Traduzido do Inglês para o Português - www.onlinedoctranslator.

com

Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836

Listas de conteúdos disponíveis emScience Direct

Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular

Página inicial do jornal:www.elsevier.com/locate/pmpp

Pseudomonas fluorescensResistência sistêmica induzida mediada por VSMKU3054 em

tomate contraRalstonia solanacearum

P. Suresha, V. Shanmugaiaha,*, Rajakrishnan Rajagopalb, K. Muthusamyc, V. Ramamoorthyd

aDepartamento de Tecnologia Microbiana, Escola de Ciências Biológicas, Madurai Kamaraj University, Madurai, 625 021, Tamil Nadu, Índia
bDepartamento de Botânica e Microbiologia, Faculdade de Ciências, King Saud University, Riyadh, 11451, Arábia Saudita
cDivisão de pastagens e forragens, Instituto Nacional de Ciência Animal, Administração de Desenvolvimento Rural, Cheonan, 31000, Coreia do Sul
dDepartamento de Patologia Vegetal, Colégio Agrícola e Instituto de Pesquisa, Tamil Nadu Agricultural University, Madurai, 625 104, Tamil Nadu, Índia

ARTIGOINFO ABSTRATO

Palavras-chave: As rizobactérias promotoras do crescimento vegetal (PGPR) são potenciais bioagentes para a supressão de várias doenças
resistência induzida transmitidas pelo solo em plantas cultivadas e consideradas uma alternativa viável aos pesticidas químicos. O selecionado
Ralstonia solanacearum
Pseudomonas fluorescensisolado VSMKU3054 é um inóculo de controle biológico eficaz para a supressão da doença de
controle biológico
murcha do tomate incitada porRalstonia solanacearuminduzindo enzimas de defesa da plantaisto é., peroxidase (POX),
Enzimas de defesa vegetal
polifenol oxidase (PPO), lipoxigenase (LOX), fenilalanina amônia-liase (PAL) e teor de fenóis totais. O mais alto nível de enzimas
de defesaisto é., POX, PAL, PPO, LOX e teores de fenóis totais foram observados em mudas de tomate tratadas comP.
fluorescensàs 24h, 36h, 36h, 48h e 24h após a inoculação do desafioR. solanacearum, respectivamente. Considerando que a
aplicação deP. fluorescenssozinho em plantas de tomate também provocou a indução de níveis mais altos de POX, PAL, LOX e
teores totais de fenóis, e um nível moderado de atividade de PPO em comparação com plantas inoculadas com patógenos e
plantas controle. A indução máxima de quatro isoformas proeminentes de PPO foi observada em plantas de tomate após o
tratamento deP. fluorescensVSMKU3054 e desafiado comR. solanacearum. Assim, este estudo mostrou que a indução de
genes relacionados à defesa porP. fluorescensdesempenha um papel importante contra
R. solanacearum.

1. Introdução importância e considerado como um método esperançoso para criar

Murcha do tomateiro provocada porRalstonia solanacearumé uma das
doenças mais destrutivas e economicamente significativas [1,2]. Trouxe cerca de
26% de perda de rendimento da produção de frutas frescas e a perda de
rendimento pode atingir até 91% sob incidência de doença severa [3]. Na Índia, é
um grande constrangimento para a produção de tomate. Pesticidas como
fungicidas à base de cobre, sulfato de estreptomicina e pós de branqueamento
foram usados anteriormente para controlar a doença da murcha do solo do
tomateiro.4,5]. Mas o pesticida químico causa riscos sem adornos ao meio
ambiente e à saúde pública [6,7]. Além disso, o uso de fungicidas químicos no
sistema agrícola para o manejo de doenças de plantas aumenta o custo do cultivo
e também cria problemas residuais de pesticidas em nosso meio ambiente.
Como resultado, há uma necessidade urgente de desenvolver abordagens
alternativas para controlar a doença da murcha do tomateiro sem causar riscos ao
meio ambiente. Nos últimos dias, o método de controle biológico vem ganhando
soluções permanentes para o manejo de doenças e permitir uma agricultura
sustentável [8–11]. Numerosos micróbios da rizosfera, comoPseudomonas
sp.,Bacilosp.,Streptomycessp.,Burkholderiasp. eTrichodermasp. estiveram
envolvidos na resistência sistêmica induzida (ISR), atividade de biocontrole e
promoção do crescimento vegetal [7,12].Pseudomonassp. é um agente de
controle biológico potencial bem conhecido para a supressão de vários
fitopatógenos, e também demonstrou atividade significativa de promoção
do crescimento de plantas através da produção de compostos
antimicrobianos, como 2, 4-diacetilfloroglucinol, fenazina-1-carboxamida,
cianeto de hidrogênio, sideróforo , enzimas líticas, enzimas mediadas por
ISR e hormônios de crescimento vegetal como IAA [2,8,13,14].
A Resistência Sistêmica Induzida (ISR) refere-se ao desenvolvimento da
capacidade de autoproteção em plantas cultivadas contra vários patógenos após o
preparo adequado com organismos não patogênicos, particularmente bactérias e
fungos saprofíticos da rizosfera. micróbios benéficos

Abreviaturas:PGPR, rizobactérias promotoras do crescimento vegetal; ISR, Resistência Sistêmica Induzida; PBS, tampão fosfato salino; OD, Densidade Óptica; UFC, Unidade
Formadora de Colônia; mM, mili molar; μl, Microlitro.
* Autor correspondente.
Endereço de e-mail:shanmugaiahv@gmail.com,shanmugaiah.biological@mkuniversity.org (V. Shanmugaiah).

https://doi.org/10.1016/j.pmpp.2022.101836
Recebido em 5 de dezembro de 2021; Recebido no formulário revisado em 27 de março de 2022; Aceito em 4 de abril de 2022
Disponível online em 10 de abril de 2022
0885-5765/© 2022 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.
P. Suresh et ai. Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836

