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Eleonora
1. Reao de Antrona
O reagente da Antrona contm antranol em meio de H2SO4 concentrado. O calor liberado pela
diluio do H2SO4 suficiente para que ocorra a reao. No caso de oligo e polissacardeos, o
H2SO4 atua como catalisador de hidrlise convertendo-os a monossacardeos (hexoses e pentoses) e
tambm como agente desidratante levando formao de hidroximetilfurfural e furfural que, em
presena de Antranol, do produtos de condensao coloridos.
OH
H H H
O _ _ _
_ _ _ H C C OH
H C C +
O H O OH
OH OH
_ __
R_ _
C_ O + H2 O
O H
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promove sua decomposio a cido levulnico e cido frmico, o que redunda na formao de
produtos de condensao escuros conhecidos como humina.
Outras substncias orgnicas produzem descolorao do reagente e aparecimento de uma cor
marrom, fruto de sua decomposio.
O teste de Antrona muito sensvel e pode ser usado, quando modificado, para
quantificao de glicdios.
2. Reao de Seliwanoff
A reao feita com resorcinol em meio de HCl, quente. As cetohexoses do uma cor vermelha
que se desenvolve rapidamente; as aldohexoses correspondentes reagem mais lentamente. Durante o
tempo em que as cetohexoses so desidratadas e reagem com o resorcinol, fornecendo o produto de
condensao vermelha, as aldohexoses do apenas uma colorao rosa plida.
OH
HOH2C O OH HO2HC O
H CH2OH COH
H OH +
OH H 3 H2O OH
hidroximetilfurfural resorcinol
cetohexose
3. Reao de Bial
O reagente consiste de orcinol em meio de HCl concentrado em presena de ons Fe 3+. O furfural
proveniente da desidratao de pentoses, quando aquecido em presena do reagente de Bial, d uma
cor verde. O hidroximetilfurfural (hexoses) reage dando uma cor diferente (que vai de amarelo a
marrom).
H H CH3
HO C C OH
O +
O C
H C H H C C HO OH
O H
H
HO OH
pentose furfural orcinol
(5 metil 1, 3 dihidroxi benzeno)
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O teste de Bial foi modificado para permitir quantificar pentoses. Respondem tambm ao
teste de Bial trioses e o cido 5-cetoaldnico.
As cetoheptoses do uma cor prpura enquanto que as cetohexoses e metilpentoses
fornecem uma soluo de cor laranja onde, posteriormente, em repouso, forma-se um precipitado de
cor verde escura.
Poder Redutor
Os acares contm grupos aldedos e cetonas capazes de reduzir sais de metais pesados; desses os
mais usados so, geralmente, os sais de Cu2+.
O princpio fundamental de todos os procedimentos analticos que utilizam Cu2+ sua
dissoluo em meio alcalino, em presena de cidos orgnicos - como cido ctrico e o cido
tartrico - capazes de formar complexo.
Tambm podem ser empregados outros cidos orgnicos como EDTA, cido lctico e cido
trihidroxiglutrico, ou um cido sacrico. cidos sacricos so o produto da oxidao da carbonila
aldedica e do grupamento lcool primrio dos glicdios sendo, portanto, cidos dicarboxlicos.
A reao de formao do complexo ocorre, em geral, em meio fortemente alcalino e isto
promove profundas modificaes na estrutura do acar.
Os acares, individualmente, apresentam poder redutor diferente sobre o Cu2+; isto
significa que dois tipos de hexoses, numa mesma concentrao fornecem quantidades diferentes de
xido cuproso (produto final da reduo). De qualquer forma, os mtodos podem ser adaptados de
modo a se tornarem reprodutveis e a haver proporcionalidade entre a quantidade de Cu2O
produzido e a concentrao de glicdios presente dentro de certo limite (certa faixa).
A quantidade de ons cobre reduzida pelos diferentes glicdios funo do pH, da
temperatura, da concentrao e tipo de glicdios e do tipo de on orgnico complexante.
H diversos mtodos para determinao do teor de Cu2O, como, por exemplo, gravimetria e
colorimetria. No ltimo caso, o Cu2O formado dissolvido num excesso de reagente como
fosfomolibdato, fosfotungstato ou arsnio-molibdato, formando-se um complexo de cor azul. Este
procedimento muito adequado para verificao de glicdios em materiais biolgicos.
Dentre os testes baseados no poder redutor dos glicdios, podemos destacar os testes de
Benedict e de Barfoed modificado.
1. Teste de Benedict
O reagente consiste de uma nica soluo onde esto presentes ons de Cu2+, citrato e carbonato de
sdio. A reao complexa e influenciada por uma srie de fatores; podendo ser esquematizada
por:
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COOH COOH
H O
C
OH
H H C O
A reao feita usando-se acetato de cobre em meio de cido lctico ou de cido actico (Reagente
de Barfoed), a quente e por 30 segundos e o produto formado nesta primeira etapa posteriormente
revelado com soluo de fosfomolibdato.
S os monossacardeos daro um produto de colorao azul.
Esta diferenciao pode ser explicada pelo fato de que, em meio cido, a mutarrotao
ocorre em velocidade cerca de 4000 vezes menor do que em meio alcalino.
