– AULA PRÁTICA 11: ESPECTROFOTOMETRIA

11.1 – OBJETIVOS

Esta aula prática tem como objetivo geral, desenvolver habilidades e

competências referentes à espectrofotometria. Como objetivos específicos se
destacam os seguintes pontos:
- determinar a absortividade molar para o permanganato de potássio
(KMnO4) e em seguida determinar a concentração de uma solução de
concentração desconhecida;

11.2 – ABORDAGEM TEÓRICA

11.2.1 – Espectrofotometria

A concentração de substâncias pode ser determinada medindo-se a luz

absorvida por uma solução, através do método espectrofotométrico.
Se um raio de luz monocromático atravessar uma solução contendo uma
substância capaz de absorver luz neste comprimento de onda (), uma parte desta
luz incidente (Io) será absorvida e uma parte será transmitida (I). Chamamos de
transmitância (T) a razão entre a intensidade da luz transmitida (I) e a intensidade
da luz incidente (Io).

A transmitância de uma solução depende dos seguintes fatores:

- Natureza da substância
- Concentração
- Espessura da solução

A relação entre estes três fatores é descrita quantitativamente pela lei de

Beer-Lambert, ou simplesmente lei de Beer, segundo a qual a transmitância de
uma solução num determinado comprimento de onda é:

Química Analítica 1
 Onde:  é a absortividade molar e é expressa nas unidades M-1cm-1;
c é a concentração da amostra expressa em mol/L(M);
b é o caminho óptico e é geralmente expresso em cm.

Como a transmitância é uma função exponencial, aplicando-se o logaritmo

temos:

Chamando-se (-log T) de absorbância (A) temos:

Portanto, a lei de Beer estabelece que a absorbância de uma substância

em solução é diretamente proporcional a sua concentração e a espessura que a
luz atravessa.
A utilização da lei de Beer requer o estabelecimento do comprimento de
onda à absorção máxima. Conhecendo-se este comprimento de onda, preparam-
se soluções com concentrações conhecidas e determina-se a absorbância neste
comprimento de onda. Fazendo-se um gráfico da absorbância (Eixo Y) em função
da concentração (Eixo X), obtém-se uma reta que é chamada de curva padrão, a
qual poderá ser utilizada para determinar a concentração de soluções a partir dos
valores da absorbância.
Como valores de  para muitas substâncias são conhecidos, ou podem ser
facilmente determinados (fazendo-se um espectro de absorção), e também
porque a determinação de A é simples, este método é bastante utilizado para
determinações de concentração.

11.2.2 – Instrumentação

De maneira global, um espectrofotômetro tem três partes:

- Fonte de radiação: normalmente é uma lâmpada incandescente. Existe também
um controle de intensidade da radiação, mas é fundamental um meio de
controle do comprimento da onda (por exemplo, ¯filtros ou

Química Analítica 2
 monocromatizadores como prismas ou grades de difração). No nosso
aparelho, pode-se selecionar o comprimento de onda da luz incidente
através de um controle manual.
- Amostra: deve estar contida em um recipiente apropriado do tipo tubos de ensaio
ou cubetas. Como normalmente medidas comparativas são feitas (uma
medida só com solvente, outra com solvente e soluto), as cubetas vêm
emparelhadas. As cubetas são fabricadas as mais iguais possíveis. Assim,
no resultado ¯final, somente o soluto faz uma contribuição à absorção.
- Detector: é um elemento sensível à radiação e que pode nos dar uma medida da
intensidade da mesma; varia desde foto-molécula até o próprio olho. Um
indicador no aparelho converte o sinal do elemento em um número. Os
instrumentos em geral dispõem de dois indicadores: um deles nos dá a
transmitância e o outro dá a absorbância, evitando a necessidade de uma
calculadora.

11.3 – PROCEDIMENTO PRÁTICO

a) Preparar 1 L de uma solução estoque de permanganato de potássio

(KMnO4 – massa molar = 158,034 g/mol) na concentração de 1,58 mg/L.
(Obs.: para poupar tempo esta etapa já foi executada previamente e a
solução de permanganato de potássio 1,58 mg/L já se encontra sobre a
bancada central)

b) A partir da solução 1,58 mg/L obtida na etapa anterior, prepare 04 (quatro)

soluções padrões de permanganato de potássio por diluição. Estas
soluções devem possuir as seguintes concentrações: 0,316 mg/L, 0,632
mg/L, 0,948 mg/L e 1,265 mg/L de permanganato de potássio.

Para efetuar as diluições você deverá calcular o volume de solução a 1,58

mg/L que será pipetado e transferido para um balão volumétrico de volume
conhecido, de forma à obter-se a concentração desejada.