incluindo vários PGPR desencadeiam resistência sistêmica contra várias
doenças e pragas de insetos. ISR por diferentes PGPR é um dos mecanismos
significativos em sistemas de proteção de plantas contra vários patógenos
fúngicos, bacterianos e virais, aumentando a imunidade da planta.15,16].
Um relatório recente confirmou que ISR parece ser o resultado de vários
mecanismos e são altamente eficazes contra vários patógenos. Tanto a
resistência induzida quanto as respostas foram bem descritas em uma
ampla variedade de plantas com flores.14,17]. A ISR foi relatada em uma
variedade de plantas, incluindo tabaco, tomate, arroz, girassol, feijão, cravo,
pepino e também na planta modeloArabidopsis thaliana[4,7,16,18–20].
As rizobactérias associadas às plantas hospedeiras também aumentam a
biossíntese de enzimas relacionadas à defesa dentro do sistema vegetal. As
células vegetais possuem vias antioxidantes avançadas que envolvem o
acúmulo e a ativação de enzimas relacionadas ao ISR, incluindo LOX, PPO,
POX, PAL, quitinase e β-1,3-glucanase. A produção de enzimas antioxidantes
leva ao espessamento da parede celular e deformação estrutural,
resultando na deposição de calose e acúmulo de compostos fenólicos.19,21
].
A maioria das culturas importantes para a horticultura, especialmente as solanáceas,
como batata, tomate, pimentão e berinjela, são severamente afetadas por
R. solanacearum.PGPR eTrichodermaspp. são agentes de biocontrole bem
conhecidos e implicados na indução de várias enzimas relacionadas à defesa e
agentes antimicrobianos.19,22,23].Pseudomonassp. VSMKU4050 eP. fluorescens
DABBV4 como bacterização de sementes e aplicação no solo melhorou a
germinação das sementes e o índice de vigor [24,25]. Pesquisas anteriores
revelaram queP. fluorescensA atividade enzimática de defesa induzida protegeu
significativamente as plantas de tomate deR. solanacearum[4, 13,22,26].
Pseudomonassp. atividade enzimática de defesa induzida em diferentes plantas,
como a amoreira [27], pepino [28], banana [29,30] e arroz [7,20,31]. O objetivo
deste estudo é realizar uma análise quantitativa de proteínas relacionadas à
defesa e detectar padrões de isoformas de peroxidase e polifenol oxidase
induzidas emP. fluorescensDesafio de plantas de tomate tratadas com
VSMKU3054 inoculadas comR. solanacearum.
seguido de três lavagens com água destilada estéril por 3 min e secagem com
papel absorvente. Em seguida, foram embebidos em 20 ml de suspensão deP.
fluorescens(1 ×108CFU ml−1) misturada com carboximetilcelulose (CMC) 0,2% para
facilitar a aderência de células bacterianas nas sementes de tomate e incubadas
por 12h a 24±2◦C em um agitador rotativo a 120 rpm. Após a incubação, as
sementes foram secas ao ar assepticamente [33]. Sementes de tomate embebidas
em água estéril contendo 0,2% de CMC serviram como controle.
No segundo tratamento, sementes de tomate foram pré-tratadas com
P. fluorescenssuspensão (1×108UFC) por 12h. Eles foram germinados em papel
mata-borrão úmido em placas de Petri de acordo com o procedimento padrão da
International Seed Testing Association (ISTA) (2005). As sementes foram incubadas
a 28±2◦C por 12 dias até que a folha da semente emergisse completamente. As
mudas de tomate com 12 dias de idade foram inoculadas com 20 ml deR.
solanacearumsuspensão (1×108UFC) [22] por imersão das raízes por 20 min e
foram colocados em papel de filtro úmido em placa de Petri (Figura 1).
Mudas de tomate foram inoculadas comR. solanacearumsozinho no terceiro
tratamento. Mudas tratadas apenas com PBS serviram como controle. Mudas de
tomate foram colhidas em 0, 12, 24, 36, 48, 60 e 72h após a inoculação de desafio
para análise de proteínas e produtos químicos relacionados à defesa e as
amostras foram armazenadas a - 80◦C [26]. O teor de proteína total foi
determinado a partir das amostras de acordo com o método de Bradford

2. Materiais e métodos

2.1. Condições de cultura

P. fluorescensVSMKU3054, um potencial isolado antagonista, foi usado

ao longo do experimento. Para a multiplicação em massa, foi cultivado em
meio King's B agar à temperatura ambiente. Patógeno da murcha
bacteriana Ralstonia solanacearumfoi coletado da Indian Type Culture
Collection (ITCC), Conselho Indiano de Pesquisa Agrícola (IARI), Nova Delhi.
Foi cultivada em meio ágar 2,3,5-Trifenil Tetrazolium Chloride (TZC) e
posteriormente subcultivada em meio de cultura líquido caldo tríptico de
soja (TSB). Ambas as culturas foram subcultivadas e mantidas em glicerol a
30% a -80◦C para estudos inteiros.

2.2. Preparação de inóculo bacteriano

P. fluorescensfoi cultivada em caldo King's B por 24 horas a 37◦C. Depois

incubação, as células foram peletizadas a partir do meio de crescimento por
centrifugação do caldo King's B a 12.000 rpm por 10 min a 4◦C. As células
foram limpas com tampão fosfato salino 1X estéril (PBS) e ressuspensas em
PBS e ajustadas para 1×108CFU ml−1espectrofotometricamente a 600 nm. De
forma similar,R. solanacearumcresceu durante a noite em meio TSB. As
células bacterianas foram peletizadas por centrifugação a 12.000 rpm por 10
min e posteriormente as peletes foram dissolvidas em PBS. As células foram
ajustadas para 1×108UFC/ml−1espectrofotometricamente (como um OD
aproximadamente igual a 1×108UFC/ml−1) [22].

2.3. Bacterização de sementes de tomate

Figura 1.Efeito da bacterização de sementes comP. fluorescensVSMKU3054 e

As sementes de tomate (variedade PKM1) susceptíveis à murcha desafio inoculados comR. solanacearumem mudas de tomate (PKM1). A – Controle
bacteriana [32] foram obtidos do Horticultural College & Research Institute, (não tratado), B −P. fluorescensVSMKU3054, C-P. fluorescensVSMKU3054+
Tamil Nadu, Índia. A superfície foi esterilizada com hipoclorito de sódio a 1% R. solanacearum, D-R. solanacearum.