Dentro de um curto intervalo de tempo os monossacardeos, devido sua estrutura, tm
maior reatividade e talvez formem o enediol (um dos possveis responsveis pelo poder redutor dos
glicdios) mais fcil e rapidamente que os dissacardeos.
A adio posterior do cido fosfomolbdico leva formao de um complexo corado de cor
azul intensa.
Deve-se atentar para o fato de que o teste tambm dar positivo se a concentrao dos
dissacardeos redutores for muito maior do que a dos monossacardeos.
O amido composto de dois tipos de cadeia: a amilose e a amilopectina. Foi verificado que a
amilose capaz de formar um complexo de incluso de colorao azul com o I2. O grau de adsoro
do I2, a partir de uma soluo diluda de I2-KI, pela amilose nativa 19-20%, enquanto que a
amilopectina adsorve 0,5%. Para que a cor azul aparea necessrio que a amilose tenha no mnimo
40 resduos (unidades) de glicose.
Cadeias pequenas de amilose ou amilopectina tambm adsorvem o I2, s que necessrio
usar solues mais concentradas de I2-I-.
Essas cadeias do cores que variam entre o vermelho-marrom e o amarelo.
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Referncias:
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Anexo 1
CHO
| Legenda:
H_ C_ OH
| CHO
CH2OH
OH
D-gliceraldedo
D-eritrose D- treose
Observaes:
1) As setas indicam as relaes estereoqumicas, no as vias biossintticas.
2) A configurao em torno do C2 distingue os membros de cada par de monossacardeos.
3) As formas L correspondentes a esses 15 acares so suas imagens especulares.
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Anexo 2
CH2OH Legenda:
|
C O
| C=O
CH2OH
OH
Diidroxiacetona
D-eritrulose
D-xilulose
D-ribulose
Observao:
A configurao em torno do C 3 distingue os membros de cada par.
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Anexo 3
H O
H OH H OH
C
C OH C1 CH2OH
H-C-OH H2O 6
H-C-OH H-C-OH O
H 5 H
HO-C-H H
HO-C-H HO-C-H O 4 1
H-C-OH OH H
H-C-OH H-C-OH HO OH
H-C-OH 3 2
H-C- OH H2O H-C5 H OH
CH2OH
CH2OH CH2OH
Observao:
Quando um monossacardeo se cicliza, o carbono da carbonila, denominado carbono anomrico, torna-se um
centro quiral com duas configuraes possveis.
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Anexo 4
Dissacardeos
6CH2OH 6CH2OH
5 O 5 O
Lactos e HO H H
H H
4 1 4 1
OH H O ext remidade redu to ra
H OH H
H OH (carbono ano mrico livre)
3 2 3 2
H OH H OH
D-g alacto s e () D-g licos e ()
po nt e o s dica
- 1, 4
6CH2OH 6CH2OH
H 5 O H H
5 O
H
M altos e H H
4 1 4 1
OH H OH H ext remidade redu to ra
HO O
3 OH (carb o no anomrico livre)
2 3 2
H OH H OH
po n te os d ica
- 1, 4
6CH2OH
6CH2OH
H 5 O H HOH2C1 O H
Sacaros e H H 5 O H
4 1 2 5 H
OH H H HO 4 1
HO O CH OH OH H
3 2
3 4 6 2 ou HO
OH H 3 2
H OH
H OH
D-glico s e () -D-frutos e O
HOH2C6
p on t e os dica O
- 1, 2 5
H HO
2
H4 3 CH2OH
1
OH H
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1. MATERIAL
Solues de glicdios na concentrao de 0,1M
Suspenses:
Dextrina 0,5%
Carboximetil celulose (CMC) 0,5%
Agar(*) 0,5%
Amido 0,5%
cido poligalacturnico 0,5%
Soluo de furfural 2,3 g/mL
Soluo de cido glutmico 0,1M
Reagente de Antrona: Antrona em H2SO4 concentrado
Reagente de Bial: orcinol em HCl concentrado
Reagente de Seliwanoff: resorcinol em HCl
Reagente de Benedict: CuSO4 em meio alcalino
Reagente de Barfoed modificado: CuSO4 em meio levemente cido
Soluo de Lugol: I2 e I-
Banho termostatado a 100C
2. OBJETIVO
Caracterizar grupos de glicdios a partir de suas propriedades qumicas
3. PROCEDIMENTO
a) Teste de Antrona
A reao praticamente imediata e o teste considerado positivo se apresentar cor verde intensa.
b) Teste de Seliwanoff
(*)
Polissacardeo de estrutura no completamente estabelecida contm D-L-galactose com radicais sulfato.
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Observar: a) em que tubo(s) aparece a cor e o tempo necessrio para que isto ocorra.
b) a colorao obtida nos outros tubos.
c) Teste de Bial
d) Teste de Benedict
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Tabela de Resultados
glicose
sacarose
Antrona
amido
CMC
cido glutmico
glicose
frutose
Seliwanoff
sacarose
lactose
glicose
arabinose
Bial cido poligalacturnico
furfural
glicose
frutose
Benedict sacarose
lactose
amido
glicose
Barfoed lactose
(modificado) sacarose
amido
dextrina
Iodo CMC
agar
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