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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARAN

CENTRO DE ENGENHARIAS E CINCIAS EXATAS

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA

CURSO DE ENGENHARIA QUMICA

CONSTRUO DE EQUIPAMENTOS DE FERMENTAO

Claudio R. de Brito Junior

Gabriel Sperotto

Marciano B. Uliana

Toledo PR

2017
UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARAN

CENTRO DE ENGENHARIAS E CINCIAS EXATAS

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA

CURSO DE ENGENHARIA QUMICA

CONSTRUO DE EQUIPAMENTOS DE FERMENTAO

Trabalho acadmico apresentado da


disciplina de Engenharia Bioqumica no
curso de Engenharia Qumica
Universidade Estadual do Oeste do
Paran - Campus Toledo, ministrada pelo
Professor Dr. Srgio Luiz de Lucena

Toledo PR

2017
RESUMO

Os processos fermentativos so realizados pelo ser humano desde os


tempos pr-histricos, com a produo no controlada de produtos como
bebidas alcolicas e alimentos fermentados. Porm, foi apenas no incio do
sculo XX em que se deu o incio desenvolvimento de biorreatores para a
fermentao, em que foram desenvolvido os primeiros processos fermentativos
controlados. A construo de fermentadores envolve aspectos como tipo de
reator, capacidade, e material de construo, sendo esses de grande
importncia uma vez que so decisivos na obteno de processos
fermentativos saudveis e de alto rendimento. Alm disso, facilidade em
manter a limpeza e condies estreis, na tubulao equipamentos e
fermentadores tambm importante, uma vez que ao facilitar esse processo, a
produtividade pode ser maximizada. Por fim a construo adequada de um
sistema de fermentao permite uma vida til maior deste alm de uma
economia com possveis gastos desnecessrios.
SUMRIO

1. INTRODUO ............................................................................................. 5
1.1 CARACTERSTICAS BSICAS DE REATORES PARA CULTIVO DE
BACTRIAS OU CLULAS DE ANIMAIS ...................................................... 6
1.1.1. Primeiros aspectos do projeto ........................................................ 7
1.1.2. Fluxograma do processo ................................................................ 7
1.1.3. Desenho mecnico ......................................................................... 8
1.2. CONSTRUO DO FERMENTADOR .................................................. 9
1.2.1. Vedaes asspticas .................................................................... 10
1.2.2. Detalhes construtivos ................................................................... 11
1.3. CULTIVO DE CLULAS ANIMAIS ...................................................... 15
1.4. OBTENO E MANUTENO DAS CONDIES DE
ESTERILIDADE E BIOSSEGURANA......................................................... 16
1.5. ESTERILIDADE DO FERMENTADOR ............................................... 17
1.6. ESTERILIZAO DO SUPRIMENTO DE AR ..................................... 18
1.7. ESTERILIZAO DOS GASES DE EXAUSTO ............................... 19
1.8. VLVULAS E PURGADORES DE VAPOR ........................................ 19
1.9. OUTROS TIPOS DE REATORES....................................................... 22
2. CONCLUSO ............................................................................................ 26
3. REFERNCIAS ......................................................................................... 27
1. INTRODUO
Os primeiros produtos obtidos por fermentao, como o vinho, cerveja,
queijos, iogurte, vinagre e chucrute se processavam satisfatoriamente, mesmo
sob condies precrias de assepsia. A natureza especfica do substrato
empregado, o crescimento vigoroso do microrganismo utilizado, ou ainda a
ao inibidora do produto final, contriburam, separadamente ou em conjunto,
para o bom andamento dos processos fermentativos. A passagem desses
processos artesanais de fermentao para escalas comerciais mais evoludas
aportou poucos melhoramentos ao desenvolvimento dos equipamentos
utilizados.
Um primeiro passo de melhoramento e sofisticao dos processos
fermentativos ocorreu com a introduo de culturas puras para a produo de
cerveja. Porm, foi na Inglaterra entre 1914 a 1918, com CHAIM WEIZMANN e
colaboradores, que desenvolvendo o processo de fermentao submersa
anaerbia para a produo de acetona-butanol, em que os conceitos de
fermentao controlada se consolidaram. Este processo, foi considerado o
marco inicial para a primeira fermentao industrial em grande escala,
utilizando-se de condies totais de assepsia.
Ainda hoje, com todos os avanos, melhoramentos e sofisticao, a
infeco fgica de fermentaes de antibiticos pode apresentar srios
problemas, que so eliminados unicamente com a seleo e introduo de
cepas fago resistentes. A construo de grandes reatores em ao-carbono,
com fundo e tampa torriesfricos esterilizveis com vapor sob presso, com
tubulaes tambm esterilizveis para a adio de inculo, antiespumante,
coleta de amostras, descarga e sada dos gases formados durante a
fermentao, foram passos de gigante.
Em setembro de 1943 foi iniciada, em Terre Haute, Estados Unidos, a
primeira planta industrial de fermentao de penicilina com fermentadores de
ao-carbono, com 54 m3 dotados de sistema de agitao, aerao e outros
aperfeioamentos necessrios conduo do novo processo fermentativo.
Nas dcadas subsequentes, muita ateno foi dedicada a problemas
relacionados com a substituio dos processos de batelada por batelada
alimentada e processos contnuos, utilizao de novos substratos como
hidrocarbonetos e estudos de novas configuraes dos reatores, agitadores,
filtrao do ar, controle dos processos.
Com a demanda explosiva do mercado de produtos biotecnolgicos,
advindo dos resultados prticos do emprego das tecnologias do DNA
recombinante, influenciou-se novamente a concepo da construo dos
equipamentos de fermentao, principalmente no que diz respeito ao conceito
de esterilidade e conteno ambiental e o emprego de clulas animais ou
humanos para a produo de biofrmacos.