Ex:

Química Analítica 3
 - Volume do balão volumétrico = 25 ml (V2)
- Concentração final desejada = 0,316 mg/L (C2)
- Concentração da solução a diluir = 1,58 mg/L (C1)
- Volume da solução a diluir que deve ser pipetado = ? (V 1)

Cálculo: C1V1 = C2V2

1,58 mg/L . V1 = 0,316 mg/L . 25 ml => V1 = 5 ml

Complete o quadro abaixo com os volumes que devem ser pipetados para
preparar cada solução padrão.

Solução C1 V1 C2 V2
1 1,58 mg/L 0,316 mg/L 25 mL
2 1,58 mg/L 0,632 mg/L 25 mL
3 1,58 mg/L 0,948 mg/L 25 mL
4 1,58 mg/L 1,265 mg/L 25 mL

Tendo calculado os volumes de solução (V 1) que devem ser usados para

cada diluição, pipete o volume calculado e transfira-o para o balão volumétrico (de
volume idêntico ao usado nos cálculos), complete o volume (até o menisco)
usando água como solvente (isto para cada solução). Guarde cada solução
preparada em um frasco e rotule, indicando a concentração de permanganato de
potássio (obs.: entre a preparação de uma solução e outra, lave o balão
volumétrico usado água).

c) Leve as quatro soluções padrões preparadas ao espectrofotômetro e leia a

absorbância de cada uma delas usando um comprimento de onda o mais
próximo possível de 525 nm. Use água como branco.

d) Preencha o quadro abaixo com as absorbâncias relativas a cada

concentração de permanganato de potássio. Calcule também a
concentração molar de cada solução.

Solução Concentração Concentração Absorbância

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 (mg/L) (mol/L)
1 0,316 mg/L
2 0,632 mg/L
3 0,948 mg/L
4 1,265 mg/L

e) Usando uma planilha eletrônica de cálculo (o Microsoft EXCEL, por

exemplo) trace um gráfico de pontos, colocando os valores de absorbância
nas ordenadas e as concentrações molares nas abscissas. Ajuste a
equação de uma reta passando pelos pontos e pela origem (Y = a.X) aos
dados experimentais. Anote a equação da reta e o coeficiente de
correlação (R2).

Ex:

0,7
y = 145x
0,6
R2 = 0,9932
0,5
0,4
Abs

0,3
0,2
0,1
0
0 0,001 0,002 0,003 0,004 0,005
Concentração molar

A tangente da reta fornece a absortividade molar do permanganato de

potássio, sabendo-se que o caminho óptico da cubeta é de 1 cm. Compare a
equação da reta com a lei de Beer-Lambert.
A =  . C. l

Y = a. X

f) Anote o valor de , ele será necessário para determinar a concentração de

uma determinada solução de permanganato de potássio.
 = M-1cm-1

g) Leve a solução de permanganato de potássio de concentração

desconhecida e leia a absorbância à um comprimento de onda próximo à
525 nm. Anote a absorbância obtida.

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 h) Calcule a concentração molar da solução usando a lei de Beer-Lambert
(A = .C.l) – use l = 1 cm.

11.4 – PÓS-LABORATÓRIO

a) Pesquisa - Faça uma pesquisa sobre espectrofotometria e:

a.1) Cite e explique quais são as limitações da técnica.
a.2) Quais são os tipos de desvios que podem ocorrer na lei de
Lambert-Beer? Explicar cada um deles.

b) A absortividade molar de uma certa substância é 14.000 M -1cm-1 no

comprimento de onda do seu máximo de absorção. Calcular a molaridade
dessa substância que pode ser medida no espectrofotômetro com célula
de 1 cm, para uma absorbância de 0,850.

11.5 – MATERIAIS E REAGENTES

MATERIAIS REAGENTES
1 becker de 40 mL KMnO4
1 Espátula Água destilada
1 balão volumétrico de 1000 mL
1 balão volumétrico de 25 mL
1 Pipeta graduada de 10 mL
4 frascos com rótulo
1 Espectrofotômetro

8.6 – BIBLIOGRAFIA

1 - HARRIS, Daniel C. Análise química quantitativa. 5. ed. Rio de Janeiro: LTC,

2001. 862 p.
2 - SKOOG, D.H. et al. Fundamentos de Química Analítica. 8. ed. São Paulo:
Thomson, 2006. 999 p.
3 - BACCAN, Nivaldo et al. Química analítica quantitativa e elementar. 2. ed.
rev. ampl. São Paulo: Edgard Blücher; Campinas

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