2
P. Suresh et ai.
método.
2.4. Avaliação bioquímica de enzimas e produtos químicos de defesa em mudas de
tomate
2.4.1. Estimativa de POX
Um grama de mudas de tomate foi homogeneizado em 1 ml de tampão
fosfato 10 mM de pH 6,0. O homogeneizado foi centrifugado a 12.000 rpm
por 20 min a 4◦C. O sobrenadante foi usado como fonte de enzima para a
análise de POX. O ensaio POX foi realizado com pequenas modificações,
conforme descrito por Hammerschmidt et al. [34]. A mistura de reação
consistia em 0,25% (v/v) de guaiacol em tampão fosfato de potássio 10 mM
(pH 6,0) contendo peróxido de hidrogênio 10 mM. À mistura reacional, 100
μl de extrato enzimático bruto foram adicionados no mesmo frasco e
incubados à temperatura ambiente. As alterações na absorbância foram
medidas a 420 nm a cada 30 s por 3 min. Alterações na absorbância min-1
mg-1 de proteína foram usadas para calcular a atividade enzimática. Os
experimentos foram realizados duas vezes com três repetições para cada
tratamento [35].
2.4.2. Estimativa de PAL
A versão modificada de Lisker et al. [36] procedimento foi usado para avaliar a
atividade PAL. Um grama de mudas de tomate foi macerado e homogeneizado
com 1 ml de tampão Tris-HCL 25 mM (pH 8,8). O homogeneizado foi centrifugado
a 10.000 rpm por 30 min a 4◦C e o sobrenadante foi usado para ensaio enzimático.
A mistura de reação consistia em 1 ml de extrato de enzima, 0,5 ml de 50 mMeu
-fenilalanina (substrato) e 0,4 ml de tampão Tris-HCL 25 mM (pH 8,8). A reação foi
interrompida pela adição de 0,06 ml de 5 N HCl à mistura de reação após ter sido
incubada por 2h a 40◦C. A absorbância foi medida a 290 nm contra uma mistura de
reação em branco semeu-fenilalanina. A taxa de conversão detrans-- ácido
cinâmico (CA) deeu-fenilalanina foi usada para determinar a atividade enzimática.
Para cada tratamento, três réplicas foram empregadas. Os experimentos foram
realizados duas vezes. A atividade enzimática foi expressa em mol detrans-ácido
cinâmico min−1mg−1proteína [37].
2.4.3. Estimativa de PPO
A atividade da PPO foi medida pelo método de Mayer et al. [38]. 1 g de
mudas de tomate foi homogeneizado em tampão fosfato 10 mM (pH 6,0). A
mistura homogeneizada foi centrifugada a 12.000 rpm por 20 min a 4
◦ R. solanacearumporqueP. fluorescensVSMKU3054 tem o potencial de gerar
C e o sobrenadante foi usado diretamente como fonte de enzima. 1,5 mL
de tampão fosfato de sódio 0,1 M (pH 6,5) e 200 μl de extrato enzimático
foram usados no processo. A reação foi iniciada pela adição de 200 μl de
catecol 10 mM à mistura. Durante 1 min, a taxa de oxidação do catecol foi
medida a 420 nm. Mudanças na absorbância min−1mg−1proteínas foram
usadas para medir a atividade. Para cada tratamento, três réplicas foram
empregadas. Os experimentos foram realizados duas vezes [37].
2.4.4. Estimativa da lipoxigenase (LOX)
A atividade da lipoxigenase foi determinada de acordo com Borthakur et
al. [39]. Um grama de mudas de tomate foi homogeneizado com tampão
fosfato de sódio 0,2 M (pH 6,5). A mistura de reação consistia em 0,05 ml do
extrato enzimático, 2,7 ml de tampão fosfato de sódio 0,2 M (pH 6,5) e 0,3 ml
de ácido linoleico 10 mM em Tween 20. A atividade de LOX foi medida por
espectrofotômetro e observou-se o aparecimento de hidroperóxido de
dieno conjugado em 234 nm. Mudanças na absorbância min−1
mg−1proteína foram usados para medir a atividade [37]. Para cada tratamento,
três réplicas foram empregadas. Os experimentos foram realizados duas vezes.
2.4.5. Estimativa de fenol total
Um grama de mudas de tomate foi homogeneizado com metanol 80%
por 15 min. As mudas de tomate homogeneizadas foram centrifugadas a
12.000 rpm por 20 min a 4◦C. A mistura reacional consistiu de 1 ml de extrato
metanólico, 5 ml de água destilada estéril e 250 μl de reagente Folin
Ciocalteau (1 N). Esta solução foi incubada a 25◦C por 30
3
Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836
min. Após a incubação, a mistura reacional desenvolveu coloração azul
e a absorbância foi medida a 725 nm [35]. A atividade foi medida como
mudanças na absorbância e expressa como μg de catecol−1mg−1
proteína. Para cada tratamento, três réplicas foram empregadas. Os
experimentos foram realizados duas vezes.
2.4.6. Análise PAGE nativa de peroxidase e polifenol oxidase As isoformas de
POX e PPO foram estimadas por eletroforese descontínua em gel de
poliacrilamida nativa (Native-PAGE) de acordo com Laemmli (1970) [40] com
pequenas modificações. As proteínas totais de mudas de tomate foram
extraídas, submetidas a condições não desnaturantes. 50 μl de extratos
brutos foram misturados com o corante azul de bromofenol. Ambas as
amostras tratadas e não tratadas foram coletadas em 24 e 36h para análise
de POX e PPO, respectivamente. A separação eletroforética foi realizada
seguindo o procedimento padrão.
2.4.7. Método de coloração POX e PPO após eletroforese
A isoforma da peroxidase foi detectada pela imersão dos géis em uma solução
corante preparada pela dissolução de 100 mg de benzidina em 1 ml de álcool e,
finalmente, o volume foi completado para 40 ml de água destilada. 500 μl de ácido
acético glacial e 250 μl de H2O2foram adicionados à solução filtrada e os géis
foram incubados na solução até que a banda azul fosse visível [41]. As isoformas
de PPO foram determinadas por géis de agitação rotativa em tampão Tris 50 mM
(pH 6,8) com 500 mg de catecol e 300 mg de L-3,4-di-hidroxifenilalanina (eu-DOPA)
por 20 min até aparecerem faixas pretas [37].
2.4.8. Análise estatística
Os dados das enzimas ISR foram valores médios de três replicações e
analisados por meio da análise de variância (ANOVA) e teste de intervalo múltiplo
de Duncan (DMRT). Os dados são expressos como valores médios±desvio padrão.
Valores médios com letras diferentes diferem significativamente emp= 0,05 de
acordo com DMRT.
3. Resultados
3.1. Indução de resistência por P. fluorescens VSMKU3054 em tomateiro
contra R. solanacearum
P. fluorescensVSMKU3054 notavelmente induzido e aprimorado
capacidade de defesa em termos de genes relacionados à defesa para o controle de
respostas substanciais de defesa da planta. A ativação de genes de defesa
por PGPR é uma técnica única em plantas cultivadas contra o estresse
biótico, além de promover o crescimento da planta e a atividade
antibacteriana. Neste estudo, propõe-se queP. fluorescensVSMKU3054
coloniza na superfície da raiz. O alto nível de moléculas eliciadoras de defesa
presentes na superfície do antagonista pode induzir enzimas de defesa
associadas à planta e proteínas relacionadas à patogêneseisto é., PPO, PO,
LOX, PAL e teores de fenóis totais que estão envolvidos na proteção contra a
murcha do tomateiro. Assim, ilustramos o processo de ISR mediado porP.
fluorescens em plantas de tomate (Fig. 9).
3.2. Estimativa de POX
