Corantes e Meios de Cultura

utilizados na Micologia
 CORANTES

LACTOFENOL DE AMANN OU AZUL DE ALGODÃO:

Composição Química:
- Ácido fênico .............................20mL.
- Ácido Láctico ........................... 20mL.
- Glicerina ...................................40mL.
- Água destilada 20mL.
- Azul de Poirrierblau 0,05g.

Técnica de Preparação:
- Misturar todos os componentes.
- Dissolver pelo calor.
- Depois adicionar 0,05g de Azul de Poirrierblau ou Algodão.
- Espera 24 horas e filtrar.
- Armazenar em recipiente rotulado com nome da substância e
data de preparação.

Finalidade e Uso: - Utilizado para exame microscopico de material

biológico.
- Corar e tornar mais distintas e hialinas as estruturas
fúngicas que se isolam de uma cultura.
 CORANTES

TINTA DA CHINA (TINTA NANKIM):

Técnica de Coloração:
- Misturar o material biológico ou fragmentos de cultura, a ser
examinado, com uma gota de Tinta da China e cobrir com uma
lamínula.
- Examinar a lâmina preparada sob microscópio. Se a
preparação ficar muito escura, a mesma poderá ser diluída com
pequena quantidade de água.
Uso: Este corante é utilizado na Micologia Médica como contraste.
Finalidade:
- Evidenciar cápsula de Cryptococcus neoformans, no escarro,
líquor, urina ou suspensão de cultura.
 CORANTES

MÉTODO DE GRAM:

Uso: Material clínico com suspeita de leveduras

Finalidade:
- Corar leveduras (fungos unicelulares) isolados da mucosa
vaginal, bucal, principalmente do Gênero Candida.
 MEIOS DE CULTURA,

1.MEIOS DE CULTURA: Os meios de cultura são substratos naturais

ou artificiais empregados no cultivo de microrganismos e dentre estes,
encontram-se os fungos. Existe uma grande variedade de meios para
atender as exigências nutricionais das diferentes espécies de fungos
encontradas na natureza.
Os meios de cultura são utilizados no isolamento, na purificação,
conservação e identificação dos microrganismos.

1.1.CLASSIFICAÇÃO: Os meios de cultura podem ser classificados

quanto à sua consistência , composição e finalidade/uso
 MEIOS DE CULTURA.

1.1.1 QUANTO Á SUA CONSISTÊNCIA: Sólido e Liquído

MEIO SÓLIDO – É aquele que além de todos os ingredientes é

adicionado de Ágar, agente gelificante,que lhe proporciona consistência
mais rígida, torna-o sólido.

MEIO SEMI-SÓLIDO - o Ágar é adicionado em certa quantidade,

proporção, ocasionando uma consistência não muito sólida ao meio,
ficando este com aspecto mais geiliforme.

MEIO LÍQUIDO – não se adiciona o Ágar.

 MEIOS DE CULTURA, SOLUÇÕES, REAGENTES E CORANTES
FUNDAMENTAIS USADOS EM MICOLOGIA
1.1.2. QUANTO À NATUREZA DE SUA COMPOSIÇÃO: Naturais,
Sintéticos e Semi-Sintéticos.

NATURAIS – É aquele de composição desconhecida, por conter

substratos naturais, sem concentração definida. Ex. : Meio Cenoura,
Meio Água de Coco, Meio Aveia, Meio batata.

SEMI-SINTÉTICOS – É aquele cuja composição e concentração é

parcialmente conhecida. Ex.: BDA ( Batata + Dextrose + Agar).

SINTÉTICOS – É aquele cuja composição e concentração são

conhecidas Ex.: Agar Sabouraud
 MEIOS DE CULTURA

1.1.3.QUANTO À SUA FINALIDADE/USO: Gerais, Especiais, Seletivos e

Diferenciais.

GERAIS – São aqueles que permitem o cultivo da maioria dos fungos, são
denominados também de universais. Ex.: ÀGAR SABOURAUD

ESPECIAIS – São meios aos quais se adicionam substâncias nutritivas

(substratos) que propiciam melhores condições para o desenvolvimento e
multiplicação de certos fungos Ex. ÁGAR SABOURAUD + EXTRATO DE
LEVEDURA.
 MEIOS DE CULTURA, SOLUÇÕES, REAGENTES E CORANTES
FUNDAMENTAIS USADOS EM MICOLOGIA

SELETIVOS – São aqueles usados para favorecer o desenvolvimento de

uma determinada espécie de fungo.
Ex .: MYCOSEL (Dermatófitos).

