadas, designados pelos nmeros 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7. medida que o nmero da camada aumenta, significa que esta se encontra mais afastada do ncleo e, portanto, h menor probabilidade de se encontrar um eltron. A primeira camada tem um orbital s denominado 1s; a segunda um orbital s (2s) e trs orbitais p (2px, 2py,2pz); e a terceira, um orbital s (3s) , trs orbitais p (3px. 3py, 3pz), e cinco orbitais d. A configurao eletrnica no estado fundamental de um tomo uma lista dos orbitais ocupados por seus eltrons. Podemos prever esse arranjo seguindo estas trs regras: Regra 1: Os orbitais de menor energia so preenchidos seguindo as setas do diagrama a seguir (Principio de Aufbau)

269

Observe que o orbital 4s est situado entre os orbitais 3p e 3d com relao energia. Regra 2: os eltrons agem de forma como se estivessem girando em torno de um eixo da mesma maneira que a terra. Esse movimento denominado spin (que significa girar), tem duas orientaes denominadas para acima (positivo) e para abaixo (negativo). Somente dois eltrons podem ocupar um orbital e eles devem ter spins opostos (Princpio de Pauli). Regra 3: se dois ou mais orbitais vazios de mesma energia esto disponveis, todo eltron ocupa cada um dos orbitais com seus spins paralelos at que todos os orbitais estejam ocupados pela metade. Por que os tomos se ligam e como as ligaes podem ser descritas eletronicamente? Os tomos se ligam uns aos outros porque os compostos resultantes so muito mais estveis (possuem menor energia) do que os tomos separados. A energia sempre flui para fora de um sistema qumico quando uma ligao se forma. De modo inverso, a energia deve ser colocada no sistema para quebrar uma ligao qumica. Dessa maneira, fazer ligaes libera energia e quebrar ligaes absorve energia. A pergunta de como as ligaes podem ser descritas eletronicamente mais difcil. Para tanto, preciso estudar mais sobre as propriedades dos tomos. Quando os tomos reagem para formar ligaes, somente atuam os eltrons do nvel mais externo, denominado nvel de valncia. Para representar os eltrons do nvel de valncia, usa-se a notao de Lewis, assim chamada em honra ao qumico norte americano Lewis (1875-1946), que consiste em escrever os smbolos atmicos rodeados de tantos pontos quantos eltrons possui o tomo no nvel de valncia. Em condies normais (25oC, 1 atm) apenas os gases nobres existem como tomos isolados (muito estveis e pouco reativos). Os demais elementos se atraem entre si ou em relao a outros elementos. G. Lewis e W. Kossel explicam a teoria eletrnica de valncia como: os tomos ao se unirem procuram perder ou ganhar eltrons na ltima camada at adquirirem a configurao eletrnica de um gs nobre . Esta hiptese conhecida tambm como regra do octeto. O tomo adquire estabilidade quando possui oito eltrons na camada eletrnica mais externa. Dito de outra maneira: quando dois tomos vo unir-se, estes trocam eltrons entre si ou usam eltrons em parceria procurando adquirir a configurao de um gs nobre. As foras que mantm os tomos unidos so de natureza fundamentalmente eltrica e so denominadas ligaes qumicas. Ligaes qumicas So encontrados dois tipos mais comuns de ligaes qumicas: inicas (ou eletrovalentes) e covalentes. Ligao inica: resulta da atrao eletrosttica de ons de cargas opostas. Geralmente formada entre dois tomos cujos valores de eletronegatividade so bastante distintos. O tomo menos eletronegativo perde um eltron (ou mais de um), tornando-se um on positivo (ction). J o
270

tomo mais eletronegativo ganha um ou mais eltrons, tornando-se um on carregado negativamente (nion). A atrao eletrosttica entre os ons resulta na liberao de energia, com a conseqente estabilizao do sistema. Quando os elementos ganham ou perdem eltrons, a configurao eletrnica da sua camada de valncia tende a ficar com oito eltrons, como a maioria dos gases nobres. A ligao inica pode tambm ocorrer em sais orgnicos. Ligao covalente: uma ligao denominada covalente quando os tomos compartilham um ou mais pares de eltrons. Normalmente a diferena de eletronegatividade entre os tomos que formam uma ligao covalente pequena ou nula. Considere-se por exemplo, uma molcula de hidrognio (H2). A ligao covalente H H resulta do compartilhamento de eltrons dos dois tomos de hidrognio, representados aqui por pontos (estrutura de Lewis).

ou

Hidrognios isolados (atmicos)

Molcula (ligao covalente)

Figura 12.2. Ligao covalente na molcula de H2, representao de Lewis (pontos);trao e a representao da sobreposio de spins para formar a ligao

O nmero de ligaes covalentes que um tomo forma depende tanto do nmero de eltrons de valncia quanto do nmero adicional de eltrons que ele necessita para atingir a configurao de gs nobre. tomos com um, dois ou trs eltrons de valncia formam uma, duas ou trs ligaes; tomos com quatro ou mais eltrons de valncia formam tantas ligaes quantas forem necessrias para que os nveis s e p da camada de valncia sejam preenchidos com eltrons, de forma a atingir um octeto estvel. O boro, por exemplo, tm somente trs eltrons de valncia e forma apenas trs ligaes covalentes numa molcula como BF3. O carbono tem quatro eltrons de valncia e preenche sua camada de valncia formando quatro ligaes, como no metano (CH4). O nitrognio tem cinco eltrons de valncia e forma somente trs ligaes como na amnia (NH3); e o oxignio tem seis eltrons de valncia e forma duas ligaes na gua (H2O). A valncia de cada elemento pode ser encontrada na tabela peridica em nmeros romanos I, II, III, IV etc., que corresponde ao grupo a que pertence um tomo. O carbono, por exemplo, pertence ao Grupo IVA da tabela peridica; o nitrognio ao Grupo VA; e o oxignio ao Grupo VIA. Os pares de eltrons compartilhados so representados, geralmente, por traos. enquanto que os no-compartilhados (ou no-ligantes) so representados por pontos.
No ligantes

H Cl

F Br

Uma ligao

Duas ligaes Trs ligaes Quatro ligaes

271

O carbono Por que o carbono especial? O que distingue o carbono dos outros elementos? Respostas para essas perguntas podem ser obtidas com a anlise da posio do carbono na tabela peridica. Como um elemento do grupo IVA, o carbono compartilha quatro eltrons de valncia e forma quatro ligaes covalentes fortes. Alm do mais, os tomos de carbono podem se ligar uns aos outros formando cadeias e anis. O carbono sozinho capaz de formar uma diversidade imensa de compostos que pode ir desde o mais simples at os mais surpreendes complexos do metano com um nico tomo de carbono ao DNA que pode conter alguns bilhes de tomos. V-se agora como esses tomos se arranjam no espao. Para compreender isto, necessrio considerar, inicialmente, a hibridizao dos orbitais atmicos. a teoria da hibridizao que fornece explicaes para a geometria observada nas molculas Orbitais hbridos sp3 O composto orgnico mais simples o gs metano CH4. Para satisfazer a valncia de todos os cinco tomos, os hidrognios devem unir-se ao carbono por meio de ligaes simples denominadas ligaes sigma (). No estado fundamental, a configurao eletrnica do tomo de carbono 1s22s22p2. Com essa distribuio eletrnica, o carbono no capaz de se ligar a quatro tomos de hidrognio, mas apenas a dois. Para melhor compreenso desse fato, basta representar os orbitais em forma de caixas como mostrado a seguir:

Se um eltron do orbital 2s for transferido para o orbital 2p vazio, o carbono passar a ter quatro eltrons desemparelhados (estado excitado), capaz de fazer, portanto, quatro ligaes. Pode ser explicado desse modo a tetravalncia do tomo de carbono. Porm, se os tomos de hidrognio se ligassem aos orbitais 2s, 2px, 2py e 2pz os ngulos entre as ligaes H-C-H no corresponderiam ao valor experimental de 109,47, pois o ngulo entre orbitais p de 90. Tambm no seriam iguais todos os comprimentos das ligaes C-H, pois o orbital 2s possui raio diferente do dos orbitais 2p. O que acontece, na verdade, uma hibridizao dos orbitais s e p, dando origem a quatro novos orbitais denominados hbridos sp3. O ngulo entre os orbitais sp3 de 109,47. Dessa forma, a distncia entre eles mxima, minimizando, assim, a repulso entre os eltrons. Na Figura 12.3, pode ser observada uma representao simplificada da combinao dos orbitais s e p do carbono para formar os orbitais hbridos. Tambm mostrada a combinao destes com quatro tomos de hidrognio, resultando na formao do CH4.

Figura 12.3. Hibridizao de orbitais s e p e formao do metano (sp3)

272

A geometria da molcula do metano dependente da dos orbitais sp3, sendo representada a seguir:

Figura 12.4: Geometria tetradrica do metano

O tomo de carbono ocupa o centro de um tetraedro e os tomos de hidrognio ocupam seus vrtices. O ngulo entre as ligaes de 109,47 . Esta geometria denominada tetradrica. Todo carbono que se encontrar ligado a quatro outros tomos ou grupo de tomos apenas por meio de ligaes sigma ter hibridizao sp3, ou seja, geometria tetradrica. Alm do carbono, outros elementos, tais como o oxignio e o nitrognio tambm podem ter hibridizao sp3. Como o oxignio contm dois eltrons desemparelhados poder fazer duas ligaes sigma . O ngulo observado entre as ligaes H O H de 104,5, em razo da maior repulso entre os eltrons no-ligantes quando comparada com a repulso entre os eltrons que participam das ligaes O H. Levando-se em conta apenas os tomos de hidrognio e oxignio, a geometria da molcula de gua denominada angular. No caso da molcula de amnia NH3, os ngulos entre as ligaes H N H so de 107, ou seja, tambm menores que 109,47. Esse desvio pode ser explicado pela maior repulso entre o par de eltrons no-ligantes e os pares de eltrons da ligao N-H, quando comparada s interaes dos eltrons ligantes entre si. A geometria da molcula de amnia denominada piramidal. Orbitais hbridos sp2 O hidrocarboneto mais simples, representativo de molculas com tomos de carbono com hibridizao do tipo sp2, o eteno (CH2=CH2). Nesse caso, os tomos de carbono encontram-se ligados por meio de duas ligaes, sendo uma delas do tipo sigma e a outra do tipo pi (). O ngulo entre uma ligao e outra de aproximadamente 120. Para explicar a geometria dessa molcula e a existncia de uma ligao dupla entre os tomos de carbono, um outro tipo de hibridizao deve ser considerado. O orbital 2s e dois orbitais 2p de carbono so combinados para formar trs orbitais hbridos sp2. Esses orbitais so direcionados para os vrtices de um tringulo eqiltero e, conseqentemente, a repulso entre os eltrons que ocuparem o orbital hbrido ser a mnima possvel. O orbital 2p que no participou da hibridao permanece perpendicular ao plano ocupado pelos orbitais hbridos

A aproximao entre dois tomos de carbono sp2 leva formao da ligao sp2-sp2 , por meio da superposio frontal entre um orbital sp2 de cada tomo, enquanto a interpenetrao lateral entre
273

os orbitais 2p resulta na formao da ligao . Os orbitais 2sp2 restantes combinam-se com os orbitais 1s dos tomos de hidrognio (quatro no total) completando as valncias dos tomos de carbono na molcula do eteno, como mostrado a seguir:

O oxignio e o nitrognio tambm podem apresentar ligao dupla e, portanto, hibridizao sp2.
Orbitais hbridos sp

O tomo de carbono que se liga a outros tomos por meio de duas ligaes e duas ligaes apresentam hibridizao sp. Nesse caso, um orbital 2s combina-se com um orbital 2p para formar dois orbitais hbridos sp, sendo o ngulo entre eles de 180 (planar). Os outros dois orbitais 2p que no participam da hibridao encontram-se perpendiculares ao plano dos orbitais sp.

A hibridao sp, para os tomos de carbono no se restringe formao da ligao trplice carbono-carbono. O tomo central do aleno (CH2=C=CH2),e os tomos de carbono e nitrognio na molcula HCN, por exemplo, tambm apresentam hibridao sp. Molculas polares e eletronegatividade Se cada elemento possui uma carga nuclear e uma configurao eletrnica diferente, no fica difcil esperar que os tomos de elementos diferentes tenham capacidades distintas de atrair eltrons quando participam de uma ligao qumica. A eletronegatividade mede a habilidade de um tomo em atrair eltrons numa ligao. Na tabela peridica, pode-se observar um aumento da eletronegatividade dos elementos na linha horizontal da esquerda para a direita e, na vertical, de cima para baixo, como mostrado na Figura 12.5
274

Figura 12.5. Representao de ordem crescente dos valores de eletronegatividade (seguindo as setas) na tabela peridica.

Em molculas como H 2 ou Cl2 formadas por tomos de um mesmo elemento, o compartilhamento pelo par de eltrons da ligao covalente ocorre de modo igual, visto que no h diferena de eletronegatividade entre as espcies envolvidas. O resultado uma distribuio simtrica dos eltrons na ligao qumica. Nesse caso, a ligao denominada covalente apolar. Porm, a maioria das ligaes no nem completamente inica, nem completamente covalente, mas situa-se num lugar entre os dois extremos. Tais ligaes so chamadas ligaes covalentes polares, em que os eltrons envolvidos na ligao so atrados mais fortemente por um tomo de tal modo que a distribuio eletrnica entre os tomos no simtrica.
Aumento do carter inico

+ X

Ligao covalente simtrica

Ligao covalente polar

Ligao inica

Nesse contexto, o smbolo (letra grega minscula, delta) significa carga parcial, tanto carga parcial positiva (+) para o tomo pobre em eltrons, quanto carga parcial negativa (_) para o tomo rico em eltrons. No caso de ligaes formadas por tomos que possuem eletronegatividades diferentes, o compartilhamento pelo par de eltrons da ligao covalente ocorrer de modo desigual. O tomo de maior eletronegatividade exercer maior atrao sobre o par de eltrons, desenvolvendo, portanto, uma carga parcial negativa. Conseqentemente, o tomo menos eletronegativo sustentar uma carga parcial positiva. De forma geral, ligaes entre tomos cujos valores de eletronegatividade diferem em menos de duas unidades, so ligaes covalentes polares e ligaes entre tomos, cujos valores de eletronegatividade diferem de duas ou mais unidades so inicas. Considere-se, por exemplo, o caso da molcula cido clordrico (HCl). A eletronegatividade do tomo de cloro 3 e a do hidrognio, 2,1. O par de eltrons da ligao ser mais atrado pelo cloro fazendo com que se apresente uma carga parcial positiva sobre o hidrognio, ao passo que o cloro ter uma carga parcial negativa.

+ H Cl
esta molcula apresenta, portanto, carter dipolar. A polaridade da ligao H-Cl e, conseqentemente, da molcula HCl, medida pelo momento de dipolo () que dada pela frmula: =exd
275

onde : e = carga parcial em Coulomb d = distncia (que separa as cargas) = momento dipolo No caso de molculas poliatmicas, o momento dipolo ser resultante da soma vetorial dos momentos dipolo de todas as ligaes. Propriedades fsicas e foras intermoleculares A natureza e a intensidade das foras intermoleculares tm grande influncia sobre vrias propriedades dos compostos orgnicos, tais como, temperatura de ebulio, temperatura de fuso e solubilidade em determinado solvente. Na Tabela 12.1, so representados alguns tipos de interaes intermoleculares e as espcies envolvidas.
Tabela 12.1 Principais interaes intermoleculares

Tipo de interao on-dipolo Dipolo-dipolo Dipolo-dipolo induzido Dipolo instantneodipolo induzido Ligao de hidrognio

Fora relativa Forte Moderadamente forte Muito fraca Muito fraca* Forte

Espcies envolvidas ons e molculas polares Molculas polares Molcula polar e outra apolar Qualquer tipo de molcula incluindo as apolares Molculas que possuem H ligado a elemento bastante eletronegativo

Em geral essas foras so fracas, mas, uma vez que aumentam com a superfcie de contato entre as molculas podem se tornar intensas

A seguir, feita uma breve discusso sobre cada tipo de interao listada na Tabela 12.1. Interao on dipolo: este tipo de interao ocorre quando os compostos inicos so dissolvidos em solventes polares, como gua ou lcool. A interao devida a atrao eletrosttica entre os ons positivos (ctions) e a parte negativa da molcula do solvente, e entre os ons negativos e a parte positiva da molcula do solvente, como no exemplo do sal NaCl em H2O. Quando o solvente utilizado gua, diz-se que os ons esto hidratados e, quando diferente de gua, diz-se que eles so solvatados.

Interao dipolo dipolo: A maioria das molculas orgnicas no plenamente inica, mas possui um momento dipolar permanente, resultante da distribuio no uniforme dos eltrons de ligao. Acetona e acetaldedo so exemplos de molculas com dipolos permanentes, pois o grupo carbonila que contm altamente polarizado. Nesses compostos, a fora atrativa entre as molculas
276

 muito mais fcil de visualizar. Estas atraes chamadas dipolo dipolo foram as molculas a se orientarem de modo que a extremidade positiva de uma molcula direcionada para a extremidade negativa da outra
H3C + H3C H3C + H3C H3C + C H3C
Modelo de potencial eletrostatico para molculas de acetona mostrando como elas podem se alinharde acordo com as atraes de suas regies parcialmente positivas e parcialmente negativas (Interao dipolo - dipolo)

Ligao hidrognio: atraes dipolo dipolo muito fortes ocorrem entre tomos de hidrognios ligados a tomos pequenos e fortemente eletronegativos (O, N ou F) e pares de eltrons no ligantes de outros tomos. Esse tipo de fora intermolecular chamado ligao hidrognio. A ligao hidrognio mais fraca que uma ligao covalente comum, porm muito mais forte do que, por exemplo, as interaes dipolo dipolo que ocorrem na acetona. A ligao hidrognio normalmente representada por uma linha pontilhada. O grupo que possui o tomo de hidrognio covalentemente ligado denominado doador de ligao hidrognio, enquanto o que participa com o par de eltrons livre denominado aceptor de hidrognio.

Quando uma ligao hidrognio pode ser formada, devido sua fora, ela normalmente predomina sobre outros tipos de interaes intermoleculares. Em algumas molculas pode ocorrer a ligao hidrognio intramolecular, ou seja, a ligao ocorre no entre duas molculas, mas entre o doador e o aceptor de ligao de hidrognio, pertencentes a uma mesma molcula, como mostrado a seguir:

Nos dois primeiros exemplos anteriores, o grupo OH doador est prximo do aceptor, o que facilita a formao de ligao de hidrognio. Observe que, em ambos casos, formada uma estrutura com anel de seis membros. Se os grupos esto muito afastados, no ocorre formao dessa ligao intramolecular, como no caso do terceiro composto mostrado no esquema anterior. As ligaes hidrognio tm influncia enorme sobre a forma de muitas molculas como, por exemplo, no arranjo supramolecular das substncias hmicas em meio cido. Interao dipolo instantneo dipolo induzido (Foras de Van der Waals): considerarandoa uma substncia como o metano CH4, cujas partculas so molculas apolares, veremos que o ponto de fuso e ponto de ebulio so muito baixos: -182,6C e -162C, respectivamente. Em vez da pergunta por que o metano ferve ou funde a temperaturas to baixas? A pergunta mais apropriada seria por que o metano, uma substncia no-inica e apolar, pode tornar-se um lquido ou um slido? A resposta para esta questo pode ser dada em termos de foras intermoleculares atrativas, chamadas foras de Van der Waals (ou Foras de London, ou ainda, foras de disperso). A
277

distribuio mdia de carga em uma molcula de metano simtrica e o momento dipolo resultante , portanto, nulo. Os eltrons, todavia, movem-se e, em determinado instante, a distribuio de carga se apresenta deformada em relao distribuio mdia simtrica. Conseqentemente, produzido nesse instante um pequeno dipolo. Este dipolo, de existncia momentnea, dever afetar a distribuio eletrnica em outra molcula do composto que se encontra na sua vizinhana. O plo negativo do dipolo tende a repelir eltrons, enquanto o plo positivo tende a atra-los; o dipolo da primeira molcula induz, portanto, um dipolo de orientao oposta segunda. Embora os dipolos momentneos e os induzidos variem constantemente, o resultado final a existncia de uma certa atrao mtua entre as duas molculas.