Após ações microbianas, a atividade de POX atingiu os níveis máximos em
24h. A atividade de POX foi maior em mudas de tomate desafiadas comR.
solanacearumdo que foram tratados comP. fluorescens VSMKU3054 sozinho. No
entanto, a atividade de POX nas mudas de tomate tratadas comP. fluorescens
VSMKU3054 sozinho permaneceu em níveis mais elevados (14,8/Δ470nm/min/mg
de proteína) em comparação com o controle não tratado. Considerando que, a
maior atividade de POX (23,1/Δ470nm/min/mg proteína) foi registrado emP.
fluorescentens mudas de tomate tratadas com VSMKU3054 seguidas por desafio-
inoculado comR. solanacearum(Figura 2).
P. Suresh et ai.
Figura 2.Atividade da peroxidase (POX) em mudas de tomateiro submetidas a diferentes
tratamentos. Controle (mudas de tomate tratadas com água destilada estéril); RS -
(Mudas de tomate inoculadas comR. solanacearum);P. fluorescens(Mudas de tomate
inoculadas comP. fluorescensVSMKU3054);P. fluorescens+RS (mudas de tomate tratadas
comP. fluorescensVSMKU3054 e inoculado por desafio com
R. solanacearum. As letras acima da barra indicam valores significativamente diferentes
(P = 0,05, análise DMRT).
3.3. Estimativa de PAL
P. fluorescensDesafio de mudas de tomate tratadas com VSMKU3054
inoculado comR. solanacearummostrou atividade de PAL aumentada. A
atividade máxima de PAL (41,07 μ.moltrans-ácido cinâmico/min/mg
proteína) foi observado 36h após a inoculação emP. fluorescensMudas
pré-tratadas com VSMKU3054 seguidas de desafio inoculado com
R. solanacearum.Considerando que, mudas inoculadas comR. solanacearum
sozinho mostrou menor atividade de PAL (29,73 μ.moltrans-ácido cinâmico/min/
mg de proteína) e mudas tratadas comP. fluorescensVSMKU3054 sozinho
permaneceu maior atividade PAL (34,67 μ.moltrans-ácido cinâmico/min/mg de
proteína) em comparação com o controle (Fig. 3).
3.4. Estimativa de PPO
A atividade da PPO foi observada em níveis mais elevados emP. fluorescens
mudas de tomate tratadas e desafiadas com o patógeno às 36h (42,33 Δ A420nm/
min/mg de proteína) após a inoculação do patógeno em comparação com o
controle. No entanto, a atividade de PPO (37,47 Δ A420nm/min/ mg de proteína)
emR. solanacearummudas de tomate tratadas sozinhas permaneceram
ligeiramente mais altas do que as mudas que foram tratadas comP. fluorescens
VSMKU3054 sozinho (Fig. 4).
Figura 3.Atividade da fenilalanina amônia-liase (PAL) em mudas de tomateiro
submetidas a diferentes tratamentos. Controle (mudas de tomate tratadas com
água destilada estéril); RS - (Mudas de tomate inoculadas comR. solanacearum);P.
fluorescens (Mudas de tomate inoculadas comP. fluorescensVSMKU3054);P.
fluorescens+ RS (mudas de tomate tratadas comP. fluorescensVSMKU3054 e
desafio inoculado comR. solanacearum.As letras acima da barra representam
valores significativamente diferentes (P = 0,05, teste DMRT).
4
Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836
3.5. Estimativa de LOX
O nível máximo de atividade de LOX foi observado em níveis mais altos em
P. fluorescensmudas de tomate tratadas com desafio inoculado com o patógeno
em 48h (49 Δ A234nm/min/mg de proteína) após a inoculação do patógeno.
Considerando que a atividade LOX moderada (42,6 Δ A234nm/min/mg proteína) foi
observada em mudas de tomate tratadas comP. fluorescens sozinho. No entanto,
o baixo nível de atividade da LOX (32,86 Δ A234nm/min/mg de proteína) foi obtido
emR. solanacearummudas de tomate tratadas sozinhas (Fig. 5).
3.6. Teor total de fenóis
O teor máximo de fenólicos (84,5 μg de catecol/min/mg proteína)
foi observado às 24h em mudas de tomate induzidas com
P. fluorescensseguida de inoculação-desafio comR. solanacearum. Mudas de
tomate inoculadas com oP. fluorescensO VSMKU3054 sozinho também
registrou o nível mais alto (69,16 μg de catecol/min/mg de proteína) de
acúmulo de conteúdo fenólico em comparação comR. solanacearummudas
de tomate inoculadas sozinhas e mudas de controle (Fig. 6).
4. Análise da isoenzima POX e PPO por PAGE nativa
A expressão de POX foi examinada em amostras de proteínas de mudas
de tomate. POX1, POX2, POX3 e POX4 são quatro isoformas de POX
identificadas pela análise PAGE nativa. A expressão das isoformas POX3 e
POX4 foi maior em mudas de tomate inoculadas comP. fluorescense
R. solanacearum. A intensidade das bandas detectadas em mudas de tomate tratadas
comP. fluorescenssozinho ou tratado comR. solanacearum sozinho permaneceu em
níveis mais baixos. Os extratos proteicos das plantas controle apresentaram apenas 2
isoenzimas quando comparados aos outros tratamentos (Fig. 7).
A eletroforese em gel de PAGE nativa foi usada para examinar a expressão de
isoformas de PPO em mudas de tomate. Houve diferença nos níveis de expressão
das isoformas de PPO entre mudas de tomate tratadas com
P. fluorescense inoculado por desafio comR. solanacearum, mudas tratadas
comP. fluorescenssozinho, mudas tratadas comR. solanacearum sozinho, e
plantas de controle. Em comparação com mudas de controle, mudas
geradas a partir deP. fluorescensTratamento VSMKU3054 e desafio
inoculado comR. solanacearum(T1) exibiu quatro isoformas de PPO: PPO1,
PPO2, PPO3 e PPO4 e resultou em níveis mais altos de isoformas de PPO3 e
PPO4. Apenas duas isoformas de PPO foram detectadas nas plantas controle
e foram expressas em níveis de intensidade mais baixos em comparação
com outros tratamentos (T1–T3). (Fig. 8).
5. Discussão
micróbios associados à rizosfera, comoPseudomonasspp.,Streptomycesspp.,
Bacilospp. eTrichodermaspp. interagiu significativamente com sistemas de plantas
por mecanismos diretos e indiretos para o controle de várias doenças de plantas e
suporte notável para o crescimento das plantas [10,24, 42,43]. Entre várias
rizobactérias,Pseudomonasspp. controlou significativamente várias doenças de
plantas, como brusone e queima da bainha do arroz, queima precoce das folhas e
mancha foliar do tomateiro e murcha do tomate [4,7,44,45] através do ISR. Por
isso,P. fluorescensé uma abordagem atual para a supressão de patógenos
transmitidos pelo solo. Nosso relatório anterior foi confirmado queP. fluorescens
VSMKU3054 significativamente controlado
R. solanacearume outros patógenos fúngicos transmitidos pelo solo pela
produção de vários compostos antimicrobianos, como 2,4-
diacetilfloroglucinol, pioleuterina, sideróforo, cianeto de hidrogênio,
enzimas hidrolíticas e hormônio de crescimento vegetal IAA [2,46].
Neste estudo, percebemos queP. fluorescensVSMKU3054 induziu ISR
contraR. solanacearumativando enzimas de defesa como POX, PPO, PAL,
LOX e teor de fenóis totais. Nossos resultados são concordantes com o
relatório anterior [7,22] mostrandoP. fluorescenseP. aeruginosa VMKU2
induziu mecanismo de defesa próprio da planta, como ISR, para o controle
da murcha do tomateiro e queima da bainha do arroz. O presente estudo
P. Suresh et ai. Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836

