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Jornal Saudita de Ciências Biológicas 29 (2022) 2163–2172

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Revista Saudita de Ciências Biológicas

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Atividade bactericida de alguns óleos essenciais de plantas contraRalstonia


solanacearuminfecção
Rahma Abd-Elrahima,⇑, Mohamed RA Tohamya, Mahmoud M. Atiaa, Mohamed MA Elashtokhyb,
Mohamed AS Alia
aDepartamento de Patologia Vegetal, Faculdade de Agricultura, Universidade de Zagazig, Zagazig 44511, Egito
bDepartamento de Genética, Faculdade de Agricultura, Universidade de Zagazig, Zagazig 44511, Egito

artigoinfo abstrato

Historia do artigo: As plantas de batata e seus tubérculos no Egito são afetados por um dos mais renomados patógenos do solo, Ralstonia
Recebido em 14 de setembro de 2021 Revisado em solanacearum,que causava podridão parda em tubérculos de batata e murcha em plantas. Não há nenhum bactericida
21 de outubro de 2021 Aceito em 17 de novembro
terapêutico eficiente assim; o controle da murcha bacteriana é muito difícil.
de 2021 Disponível online em 24 de novembro de
O estudo investigou três diferentes concentrações de sete óleos vegetais essenciais sobem vitroe na Vivo
2021
condições como resultado de seus efeitos sobreRalstonia solanacearumcrescimento e sua possibilidade de uso
como cobertura de pedaços de sementes de batata para controlar a incidência de murcha bacteriana.Em vitro,óleo
Palavras-chave:
de erva-doce nas três diferentes concentrações testadas (0,04, 0,07 e 0,14% vol/vol) foi o mais eficaz na inibição do
Ralstonia solanacearum
crescimento dos isolados T4 e W9 deRalstonia solanacearumdepois seguido por óleos de tomilho, capim-limão e
Atividade antibacteriana
óleos vegetais essenciais
cravo. Por outro lado, o óleo de rúcula na concentração testada foi o menos eficaz seguido pelo óleo de erva-doce.
enzimas No entanto, o óleo de gérmen de trigo não foi totalmente eficaz.Na Vivo,O experimento revelou que o óleo de erva-
Microscópio eletrônico de transmissão (TEM) doce nas três concentrações reduziu significativamente a incidência e a severidade da doença nas cultivares de
batata sponta e hermes e seu efeito foi associado ao aumento de peroxidase, polifenoloxidase, fenóis e ao peso
fresco foliar das plantas tratadas, bem como ao peso dos tubérculos/ planta seguida por óleos de tomilho e capim-
limão em comparação com o controle não tratado infectado.
Diferenças morfológicas na estrutura da célula bacteriana foram observadas usando um microscópio eletrônico de
transmissão (TEM). O óleo de erva-doce em maior concentração causou ruptura da parede celular e componentes celulares
degradados.
- 2021 O(s) Autor(es). Publicado pela Elsevier BV em nome da King Saud University. Este é um acesso aberto
artigo sob a licença CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

1. Introdução Toukam et ai. 2009). Controlar esta doença através de cultivares resistentes
é ineficaz, uma vez que a resistência na planta hospedeira pode ser variável
Os sintomas da murcha bacteriana (BW) em campos de plantas de batata, de acordo com a bactéria que é o patógeno da semente e do solo e as
conhecidos como 'sintomas de podridão parda' em tubérculos de batata durante o diferentes condições ambientais de crescimento do hospedeiro.Lopez e
armazenamento, são causados porPseudomonas solanacearum (Smith 1896)Yabuuchi Biosca 2004).
et al. atualmente em 1995chamadoRalstonia solanacearum.É um patógeno transmitido Os óleos essenciais de plantas medicinais e seus componentes ativos são
por sementes e solo e possui uma ampla variedade de hospedeiros em todo o mundo. conhecidos por terem efeitos fungicidas e bactericidas.Ji et al. 2005).
Salanoubat et ai. 2002). Precursorem vitroena Vivoexperimentos foram conduzidos usando vários
O controle da murcha bacteriana é complicado devido à existência de óleos essenciais de plantas e seus componentes mostraram que algumas
muitas cepas patogênicas e sua ampla gama de hospedeiros.Hayward 1991; folhas de tomilho têm eficácia significativa contraR. solanacearum (
Pradhanang et ai. 2003). O uso de óleos vegetais essenciais é um caminho
potencial para controlar a podridão parda dos tubérculos de batata,
⇑Autor correspondente.
conforme relatado porOboo et al. (2014). Ele inferiu que esses óleos têm
Endereço de email:rahmaabdelrahimnasr@yahoo.com (R. Abd-Elrahim). Revisão
atividade antibacteriana que é eficaz no controle deR. solanacearumque
por pares sob responsabilidade da King Saud University.
causava podridão parda em tubérculos de batata.
Extratos de plantas têm efeitos antimicrobianos sobre patógenos de
plantas. Além das plantas, os óleos vegetais essenciais incluem vários
compostos voláteis, como aldeídos alifáticos, terpenoides, ésteres e alcoóis.
Produção e hospedagem por Elsevier

