ANÁLISE QUALITATIVA DE CARBOIDRATOS

1. Objetivo Geral:
Caracterizar grupos de carboidratos a partir de suas propriedades químicas.

2. Princípio do experimento:
Propriedades Químicas dos carboidratos
Diferentemente dos aminoácidos que apresentam reações específicas baseadas
principalmente na natureza química de seu radical, os carboidratos apresentam
estruturas muito parecidas entre si o que os torna quase impossíveis de identificá-los.
Neste caso o que se faz é caracterizar grupos de carboidratos utilizando suas
propriedades químicas comuns.
As reações mais utilizadas na prática estão baseadas em 2 dessas propriedades:

1) Desidratação de carboidratos por ácidos fortes

Hexoses e pentoses colocadas nestas condições são desidratadas,
respectivamente a hidroximetilfurfural e furfural; estes compostos são capazes de se
condensar com substâncias fenólicas, com aminas aromáticas, tiocompostos, uréia. Os
complexos formados são, algumas vezes, coloridos e utilizados para a caracterização
de certos grupos glicídicos. Neste caso, situam-se:

A) Reação de antrona - Teste geral de glicídios

O reagente de antrona contém antranol em meio de H2SO4 concentrado. O calor
liberado pela diluição do H2SO4 é suficiente para que a reação ocorra. No caso de oligo
e polissacarídeos, o ácido atua como catalisador de hidrólise convertendo-se a
monossacarídeos (hexoses e pentoses) e também como agente desidratante levando a
formação de hidroximetilfurfural e furfural que, em presença de antranol, dão produtos
de condensação coloridos.
 H O OH
H C C + H H
O H
OH H C C OH
O
hidroximetilfurfural antranol OH OH

H H
Complexo H C C OH
verde azulado OH
O
OH

O hidroximetilfurfural proveniente da desidratação de hexoses produz uma

substância de coloração verde azulada relativamente estável enquanto que o furfural
proveniente da desidratação de pentoses fornece um produto de cor análoga, mas que
em alguns minutos se torna vermelho-amarelada ou rubi.
O teste de antrona é muito sensível e pode ser usado, quando modificado, para a
quantificação de glicídios.

B) Reação de Seliwanoff - Teste de diferenciação entre aldoses e cetoses.

A reação é feita com resorcinol em meio de HCl à quente. As cetohexoses dão
um produto de coloração vermelha que se desenvolve rapidamente; as aldohexoses
correspondentes reagem mais lentamente. Durante o tempo em que cetohexoses são
desidratadas e reagem com o resorcinol fornecendo o produto, as aldohexoses
fornecem apenas um produto levemente rosa.

OH
HOH2C O H O
HOH2C

H OH H CH2OH COH
+
H2O
OH
H OH H H
hidroximetilfurfural resorcinol
cetohexose

Produto de coloração
vermelha

C) Reação de Bial - Teste para a identificação de pentoses e certos ácidos urônicos

(galacturônico, glicurônico e outros) que se decompõem durante o aquecimento
em presença de H+, formando pentoses.
 O reagente consiste de orcinol em meio de HCl concentrado e em presença de
íons Fe+3. O furfural proveniente da desidratação de pentoses quando aquecido em
presença do reagente de Bial fornece uma cor verde. O hidroximetilfurfural (hexoses)
reage formando um produto diferente que oscila entre amarelo e marrom.

H H H O CH3
OH C C OH
COH
H C HH C COH +
OH OH 2H2O HO OH
H H
pentose furfural orcinol

Produto de coloração
verde

O teste de Bial foi modificado a permitir quantificar pentoses, trioses e o ácido 5-

cetoaldônico. As cetoheptoses fornecem produtos de coloração púrpura, as
cetohexoses e metilpentoses formam inicialmente um produto de cor laranja que em
repouso, posteriormente, precipita apresentando uma cor verde.