Solubilidade de compostos orgnicos As foras intermoleculares so imprescindveis para explicar a solubilidade das substncias. A baixa solubilidade em gua das substncias hmicas d uma idia da quantidade de foras intermoleculares envolvidas. A dissoluo de um slido em um lquido pode, em muitos aspectos, ser tratada do mesmo modo como a fuso do slido. A estrutura cristalina organizada do slido destruda e o resultado um arranjo mais desordenado das molculas ou ons na soluo. No processo de dissoluo, as molculas ou ons precisam, ainda, ser separados uns dos outros. Essas duas alteraes exigem suprimento de energia. A energia necessria para compensar as energias de rede e as atraes intermoleculares (ou interinicas) proveniente da formao de novas foras atrativas entre o soluto e o solvente. Para compostos no-inicos, as caractersticas de solubilidade esto relacionadas, sobretudo com a sua polaridade. Os compostos apolares ou fracamente polares so solveis em solventes apolares ou fracamente polares; os compostos altamente polares so solveis em solventes altamente polares. Da a regra emprica: polar dissolve polar, apolar dissolve apolar. O metano solvel em tetracloreto de carbono, porque as foras que agregam as molculas (foras de Van der Waals) de cada uma dessas substncias so, com a dissoluo, substitudas por foras atrativas muito semelhantes; j o metano no solvel em gua. Por outro lado, compostos polares como, por exemplo, o metanol (que muito solvel em gua), possuem interaes fortes dipolo dipolo (ligaes de hidrognio). As ligaes de hidrognio que se estabelecem entre as molculas de gua e as de metanol podem substituir facilmente as ligaes hidrognio existentes, quer entre as molculas de metanol, quer entre as molculas de gua. Mas quase todas as molculas orgnicas so maiores que as do metano e do metanol; a maioria delas contm partes polares e partes apolares e isso se reflete no seu comportamento enquanto a solubilidade. Embora o cido actico e outros cidos carboxlicos, contendo menos de cinco tomos de carbono, sejam solveis em gua, muitos outros cidos carboxlicos, de maior massa molecular so pouco solveis em gua. Devido sua elevada acidez, os cidos carboxlicos insolveis em gua se dissolvem em soluo aquosa de base forte (como o hidrxido de sdio, por exemplo). A ionizao do grupo funcional e a conseqente formao dos sais de sdio tornam esses compostos solveis em gua. Dada a posio muito especial da gua como solvente (principalmente em sistemas biolgicos), os termos hidroflico (que gosta de gua) e hidrofbico (que odeia gua) so utilizados para designar a solubilidade ou insolubilidade em gua. O termo lipoflico (que gosta de gorduras) usado, muitas vezes, no lugar de hidrofbico, para indicar a solubilidade em solventes apolares.
278

Introduo s reaes orgnicas primeira vista, a qumica orgnica pode parecer uma confuso: coleo de milhes de compostos, grupos funcionais e, ainda por cima, um nmero enorme de reaes. Ao estud-las, no entanto, fica evidente que algumas poucas idias fundamentais constituem a base de todas as reaes orgnicas. Uma vez entendidas essas idias, o aprendizado da qumica orgnica torna-se bem mais fcil Reaes orgnicas As reaes orgnicas podem ser organizadas de duas maneiras: pelo tipo de reao e pela forma como ocorre. Em primeiro lugar, sero vistos os tipos de reaes. Existem quatro tipos gerais de reaes orgnicas: adies, eliminaes, substituies e rearranjos. Virtualmente, todas as reaes orgnicas se enquadram em uma das quatro categorias. As reaes de adio ocorrem quando dois reagentes se unem para formar um nico produto e todas as partes do reagente adicionado aparecem no produto como, por exemplo, na hidrogenao de alcenos ou alcinos e em alguns tipos de condensao (por exemplo, aldlica, de Claisen). As reaes de adio so caractersticas de compostos com ligaes mltiplas. O processo pode ser representado genericamente por: os reagentes so adicionados A+ B

para fornecer este produto

Exemplo: a reao de um alqueno HX para formar um halogeneto de alquila

HBr
+ Estes dois reagentes H C C H H H H H C H Br C H H Se adicionam para fornecer este produto

As reaes de eliminao so de certa forma, o oposto das reaes de adio. Reaes de eliminao nos fornecem um mtodo de preparao de compostos com ligaes duplas e triplas como na desidroalogenao (perda de hidrognio e halognio) de haletos de alquila para fornecer alcenos. Uma eliminao ocorre quando um reagente se divide em dois produtos
Este reagente A B + C se divide para fornecer estes dois produtos

Exemplo: Um halogeneto de alquila em meio bsico para formar um cido e um alqueno (Desidrohalogenao):
H Este reagente H C H Br C H H Base H H C C H H +

HBr

Fornece estes dois produtos

279

As reaes de substituio so reaes caractersticas de compostos saturados, tais como, alcanos e haletos de alquila e de compostos aromticos (ainda que estes sejam insaturados). Ocorrem quando dois reagentes trocam partes de suas molculas para formar dois produtos:
Estes dois reagentes trocam partes de suas molculas A-B + C-D A-C + B-D Para fornecer estes dois produtos

Exemplo: a reao de um alcano com o gs cloro na presena de luz ultravioleta para formar um cloreto de alquila
H H C H + Cl Cl Luz H Estes dois reagentes trocam partes de suas moleculas H H C H Para fornecer estes dois produtos Cl + HCl

As reaes de rearranjo acontecem quando um nico reagente passa por uma reorganizao de suas ligaes e dos seus tomos e forma um produto ismero
Este reagente A B Fornece ste ismero

Exemplo de reao de rearranjo a converso do alqueno 1-buteno no ismero de constituio 2buteno com um catalisador cido
CH3CH2 C H C H H CH3
Catalizador cido

H C C CH3

Como as reaes orgnicas ocorrem Uma descrio completa de como uma reao ocorre chamada mecanismo da reao (ligaes que quebram, que se formam, as seqncias e as velocidades relativas a cada etapa). A quebra e formao de ligaes levam formao de produtos. Existem, fundamentalmente, dois meios pelos quais uma ligao covalente pode-se quebrar: Ciso homoltica
A B A + B Ciso homoltica de ligao (radical) (um eltron fica com cada fragmento)

Ciso heteroltica
A B A+ + B -

Ciso heteroltica de ligao (polar) (os dois eltrons ficam com um dos fragmentos)

Existem, igualmente, dois meios pelos quais uma ligao covalente pode-se formar: eletronicamente simtrica (homognea): quando cada reagente doa um eltron para a nova ligao; ou eletronicamente assimtrica (heterognea): quando um nico reagente doa ambos os eltrons para uma nova ligao. Os processos que envolvem a quebra e a formao de uma ligao simtrica
280

so chamados reaes radicalares. Os processos que abrangem a quebra e a formao de uma ligao assimtrica so chamados reaes polares. Reaes cido - base Uma boa parte das reaes que ocorrem na qumica orgnica so reaes cido base, ou envolvem este tipo de reao em algum estgio para a formao do produto. Reaes cido - base tambm permitem examinar idias importantes sobre a relao entre as estruturas das molculas e suas reatividades, fornecendo tambm uma ilustrao do papel importante que os solventes exercem nas reaes qumicas. Teorias sobre essas substncias passaram por diversas reformulaes ao longo dos anos. A primeira definio surgiu em 1887, proposta pelo qumico sueco S. Arrhenius, que postulava que os cidos seriam substncias cujas solues aquosas contivessem excesso de ons H+ (em relao ao OH-), enquanto bases seriam substncias cujas solues aquosas contivessem excesso de ons OH- (em relao a ons H+). Por limitar-se s solues aquosas, no tardaram surgir novas definies. Os dois conceitos mais freqentemente utilizados hoje so os de Brnsted Lowry e o de Lewis. cidos e bases de Brnsted Lowry: de acordo com esta teoria, um cido uma substncia que pode doar (ou perder) um prton , e uma base uma substncia que pode aceitar (ou remover) um prton.

Assim, a base, ao receber um prton convertida na espcie H-B+ , enquanto que o cido H-A, ao ceder um prton, convertido em A-. Pode-se observar, na equao acima, que foram utilizadas duas setas para representar que a equao est em equilbrio. Isso significa que a espcie H-B+ pode fornecer um prton para o nion A-, revertendo o processo. Nesse caso, H-B+ funciona como cido, sendo denominado cido conjugado de B, enquanto A- funciona como base, sendo denominada base conjugada de H-A. Portanto, de acordo com o conceito de Brnsted Lowry, uma base conjugada a espcie resultante quando um cido doa um prton, enquanto cido conjugado a espcie formada quando uma base recebe um prton. cidos e bases de Lewis: apesar de bastante amplos, os conceitos de cido e base de Brnsted Lowry so limitados no que se diz respeito palavra prton. Em funo disso, Lewis props outra definio mais abrangente para cidos e bases. Segundo Lewis, uma base uma espcie que possui pelo menos um par de eltrons no-ligantes disponveis para compartilhar com outra espcie durante uma reao qumica e um cido uma espcie capaz de aceitar um par de eltrons em uma reao qumica. De acordo com esse conceito, cidos so ons positivos ou espcies neutras deficientes em eltrons como H+, Mg2+, BF3, AlCl3,FeCl3 etc. Em todos os exemplos apresentados anteriormente, os cidos e base de Brnsted Lowry so tambm considerados cidos e bases de Lewis.

281

Acidez em compostos orgnicos Genericamente, pode-se apontar alguns fatores que influenciam a acidez de compostos orgnicos, tais como, a fora da ligao H-A; a eletronegatividade de A e os fatores eletrnicos (efeito indutivo e de ressonncia), que estabilizam a base conjugada em relao a H-A e, por ltimo, a natureza do solvente utilizado. Em molculas orgnicas, os hidrognios mais cidos so os ligados aos tomos mais eletronegativos do que o carbono como, por exemplo, oxignio ou nitrognio, conforme ilustrado em negrito nos exemplos apresentados a seguir:

Basicidade em compostos orgnicos: um aspecto importante do conceito de cido e base de Brnsted Lowry a fora relativa do cido e da base conjugada. Assim, quanto mais forte for o cido, mais fraca ser sua base conjugada e quanto mais fraco for o cido, mais forte, sua base conjugada. A amnia (NH3), por exemplo, um cido muito mais fraco que a gua, portanto, sua base conjugada NH2- muito mais forte que a da gua OH-. Como os cidos halogendricos so muito fortes (HCl, HBr e HI), suas bases conjugadas (Cl-, Br-, I-) so bastante fracas. Alguns exemplos de bases orgnicas so dados a seguir:

Como visto at aqui, um composto orgnico pode atuar tanto como cido ou como base, dependendo do composto com o qual ele reage. Apesar disso, dos vrios grupos de compostos orgnicos existentes, alguns apresentam carter tipicamente cido, como os fenis ou cidos carboxlicos, enquanto as aminas so tipicamente bsicas. Grupos funcionais Uma grande vantagem da teoria estrutural a possibilidade de classificar uma enorme variedade de compostos orgnicos dentro de um nmero relativamente pequeno de famlias, baseado em suas estruturas. As molculas de compostos de uma famlia em particular so caracterizadas pela presena de certos arranjos de tomos chamados grupo funcional.
282

Um grupo funcional a parte da molcula em que ocorre a maioria das suas reaes qumicas. a parte que efetivamente determina as propriedades qumicas do composto (e muitas das suas propriedades fsicas tambm). Os principais grupos funcionais encontram-se a seguir: Famlias importantes dos compostos orgnicos
GRUPO FUNCIONAL ALCANO FRMULA GERAL NOME IUPAC EXEMPLO
H H C H H

C C

C
C n H 2n+2

Prefixo correspondente ao nmero de carbonos+ ANO

C H

ET ANO

ALCENO

C n H 2n

Prefixo correspondente ao nmero de carbonos + ENO

H C H
ET ENO

H C H

ALCINO C n H 2n-2

Prefixo correspondente ao nmero de carbonos + INO

C
ET INO

HALETOS DE ALQUILA C n H 2n-1

Nome do haleto+ Nome alcano Ou Nome do halognio com terminao ETO + Nome do radical alquila

H H C H

H C H Cl

Cloro etano o u Cloreto de etila

FAMLIA

GRUPO FUNCIONAL

NOME IUPAC

EXEMPLO

CH3
benzeno ou fenil

AROMTICO

metilbenzeno
H H

LCOOL

OH

Nome do radical + terminao ol

H C C OH H H Etanol
H H O C H H C H H

TER

C O C

Nome do R1-O com a terminao oxi seguido do nome de R2

C H

metoxietano

283

FAMLIA

GRUPO FUNCIONAL O

NOME IUPAC
H H C H

EXEMPLO
H C H O C O CH 3

STER

Nome de R 1 -COO- + ato + nome de R 2

propanoato de metila

H C H C

O H

O
ALDEDO

Nome de R-CO seguida da terminao al

C H

propan al
H O H C H H C H H

CETONA

Nome do R 1 + nome do R 2 seguido da palavra cetona

H C H

metil etil cetona

O
CIDO CARBOXLICO

H
OH
Palavra cido seguida do nome de R com a terminao oico

H C C

OH H H cido propan oico

H H C C O H C

O
AMIDA

C N

Nome do R-CON seguida da palavra amida

NH2 H H propanoamida
H H C H C NH 2

AMINA

Nome do R-N + a palavra amina

H H H propilamina

H
NITRILA

H C C N

Nome do R-CN + nitrila

H H propanonitrila

Reatividade e caractersticas estruturais A seguir, feito um sumrio das principais caractersticas de cada um dos grupos funcionais, considerando a sua reatividade. Tambm so apresentadas, resumidamente, as principais regies espectroscpicas de++ absores caractersticas de cada grupo funcional no ultravioleta (UV) e infravermelho (IV) bem como absores caractersticas de freqncia dos deslocamentos qumicos para os ncleos de hidrognio 1H e de 13 C no espectro de ressonncia magntica nuclear (RMN).
GRUPO FUNCIONAL & REATIVIDADE ALCANOS Principais reaes acontecem via radical em altas temperaturas ou radiao UV: halogenao ; pirlise; oxidao. UV nm IV cm-1 RMN 1H ppm RMN 13C ppm

No absorve

2850 - 2960 e 1350 - 1470

0 - 2,0

0 - 50

284

GRUPO FUNCIONAL & REATIVIDADE

ALCENOS As reaes principais so as de adio: de haletos de hidrognio (HX, onde X= Cl, Br, I); de cido sulfrico; hidrogenao; halogenao; hidratao; haloidrinas; polimerizao; hidroxilao, oximercuriao, hidroborao. Reaes de substituio allica e reaes de ciso como a ozonlise. ALCINOS Principalmente reaes de adio: de haletos de alquila, hidrogenao, halogenao, hidratao. Reaes cido-base AROMTICOS As reaes caractersticas so as substituies aromticas eletroflicas: halogenao, nitrao, sulfonao, alquilao e acilao de Friedel-Grafts. Reaes de derivados de compostos aromticos como os alquilbenzenos so a oxidao e reaes de substituio na cadeia lateral como a halogenao. HALETOS DE ALQUILA As reaes caractersticas deste tipo de compostos so substituio nucleoflica, eliminao e xireduo. LCOOIS So dois tipos principais de reaes que quebram a ligao O- H: as reaes cido-base e de oxidao. As reaes que quebram a ligao C-OH so a halogenao e a desidratao. TERES Reaes de substituio nucleoflica como halogenao. teres cclicos podem sofrer xi-reduo. ACIDOS CARBOXLICOS Reaes de substituio nucleoflica no carbono acilo (carbonila) so caractersticas desta classe de compostos a preparao de cloretos de acila a principal, pois a partir dele podem se obter outros derivados de ac. carboxlicos como anidridos, steres e amidas. Reaes de acidobase so tambm tpicas desta classe. STERES Substituio nucleoflica a reao tpica dos derivados de cido carboxlico: hidrlise, aminlise, transesterificao, saponificao. Pode ocorrer tambm oxidao, reduo e condensao. ALDEDOS e CETONAS Reaes caractersticas: adies nucleoflicas de oxidao, reduo e as condensaes: aldlica, de

UV nm No absorve
165 e 193

IV cm-1
675 1000 e 3020 3080 (conjugados)

RMN 1H ppm 0 - 2,0 4-7

RMN 13C ppm 0 - 50 80 -170

173

2100 - 2260

2 -3

20 - 90

184, 204 e 256

C=C 1500 -1600

6 -9

100 - 165

173 (Cl) 208 (Br) 259 (I)

C-X 730 - 1400

No se observam acoplament os de H com halognios

C-X 10 - 96

177 e 200

O-H: 3200 -3600 C-O: 1260 -1000

2-5

50 -85

171 e 188

C-O-C 1150 -1085

No acopla direto com H

55 -85

Carboxila: 204

C=O: 1700 - 1800 O-H: 2500- 3300 (banda larga)

10 13,2

160 -175

207

C=O: 1700 - 1750

No acopla direto com H

155 -175

C=O de cetona: 188 e 279

Cetona C=O: 1690 1870

Cetona 190 -220

285

GRUPO FUNCIONAL & reduo e REATIVIDADE condensao. ALDEDOS e CETONAS Reaes caractersticas: adies nucleoflicas de oxidao, reduo e as condensaes: aldlica, de Claisen, de Perkin, de Dieckmann; alm de outros tipos especficos de

UV nm No absorve C=O de cetona: 188 e 279

de aldedo:

IV cm-1
Cetona C=O: 1690 1870 Aldedo

RMN 1H com ppm H 0 - 2,0

RMN 13C ppm 0 - 50 Cetona 190 -220

Aldedo

Aldedo

A reatividade de um composto orgnico depende tambm do arranjo espacial dos tomos na molcula i.e., a estereoqumica. No entanto, o estudo detalhado deste assunto. bem como o dos tpicos tratados neste captulo, pode ser realizado com a leitura das obras recomendadas: MORRINSON, R.T.; BOYD,R. Qumica Orgnica, Lisboa, Editora Fundao Calouste Gulbenkian, 1995. 1639 p. MCMURRY, J. Qumica Orgnica, Vol 1, So Paulo, Editora Pioneira Thonsom Learning, 2005. 495 p. SOLOMONS, G.TW.; FRYHLE,C. B. Qumica Orgnica 1, Rio de Janeiro, Editora LTC; 2001. 645 p. CAREY, F.A.; SUNDBERG, R.J.; Advanced Organic chemistry Part a: Struture and Mechanisms; New York, Editora Plenum Press, 1990. 802 p.. BARBOSA, L. C. DE ALMEIDA, Introduo Qumica Orgnica, So Paulo, Editora Prentice Hall, 2004. 300 p. RODRIGUES, J. de ANCHIETA, Introduo s ligaes qumicas, So Carlos; Editora EdUFSCar, 2004. 77 p. SILVERSTEIN, R. M.; BASSLER, C. G.; MORRIL, C. T.; Identificao espectromtrica de compostos orgnicos, Rio de Janeiro, Editora Guanabara, 1994. 387 p.