Figura 4.Atividade da polifenol oxidase (PPO) em

mudas de tomate com diferentes tratamentos. Controle
(mudas de tomate tratadas com água destilada estéril);
Ralstonia solanacearum(RS) - (Mudas de tomate
desafiadas comR. solanacearum); Cultura (mudas de
tomate inoculadas comP. fluorescensVSMKU3054);
Cultura + RS (mudas de tomate inoculadas com
P. fluorescensVSMKU3054 +R. solanacearumem
intervalo de tempo diferente. As letras acima da barra
indicam valores significativamente diferentes (P = 0,05,
análise DMRT).

Fig. 5. Lipoxigenase(LOX) em mudas de tomate com

diferentes tratamentos. Controle (mudas de tomate
tratadas com água destilada estéril); RS - (Mudas de
tomate inoculadas comR. solanacearum);
P. fluorescens(Mudas de tomate inoculadas com
P. fluorescensVSMKU3054);P. fluorescens+RS (mudas de
tomate tratadas comP. fluorescens
VSMKU3054 e inoculado por desafio com
R. solanacearum.As letras acima da barra indicam
valores significativamente diferentes (P = 0,05, análise
DMRT).

Figura 6.Compostos fenólicos totais em mudas de tomateiro submetidas a diferentes tratamentos. Controle (mudas de tomate tratadas com água destilada estéril); RS -
(Mudas de tomate inoculadas comR. solanacearum);P. fluorescens(Mudas de tomate inoculadas comP. fluorescensVSMKU3054);P. fluorescens+RS (mudas de tomate
tratadas comP. fluorescensVSMKU3054 e inoculado por desafio comR. solanacearum.As letras acima da barra indicam valores significativamente diferentes (P = 0,05,
análise DMRT).

