Universidade Federal do Rio Grande

Escola de Química e Alimentos

Laboratório de Engenharia de Bioprocessos
Disciplina Bioquímica Industrial II

Preparo e Esterilização de Meios de Cultura e Vidrarias

Com este experimento você deverá ser capaz de: adotar corretamente os
procedimentos envolvidos no preparo de vidrarias e meios de cultura para análises
microbiológicas.

Introdução
Os meios de cultura são usados para fornecer condições adequadas para o
cultivo de micro-organismos fora de seu ambiente natural, tanto no que diz respeito aos
nutrientes necessários para seu metabolismo, quanto em relação a parâmetros químicos
e físicos importantes para o seu crescimento, tais como temperatura, viscosidade,
presença ou ausência de oxigênio, pH e pressão osmótica. Desta forma, quando os
micro-organismos são removidos do seu meio natural e cultivados em laboratório,
utilizam-se meios que simulam ou até melhoram as condições naturais.
Os meios de cultura podem ser classificados segundo os seguintes critérios
(NASCIMENTO, 2010):
Estado Físico: sólido (contém 1,5% a 2% de ágar); semi-sólido (contém de
0,5% a 1% de ágar); e líquido (não contém ágar, apresenta-se sob a forma de caldo
nutritivo).
Origem dos Constituintes: naturais ou complexos (apresentam os nutrientes
necessários para o crescimento do micro-organismo, mas sua composição é indefinida;
contém componentes como ´peptona, extrato de carne, extrato de levedura, entre
outros); sintéticos ou quimicamente definidos (meios que apresentam a composição
definida); mistos.
Emprego/função: seletivos (fornecem condições adequadas para que apenas o
micro-organismo de interesse se desenvolva, inibindo assim o crescimento dos demais);
diferenciais (permite a distinção entre diferentes grupos de micro-organismos, com base
em características biológicas e/ou na capacidade de metabolizar componentes

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específicos do meio de cultura); outros, como os meios de enriquecimento, meios de
transporte, meios de identificação e meios de conservação.
As principais funções de um meio de cultura são: fornecer condições para o
crescimento de um micro-organismo desejado, tal como a produção de culturas puras;
fornecer condições para a formação de um produto desejado, tal como na produção de
uma enzima obtida de um micro-organismo específico; fornecer condições para o
isolamento e a identificação de espécies de micro-organismos, tal como em análise
microbiológica de águas ou alimentos.
Por outro lado, todas as vidrarias utilizadas nas análises microbiológicas
precisam ser corretamente esterilizadas, a fim de evitar contaminações. A esterilização
compreende a destruição de todas as células viáveis (incluindo esporos) que possam ser
enumeradas por técnicas apropriadas de semeadura. Em alimentos é muito comum
utilizarmos o termo esterilização comercial, indicando a mesma finalidade. A
esterilização compreende processos físicos (calor úmido, seco, filtração e radiação) e
químicos (agentes químicos) (NASCIMENTO<, 2010).

Objetivo
Proporcionar a compreensão sobre os métodos de esterilização e propiciar
conhecimento sobre o preparo de meios de cultura.

Material e métodos
Preparo de meios de cultura

Esterilização de pipetas
- Colocar algodão no bocal da pipeta;
- Enrolar individualmente em papel pardo;
- Enrolar em pacotes separados, identificando a turma, o número e volume das
pipetas;
- Esterilizar em autoclave a 121°C por 15 min.

Esterilização das placas de Petri

- Passar algodão embebido em álcool 70% dentro e fora das placas;
- Enrolar as placas individualmente em papel pardo;
- Enrolar em pacotes separados, identificando a turma e o número de placas;

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 - Esterilizar em autoclave a 121°C por 15 min.

Preparo do caldo YM
- Preparar o caldo YM (Yeast Malt), com a seguinte composição: 10 g/L de
glicose, 5 g/L de peptona, 3 g/L extrato de malte e 3 g/L de extrato de levedura.
- Distribuir o caldo em tubos de ensaio com bucha de algodão. Esterilizar em
autoclave a 121°C por 15 min.

Preparo do ágar YM
- Preparar também o ágar YM, com a mesma composição, mas adicionando
ágar como agente gelificante (20 g/L).
- Aquecer em micro-ondas, parando a cada 30 s para agitar o frasco, até que o
meio esteja completamente dissolvido;
- Tampar o frasco com bucha de algodão e esterilizar em autoclave a 121°C por
15 min.

Expressão dos resultados

Descrever os procedimentos em detalhes. Explicar o funcionamento da
autoclave.

Referências bibliográficas
NASCIMENTO, J.S. Biologia de microrganismos. In. GUERRA, R.A.T. (Org.).
Cadernos CB Virtual 4. João Pessoa: UFPB, 2010, v.4, p.263-358. Disponível em:
http://portal.virtual.ufpb.br/biologia/novo_site/Biblioteca/Livro_4/6-
Biologia_de_Microrganismos.pdf
KALIL, S. Roteiro de aulas práticas de microbiologia de alimentos.