1.1 CARACTERSTICAS BSICAS DE REATORES PARA CULTIVO DE


BACTRIAS OU CLULAS DE ANIMAIS
Para desenvolver o processo de fermentao, uma srie de parmetros
deve ser considerada e incorporada ao reator durante a fase de projeto e
construo, de modo que este possa prover as condies adequadas para o
crescimento do microrganismo. Os seguintes pontos devem ser observados:
O reator deve ser capaz de manter-se estril por muitos dias, trabalhar
sem problemas por longos perodos e satisfazer todas as exigncias
legislativas de conteno ambiental;
As exigncias metablicas dos microrganismos, quanto aerao e
agitao, devem ser plenamente satisfeitas, mantendo, porm, a
integridade fsica dos mesmos;
A potncia absorvida deve ser a menor possvel;
Um eficiente sistema de controle de temperatura deve ser disponvel;
Um sistema de controle de pH deve ser disponvel;
Perdas por evaporao devem ser mantidas ao mnimo;
Eficiente sistema de controle dos gases de sada do fermentador deve
estar disponvel;
O reator deve exigir o mnimo em mo-de-obra para sua operao,
limpeza e manuteno;
O reator deve ter as superfcies internas polidas e todas as suas
conexes, na medida do possvel, devem ser soldadas e no flangeadas
ou rosqueadas.
Um grande nmero de diferentes concepes de reatores tem sido
descritos na literatura, contudo somente algumas tm se mostrado satisfatrias
e encontraram aplicao industrial. O tipo de reator mais difundido baseado
no modelo de tanque cilndrico vertical, agitado mecanicamente ou no, provido
de sistema de aquecimento e resfriamento e demais controles necessrios ao
processo. Entre as novas configuraes de reatores, duas em particular - o air
lift e o tower fermenter - tm encontrado aplicaes comerciais.
No presente trabalho vamos nos restringir mais especificamente
discusso das caractersticas construtivas de fermentadores clssicos aerados,
agitados e utilizados no cultivo de bactrias ou fungos.
A introduo da penicilina durante a Segunda Guerra Mundial iniciou
uma corrida para a descoberta de novos antibiticos, e evidenciou nitidamente
a necessidade de intensos trabalhos integrados de microbiologistas,
geneticistas, bioqumicos e engenheiros para completar, com sucesso, as
etapas necessrias para culminar no planejamento, "layout" e construo das
plantas de fermentao e dos equipamentos.

1.1.1. Primeiros aspectos do projeto


Esta etapa representa a coleta de todos os dados relativos ao projeto,
englobando dados referentes ao processo biolgico a ser desenvolvido, como
tambm planta a ser construda. Dados do processo englobam informaes
sobre a cintica do processo, balanos trmicos das reaes, condies de
assepsia necessrias, propriedades fisiolgicas do(s) microrganismo(s),
necessidade de matrias-primas e suas caractersticas.
Todas essas informaes e outras pertinentes ao processo fazem parte
do "know-how" acumulado durante a fase experimental desenvolvida em nvel
de laboratrio e planta piloto. Quanto aos dados relacionados com o projeto da
nova planta, estes se relacionam fundamentalmente com a sua localizao,
capacidade instalada prevista, disponibilidade ou no de gua, vapor,
eletricidade, volume e caractersticas dos efluentes e tratamento dos mesmos.

1.1.2. Fluxograma do processo


A elaborao de um fluxograma detalhado do processo, baseado nos
dados acumulados e estabelecidos na elaborao dos critrios primrios,
fundamental. No fluxograma, todos os equipamentos necessrios ao processo
so lanados em escala e sua exata localizao na planta. Um diagrama das
tubulaes e instrumentao elaborado, nele sendo includas e detalhadas
todas as linhas de processo, vlvulas, dimenses, tipos, bitolas, materiais de
construo e caractersticas. Enfim, todas as informaes necessrias ao
"procurement" devem estar disponveis.

1.1.3. Desenho mecnico


O desenho mecnico do projeto, que leva em base os dados e
informaes levantados dos critrios primrios, vai detalhar as especificaes
de todo o projeto, tais como:
Clculo da presso dos reatores;
Clculo dos trocadores de calor;
Clculo das estruturas metlicas;
Anlise da expanso trmica das tubulaes;
Clculo dos agitadores;
Especificao das tubulaes;
Especificao dos acabamentos internos dos reatores;
Especificao dos critrios de assepsia e esterilidade;
Especificao dos materiais de construo;
Especificao e dimensionamento da rede eltrica;

Com essas informaes e clculos, so elaborados os desenhos


definitivos com os diversos cortes e elevaes: Layout da planta, dos
equipamentos, das tubulaes, de guas pluviais, esgotos.
Logo, fica claro que os bioprocessos so semelhantes aos processos
qumicos usuais, no que diz respeito elaborao dos projetos, salvo pela
caracterstica biolgica dos mesmos, que deve ser levada em considerao em
todas as etapas do planejamento, principalmente nos itens: assepsia,
esterilidade e limpeza.
A manuteno da esterilidade depende no somente de um acurado
processo de esterilizao, como tambm do correto planejamento e execuo
do projeto. Comumente a causa do desenvolvimento de contaminaes pode
ser encontrada em falhas no projeto construtivo, tanto do fermentador como
dos equipamentos auxiliares, bem como das tubulaes e vlvulas utilizadas.