5
P. Suresh et ai.
Figura 7.Análises PAGE nativas de isoformas de peroxidase (POX) em mudas de
tomate com vários tratamentos. 1 - Cultura (mudas de tomate inoculadas com
P. fluorescensVSMKU3054); 2-Ralstonia solanacearum(RS) - (Mudas de tomate
desafiadas comR. solanacearum); 3 - Controle (mudas de tomate tratadas com
água destilada estéril); 4 - Cultura + RS (mudas de tomate inoculadas com
P. fluorescensVSMKU3054 +R. solanacearum).
Figura 8.Análises PAGE nativas de isoformas de polifenol oxidase (PPO) em mudas
de tomate com vários tratamentos. 1 - Cultura + RS (mudas de tomate inoculadas
comP. fluorescensVSMKU3054 +R. solanacearum); 2 - Cultura (mudas de tomate
inoculadas comP. fluorescensVSMKU3054); 3-Ralstonia solanacearum(RS) - (Mudas
de tomate desafiadas comR. solanacearum); 4 - Controle (mudas de tomate
tratadas com água destilada estéril).
revelou que todas as cinco enzimas de defesa foram aumentadas na indução da
planta de tomate porP. fluorescensmediante inoculação de desafio com
R. solanacearum.
A peroxidase (POX) é uma enzima importante para a biossíntese de
lignina. A produção de POX é favorável aos tecidos vegetais e não permite a
entrada de patógenos nas plantas. Além disso, pode aumentar o estresse
oxidativo através da produção de peroxidação lipídica, resultando na parada
do patógeno.7,26]. No presente estudo, a maior atividade da peroxidase foi
registrada 24 horas após a inoculação (hpi) em
P. fluorescensMudas de tomate tratadas com VSMKU3054
inoculado por desafio comR. solanacearum.
O estudo atual indicou que a atividade de PAL foi aumentada em
6
Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836
mudas de tomate tratadas comP. fluorescenspara que a entrada e
colonização deR. solanacearumpoderia ser evitada em mudas de tomate.
PAL está envolvido na via fenilpropanóide que, em última análise, leva à
biossíntese de lignina. Além disso, a formação de lignina agrava o
mecanismo de defesa e fortalece as células vegetais contra a infecção pelo
patógeno.7]. O presente estudo revelou que níveis mais altos de atividade
de PAL foram observados emP. fluorescensMudas de tomate tratadas com
VSMKU3054 desafiadas com o patógeno que atingiram o nível máximo 36h
após a inoculação do desafio. As mudas de tomate tratadas com
P. fluorescensVSMK3054 sozinho mostrou um nível moderado de atividade de PAL
em 36h, mas é maior do que as mudas de tomate tratadas com patógeno. Vanitha
e Umesha [22] demonstraram o nível máximo de atividade PAL emP. fluorescens
Mudas pré-tratadas com DABBV4 desafiadas com oR. solanacearumàs 12h após a
inoculação. Posteriormente, a menor atividade de PAL foi encontrada em mudas
inoculadas apenas com o patógeno. Esses resultados são altamente concordantes
com nossos achados. Estudos anteriores relataram queP. fluorescensRaízes de
tomate tratadas com Pf1 desafiadas com o Fusarium oxysporumfsplycopersici.
mostraram aumento da atividade de PAL no 4º dia após a inoculação do patógeno
[28]. O nível mais alto de PAL foi relatado em muitas plantas, como patchouli e
arroz.7,47]. A enzima PAL desempenha um papel importante na produção de
compostos fenólicos e fitoalexinas no pepino. Polifenol oxidases (PPO), oxidam
fenólicos a quinonas que são mais tóxicos do que fenólicos para patógenos. A
atividade da PPO foi aumentada em mudas de tomate tratadas comP. fluorescens
VSMKU3054 e inoculado por desafio comR. solanacearuma 36 hpi em comparação
com o controle e outros tratamentos. Konappa et ai. [35] relatou que a atividade
de PPO foi significativamente aumentada em 32 hpi em mudas tratadas com
bactérias láticas (LAB) inoculadas comR. solanacearum. Xie et al. [47] sugeriram
que altos níveis de atividade de PPO foram encontrados nas folhas superiores e
nas hastes inferiores 48h após a inoculação do desafio com
R. solanacearumem plantas de patchouli.
A LOX é a enzima fisiológica mais importante envolvida no crescimento,
desenvolvimento e indução da atividade de defesa contra doenças de
plantas.48,49]. Além disso, essas enzimas iniciam a atividade metabólica de
defesa da planta devido à biossíntese de diferentes metabólitos
antimicrobianos. A LOX está envolvida na biossíntese do ácido jasmônico e
outras oxilipinas antimicrobianas.50,51]. Em nosso estudo, a atividade de
LOX foi observada ao nível máximo em mudas de tomate pré-tratadas
inoculadas comP. fluorescensVSMKU3054 e desafiado com
R. solanacearuma 48 hpi. Vanitha e Umesha [22] estudaram que a atividade LOX
era níveis mais altos em 9 hpi emP. fluorescensMudas tratadas com DABBV4 e
desafiadas comR. solanacearum. Os maiores níveis de LOX foram observados em
plantas de tomate tratadas comPseudomonas putidaBTP1 e inoculado com
Bacillus cinereadevido a uma expressão aumentada de transcritos das duas
isoformas Lox, nomeadamente TomLoxD e TomLoxF [19, 52]. Estudos anteriores
mostraram que as sementes tratadas com rizobactérias resultaram em aumento
da atividade de LOX em extratos de folhas de plantas de tomate [53].
Os compostos fenólicos são de natureza fungitóxica. O teor de fenóis
totais foi aumentado em mudas de tomate tratadas comP. fluorescens
VSMKU3054 e inoculado por desafio comR. solanacearumta 24 hpi. Ao
mesmo tempo, um nível moderado de teor de fenóis foi observado em
P. fluorescensMudas de tomate tratadas sozinhas com VSMKU3054. No entanto,
uma quantidade muito menor de teor de fenóis foi observada em mudas de
tomate tratadas com patógenos. Nossas descobertas estão de acordo com as de
Anita e Samiyappan [54], que relataram que a indução de raízes de arroz com
rizobactérias resultou em alta quantidade de fenol. Anand et al. [4] afirmou que o
teor de fenóis totais foi aumentado emPseudomonasplantas tratadas seguidas de
desafio inoculado comA. solanieS. lycopersici. Portanto, os conteúdos fenólicos
são conhecidos como potentes metabólitos antimicrobianos contra vários
patógenos.
Em nosso estudo, a análise de PAGE nativa exibiu quatro isoformas de
POX1 – POX4 a 24 hpi comR. solanacearum. A isoforma POX1 apresentou
intensidade de bandamento proeminente em mudas de tomate tratadas com
P. fluorescense inoculado por desafio comR. solanacearum. Xie et al. (2017)
relataram que três isoformas de POX foram observadas no patchouli
P. Suresh et ai.
Figura 9.A ilustração representaP. fluorescensVSMKU3054 induziu ISR contraR. solanacearumem plantas de tomate.
plantas tratadas comR. solanacearumem diferentes intervalos de tempo. Kavitha e
Umesha [37], isoformas de peroxidase previamente estudadas em mudas de
tomate desafiadas comXanthomonas axonopodispv.vesicatóriaa 15 hpi. A análise
de PAGE nativa mostrou quatro isoformas de PPO em níveis de intensidade mais
altos emP. fluorescensmudas de tomate tratadas em comparação com o controle.
A expressão de nível mais alto de isoenzimas PPO foi observada em plantas de
tomate tratadas comP. fluorescensseguido pela
inoculado por desafio comF. oxysporumf. sp.lycopersici[26]. Recentemente, Arasu
et al. [55] relataram que os potenciais bioativos do extrato da planta em
patógenos causadores de doenças em plantas de tomate.
6. Conclusão
O presente estudo mostrou que o isolado selecionadoP. fluorescens
VSMKU3054 induziu proeminentemente várias reações de defesa que
poderiam tornar as plantas resistentes à entrada e multiplicação de
R. solanacearum. O nível de expressão de POX e PPO foi maior em comparação com
plantas de tomate tratadas com patógeno sozinho e plantas de tomate controle. Como
resultado,P. fluorescensO VSMKU3054 pode ser explorado como um potencial agente de
biocontrole para o controle ambientalmente amigável da doença da murcha do
tomateiro.
Declaração do autor
Suresh P realizou as atividades de pesquisa, escreveu o Manuscrito.
Dr. Rajakrishnan Rajagopal, Karnan M e Dr. Ramamoorthy, V editaram
o manuscrito e conceberam o manuscrito. Dr. Shanmugaiah V
participou da concepção da pesquisa, orientação e correções do
manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