https://doi.org/10.1016/j.sjbs.2021.11.045
1319-562X/- 2021 O(s) autor(es). Publicado pela Elsevier BV em nome da King Saud University. Este é um
artigo de acesso aberto sob a licença CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
R. Abd-Elrahim, Mohamed RA Tohamy, MM Atia et al. Jornal Saudita de Ciências Biológicas 29 (2022) 2163–2172

férias (Dewick 1997). Além disso, são usados como biofumigantes em um sistema Os óleos vegetais essenciais testados foram emulsionados em Tween 20
integrado de gerenciamento de doenças (Ji et al. 2007). (proporção 1:1) para melhorar sua solubilidade em água. Vinte mililitros de
Diferentes compostos vegetais são eleitos para controlarR. água foram adicionados com 8eul do óleo para dar uma concentração final
solanacearumno campo. Os efeitos antimicrobianos dos óleos de 0,04% vol/vol. Da mesma forma, 14 e 28eu1 dos óleos foram
essenciais de plantas sobre os patógenos, comoR. solanacearumforam emulsionados e adicionados a 20 ml de água para concentrações finais de
examinados em todo o mundo (Deberdt et al. 2012; Lucas e cols. 2012; 0,07 e 0,14% vol/vol, respectivamente.
Moghaddam et ai. 2014).
O óleo essencial de tomilho é rico em timol e carvacrol. Assim, pode ser
adequado no controle de doenças de plantas (Lee e outros. 2005; Uysal et al. 2.3. Efeito in vitro de óleos essenciais de plantas no crescimento de Ralstonia

2015) e também seus derivados sendo ricos em ácidos fenólicos (Roby et ai. solanacearum

2013; Erturk et ai. 2017).


A resistência a doenças de plantas está correlacionada com a ativação de Os experimentos foram realizados no Laboratório de Pesquisa em
meios de defesa que diminuem a infecção em certos estágios da interação Genética Microbiana, Departamento de Genética, Fac. Agric., Zag. Univ.,
patógeno-hospedeiro. Várias enzimas de defesa, incluindo peroxidase (PO) e Zagazig, Egito.
polifenoloxidase (PPO), são importantes na reação inicial do hospedeiro à O efeito antagônico de óleos essenciais de plantas contra o crescimento
infecção, (Anúncios 2013). A incorporação cumulativa de compostos deR. solanacearum (T4 e W9) foi estudado em King's Placas de ágar B (Rei e
fenólicos dentro da parede celular durante interações incompatíveis planta- outros. 1954). Cem microlitros deR. solanacearumsuspensão contendo 108
micróbio/eliciador geralmente leva ao aumento da atividade de PO.Soares e cfu/ml foi suspenso em ágar mole e espalhado na superfície da placa
outros. 2005). usando um espalhador de vareta de vidro em forma de L esterilizado. Em
A peroxidase e a polifenoloxidase são as enzimas mais relacionadas seguida, um disco de ágar de 7 mm de diâmetro (cortado de uma placa na
à defesa em plantas contra patógenos.Qin e outros. 2015). A qual os óleos essenciais) foi colocado em seu centro. A zona de inibição ao
polifenoloxidase (PPO) e a peroxidase (PO) são enzimas antioxidantes redor do disco foi medida em mm após 48 horas.
distintas e componentes notáveis de defesa contra a peroxidação
lipídica da membrana e o estresse oxidativo durante a infestação de
2.4. Aplicação de tratamento in vivo
patógenos.Foyer e Noctor 2003).
Do exposto, o estudo pretendeu atingir vários eixos,
Este estudo foi conduzido em casa de vegetação do Plant Path
nomeadamente (i) Avaliar os efeitos antibacterianos de sete óleos
Dept., Fac. Agric., Zag. Univ., Zagazig, Egito.
vegetais essenciais sobreR. solanacearumcrescimentoem vitro. (ii)
Tubérculos uniformes de duas cultivares (sponta e hermes) foram
ControleR. solanacearum in vivoreduzir a incidência e severidade da
gentilmente cedidos pela PBRP. Os pedaços de sementes de batata foram
murcha da batata melhorando métodos de aplicação eficientes e
plantados em vasos plásticos esterilizados (25 cm) cheios com 10KgRalstonia
finalmente (iii) Avaliação do efeito de óleos vegetais essenciais no
solanacearumsolo argilo-arenoso livre (1/1, v/v) obtido de campos livres de
crescimento vegetativo de plantas de ptotato, a atividade de enzimas e
pragas (zagazig) com um tubérculo/vaso. A infestação do solo foi realizada
fenóis em plantas de batata tratadas.
comR. solanacearumisolar suspensões (108cfu) (T4), previamente
propagadas em cultura líquida de casaminoácidos, peptona e glicose (CPG) e
2. Materiais e métodos cultivadas por três dias a 28 -C adicionando 50 ml/kg de solo. Apenas cinco
óleos essenciaisou sejaanis, tomilho, cravo, erva-doce e capim-limão
2.1. Cultura bacteriana e preparação do inóculo provaram ser eficazesem vitroexperimento, foram usados em três
concentrações testadas (0,04, 0,07 e 0,14% vol/vol). Os tubérculos foram
Dois isolados bacterianos (T4 e W9) foram previamente isolados de embebidos separadamente em 250 ml de cada concentração de óleo
tubérculos de batata e água, identificados e utilizados neste estudo, ( essencial de planta por 15 min para que os brotos não fossem danificados e
Abd-Elrahim et al. 2015). depois plantados em vasos contendo solo infestado. Os vasos do tratamento
Um bem caracterizadoR. solanacearum (T4 isolado) raça 3 biótipo 2 de controle foram mantidos nas mesmas condições sem infestação e
pela PCR quantitativa, em tempo real, fluorogênica (Taq-Man) foi tratados apenas com concentrações de óleos vegetais essenciais testados.
conduzido anteriormente no Potato Brown Rot Project (PBRP), Agric. Cinco vasos foram usados para cada tratamento particular.
Res. Centro, Gizé – Egito (Abd-Elrahim et al. 2015). A incidência da doença foi calculada como a porcentagem de plantas
Os dois isolados bacterianos patogênicos (T4 e W9) foram cultivados murchas após 45 dias de plantio.
a 28 -C em meio cloreto de tetrazólio (TZC) ágar por 48 h. Colônias de A gravidade da doença foi determinada 45 dias após o primeiro
isolados bacterianos testados, com base em sua morfologia de colônia, sinal de incidência da doença de acordo com a seguinte escala
foram colhidas e suspensas em cultura líquida de casaminoácidos, modificada sugerida porWinstead e Kelman (1952):
peptona e glicose (CPG) e cultivadas a 28 -C por três dias (Kelman 1954). A gravidade da doença foi calculada de acordo com a seguinte
As culturas foram centrifugadas a 10.000 rpm por 10 min a 10 -C. Os equação:
pellets bacterianos foram suspensos em água destilada e ajustados
P
para 108ufc/ml. ðN.º de plantas murchas em cada categoria - grau de murchaº
doençaveridade%¼
TotalNo:deplantas - grau mais alto