1.2. CONSTRUO DO FERMENTADOR

Para a construo dos equipamentos, a escolha do material de grande


importncia, e deve ser feita levando em considerao as condies
particulares s quais os materiais sero expostos. Nas indstrias de
fermentao as variaes de temperatura e presso utilizadas so bastante
limitadas e o pH mantido geralmente prximo ao neutro. Ao contrrio da
indstria qumica, as exigncias de operaes asspticas so fundamentais e
condicionam profundamente a escolha dos materiais de construo.
Reatores piloto e industriais, onde os volumes podem variar de 50L a
500m3 ou mais, so atualmente construdos em ao inoxidvel 316. Na
construo desses reatores os materiais utilizados devem ser avaliados em
funo de sua capacidade de resistir s presses de esterilizao, resistncia
corroso, toxicidade dos produtos resultantes de uma eventual corroso e
custo do material.
Na produo de cido ctrico, a pH 1 ou pH 2, pode ocorrer corroso, e
os metais pesados liberados podem interferir negativamente no processo. Esse
problema mais acentuado em reatores menores (1000 L) devido
relativamente elevada relao entre rea exposta/volume. O emprego de inox
317 contendo 3-4% de molibdnio aconselhvel nestes casos
Em fermentaes que utilizam clulas animais, a eliminao de uma
possvel liberao de metais pesados, devido corroso dos metais utilizados,
extremamente importante, pois pode ser a causa de insuspeitveis
problemas. A integridade das superfcies metlicas deve ser garantida a todo
custo, pois a corroso de aos inoxidveis tem causado acmulo de nquel e
cromo em produtos como o plasma sanguneo.
Atualmente o material mais utilizado na construo de reatores de
fermentao sem dvida o AISI 316, que possui uma boa resistncia ao
ataque pelos ons cloreto, presentes em praticamente todos os meios de
fermentao. O ao AISI 316 adequado para solues de cido sulfrico at
20% temperatura ambiente. Para solues de cido clordrico, recipientes de
plstico, fibra de vidro ou reatores vitrificados so recomendados.

