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ARTIGO

CRESCIMENTOS DE FUNGOS PRODUTORES DE MICOTOXINAS EM


GRÃOS DE AMENDOIM

GROWTHS OF MYCOTOXIN-PRODUCING FUNGI ON PEANUT GRAINS

Milena Zanuto Amancio 1,2

Discente da Faculdade de Americana-FAM, Curso de Nutrição, Limeira, São Paulo, Brasil


https://orcid.org/0000-0002-3235-1564
milenaamancio@fam.edu.br

Francieli Fernanda Jacomo Tomaz 1,2

Discente da Faculdade de Americana-FAM, Curso de Nutrição, Sumaré, São Paulo, Brasil


https://orcid.org/0000-0003-2215-1793
francielitomaz@fam.edu.br

Profª. Ma Orientadora Joseane Almeida Santos Nobre³


Docente da Faculdade de Americana-FAM, Curso de Nutrição, Campinas, São Paulo, Brasil
https://orcid.org/0000-0003-1539-7920
joseanenobre@fam.edu.br

Prof. Me Coorientador Leandro Rodrigues³


Docente da Faculdade de Americana- FAM, Curso de Nutrição, Nova Odessa, São Paulo, Brasil
https://orcid.org/0000-0003-4922-8607
lrodrigues@fam.edu.br

¹ Escrita – Primeira Redação, Revisão e Edição; metodologia, discussão dos resultados.


² Coleta de dados;
³ Supervisão e Validação até a versão escrita final.

Recebido: 12/12/2022. Parecer: 02/03/2022. Corrigido: 06/03/2023. Aprovado: 07/03/2023.


Publicado: 10/03/2023

Esta obra está licenciada com uma Licença Creative Commons Atribuição 4.0 Internacional.

RESUMO foi avaliar a contaminação fúngica em


amostras de grãos de amendoim disponíveis
O amendoim (Arachis hypogaea L.) é uma
para o consumo humano. Foram analisadas
oleaginosa com alto valor energético e
amostras de amendoim torrado na vagem,
nutricional, servindo de substrato ideal para o
amendoim cru (in natura) e amendoim torrado
crescimento de fungos durante o processo de
sem a vagem. A metodologia utilizada foi o
colheita, estocagem e processamento dos
método de plaqueamento direto em placas de
grãos. As micotoxinas são originadas a partir
Petri, contendo o meio cultura Sabouraud
do metabolismo secundário de fungos
Dextrose Ágar (SDA). Porções de 40 grãos de
toxigênicos; quando essas toxinas são
amendoim de cada amostra foram utilizadas
ingeridas, podem causar efeitos tóxicos em
para o teste. Os resultados obtidos foram
humanos e animais. O objetivo deste trabalho