286

R e f e r n c i a s

13

b i b l i o g r f i c a s

ABREU JR, C.H.; MURAOKA, T.; OLIVEIRA, F.C. Ctions trocveis, capacidade de troca de ctions e saturao por bases em solos brasileiros adubados com composto de lixo urbano. Sci. Agric., 58: 813-824, 2001 ABREU, H. dos SANTOS. Biossntese da Lignificao. Itagua, Edur, 1994. 64p. ACHARD, F.K. Crells Chem. Ann. 2, 391-403, 1786. ALBERTINI, P.E.G. Efeito da adio de resduos das culturas de Sorghum bicolor (L) Moench. e Dolichos lablab L. sobre o carbono e o nitrognio das fraes da matria orgnica de um Latossolo roxo. Jaboticabal, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, 1983. 86p. (Dissertao de Mestrado). ALEXANDROVA, L.V. Gumisovie veschestvo pochvi. Zapiski Leningradskogo selscohogiaistvennogo institute. T.142. Leningrado-Puschkin. 1970. ALIEV, S.A. Ecologia gumusoabrasovania v pochvah Azerbaidhzana, Isviestia A.N. Azerbaidhzana, 5-6: 78-82, 1970. ALLEN, H.L. Dissolved organic matter in lake water: Characteristics of molecular weight size fractions and ecological implications. Oikos, 27: 64-74, 1976. ALMEIDA, J. Da ideologia do progresso idia de desenvolvimento (rural) sustentvel. In: ALMEIDA, J., NAVARRO, Z. (orgs.). Reconstruindo a agricultura. Porto Alegre, Editora da Universidade/UFRGS, 1998. ALMENDROS, G.; FRND, R.; GONZLEZ-VILA, F.J.; HAIDER, K.M.; KNICKER, H.; LDEMANN, H.-D. Analysis of 13C and 15N CP-MASNMR-spectra of soil organic matter and composts. FEBS Lett., 282: 119-121, 1991. ALMENDROS, G.; KNICKER, H.; GONZLEZ-VILA, F.J. Rearrangement of carbon and nitrogen forms in peat after progressive isothermal heating as determined by solid-state 13C- and 15N-NMR spectroscopies. Org. Geochem., 34:15591568, 2003. ALTIERI, M. Agroecology: the science of natural resource management for poor farmers in marginal environments. Agriculture, Ecosystems and Environment, 93: 124, 2002. ALTIERI, M. Agroecologia: bases cientficas para uma agricultura sustentvel. Guaba, Editora Agropecuria, 2002. 592p. ALVAREZ, I.A.; CASTRO, P.R. de C.; NOGUEIRA, M.C.S. Crescimento de razes de cana crua e queimada em dois ciclos. Sci Agric., 57: 653-659, 2000. ALVAREZ-PUEBLA, R.A.; GARRIDO, J.J. Effect of pH on the agreggation of a gray humic acid in colloidal and solid states. Chemosphere , 59: 659-667, 2005. ALVEY, S.; BAGAYOKO, M.; NEUMANN, G.; BUERKERT, A. Cereal/legume rotations affect chemical properties and biological activities in two West African soils. Plant Soil, 231: 45-54, 2001. AMADO, T.J.C.; MIELNICZUK, J.; FERNANDES, S.B.V.; BAYER, C. Culturas de cobertura, acmulo de nitrognio total no solo e produtividade do milho. Rev. Bras. Ci. Solo, 23: 679-686, 1999. AMALFITANO, C.; PIGNALOSA, V.; AURIEMMA, L.; RAMUNNI, A. The contribution of lignin to the composition of humic acids from a wheat-straw amended soil during 3 years of incubation in pots. J. Soil Sci., 43: 495-504, 1992. AN, J.; HU, Y.; JIANG, L. Reactivity of semiquinone radical anions of hydroxyperylenequinone with oxygen. J. Photochem. Photobiol. B., 33: 261-266, 1996. ANDERSON, J.P.E.; DOMSCH, K.H. Quantities of plant nutrients in microbiological biomass of selected soils. Soil Sci., 130: 211-216, 1980. ANDRADE, H. Solos: Origem, componentes e organizao. Lavras, UFLA/FAEPE, 2001. 134p. ANDREUX, F.; BECERRA, S.P. Fraccionamiento y caracterizacin del material hmico en algunos suelos de sabana de la Orinoquia colombiana. Turrialba, 25: 191-198, 1975.
287

ANDREUX, F.; CERRI, C.C. Current trends in the research on soil changes due to deforestation, burning and cultivation in the Brazilian tropics. Toxicol. Environ. Chem., 20: 275-283, 1989. AOAC. Association of official Agricultural Chemists. Methods of analysis, Banta, Menasha, Wisconsin, 1955. ARATO, H.D.; MARTINS, S.V.; FERRARI, S.H.S. Produo e decomposio de serrapilheira em um sistema agroflorestal implantado para recuperao de rea degradada em Viosa-MG. rvore , 27: 715-721, 2003. ARAJO, A.P. Eficincia vegetal de absoro e utilizao do fsforo, com especial referncia ao feijoeiro. Viosa, Sociedade Brasileira de Cincia do Solo. Tpicos em Cincia do Solo, vol 1., 2000. p.163-212. ARAUJO, Q.R; FIGUEIREDO, M.S.; COSTA, L.M.; LOURES, E.G.; REGAZZI, A.J.; FONTES, L.E.F.; CASALI, V.W.D. Atividade microbiana e fracionamento da matria orgnica em um Latossolo Vermelho-Amarelo variao Uma submetido queima e percolao. Ceres, 42: 393-404, 1995. BACHELAR, G. Formao do esprito cientfico. Rio de Janeiro, Contraponto, 1996. 316p. BALDOCK J.A.; SKJEMSTAD, J.O. Role of the Soil Matrix and Minerals in Protecting Natural Organic Materials Against Biological Attack. Org. Geochem., 31: 697-710, 2000. BALDOTTO, M.A.; CANELA, M.C.; CANELLAS, L.P.; VELLOSO, A.C.X. Propriedades redox de cidos hmicos isolados de um Cambissolo sob cana-de-acar submetida ou no a queima na colheita. Encontro Brasileiro de Substncias Hmicas, Curitiba-PR, 2003. CD-ROM. BARD, J. Photoelectrochemistry and solar energy: progress, promise and problems. J. Elect. Chem., 168: 5-20., 1984. BARNERJEE, S.K.; MUKHERJEE, S.K. Studies on the infrared of some divalent trasitional metal humates. J. Indian Soc. Soil Sci., 20: 91-94, 1972. BARROS, M.C.P.; PAULA, J.R.P. de.; REZENDE, M.O. de. Caracterizao fsico-qumica do cido hmico de solo da ilha de Canania e sua interao com Fe(II), Cu (II) e Cd (II). Qumica Nova, 17: 376-380, 1994. BARTON, D.H.R; SCHNITZER, M. A New Experimental approach to humic acid problem. Nature , 198: 217, 1963. BASS BECKING, L.G.N.; KAPLAN, I.R.; MOORE, D. Limits of the natural environment in terms of pH and oxidation-reduction potentials. J. Geol., 68: 243-284, 1960. BAYER, C.; MARTIN-NETO, L; MIELNICZUK, J.; SAAB, S.C.; MILORI, D.M.P.; BAGNATO, V.S. Tillage and cropping system effects on soil humic acid characteristics as determined by ESR and fluorescence spectroscopy. Geoderma, 105: 81-92, 2002. BAYER, C.; MARTIN-NETO, L.; SAAB, S.C. Diminuio da humificao da matria orgnica de um Cambissolo em plantio direto. Rev. Bras. Ci. Solo., 27:537-544, 2003. BAYER, C.; MIELNICZUK, J. Dinmica e funo da matria orgnica. In: Santos, G. de A.; Camargo, F. A. O. (Eds) Fundamentos da matria orgnica: ecossistemas tropicais e subtropicais. Porto Alegre, Gnesis, 1999. p.0923. BELLAMY, L.J. The infrared spectra of complex molecules. London, Chapman and Hall, 1975. p.385-388. BENE, J.G.; BEALL, H.W.; CT, A. Trees, food and people: land management in the tropics. Ottawa, International Development Research Centre, 1977. 52p. BENITES, V.M.; KER, J.C.; MENDONA, E.S. Fracionamento quantitativo de substncias hmicas como auxiliar na identificao de diferentes solos da regio sul do Brasil. 185-192p. In: VI Reunio de correlao, classificao e aplicao de levantamentos de solos, EMBRAPA/iac, 2000. 222p. BENITES, V.M.; MADARI, B.; MACHADO, P.L.O. de A. Extrao e fracionamento quantitativo de substncias hmicas do solo: um procedimento simplificado de baixo custo. Comunicado Tcnico n 16, EMBRAPA SOLOS, 2003. 7p. BENITES, V.M.; SCHAEFER, C.E.G.R.; MENDONA, E.S.; MARTIN-NETO, L. Caracterizao da matria orgnica e micromorfologia de solos sob campos de altitude no parque estadual da Serra do Brigadeiro-MG. Rev. Bras. Ci. Solo, 25: 661-674, 2001. BERTOL, I.; COGO, N.P.; LEVIEN, R. Relaes de eroso hdrica com mtodos de preparo do solo, na ausncia e presena de cobertura por resduo cultural do trigo. Rev. Bras. Ci Solo, 11: 187-192, 1987. BEYER, L.; CORSEN, E.; BLUME, H.P.; SCHLEUSS, U.; VOGT, B.; WU, Q. Soil organic matter composition in
288

urbic anthrosols in the city of Kiel, NW Germany, as revelaed by wet chemistry and CPMAS 13C NMR spectroscopy of whole soil samples. Soil Technol., 9: 121-132, 1996. BLOOM, P.R.; LETENHEER, J.A. Vibrational, eletronic and high energy spectroscopy methods for characterizing humic substances. In; HAYES. M.H.B.; MaCARTHY, P.; MALCOLM, R. et al., (eds). Humic substances II: In search of structure. New York, Wiley, 1989. P.410-446. BORGES, A.L. Alterao das propriedades de um Latossolo Amarelo de Cruz da Alma, Bahia, pelo cultivo com frutferas perenes e mandioca. Piracicaba, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz/USP, 1993. 161p. (Tese de Doutoramento). BOTTOMLEY, W.B. Some effects of organic-promotion substances (auximones) on the growth of Lema minor in mineral cultural solutions. Proc. Royal Soc. London Ser. B Biol. Sci., 89: 481-505, 1917. BOYD, S.A.; SOMMERS, L.E.; NELSON, D.W. Infrared spectra of sewage sludge fraction: evidence for na amide binding site. Soil Sci. Soc. Am. J., 43: 893-898, 1979. BRACDWELL, J.M.; HAIDER, K.; LARTER, S.R. Thermal degradation relevant to structural studies of humic substances. In: HAYES, M.H.B. et al. (Eds). Humic substances II: in search of structure, New York, Willey, 1989. p.181-222. BRASIL Ministrio da Agricultura e do Abastecimento. Instruo Normativa n. 7, de 17 de maio de 1999. Dispe sobre normas para a produo de produtos orgnicos vegetais e animais. Dirio Oficial [da] Repblica Federativa do Brasil, Poder Executivo, Braslia, DF, 19 de maio 1999. Seo 1. BRAVARD, S.; RIGHI, D. Characterization of fulvic and humic acids from an Oxisol-Spodsol toposequence of Amazonia, Brazil. Geoderma, 48: 151-162, 1991. BRINKMANN, W.L.F.; NASCIMENTO, J.C. de. The effect of slash and burn agriculture on plant nutrients on the Tertiary region of Central Amazonia. Turrialba, 23: 289-290, 1973. BRITO, E.C. de. Adubao verde e sua influncia em alguns atributos microbiolgicos e qumicos de um Argissolo Vermelho-Amarelo sob cultivo de maracuj. Tese (Mestrado) Campos dos Goytacazes-RJ, Universidade Estadual do Norte Fluminense - UENF, 2003. 116p. BROWN, L.R. Building a sustainable society. New York, Norton, 1981. 232p. BUDZIAK, C.R.; MAIA, C.M.B.F.; MANGRICH, A.S. Transformaes qumicas da matria orgnica durante a compostagem de resduos da indstria madeireira. Qum. Nova, 27: 399-403, 2004. BUKVOVA, M.; TICHY, V. The effect of humus fractions on the phosphorylase activity of wheat (Triticum aestivum L.). Biol. Plant., 9: 401-406, 1967. BUSATO, J.G. Formas de fsforo de um Cambissolo cultivado com cana-de-acar, com preservao do palhio e adio de vinhaa por longo tempo. Tese (Mestrado) Campos dos Goytacazes-RJ, Universidade Estadual do Norte Fluminense - UENF, 2004. 66p. BUTLER, J.H. A; LADD, J.N. The effect of methylation of humic acids on their influence on proteolytic enzyme activity. Aust. J. Soil Res., 7: 263-268, 1969. CABANISS, S.E. Synchronous fluorescence spectra of metalfulvic acid complexes. Environ. Sci. Technol., 26: 11331139, 1992. CACCO, G.; CIVELLI, G. Azione de sostanse umiche sul transporto degli ioni nelle redici. Riv. Agron. 7: 127-131, 1973. CADE-MENUN, B.J. Characterizing phosphorus in environmental and agricultural samples by 31P nuclear magnetic resonance spectroscopy. Talanta, 66: 359-371, 2005b. CADE-MENUN, B.J. Using phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectroscopy to characterize organic phosphorus in environmental samples em Organic Phosphorus in the Environment, Turner, B.L, Frossard, E. e Baldwin, O.S. editores, CAB International, Cambridge MA, EUA, 2005a. p.21-44. CADE-MENUN, B.J.; LIU, C.W.; NUNLIST, R.; MCCOLL, J.G Soil and litter phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectroscopy: Extracts, metals and phosphorus relaxation times. J. Environ. Qual., 31: 457-465, 2002. CADE-MENUN, B.J.; PRESTON, C.M. A comparison of soil extraction procedures for 31P NMR spectroscopy. Soil Sci., 161: 770-785, 1996. CALEGARI, A.; VIEIRA, M.J. Tcnicas de controle de eroso. In: Castro Filho, C. de, Muzilli. O uso e manejos dos solos de baixa aptido agrcola. Londrina, PR:IAPAR, 1999. p.76-87.
289

CAMARGO, F.O., SANTOS, G. DE A., GUERRA, J. G. M. (1999) Macromolculas e substncias hmicas. In: Santos, G. de A.; Camargo, F. A. O. (Eds) Fundamentos da matria orgnica: ecossistemas tropicais e subtropicais. Porto Alegre, Gnesis, p. 27-39. CAMERON, R. S.; THORNTON, B. K.; SWIFT, R. S.; POSNER, A. M. Molecular weight and shape of humic acid from sedimentation and diffusion measurements on fraction extracts. J. Soil Sci., 23: 394-408, 1972a. CAMPBELL, C.A. Soil organic carbon, nitrogen and fertility. In: SCHNTTZER, M. & KHAN, S.U., Eds. Soil Organic Matter, Amsterdan, Elsevier, 1978. p.173-271. CANELLAS, L.P. Avaliao de caractersticas fsico-qumicas de cidos hmicos. Seropdica. Tese (Doutorado em Cincias do Solo). Instituto de Agronomia, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, 1999.164p. CANELLAS, L.P. ; SANTOS, G.A. ; GURIDI, F. ; RUMJANEK, V.; FREIRE, R.B. Compostos heterocclicos nitrogenados em cidos hmicos extrados de composto de resduo slido urbano. Floresta e Ambiente, 6: 1-7, 1999. CANELLAS, L.P.; MORAES, A.; RUMJANEK, V.; SANTOS, G.A. Mtodos Complementares. In: CAMARGO, F.A.O.; SANTOS, G.A. Fundamentos da matria orgnica. Porto Alegre, Gnesis, 1999. p.413-435. CANELLAS, L.P.; SANTOS, G.A.; AMARAL SOBRINHO, N.M.B. Reaes da matria orgnica. In: SANTOS & CAMARGO. Fundamentos da matria orgnica do solo: Ecossistemas tropicais e subtropicais. Gnesis. 1999. 491p. CANELLAS, L.P.; BERNER, P.G.; SILVA, S.G. da; SILVA, M.B.; SANTOS, G.A. Fraes da matria orgnica em seis solos de uma toposseqncia no Estado do Rio de Janeiro. Pesq. Apropec. Bras., 35: 133-143, 2000. CANELLAS, L.P.; SANTOS, G.; MORAES, A.A.; RUMJANEK, V. Avaliao de caractersticas de cidos hmicos de resduos slidos urbanos II. mtodos termodegradativos (pirlise acoplada cromatografia gasosa -espectrometria de massas). Rev. Bras. Ci. do Solo, 24: 751-757, 2000. CANELLAS, L.P.; SANTOS, G.A.; RUMJANEK, V.M.; MORAES, A.A.; GURIDI, F. Distribuio da matria orgnica e caractersticas de cidos hmicos em solos com adio de resduos de origem urbana. Pesq. Agropec. Bras., 36: 1529-1538, 2001a. CANELLAS, L.P.; GURIDI, F.; SANTOS, G. A.; RUMJANEK, V.M.;BRAZ-FILHO, R. Aumento da resoluo de espectros de cidos hmicos em soluo atravs do tratamento prvio com KCl 0,03 M. Qumica Nova, 24: 131132, 2001b. CANELLAS, L.P.; OLIVARES, F.L.; OKOROKOVA-FAANHA, A.L.; FAANHA A.R. Humic Acids Isolated from Earthworm Compost Enhance Root Elongation, Lateral Root Emergence, and Plasma Membrane H +-ATPase Activity in Maize Roots. Plant Physiology, 130: 1951-1957, 2002a. CANELLAS, L.P.; VELLOSO, A.C.X.; RUMJANEK, V.M.; GURIDI, F.; OLIVARES, F.L.; SANTOS, G.A. E BRAZ-FILHO, R. Distribution of the humified fractions and characteristics of the humic acids of na ultisol under cultivation of eucalyptus and sugar cane. Terra, 20: 371-381, 2002b. CANELLAS, L.P.; MORAES, A.A.; RUMJANEK, V.M.; GARCIA, M.R.; GURIDI, F.; SANTOS, G. de A.; BRAZFILHO, R. Structural features of humic acids isolated from soils amended with urban organic resudues: na elemental composition, 13C NMR and Py-GC/MS analysis. Rev. Bras. Ci. Solo, 26: 333-341, 2002c. CANELLAS, L.P., VELLOSO, A.C.X., MARCIANO, C.R., RAMALHO, J.F.G.P., RUMJANEK, V.M., REZENDE, C. E., SANTOS, G.A. Propriedades qumicas de um Cambissolo cultivado com cana-de-acar, com preservao do palhio e adio de vinhaa por longo tempo. Rev. Bras. Ci. do Solo, 27: 935-944, 2003. CANELLAS, L.P.; ESPINDOLA, J.A.; REZENDE, C.E.; CAMARGO, P.B.; ZANDONADI, J.A.A.; RUMJANEK, V.M.; GUERRA, J.G.M.; TEIXEIRA, M.G.; BRAZ-FILHO, R. Organic matter quality in a soil cultivated with perennial herbaceous legumes. Sci. Agric., 61: 53-61, 2004a. CANELLAS, L.P.; ESPNDOLA, J.A.A.; GUERRA, J.G.M.; TEIXEIRA, M.G.; VELLOSO, A.C.X.; RUMJANEK, V.M. Phosphorus analysis in soil under herbaceous perennial leguminous cover by nuclear magnetic resonance. Pesq. Agropec. Bras., 39: 589-596, 2004b. CANELLAS, L.P.; FAANHA, A.R. Chemical nature of soil humifiel fractions and their bioactivity. Pesq. Agropec. Bras., 39: 233-240, 2004c. CAPORAL, F.R., COSTABEBER, A.J. Por uma nova Extenso Rural: fugindo da obsolescncia. 2001, texto na internet www. agroeco.org acesso em setembro 2005
290