1.2.1. Vedaes asspticas


Os vrios processos fermentativos, utilizados pelas indstrias
biotecnolgicas, at recentemente, foram desenvolvidos tendo em vista mais a
preveno da contaminao dos processos pelo meio ambiente do que vice-
versa. Contudo, muitos processos biotecnolgicos tm o potencial de gerar
aerossis, que, contendo microrganismos ou produtos de origem
microbiolgica, podem representar uma fonte de perigo em potencial, tanto
para os operadores como para o meio ambiente.
Aerossis podem se formar durante o procedimento de inoculao,
amostragem, presso em cpula, sada dos gases, selos mecnicos
defeituosos, guarnies, flanges, conexes, transferncia de lquidos,
operaes de recuperao do produto fermentado. Para garantir a manuteno
da esterilidade e das condies de conteno ambiental, ateno especial deve
ser dada construo e ao tipo de material de vedao empregado na juno
entre as diversas partes, que pode ser entre vidro/vidro, vidro/metal ou
metal/metal.
As especificaes do material utilizado nas juntas de vedao so
extremamente importantes, pois os selos estticos (guarnies) formam
frequentemente a nica barreira de que se dispe para evitar a perda do
produto em processamento e, por consequncia, tambm a quebra das
condies de conteno ambiental. Vedaes estticas de vidro e metal,
largamente utilizadas em fermentadores de bancada, onde o corpo do reator
de vidro e a tampa superior e/ ou inferior de metal podem ser de vrios tipos.
Para vedaes metal com metal, a utilizao de anis de vedao ("O" rng)
sempre a mais indicada, podendo estes serem simples ou duplos, e neste caso
ainda providos de um selo interno de vapor.
1.2.2. Detalhes construtivos
A espessura do material de construo do corpo do reator varia de
acordo com o seu dimensionamento. Para reatores de 30-40 m3 de
capacidade, normalmente chapas de 7 mm de espessura so utilizadas para o
corpo cilndrico e de 10 mm para as calotas hemisfricas superior e inferior.
A colocao de chicanas, quebra-vrtice ou "baffles" em fermentadores
agitados mecanicamente fundamental, para aumentar a turbulncia e, por
conseguinte, uma melhor oxigenao do meio. Comumente so utilizadas 4
chicanas equidistantes uma das outras. A largura das chicanas normalmente
de 10% do dimetro do reator. Especial ateno deve ser dada fixao das
chicanas ao corpo do fermentador, devendo-se deixar entre este e a chicana
um espao de 1 a 2 em, a fim de evitar a formao de zonas de estagnao.
De preferncia as chicanas no devem ser soldadas diretamente ao corpo do
fermentador, principalmente se tratando de grandes reatores industriais
agitados mecanicamente e fermentaes de caractersticas reolgicas no
newtonianas, mas aparafusadas a suportes reforados, soldados parede do
fermentador, conferindo uma maior resistncia a deformaes e uma maior
facilidade na manuteno.
As camisas e as serpentinas, podem ser internas ou externas, neste
caso sob a forma de semitubos, tm a finalidade de fornecer calor durante a
esterilizao como tambm retirar calor durante a fase de resfriamento e
manuteno da temperatura de fermentao. As camisas so cada vez menos
utilizadas na construo de reatores, pela sua reduzida eficincia na
transferncia de calor pela circulao irregular do vapor ou da gua de
refrigerao nas mesmas. As serpentinas internas permitem uma boa troca
trmica e eficiente circulao do fluido em alta velocidade, tm porm alguns
inconvenientes, como:
a) reduzem significativamente o volume til do fermentador;
b) dificultam a sua limpeza interna;
c) dificultam a mistura eficiente do meio em fermentadores agitados
mecanicamente;
d) podem ser um foco adicional de contaminao por defeito nas soldas
("pitting"), s vezes difceis de detectar.
Atualmente cada vez mais difundido o emprego de serpentinas
externas, feitas de semitubos helicoidais soldados externamente parede do
reator. Essa soluo apresenta uma srie de vantagens:
a) permite o emprego de semi tubos construdos em AISI 304;
b) elimina o perigo de contaminao;
c) permite a construo das serpentinas em sees, importante quando
o fermentador deve ser esterilizado com volume abaixo da capacidade nominal;
evita- se deste modo que ingredientes venham a ser queimados, reduzindo
consideravelmente as incrustaes na parte superior do reator.
O suprimento de ar aos fermentadores feito atravs de difusores ou
dispersares de ar de vrios tipos, sendo os de tubo aberto simples, em forma
de Y ou anel de distribuio, colocados sempre abaixo da ltima turbina. Os
difusores de ar em anel apresentam o inconveniente de exigir uma manuteno
constante, pois podem entupir facilmente quando se utilizam meios ricos em
materiais em suspenso como farelos proteicos (amendoim, soja, algodo), ou
amilceos (fub, farelo, arroz).
Para reduzir este risco e facilitar a limpeza peridica do difusor eles so
construdos em segmentos flangeados e dotados de furos maiores na parte
inferior do anel para facilitar a sada de material em suspenso. O emprego de
difusores de material poroso em fermentaes industriais descartado, devido
obstruo dos poros tanto pelo meio de cultivo como pelo crescimento do
prprio microrganismo.
Os difusores de tubo aberto so os mais frequentemente utilizados em
fermentadores agitados. Nesses casos, o tubo difusor deve ser preferivelmente
afixado centralmente sob a turbina e o mais distante possvel desta, a fim de
reduzir o perigo de inundar a turbina em uma grande bolha de ar com a
consequente queda na eficincia da transferncia de oxignio.
As turbinas ou agitadores em reatores de fermentao possuem
mltiplas funes: homogeneizao do meio, mistura da fase gasosa e aquosa,
disperso do ar, transferncia de oxignio e calor, suspenso de slidos; enfim,
manter as condies ambientais no meio de fermentao o mais uniforme
possvel.
A funo principal, que afeta o desenho do reator destinado a
fermentaes aerbias, a eficincia com que o complexo agitadores/difusores
conseguem transferir o oxignio aos microrganismos.
Para obter as elevadas transferncias de oxignio necessrias,
diferentes tipos de turbinas tm sido utilizados. Desses, a turbina de disco com
seis ps planas de Rushton o tipo mais frequentemente utilizado. A relao
dimetro da turbina e dimetro do reator (D /T) um fator importante, e que
determina a eficincia da agitao e, por conseguinte, tambm da aerao.
Turbinas de Rushton, com dimetro maior ao dado pela relao anterior de 1/3,
promovem uma agitao mais eficiente, requerendo, porm, um consumo de
energia mais elevado.
Em reatores piloto ou industriais, normalmente a partir de volumes de 1
m3, h a necessidade de utilizar duas ou mais turbinas. Nesses casos a turbina
mais prxima ao fundo do reator fica a uma distncia deste de 1/3 a lh vez o
dimetro do fermentador. Nos casos de turbinas mltiplas, o espaamento
entre elas importante para obter o mximo efeito de bombeamento e
transferncia de oxignio, com um mnimo de potncia consumida.
So trs as caractersticas importantes para uma boa performance de
uma turbina operando em fermentaes aerbias: Tempo de mistura, disperso
de altos volumes de ar e transferncia de calor
O tempo de mistura o tempo necessrio para obter uma perfeita
homogeneizao do meio. Esse tempo aumenta progressivamente, medida
que aumenta o tamanho do reator e pode chegar a algumas dezenas de
segundos em reatores de grande volume (p.ex., 100 m3). O aumento do tempo
de mistura resulta em variaes na concentrao de O2 dissolvido, pH e
nutrientes em fermentaes com batelada alimentada. A no homogeneidade
do meio de fermentao pode afetar seriamente a performance do processo
fermentativo.
Quando uma turbina no consegue mais dispersar eficientemente o
volume de ar que recebe, diz-se que ela est inundada ("flooded"), passando a
trabalhar dentro de uma grande bolha de ar. A agitao torna-se
essencialmente ineficiente. Uma especificao tpica para o projeto da turbina
ela ser capaz de dispersar eficientemente volumes de ar idnticos aos
utilizados em escala de laboratrio.
Para alcanar esses valores de disperso, durante a ampliao de
escala seria necessrio um aumento progressivo da potncia instalada por
unidade de volume, o que implicaria tambm em aumento adequado da
agitao.
Mantendo constante a performance, a evoluo da temperatura de uma
fermentao aumenta proporcionalmente ao volume do fermentado. Assim,
com o aumento dos volumes, a manuteno da temperatura dentro dos limites
do processo necessita de um adequado fluxo do meio junto s superfcies de
refrigerao, que depende novamente de uma agitao que satisfaa esta
exigncia.
Convm lembrar que em uma fermentao a agitao constitui uma
parte importante do custo de produo industrial. Ela influi diretamente no
dimensionamento do motor, sistema de acoplamento, tipo e construo das
turbinas, fiao eltrica, dimensionamento da subestao, suprimento de gua
de refrigerao do reator.
Com o aumento no dimensionamento do motor, todas essas variveis e
os seus custos tambm aumentam. Por essa razo, atualmente ateno
especial dada eficincia do consumo de energia e transferncia de massa
do sistema de agitao dos reatores.
A recente introduo dos novos desenhos de agitadores, permitindo uma
melhor homogeneizao, uma maior transferncia de massa com baixa
potncia, absorvida principalmente em fermentaes viscosas, poder trazer
novas perspectivas de soluo ao difcil problema de promover urna eficiente
agitao em reatores industriais, com sensvel reduo no consumo de
energia.
A vedao adequada da entrada do eixo do fermentador um dos
problemas maiores e de mais difcil soluo no projeto de um fermentador, que
deve operar por longos perodos sob condies de completa assepsia. Quanto
posio de entrada do agitador, esta pode ser pela parte superior, a mais
frequentemente utilizada, ou pelo fundo do fermentador, escolha esta que pode
ser vantajosa quando h necessidade de maior espao livre na tampa superior.
A entrada pelo fundo permite o uso de eixos mais curtos, dispensando guia e
menos sujeitos a vibraes, mesmo em alta velocidade.
A entrada da haste do agitador, pela parte superior do fermentador,
necessita da instalao de urna guia do eixo na parte inferior do reator, para
evitar vibraes do mesmo. A ponta do eixo est sujeita a fortes desgastes,
que sero tanto maiores quanto maior for a concentrao de slidos em
suspenso. Para facilitar a manuteno do eixo, conveniente encamisar a
sua extremidade e adotar a bucha de teflon de ranhuras, para facilitar a
eliminao de material abrasivo em suspenso do meio. Os tipos de vedao
mais utilizados para eixos de agitadores so: de gaxeta, de selo mecnico e de
acoplamento magntico.