2.2. óleos essenciais de plantas


- 100

A porcentagem de redução da incidência e gravidade da doença foi


Óleos vegetais essenciais altamente purificadosou sejaAnis (Pimpinella anisum
calculada usando a seguinte fórmula:
L), tomilho (Thymus vulgarisL), Cravo (Syzigium aromaticumL), Funcho (
Foeniculum vulgareL), gérmen de trigo (Triticum vulgareL), Foguete
C-T
(Eruca sativaL) e capim-limão (Cymbopogon flexuosusL) foram PercentReduction¼ x100
gentilmente obtidos do National Research Center, Giza, Egito e usados C
para o presente estudo. Três concentrações foram preparadas a partir C = controle T = tratamento
de cada óleo original (0,04, 0,07 e 0,14% vol/vol) e testadas com base O peso dos tubérculos (g) e o peso fresco da planta (g/planta) foram
nos resultados de um estudo anterior (Pradhanang et ai. 2003) sobreR. calculados aos 90 dias após o plantio, enquanto a atividade enzimática e os
solanacearumvariedade. teores de fenóis foram calculados aos 45 dias do plantio.

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2.5. Atividade de enzimas tabela 1


Em vitroatividades antagônicas de óleos vegetais essenciais testados contra doisRalstonia
solanacearumisolados expressos como zona de inibição (mm).
As enzimas foram determinadas a partir de amostras frescas de folhas
de batata (1 g) coletadas das plantas infectadas 45 dias após o plantio. Óleo essencial Concentração Isolar