Declaração de interesse concorrente
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes
conhecidos ou relacionamentos pessoais que possam parecer influenciar o
trabalho relatado neste artigo.
7
Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836
Reconhecimento
Os autores agradecem imensamente à UGC-BSR Meritorious Fellowship,
UGC-NRCBS Program e RUSA MKU - Project (File.No. 011/RUSA/MKU/
2021-2022), Nova Delhi, Índia, pelo apoio financeiro fornecido para a
conclusão deste trabalho de pesquisa. Os autores também reconhecem o
Projeto de Apoio aos Pesquisadores nº: RSP2022R465, King Saud University,
Riyadh, Arábia Saudita, pelo financiamento desta pesquisa.
Referências
[1] TR Elsayed, S. Jacquiod, EH Nour, SJ Sørensen, K. Smalla, Biocontrole da doença da
murcha bacteriana por meio de interação complexa entre planta de tomate,
antagonistas, microbiota nativa da rizosfera eRalstonia solanacearum, Frente.
Microbiol. 10 (2020) 1–15,https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.02835.
[2] P. Suresh, G. Varathraju, V. Shanmugaiah, KS Almaary, YB Elbadawi,
A. Mubarak, Purificação parcial e caracterização de 2,4-diacetilfloroglucinol produzindo
Pseudomonas fluorescensVSMKU3054 contra a doença da murcha bacteriana do
tomateiro, Saudi J. Biol. ciência 28 (2021) 2155–2167,https://doi.org/10.1016/j.
sjbs.2021.02.073.
[3]RB Artal, C. Gopalakrishnan, B. Thippeswamy, Um método de inoculação eficiente para selecionar
entradas de tomate, berinjela e pimenta para resistência à murcha bacteriana, Pest Manag. Hortic.
Ecossistema. 18 (2012) 70–73.
[4] T. Anand, A. Chandrasekaran, S. Kuttalam, T. Raguchander, V. Prakasam,
R. Samiyappan, Associação de algumas atividades enzimáticas de defesa da planta com
resistência sistêmica à ferrugem precoce e mancha foliar induzida em plantas de tomate
por azoxistrobina ePseudomonas fluorescens, J. Plant Interact. 2 (2007) 233–244, https://
doi.org/10.1080/17429140701708985.
[5] S. Gomathinayagam, N. Balasubramanian, V. Shanmugaiah, M. Rekha, P. T,
D. Lalithakumari, Caracterização molecular da resistência ao carbendazim do patógeno
vegetal (Bipolaris oryzae), Fúngica. - Benef. Nocivo Asp. (2011),https://doi.org/
10.5772/29115.
[6] PB Rainey, ER Moxon, Quando ser hiperativo mantém você em forma, Science 288 (2000)
1186–1187,https://doi.org/10.1126/science.288.5469.1186.
[7] K. Nithya, V. Shanmugaiah, N. Balasubramanian, S. Gomathinayagam, Enzimas
relacionadas à defesa de plantas em arroz (Oryzae satival.,) induzida porPseudomonas
sp VsMKU2, J. Pure Appl. Microbiol. 13 (2019) 1307–1315,https://doi.org/10.22207/
JPAM.13.3.02.
[8] K. Nagorska, M. Bikowski, M. Obuchowski, comportamento multicelular e produção de uma
ampla variedade de substâncias tóxicas suportam o uso deBacillus subtiliscomo um
poderoso agente de biocontrole, Acta Biochim. pol. 54 (2007) 495–508,https://doi.org/
10.18388/abp.2007_3224.
[9] V. Shanmugaiah, N. Mathivanan, B. Varghese, Purificação, estrutura cristalina e atividade
antimicrobiana da fenazina-1-carboxamida produzida por uma bactéria biocontroladora
promotora do crescimento,Pseudomonas aeruginosaMML2212, J. Appl. Microbiol. 108
(2010) 703–711,https://doi.org/10.1111/j.1365-2672.2009.04466.x.
P. Suresh et ai.
[10] H. Harikrishnan, V. Shanmugaiah, N. Balasubramanian, MP Sharma, S.
O. Kotchoni, potencial antagônico da cepa nativaStreptomyces aurantiogriseus
VSMGT1014 contra a ferrugem da bainha da doença do arroz, World J. Microbiol.
Biotecnologia. 30 (2014) 3149–3161,https://doi.org/10.1007/s11274-014-1742-9.
[11] G. Varatharaju, K. Nithya, P. Suresh, M. Rekha, N. Balasubramanian,
S. Gomathinayagam, PT Manoharan, V. Shanmugaiah, propriedades de biocontrole
e caracterização funcional da rizobactéria do arrozpseudomonassp. VsMKU4036, J.
Pure Appl. Microbiol. 14 (2020) 1545–1556,https://doi.org/10.22207/JPAM.14.2.53.
[12] R. Singh, BP Singh, A. Singh, UP Singh, RS Kureel, Manejo da ferrugem da bainha do arroz
por meio da aplicação de validamicina,Trichoderma harzianume Fluorescência de
Pseudomonas, J. Appl. Nat. ciência 2 (2010) 121–125,https://doi.org/10.31018/
jans.v2i1.110.
[13] F. Sarafraz Nikoo, N. Sahebani, H. Aminian, L. Mokhtarnejad, R. Ghaderi, Indução de
resistência sistêmica e enzimas relacionadas à defesa em plantas de tomate usando
Pseudomonas fluorescensCHAO e ácido salicílico contra nematoide das galhas
Meloidogyne javanica, J. Plant Protect. Res. 54 (2014) 383–389,https://doi.org/ 10.2478/
jppr-2014-0057.
[14] K. Nithya, S. Vellasamy, B. Natesan, MP Sharma, DA Al Farraj, MS Elshikh,
Characterization of antifungal metabolite phenazine from rice rhizosphere
fluorescent pseudomonads (FPs) and their effect on sheath blight of rice, Saudi J.
Biol. ciência 27 (2020) 3313–3326,https://doi.org/10.1016/j.sjbs.2020.10.007.
[15] GE Vallad, RM Goodman, resistência sistêmica adquirida e resistência sistêmica
induzida na agricultura convencional, Crop Sci. 44 (2004) 1920–1934.https://
doi:10.2135/cropsci2004.1920.
[16] Z. Jabeen Rais, F. Shair, FY Hafeez, MN Hassan,Bacilospp., um agente de biocontrole
aumenta a atividade de enzimas de defesa antioxidante em arroz contraPyricularia oryzae
, PLoS One 12 (2017), e0187412,https://doi.org/10.1371/journal. pone.0187412.
[17]R. Karban, IT Baldwin, Respostas Induzidas à Herbivoria, Chicago Press, Chicago,
1997, p. 5663.
[18] BR Solano, JB Maicas, MTP De Iglesia, J. Domenech, FJG Mañero, U. San,
P. Ceu, F. De Farmacia, PO Box, B. Monte, proteção contra doenças sistêmicas provocada
por cepas de rizobactérias promotoras de crescimento vegetal: relação entre respostas
metabólicas, Syst. Dis. Proteger. Biotic Elicitors 98 (2008) 451–457,https://doi.org/ 10.1094/
PHYTO-98-4-0451.
[19] H. Kurabachew, K. Wydra, Indução de resistência sistêmica e enzimas relacionadas à defesa
após indução de resistência por rizobactérias e aplicação de silício contraRalstonia
solanacearumem tomate (Solanum lycopersicum), Proteção de Cultivos. 57 (2014) 1–7,
https://doi.org/10.1016/j.cropro.2013.10.021.
[20] M. Ashajyothi, A. Kumar, N. Sheoran, P. Ganesan, R. Gogoi, GK Subbaiyan,
R. Bhattacharya, pimenta preta (Piper nigrumL.) endofítico associadoPseudomonas putida
BP25 altera fenótipo da raiz e induz defesa em arroz (Oryza sativaL.) contra a doença
blástica induzida porMagnaporthe oryzae, Biol. Controle 143 (2020), 104181,https://
doi.org/10.1016/j.biocontrol.2019.104181.
[21] C. Bhattacharyya, S. Banerjee, U. Acharya, A. Mitra, I. Mallick, A. Haldar,
S. Haldar, A. Ghosh, A. Ghosh, Avaliação das propriedades de promoção do crescimento
vegetal e indução do mecanismo de defesa antioxidante por rizobactérias do chá de
Darjeeling, Índia, Sci. Rep. 10 (2020) 1–19,https://doi.org/10.1038/s41598-020-72439-z.
[22] SC Vanitha, S. Umesha,Pseudomonas fluorescensresistência sistêmica mediada em
tomate é impulsionada por uma síntese elevada de enzimas de defesa, Biol.
Plantar. (Praga) 55 (2011) 317–322,https://doi.org/10.1007/s10535-011-0045-3.
[23] R. Jayalakshmi, R. Oviya, K. Premalatha, ST Mehetre, M. Paramasivam,
R. Kannan, M. Theradimani, MS Pallavi, PK Mukherjee, V. Ramamoorthy, Produção,
estabilidade e degradação deTrichodermagliotoxina em meio de crescimento,
água de irrigação e solo agrícola, Sci. Rep. 11 (2021) 1–14,https://doi.org/ 10.1038/
s41598-021-95907-6.
[24] R. Kalimuthu, P. Suresh, G. Varatharaju, N. Balasubramanian, KM Rajasekaran,
V. Shanmugaiah, Isolamento e caracterização de ácido indol acético (IAA) produtor de
rizobactéria de tomatePseudomonassp VSMKU4050 e seu potencial para promoção do
crescimento vegetal, Int. J. Curr. Microbiol. Appl. ciência 8 (2019) 443–455, https://doi.org/
10.20546/ijcmas.2019.806.050.
[25] SC Vanitha, SR Niranjana, CN Mortensen, S. Umesha, Murcha bacteriana do
tomateiro em Karnataka e seu manejo porPseudomonas fluorescens, BioControl
54 (2009) 685–695,https://doi.org/10.1007/s10526-009-9217-x.
