Nome: Arthur Canto Frederico Cincias Biolgicas - 6 perodo Biologia Molecular - Prof.

Thiago

"Mecanismos de Reparo no DNA"

Comparado com as molculas de protenas e com o RNA, que so, via de regra, constantemente reciclados (rapidamente degradas e substitudas por novas molculas), o DNA bastante estvel. O DNA genmico, entretanto, no est isento de alteraes graduais, quer na sua conformao quer na sua estrutura. Sua conformao pode, por exemplo, se modificar medida que ele sofre condensao e relaxamento, necessrios para a realizao de funes vitais, como a sua replicao in vivo e a sua expresso gnica via transcrio (sntese de RNA). Alteraes estruturais, por seu turno, podem surgir a partir leses fsicas ou qumicas de bases nitrogenadas ou de ligaes fosfodister. Erros tambm podem surgir como consequncia de pareamentos incorretos durante a replicao, a despeito dos mecanismos de auto-correo feitos pelas DNAs polimerases, como veremos adiante. Na ausncia de deteco e de reparao correta (figura a seguir), essas leses podem ser incorporadas ao DNA. Igualmente, uma mutao em um gene de reparo pode inviabilizar o processo de reparao e provocar uma cascata de mutaes. Ao contrrio das protenas e dos RNAs que, via de regra, so degradados aps lesados, alteraes do DNA de procariotos e eucariotos costumam ser reparadas por mecanismos que revertem diretamente a leso ou substitui a regio lesado. Dessa forma, os diversos mecanismos de reparo podem anular os efeitos dos agentes mutagnicos, levando a que a sequncia nucleotdica normal seja restaurada e o contedo informacional seja preservado. graas, portanto, a esses mecanismos, presentes em todos os organismos e cuja taxa depende de muitos fatores, como o tipo e a idade da clula, que a vida vem se mantendo e evoluindo na Terra.

Se os processos de reparao fossem 100% eficazes, os agentes mutagnicos no seriam uma ameaa para o DNA. O reparo das mutaes, entretanto, pode ser incorreto (figura acima), levando a que a molcula perca sua atividade biolgica, o que poderia se traduzir pela inviabilidade da estrutura celular dela dependente. Neste contexto, deve-se levar em considerao tambm a saturao dos sistemas de reparao devido a volumes elevados de danos que o DNA possa sofrer em um curto intervalo de tempo. Em funo disso, poder haver replicao de leses no reparadas, perpetuando as mutaes. Para sair de situaes como essas, as bactrias utilizam sistemas no expressos em clulas no danificadas, no sendo, portanto, constitutivo e, sim, indutvel. Um deles o sistema de reparo SOS (esquema abaixo), que, por gerar muitos erros no DNA, enquanto procura reparar as leses, denominado propenso ao erro. Ele faz com que as DNAs polimerases, paradas em um bloqueio, prossigam incorporando um ou mais nucleotdeo at ultrapassarem a regio danificada, atuando, dessa forma, como um mecanismo reparador de emergncia. O fato de os

erros induzidos pelo sistema SOS ocorrerem no local das leses sugere que esse mecanismo insere nucleotdeos aleatrios no lugar dos nucleotdeos danificados. Em funo disso, esse sistema indutvel, que perpetua as mutaes, s utilizado quando todos os mecanismos isentos de erros de reparo (reparao constitutiva) no conseguem solucionar o problema, sendo, portanto, usado como ltimo recurso. As clulas animais tambm so dotadas de sistema de reparo indutveis.

Trabalhos diversos tm demonstrado que a mutagnese, na sua grande maioria, decorre de uma relativa impreciso dos processos de reparao. Essas imprecises representam um dos principais meios pelos quais danos no DNA, causados por diferentes agentes mutagnicos, induzem a formao de tumores. Com base nisso, conclui-se que os processos de reparo do DNA esto relacionados, direta ou indiretamente, proteo contra o desenvolvimento de cnceres e outras leses degenerativas. PRINCIPAIS MECANISMOS DE REPARO So conhecidos vrios tipos de mecanismos de reparo, que, provalmente, se tornaram mais complexos com a progressiva diferenciao das estruturas biolgicas. Embora eles tenham como finalidade precpua manter o patrimnio gentico, preservando os caracteres, sua eficincia absoluta teria se constitudo, sem dvida, um obstculo intransponvel evoluo, que tem a mutao gnica como fonte primria de variabilidade gentica. Entre os mecanismos de reparo, destacamos a fotorreativao, a reparao por exciso e a reparao ps-replicativa, que apresentam natureza polignica (controlados por diversos genes). I. FOTORREATIVAO Este mecanismo, considerado o mais importante reparo direto utilizado pelas bactrias, foi descoberto em 1949 e consiste na eliminao de leses provocadas pelos raios ultravioleta (UV) germicida no DNA, mais especificamente dos dmeros de timina que eles induzem. Esses dmeros, resultantes de ligaes covalentes anormais entre pirimidinas adjacentes, levam formao de uma salincia no DNA, que inibe a ao da DNA polimerase, impedindo a replicao semiconservativa e, da RNA polimerase-DNA dependente, interferindo na transcrio. Esses processos moleculares, a princpio, permanecem bloqueados at que leso seja reparada. Nesse mecanismo, a remoo da leso est condicionada exposio do DNA irradiado com UV, luz visvel, sendo o processo mediado por uma enzima fotopendente chamada fotoliase ou enzima de fotorreativao, que rompe as ligaes covalentes entre as timinas no interior do dmero, convertendo-o em monmeros. Essa enzima, encontrada em bactrias, eucariotos inferiores, insetos e plantas, tem a propriedade de se associar leso, mesmo na ausncia da luz. A dissociao do complexo enzima-substrato, com a consequente

reparao do DNA, s ocorre, todavia, quando o sistema iluminado. Do ponto de vista molecular, constata-se que na fotorreativao os dmeros de timina so clivados (desfeitos), levando ao restabelecimento das ligaes A-T, como mostra a figura abaixo.