CAPORAL, F.R.; COSTA-BEBER, J.A. Agroecologia: enfoque cientfico e estratgico. EMATER-RS, Porto Alegre, 2002. 4p. CAPRA, F. O ponto de mutao: a cincia, a sociedade e a cultura emergente. So Paulo, Cutrix, 1989. CAPRIEL , P.; HARTER, P. STEOHENSON, D. Influence of management on the organic matter of mineral soil. Soil Sci., 153: 122-128, 1992. CARO, I. Propiedades qumico-fsicas de las sustancias hmicas obtenidas de vermicompost de estircol vacuno. Tesis de maestra, La Habana. 2004. 50p. CARTER, C.W.; SUFFET, I.H. Binding of DDT to dissolved humic material. Environ. Sci. Technol., 16: 735-740, 1982. CASTILHOS, R.M.V.; SANTOS, V.B.; DICK, D.P.; CATILHOS, D.D.; PAULETTO, E.A.; GOMES, A. da S.; ROSA, C.M. da. Substncias hmicas de Planossolos hidromrfico sob diferentes sistemas de manejo. V Encontro Brasileiro de Substncias Hmicas, Curitiba-PR, 2003. p.124-126. CASTRO, C.M. de, ALMEIDA, D.L. de; RIBEIRO, R.L.; CARVALHO, J.F. Plantio direto, adubao verde e suplementao com esterco de aves na produo orgnica de berinjela. Pesq. Agropec. Bras., 40: 495-502, 2005. CAUME, D.J. A construo social de um outro ofcio de agricultor: as estratgias tecnolgicas de reroduo social do campesinato. Porto Alegre, Dissertao de Mestrado em Sociologia/UFRGS, 1992. CAUME, D.J. Segurana Alimentar, Reforma Agrria e Agricultura Familiar. Revista da UFG v.5, 2003. On line www.proec.ufg.br CEDDIA, M.B.; ANJOS, L.H.C.; LIMA, E.; RAVELLI NETO, A.; SILVA, L.A. Sistemas de colheita da cana-deacar nas propriedades fsicas de um Podzlico Amarelo no estado do Esprito Santo. Pesq. Agropec. Bras., 34: 1467-1473, 1998. CELI, L.; SCHNITZER, M.; NGRE, M. Analysis of carboxyl group in soil humic acids by a wet chemical method. Fourier-trasform Infrared Spectrophotometry, and solution-state carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance. A comparative study. Soil Sci., 162: 189-197, 1997. CERETTA, C.A. Fracionamento de N orgnico, substncias hmicas e caracterizao de cidos hmicos de solo em sistemas de cultura sob plantio direto. Porto Alegre, UFRGS 1995. 127 f. Tese (doutorado em Agronomia-Cincia do Solo). CERETTA, C.A.; MARCOLAN, A.L.; DURIGON, R.; TISOTT, A.R. Acumulo de carbono em humina, cidos flvicos e hmicos em trs profundidades de solo com sistemas de cultura, sob plantio direto, durante seis anos. In: II ENCONTRO BRASILEIRO DE SUBSTNCIAS HMICAS, So Carlos-SP, Anais..., p.136, 1997. CERETTA, C. A.; DURIGON, R.; BASSO, C.J.; BARCELLOS, L.A.R.; VIEIRA, F.C.B. Caractersticas qumicas de solo sob aplicao de esterco lquido de sunos em pastagem natural. Pesq. Agropec. Bras., 38: 729-735, 2003. CERRI, C.C.; VOLKOFF, B. Matria orgnica de trs solos dos campos inundveis da ilha do Maraj-PA. Rev. Bras. Ci. Solo, 12: 93-100, 1988. CERRI, C.C.; VOLKOFF, B.; EDUARDO, B. Efeito do desmatamento sobre a biomassa microbiana em Latossolo Amarelo da Amaznia. Rev. Bras. Ci. Solo, 9: 1-4, 1985. CHEN, J., GU, B., ROYER, R.A., BURGOS, W.D. The roles of natural organic matter in chemical and microbial reduction of ferric ion. Sci. Total Environment, 307: 167-178, 2003. CHEN, Y.; AVIAD, T. Effects of humic substances on plant growth. In: MACCARTHY, P., CLAPP, C.E., MALCOM, R.L., BLOOM, P.R. (Eds.), Humic Substances in Soils and Crop Science: Selected Readings, Madison, Soil Science Society of America, 1990. pp.161-1186. CHEN, Y.; SENESI, N.: SCHNITZER, M. Information provided on humic substances by E4/E6 ratios. J. Soil Sci. Soc. Am., 41: 352-358, 1977. CHERNIKOV, V.A.; KASATIROV, K.A. Derivatographic study of humic acids in soils of solonetz complex. Pochvovedeniye, 3: 35-40, 1977. CHERNIKOV, V.H.; KONCHITS, V.A. Parmetros cinticos de la pirlisis de los cidos hmicos aislados por diferentes tcnicas. Timiriazev Sels Akad, 3: 131-141, 1978. CHICZ, R.M.; REGNIER, F.E. High-performance liquid chromatography: Effective protein purification by various chromatographic modes. In Guide to Protein Purification. M.P. Deutscher (ed.). Methods of Enzymology, Vol. 182. Academic Press, San Diego, 1990. pp. 392-421.
291

CHUKOV, S.N. Study by 13C NMR spectroscopy of humic acids and molecular parameters in antropogenically disturbed soil. In: International Meeting of the International Substances Society 10 , 2000. Toulouse. Proc..International Humic Substances Society, v. 2, p. 81-84, 2000. CIVIDANES, F.J. Efeitos do sistema de plantio e da consorciao soja-milho sobre artrpodes capturados no solo. Pesq. Agropec. Bras., 37: 15-23, 2002. CIVIDANES, F.J., YAMAMOTO, F.T Pragas e inimigos naturais na soja e no milho cultivados em sistemas diversificados. Sci. Agric. 59: 683-687, 2002. CLARO, S.A. Referenciais tecnolgicos para a agricultura familiar ecolgica a experincia da regio centroserra do Rio Grande do Sul. Porto Alegre, EMATER-RS-ASCAR, 2001. 250p. CLAUS, H. Laccases: Structure, Reactions, Distribution. Micron., 35: 93-96, 2004. COATES, J.D., COUNCELL, T., ELLIS, D.J., LOVLEY, D.R. Carbohydrate oxidation coupled to Fe(III) reduction, a novel form of anaerobic metabolism. Anaerobe, 4: 277-282, 1998. COELHO, R.M. Influncia da vinhaa, da fertilizao mineral e do cultivo em caractersticas qumicas da matria orgnica e da frao mineral de um Latossolo Vermelho-Escuro. Tese de Mestrado, UFV, 1991. 84p. COENEN, C.; BIERFREUND, N.; LTHEN, H.; NEUHAUS, G. Developmental regulation of H+-ATPasedependent auxin responses in the diageotropica mutant of tomato (Lycopersicon esculentum). Physiol. Plant., 114: 461-471, 2002. COLTHUP, N. B.; DALY, L. H.; WIBERLEY, S. E. Introduction to infrared and raman spectroscopy. New York, Academic, 1964. 511p. CONCEIAO, M. Natureza do hmus e caractersticas de solos com elevado teor de matria orgnica da regio de Itagua-Santa Cruz, RJ. Tese de Mestrado. UFRRJ, 1989. 171p. CONSTANTIN, E.; SCHNELL, A. Mass Spectrometry. New York, Ellis Horwood, 1990. 184p. CONTE, P.; PICCOLO, A. Conformational arrangement of dissolved humic substances. Influence of solution composition on association of humic molecules. Environ. Sci. Technol., 33: 1682-1690, 1999. CONTE, P.; SPACCINI, R.; PICCOLO, A. State of the art of CPMAS 13C-NMR spectroscopy applied to natural organic matter. Progr. in Nuclear Mag. Res. Spectr., 44: 215-223, 2004. COOK, R.L. Coupling NMR to NOM. Anal. Bioanal. Chem., 378: 1484-1503, 2004. COOK, R.L.; MC INTYRE, D.D.; LANGFORD, C.H.; VOGEL, H.J. A Comprehensive Liquid-State Heteronuclear and Multidimensional NMR Study of Laurentian Fulvic Acid. Environ. Sci. Technol., 37: 3935-3944, 2003. COSGROVE, D.J. Cell Wall Loosening by expansins, Plant Physiol., 118: 333-339, 1998. COSGROVE, D.J. Expansive growth of plant cell walls. Plant Physiol. Biochem., 38: 109-124, 2000. COUTO, E.G.; RESENDE, M. Caracterizao da matria orgnica de alguns solos orgnicos e gleizados do sudoeste da Bahia. Rev. Bras. Ci. Solo, 9: 185-191, 1985. COZZOLINO, A.; CONTE, P.; PICCOLO, A. Conformatinal changes of humic substances induced by some hydroxy, keto, and sulfonic acids. Soil Biol. Biochem., 33:563-571, 2001. CUNHA, T.J.F. cidos hmicos de solos escuros da Amaznia. Seropdica,UFRRJ, 2005. 140p. (Tese de doutorado). CUNHA, T.J.F.; MOUTTA, R. de O.; BENITES, V. M.; CANELLAS, L.P.; MADARI, B. & SANTOS, G.A. Algumas caractersticas da matria orgnica de solos antropognicos na Amaznia Brasileira. In: V Encontro Brasileiro de Substncias Hmicas, Curitiba-PR, 2003a (138 - 140) Grupo Brasileiro da IHSS. CUNHA, T.J.F.; RIBEIRO, L.P. PALMIERI, F. SILVA, E.F. da & CONCEIO, M. Caracterizao e natureza do hmus de latossolos amarelos coesos de tabuleiro na regio do recncavo baiano. Magistra, 15: 147-154, 2003. CUNHA, T.J.F.; RIBEIRO, L.P. Qualidade e relaes pedogenticas da matria orgnica de alguns solos da regio de Irec-Ba. Rev. Bras. Ci. Solo, 22: 693-704, 1998. CUNHA, T.J.F.; MACEDO, J.R., Ribeiro, L.P., Palmieri, F., Freitas, P.L., Aguiar, A.C. Impacto do manejo convencional sobre propriedades fsicas e substncias hmicas de solos sob Cerrado. Cincia Rural, 1:27-36, 2001. DABIN, B. Les materes organiques dans les sols tropicaux normalement drains. Cah. ORSTOM, Ser. Pedol., 28: 197-215, 1981. DABIN, B. Matria orgnica dos solos. Salvador, UFBA, 1982, p. 104 (mimeografado).

292

DABIN, B. Mthode dextraction et de fractionnement des matires humiqes du sol. Application quelques etudes pdologiques et agronomiques dans les sols tropicaux. Cah. ORSTON, Ser. Pedol.., 14: 279-287, 1976. DANTAS, J.P. Matria orgnica do solo. In: Curso de atualizao em fertilidade do solo. 2. UFPB/CCA/DSER. Areia, 1986 (mimeografado). DAROUB, S.H.; ELLIS, B.G.; ROBERTSON, G.P. Effect of cropping and low-chemical input systems on soil phosphorus fractions. Soil Sci., 166: 281-291, 2001. DE ALMEIDA, R. M.; POSPSIL, F.; VACKOVA, K.; KUTACEK, M. Effect of humic acid on the inhibition of pea choline esterase and choine a-cyltransferase with malation. Physiol. Plant., 22: 167-175, 1980. DE HAAN, H.; JONES, R. I.; SALONEN, K. Does ionic strength affect the configuration of aquatic humic substances, as indicated by gel filtration? Freshwater Biol., 17:453-459, 1987. DE NOBILI, M.; GJESSING, E.; SEQUI, P. Sizes and shapes of humic substances by gel chromatography. In Humic Substances II. In Search of Structure. M.H.B. Hayes, P. McCarthy, R. L. Malcolm and R.S. Swift (eds.). New York, Wiley, 1989. pp. 562-587. DE SAUSSURE, T. Recherches chimiques sur la vegetation (Paris, France) (1804). DELGADO, A.A. Os efeitos da queima do canavial. STAB Acar, lcool e Subprodutos, 3:42-45, 1985. DELLAGNOLA, G.; FERRARI, G.; NARDI, S. Antidote action of humic substances on atrazine inhibition of sulfate uptake in barley roots. Pestic. Biochem. Physiol., 15: 101-104, 1981. DEMTRIO, R.; GUERRA, J.G.M.; SANTOS, G.A.; ALMEIDA, D.L.; DE-POLLI, H.; CAMARGO, F.A.O. Absoro de nitrognio do solo pelo milho influenciada pela adio de diferentes resduos de culturas. Pesq. Agrop. Bras., 33: 481-486, 1998. DETWILLER, R.P. Land use changes and the global carbon cycle: the role of tropical soils. Biogeochem., 2: 67-93, 1986. DHARMASIRI N, DHARMASIRI S, ESTELLE M The F-box protein TIR1 is an auxin receptor. Nature, 435: 441443, 2005. DIALLO, M. S.; SIMPSON, A.; GASSMAN, P.; FAULON, J. L.; JOHNSON, J. H., JR.; GODDARD, W. A., III; HATCHER, P. G.; 3-D Structural Modeling of Humic Acids through Experimental Characterization, Computer Assisted Structure Elucidation and Atomistic Simulations. 1. Chelsea Soil Humic Acid. Environ. Sci. Technol., 37: 1783-1793, 2003. DICK, D.P.; BURBA, P.; HERZOG, H. influence of extractant and soil type on molecular characteristics of humic substances from two Brazilian soils. J. Braz. Chem. Soc., 10:140-145, 1999. DICK, D.P.; MANGRICH, A.S.; MENESES, S.M.C.; PEREIRA, B.F. Chemical and Spectroscopical Characterization of Humic Acids from two South Brazilian Coals of Different Ranks. J. Braz. Chem. Soc.,. 13: 177-182, 2002. DBEREINER, J.W. Phytochemie, 64 1822. DOMERGUES, Y.; MANGENOT, F. Ecologie microbienne du sol. Paris:Masson, 1970, 766p. DORAN, J.W.; PARKIN, T.B. Defining and assessing soil quality. In: DORAN, J.W., COLEMAN, D.C., BEZDICEK, D.F.; STEWART, B.A., eds. Defining soil quality for a sustainable environment. Madison, Soil Science Society of America, 1994. p.3-21. (Special publication, 35) DUARTE, A. P. Calagem e sistemas de rotao de culturas: efeitos nas caractersticas e propriedades da matria orgnica do solo. Jaboticabal, Universidade Estadual Paulista, 1994. 165 p. (tese de Mestrado). DUBACH, P.; MEHTA, N.C., JAKAB, F.; MARTIN, F., ROULET, N. Chemical investigation of soil humic substances. Geochim. Cosmochim. Acta, 28: 1567-1578, 1964. DUCHAUFOU, Ph. Pdologie 1. Pdogense et clasification. Massa Ed. Paris, 1977. 477p. DUCHAUFOUR, Ph. Humification et cologie. Cah. ORTOM. Sr. Pdol. N.4, 1970. DUCHAUFOUR, Ph. Pdogense et classification. In: DUCHAUFOUR, Ph.; SOUCHIER, B., eds. Pedologie, Paris, 1977. v.1. 478p. DUDA, G.P.; GUERRA, J.G.M.; MONTEIRO, M.T.; DE-POLLI, H.; TEIXEIRA, M.G. Perennial herbaceous legumes as live soil mulches and their effects on C, N and P of the microbial biomass. Sci. Agric., 60:139-147, 2003. DUNNIVANT, F.M.; SCHWARZENBACH, R.P.; MACALADY, D.L. Reduction of substituted nitrobenzenes in