Revista Higiene Alimentar, 37 (296): e1123, Jan/Jun, 2023. ISSN 2675-0260


DOI: 10.37585/HA2023.01amendoim
expressos em quantidade de grãos que Aspergillus sp., Rhizopus sp., Alternaria sp.,
apresentaram crescimento fúngico em Penicillium sp. and Fusarium sp. The
porcentagem. Para identificação ao nível do presence of these fungi in peanut samples
género das colônias fúngicas isoladas, foi indicates the possibility of development of
efetuada uma observação microscópica das mycotoxins potentially toxic to humans. The
suas estruturas morfológicas. Em todas as roasting process may not be sufficient to
amostras estudadas ocorreram o crescimento destroy some mycotoxins.
de fungos potencialmente micotoxigênicos. Keywords: Contamination. Aflatoxins.
Os grãos de amendoim cru (in natura) sem a Microscopy.
vagem foram os mais contaminados por
fungos como Aspergillus sp. (20%), Alternaria
sp. (13,1%), Penicillium sp. (13,3%) e
INTRODUÇÃO
Fusarium sp. (23,3%) quando comparados
com os grãos torrados. A presença desses O amendoim (Arachis hypogaea L.) é
fungos nas amostras de amendoim indica a
uma leguminosa de consumo mundial, devido
possibilidade de desenvolvimento de
micotoxinas potencialmente tóxicas para o às suas propriedades nutritivas. É uma
humano. O processo de torrefação inibe o
importante fonte de proteína, óleo vegetal,
crescimento de determinadas espécies de
fungos micotoxigênicos. vitaminas (vitamina E e do complexo B), além
Palavras-chave: Contaminação. Aflatoxinas.
de minerais (potássio, magnésio, fósforo,
Microscopia
cálcio, ferro, zinco e manganês), podendo ser
ABSTRACT
consumido de diversas formas, como o grão
Peanut is an oilseed with high energy and
nutritional value, serving as an ideal substrate in natura, torrado, pastas, manteiga e em
for the growth of fungi during the process of
preparações de doces e outros produtos
harvesting, storing and processing the grains.
Mycotoxins originate from the secondary culinários e de confeitaria, além de sua
metabolism of toxigenic fungi; when ingested,
proteína vegetal, o amendoim tem se
they can cause toxic effects in humans and
animals. The objective of this work was to destacado também por ser fonte potencial de
evaluate the fungal contamination in samples
compostos antioxidantes, tais como
of peanut grains available for human
consumption. The methodology used was the compostos fenólicos, carotenoides, ácido
direct plating method in Petri dishes containing
ascórbico e tocoferóis (ARAÚJO,et al.,2008).
Sabouraud Dextrose Agar (SDA) culture.
Portions of 40 peanut kernels from the Devido a sua composição, os grãos de
samples were immersed in a 0.4% sodium
amendoim são susceptíveis à contaminação
hypochlorite solution for two minutes for
surface disinfection, then rinsed once in por fungos produtores de micotoxinas, como
distilled water. Incubation was carried out at
as aflatoxinas, fumonisinas, zearalenona,
room temperature for 7 days and the results
were expressed as the amount of grains that tricotecenos e ocratoxina. As micotoxinas são
showed fungal growth in percentage. To
substâncias químicas tóxicas produzidas
identify the colonies of isolated filamentous
fungi at the genus level, a microscopic durante o metabolismo secundário dos
observation of their morphological structures
fungos, podendo ocorrer praticamente em
was carried out, which consists of removing a
sample from the edge of the colony and todas as fases das várias etapas da cadeia
placing it in a drop of cotton blue (1g/L in lactic
produtiva dos grãos, principalmente durante o
acid 88%), between slide and coverslip.
Potentially toxigenic fungi were identified: armazenamento incorreto dos grãos. A

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contaminação do amendoim por micotoxinas É frequente a ocorrência dessas
é decorrente de falhas no controle de substâncias tóxicas, que ocorre por conta do
temperatura e umidade; o que favorece as manejo de produção e estocagem
condições para o crescimento de fungos. A inadequados, além de condições climáticas
maioria das micotoxinas é quimicamente propícias para o desenvolvimento fúngico
estável e sobrevive ao processamento dos que concorre para a deterioração dos
alimentos (LIMA et al., 2013). alimentos, perdendo desta forma sua
Dentre as micotoxinas, as aflatoxinas qualidade nutricional. Quando ingeridas, as
são as micotoxinas mais amplamente aflatoxinas podem ocasionar prejuízos à
estudadas. Quando ingeridas, as aflatoxinas saúde humana, pois possuem efeitos
podem ocasionar prejuízos à saúde humana, cancerígenos, teratogênicos e mutagênicos
pois possuem efeitos cancerígenos, atingindo principalmente o fígado (ARAÚJO
teratogênicos e mutagênicos atingindo et al.,2003; BANDO et al., 2007).
principalmente o fígado. A aflatoxina B1, é o Diante dos fatos apresentados, o
principal metabólito produzido por fungos do objetivo deste estudo foi analisar a ocorrência
gênero Aspergillus, e a que possui maior de crescimento de fungos potencialmente
hepatotoxicidade (SHIMIZU et al., 1999; micotoxigênicos em grãos de amendoim in
PIMENTA RJ, MASSABKI, 2010). natura (sem a vagem) e grãos de amendoim

As principais espécies fúngicas torrado, com e sem vagem, disponíveis para o

associadas com a contaminação por consumo humano em mercados da cidade de

aflatoxinas em amendoim, são Aspergillus Americana-SP, verificando se a torrefação é

flavus Link e Aspergillus parasiticus Speare capaz de interferir no crescimento de fungos

(TENGEY et al., 2022). potencialmente produtores de toxinas.

