LATA et al, 2006 - Identification of IAA-producing endophytic bacteria from micropropagated

Echinacea plants using 16S rRNA sequencing

https://link.springer.com/content/pdf/10.1007/s11240-006-9087-1.pdf

Identificação de bactérias endofíticas produtoras de IAA a partir de plantas Echinacea

micropropagadas usando sequenciamento de rRNA 16S

H. Lata; X.C. Li; B. Silva;, R.M. Moraes; L. Halda-Alija

Resumo

A presença de bactérias latentes é um problema sério em culturas de tecidos vegetais. Embora

os endófitos sejam geralmente benéficos para as plantas in situ, eles podem afetar o
crescimento da cultura nas condições modificadas in vitro. O presente estudo foi realizado
para identificar e caracterizar bactérias endofíticas associadas à planta medicinal Echinacea em
cultura de tecidos. Com base em testes microbiológicos clássicos e análises de rRNA 16S,
verificou-se que bactérias endofíticas associadas a plântulas de Echinacea micropropagadas
assepticamente são representantes de vários gêneros, Acinetobacter, Bacillus, Pseudomonas,
Wautersia (Ralstonia) e Stenotrophomonas. Com base nas análises de TLC e HPLC,
descobrimos que a cepa Pseudomonas stutzeri P3 produz hormônio vegetal auxina (ácido
indol-3-acético, IAA). A resistência aos antibióticos também foi avaliada como fator de
virulência. A maioria das bactérias endofíticas eram resistentes ao antibiótico canamicina, mas
sensíveis ao cloranfenicol. As recomendações para a propagação de culturas in vitro de
Echinacea envolvem a adição de cloranfenicol, tetraciclina e ampicilina, antibióticos que não
causam efeitos colaterais nessas espécies de plantas.

Introdução

Echinaceais é um dos suplementos de ervas mais populares entre o público em geral nos
Estados Unidos (o mercado americano de Equinácea alcançou US $ 33 milhões por ano), e a
popularidade deste remédio se deve ao seu uso no tratamento de infecções e baseado em
seus efeitos imunoestimulantes e antiinflamatórios (Giles et al., 2000; pesquisa de mercado
Fintrac 2001). Nos últimos 70 anos, vários componentes foram identificados como tendo
atividade biológica. É amplamente aceito hoje que os constituintes ativos são agrupados em
compostos lipofílicos insaturados, fenóis de ácido cafeico e categorias de polissacarídeos (Hall,
2003). O gêneroEchinacea é nativo da América do Norte (McGregor, 1968) e, de acordo com
uma revisão recente, Echinacea consiste em dois subgêneros e quatro espécies (Binns et al.,
2002). Um repositório de clones comercialmente importantes micropropagados de Equinácea
foi criado (Lata et al., 2003, 2004) para produzir uma fonte reprodutível de biomassa
padronizada para estudos clínicos. Durante o processo de seleção de nossa planta, bactérias
endo-fíticas associadas a culturas de vitro-estanho de Equinácea foram observadas após vários
ciclos de propagação, ao longo de um período de nove meses. Adotamos a definição de
bactérias endofíticas como aqueles microrganismos que não prejudicam visivelmente o
hospedeiro, vivem na parte interna das plantas e podem ser isolados de tecidos que foram
previamente desinfetados de superfície (Hallmann et al., 1997). A identificação dessas
bactérias é importante para os cultivadores de tecidos vegetais, uma vez que os
hemicroorganismos ganham entrada e sobrevivem em microplantas sem serem detectados
(Thomas, 2004). Embora os endofitos geralmente não sejam prejudiciais às plantas (Baconet
al., 2002) e sejam benéficos para a melhoria da tolerância ao estresse das plantas (Nowak et
al., 1998), eles podem afetar o crescimento da cultura sob condições modificadas in vitro e agir
como vitropath-ogens (Leifert e Cassells, 2001). Alternativamente, eles podem induzir a
modificação mediada por hormônio da resposta de vitrocerâmica (Holland e Polacco, 1994), o
que coloca em questão a reprodutibilidade dos protocolos de cultura de tecidos.
Consequentemente, maior atenção tem sido direcionada a este problema por pesquisadores
que buscam caracterizar e identificar bactérias associadas a plantas com o propósito de
desenvolver terapias antibacterianas para cultura de tecidos vegetais (Leifert et al., 1991). O
objetivo do presente estudo foi identificar e caracterizar bactérias endofíticas associadas à
Equinácea, avaliar sua resistência a aditivos antibióticos (padrões de resistência a antibióticos)
durante a propagação e avaliar sua capacidade de produzir o metabólito secundário IAA.