293

aqueous solutions containing natural organic matter. Environ. Sci. Technol., 26: 21332141, 1992. DURIGON, R.; CERETTA, C.A.; BASSO, C. J.; BARCELLOS, L.A.R.; PAVINATO, P. S. Produo de forragem em pastagem natural com o uso de esterco lquido de sunos. Rev. Bras. Ci. Solo, 26: 983-992, 2002. EMBRAPA. Sistemas de produo com plantas perenes em consrcio duplo para o trpico mido brasileiro Resultados preliminares. Belm, Centro de Pesquisa Agropecuria do Trpico mido, 117p. 1981. ENGEBRETSON, R.; AMOS, T.; YON WANDRUSZKA, R. Quantitative approach to humic acid associations. Environ. Sci. Technol., 30: 390-397, 1996. ENGEBRETSON, R.; VON WANDRUSZKA, R. Microorganization in dissolved humic acids. Environ. Sci. Technol., 28: 1934-1941, 1994. ENGEBRETSON, R.; VON WANDRUSZKA, R. The effect of molecular size on humic acid associations. Org. Geochem., 26:759-767, 1997. ESPINDOLA, J.A.A. Avaliao de leguminosas herbceas perenes usadas como cobertura viva do solo e sua influncia sobre a produo da bananeira (Musa spp.). Tese (Doutorado) Seropdica-RJ, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro - UFRRJ, 2001. 144p. EVANGELOU, V.P.; MARSI, M.; CHAPELL. M.A. Potenciometric-spectroscopic evaluation of metal-ion complexes by humic fractions extracted from corn-tissue. Spectrochim. Acta Part A: Mol. Biomol. Spectr., 58: 2159-2175, 2002. EVANS, J.N.S. Biomolecular NMR Spectroscopy. London, Oxford University Press, 1995. p.36. FAANHA, A.R.; DE MEIS, L. Reversibility of H+-ATPase and H+-Pyrophosphatase in tonoplast vesicles from maize coleoptiles and seeds. Plant Physiol., 116: 1487-1495, 1998. FAANHA, A.R.; FAANHA, A.L.O.; OLIVARES, F.L.; GURIDI, F.; SANTOS, G.A.; VELLOSO, A.C.X., RUMJANEK, V.M.; BRASIL F.; SCHRIPSEMA, J.; BRAZ-FILHO, R.; OLIVEIRA, M.A.; CANELLAS, L.P. Bioatividade de cidos hmicos: efeito sobre o desenvolvimento radicular e sobre a bomba de prtons da membrana plasmtica. Pesq. Agropec. Bras., 37: 1301-1310, 2002. FARMER, V.C.; SKJEMSTAD, J.O.; THOMPSON, C.H. Gnesis of hmus B horizons in hydromorfic hmus podzols. Nature , 304: 342-344, 1983. FEARSINDE, P.M. Amazonian deforestation and global warming: carbon stocks in vegetation replacing Brazils Amazon forest. Forest Ecol. Manag., 80: 21-34, 1996. FERNANDES, F.A. Matria orgnica e caractersticas fsicas e qumicas de podzois Hidromrficos no Pantanal Mato-Grossense:alteraes pelo uso com pastagens cultivadas. Piracicaba:CENA/USP, 1993. 74p. (dissertao de Mestrado). FERNANDES, F.A.; CERRI, C.C.; FERNANDES, A.H.B.M. Alteraes na matria orgnica de um podzol hidromrfico pelo uso com pastagens cultivadas no pantanal Mato-Grossense. Pesq. Agropec. Bras., 34: 19431951, 1999. FERREIRA, L.M. As interaes entre a frao mineral e a frao orgnica em solos da regio de Bauru-SP. So Paulo, Universidade de So Paulo, 1977. 214p. (Tese de Doutorado). FIGUEIREDO, V. A produo social da tecnologia. So Paulo, EPU, 1989. FLAIG, W. BEUTELSPACHER, H.; RIETZ, E. Soil components: Vol. I. Organic components. Berlim, SpringerVerlag. 1975. FLAIG, W. Generation of model chemical precursors. Im: FRIMMEL, F.H.; CHRISTMAN, F. Eds. Humic substances and their role in the environment, Wiley, New York, 1988, pp. 75-92. FLAIG, W.; BEUTELSPACHER, H.; RIETS, E. Chemical composition and physical properties of humic substances. In Soil Components, Vol. 1. J.E. Gieseking (ed.). Berlin, Springer-Verlag, 1975. pp. 1-219. FLEXOR, J.M.; VOLKOFF, B. Distribution de isotope stable 13C dans la matire organque dun sol ferralitique de LEtat da Bahia (Brsil). Comp. R. Hebd. Sanc. Acad. Sci., Ser. D, 284: 1655-1657, 1977. FORTUM, C.; LOPEZ-FANDO, C. Influencia del acido humico sobre la nutricin mineral y el desarrollo radicular de plantas de maz cultivadas en soluciones nutritivas normales y carentes de F y Mn. An. Edafol. Agrobiol., 41: 335-349, 1982. FRANCIOSO, O.; CIAVATTA, C.; TUGNOLI, V. Spectroscopic characterization of pyrophosphate incorpotation during extraction of peat humic acids. Soil Sci. Soc. Am. J., 62: 181-187, 1998.
294

FREDRICKSON, J.K.; GORBY, Y.A. Environmental process mediated by iron-reducing bacteria. Environ. Biotechnol., 7: 287-294, 1996. FREIXO, A.; CANELLAS, L.P.; MACHADO, P. L.A. Propriedades estruturais da matria orgnica leve livre e intra-agregados de dois latossolos sob plantio direto e preparo convencional. Rev. Bras. Ci. Solo, 26: 445-453, 2002. FREIXO, A.A.; CONCEIO, M.; CUNHA, T.J.F.; SAAB, S. da C.; MARTIN-NETO, L. Estudo comparativo do hmus de quatro solos orgnicos do estado do Rio de Janeiro. In; II EMCONTRO BRASILEIRO SOBRE SUBSTNCIAS HMICAS. So Carlos-SP, 1997. p.124. FRIAS, I.; CALDEIRA, M.T.; PEREZ, C.J.R.; NAVARRO, A.J.P.; CULIANEZ, M.F.A.; KUPPINGER, O., STRANSKY, H.; PAGES, M., HAGER, A.; SERRANO, R. A major isoform of the maize plasma membrane H+ATPase: Characterization and induction by auxin in coleoptiles. Plant Cell, 8: 1533-1544, 1996. FRIMMEL, F.H.; CHRISTMAN, R.F. Humic substances and their role in the environment. New York, John Wiley and Sons, 1988. FUKUSHIMA, M.; TATSUMI, K. Light acceleration of iron (III) reduction by humic acid in the aqueous solution. Colloids and Surfaces, 155: 249-258, 1999. GAMA, M.A.P. Dinmica do fsforo em solo submetido a sistema de preparos alternativos ao de corte e queima no noroeste paranaense. Tese (Doutorado) - Piracicaba-SP, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz ESALQ, 2002. 96p. GARCS, N. Caractersticas actuales del humus de los principales tipos de suelos de Cuba. Tesis de Ph.D., Nitra, Checoslovaquia. 1987. 150p. GARCS, N.; SAVICH V.I. Caractersticas fsico-qumicas de los cidos hmicos de algunos tipos de suelos de Cuba. I Datos de las investigaciones espectroscpicas. Revista CNIC, 7: 349-363, 1976. GARCS, N.; SAVICH, V.I. Clculos termoqumicos para la caracterizacin de las sustancias hmicas de los suelos. Memorias del 5to. Seminario Cientfico del CNIC. Ed. Orbe. 1975. GENRO FILHO, A. Marxismo, filosofia profana. Porto Alegre, Tch, 1986. pp. 49-80. GHOSH, K.; MUKHERJEE, S.K. Hymatomelanic acids as polyelectrolytes: 1. Viscosimetric and osmometric studies. J. Appl. Polym. Sci., 15:2073-2077, 1971. GHOSH, K.; SCHNITZER, M. Macromolecular structures of humic substances. Soil Sci., 129:266-276, 1980. GHOSH, K.; SCHNITZER, M. UV and visible absorption spectroscopic investigations in relation to macromolecular characteristics of humic substances. J. Soil Sci., 30: 735-745, 1979 GLASSTONE, S. Thermodinamics for Chemists. La Habana, Ed. Revolucionaria, 1975. GOLDENBERG, M. A arte de pesquisar. So Paulo, Record, 2001. 108p. GOMES, J.B.V.; RESENDE, M.; REZENDE, S.B. de; MENDONA, E. de S. Solo de trs reas de restinga. II. Dinmica de substncias hmicas, ferro e alumnio. Pesq. Agropec. Bras., 33: 1921-1932, 1998. GONALVES, C.N.; DALMOLIN, R.S.D.; DICK, D.P.; KNICKER, H.; KLAMT, E.;KGEL-KNABER, I. The effect of 10% treatment on the resolution of CPMAS 13C NMR spectra and on the quality of organic matter in Ferrasols. Geoderma, 116: 373-392, 2003. GOTTLIEB, O.R.; BRAZ-FILHO, R.; CRAVEIRO, A.A. introduccin a la espectrometria de masa de sustncias orgnicas. Washington, OEA, 1983. 138p. GRAZIANO, J.G. da. A modernizao dolorosa: estrutura agrria, fronteira agrcola e trabalhadores rurais no Brasil. Rio de Janeiro, Zahar, 1981. GREENLAND, D.J. Interaction between clays and organic compounds in soil. 2. Adsorption of soil organic compounds and its effect on soil properties. Soil Fert., 28: 232-251, 1965. GRIFFTH, S.M.; SCHNITZER, M. Analytical characteristics of humic and fulvic acids extracted from tropical volvanic soils. Soil Sci. Soc. Am. Proc., 39: 861-867, 1975. GROSSMAN, J.M. Exploring farmer knowledge of soil process in organic coffee systems of Chiapa, Mexico. Geoderma, 111: 267-287, 2003. GUERASIMOV, Y.A.; DREVING V.; ERIOMIN, E.; KISELIOV, A.; LEVEDEV, V.; PANCHENKOV, G.; SHLIGUIN, A. Curso de Qumica Fsica. MIR, Mosc. 1971.
295

GUMINSKI, S. Present days view on physiological effects induced in plant organisms by humic compounds. Sov. Soil Sci., 9: 1250-1255, 1968. GUMINSKI, S.; SULEJ, J.; GLABISZEWSKI, J. Influence of sodium humate on the uptake of ions by tomato seedlings. Acta Soc. Bot. Pol. 52: 149-164, 1983. GURIDI, F. O fsforo, a matria orgnica e a micorriza no Cafeeiro (Coffea arabica L.). Seropdica. 2000. 108 f. Tese (Doutorado em Cincias do Solo). Instituto de Agronomia, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, 2000. HAGER, A.; DEBUS, G.; EDEL, H.G.; STRANSKY, H.; SERRANO, R. Auxin induces exocytosis and rapid synthesis of a high-turnover pool of plasma-membrane H +-ATPase. Planta, 185: 527-537, 1991. HATTORI, T.; YONEBAYASHI, K. Surface-active oroperties of soil humic acids. Sci. Total Environ., 62: 55-64,1987. HAYASE, K.; TSUBOTA, H. Sedimentary humic and fulvic acid as surface active substances. Geochim. Cosmochim. Acta, 47: 947-952, 1983. HAYES, M.H.; MALCOLM, R. Consideration of composition and aspects of the structures of humic substances. In: HAYES, M.H.; MALCOLM, R. (eds.) Humic substances and chemical contaminants. Madson: Soil Science Society of America, 2001. p. 3-39. HAYES, M.H.B.; MaCCARTHY, P.; MALCOLM, R.; SWIFT, R.S. Humic susbtances II. In search of structure. New York, willey, 1989. 764p. HECHT, S.B.A A evoluo do pensamento agroecolgico. In: Altieri, M. Agroecologia: bases cientficas para uma agricultura sustentvel. Guaba, Editora Agropecuria, 2002. p.21-51. HEMPFLING, H.; SCHULTEN, H.-R. Chemical chracterization of organic matter in forest soil by curie point pyrolysisGC-MS and pyrolysis-field ionization mass spectrometry. Org. Geochem., 15: 131-145, 1990. HERNANDEZ, M. E.; NEWMAN, D.K. Extracellular electron transfer. Cel. and Mol. Life Sci., 58: 15621571, 2001. HETIER, J.M. Formation et evolution des andosols en climat temper. Nancy, Universit de Nancy, 1975. 194p. HOLZHEY, C.S.; DANIELS, R.B.; GAMBLE, E.E. Thick Bh horizons in the North Carolina Coastal Plain: II. Physical and chemical properties and rates of organic additions from surface sources. Soil Sci. Soc. of Am. Proc., 39:1182-1187, 1975. HSU, J.H.; LO, S.L. Chemical and spectroscopic analysis of organic matter transformations during composting of pig manure. Environmental Pollution, 104:189-196, 1999. HUE, A. Y.; DURAND, B. M. Occurrence and significance of humic acids in ancient sediments. Fuel, 56: 73-80, 1977. HUSS, M.; INGENHORST, G.; KNIG, S.; GABEL, M.; DRSE, S.; ZEECK, A.; ALTENDORF, K.; WIECZORE, H. Concanamycin A, the Specific Inhibitor of V-ATPases, Binds to the Vo Subunit c. J. Biol. Chem., 277: 4054440548, 2002. INBAR, Y.; CHEN, Y.; HADAR, Y. Solid-state carbon-13 nuclear magnetic resonance and infrared spectroscopy of composted organic matter. Soil Sci. Soc. Am. J., 53: 1695-1701, 1989. INMAM, J.C.; STRACHAN, S.D.; SOMMERS, L.; NELSON, D.W. The decomposition of phthalate esters in soil. J. Environm. Sci. Health, 19: 245-257, 1984. International Conference on Land Degradation and Meeting of the IUSS Subcommission C - Soil and Water Conservation (3.: 2001 : Rio de Janeiro, RJ, Brazil). Proceedings Rio de Janeiro : Embrapa Solos, Sociedade Brasileira de Cincia do Solo (SBCS), 2002. ISLAM, K. R.; WEIL, R.R. Land use effects on soil quality in a tropical forest ecosystem of Bangladesh. Agr. Ecosys. Environ., 79: 9-16, 2000. JACQUIN, F.; HAIDOUTI, C.; MULLER, J.C. Dynamique de la matire organique de sols carbonates cultivs. Science Sol, 1: 27-36, 1980. JAHN T.; BALUSKA F.; MICHALKE, W.; HARPER, J.F.; VOLKMANN, D. Plasma membrane H +-ATPase in the root apex: Evidence for strong expression in xylem parenchyma and asymmetric localization within cortical and epidermal cells. Physiol. Plant., 104: 311-316, 1998. JENKINSON, D.S. The Rothamsted long-term experiments: Are they still of use? Agron. J., 83: 2-10, 1991. KAGEYAMA, ., GRAZIANO, J.G. Produtividade e emprego na agricultura brasileira. In: BELUZZO, Luiz
296

Gonzaga. Desenvolvimento capitalista no Brasil. So Paulo, Brasiliense, 1983. KALBITZ, K.; GEYER, W.; GEYER, S. Spectroscopicproperties of dissolved humic substances: a reflection of land use history in fen area. Biogeochem., 47: 219-238, 1999. KAPPLER, A.; BENZ, M.; SCHINK, B.; BRUNE, A. Electron shuttling via humic acids in microbial iron (III) reduction in a freshwater sediment. FEMS Microbiology Ecol., 47: 85-92, 2004. KAWASAKI-NISHI, S.; NISHI, T.; FORGAC, M. Proton translocation driven by ATP hydrolysis in V-ATPases. FEBS, 545: 76-85, 2003. KEELING, A.A., MULLET, J.A.J; PATON, I.K. CG-mass spectrometry of refuse-derived composts. Soil Biol. Biochem., 26: 773-776, 1994. KELLY, M.O.; BRADFORD, K.J. Insensitivity of the diageotropica tomato mutant to auxin. Plant Physiology, 82: 713-717, 1986. KEUM, Y., LI, Q.X. Reduction of nitroaromatic pesticides with zero-valent iron. Chemosphere , 54: 255263, 2004. KHAN, S.U.; SCHNITZER, M. The retention of hidrophobic organic compounds by humic acid. Geochim. Cosmochim. Acta, 36: 745-754, 1972. KIM, S.; PICARDAL, F.W. Enhanced anaerobic biotransformation of carbon tetrachloride in the presence of reduced iron oxides. Environ. Toxicol. Chem., 18: 2142-2148, 1999. KIREEV, V. Curso de Fsico-Qumica. Ed. Crtago. 1969. KLINGE, H.; RODRIGUES, W.A. Litter production in area of Amazonian terra firme forest. I. Litter-fall, organic carbon and total nitrogen contents of litter. Amazniana. Kiel, 1(4):95-98, 1968. KLINGE, H.; RODRIGUES, W.A.; BRUNIG, E.; FITTKAU, E.J. Biomass and structure in a central amazonian rain forest. In: GOLLEY, F.B.; MEDINA, E. Ed. Tropical ecological systems trends in terrestrial and aquatic research. New York, Springer-Verlag, p.115-122 (Ecological Studies, v.11), 1975. KGEL-KNABER, I. The macromolecular organic composition of plant and microbial residues as inputs to soil organic matter. Soil Biol. Biochem., 34: 139-162, 2002. KGEL-KNABER, I.; ZECH, W.; HATCHER, P.G. Chemical composition of the organic matter in forest soil II. The humus layer. Zeitschrift fur Pflanzenernahrung und bodenkunde, 151: 331-340, 1988. KOMISSAROV, I.D.; KLIMOVA, A.A. Effect of humic acids on biocatalytic process. Nauch Tr. Pyumenskogo Selskokhoz. Inst., 14: 225-242, 1979. (Chem. Abstr., 79: 102832w) KONONOVA M.M. 1966. Soil organic matter. Pergamon Press. KONONOVA, M.M. Matria orgnica del suelo: su naturaleza, propriedades y mtodos de investigacin. Barcelona, Oikos-Tou. 1982. 365p. KONONOVA, M.M. Transformations of organic matter and their relation to soil fertility. Sov. Soil Sci., 8: 10471057, 1968. KORSHIN, G.V.; LI, C.W., BENJAMIN, M.M. Monitoring the properties of natural organic matter through UV spectroscopy: A consistent theory. Water Res., 31: 1787-1795, 1997. KRISTEVA, L. A.; LUKANENKO, R. Role of physiologically active substances in the soil-humic acids, bitumes and vitamins B, C, P-P e D in the life of plants and their replenishment. Sov. Soil Sci., 23: 1137-1141, 1962. KROSSHAVN, M.; KOGEL-KNABER, I.; SOUTHON, T. E. The influence of humus fractionation on the chemical composition of soil organic matter studied by solid-state 13C NMR. J. Soil Sci., 43: 473-483, 1992. KUERK, J. Study of lignite humic acids. Tesis de Dr., Universidad Tecnolgica de Berno, Rep. Checa. 2004. KUHN, T. A Estrutura das Revolues Cientficas. So Paulo, Perspectiva, 1972. KUKKADAPU, R.K.; ZACHARA, J.M.; SMITH, S.C.; FREDRICKSON, J.K.; LIU, C. Dissimilatory bacterial reduction of Al-substituted goethite in subsurface sediments. Geochim. Cosm. Acta, 65: 29132924, 2001. KUWATSUKA, S.; TSUTSUKI K.; KUMADA, K. Chemical studies on soil humic acid I. Elementary composition of humic substances. Soil Sci. Plant Nutr., 24: 337-347, 1978. LABRADOR MORENO, J. La matria ornica en los agrosistemas. Madri, Ministria Agriculltura, 1996. 176p. LAMIN, S.S.M.; JORDO, C.P.; BRUNE, W. Chemical and physicochemical caracterization of vermicomst from bovine manure and evaluation of competitive retention of cooper and zinc. Qumica Nova, 21: 278-283, 1998 LANDGRAF, M.D.; ALVES, M.R.; SILVA, S.C. Caracterizao de cidos hmicos de vermicomposto de esterco
297

