UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MARINGÁ

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGIA, GENÉTICA E BIOLOGIA

CELULAR

PROVA ONLINE DO CURSO DE ESPECIALIZAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA

MODALIDADE À DISTÂNCIA

MÓDULO II – TURMA 5

30/05/2015

Diego Igor Alves Fernandes de Araújo

Mat. Pg69769

 Genética Aplicada à Biotecnologia.

1- Na ervilha-de-cheiro, a síntese do pigmento púrpura antocianina

nas pétalas é controlada por dois genes, B e D. A via biossintética
que leva à formação deste pigmento é a seguinte:
enzima B enzima D
intermediário intermediário antocianina
incolor azul púrpura

a) Qual a cor das pétalas que você espera em uma planta “pura”
incapaz de catalisar a primeira reação?

Se a planta é incapaz de catalisar a reação 1, ou seja, não apresenta

enzima B eficaz, teremos as pétalas incolores.

b) Qual a cor das pétalas que você espera em uma planta “pura”
incapaz de calalisar a segunda reação?

Se a planta é incapaz de catalisar a reação 2, ou seja, não apresenta

enzima D eficaz, teremos as pétalas azuis.
 c) Se as plantas do ítens a e b anteriores forem cruzadas, qual a cor
esperada das pétalas para as plantas F1?

Pétalas púrpuras.

d) Qual a proporção esperada de plantas púrpuras: azuis: brancas

que você espera na F2?

Este exemplo trata-se de um caso de epistasia recessiva, dessa

forma após os cruzamentos, teremos a proporção: 9 púrpuras: 3 azuis
: 4 incolores.

 Ferramentas de Biologia Molecular Aplicada à Biotecnologia.

1- Descreva ou esquematize um método de clonagem gênica

A clonagem gênica consiste na inserção de um segmento

selecionado de DNA em um plasmídeo ou no cromossomo de um
bacteriófago, que atuam como vetores de clonagem, e posterior
replicação desse DNA recombinante em um hospedeiro apropriado,
como uma bactéria ou levedura. Essa replicação ocorre quando o
sistema de síntese do DNA do hospedeiro replica o DNA inserido na
célula hospedeira. Sendo assim, a partir de uma célula transformada,
são obtidos uma grande quantidade de células idênticas (clones), cada
uma dotada de várias cópias de DNA recombinante.
Inicialmente, ocorre a obtenção e o preparo de DNA em dupla fita
ou fragmentos de cDNA contendo extremidades 5’ ou compatíveis com
os sítios criados no interior do vetor de clonagem. Em seguida, ocorre a
inserção de fragmentos de DNA em um vetor de clonagem, visto que a
etapa anterior promoveu a adequação dos sítios de ligação entre os
materiais que serão utilizados.
O próximo passo consiste na introdução do vetor recombinante
recém formado em uma célula hospedeira. A escolha desta célula está,
relacionada ao objetivo da clonagem. Se a intenção é promover uma
análise estrutural do gene isolado, deve-se, utilizar um sistema simples
que seja de fácil uso. Se o objetivo é expressar as informações
 genéticas em grandes eucariotos, serão necessários sistemas mais
específicos.
Ocorre então, a replicação do vetor recombinante no interior das
células hospedeiras transformadas, num processo chamado de
amplificação. Seguido pela divisão da célula hospedeira e consequente
passagem para a prole, de cópias da molécula de DNA recombinante.
As váias etapas de divisão resultam nos clones.
Dentre as colônias transformadas com o vetor recombinado é
necessário selecionar aquelas que contém, de fato, o gene de interesse,
excluindo aquelas que não possuem o vetor ou contém o vetor vazio.
Essa seleção é feita por genes marcadores contidos no vetor.
E por fim, ocorre o isolamento e análise dos insertos de DNA e/ou
seus produtos proteicos expressos.

 Biotecnologia Vegetal.

1- Os meios de cultura usados para cultivar tecidos vegetais in vitro

contém macronutrientes, micronutrientes, e podem ser
suplementados com vitaminas, aminoácidos e fontes de carbono
(sacarose, glicose, maltose, frutose...). Se esses meios de cultura
são idealizados para suprir os requerimentos nutricionais dos
tecidos in vitro, por que os reguladores de crescimento são
frequentemente adicionados nos meios de cultura?

Os meios de cultura devem reproduzir ao máximo as condições

necessárias para o desenvolvimento da planta. Normalmente, além dos
macro e micronutrientes como sais minerais e compostos orgânicos
como fontes de carbono e nitrogênio, as plantas produzem uma série de
hormônios que são necessários ao seu desenvolvimento e diferenciação
celular. Entre estes podemos citar as auxinas e as citocininas que são
produzidas no metabolismo do vegetal e que promovem o crescimento
da mesma.
Estudos foram realizados em busca de substâncias sintéticas que
pudessem suprir esta necessidade natural do vegetal, bem como
descobrir as proporções que estas substâncias pudessem contribuir para
o desenvolvimento da planta. São chamados de reguladores de
crescimento, pois são substâncias que têm ação similar aos hormônios,
porém, têm origem sintética. Hoje, temos à disposição o ácido
 indolbutírico, ácido naftalenoacético, zeatina, picloran, cinetina, entre
outros.
Dessa forma, estes reguladores são utilizados para controlar o
desenvolvimento do vegetal em estudo. De acordo com a proporção e
do tipo de regulador utilizado, é possível induzir o desenvolvimento de
calos, brotos ou raízes

2- A soja RR criada pela Monsanto e foi liberada pelo CTNBio em 1998.

O gene que foi inserido na soja foi retirado do genoma bacteriano.
Explique de que maneira a sequência gênica bacteriana expressou
suas atividades nas células de soja.

As ervas daninhas constituem um dos principais fatores limitantes

na produção agrícola da soja. Normalmente, são controladas por
práticas culturais (aração e gradagem) e métodos químicos. A soja RR
desenvolvida pela Monsanto para ser tolerante ao herbicida glifosato
com objetivo de controlar as ervas daninhas. Este herbicida atua
bloqueando a enzima EPSP sintase responsável pela produção de
aminoácidos essenciais à sobrevivência e crescimento da maior parte
das plantas.
Para promover a resistência da soja foi inserido, por
bombardeamento de microprojéteis, em células matrizes, um gene da
Agrobacterium tumefaciens estirpe CP4 que codifica a EPSPS
modificada. Dessa forma, a soja possui dupla expressão da enzima
EPSPS sendo que a original produzida pela planta será desativada pela
ação do herbicida, mas a oriunda do A. tumefaciens não será afetada e
funcionará normalmente. Além disso, a nova soja contém porções
genéticas de petúnia (CTP), do vírus do mosaico da couve flor (P-E35S)
e da bactéria A. tumefaciens (NOS 3’) utilizados como elementos para
regular a integração e o funcionamento do gene EPSPS bacteriano no
genoma da soja.

 Biotecnologia Ambiental.

1- Em Dezembro de 2006, foi detectado por apicultores americanos um

fenômeno relacionado com as abelhas polinizadoras. Este fenômeno
caracterizado por colméias vazias, ainda não totalmente
esclarecidos, pode estar relacionado à pesticidas agrícolas, vírus,
ácaros. Este fenômeno também surgiu na Austrália, Brasil, Europa e
outras regiões e ficou conhecido como:

a) Colapso dos vírus em abelhas (CVA)

b) Abelhas extintas por Ácaros (AEA)

c) Morte natural das Abelhas (MNA)

d) Distúrbio do Colapso das Colônias (DCC)

d) Colapso do Distúrbio das Rainhas (CDR)

A letra D é a alternativa correta.