1.3. CULTIVO DE CLULAS ANIMAIS

O interesse no cultivo de clulas animais se deve necessidade de


produo em escala ampliada de anticorpos monoclonais, vacinas e outros
frmacos de difcil obteno por vias que no a fermentativa. Existe uma
diferena muito grande entre uma fermentao utilizando clulas animais e
uma utilizando bactrias ou fungos como microrganismo produtor:
a) clulas animais so nutricionalmente mais exigentes
b) clulas animais, sendo destitudas de parede celular, so mais
sensveis ao cisalhamento;
c) o seu tempo de duplicao longo, geralmente de 12 a 48 h;
d) a densidade celular obtida baixa, da ordem de 106-107 clulas por
mL.
Quanto ao modo de crescer, o que naturalmente condiciona o tipo de
reator e tecnologia a ser utilizada, as clulas animais podem ser diferenciadas
em:
a) clulas que necessitem de um suporte para o seu desenvolvimento;
b) clulas capazes de crescer em suspenso, independentes de suporte.
Um dos maiores problemas do cultivo de clulas animais e/ ou vegetais
reside na sua extrema sensibilidade frente ao cisalhamento, causado
fundamentalmente pela agitao. A sensibilidade das clulas ao cisalhamento
pode ser tal que a prpria introduo de gs (ar ou mistura de gases), devido
ao borbulhamento pode danificar as mesmas. O emprego de aerao
superficial elimina esse inconveniente, porm a sua eficincia quanto
transferncia de oxignio baixa.
Qualquer que seja o tipo de clulas empregadas, dependentes de
suporte ou no, h sempre a necessidade de se manter o meio em agitao, a
fim de garantir a homogeneizao do mesmo tanto quanto aos nutrientes e aos
gases, como tambm para a manuteno uniforme da temperatura. Os
agitadores utilizados no cultivo de clulas animais se caracterizam pela ampla
superfcie de contato, assegurando uma adequada homogeneizao e
manuteno do material de suporte em suspenso mesmo em baixa rotao.
O meio utilizado em cultivo de clulas animais, contendo geralmente
considervel proporo de soro bovino, propenso formao de espuma.
Para reduzir ao mximo a formao de espuma, importante que o sistema de
agitao, tipo das turbinas e sistemas de difuso do ar sejam bem projetadas.
O emprego de sistemas mecnicos de destruio da espuma no satisfatrio,
pois destri tambm inevitavelmente as clulas presentes na espuma. O
emprego de antiespumante tem de ser cuidadosamente avaliado, pois pode
apresentar srios efeitos txicos ou ento causar problemas na purificao
posterior do produto.
Clulas animais so mais sensveis a contaminantes qumicos que
bactrias ou fungos. A presena de metais pesados, em especial, deve ser
evitada, pois j diminutos quantitativos podem afetar significativamente seu
desenvolvimento. Por essas razes, a gua, vapor, gases e nutrientes que
entram na composio do meio devem ser de alto grau de pureza.
Igual importncia deve ser dada aos recipientes de estocagem dos
ingredientes lquidos e ao sistema de distribuio, a fim de minimizar a
possibilidade de liberao de metais pesados. Contato do meio com peas de
cobre, bronze, ao inox de qualidade inferior, ao carbono, s vezes presentes
em vlvulas, serpentinas de aquecimento pode ser fonte de contaminao por
metais pesados e, portanto, eles no devem ser utilizados na construo de
reatores. Nunca demais lembrar que alguns tipos de ao inoxidvel, sob
certas condies, liberam para o meio metais pesados.