DIFERENCIAIS – São aqueles usados para evidenciar certas

propriedades de uma espécie, a fim de diferenciá-la de outras.
Ex. GORODKOWA (leveduras Ascosporadas).
 MEIOS DE CULTURA

ÁGAR SABOURAUD

Uso: Universalmente usado para cultivar fungos, Actinomicetos e Algas

dos Gêneros Prototheca e Chorella.

Finalidade: Isolar ou cultivar fungos patógenos e principalmente, fungos

contaminantes filamentosos e leveduras ( fungos unicelulares).

Composição Química:
Peptona ....................10g
Dextrose...................40g
Ágar...........................15g
Água destilada......... 1000mL
 MEIOS DE CULTURA

Finalidade dos Componentes:

Peptona – é uma proteína, fonte de Nitrogênio para o crescimento

dos fungos.

Dextrose – fonte de Carbono, fornecendo energia para o

crescimento dos fungos.

Ágar – é oriundo de uma alga marinha de procedência japonesa.

Têm duas finalidade: Dar corpo , agente espessante, gelificante e
também fornece nutrientes orgânicos para o fungo.

Água destilada– agente diluente e fornece frações de sais minerais.

 MEIOS DE CULTURA

ÁGAR SABOURAUD

Técnica de Preparação:

-Dissolver o meio de cultura em 1 L de água destilada ou o Agar misturado

a água Levar o meio a uma fonte de calor (direta ou indireta)
- Adicionar os outros componentes após a retirada da mistura do fogo.
- Distribuir o meio em tubos de ensaios ( 10 mL para cada tubo de ensaio)

- Fazer a tamponação com algodão hidrófobo ( cardado ou ortopédico)

-Autoclavar a 120oC durante 15 a 20 minutos

-Armazenar sob refrigeração ( geladeira), após a evaporação de toda a

água de condensação da parede dos recipientes onde foram
acondicionados
-Identificar os tubos, balões, etc com nome do meio de cultura.
 MYCOSEL
Finalidade: Meio seletivo Usado especificamente para isolar e cultivar
fungos patógenos . Ex.: DERMATÓFITOS

Composição Química:
- Peptona ..........................................10g
- Dextrose..........................................10g
- Ágar ................................................15,5g
- Ciclohexamide (actidione)............ 0,4g
- Cloranfenicol ................................ 0,05g
- Água .............................................1000mL

Finalidade do Antibióticos:

Ciclohexamide : inibe o crescimento de fungos contaminantes e leveduras,

com exceção de Candida albicans
Cloranfenicol : inibe o crescimento de bactérias

Técnica de Preparação: Semelhante ao Ágar Sabouraud, com diferenças

em relação à autoclavação (15 minutos), os antibióticos devem ser
adicionados por ultrafiltração à vácuo.
 MEIOS DE CULTURA

• BATATA-DEXTROSE-AGAR (BDA )
• Uso: Meio seletivo para cultivar fungos filamentosos.
•
• Finalidade: Utilizado geralmente para cultivar certos grupos de
fungos filamentosos.

• Composição Química:
• Batata (inglesa).......................................................200g
• Glicose......................................................................20g
• Agar...........................................................................15g
• Água destilada.........................................................1000mL

•
 MEIOS DE CULTURA
• Técnica de preparação:
• Ferver a batata, sem casca, em 500mL de água por 30 min.
• Após cozimento, amassar a batata e filtrar o caldo em gaze ou
similar.
• Fundir o Agar em 500mL de água destilada.
• Adicionar a glicose ao caldo de batata e adicionar tudo ao recipiente
contendo o Agar fundido.
• Ajustar o volume, em proveta, com água até completar 1000mL, .
• Distribuir o meio ainda quente em tubo de ensaio, balão ou
erlenmeyer, tamponar e esterilizar em autoclave a 120 oC, 1 atm. de
pressão, durante 19 minutos.
• Retirar o meio do autoclave, inclinar os tubos, deixando resfriar à
temperatura ambiente e após identificação, armazenar em
refrigerador.