bovino compostado durante 3 e 6 meses. Qumica Nova, 22: 483-486, 1999. LEE, Y.S.; BARTLETT, R. J. Stimulation of Plant growth by humic substances. Soil Sci. Soc. Am. J., 40: 876-879, 1976. LEENHEER, J.A.; NOYES, T.I. Derivatization of humic substances for structural studies, In: HAYES, M.H.B.; MACCARTHY, P.; MALCOLM, R.L. AND SWIFT, R.S. Eds., Humic Substances II: Search of Structure, John Wiley, p.257-289, 1989. LEEUW, J.W.; LEER, E.W.B.; SINNINGHE-DAMSL, J. Screening of anthropogenic compounds in polluted sediments and soil by flash evaporation/pyrolysis gas chromatography-mass spectrometry. Anal. Chem., 58: 18521857, 1986. LEIBIG, J.V. Organic chemistry in its applications to agriculture and physiology, Trans. Webster, J.W. and Owen, J. Cambridge, UK, 1841. LEINWEBER, P.; BLUMENSTEIN, O; SHULTEN, H.-R. Organic matter composition in sewage sludge farm-soils investigations by 13C NMR and pyrolysis-field ionization mass spectrometry. Eur. J. Soil Sci., 47: 71-80, 1996. LESCURE, J.P.; PUIG, H.; RIERA, B.; BEEKMAN, F.; BENETEAU, A.; LECLERC. La phytomasse pige de la fort dense en Guyane Franaise. In: SCHIRLE, A. et al., Ed. Lecosysteme forestier guyanais. Etude et mise em valeur. Cayenne, ORSTOM, p. 77-118. (Bulletin de liaison du group de travaux, n 6), 1982. LEVESQUE, M.; SCHNITZER, M. Electron-spin resonance as a guide to the degree of humification os peats. Soil Sci., 127: 140-145, 1979. LIGHT, T.S. Standard solution for redox potential measurements. Anal. Chem., 44: 1038-1039, 1972. LIMA, H.N. Gnese, Qumica e Micromorfologia de solos da Amaznia Ocidental. Tese de Doutorado, UFV-MG, 2001. 176p. LINDQUIST, I. Adsorption effects in gel filtration of humic acids. Acta Chem. Scand., 21: 2564-2566, 1967. LINDSAY, W.L. Chemical equilibria in soils. New York, Wiley, 1979. 449p. LINEHAN, D. Some effect of a fulvic component of soil organic matter on the growth of of cultured excised tomato roots. Soil Biol. Biochem., 8: 511-517, 1976. LISIAK, M.J. the effect of sodium humate on the content of differents types of phosphorus compounds on the activity of acid phophatases in tomato seedlings. Acta Soc. Bot. Pol. 53: 385-398, 1984. LOBARTINI, J.C.; TAN, K.H. differences in humic acids characteristics as determined by carbon-13 nuclear magnetic resonance, scanning electron microscopy and infrared analysis. Soil Sci. Soc. Am. J., 52: 125-130, 1988. LOMBARTINI, J.C.; ORIOLI, G.A. Las sustncias hmicas y la nutricin vegetal. Revista de la Facultad de Agronomia, 101:201-209, 1996. LONGO, J.V. Fracionamento e caracterizao de substncias hmicas em materiais de solos. UFV-Viosa-MG, 1982 (tese de Mestrado), 66p. LONGO, R.M.; ESPNDOLA, C.R. C-orgnico, N-total e substancias humicas sob influencia da introduo de pastagens (Brachiaria sp.) em reas de cerrado e floresta amaznica. Rev. Bras. Ci. Solo, 24: 723-729, 2000 LORENZ, K.; PRESTON, C.M., Raspe, S. Litter decomposition and humus characteristics in Canadian and German spruce ecosystems: information from tannin analysis and 13C CPMAS-NMR. Soil Biol. Biochem., 32: 779-792, 2000. LOVLEY, D. Microbial Fe (III) reduction in subsurface environments. FEMS Microbiology Ver., 20: 305-313, 1997. LOVLEY, D.R.; COATES, J.D.; BLUNT-HARRIS, E.L.; PHILLIPS, E.J.P.; WOODWARD, J.C. Humic substances as electron aceptors for microbial respiration. Nature, 382: 445-448, 1996. LOVLEY, D.R.; KASHEFI, K.; VARGAS, M.; TOR, J.M.; BLUNT-HARRIS, E.L. Reduction of humic substances and Fe(III) by hyperthermophilic microorganisms. Chem. Geol., 169: 289-298, 2000. LOVLEY, D.R.; WOODWARD, J.C.; BLUNT-HARRIS, E.L.; HAYES, L.; PHILLIPS, E.J.P.; COATES, J.D. Humic substances as mediator for microbially-catalized metal reduction. Acta Hidrochim. Hydrobiol., 26: 152-157, 1998. LOWER, S.K. Free energy of sulfur in various oxidation states. J. Chem., 54: 485-498, 1977. MAATHUIS, F.J.M.; FILATOV, V.; HERZYK, P.; KRIJGER, G.C.; AXELSEN, K.B.; CHEN, S.X.; GREEN, B.J.; LI, Y.; MADAGAN, K.L.; SANCHEZ-FERNANDEZ, R.; FORDE, B.G.; PALGREN, M.G.; REA, P.A.; SANDERS,
298

D.; AMTMANN, A. Transcriptome analysis of root transporters reveals participation of multiple gene families in the response to cation stress. Plant J., 35: 675-692, 2003. MacCALLISTER, D.L.; CHIEN, W.L. Organic carbon quatity and forms as influenced by tillage and cropping sequence. Commun. Soil Sci. Plant Anal., 31: 465-479, 2000. MACCARTHY, P.; RICE, J.A. Spectrocopic methods (other than NMR) for determining functionality in humic substance. In: AIKEN, G.R.; MCKINGHT, D.M.; WERSHAW, eds. Humic susbtances in soil, sediment, and water. New York, J. Wiley, 1985. p. 527-559. MAESHIMA, M. Vacuolar H +-pyrophosphatase. Biochim. Biophys. Acta, 1465: 37-51, 2000. MAESHIMA, M.; YOSHIDA, S. Purification and properties of vacuolar membrane proton-translocating inorganic phyrophosphatase from mung bean. J. Biol. Chem., 264: 20068-20073, 1989. MAGDOFF, F. Qualidade e manejo do solo. In: Altieri, M. Agroecologia: bases cientficas para uma agricultura sustentvel. Guaba: Editora Agropecuria, 2002. p.519-542. MAHIEU, N.; POWLSON, D.S.; RANDALL, E.W. Statistical analysis of published carbon-13 CPMAS NMR spectra of soil organic matter Source. Soil Sci. Am. J., 63: 307-319, 1999. MAILLARD, L.C. Gense des Matieres portiques et des matire humiques: action de la glycrine et des sucres sur les acides a-amines. C.R. Acad. Sci., 156/148, 1913. 220p. MANARINO, R.P,; VOLKOFF, B.; CERRI, C.C. Comparao do hmus de capoeira de de floresta natural em Latossolos Amarelos da regio Amaznica, Brasil. In:Anais do Colquio Regional Sobre Matria Orgnica do Solo. Piracicaba, SP, p.51-57, 1982. MANGRICH ,S.A.; LOBO, M. A.; TANCK, C.B.; WYPYCH, F.; TOLEDO, E.B.S.; GUIMARES, E. Criterious preparation and characterization of earthworm-comppost in view of animal waste recycling. Part 1. Correlation beteween chemical, thermal and FTIR spectrocopic analyses of four humic acids from earthworm composted anima manure. J. Braz. Chem. Soc., 11: 164-169, 2000. MANZATTO, H.R.H. Dinmica da matria orgnica em solos Glei pouco hmico cultivado com arroz inundado no Vale do So Joo-RJ. UFRRJ. Rio de Janeiro. 1990. 143p. (tese de mestrado). MAO, J.D., HUNDAL, L.S., SCHMIDT-ROHR, K. E THOMPSON, M.L. Environ. Sci. Technol., 37: 1751-1757, 2003. MAO, J.D.; XING, B.; SCHMIDT-ROHR, K. New structural information on a humic acid from two-dimensional 1H-13C correlation solid-state nuclear magnetic resonance. Environ. Sci. Technol., 35 1928-1934, 2001. MARBOT, R. Pirlisis analtica de sustncias hmicas. Centro Nacional de Investigacin cientfica, Direccin de Qumica, Centro de Produtos Naturales. La Habana (Tesis de Doutoramento), 1999. 150p. MARCHIORI JNIOR, M.; MELO, W.J. de. Alteraes na matria orgnica e na biomassa microbiana em solos de mata natural submetido a diferentes manejos. Pesq. Agropec. Bras., 35: 1177-1182, 2000. MARSCHNER, B.; KALBITZ, K. Controls of bioavailability and biodegradability of dissolved organic matter in soils. Geoderma, 113: 211-235, 2003. MARTIN NETO, L.; VIEIRA, E.M.; SPOSITO, G. Mechanism of atrazine sorption by humic acid: a spectroscopic study. Environ. Sci. Technol., 28: 1867-1873, 1994. MARTIN, F.; GONZALEZ-VILA, F.; ALMENDROS, G. Diborane reduction of humic substances. Sci. Total Environm., 62: 121-128, 1987. MARTINE, G.; GARCIA, R.C. Os impactos sociais da modernizao agrcola. So Paulo, Caets, 1987. MARTINS, P.F. da S. Conseqncias do desmatamento sobre o solo de um ecossistema de terra firme da amazonia oriental. Piracicaba, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz/USP., 1987. 231p. (Tese de Doutoramento). MARTINS, P.F.S.; CERRI, C.C.; VOLKOFF, B.; ANDREUX, F. Conseqncias do cultivo e do pousio sobre a matria orgnica do solo sob floresta natural na Amazonia Oriental. Acta Amaznica, 2: 19-28, 1990. MARTY, F. Plant Vacuoles. Plant Cell, 11: 587599, 1999. MARX, K. O capital: crtica da economia poltica (livro 1). Rio de Janeiro, Civilizao Brasileira, 1971, 465p. MATO, M.C.; OLMEDO, M.G.; MNDEZ, J. Inhibition of Indoleacetic acidd-oxidase by soil humic acids fractioned on sephadex. Soil Biol. Biochem., 4: 469-473, 1972. MATTHIESSEN, A. Determining the redox capacity of humic substances as a function of pH. Vom Wasser, 84:
299

229-235, 1995. MAUREL, C. Aquaporins and water permeability of plant membranes. Annu Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48: 399429, 1997. MAZOYER, M. ROUDART, L. Histoire ds Agricultures di Monde; du nolitiqye la crise contemporaine. Paris, Ed Seuil, 1997. 534p. McCULLY, M. E. Roots in soil: unearthing the complexities of roots and their rhizospheres. Annu. Rev. Plant Physiol. Mol. Biol., 50: 695-718, 1999. MCDOWELL, R.W.; STEWART, I. An improved technique for the determination of organic phosphorus in sediments and soils by 31P nuclear magnetic resonance spectroscopy. Chem. Ecol., 21: 11-22, 2005. MEDIEN, H.A.A.; ZAHRAN, A.A. Spectrophotometric kinetic and determination of quinones and barbiturates. Spectrochimica Acta, 57: 25052511, 2001. MELLO, S.C.; VITTI, G.C. Desenvolvimento do tomateiro e modificaes nas propriedades do solo em funo da aplicao de resduos orgnicos, sob cultivo protegido. Hort. Bras., 20: 199-206, 2002. MELO, W.J.; MARQUES, M.O. SANTIAGO, G.; CHELLI, R.A.; LEITE, S.A.S. Efeito de doses crescentes de lodo de esgoto sobre fraes da matria orgnica e CTC de um Latossolo cultivado com cana-de-acar. Rev. Bras. Ci. Solo, 18: 449-455, 1994. MENDONA, E.S. Oxidao da matria orgnica e sua relao com diferentes formas de alumnio de Latossolos. Rev. Bras. Ci. Solo, 19: 25-30, 1995. MENDONA, E.S.; ROWELL, D.L. Dinmica do alumnio e de diferentes fraes orgnicas de um Latossolo argiloso sob cerrado e soja. Rev. Bras. Ci. Solo, 18: 295-303, 1994. MENDONA, H.N.S.; LIMA, E.; ANJOS, L.H.C.; SILA, L.A.; CEDDIA, M.B.; ANTUNES, M.V.M. Propriedades qumicas de solo de tabuleiro cultivado com cana-de-acar com e sem a queima da palha. Rev. Bras. Ci. Solo, 24: 201-207, 2000. MIANO,T.M.; SENESI,N., Synchronous excitation fluorescence spectroscopy applied to soil humic substances chemistry. Sci. Total Environ., 117/118: 4151, 1992. MIANO,T.M.;SPOSITO,G.; MARTIN, J.P. Fluorescence spectroscopy of humic substances. Soil Sci. Soc. Am. J., 52: 10161019, 1988. MIELNICZUCK, J. Matria orgnica e sustentabilidade de sistemas agrcolas. In: SANTOS, G. de A.; CAMARGO, F.A.O. (Ed) Fundamentos da matria orgnica: ecossistemas tropicais e subtropicais. Porto Alegre: Gneses, 1999. p.1-8. MIKKI, V. SENESI, N.; HANNINEN, K. Characterization of humic material formed by composting o domestic and industrial biowastres. Chemosphere, 34: 1639-1651, 1997 MILLER, R.H.; NICHOLAIDES, J.J.; SANCHEZ, P.A.; BANDY, D.E. Soil organic matter consideration in agricultural systems of the humid tropics. In; CERRI, CC. et al., Ed. Anais do Colquio Regional sobre Matria Orgnica do Solo. Piracicaba, Cena-USP/PROMOCET, P.105-110, 1982. MILORI, D.M.B.P.; BAYER, C.; BAGATO, W.S.; MIELNICZUK; MARTIN-NETO, L. Fluorescence Spectroscopy as alternative approach to study humification degree in soil humic acids. In: 10th International Meeting of International Humic Substances Society: Entering the third millenium with a commom approach to humic susbtances and organic matter in water, soil and sediments, 24-28 july, Toulouse, France, 2000. pp.97-100. MILORI, D. M.B.P.; MARTIN NETO, L.; BAYER, C.; MIELNICZUCK, J.; BAGNATO, V.S. Humification degree of soil humic acids determined by fluorescence spectroscopy. Soil Sci., 167: 739-749, 2002. MIRANDA, C.C. Caracterizao da matria orgnica do solo em fragmentos de mata atlntica e em plantios abandonados de eucalipto, reserva Biolgica Unio-RJ. Campos dos Goytacazes, 2004. 123p. (dissertao de mestrado) MOOG, V. Bandeirantes e Pioneiros. So Paulo, Livros do Brasil, 1973. 400p. MOREIRA, C.F. Caracterizao de sistemas de caf orgnico sombreado e a pleno solo no Sul de Minas Gerais. Tese (Mestrado) - Piracicaba-SP, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz - ESALQ, 2003. 113p. MORSOMME, P.; BOUTRY, M. The plant plasma membrane H+-ATPase: structure, function and regulation. Biochim. Biophys. Acta, 1465: 1-16, 2000. MOTHEO, A.J.; PINHEDO, L. Electrochemical degradation of humic acid. Sci. Total Environ., 256: 67-76.
300

2000. MUDAY, G.K.; LOMAX, T.L.; RAYLE, D.L. Characterization of the growth and auxin physiology of roots of the tomato mutant diageotropica. Planta, 195: 548-553, 1995. MUKHERJEE, P.N.; LAHIRI, A. Polyelectrolytic behaviors of humic acids. Fuel, 37:220-226, 1959. MUOZ, S.I.S. Impacto ambiental na rea do aterro sanitrio e incinerador de resduos slidos de Ribeiro Preto, SP: Avaliao dos nveis de metais pesados. Tese (Doutorado) - Ribeiro Preto-SP, Universidade de So Paulo - USP, 2002. 131p. MUSCOLO, A.; CUTRUPI, S.; NARDI, S. IAA detection in humic substances. Soil Biol. Biochem., 30: 1199-1201, 1998. MUSCOLO, A; PANUCCIO M.R.; SIDARI, M.; NARDI, S. The effect of humic substances on pinus callus are reversed by 2,4-Dicchlorophenoxyacetic acid. J. Chem. Ecol., 31: 557-590, 2005. MYLONAS, V.A.; MCCANT, C.B. Effect of humic and fulvic acids on growth of tobacco. 2. Tobacco growth and ion uptake. J. Plant Nutr., 2: 377-393, 1980. NAIR, P. K.R. Agroforestry systems in the tropics. London, Kluwer, 1989. 664p. NANNIPIERI, P.; GRECO, S,; DELLGNOLA, G.; NARDI, S. Propiet biochimiche e fisiologiche della sostanza orgnica. In: NANNIPIERI, P.; (ed). Ciclo della sostanza organica nel suolo: aspecti agronomici, chimici, ecologici & selvicolturali. Bologna, Patron, 1993.p.67-78. NAPIER, R.M.; DAVID, K.M.; PENOT-RECHENMANN, C. A short history of auxin-binding proteins. Plant Mol. Biol., 49: 339-348, 2002. NARDI, S.; ARNOLDI, G.; DELL AGNOLA, G. Release of the hormone-like activities from Allophobora rosea (sav.) and Allophobora caliginosa (sav.) feces. Can. J. Soil Sci., 68: 563-567, 1988. NARDI, S.; CONCHERI, G.; DELLAGNOLA G.; SCRIMIN, P. Nitrate uptake and ATPase activity in oat seedlings in the presence of two humic fractions. Soil Biol. Biochem., 23: 833836, 1991. NARDI, S.; PIZZEGHELLO, D.; MUSCOLO, A.; VIANELLO, A. Physiological effects of humic substances on higher plants. Soil Biol. Biochem., 34: 1527-1536, 2002. NASCIMENTO, E.J. Dinmica da matria orgnica em um latossolos vermelho-escuro distrfico, fase cerrado, submetido a diferentes sistemas de preparo do solo e rotao de milho e solo. Viosa, UFV. (tese de mestrado), 1989, 70p. NASCIMENTO, V.M.; ALMENDROS, G.; FERNANDES, F. M. Soil hmus characteristics in virgin and cleared reas of the Paran river basin in Brazil. Geoderma, 54: 137-150, 1992. NASCIMENTO, V.M.; MELO, W.J.; NEPTUNE, A.M.L. Efeitos da rotao de culturas sobre fraes da matria orgnica de um Latossolo sob vegetao de cerrado. Cientfica, 16: 13-19, 1988. NEWMAN, R.H.; TATE, K.R. Soil phosphorus characterization by 31P-nuclear magnetic resonance. Commun. in Soil Sci. Plant Anal., 1: 835-842, 1980. NOOGARD, R.B.; SIKOR, T.O. Metodologia e prtica da agroecologia. In: Altieri, M. Agroecologia: bases cientficas para uma agricultura sustentvel. Guaba: Editora Agropecuria, 2002. p.53-83. NUES, J.E.V.; AMARAL SOBRINHO, N.M.B.; MAZUR, N. Conseqncias de diferentes preparos do solo sobre distribuio qumica e perdas de fsforo de um Argissolo. Bragantia, 62: 101-109, 2003. OADES, J.M. The retention of soil organic matter in soils. Biogeochem., 5: 35-70, 1988. OADES, J.M. Soil organic matter and structural stability: mechanism and implications for management. Plant Soil, 76: 319-337, 1984. OLIVEIRA, M.W.de.; TRIVELIN, P.C.O.; GAVA, G.J.C.; PENATTI, C.P. Degradao da palhada cana de acar. Sci. Agric., 56: 803-809, 1999. ORLOV D.S. Gua prctica de la bioqumica del humus. MGU. 1969. ORLOV D.S. Humic substances of soils and general theory of humification. A.A. Balkema, Rotterdam, 1995. ORLOV, D.S. The determination of molecular mass, size and shapes of humic substances. In Metody Izucheniya Mineralogichescogo i Organicheskogo Veshchestva Pochv., Ashkhabad. 1975. ORLOV, D.S.; AMMOSOVA, Ya.M.; GLEBOVA, G.I. Molecular parameters of humic acids. Geoderma, 13: 211229, 1975.
301