T4 W9
2.5.1. Atividade da peroxidase Anis 0,04% 51 57
A peroxidase foi calculada de acordo comKochba et ai. (1977). A 0,07% 56.3 60,3
enzima foi calculada como densidade de cor lida no espectrofotômetro 0,14% 62.3 66,7
Tomilho 0,04% 38,7 44
601 em comprimento de onda de 425 nm e medida como mg/g de peso
0,07% 45.3 49
fresco. 0,14% 49 52
capim-limão 0,04% 26,7 34.3
2.5.2. Atividade da polifenoloxidase 0,07% 31 37,7
0,14% 34 40,7
A polifenoloxidase foi calculada de acordo comLisker et ai. (1983). A
dente de alho 0,04% 17.3 20.3
enzima foi calculada como densidade de cor lida no espectrofotômetro 0,07% 19.3 24
601 em comprimento de onda de 495 nm e medida como mg/g de peso 0,14% 20.7 30.3
fresco. Funcho 0,04% 9.6 12
0,07% 10.7 14.7
0,14% 14 17.3
2.6. Teor total de fenóis Foguete 0,04% 3.7 6
0,07% 5.7 7.7
Os fenóis totais foram extraídos pela adição de um grama de pedaços de 0,14% 7.7 10.3
Germe do trigo 0,04% 0 0
folha de batata coletados das plantas infectadas 45 dias após o plantio a 10
0,07% 0 0
ml de etanol 70% em banho-maria a 70 -C por 72 h. e deixados para secar, 0,14% 0 0
em seguida, 5 ml de isopropanol 50% foram adicionados ao filme seco LSD a 0,05 1.5086 1.3247
(resíduo) e mantidos em freezer para determinações químicas.
Um ml do extrato da amostra previamente preparada foi
solanacearum (isolado T4) entre os óleos vegetais essenciais testados nas
determinado de acordo com o método descrito porSnell e Snell (1953).
duas cultivares de batata (hermes e sponta) em casa de vegetação. O óleo
Em um espectrofotômetro de absorção 601 em comprimento de onda
de erva-doce foi o mais eficaz na redução da doença da murcha da batata
de 520 nm, a densidade óptica de cor da mistura reagida foi medida.
nas cultivares hermes e espontâneas, resultando na maior porcentagem de
redução da incidência da doença, seguido pelo óleo de tomilho e capim-
limão, respectivamente, em comparação com o tratamento de controle não
2.7. Microscopia eletrônica de transmissão
tratado infestado. Por outro lado, o óleo de erva-doce exibiu a menor
porcentagem de redução da incidência e severidade da doença, enquanto o
A microscopia eletrônica de transmissão (TEM) tem sido usada para
cravo revelou valores moderados.
caracterizar a morfologia das células bacterianas antes e depois de lidar com
Dados apresentados emfigos. 4, 5revelam que os óleos de erva-doce, tomilho
o óleo vegetal essencial mais eficaz (anis) na concentração de 0,14%. A
e capim-limão nas três concentrações testadas aumentaram a massa fresca média
suspensão bacteriana cultivada durante a noite (isolado T4) foi
e os tubérculos/planta das cultivares hermes e sponta, respectivamente. Por outro
suplementada com óleo essencial de erva-doce na concentração de 0,14% e
lado, o óleo de erva-doce e o óleo de cravo apresentam os menores pesos médios
incubada a 30 -C por 24 h. Imagens de microscopia eletrônica de
de tubérculos/planta e peso fresco da planta, respectivamente.
transmissão foram obtidas e fotografadas usando um microscópio
eletrônico de transmissão de mancha negativa (Universidade do Cairo) com
Dados emFig. 6mostraram que os maiores valores de atividade de
uma tensão de trabalho de 80 kV.
peroxidase, polifenoloxidase e teores de fenóis totais da cultivar sponta
foram calculados com erva-doce, tomilho e capim-limão nas
2.8. Análise estatística concentrações de 0,14, 0,07 e 0,04% calculando 0,895, 0,863, 0,786;
0,708, 0,677, 0,579; 0,551, 0,497 e 0,475 para peroxidase, 0,769, 0,741,
Os dados foram analisados estatisticamente (Gómez e Gómez 1984), e 0,727; 0,684, 0,641, 0,595; 0,528, 0,472 e 0,416 para polifenoloxidase e
as médias foram comparadas usando LSD (Duncan 1955). 4,163, 3,231, 2,864; 2.531, 2.148, 1.874; 1,658, 1,174 e 0,853 para teores
de fenóis totais, respectivamente. Enquanto os valores de atividade
3. Resultados mais baixos 0,217, 0,256, 0,295; 0,318, 0,358 e 0,391 para
peroxidase, 0,191, 0,217, 0,256; 0,302, 0,347 e 0,368 para
Está claro a partir dos dados emtabela 1eFigura 1que todos os óleos polifenoloxidase e 0,482, 0,532, 0,587; 0,642, 0,748 e 0,765 para teores
vegetais essenciais usados em diferentes concentrações inibemRalstonia de fenóis totais, respectivamente de funcho e cravo.
solanacearumcrescimento na placa de ágar, exceto para o óleo de gérmen
de trigo. Os resultados revelaram que o óleo de erva-doce nas três Dados emFig. 7mostraram que os maiores valores de atividade de
concentrações testadas foi o mais eficiente na inibição dos doisRalstonia peroxidase, polifenol oxidase e teores de fenóis totais da cultivar
solanacearum crescimento dos isolados seguido dos óleos de tomilho, hermes foram calculados com erva-doce enquanto tomilho e capim-
capim santo e cravo nas três concentrações testadas (0,04, 0,07 e 0,14% v/v). limão revelaram valores moderados nas concentrações de 0,14, 0,07 e
Os resultados no isolado w9 foram registrados como 66,7, 60,3, 57; 52, 49, 0,04% sendo 0,985, 0,927, 0,856; 0,846, 0,828, 0,785; 0,742, 0,698 e
44; 40,7, 37,7, 34,3; 30,3, 24 e 20,3 mm, respectivamente. Por outro lado, os 0,647 para peroxidase, 0,932, 0,832, 0,816; 0,792, 0,758, 0,595; 0,675,
óleos de rúcula e erva-doce em diferentes concentrações exibem os menos 0,648 e 0,584 para polifenoloxidase 4,832, 3,682, 3,186; 2.753, 2.685,
eficazes, seguidos pelo óleo de erva-doce com valores 6, 7,7, 10,3; 12, 14,7 e 2.139; 1,853, 1,349 e 0,982 para teores de fenóis totais,
17,3 mm, respectivamente. No entanto, o óleo de gérmen de trigo nas três respectivamente.
concentrações testadas não foi eficaz contra as duasRalstonia solanacearum Os valores mínimos de atividade sendo 0,451, 0,496, 0,507; 0,543,
isolados. 0,578 e 0,607 para peroxidase, 0,326, 0,397, 0,468; 0,504, 0,514 e 0,538
mesa 2efigos. 2,3mostraram as diferenças na porcentagem de incidência para polifenoloxidase, 0,628, 0,674, 0,751; 0,872, 0,921 e 0,953 para
da doença murcha e redução da severidade causada pela virulênciaR. teores de fenóis totais foram de funcho e cravo.