Dentre as aflatoxinas destacam-se as


B1, B2, G1, G2, estes compostos MATERIAIS E MÉTODOS

caracterizam-se pela elevada toxicidade. A Coleta da amostra

aflatoxina B1, é o principal metabólito O estudo foi realizado em Americana,

produzido por fungos do gênero Aspergillus, e Estado de São Paulo, Brasil. Amostras de

a que possui maior hepatotoxicidade, seguida amendoins embalados em pacotes

de G1, B2 e G2. São identificadas as (amendoim cru in natura sem a vagem e

aflatoxinas em saúde pública, como fatores amendoim torrado sem a vagem), com duas

envolvidos na etiologia do câncer hepático no marcas distintas, foram coletadas nas

homem, consequente à ingestão de alimentos gôndolas de supermercados; todas as

contaminados (RICHARD e PAYNE, 2003). amostras estavam dentro do prazo de


validade estabelecido pelo fabricante. As

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amostras de amendoins a granel (amendoim lactofenol azul de algodão, e por cima foi
torrado na vagem) foram coletadas de feiras adicionado uma lamínula. Todas as lâminas
livres no âmbito de varejo, disponibilizadas dos isolados fúngicos foram observadas ao
para o consumo humano. Foram obtidas 12 microscópio óptico de luz e as fotografias
amostras: 4 amostras de amendoim cru (in foram tiradas em diferentes aumentos. As
natura) sem a vagem, 4 amostras de espécies fúngicas foram identificadas com
amendoim torrado sem a vagem e 4 amostras base em características morfológicas de
de amendoim torrado na vagem. As quatro acordo com Goulart (2018).
amostras de cada tipo de amendoim foram
misturadas para formar um lote total,
RESULTADOS E DISCUSSÕES
posteriormente uma porção de cada amostra
(N=40) foi retirada para ser inoculada na placa Os resultados das amostras foram
de Petri por meio da técnica de plaqueamento expressos em quantidade de grãos que
direto. apresentaram crescimento fúngico em
Isolamento de fungos das amostras de porcentagem. Todas as amostras analisadas
amendoim Técnica de plaqueamento de amendoim (cru, torrado sem a vagem e
direto: Para os isolamentos dos fungos torrado na vagem) apresentaram
obtidos a partir das amostras de amendoim, crescimento fúngico. De acordo com Goko et
as sementes foram desinfetadas al. (2021), o crescimento fúngico e a
superficialmente em hipoclorito de sódio a produção de micotoxinas podem ocorrer
0,4% durante 2 minutos, lavadas em água devido a vários fatores intrínsecos, como
destilada esterilizada e distribuídas em placas atividade de água, tipo de substrato, teor de
de Petri com meio de cultura Sabouraud ágar umidade e composição de nutrientes
dextrose (SDA). Foram utilizadas 10 presentes nos grãos, além de fatores
sementes por placa, com 4 repetições por extrínsecos como temperatura, clima e nível
amostra (N=40). As placas foram mantidas de oxigênio. O processamento de grãos
em sala de incubação, com luminosidade de também pode contribuir para o crescimento
12 horas de escuro e 12 horas de luz, a dos fungos como a secagem inadequada, a
temperaturas variando de 25 ºC a 32 ºC. mistura e adição de conservantes e o
manuseio dos grãos.
Análise microscópica
Uma pequena porção de micélio e A maior porcentagem de
conidióforos foi retirada da colônia jovem (7 contaminação das sementes por fungos (80%
dias de crescimento), colocada sobre uma dos grãos de amendoim) foi identificada no
lâmina microscópica contendo uma gota de amendoim in natura (cru sem a vagem), desse

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total foram encontrados diferentes tipos de trabalho, os autores conseguiram identificar
fungos como: Aspergillus sp. (20% dos grãos fungos potencialmente toxigênicos do tipo
analisados), Rhizopus sp. (10%), Alternaria Apergillus niger, Aspergillus flavus,
sp. (13,1%), Penicillium sp. (13,3%) e Aspergillus nidulans e Penicillium spp. quando
Fusarium sp. (23,3%) como observado na avaliaram distintas amostras de amendoim,
figura 1; a própria manipulação que o produto em grão com casca, grão a granel e grão sem
sofre, quase sempre sem os devidos cuidados casca. No estudo de Nóbrega & Suassuna
na pós-colheita, explicam a maior facilidade (2004) os autores fizeram uma análise
de infecção dos produtos descascados. sanitária em 300 sementes de amendoim
Santurio (2000) atribui o maior crescimento de armazenado, e verificaram o crescimento dos
fungos em grãos in natura devido à atividade fungos Aspergillus flavus, Aspergillus niger,
da água no grão, pois, à medida que ela Fusarium sp., Rhyzoctonia solani, Rhyzopus
aumenta, o crescimento microbiano se stolonifer, Sclerotium sp., e Phoma sp. em
beneficia. O trabalho de Oliveira Krahn et al. 71,66% das amostras.
(2020) corrobora com os achados em nosso

Figura 1 - Frequência de isolamento fúngico nos grãos de amendoim Arachis hypogaea L. cru (in
natura), em amostras comercializados em mercados do município de Americana SP

Fonte: Arquivo pessoal, 2022.