1.4. OBTENO E MANUTENO DAS CONDIES DE ESTERILIDADE


E BIOSSEGURANA
Para que um processo fermentativo possa operar sob as condies de
assepsia e segurana biolgica exigidas, no basta que a ateno seja dirigida
exclusivamente ao projeto de construo do reator e seu sistema de aerao e
agitao. Um processo fermentativo, para ser completo, necessita uma srie de
equipamentos adicionais tanto a montante como a jusante, tais como: vlvulas,
linhas de transferncia de inculo, nutrientes, antiespuma, amostragem e
sondas diversas que devem ser projetados e construdos de tal modo que
ofeream as condies de segurana e esterilidade necessrias ao processo e
aos operadores. Para manter as condies de assepsia e conteno ambiental,
as seguintes sequncias de operaes so necessrias durante um processo
fermentativo.
1) Esterilizao do fermentador;
2) Esterilizao do suprimento de ar e dos gases de exausto;
3) Aerao e agitao;
4) Adio de inculo, nutrientes e outros suprimentos;
5) Amostragem;
6) Controle de espuma;
7) Monitoramento e controle de parmetros.
No projeto de uma planta de fermentao importante ter claramente
definido o seu propsito, isto , ele se destina produo de um produto
especfico ou dever ser. multipropsito e, portanto, flexvel e adaptado para
executar com segurana diversos processos, inclusive com microrganismos
recombinantes.

1.5. ESTERILIDADE DO FERMENTADOR

O projeto construtivo do fermentador deve ser tal que permita a


esterilizao do mesmo por admisso direta de vapor, sob presso por um
tempo suficientemente longo. A esterilizao pode ser feita juntamente com o
meio, ou este pode ser esterilizado em separado por filtrao e adicionado
assepticamente ao fermentador esterilizado vazio, com vapor. Todo
fermentador possui um nmero maior ou menor de entradas e sadas, que so
uma fonte em potencial de contaminaes quando no esterilizadas
adequadamente e quando ocorrerem falhas de projeto. Como norma, todas as
tubulaes devem ser mantidas o mais simples possvel, com perfeita
drenagem, de modo a evitar possveis acmulos de materiais e pontos cegos
onde o vapor chega com dificuldade.
Sempre que possvel seguir uma regra importante que tem salvado
muitas fermentaes de contaminaes e evitando desnecessrios problemas:
a) Melhor dobrar do que soldar;
b) Melhor soldar do que rosquear ou flangear.
Perde-se em flexibilidade e facilidade na substituio de peas
danificadas, mas se ganha em segurana.

1.6. ESTERILIZAO DO SUPRIMENTO DE AR

A grande maioria dos processos fermentativos so aerbios e


necessitam de suprimento de grandes quantitativos de ar estril. A primeira
vista, o problema de suprir uma fermentao industrial, com ar estril, pode
parecer um problema de fcil soluo. Contudo, suprir um fermentador
industrial com ar estril, por minuto, durante 72 h ou mais, pode apresentar
problemas. Atualmente, com a disponibilidade de filtros absolutos, a soluo do
problema fica, sem dvida, muito mais simples, alm de proporcionar maior
segurana.
Antes da introduo dos filtros absolutos para a esterilizao do ar,
utilizavam-se filtros de profundidade, contendo como material filtrante carvo
animal, fibras de vidro ou l de vidro. Os filtros de profundidade, quando no
perfeitamente secos, perdem rapidamente a sua eficincia, permitindo a
passagem de contaminantes.
O material filtrante mais largamente utilizado a l de vidro fortemente
compactada. Para manter o material filtrante seco, a camisa do filtro mantida
sob vapor. O material filtrante seco garante que as foras eletrostticas
responsveis pela atrao e captura das clulas microbianas estejam atuantes,
retardando assim a sua passagem. O calor causa, porm um srio
inconveniente, que a quebra das fibras de vidro que esto em contato com a
superfcie aquecida do filtro. Isso cria canais preferenciais de passagem do ar,
reduzindo a eficincia do filtro. Para retardar a formao dessas vias
preferenciais, e estender a vida til do filtro, a construo interna do filtro,
aumenta significativamente a sua eficincia. Um inconveniente adicional dos
filtros de profundidade a elevada resistncia passagem do ar que oferecem.

1.7. ESTERILIZAO DOS GASES DE EXAUSTO


Considerando as elevadas taxas de aerao que normalmente so
utilizadas em fermentadores, a formao de aerossol impossvel de ser
evitada, como tambm o arraste de partculas de espuma com os gases de
exausto. Para evitar que os filtros colocados na sada dos fermentadores
sejam rapidamente obstrudos, equipamentos adequados devem ser
intercalados entre o fermentador e os filtros para remover lquidos e partculas
slidas arrastadas.
O separador de ciclone elimina as partculas slidas (espuma), ao passo
que o filtro de coalescncia retira as gotculas de aerossol. Todo o material
contaminado encaminhado ao tanque de conteno, onde esterilizado
antes de ser descarregado. A utilizao de dois filtros absolutos em srie
uma garantia a mais da manuteno da esterilidade, para o caso de haver falha
em um deles. A integridade dos filtros testada aps cada operao realizando
o teste da bolha.