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Figura 1.Em vitroatividades antagônicas de capim-limão e erva-doce a 0,04% de óleos vegetais essenciais contraRalstonia solanacearumisolar W9 no rei's meio B.

mesa 2
Na Vivoefeito de óleos essenciais de plantas testados na redução da porcentagem de incidência de murcha e severidade de cultivares hermes e espontâneas infectadas comRalstonia solanacearum
(isolar T4).

Óleo essencial Concentração Hermes espontâneo

(%)
Redução da incidência (%) Redução da gravidade (%) Redução da incidência (%) Redução da gravidade (%)

Anis 0,04 75.2 79,5 59,6 63.1


0,07 76,6 80,9 61,7 64,9
0,14 77,7 82 64.2 67,4
Tomilho 0,04 69,5 75,9 53,8 54,9
0,07 71 76,8 56,5 58,4
0,14 73,5 77,6 58 60,7
capim-limão 0,04 61,9 63,8 43,5 46,9
0,07 64,6 66,5 45.4 48,9
0,14 66,6 69,4 49 51,5
dente de alho 0,04 52,8 55.3 36 37,8
0,07 55,9 58.1 38,5 41.3
0,14 58,4 60.1 40,5 43,9
Funcho 0,04 44 55,7 23.7 27,5
0,07 45.4 50,5 27,8 31.2
0,14 49.3 52.4 31.8 34.4
Infectado não tratado 00,0 00,0 00,0 00,0
controle saudável 100,0 100,0 100,0 100,0
LSD a 0,05 1.0074 0,8872 4.6130 0,8971

Incidência da doença (%) Redução da incidência da doença (%)

Gravidade da doença (%) Redução da gravidade da doença (%)

90
80
(%) incidência e/ou redução

70
60
50
40
30
20
10
0
0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 Anis
Tomilho capim-limão dente de alho Funcho

concentração (%)

Figura 2.Na Vivoefeito de óleos essenciais de plantas testados na redução da porcentagem de incidência de murcha e severidade da cultivar hermes infectada comRalstonia solanacearum (isolar T4).

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R. solanacearumque causou a doença da murcha bacteriana da batata é


atualmente altamente difícil. A estratégia mais confiável para controlarR.
solanacearumé através do programa genético para introdução de cultivares
resistentes (Lebeau et ai. 2011) mas esta estratégia não está disponível no
Egito porque todos os pedaços de sementes de batata são importados. O
presente estudo foi realizado para avaliar a eficiência de sete óleos vegetais
essenciais disponíveis (anis, tomilho, erva-doce, gérmen de trigo, cravo,
rúcula e capim-limão)em vitrocontra o crescimento de dois patógenosR.
solanacearumisolados (T4 e W9) e as possibilidades de uso desses óleos
vegetaisna Vivopara controlar a murcha bacteriana da batata.
Esses resultados demonstraram que os óleos vegetais essenciais de anis,
tomilho, capim-limão e erva-doce são capazes de suprimir o crescimento de
R. solanacearum in vitro (isolar T4 e W9) e seu efeito dependendo da
concentração utilizada.
Os cinco óleos vegetais essenciais testados estavam sobem vitroforam
selecionados de acordo com seus resultados, pois são os mais eficientes
inibidores deR. solanacearumcrescimento. Vale ressaltar que o óleo de
gérmen de trigo nas diferentes concentrações utilizadas não foi eficiente em
inibir o crescimento dos doisR. solanacearumisolados. Além disso, o foguete
tem baixo efeito inibidor afetado no crescimento deR. solanacearum.
Portanto, óleo de gérmen de trigo e óleo de rúcula foram excluídosna Vivo
Figura 3.Na Vivoefeito de óleos essenciais a 0,14% na incidência da murcha da batata estudar.
(cultivar Hermes). Nossos resultados mostraram que os óleos essenciais de anis, tomilho,
capim-limão e erva-doce reduziram o crescimento deR. solanacearum (isolar
T4)na Vivoem concentração diferente.
O TEM foi utilizado para verificar a interação entre o óleo vegetal
Os resultados obtidos em relação aos efeitos de redução da murcha
essencial de erva-doce e as células bacterianas (isolado T4) para comparar as
bacterianana Vivoestão de acordo com relatórios anteriores obtidos
variações celulares das células não tratadas e tratadas durante o tratamento
por (Pradhanang et ai. (2003). Eles descobriram que os óleos de
com óleo essencial de erva-doce.
palmarosa e capim-limão reduziram as populações deR. solanacearum
Como é evidente em micrografias TEM (Fig. 8), não tratadaR. solanacearumas
raça-1 e a murcha bacteriana do tomateiro. Também,Paret et ai. (2010)
células com óleos essenciais testados eram de textura macia. As células tratadas
e Hong et al. (2011)demonstrou o efeito bactericida de palmarosa,
com óleo de erva-doce foram embrulhadas em forma e estruturas semelhantes a
timol e capim-limão emR. solanacearumraça 4, que causam murcha
bolhas fora da célula que dilaceraram. Grandes massas de detritos foram
bacteriana de tomate e gengibre comestível em áreas tropicais.
recolhidas. Além disso, as células têm uma textura tortuosa e são menores em
Também,Huang e Lakshman (2010)explicou que o óleo de cravo tem a
tamanho em comparação com os controles não tratados.
perspectiva de eliminar populações deR. solanacearumno solo e
reduzir a incidência de murcha de gerânio e murcha bacteriana do
4. Discussão tomateirona Vivocondições. Resultados semelhantes foram
encontrados sobre os efeitos antimicrobianos do óleo de tomilho
A ausência dos tratamentos de controle químico mais eficazes para contraR. solanacearumePectobacterium carotovorum. (RF.)Nezhad et
sanitizaçãoRalstonia solanacearumcampos infectados levaram a gerenciar ai. (2012).