[26] V. Ramamoorthy, T. Raguchander, R. Samiyappan, Indução de proteínas relacionadas à
defesa em raízes de tomate tratadas comPseudomonas fluorescensPf1 eFusarium
oxysporumf. sp.lycopersici, Plant Soil 239 (2002) 55–68,https://doi.org/10.1023/
R:1014904815352.
[27] P. Ganeshamoorthi, T. Anand, V. Prakasam, M. Bharani, N. Ragupathi,
R. Samiyappan, Bioconsórcios rizobacterianos promotores do crescimento vegetal (PGPR) medeiam
a indução de proteínas relacionadas à defesa contra a infecção do patógeno da podridão radicular
em plantas de amoreira, J. Plant Interact. 3 (2008) 233–244,https://doi.org/
10.1080/17429140802088097.
[28] C. Chen, RR Bélanger, N. Benhamou, TC Paulitz, Enzimas de defesa induzidas em raízes de
pepino por tratamento com rizobactérias promotoras de crescimento vegetal (PGPR) e
Pythium aphanidermatum, Fisiol. Mol. Plant Pathol. 56 (2000) 13–23,https://doi.org/
10.1006/pmpp.1999.0243.
[29]T. Saravanan, R. Bhaskaran, M. Muthusamy,Pseudomonas fluorescensinduziu alterações
enzimológicas em raízes de bananeira (Cv. Rasthali) contra a murcha de Fusarium,
Plant Pathol. J. (2004).
[30] M. Kavino, S. Harish, N. Kumar, D. Saravanakumar, R. Samiyappan, Indução de resistência
sistêmica em bananeira (Musa spp.) Contra o vírus Banana Bunky Top (BBTV)
combinando quitina com colonização de raízesPseudomonas fluorescensestirpe CHA0,
8
Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836
EUR. J. Plant Pathol. 120 (2008) 353–362,https://doi.org/10.1007/
s10658-007-9223-8.
[31] R. Nandakumar, S. Babu, R. Viswanathan, T. Raguchander, R. Samiyappan, Indução de
resistência sistêmica em arroz contra a doença da queima da bainha por Pseudomonas
fluorescens, Biol do Solo. Bioquim. 33 (2001) 603–612,https://doi.org/ 10.1016/
S0038-0717(00)00202-9.
[32] A. Balamurugan, A. Kumar, M. Muthamilan, K. Sakthivel, M. Vibhuti,
M. Ashajyothi, N. Sheoran, A. Kamalakannan, A. Shanthi, T. Arumugam, Surto de murcha
de tomate causada porRalstonia solanacearumem Tamil Nadu, Índia e elucidação de sua
relação genética usando tipagem de sequência multilocus (MLST), Eur. J. Plant Pathol. 151
(2018) 831–839,https://doi.org/10.1007/s10658-017-1414-3.
[33] JH Guo, HY Qi, YH Guo, HL Ge, LY Gong, LX Zhang, PH Sun, Biocontrol of tomato wilt
by plant growth-promoting rhizobacteria, Biol. Controle 29 (2004)
66–72,https://doi.org/10.1016/S1049-9644(03)00124-5.
[34] R. Hammerschmidt, EM Nuckles, J. Kuc, Associação de atividade de peroxidase
aumentada com resistência sistêmica induzida de pepino aColletotrichum
lagenarium, Fisiol. Plant Pathol. 20 (1982) 73–82,https://doi.org/
10.1016/0048-4059(82) 90025-X.
[35] NM Konappa, M. Maria, F. Uzma, S. Krishnamurthy, SC Nayaka, SR Niranjana,
S. Chowdappa, bactérias do ácido láctico mediaram a indução de enzimas de defesa para
aumentar a resistência do tomate contraRalstonia solanacearumcausando murcha
bacteriana, Sci. Hortic. (Amst.) 207 (2016) 183–192,https://doi.org/10.1016/j.
cienta.2016.05.029.
[36] N. Lisker, L. Cohen, E. Chalutz, Y. Fuchs, infecções fúngicas suprimem a atividade
da fenilalanina amônia-liase induzida por etileno em toranjas, Physiol. Plant
Pathol. 22 (1983) 331–338,https://doi.org/10.1016/S0048-4059(83)81020-0.
[37] R. Kavitha, S. Umesha, Regulação de enzimas relacionadas à defesa associadas à
resistência à mancha bacteriana em tomate, Phytoparasitica 36 (2008) 144–159,https://
doi.org/10.1007/BF02981327.
[38] AM Mayer, E. Harel, R. Ben-Shaul, Ensaio de catecol oxidase - uma comparação
crítica de métodos, Phytochemistry 5 (1966) 783–789,https://doi.org/ 10.1016/
S0031-9422(00)83660-2.
[39] A. Borthakur, BG Bhat, CS Ramadoss, As especificidades posicionais da oxigenação
do ácido linoléico catalisada por duas formas de lipoxigenase isoladas do grama
de Bengala (Cicer arietinum), J. Biosci. 11 (1987) 257–263,https://doi.org/10.1007/
BF02704676.
[40] UK Laemmli, Clivagem de proteínas estruturais durante a montagem da cabeça do
bacteriófago T4, Nature 227 (1970) 680–685,https://doi.org/10.1038/ 227680a0.
[41] J. Schrauwen, Nachweis von Enzymen nach elektrophoretischer Trennung an
Polyacrylamid-säulchen, J. Chromatogr. A 23 (1966) 177-180,https://doi.org/
10.1016/S0021-9673(01)98667-4.
[42] B. Mohite, Isolamento e caracterização de ácido indol acético (IAA) produzindo bactérias de
solo rizosférico e seu efeito no crescimento de plantas, J. Soil Sci. Planta Nutr. 13 (2013)
638–649,https://doi.org/10.4067/S0718-95162013005000051.
[43] WIA Saber, KM Ghoneem, YM Rashad, AA Al-Askar,Trichoderma Harzianum WKY1:
um produtor de ácido indol acético para melhoria do crescimento e controle da
doença antracnose em sorgo, Biocontrol Sci. Tecnol. 27 (2017) 654-676,https://
doi.org/10.1080/09583157.2017.1321733.
[44] D. De Vleesschauwer, M. Djavaheri, PAHM Bakker, M. Höfte,Pseudomonas fluorescens
Resistência sistêmica induzida por WCS374r em arroz contraMagnaporthe oryzaebaseia-
se no priming mediado por pseudobactina para uma resposta de defesa multifacetada
reprimível por ácido salicílico, Plant Physiol. 148 (2008) 1996–2012,https://doi. org/
10.1104/pp.108.127878.
[45] S. Fátima, T. Anjum, Identificação de um potencial determinante ISRde pseudomonas
aeruginosaPM12 contra murcha de fusarium em tomateiro, Front. Plant Sci. 8 (2017) 1–14,
https://doi.org/10.3389/fpls.2017.00848.
[46] P. Suresh, S. Vellasamy, KS Almaary, TM Dawoud, YB Elbadawi, Pseudomonas fluorescentes
(FPs) como potencial biocontrole e agente promotor de crescimento de plantas associado
à rizosfera de tomate, J. King Saud Univ. ciência 33 (2021), 101423, https://doi.org/
10.1016/j.jksus.2021.101423.
[47] JH Xie, TT Chai, R. Xu, D. Liu, YX Yang, ZC Deng, H. Jin, H. He, Indução de enzimas
relacionadas à defesa em patchouli inoculado com virulentoRalstonia
solanacearum, Electron, J. Biotechnol. 27 (2017) 63–69,https://doi.org/10.1016/j.
ejbt.2017.03.007.
[48] KPC Croft, F. Jüttner, AJ Slusarenko, Produtos voláteis da via da lipoxigenase
evoluídos a partir de folhas de Phaseolus vulgaris (L.) inoculadas com
Pseudomonas syringae pv phaseolicola, Plant Physiol. 101 (1993) 13–24,https://
doi.org/10.1104/ pp.101.1.13.
[49] SC Vanitha, S. Umesha, Variações nas atividades enzimáticas relacionadas à defesa em
tomate durante a infecção com o patógeno da murcha bacteriana, J. Plant Interact. 3
(2008) 245–253,https://doi.org/10.1080/17429140802032863.
[50] E. Blée, Impact of phyto-oxylipins in plant defense, Trends Plant Sci. 7 (2002) 315–
322,https://doi.org/10.1016/S1360-1385(02)02290-2.
[51] M. Ongena, F. Duby, F. Rossignol, ML Fauconnier, J. Dommes, P. Thonart, A estimulação da
via da lipoxigenase está associada à resistência sistêmica induzida no feijão por um
agente não patogênicoPseudomonasestirpe, Mol. Plant Microbe Interact. 17 (2004)
1009–1018,https://doi.org/10.1094/MPMI.2004.17.9.1009.
[52] M. Mariutto, F. Duby, A. Adam, C. Bureau, ML Fauconnier, M. Ongena,
P. Thonart, J. Dommes, A elicitação de uma resistência sistêmica porPseudomonas putida
BTP1 no tomate envolve a estimulação de duas isoformas de lipoxigenase, BMC Plant Biol.
11 (2011),https://doi.org/10.1186/1471-2229-11-29.
[53] HSA Silva, R. Da Silva Romeiro, D. Macagnan, B. De Almeida Halfeld-Vieira, MC
B. Pereira, A. Mounteer, Indução rizobacteriana de resistência sistêmica em tomateiro
P. Suresh et ai.
plantas: proteção inespecífica e aumento da atividade enzimática, Biol. Controle 29
(2004) 288–295,https://doi.org/10.1016/S1049-9644(03)00163-4.
[54]B. Anita, R. Samiyappan, Indução de resistência sistêmica em arroz porPseudomonas
fluorescenscontra o nematóide das galhas do arrozMeloidogyne graminicola, J. Biopestic.
5 (2012) 53–59.
Patologia Vegetal Fisiológica e Molecular 119 (2022) 101836
[55]MV Arasu, NAA Al-Dhabi, KC Choi, AD Bency, J. Rajaselvam, Potencial bioativo do
extrato de Albizia Lebbeck contra fitopatógenos e propriedades protetoras na
planta de tomate contra a doença de Speck em estufa, Physiol. Mol. Plant Pathol.
(2022), 101750.