1.8. VLVULAS E PURGADORES DE VAPOR

Em um fermentador industrial, diversos tipos de vlvulas so utilizadas


para o controle do fluxo de lquidos e gases, porm somente alguns tipos
especiais podem ser empregados em pontos onde fundamental a
manuteno da esterilidade e integridade do produto e do meio ambiente.
Na escolha do tipo mais apropriado da vlvula a ser utilizada no
fermentador, alguns pontos devem ser analisados:
1. Ela preenche adequadamente as necessidades?
2. adequada para manter as condies de assepsia e conteno
ambiental ao longo do processo?
3. capaz de resistir por longo tempo s condies de trabalho do
processo (pH, temperatura e presso)?
4. resistente corroso?
5. A sua instalao por meio de rosca, flange ou solda?
6. A relao custo e benefcio favorvel?
A seguir, urna descrio dos tipos de vlvulas mais frequentemente
utilizada se onde podem ser empregadas.

Vlvula de gaveta

urna vlvula adequada para a instalao em linhas de vapor e gua.


Deve ser usada ou inteiramente aberta ou fechada, no sendo adequada para
regulao do fluxo, devido ao fenmeno de cavitao, que pode desgastar
rapidamente a vlvula. No adequada para o uso em linhas onde devem ser
mantidas condies asspticas

Vlvula globo

O assento do disco metlico de vedao pode ser de bronze ou de


teflon, que d urna melhor vedao. muito utilizada para regular o fluxo de
vapor ou gua. imprpria para linhas onde devem ser mantidas condies
asspticas.

Vlvula de pisto

de construo similar da vlvula globo, sendo o fluxo controlado por


um pisto contendo dois anis de vedao. Tem sido empregada, com certo
sucesso, em linhas exigindo condies de assepsia. Como no se pode excluir
o vazamento de material pela haste, o uso deste tipo de vlvula, contudo, no
aconselhvel.

Vlvula de agulha

Muito utilizada em casos onde necessrio o controle preciso do fluxo


de vapor ou de lquidos. O seu emprego em situaes que exigem assepsia
desaconselhvel.

Vlvula de esfera

Estas vlvulas so apropriadas para operaes asspticas, podendo


trabalhar sob elevadas temperaturas e presses. Apresentam um excelente
desempenho quando se deseja uma vedao estanque de lquidos, vapor ou
gases.

Vlvulas diafragma ou de membrana

So de construo bastante simples, e compem-se de 3 unidades:


corpo, diafragma e castelo. Dispensam gaxeta na haste, so de fcil
manuteno e de vida til muito longa. O material mais indicado para a
membrana o teflon, devido sua elevada resistncia temperatura. Essa
vlvula tambm indicada para trabalho em condies asspticas.

Vlvula de fundo

fundamental que a vlvula de fundo do reator apresente


caractersticas prprias de projeto, que garantam uma efetiva manuteno da
esterilidade do meio, mesmo nos casos em que se faz necessria a
transferncia ou retirada parcial do fermentado durante o processo. Para isso
ela no deve apresentar pontos que permitam o acmulo de resduos do meio,
pontos mortos de difcil esterilizao e, quando fechada, deve ser solidria com
a superfcie interna do reator.

Vlvulas controladoras de presso

Em uma instalao de fermentao, os suprimentos mais importantes,


vapor, gua e ar, frequentemente devem ser fornecidos s vrias partes da
instalao presses diversas. A regulao e manuteno dessas presses,
dentro de limites especificados pelo processo, obtida pela instalao de
vlvulas redutoras da presso e vlvulas de manuteno da presso.
As vlvulas redutoras de presso tm a capacidade de manter a presso
reduzida a jusante dentro de valores definidos, independente da variao da
presso a montante.

Vlvulas de segurana e discos de ruptura

A incorporao de vlvulas de segurana ou de disco de ruptura ao


reator de fermentao que, durante o processo operacional, deve ser
esterilizado sob presso, uma condio fundamental de segurana. Para
microrganismos no patognicos e para trabalhos sob condies GILSP,
perfeitamente aceitvel que a eventual descarga seja feita acima do telhado do
estabelecimento. Obviamente, tratando-se de microrganismos que exigem
conteno ambiental, devem existir condies que permitam a inativao
segura do material contaminado liberado.

Purgadores

Para assegurar condies timas de operao, todas as linhas de vapor


devem ser dotadas de eficientes purgadores, a fim de evitar o acmulo de
condensado nas linhas. O condensado, quando no contaminado, pode ser
reaproveitado na caldeira, desprezado ou, no caso de conter microrganismos,
deve ser forosamente enviado ao tanque de conteno para sua esterilizao.

