DANIEL LIRA DE LIMA

Atividade 2
Resenha: Agrobacterium infection of hemp (Cannabis sativa L.): establishment
of hairy root cultures

Santo André
2021

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 Daniel Lira de Lima – r.a.:11047414

Atividade 2

Resenha: Agrobacterium infection of hemp (Cannabis sativa L.): establishment

of hairy root cultures

Atividades complementar da disciplina

(NANHZ1009-15SA) Biologia Molecular e
Biotecnologia apresentado ao curso de
graduação da Universidade Federal do ABC,
referente ao curso em Bacharel em
Biotecnologia

Orientadores: Profa. Ana Paula Arêas e Prof.

Sérgio Sasaki

Santo André SP

2021

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Resenha: Agrobacterium infection of hemp (Cannabis sativa L.): establishment
of hairy root cultures

Tradução livre: Infecção por Agrobacterium de cânhamo (Cannabis sativa L.):

estabelecimento de culturas de raízes transformadas (Hairy roots)

Imane Wahby, Juan M. Caba & Francisco Ligero (2013) Agrobacterium infection of
hemp (Cannabis sativa L.): establishment of hairy root cultures, Journal of Plant
Interactions, 8:4, 312-320, DOI: 10.1080/17429145.2012.746399.

O presente artigo de 2013 é um dos primeiros a descrever um sistema de

transformação de cânhamo usando cepas de tipo selvagem de Agrobacterium (A.
tumefaciens e A. rhizogenes abrigando plasmídeos Ti e Ri, respectivamente) ou
cepas desarmadas de A. tumefaciens abrigando os genes pRi1855 TL-DNA rolA, rolB
e rolC, para estabelecer tecidos transformados de forma estável, de forma a testar e
desenvolver protocolos de transformação através da seleção de cepas para produção
de cultura de raízes transformadas (hairy roots).

Assim temos por cultura de raízes transformadas (hairy roots), ou cultura de órgãos
radiculares (COR), o cultivo de raízes de plantas na ausência de parte aérea, o qual
possuí diversas aplicações biotecnológicas, indicados para a produção de
compostos exclusivamente sintetizados em raízes de plantas, esse sistema
permite o crescimento de raízes em condições assépticas, como em biorreatores. P
presente estudo não foca na produção e extração de compostos sintetizados pelas
raízes, mas sim no estabelecimento de cultura de raízes, porém outros estudos
mostram esta uma forma de produção de canabinóides (Farag e Kayser, 2015),
mesmo que de forma não muito eficiente ainda, mas estudos de demais compostos
se mostram promissores.

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O artigo nos traz uma série de referências quanto ao uso de Agrobacterium
rhizogenes na obtenção cultura de raízes transformadas (hairy roots) via infecção de
células vegetais com Agrobacterium rhizogenes contento o plasmídeo Ri T-DNA, para
o desenvolvimento de doenças radiculares, ressaltando a relevância dos genes rolA,
rolB e rolC, localizados no TL-DNA de A. rhizogenes, responsáveis pelo processo de
indução da raiz.

Os autores nos trazem também um levantamento de referências sobre o uso da

cannabis nas suas mais diversas aplicações e diferentes propriedades encontradas
na mesma espécie. Assim temos da Cannabis, sua importância na produção de fibras
de cânhamo, diversas aplicações dos óleos de sementes e compostos químicos de
implicações farmacológicas encontrados em toda a planta, não só como princípios
psicoativos. Outra questão que o artigo traz, que é menos frequente em outras
literaturas é a da cannabis como cultura amiga do ambiente (environmentally friendly
crop), dado alto rendimento com baixos requisitos de agroquímico, passível de
rotação de culturas, potencial para biorremediação de metais pesados e solos
contaminados e biodegradação de hidrocarbonetos.

Para os ensaios foram selecionadas cinco variedades de cânhamo (Cannabis sativa

L.), dada sua variedade de ciclos de vida e aplicações, sendo as variedades Futura77,
Delta-llosa e Delta405, cepas monoicas utilizadas para produção de fibras, já as
cepas CAN0111 e CAN0221, são do tipo droga dioica, principio psicoativo, obtida de
produtores locais (norte de Marrocos). Fora utilizado também Nicotiana tabacum cv.
como controle positivo ao longo do estudo.

Assim o presente trabalho nos detalha todos os procedimentos utilizados visando a

produção de cultura de raízes transformadas destas variedades de cannabis
analisando sua frequência de resposta a infecção, numero e tamanho de raízes, bem
como análise visual dos cultivares. Temos o detalhamento dos procedimentos de
estimulação da virulência de Agrobacterium, acompanhamento do crescimento da
planta e as condições de inoculação utilizadas, bem como procedimentos de
subcultivo, determinação de biossíntese de etileno para correlação com a expressão
de gene rolC, ensaio de coloração para aferir estabilidade do gene da β-glucuronidase
(GUS), por fim análise procedimento de análise PCR.

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Assim por esses ensaios e dados apresentados em tabelas foi possível confirmar
natureza transgênica das culturas, analisando a presença, no genoma da planta via
PCR, dos genes rolB e rolC, raízes, gene ipt, tumor, gene virG, para ausência de
Agrobacterium no material transformado e localização histoquímica da atividade β-
glucuronidase (GUS) nos tecidos radiculares, bem como também foram testadas
quanto à sua capacidade de crescer em meio sem hormônio, resultando assim neste
estudo a elaboração de um protocolo eficiente relatado para a transformação de
Cannabis sativa resultando em culturas de raízes transformadas (hairy roots).

Por fim os autores nos trazem mediante este estudo perspectivas quanto a estes
cultivares na investigação de vias biossintética e produção comercial de metabólitos
secundários, incluindo o THC, mesmo que não analisado neste trabalho, graças a
capacidade biossintética e estabilidade genética e bioquímica das culturas de raízes
transgênicas.

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REFERÊNCIAS

Imane Wahby, Juan M. Caba & Francisco Ligero (2013) Agrobacterium infection of
hemp (Cannabis sativa L.): establishment of hairy root cultures, Journal of Plant
Interactions, 8:4, 312-320, DOI: 10.1080/17429145.2012.746399

Farag, S. e Kayser, O. (2015) Cannabinoids Production by Hairy Root Cultures of

Cannabis sativa L. American Journal of Plant Sciences, 6, 1874-1884. doi:
10.4236/ajps.2015.611188.