Hermes cui-var peso de tubérculos (g/ planta) Hermes cui-var


infectado peso de tubérculos (g/ planta) controle saudável
Hermes cui-var peso fresco de planta (g) Infectado
Hermes cui-var peso fresco da planta (g) controle saudável
180

160

140

120

100
Peso (g)

80

60

40

20

0
0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 Anis
Tomilho capim-limão dente de alho Funcho

Concentração (%)

Figura 4.Na Vivoefeito de óleos vegetais essenciais testados em alguns parâmetros de crescimento de plantas de batata murcha (cultivar Hermes) infectadas comRalstonia solanacearum (T4).

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Sponta cui-var peso de tubérculos (g/ planta) Infectado Sponta


cui-var peso de tubérculos (g/ planta) controle sadio Sponta
cui-var peso fresco de planta (g) Infectado
Sponta cui-var peso fresco da planta (g) controle saudável
160

140

120

100
Peso (g)

80

60

40

20

0
0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 Anis
Tomilho capim-limão dente de alho Funcho

concentração (%)

Figura 5.Na Vivoefeito de óleos vegetais essenciais testados em alguns parâmetros de crescimento de plantas de batata murcha (cultivar Sponta) infectadas comRalstonia solanacearum (T4).

Infecção por polifenoloxidase Controle de polifenoloxidase saudável


Infecção por peroxidase Controle de peroxidase saudável
Fenóis infectados Os fenóis controlam de forma saudável

4.5
Atividade enzimática mg/g de peso fresco.

4
3.5
3
2.5
2
1,5
1
0,5
0
0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 Anis
Tomilho capim-limão dente de alho Funcho
concentração (%)

Figura 6.A atividade de peroxidase, polifenoloxidase e teores de fenóis totais medidos em mg/g de massa fresca de folhas de batata espontânea cultivar tratadas com óleos vegetais
essenciais emRalstonia solanacearum (T4) plantas infectadas.

Expor o modo de ação dos óleos essenciais de plantas na inibição do alcaloides, geraniol, citral, flavonoides, eugenol, citoronolal, acetato de
crescimento de bactérias patogênicas e o controle de doenças dependia da geranila, beta cariofilna, taninos, compostos fenólicos (timol),
classificação do conteúdo desses óleos essenciais e seus efeitos no hidrocarbonetos de terpeno (c-terpineno) saponina, farnsul e p-cimeno,
crescimento de patógenos e seus papéis no metabolismo das plantas após a respectivamente.
aplicação. O presente estudo indicou a maior atividade do óleo de erva-doce
A este respeito, vários trabalhos de pesquisa foram realizados para contraR. solanacearum.A este respeito, as atividades antimicrobianas
explicar o modo de ação de tais óleos vegetais essenciais dependendo dos extratos de erva-doce podem ser atribuídas ao seu conteúdo
do óleo, patógeno, planta hospedeira e a interação entre eles. Entre fenólico relatado porMartins e cols. (2016) e Bettaieb Rebey et al. (2018)
essas pesquisas foram registradas porRota et ai. (2008) e Hindumathy como Anetol, Ácido Linoléque, Limoneneno e Fenchone, uma vez que
(2011)Eles descobriram que o impacto da inibição dos óleos essenciais numerosos estudos fitoquímicos indicaram a presença de quantidades
naR. solanacearumcrescimento pode ser ligado aos seus compostos notáveis de compostos fenólicos no anis.
antibacterianos ativos que incluem: esteróides, terpenóides,

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Infecção por polifenoloxidase (T4) Polifenoloxidase Controle saudável


Infecção por peroxidase (T4) Peroxidase Controle saudável
Fenóis infectados (T4) Fenóis Controle saudável
6

Atividade enzimática mg/g de peso fresco.


5

0
0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 0,04 0,07 0,14 Anis
Tomilho capim-limão dente de alho Funcho

concentração (%)

Figura 7.A atividade de peroxidase, polifenoloxidase e teores de fenóis totais medidos em mg/g de massa fresca de folhas de batata Hermes cultivar tratadas com óleos vegetais
essenciais deRalstonia solanacearum (T4) plantas infectadas.