2) Poder redutor
Os açucares contêm grupos aldeídos e cetonas capazes de reduzir sais de metais
pesados; desses os sais mais usados são dos de Cu+2.
O princípio fundamental de todos os procedimentos analíticos que utilizam Cu +2 é
sua dissolução em meio alcalino em presença de ácidos orgânicos (como ácido cítrico
e o ácido tartárico) capazes de formarem complexos. Também podem ser empregados
outros ácidos orgânicos como EDTA, ácido láctico, ácido trihidroxiglutárico ou ácido
sacárico.
A reação de formação do complexo ocorre em geral em meio fortemente alcalino
e isto promove profundas modificações na estrutura do açúcar. Os açucares apresentam
um poder redutor diferente sobre o íon Cu+2. Isso significa que dois tipos de hexoses em
uma mesma concentração fornecem quantidades diferentes de óxido cuproso (produto
final da reação). A quantidade de íons cobre reduzida pelos diferentes glicídios é função
do pH, da temperatura, da concentração e dos tipos de glicídios e íons orgânicos
complexantes.
Há diversos métodos para a determinação de teor de Cu2O, os mais utilizados para
a determinação em material biológico, são os colorimétricos que utilizam o Cu2O
dissolvido em excesso de reagentes como fosfomolibdato, fosfotungstato ou arsênio-
 molibdato, formando um complexo azul. Dentre os testes baseados em poder redutor
de glicídio destacam-se:
A) Teste de Benedict - Teste geral de glicídio redutores.
O reagente consiste de uma única solução onde estão presentes íons Cu+2, citrato
e carbonato de sódio. A reação é complexa e influenciada por uma série de fatores
podendo ser esquematizada por:

Cu+2 + glicídio Composto oxidado + Cu2O

(precipitado vermelho)

B) Teste de Barfoed modificado - Teste de diferenciação entre monossacarídeos

e dissacarídeos redutores.
A reação é feita usando-se acetato de cobre em meio de ácido láctico (reagente
de Barfoed) a quente e por 30 segundos; o produto formado nesta primeira etapa é
posteriormente revelado com solução de fosfomolibdato. Só monossacarídeos formam
produto de cor azul. A adição de ácido fosfomolíbdico leva a formação de um complexo
corado de azul intenso.

Cu+2 + glicídio Composto oxidado + Cu2O

H3PO4 . 12 MoO3

Complexo
de cor azul
I. TESTE DE BENEDICT:
1. Objetivo:
Identificar se amostra apresenta açúcar redutor (monossacarídeos e
dissacarídeos) em sua composição.

2. Procedimento:
Tubos H2 O Amostras Reagente de Resultados
(mL) (mL) Benedict
(mL)
B 0,2 ----- 1,0
glicose 0,1 M ----- 0,2 1,0
celulose 0,1 M ----- 0,2 1,0
Legenda: B (Branco – ÁGUA);

• Aquecer em banho fervente (100°C) por 5 minutos;

 Resultados: No teste é considerado positivo se houver formação de precipitado
VERMELHO.

II. TESTE DE SELLIWANOFF

1. Objetivo:
Identificar se a amostra é uma aldose ou uma cetose. A reação é positiva
para cetoses. Aldoses também reagem, no entanto, de forma muito mais lenta do
que as cetoses.

2. Procedimento:
Tubos H2 O Amostras Reagente de Resultados
(mL) (mL) Selliwanoff
(mL)
B 0,2 ----- 1,0

frutose 0,1 M ----- 0,2 1,0

arabinose 0,1 M ----- 0,2 1,0
Legenda: B (Branco – ÁGUA);

• Aquecer em banho fervente (100°C) por 3 minutos

Resultados: No teste é considerado positivo se apresentar cor VERMELHO .

III. TESTE DO IODO

1. Objetivo:
O objetivo do teste é permitir que o aluno seja capaz de identificar uma amostra
contendo o polissacarídeo amido.
2. Procedimento:
H2 O Amostras LUGOL
Tubos (mL) (mL) (gotas) Resultados
B 2,0 ----- 1,0
amido 1% ----- 2,0 1,0
celulose 1% ----- 2,0 1,0
Legenda: B (Branco – ÁGUA);

Resultados: No teste é considerado positivo se apresentar cor AZUL

ESCURO ou ROXO.
 IV. TESTE DE BARFOED MODIFICADO:
1. Objetivo:
Diferenciar monossacarídeos redutores de dissacarídeos redutores.

2. Procedimento:
Tubos H2 O Amostras Reagente Aquecer Reagente
(mL) (mL) de Barfoed os tubos Fosfomobdílico Resultados
(mL) em banho (mL)
B 0,2 ----- 1,0 fervente 0,5
dextrose 0,1 M ----- 0,2 1,0 (100oC) 0,5
lactose 0,1 M ----- 0,2 1,0 por 30 0,5
arabinose 0,1 M ------ 0,2 1,0 segundos 0,5
Legenda: B (Branco – ÁGUA);

No teste é considerado positivo (monossacarídeos) se apresentar cor

azul escura.