No amendoim torrado (sem a vagem) Fusarium sp. (3,3%) (Figura 2). Ferreira et al.
observou-se o crescimento fúngico em 10% (2017) também encontraram contaminação
das sementes analisadas. Dentre os fungos em grãos de amendoim processados e
que cresceram podem-se destacar o torrados em 40% de suas amostras,
Penicillium sp. (6,7% dos grãos analisados) e mostrando que o processamento em altas

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temperaturas não é o suficiente para inibir o
crescimento de fungos toxigênicos.

Figura 2 - Frequência de isolamento fúngico nos grãos de amendoim (Arachis hypogaea, L.)
torrado (sem a vagem), em amostras comercializadas em mercados do município de Americana SP

Fonte: Arquivo pessoal, 2022.


Nas amostras de amendoim torrado (na vagem seria uma barreira de proteção contra
vagem) observou-se um crescimento total de agentes invasores, porém a contaminação é
fungos em 26,6% das sementes analisadas, inevitável, uma vez que, as vagens ficam
podendo-se destacar a presença de fungos alojadas abaixo do solo altamente
como Penicillium sp. (10% dos grãos contaminado, ficando, portanto, expostas ao
analisados) e Fusarium sp. (16,6%) (Figura 3) ataque de fungos e a condições de umidade e
. No presente estudo o amendoim torrado na temperatura favoráveis à infecção. Durante o
vagem apresentou maior contaminação dos processo de colheita as vagens também
grãos por fungos do que o amendoim torrado podem sofrer injúrias que servem como porta
sem a vagem. A princípio acreditava-se que a de entrada para microrganismos.
Figura 3 - Frequência de isolamento fúngico nos grãos de amendoim (Arachis hypogaea, L.)
torrado (com a vagem), em amostras comercializadas em mercados do município de Americana SP

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Fonte: Arquivo pessoal, 2022.
Todas as amostras de amendoim outras leguminosas por ocasião do plantio,
estudadas apresentaram crescimento de com a finalidade de aumentar a produtividade
bactéria (bacilo gram positivo) (Figura 4 - F), da safra e melhorar o desenvolvimento da
sendo que, nas amostras de amendoim planta (MELO et al., 2016).
torrado (na vagem ou sem vagem) a Para identificação a nível de gênero
contaminação acometia 73,4% e 90% dos das colônias de fungos filamentosos isolados,
grãos respectivamente contra 20,3% do foi efetuada uma observação microscópica
crescimento em grãos de amendoim cru. A das suas estruturas morfológicas. As fotos
justificativa do aparecimento de bactéria gram dos fungos cultivados e da bactéria isolada
positiva nas amostras pode ser devido à das amostras de amendoim podem ser
inoculação de algumas bactérias fixadoras de observadas na figura 4.
nitrogênio nas sementes de amendoim e

FIGURA 4 - Imagem microscópica (400x) dos fungos isolados dos grãos de amendoins: A) Aspergillus
sp. B) Rhizopus sp. C) Alternaria sp. D) Penicillium sp. E) Fusarium sp. F) Bactéria: Bacillus sp. (Arquivo
pessoal)

Fonte: Arquivo pessoal , 2022.

A presença desses fungos nas


amostras de amendoim indica a possibilidade
associadas à incidência de câncer renal e
de desenvolvimento de micotoxinas como
hepático. O processo de torrefação pode não
observado na tabela 1. A Aflatoxina e
ser suficiente para a destruição de algumas
Ocratoxina produzida principalmente por
micotoxinas, contudo o amendoim torrado
Aspergillus spp. são micotoxinas
apresentou menor contaminação fúngica do
potencialmente tóxicas para o ser humano,

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que os grãos in natura (FERREIRA et al.,
2017).

Tabela 1 - Fungos isolados de grãos de amendoim (Arachis hypogaea L.) crus e torrados,
nos grãos, e principais micotoxinas associadas aos fungos.