Figura 8.Imagens TEM de (A, B)R. solanacearumcélulas não tratadas com óleo essencial de anis. (C, D, E, F) A suspensão bacteriana cultivada durante a noite (isolado T4) foi suplementada com óleo
essencial de erva-doce na concentração de 0,14% e incubada a 30 -C por 24 h. Observações das membranas bacterianas danificadas das bactérias tratadas com óleo essencial de anis usando TEM (C).
Células tratadas com óleo de erva-doce foram torcidas em forma (D) estruturas semelhantes a bolhas foram observadas fora da célula e rompidas. Grandes massas de detritos atacaram as células (E) as
células não tinham uma textura lisa e eram menores em tamanho em comparação com os controles não tratados e (F) o citoplasma das células danificadas era denso.

No caso do capim-limãoHindumática (2011)mostraram que seu Extraído do óleo essencial de cravo que contém eugenol que se
efeito inibidor pode ser devido a alcaloides e fenóis comoa-terpineno, revelou ser o principal constituinte do óleo de cravo, revelado pelas
linalol,a-pineno, ec-terpinene contém propriedades antibacterianas. análises de estrutura química (Chaieb et al. 2007). Um estudo anterior
realizado porWalsh e outros. (2003)mostraram que o eugenol ativo, um
Verificou-se que as propriedades antimicrobianas dos óleos dos principais compostos do óleo de cravo, teve atividade
essenciais de tomilho dependem principalmente de seus constituintes antibacteriana onde tem capacidade de inibir a função da membrana
fenólicos. Os compostos quantitativamente mais importantes são os de microorganismos comoE. coli,incluindo certos processos ou enzimas
fenóis timol e carvacrol. Sabe-se que esses dois compostos fenólicos celulares.
possuem fortes propriedades antimicrobianas.Sivropoulou et ai. 1996; Além disso, mecanismos de atividade antibacteriana de óleos vegetais
Aligiannis et ai. 2001). O tomilho também é caracterizado por um alto essenciais foram explicados porUltee et al. (1999); Dorman e Deans (2000) e
teor de monoterpenos, como hidrocarbonetosc-terpineno eb-cymene. Rota et al. (2008). Eles descobriram que o óleo essencial de cravo pode
A atividade bacteriana do funcho foi explicada de acordo com Anwar et prejudicar vários processos celulares bacterianos essenciais, como a
al. (2009)quem descobriu issotrans-anetol, fenchone, estragol e limoneno alteração na síntese de DNA, o desperdício de turgidez, a inibição da
foram os principais ingredientes antibacterianos do óleo essencial de atividade de enzimas e a diminuição de processos metabólicos através do
sementes de erva-doce testado. constituinte hidrofóbico de carvacrol, eugenol, acetato de eugenol,

