2 Cursos Práticos em Bioquímica

R O TEI RO DE P R ÁTIC A
DETERMINAÇÃO DO ESPECTRO DE ABSORÇÃO DE
CORANTES E CONSTRUÇÃO DE CURVA PADRÃO

MATERIAL:
O O
S Br
O
OH

Br
⇒ solução de azul de bromofenol - 0,01 mg/mL
Br Br
OH

⇒ solução de metilorange - 0,01 mg/mL NaO3S N N N(CH3)

⇒ espectrofotômetro

OBJETIVO

⇒ Determinar o espectro de absorção de soluções de azul de bromofenol (ABF) e de metilorange

(MO).
⇒ Caracterizar o comprimento de onda onde ocorre absorção máxima.
⇒ Determinar o espectro de absorção de uma mistura de ABF e MO.
⇒ Construir uma Curva Padrão para cada um dos corantes nos λs adequados.

PROCEDIMENTO
Determinação do Espectro de Absorção:

⇒ Preparar o material de acordo com o esquema a seguir:

Tubo Composição
ABF ou MO 5 mL de ABF ou MO
ABF MO
ou 2,5 mL ABF ou MO + 2,5 mL H2O
2 2
ABF + MO 2,5 mL ABF + 2,5 mL MO

⇒ Varrer o espectro determinando as Absorvâncias nos comprimentos de onda relacionados na

tabela a seguir, calibrando o aparelho à T = 100% (Abs = 0) em cada λ com o Branco,
conforme indicado.

UFRJ • Instituto de Química

 Espectrofotometria 3

Abs. em λ (nm)
415 445 460 490 520 535 550 580 610 640
MO

MO/2

ABF

ABF/2

ABF+MO X H2O

ABF+MO X MO/2

ABF+MO X ABF/2

⇒ Lançar em gráfico as leituras de Absorvância x comprimento de onda e selecionar os λs

adequados para construção da curva padrão de cada corante.

Construção de Curva Padrão

⇒ Seguir o protocolo abaixo utilizando soluções de ABF ou MO, conforme o caso:

TUBO ABF ou MO H2 O Abs Concentração

(mL) (mL) (..............nm) ( )
B - 5,0

1 1,0 4,0

2 2,0 3,0

3 3,0 2,0

4 4,0 1,0

5 5,0 -

⇒ Ler as Absorvâncias de cada tubo no λ anteriormente selecionado para cada corante, utilizando
o tubo B como branco da reação.
⇒ Lançar em gráfico Absorvância x concentração de corante e analisar os resultados obtidos.