PRINCIPAIS FUNGOS ISOLADOS PRINCIPAIS MICOTOXINAS ASSOCIADAS

Aspergillus sp. Aflatoxinas, Ocratoxinas, Esterigmatocistina, Patulina

Rhizopus sp. ***

Alternaria sp. Alternariol

Penicillium sp. Patulina, Ocratoxina

Fusarium sp. Desoxinivalenol, Zearalenona, Fumonisina, Ácido Fusárico

*** não produz micotoxinas

Fonte: Arquivo pessoal, 2022.

O menor índice de contaminação à contaminação (de alimentos) dentro da


nas amostras de amendoim torrado (com cadeia de abastecimento alimentar
ou sem vagem), se justifica pelo (PATERSON et al., 2010).
processamento de torra, que leva ao A colonização e a contaminação
aquecimento, pelo qual estas amostras com micotoxinas podem ocorrer
passam antes de serem disponibilizadas simultaneamente, ou a produção de
para consumo, o que diminui o número de micotoxinas pode ocorrer numa fase
fungos presentes. posterior (LOGRIECO et al., 2003). O
As micotoxinas são originadas a crescimento do fungo não está associado
partir do metabolismo secundário de necessariamente à presença de toxinas,
fungos toxigênicos; quando ingeridas, as pois nem todos os fungos produzem
micotoxinas podem causar efeitos tóxicos toxinas, como por exemplo, houve
em humanos e animais, essa crescimento do fungo Rhizopus sp. que
contaminação também pode ocorrer por não produz micotoxinas. Por outro lado, as
inalação, ou contato, possivelmente devido micotoxinas podem permanecer no

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alimento mesmo após a destruição dos nefrotóxicos, teratogênicos e
fungos que as produziram. Os gêneros de imunossupressores, dose dependente
fungos mais comumente associados com (IARC, 1993). Estes elevados percentuais
toxinas são Aspergillus, Penicillium e de infecção sugerem que os consumidores
Fusarium (IANANAKA et al., 2005). podem estar expostos à presença de
Um estudo realizado pela aflatoxinas nos produtos estudados. No
International Agency for Research on Brasil, conforme a Resolução RDC nº 274,
Câncer (IARC, 1993), caracterizou cinco da ANVISA, o limite máximo para
toxinas fúngicas: aflatoxinas (AFLA), aflatoxinas (B1+B2+G1+G2) é de 20μg/kg
ocratoxina A (OTA), zearalenona (ZON), (20 ppb), porém os consumidores podem
desoxinivalenol (DON) e fumonisinas estar consumindo níveis mais altos do que
(FUMO), como as de maior risco à saúde. o recomendado. A contaminação de
No caso específico do amendoim, os aflatoxinas em amendoim por Aspergillus
fungos Aspergillus flavus e A. parasiticus tem um impacto negativo na renda,
produzem aflatoxinas dos tipos B e G, produtividade e segurança alimentar
principalmente em grãos com teor elevado familiar, o que leva a custos significativos e
de umidade. O A. flavus produz apenas perdas econômicas em países em
aflatoxina B, sendo que aproximadamente desenvolvimento.
40% das cepas são produtoras; já o A.
parasiticus produz tanto a aflatoxina B CONCLUSÃO
como a G, sendo que 100% das cepas Concluiu-se que os grãos de
isoladas do ambiente são produtoras. amendoim in natura sem a casca foram os
(MANUAL DE SEGURANÇA E mais contaminados por fungos
QUALIDADE PARA A CULTURA DO potencialmente toxigênicos, como os
AMENDOIM, 2004). fungos do gênero Aspergillus, que são
No presente estudo, conforme produtores de micotoxinas importantes
exemplificado na tabela 1, foram como as aflatoxinas carcinogênicas. A
identificados por cultura e microscopia presença destes fungos nas amostras de
óptica, dois diferentes gêneros de fungos amendoim indica a possibilidade de
potencialmente toxigênicos: Penicillium sp. desenvolvimento de micotoxinas
Aspergillus sp. Esses fungos estão potencialmente tóxicas para o humano. O
associados à produção de ocratoxina A e processo de torrefação inibe o crescimento
aflatoxinas B1, B2, G1 e G2, de determinadas espécies de fungos
respectivamente, consideradas micotoxigênicos, porém não garante total
substâncias com efeitos carcinogênicos, inibição de crescimento no alimento
citotóxicos, mutagênicos, hepatotóxicos, submetido ao processo de altas
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