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e o cariofileno presente no óleo essencial de cravo reage com as tomatena Vivo.Pradhanang et ai. 2003; Ji et al. 2005; Lee e outros. 2012relataram
membranas celulares das bactérias alteradas, alterando a que o tratamento com óleo de tomilho diminuiu significativamente a incidência de
permeabilidade aos cátions H+ e K+. murcha bacteriana do tomate e aumentou o crescimento vegetativo em
Os mecanismos de ação dos óleos essenciais de plantas também comparação com o controle não tratado.
foram incluídos na desintegração da parede celular (Helander et ai. Os resultados obtidos demonstraram que os óleos vegetais
1998; Gil e Holley 2006), destruindo a coagulação do citoplasma, essenciais de anis, tomilho e capim-limão podem aumentar os valores
especialmente a membrana citoplasmática (Gustafson et ai. 1998), de atividade de peroxidase e polifenoloxidase. No entanto, o óleo
destruindo as proteínas da membrana, aumento da permeabilidade essencial de erva-doce revela os mínimos. O papel das enzimas nas
levando ao vazamento do conteúdo celular (Lambert e outros. 2001). plantas tratadas com óleos foi registrado por muitos pesquisadores,
Por outro lado, os óleos essenciais também alteram a entre elesVanitha e Umesha (2008)que indicaram que as enzimas
permeabilidade da membrana destruindo o sistema de transporte de protetoras lipoxigenase (LOX) e polifenol-oxidase (POX) participam
elétrons.Tassou et ai. 2000) e vários componentes dos óleos essenciais, ativamente na resistência à incidência da murcha bacteriana. Pode
como carvon, timol e carvacrol, levam a um aumento na concentração inibir o crescimento deRalstonia solanacearum.
intracelular de ATP (Helander et ai. 1998). Inibição do transporte de O aumento da atividade de POX foi encontrado nas reações de
elétrons, translocação de proteínas, síntese de componentes celulares. resistência nas interações planta-bactéria (Young e cols. 1995). O aumento
Finalmente, todas as alterações fisiológicas que podem resultar em lise nas atividades da POX está associado à taxa de multiplicação e disseminação
e morte celular (Ben Arfa et ai. 2006). do patógeno, sugerindo um papel ativo da POX na resistência das plantas.
Os óleos essenciais consistem de baixo peso molecular, análogos de oxigênio Reimers e outros. 1992; Guo et al. 1993). O aumento da atividade POX foi
e derivados de fenóis.Adminis et al. 2002; Huang e outros. 2005). Os pequenos confirmado durante vários sistemas de interação patógeno-hospedeiro (
tamanhos de moléculas de óleo essencial penetram facilmente através das Kartashova et ai. 2000).
paredes celulares e afetam diversos processos bioquímicos. Em resposta à invasão de patógenos, o hospedeiro produz enzimas
Óleos com conteúdo fenólico, como o timol, possuem alta atividade de defesa, que estão envolvidas na resistência a patógenos. As enzimas
antimicrobiana contra bactérias, conforme explicado em muitos estudos ( de defesa desempenham papel importante na defesa das plantas
Misharina e Samusenko 2008; Bassolé et ai. 2010; Sokovic et al. 2010). Várias contra patógenos. As plantas possuem suas enzimas de defesa
suposições foram propostas para demonstrar esse modo de ação dos óleos específicas como PPO, PO e-1,3-glucanase. Enzimas peroxidases que
essenciais de plantas.Kallali et al. (2020)descobriram que o conteúdo são responsáveis tanto pela eliminação de H2O2pela oxidação de
fenólico total aumentou significativamente em plantas de tomate inoculadas fenóis (Polle et al. 1994).
e não inoculadas com bactérias pelo óleo essencial de semente de erva- A peroxidase é uma enzima importante durante a reação de defesa
doce. contra patógenos na oxidação de fenóis e lignificação de células
Os presentes resultados mostraram que as plantas de batata tratadas vegetais hospedeiras. A polifenoloxidase é importante na oxidação de
com óleos vegetais essenciais (anis, tomilho e capim-limão) aumentaram os polifenóis em quinonas e lignificação de células vegetais durante a
fenóis nas plantas de batata inoculadas. Além disso, os resultados obtidos infecção microbiana.Mohammadi e Kazemi 2002).
são idênticos aos indicados porBenhamou et al. (2000). Este relatório propôs As imagens microscópicas de células vegetais tratadas e não tratadas
que os compostos fenólicos podem prevenir a infecção por patógenos, observadas por TEM mostraram que as células tratadas com óleo de anis
aumentando a força mecânica das paredes celulares do hospedeiro, o que tinham uma aparência de lise, mostrando um efeito direto do óleo essencial
leva à inibição da infecção por patógenos. Os flavonóides são os compostos de anis na estrutura celular do patógeno. A membrana celular foi penetrada,
polifenólicos formados pelas plantas para reduzir o estresse oxidativo nas um significado adicional das propriedades antibacterianas do óleo essencial
células (Panche et ai. 2016). Além disso, os resultados mostraram que o de anis. O citoplasma das células tratadas com patógenos era espesso e
aumento do teor de fenol em plantas de batata inoculadas com o patógeno preto, enquanto as células não tratadas apresentavam a coloração negativa
e tratadas com o óleo essencial pode ser devido ao aumento da resistência perfeita ao redor da membrana celular, mas não dentro da célula (Santiago
sistêmica nas plantas hospedeiras.Rajeswari 2014). As defesas constituintes e outros 2019).
das plantas incluem obstáculos estruturais, como as paredes celulares das
plantas, bem como compostos inibitórios, incluindo compostos fenólicos. Consentimento para Participar Publicar
Nürnberger et al. 2004). Esses compostos fenólicos podem desempenhar
um papel importante na resistência da planta a patógenos. É considerado Todos os autores consentem em participar e publicar.
um dos compostos de maior defesa antimicrobiana (Dixon e outros. 2002).

Disponibilidade de dados e materiais


Ultee et al. (1999)descobriram que o componente hidrofóbico do
carvacrol no óleo de cravo interage com as membranas celulares das
Não aplicável.
bactérias e diminui a permeabilidade aos cátions H+ e K+. Essa
alteração prejudica processos celulares essenciais, como as enzimas,
pela perda desses íons, perda da turgidez, alteração na síntese do DNA Aprovação ética
e redução das atividades metabólicas.
Alguns dos extratos vegetais são comumente ricos em compostos Não aplicável.
fenólicos (ácidos fenólicos e flavonoides) e taninos que apresentam
propriedades antioxidantes e antimicrobianas. Os compostos fenólicos Financiamento

são doadores de hidrogênio e são capazes de remover radicais livres e


reduzir danos oxidativos.Kesharwani et ai. 2012; Wintola e Afolayan Os autores estavam financiando este trabalho de pesquisa, bem
2015), o que o torna um poderoso antioxidante. Além da atividade como a análise dos autores, a interpretação dos dados e a redação do
antioxidante, compostos fenólicos atuam como agentes manuscrito.
antimicrobianos através de vários mecanismos, incluindo a lise de
membranas microbianas.Proestos et al. 2006; Bajpai et ai. 2009). Declaração de Interesse Concorrente
Em casa de vegetação, os componentes do rendimento apresentaram
relação proporcional com a eficácia dos óleos essenciais. Esses resultados Os autores declaram que não têm interesses financeiros
estão de acordo com os relatados anteriormente por outros pesquisadores concorrentes conhecidos ou relacionamentos pessoais que possam
usando óleos essenciais de plantas para controlar a murcha bacteriana de parecer influenciar o trabalho relatado neste artigo.

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