1.9. OUTROS TIPOS DE REATORES

Entre os diversos tipos de reatores trs encontram uma aplicao mais


significativa. Todos esses fermentadores so desprovidos de agitao
mecnica.
1. Fermentador em torre ("tower fermenter")
2. Fermentador de coluna de bolhas ("bubble column")
3. Fermentador com tubo ascendente interno ou externo ("air lift")

Fermentador em torre

Este tipo de fermentador (Figura 1) foi utilizado por algum tempo na


Inglaterra, para a produo contnua de cerveja, sendo mais tarde abandonado
devido produo excessiva de biomassa. Encontrou aplicao mais
generalizada na Nova Zelndia. Esse sistema de fermentao pode ser
considerado parcialmente fechado, pois muito poucas clulas de levedura
saem do sistema, em vista da sua acentuada caracterstica floculante. Mosto
fresco introduzido na extremidade inferior do reator, sendo progressivamente
fermentado durante o seu fluxo ascendente. A parte superior do fermentador,
de dimetro cerca de duas vezes maior ao do corpo, reduz a velocidade do
fluxo, facilitando a sedimentao das clulas. A grande vantagem do processo
contnuo de produo de cerveja com fermentador de torre, a reduo do
tempo de fermentao, que cai para 4 a 8 h contra 1 semana para o processo
de batelada.
Com o desenvolvimento do fermentador cilindro cnico o tempo de
fermentao de cerveja pelo processo em batelada pde ser reduzido para 48
horas. Considerando o tempo necessrio para dar incio fase de fermentao
contnua utilizando o fermentador de torre, que de mais de 9 dias, a
vantagem deste tipo de produo de cerveja sobre o de batelada utilizando o
fermentador cilindro-cnico, deixou de ser interessante. Atualmente o
fermentador contnuo para a produo de cerveja no mais utilizado, tendo
sido substitudo, com vantagem, pelo fermentador cilindro-cnico. Nesse tipo
de fermentador, a relao altura/dimetro de 3:145 podendo o mesmo atingir
alturas de at 20m.

Figura 1 - Fermentado em torre

Fermentador de coluna de bolhas


Do ponto de vista construtivo, o tipo mais simples de fermentador
(Figura 2), sendo formado por um cilindro com fundo e tampa abauladas, com
serpentinas de resfriamento internas (ou externas), e entrada de ar pelo fundo
atravs de vrios difusores Provavelmente a empresa com a mais ampla
experincia com esse tipo de fermentador a Pfizer Ltda., que o tem utilizado
para a produo dos mais diversos produtos, desde cido ctrico at
antibiticos.46 Esses reatores mantm uma relao altura/ dimetro de 4:1 a
5:1, podendo atingir at 23m de altura.
Quando esses tipos de fermentadores contm no seu interior
serpentinas de resfriamento, como geralmente o caso, eles passam a
funcionar mais como "airlift fermenters" e no como "bubble column
fermenters".

Figura 2 - Bubble fermentador

Fermentadores Airlift

Este tipo de fermentador composto fundamentalmente de um corpo


cilndrico, contendo no seu interior um cilindro, em cuja base injetado o ar
(figura 3), atravs de difusor, que pode ser de diversos tipos construtivos: anel,
tubos abertos, etc. A injeo de ar no cilindro central produz uma corrente
ascendente do lquido, devido sua menor densidade (excesso de bolhas de
ar no meio) com relao ao meio no aerado, que passa a circular em sentido
contrrio, isto , descendente.
O "air lift fermenter" se caracteriza, portanto, pela sua extrema
simplicidade, baixo investimento e, comparado com fermentadores agitados
mecanicamente, por apresentar maior facilidade para a ampliao de escala,
menor consumo de energia e se adaptar mais facilmente ao cultivo de clulas
sensveis ao cisalhamento ("shear stress"). Uma caracterstica adicional,
quando comparada com reatores agitados mecanicamente, a sua maior
eficincia de circulao do lquido menor tempo de circulao que aumenta
pouco com o aumento de escala.

Figura 3 - Fermentador airlift

Importante caracterstica construtiva de "air-lift fermenter" a sua


relao altura/ dimetro, que pode variar entre 5:1 at 10:1 e a relao entre
dimetro do tubo central e dimetro do reator, que variam entre 0,6 - 0,8. Essa
relao importante para maximizar a circulao do meio e, portanto, obter um
menor tempo de mistura.
2. CONCLUSO
A partir do que foi exposto, nota-se a complexidade e importncia de se
atentar para os diversos fatores ao se realizar a construo de equipamentos
que faro parte de um processo de fermentao. Deste modo, fica claro que os
aspectos inerentes a construo de um fermentador determinante na
obteno de uma fermentao de qualidade e alto rendimento. Alm disso,
dentre esses equipamentos, desde os menores at de maiores propores,
deve-se ter uma ateno em especial, principalmente quanto a evitar
contaminaes externas, e tambm a promover uma limpeza adequada de
modo a evitar resduos e de fcil manuseio, o que pode ser conseguido mais
facilmente com uma construo ideal dos equipamentos. Por fim, a construo
adequada de um sistema de fermentao permite alm de uma facilidade maior
de se manter a limpeza e a esterilidade do processo, tambm pode aumentar
significativamente a vida til dos componentes deste sistema, resultando em
grandes economias, uma vez que o custo desses componentes pode ser
bastante elevado.
3. REFERNCIAS
SCHMIDELL, W., LIMA, U.A., AQUARONE, E., BORZANI, W. Biotecnologia
Industrial, Volume 2, Engenharia Bioqumica, 1a ed., So Paulo, Ed. Edgard
Blcher Ltda., 2001, 541 p. il.