ORTEGA SASTRIQUES, F. La material orgnica de los suelos y el humus de los suelos de Cuba. Havana. Ed. Academia de Cincias de Cuba. 1982, 136p. OSTERBERG, R.; SHIRSHOVA, L. Oscillating, nonequilibrium redox properties of humic acids. Geochim. et Cosmochim. Acta, 61: 4599-4604, 1997. PALMGREN, M.G. Regulation of plan plasma membrane activity. Physiol. Plant., 83: 314-323, 1991. PARRA, M.S. Dinmica da matria orgnica e de nutrientes num latossolo roxo distrfico submetido aos sistemas de plantio convencional e direto e a diferentes sucesses de cultura. Viosa, UFV. (tese de mestrado), 1986, 94p. PAULI, F.W. Soil fertility. London: Adam Hilger, 1967. PERDUE, E. M. Analytical constraints on the structural features of humic substances. Geochim. Cosmochim. Acta, 48:1435-1443, 1984. PERDUE, E.M. Analytical constraints on the structural features of humic substances. Geochim. Cosmochim. Acta, 48: 1435-1443, 1984. PREZ, M.G.; MARTIN-NETO, L.; SAAB, S.C.; NOVOTNY, E.H.; MILORI, D.M.B.P.; BAGNATO, V.S.; COLNAGO, L.A. ; MELO, W.J.; KNICKER, H. Characterization of humic acids from a Brazilian Oxisol under different tillage systems by EPR, 13C NMR, FTIR and fluorescence spectroscopy. Geoderma, 118: 181-190, 2004. PEREZ, K.S.S.; RAMOS, ML.L.G.; MCMANUS, C. Nitrognio da biomassa microbiana cultivado com soja, sob diferentes sistemas de manejos, nos Cerrados. Pesq. Agropec. Bras., 40:137-144, 2005. PHIRI, S.; BARRIOS, E.; RAO, I.M.; SINGH, B.R. Changes in soil organic matter and phosphorus fractions under planted fallows and a crop rotation system on a Colombian volcanic-ash soil. Plant Soil, 231: 211-223, 2001. PICCOLO, A. Characteristics of soil humic extracts obtained by some organic and inorganic solvents and purified by HCl-HF treatment. Soil Sci., 146: 418-422, 1988. PICCOLO, A. Humus and soil conservation, In Humic Substances in Terrestrial Ecosystems. A. PICCOLO (ed.). Amsterdam, Elsevier, 1996. pp. 225-264. PICCOLO, A. Metodi chimici e spettroscopi per lo studio della struttura e reattivit della sostanza organica del suolo. In: NANNIPIERI, P.; (ed). Ciclo della sostanza organica nel suolo: aspecti agronomici, chimici, ecologici & selvicolturali. Bologna, Patron, 1993.p.247-304. PICCOLO, A. New Insights on the conformational structure of humic substances as revealed by size exclusion chromatography. In: DROZD, J; GONET, S.S., SENESI, N.; WEBER, J. (eds). The role of humic substances in the ecosystems and in environmental protection. Wroclaw, Polish Society of Humic Substances, 1997. p. 19-38. PICCOLO, A. The supramolecular structure of humic substances. Soil Sci., 166: 810-832, 2001. PICCOLO, A. The Supramolecular Structure of Humic Substances: A Novel Understanding of Humus Chemistry and Implications in Soil Science. Adv. Agron., 75: 57-1342002. PICCOLO, A.; CAMICI, L. A comparison of 2 methods for the determination of total acidity of humic substances. Int. J. Environ. Analyt, Chem. 41: 65-69, 1990. PICCOLO, A.; CAMPANELLA, L.; TETRONIO, B. M. Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectra of soil humic substances extracted by different mechanisms. Soil Sci. Soc. Am. J., 54: 750-756, 1990. PICCOLO, A.; CONTE P.; COZZOLINO, A. Effects of mineral and monocarboxylic acids on the molecular associations of dissolved humic substances. Eur. J. Soil Sci., 50: 687-694, 1999. PICCOLO, A.; CONTE, P.; SPACCINI, R.; CHIARELLA, M. Effects of some dicarboxylic acids on the association of dissolved humic substances. Biol. Fert. Soils, 37: 255-259, 2003. PICCOLO, A.; CONTE, P.; TRIVELLONE, E.; VAN LAGEN, B.; BUURMAN, P. Reduced heterogeneity of a lignite humic acid by preparative HPSEC following interaction with an organic acid. Characterization of sizeseparates by Pyr-GC-MS and H-1-NMR spectroscopy. Environ. Sci. Technol., 36: 76-84, 2002. PICCOLO, A.; NARDI, S.; CANCHERI, G. Macromolecular changes of soil humic substances induced by interactions with organic acids. Eur. J. Soil Sci., 47: 319-328, 1996. PICCOLO, A.; NARDI, S.; CONCHERI, G. Structural characteristics of humus and biological activity. Soil Biol. Biochem., 24: 273380, 1992. PICCOLO, A.; STEVENSON, F.J. Infrared spectra of Cu2+, Pb2+ and Ca2+ complexes of soil humic substances. Geoderma, 27: 195-208, 1982.
302

PINTO, L.F.G. Avaliao do cultivo de cana-de-acar em sistemas agroflorestais em Piracicaba, SP. Tese (Doutorado) - Piracicaba-SP, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz - ESALQ, 2002, 116p. PINTON, R.; CESCO, S.; DE NOBILI, M.; SANTI, S.; VARANINI, Z. Water- and pyrophosphate-extractable humic substances fractions as source of iron for Fe-deficient cucumber plants. Biol. Fert. Soils, 26: 2327, 1998. PINTON, R.; CESCO, S.; IACOLETTI, G.; ASTOLFI, S.; VARANINI, Z. Modulation of nitrate uptake by waterextractable humic substances: involvement of root plasma membrane H +-ATPase. Plant Soil, 215: 155163, 1999. PINTON, R.; CESCO, S.; SANTI, S.; AGNOLON, F.; VARANINI, Z. Water-extractable humic substances enhance iron deficiency responses by Fe-deficient cucumber plants. Plant Soil, 210: 145157, 1999. PINTON, R.; VARANINI Z.; VIZZOTO G.; MAGGIONI, A. Soil humic substances affect transport-properties of tonoplasto vesicles isolated from oat roots. Plant Soil, 142: 203-210, 1992. PIZAURO JR, J.M.;MELO, W.J. Influncia da incorporao da parte area de sorgo ou lablabe nas fraes da matria orgnica de um Latossolo vermelho-escuro. R. Bras Ci Solo, 19:95-103, 1995. PRIMAVESI, A. Manejo ecolgico do solo: a agricultura em regies tropicais. So Paulo, Nobel, 9 ed., 1987. 549p. PUIG, H. Production de litere em fort guyanaise: resultats prliminaires. Bull. Soc. Hist. Nat., 115: 338-346, 1979. QUAGGIOTTI S.; RUPERTI B.; PIZZEGHELLO D.; FRANCIOSO O.; TUGNOLI V.; NARDI S. Effect of low molecular size humic substances on nitrate uptake and expression of genes involved in nitrate transport in maize (Zea mays L.). J. Exp. Bot., 55: 803-813, 2004. QUEIROZ, F.M de, MATOS, A.T. de, PEREIRA, O.G., OLIVEIRA, R.A. de. Caractersticas qumicas de solo submetido ao tratamento com esterco lquido de sunos e cultivado com gramneas forrageiras. Cincia Rural, 34: 1487-1492, 2004. QUMICA. 1989. Colectivo de autores. Facultad de Qumica. Universidad de la Habana. RAM, N.; VERLOO, M. Effect of lnatural complexants on the uptake of trace elements by barley and their extractable amounts in soil. Agrochimica, 28: 13-19, 1983. RAMOS, A.C.; FAANHA, A.R.; CANELLAS, L.P. O fluxo extracelular de prtons das razes estimulado pelos cidos hmicos: evidncias obtidas com a microssonda vibrtil seletiva ao H +. VI Encontro Brasileiro Sobre Substncias Hmicas, Rio de Janeiro. 16 a 18 de novembro, EMBRAPA-CNPS, 2005. Resumo expandido. p.1-4. RAMOS-TEJADA, M.M.; ONTIVEROS, A.A.; VIOTA, A.J.L., DURN, J.D.G. Interfacial and rheological properties of humic acid/hematite suspensions. J. Colloid Interf. Sci., 268: 85-95, 2003. RANBY, B.; RABEK, J. F. Photodegradation, Photo-oxidation and Photostabilization of Polymers. New York, John Wiley and Sons, 1975. pp. 42-96. RASAD, B.; SINHA, M.K. physical and chemical characterization of moleculary homogeneous fulvic fractions and their metl complexes. J. Indian Soc. Soil Sci., 31: 187-191, 1983. RAUTHAN, B.S.; SCHNITZER, M. Effect of a soil humic acid on the growth and nutrient content of cucumber (Cucunis sativum) plants. Plant Soil, 63: 491-495, 1981. RAVEN, P.H.; EVERT, R. F.; EICHORN, S. E. Biologia Vegetal. Rio de Janeiro, Ganabara Koogan, 6a ed., 1999. 906p. RAY, W.J.; BURGNER, J.W.; POST, C.B. Characterization of vanadate-based transition-state-analog complexes of phosphoglucomutase by spectral and NMR techniques. Biochem., 29: 2770-2778, 1990. REA, P. A.; SANDERS, D. Tonoplast energization: Two H+ pumps, one membrane. Physiol. Plant., 71: 131-141, 1987. REUTER, J.H.; PERDUE, E.M. Calculation of molecular weights of humic substances from colligative data: Application to aquatic humus and its molecular size fractions. Geochim. Cosmochim. Acta, 45: 2017-2022, 1981. REX, R.W. Electron paramagnetic resonance studies of stable free radicals in lignins and humic acids. Nature, 188: 1185-1186, 1960. RIBEIRO, D. O processo civilizatrio. So Paulo, Companhia das Letras, 1998. 456p. RICE, J. A. & MACCARTHY, P. Statistical evaluation of the elemental composition of humic substances. Org. Geochem., 17: 635-648, 1991
303

RIPOLI, T.C.; VILLANOVA, W.A. Colheita mecanizada da cana-de-acar: novos desafios. STAB Acar, lcool e Subprodutos, 10: 28-31, 1992. RIVERO, C.; CHIRENJE, T.; MA, L.Q.; MARTINEZ, Z. Influence of composto on soil organic matter under tropical conditions. Geoderma, 123: 355-361, 2004. ROCHA, J.C.; ROSA, A.H. Substncias hmicas aquticas: interao com espcies metlicas. So Paulo, Editora Unesp, 2003. 120p. ROSA, A.H.; SIMES, M.L.; OLIVEIRA, L.C. DE.; ROCHA, J.C., MARTIN NETO, L.; MILORI, D.M.B.P. Multimethod study of the degree of humification of humic substances extracted from different tropical soil profiles in Brazils Amazonian region. Geoderma, 127: 1-10, 2005. ROSALES, M.A.; OLIVEIRA, O.S.; MOURA, M.A.; LOURES, E.G. Influencia das adubaes orgnicas e mineral contnuas sobre as caractersticas das fraes das substncias hmicas do solo. Ceres, 46: 67-81, 1999. ROTH C.; VIEIRA M. J. Infiltrao de gua no solo. Plantio direto, 1: 1-4, 1983. RUCK, A.; PALME, K.; VENIS, M. A.; NAPIER, R. M.; FELLE, R. H. Patch-clamp analysis establishes a role for an auxin-binding protein in the auxin stimulation of plasma-membrane current in Zea mays protoplasts. Plant J., 4: 41-46, 1993. RUIZ, E.; GARCS, N.; GURIDI, F. Propiedades de vermicompost obtenidos en Cuba: su calidad como biofertilizantes y como mejorador del suelo. In: CONGRESO LATINOAMERICANO DE LA CIENCIA DEL SUELO, 14., 1999, Temuco. Anais ....Temuco: Universidad de la Frontera, 1999. 4 p. (CR-ROM) RYAN, D.K.; WEBER, J.H. Fluorescence quenching titration for determination of complexing capacities and stability constants of fulvic acid. Anal. Chem., 54: 986-990, 1982. SAAB, S.C., MARTIN NETO, L. Use of the EPR technique to determine thermal stability of some humified organic substances found in soil organic-mineral fractions. Qumica Nova, 26: 497-498, 2003. SAALBACH, E. Einfluss von humusstoffen auf den stoffwechsel der pflanzen. Trans. 6th Intern. Congr. Soil Sci., Rapp. D, p. 107-111, 1956. SAGAN, C. O mundo assombrado pelos demnios: a cincia vista como uma vela no escuro. So Paulo, Companhia das Letras, 1996. 446p. SAIZ-JIMENEZ, C. Analytical pyrolysis of humic substances: Pitfalls, limitations and possible solutions. Environ. Sci. Technol. 28: 1773-1780, 1995. SAIZ-JIMENEZ, C. Application of pyrolysis-gas chromatography/mass spectrometry to soil chemistry. In: World Congress of soil science, 15., 1994. Acapulco, ISSS.p.65-84. SAIZ-JIMENEZ, C. The chemical structure of humic substances: Recent advances. In Humic Substances in Terrestrial Ecosystems. A. Piccolo (ed.). Amsterdam,Elsevier, 1996. pp. 1-44. SALAS, A.M.; ELLIOTT, E.T.; WESTFALL, D.G.; COLE, C.V.; SIX, J. The role of particulate organic matter in phosphorus cycling. Soil Sci. Soc. Am. J., 67: 181-189, 2003. SAMSOM, G.; VISSER, S.A. Surface-active effects of humic acids on potato cell-membrane properties. Soil Biol. Biochem., 21: 343-347, 1989. SANCHEZ, P.A. Properties and management of soils in the tropics. New York, John Wiley & Sons, 1976. 618p. SANTA-ISABEL, L.M. Caracterizao e algumas relaes pedogenticas da matria orgnica de uma toposseqncia de solos em regio de clima semi-rido de Itaberaba-BA. Salvador, UFBA., 1988. Dissertao (Mestrado em Geocincias) Instituto de Geocincias , Universidade Federal da Bahia. SANTOS, G. A., CAMARGO, F. A. O. Fundamentos da matria orgnica do solo: ecossistemas tropicais e subtropicais.SANTOS, G. A., CAMARGO, F. A. O. (eds). Porto Alegre, Gnesis, 1999, 508p. SANTOS, R.H.S.; SILVA, F.; CASALI, V.W.D.; CONDE, A.R. Efeito residual da adubao de composto organico sobre o crescimento e produo de alface. Pesq.Agropec.Bras. ,36: 1395-1398, 2001. SARAIVA, O.F. Relaes da matria orgnica com as caractersticas fsicas e qumicas de um Podzlico VermelhoAmarelo Cmbico Distrfico, fase terrao, submetido a sistemas de cultivo. Viosa, UFV., Impr. Univ., 1987. 175p. (Tese de Doutoramento). SCHIAVO, J. Correlao entre mtodos qumicos e espectroscpicos na avaliao da acidez carboxlica de cidos hmicos. Exame de Qualificao. Programa de Ps Graduao em Produo Vegetal, 2004. 15p. (mimeo)

304

SCHILLING, M.; COOPER, W.T. Effects of chemical treatments on the quality and quantitative reliability of solid state 13C NMR spectroscopy of mineral soils. Anal. Chim. Acta, 508: 207-216, 2004. SCHNITZER, M. Characterization of humic constituints by spectroscopy soil biochemistry. Soil Biochem., 2: 6095, 1971. SCHNITZER, M. Chemical, Spectroscopic, and Thermal Methods for the Classification and Characterization of Humic Substances. In: Proc. Intern. Meetings on Humic Substances, Wageningen, 1972. p.293-310. SCHNITZER, M. Soil organic matter-the next 75 years. Soil Sci., 151: 41-58, 1991. SCHNITZER, M. Toward a better understanding of the interrelationship between humus and nitrogen: a key economic and scientific problem in internation agriculture. In: DUTIL, P.; JACQUIN, F. (Eds). Colloque Humus-Azote, 7-10 juillet, Reims, France, 1981. p.1-15. SCHNITZER, M.; GUPTA, U.C. Determination of acidity in soil organic matter. Soil Sci. Soc. Am. Proc., 27: 274277, 1965. SCHNITZER, M.; KHAN, S.U. Humic Substances in the Environment. New York, Marcel Dekker, 1972. 325p. SCHNITZER, M.; KHAN, S.U. Soil organic matter. Amsterdam, Elsevier, 1978, 319p. SCHNITZER, M.; POASP, P.A. Effects of a soil humic compound on root initiation. Nature , 213: 598, 1967. SCHNITZER, M.; MCARTHUR, D.F.E.; SCHULTEN, H.; KOZAK, L. M.; HUANG, P.M. Long-term cultivation effects on the quantity and quality of organic matter in selected Canadian prairie soils. Geoderma, In press. (2005) SCHOLES, R. J., BREEMEN, N. VAN. The effects of global change on tropical ecosystems. Geoderma, 79:9-24, 1997. SCHULTEN, H.-R., LEINWEBER, P. New insights into organicmineral particles: composition, properties and models of molecular structure. Biol. Fertil. Soils, 30: 399-432, 2000. SCHULTEN, -H.R.; Analytical pryrolisis of humic substances and soils: geochimical, agricultural and ecological consequences. J. Anal. Appl. Pyrolisis, 25: 97-122, 1993. SCHULTEN, -H.R.; BECKEY, H.D.; BOERBOOM, A.J. Pyrolisys field desorption mass spectrometry of deoxyribonucleic acid. Anal. Chem., 45: 2358-2362, 1973. SCHULTEN, -H.R.; SCHNITZER, M. Chemical model structures for soil organic matter and soils. Soil Sci., 162: 115-130, 1993. SCHULTEN, -H.R.; SCHNITZER, M. Structural studies on soil humic acids by curei-point pyrolysis-gas chromatography/mass spectrometry. Soil Sci., 153: 205-224, 1992. SCHULTEN, H.-R.; SCHNITZER, M. The chemistry of soil organic nitrogen: A review. Biol. Fertil. Soils, 26: 1-15, 1997. SCHULTEN, H.-R.; SCHNITZER, M. Three-dimensional models for humic acids and soil organic matter. Naturwissenschaften, 82: 487-498, 1995. SCHULTEN, H.-R.; SORGE, C.; SCHNITZER, M. Structural studies on soil nitrogen by curied point pyrolysis-gas chromatography/mass spectrometry with nitrogen-selective detection. Biol. Fert. Soils, 20: 174-184, 1995. SCHULTEN, H. R., MONREAL, C. M., SCHNITZER, M. Effects of long-term cultivation on the chemical structure of soil organic matter. Naturwissenschaften, 82: 4244, 1995. SCOTT, D.T.; MCKNIGHT, D.M.; LOVLEY, D.R. Quinone moieties act as electron acceptors in the reduction of humic substances by humics-reducing microorganisms. Environ. Sci. Technol. 32: 2984-2963, 1998. SENESI, N. Molecular and quantitative aspects of the chemistry of fulvic acid and its interactions with metal ions and organic chemicals. Part II. The fluorescence spectroscopy. Anal. Chim. Acta, 232: 77106, 1990. SENESI, N.; MIANO,T.M.; PROVENZANO, M.R.; BRUNETTI, G. Characterization,differentiation, and classification of humic substances by fluorescence spectroscopy. Soil Sci., 152: 259271, 1991. SERRANO, R. Strucuture and function of plasma membrane ATPase. Ann. Rev. Plant Physiol. Plant. Mol. Biol. 40: 61-94, 1989. SHUBERT, H.O.R. Ecologia e utilizao das florestas. In: SALATI, E., Cood. Amaznia: desenvolvimento, integrao e ecologia. So Paulo, Editora Brasiliense/CNPq, 1983. p.1001-143. SIERRA, M.M.D.; GIOVANELA, M.; PARLANTI, E.; SORIANO-SIERRA, E.J. Fluorescence fingerprint of fulvic and humic acids from varied origins as viewed by single-scan and excitation/emission matrix techniques. Chemosphere, 58: 715733, 2005.
305