II. REPARAO POR EXCISO Este mecanismo de reparo foi descrito por volta de 1964 e, ao contrrio da fotorreativao, independe da luz para ocorrer, sendo, portanto, uma reparao no escuro (dark repair). a forma mais geral de reparo de DNA e, provavelmente, o principal processo que ocorre na maioria dos seres vivos. Nele, as regies defeituosas de uma fita so removidas e ressintetizadas, a partir da sequncia contida na fita complementar intacta, que serve como molde. Uma deficincia nesse reparo pode levar a tumores letais. A reparao por exciso requer uma sequncia de reaes enzimticas e pode ser dividida em trs etapas, que esto esquematizadas na figura a seguir. IIa Reconhecimento e inciso da leso: esta primeira etapa consiste no reconhecimento da alterao estrutural (b) e na inciso da cadeia polinucleotdica situada nas proximidades da leso (c). Essa etapa mediada por uma enzima denominada endonuclease dmero-especfca.

As pessoas portadoras de xeroderma pigmentosum, doena autossmica recessiva, so incapazes de produzir a endonuclease especfica para o dmero, evidenciando a importncia clnica desse mecanismo de reparo. Os portadores dessa deficincia gentica so muito sensveis luz solar, apresentando leses pigmentadas em reas da pele expostas ao sol e uma incidncia elevada de cnceres de pele, como carcinoma basocelular, espinocelular carcinoma e melanoma. A capacidade reduzida de reparar o DNA lesado leva a mutaes somticas, que podem, por seu turno, causar transformaes malignas.

IIb. Exciso e replicao restauradora: nesta etapa, ocorre a remoo do fragmento da cadeia que contm a leso e a ressntese do segmento removido (d), tendo por base a sequncia contida na cadeia complementar no afetada, no espao correspondente exciso. Essa etapa catalisada pela DNA polimerase I ou polimerase de Kornberg, enzima dotada de atividade exonucleoltica e polimersica. A frao removida contm cerca de 15 a 20 nucleotdeos. Lembramos que a enzima que atua na reparao do DNA, sintetizando o segmento faltante, a DNA polimerase I (pol I) e a que participa da replicao a DNA polimerase III (pol III). IIc. Ligao: o processo de restaurao por exciso finalizado pela ligao do segmento neossintetizado extremidade livre da cadeia preexistente (e). Essa etapa, que restabelece o posicionamento do segmento, mediada por uma enzima denominada polinucleotdeo-ligase. Vrios estudos tm demonstrado uma srie de vias alternativas do modelo mencionado acima. Um deles sugere a existncia de uma endonuclease capaz de produzir duas incises (uma em cada lado da regio danificada) e no apenas uma como foi referido na primeira etapa (IIa) do modelo descrito. Nesse modelo alternativo, a remoo do segmento contendo a leso poderia ser feita por simples quebra das pontes de hidrognio, dispensando, dessa forma, a atividade exonucleoltica. III. REPARAO PS-REPLICATIVA Ao contrrio do que se verifica nos tipos de reparo mencionados anteriormente, na reparao ps-replicativa a remoo da sequncia lesada ocorre aps a replicao semiconservativa (figura abaixo). As lacunas deixadas nas molculas-filhas, a exemplo do que ocorre na reparao por exciso, so preenchidas tendo por base a sequencia contida na fita complementar no modificada. Desse processo de reparao, tambm independente da luz, portanto reparao no escuro (dark repair), participam a endonuclease, a polimerase I (polimerase de Kornberg) e a polinuclotdeo-ligase, enzimas que tambm atuam no mecanismo de reparao por exciso.

Lembramos que a cafena interfere no mecanismo de reparo do DNA, inibindo a sntese das purinas e produzindo, consequentemente, quebras e delees no material gentico. A DNA POLIMERASE CORRIGE ERROS QUE ELA MESMA COMETE Se durante a replicao a DNA polimerase inserir, acidentalmente, um nucleotdeo incorreto, ela pode perceber a falha e no agregar novos nucleotdeos, interrompendo, temporariamente, o crescimento da cadeia. Esse erro pode ser corrigido, pela prpria enzima, graas a uma funo adicional que ela possui conhecida como leitura de provas. Dessa forma, a DNA polimerase, diante da presena de um nucleotdeo colocado de modo incorreto, retrocede e o elimina, utilizando, para isso, a atividade exonucleotdica 3 5 de uma de suas subunidades. Uma vez eliminado o nucleotdeo inserido incorretamente, a sntese do DNA prossegue normalmente.