SIERRA, M.M.M.; GIOVANELA, M.; DINARD,O.F.X.; BELIN, C.A. utilizao da espectroscopia de fluorescncia no estudo da matria orgnica dissolvida em guas naturais: evoluo e perspectivas. Qumica Nova, 19: 294-301, 1996. SILVA, C.A., ANDERSON, S.J.; GUILHERME, L.R.G. Uso da cromatografia de excluso por tamanho na caracterizao das substncias hmicas de um Latossolo Vermelho-escuro sob efeito da calagem. Rev. Bras. Ci. Solo, 24:495-503, 2000. SILVA, J. Da, LIMA E SILVA, P.S.; OLIVEIRA, M.De.; BARBOSA E SILVA, K.M. Efeito do esterco bovino sobre o rendimento de espigas verdes e de gros de milho. Hortic. Bras., 22: 326-331, 2004. SILVA, J. ., RESCK, D.V.S. Matria orgnica do solo. In: Vargas, M A. T., Hungria, M. Biologia dos solos dos cerrados. Planaltina, EMBRAPA-CPAC, 1997. p.467-527. SIMMONDS, P.O.G.; SHULMAM, G.P.; STEMBRIDGE, R. Organic analysis by pyrolysis-gas chromatography/ mass spectrometry: a candidate experiment for biological exploration of Mars. J. Chromat. Sci., 7: 36-41, 1969. SIMPSON, A.; TSENG, L.H.; SIMPSON, M.J.; SPRAUL, M.; BRAUMANN, U.; KINGERY, W.L.; KELLEHER; B.P.; HAYES, M.H. The application of LC-NMR and LC-SPE-NMR to compositional studies of natural organic matter. Analyst, 129: 1216-1222, 2004. SIMPSON, A.J. Determining the molecular weight, aggregation, structures and nteractions of natural organica matter using diffusion ordered spectroscopy. Magnetic Res. Chem., 40: 572-582 2002. SIMPSON, A.J.; BURDON, J.; GRAHAM, C.L.; HAYES, M.H.B.; SPENCER, N.; KINGERY; W.L. Interpretation of heteronuclear and multidimensional NMR spectroscopy of humic substances. Europ. J. Soil Sci., 52: 495-510, 2001. SIMPSON, A.J.; LEFEBVRE, B.; MOSER, A.; WILLIAMS, A.; LARIN, N.; KVASHA, M.; KINGERY; W.L.; KELLEHER; B. Identifying residues in natural organic matter through spectral prediction and pattern matching of 2D NMRdatasets. Magnetic Res. Chem., 42: 14, 2004. SIMPSON, A.J; KINGERY, W.L.; HATCHER, P.G. The identification of plant derived structures in humic materials using three-dimensional NMR spectroscopy. Environ. Sci. Technol., 37: 337-342, 2003. SIQUEIRA, J. O.; MOREIRA, F.M.S. Biologia e bioqumica do solo. Lavras: UFLA/FAEPE, 2001, 291p. SKJEMSTAD, J.O.; FITZPATRICK, R.W.; ZARCINAS, B.A.; THOMPSON, C.H. Genesis of podzols on coastal dunes in Southern Queensland. II. Geochemistry and forms of elements as deduced from various soil extraction procedures. Austr. J. Soil Res., 30: 593-613, 1992. SLEPETINE, A.; SLEPETYS, J. status of humus in soil under various long term tillage systems. Geoderma, 122: 207-215, 2005. SMERNIK, R.J. Solid-state spectroscopic studies of soil organic matter at two magnetic field strengths. Geoderma, 125: 249-271, 2005. SMIDOVA, M. The influence of humic acid on the respiration of plant roots. Biol. Plant., 2: 152-164, 1960. SOLOMON, D.; LEHMANN, J.; KINYANGI, J.; LIANG, B.Q.; SCHAFER, T. Carbon K-edge NEXAFS and FTIRATR spectroscopic investigation of organic carbon speciation in soils. Soil Sci. Am. J., 69: 107-119, 2005. SOMBROEK, W.G. Amazonas soils. A reconnaissance of the soils lf the Brazilian Amazon region. Wageningen, Centre for Agricultural Publication and Documentation, 1966. 292p. SONDERGAARD, T.E.; SCHULZ, A.; PALMGREN, M. G. Energization of Transport Processes in Plants. Roles of the Plasma Membrane H+-ATPase. Plant Physiology, 136: 24752482, 2004. SOUZA, C.M. Efeito do uso contnuo de grade pesada sobre algumas caractersticas fsicas e qumicas de um Latossolo Vermelho-Amarelo distrfico, fase cerrado, e sobre o desenvolvimento das plantas e absoro de nutrientes pela cultura de soja. Tese (Mestrado) Viosa-MG - Universidade Federal de Viosa,UFV, 1988. 105p. SOUZA, L.F.; MADARI, B.; BENITES, V.M.; CUNHA, T.J. & NEVES, E.G. Relao entre a fertilidade e as substncias hmicas numa ter preta da Amaznia. In: XXIX CONGRESSO BRASILEIRO DE CINCIA DO SOLO, Ribeiro Preto-SP, 2003. Anais...CD-Rom SOUZA, W.J.O.; MELO, W.J. Matria orgnica em um Latossolo submetido a diferentes sistemas de produo de milho. Rev. Bras. Ci. Solo, 27: 1113-1122, 2003. SPACCINI, R., MBAGWU, J. S. C. CONTE, P., PICCOLO, A. Changes of humic substances characteristics from forested to cultivated soils in Ethiopia. Geoderma, In press. (2005)

306

SPARKS, D.L. Elucidating the fundamental chemistry of soils: past and recent achievements and future frontiers. Geoderma, 100: 303319, 2001. SPARKS, D.L. Environmental soil chemistry. San Diego, Academic Press. 1995. 387p. SPAROVEK, G., ALLEONI, L.R.F., PEREIRA, J.C., ROSSETTO, R. Aptido das terras de Piracicaba para o corte mecanizado de cana-de-acar. STAB acar, lcool e Subprodutos, 15:14-17, 1997. SPOSITO, G. Chemistry of Soil. New York, Oxford Univ. Press, 1989. 277p. SPOSITO, G.; HOLTZCLAW, K.M.; BAHAM, J. Analytical properties of the soluble, metl-complexing fractions in sludge-soil mistures: II comparative structural chemistry of fukvic acid. Soil Sci. Soc. Am. J ., 40: 691-697, 1976. STANCHEV, L.; TANEV, Z.; IVANOV, K. Humus substances as suppressors of biuret phytotoxicity. In Humus et Planta, 6: 373-381, 1975. STEVENSON, F.J. Humus Chemistry. Genesis, Composition, Reactions. John Wiley & Sons, Inc. 2 th Edition. 1996. 496 p. STRUYK, Z.; SPOSITO, G. Redox properties of standard humic acids. Geoderma, 102: 329-346, 2001. STUMM, W.; MORGAN, J.J. Aquatic chemistry: chemical equilibria and rates in natural waters. New York, Wiley-Interscience,1996. 302 p. SWIFT, R.S. Macromolecular properties of soil humic substances: fact, fiction, and opinion. Soil Sci., 164: 790802, 1999. SWIFT, R.S. Sequestration of Carbon by Soil. Soil Sci., 166: 858-871, 2001. SWIFT, R.S.; POSNER, A.M. Gel chromatography of humic acid. J. Soil Sci. 22: 237-249, 1971. SZE, H. H+-translocating ATPases: advances using membranes vesicles. A. Rev. Plant Physiol., 36: 175-208, 1985. SZE, H.; WARD, J.M.; LAI, S.; PERERA, I. Vacuolar-type H+-translocating ATPases in plant endomembranes: subunit organization and multgene families. J. Experim. Biol., 172: 132-135, 1992. SZILGYI, M. Reduction of Fe3+ ion by humic acid preparations. Soil Sci., 111: 233-235, 1971. SZILGYI, M. The redox properties and the determination of the normal potential of the peat-water system. Soil Sci., 115: 434-437, 1973. SZILGYI, M. Valency changes of metal ions in the interaction with humic acids. Fuel, 53: 26-28, 1974. TAIZ, L. The plant vacuole. J. Exp. Biol., 172: 113-122, 1992. TAIZ, L.; ZEIGER, S. Plant Physiol. Redwood City, The Benjamin Cummings Publishing Company, 1991. 690p. TAN, K.H.; HILMMELSBACH, D.S.; LOBARTINI, J.C. The significance of solid-state 13C NMR spectroscopy of whole soil in the characterization of humic matter. Commun. Soil Sci. Plant Anal., 23: 1513-1532, 1992. TANFORD, C.The hydrophobic effect: formation of micelles and biological membranes. New York, Wiley, 1980. TICH, V. Phosphorus uptake suppression in maize seedlings as related to humate supply. Biol. Plant., 26: 221229, 1984. TIMM, L.C. Efeito do manejo da palha da cana-de-acar nas propriedades fsico-hdricas de um solo. Tese (Doutorado) - Piracicaba-SP, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz - ESALQ, 2002, 115p. TINOCO, P.; ALMENDROS, G.; GONZALEZ-VILA; F.J.; LANKES, U. LDEMANN, H.D. Analysis of Carbon and Nitrogen Forms in Soil Fractions afterthe Addition of 15N-Compost by 13C and 15N Nuclear Magnetic Resonance. J. Agr. Food Chem., 52: 5412-5417, 2000. TIURIN, J.V. Organicheskoe veschestvo pochv. Selshkozgiz., Leningrado. TRATNYEK, P.G.; MACALADY, D.L. Abiotic reduction of nitro aromatic pesticides in anaerobic laboratory systems. J. Agric. Food Chem., 3: 248254, 1989. TU, S.; NAGHASHI, G.; BROUILLETTE, J.N Proton pumping kinetcs and origin of nitrate inhibition of tonoplasttype H+-ATPase. Arch. Biochem. Biophys., 256: 625-637, 1987. TURNER, R.C.; SCHNITZER, M. Thermogravimetry of organic matter of a podzol. Soil Sci., 93: 225-232, 1962. TURRENE, J.F. Modes dhumification et diffrenciation podzolique dans deux toposquences guyanaises. Mem. ORSTOM, Paris, 1977. 173p. VALADARES, G.S. Caracterizao de Organossolos: auxilio sua classificao. Seropdica, UFRRJ, 2003. 129p. (Tese de doutorado).
307

VALLE, C.E. Qualidade ambiental. O desafio de ser competitivo protegendo o meio ambiente. So Paulo, Livraria Pioneira Editora, 1995. 74p. VAN DICK, H. Colloidal chemical properties of humic matter. In: MCLAREN, A.D. & PETERSON, G.H. (eds) Soil Biochemistry. New York, Dekker, 1972. pp. 16-34. VAN KREVELEN, D.W. Graphical-statistical method for the study of structure and reaction processes of coal. Fuel, 29: 269-284, 1961. VARANINI, Z.; PINTON, R.; DE BIASE, M.G.; ASTOLFI, S.; MAGGIONI, A. Low molecular weight humic substances stimulate H+-ATPase activity of plasma membrane vesicles isolated from oat (Avena sativa L.) roots. Plant Soil, 153: 61-69, 1993. VARGAS, L.K.; SELBACH, P.A.; S, E.L.S. de. Alteraes microbianas no solo durante o ciclo do milho nos sistemas de plantio direto e convencional. Pesq. Agropec. Bras., 39:749-755, 2004. VAUGHAN, D. A possible mechanism for humic acid action on cell elongation in root segments of Pisum sativum under aseptic conditions. Soil. Biol. Biochem., 6: 241-247, 1974. VAUGHAN, D. The stimulation of invertase development in aseptic storage tissue slices by humic acids. Soil Biol. Biochem., 1: 15-28, 1969. VAUGHAN, D.; MACDONALD, I.R. Effects of humic acids on protein synthesis and ion uptake in beet roots. J. Exp. Bot., 22: 400-410, 1971. VAUGHAN, D.; MALCOLM, R.E. Effect of humic acid on invertase syntesis in roots of higher plants Soil Biol. Biochem., 11: 247-252, 1979. VAUGHAN, D.; MALCOLM, R.E. Influence of humic substances on growth and physiological process. In: VAUGHAN, D.; MALCOLM, R.E. (Ed.). Soil organic matter and biological activity. Dordrecht, Martinus Nijhoff/Junk W- Kluwer Academic, 1985. p.37-75. VAUGHAN, D.; MALCOM, R.E.; ORD, B.G. Influence of humic substances on biochemical processes in plants. In: D. VAUGHAN and R.E. MALCOM, Editors, Soil Organic Matter and Biological Activit. Dordrecht, Martinus Nijhoff/Junk W, 1985. p.77108. VAUGHAN, D.; ORD, B.G. Soil organic matter: a perspective on it nature, extraction, turnover and role in soil fertility. In: WAUGHAN, D.; MALCOLM, R.L. (eds). Soil organic matter and biological activity Dordrecht, Martinus Nijhoff/Junk W- Kluwer Academic 1985. p.1-34. VISSER, S. A. A physico-chemical study of the properties of humic acids and their changes during humification. J. Soil Sci., 15:202-219, 1964. VISSER, S.A Surface active phenomena by humic substances of aquatic origin. Rev. Fr. Sci. Eau, 1: 285-295, 1982. VOLKOFF, B. La matiere organique des sols ferralitiques du nordeste du Brsil. Cah. ORSTON, Ser. Ped., 15: 275290, 1977. VOLKOFF, B.; ANDRADE, M. J. Caracterizao da matria orgnica de alguns solos ferralticos do Estado da Bahia:aplicao de um mtodo de fracionamento das substncias hmicas. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE CINCIA DO SOLO, 15., Campinas, SP, 1976. Anais...Campinas:Sociedade Brasileira de Cincia do Solo, 1976. p.116-126. VOLKOFF, B.; CERRI, C.C. Comparao de hmus de um solontchak, um rendizina e um solo litlico da regio semi-arida do Rio Grande do Norte. Rev. Bras. Ci. Solo, 4: 49-56, 1980. VOLKOFF, B.; CERRI, C.C. Hmus em solos da floresta amaznica na regio do rio Madeira. Rev. Bras. Ci. Solo, 5: 15-21, 1981. VOLKOFF, B.; CERRI, C.C. Lhumus des sols du Brsil: nature et relation avec lenvironnement. Cah. ORSTOM, Ser. Ped. 24: 83-95, 1988. VOLKOFF, B.; CERRI, C.C.; MELFI, A.J. Hmus e mineralogia dos horizontes superficiais de trs solos de campos de altitude dos estados de Minas Gerais, Paran e Santa Catarina. Rev. Bras. Ci. Solo, 8: 277-283, 1984. VOLKOFF, B.; FLEXOR, J.M.; SANTA-ISABEL, L.M.; SANTA-ISABEL, M. Natureza do hmus nos latossolos distrficos da Bahia. Rev. Bras. Ci. do Solo, .2: 59-63, 1978. VOLKOFF, B.; MELFI, A.J.; CERRI, C.C. Solos podzlicos e cambissolos eutroficos do alto rio Purus (Estado do Acre). Rev. Bras. Ci. Solo, 13: 363-372, 1989. WADT, P.G.S. Movimentao de ctions em latossolo vermelho-amarelo, lico, incubados com carbonato e
308

sulfato de clcio, isolados ou misturados. Itagua, Departamento de Solos, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, 1991, 174 p. (Tese de Mestrado). WAKSMAN, S.A. Humus, 2nd ed. Bailliere, Tindall & Cox. London, UK, 1938. WALLERIUS, J.G. De Humo. Agriculturae fundamenta chemica spez. Diss. Upsala, Sweden, 1761. WALLING, C. Fentons Reagent Revisited. Accounts of Chemical Research. Vol. 8 pg 125-131. Apud 7. U.S. Environmental Protection Agency; Handbook Advanced Photochemical Oxidation Processes (EPA/625/R-98/004), Cincinnati, E.U.A., 1998, p. 2-2. WANG, Y.; LEIGH, R. A.; KAESTNER, K. H.; SZE, H. Eletrogenic H+-pumping pyrophosphatase in tonplast vesicles of oat roots. Plant Physiology 81:497-502, 1986. WERSHAW, R. L.; AIKEN, G.R. Molecular size and weight measurements of humic substances. In Humic Substances in Soil, Sediment, and Water. G.R. AIKEN, D.M. MCKNIGHT, R.L. WERSHAW, and P. MACCARTHY (eds.). New York, Wiley, 1985. pp. 477-492. WERSHAW, R.L. Application of a membrane model to the sorptive interactions of humic substances. Environ. Health Perspect., 83: 191-203, 1989. WERSHAW, R.L. Model for humus in soils and sediments. Environ. Sci. Technol., 27: 814-816,1993. WHITE, P.J. Bafilomycin A1 is a non-competitive inhibitor of the tonoplast H+-ATPase of maize coleoptiles. J. Exp. Bot., 45: 1397-1402, 1995. YAGI, R.; FERREIRA, M.E.; CRUZ, M.C.P. da.; BARBOSA, J.C. Organic matter fractions and soil fertility under the influence of liming, vermicmpost and cattle manure. Sci. Agric., 60: 549-557, 2003. YAVORSKI, B.M.; DETLAF, A.A. Prontuario de Fsica.Ed. MIR, Mosc, 1988. 150p. ZANDONADI, D. B.; CANELLAS, L.P.; FAANHA, A.R. Auxin inhibitors impair humic acids activity on plasmalema proton pumps and maize development. Planta (Submetido publicao, 2006). ZANDONADI, D.B.; RODDA, M.R.C.; MARQUES JR., R.B.; FAANHA, A.R.; CANELLAS, L.P. Bioatividade de cidos hmicos fracionados em sephadex. V Encontro Brasileiro de Substncias Hmicas, Curitiba, 2003. cdroom. p. 44-46. ZECH, W.; HAUMAIER, L.; HEMPFLING, R. Ecological aspects of soil organic matter in tropical land use. In: MaCARTHY, P.; CLAPP, C.E.; MALCOLM, R.L.; BLOOM, P.R. (eds). Humic substances in soil and crop sciences: Selected Resdings. Madison, ASA/SSSA, 1990. p.187-201, ZECH, W.; SENESI, N.; GUGGENBERGER, G.; KAISER, K.; LEHMANN, J.; MIANO, T.M. MILTNER, A.; SCHROTH, G. Factors controlling humification and mineralization of soil organic matter in the tropics. Geoderma, 79: 117-161, 1997. ZIECHMANN, W.; KESS, B. ber Elektronenzustnde einen endoxydierten Huminsure in wssriger Lsung. Geoderma, 17: 293-301, 1977. ZIGOU, K.; KIRK, P.W.W.; LESTER, J.N. Behaviour of phthalic acid esters during batch anaerobic digestion of sludge. Water Research, 23: 743-748, 1986. ZSOLNEY, A. Differentiating with fluorescence spectroscopy the source of dissolved organic matter in soils subjected to drying. Chemosphere, 38: 45-50, 1999.

309

310

311

312

313

314

315

316

317

318

319

320

321

322

323

324

325

326

327

328

329

330

331

332

333

334

335

336

337

338

339

340

341

342

343

344

345

346

347

348

349