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Co2+ bimetálico e hexacianoferrato de Mn2+ para hidrogênio

Biossensor de colesterol sensível

DOI: 10.1002/celc.201900190

Eletrooxidação de peróxido e sua aplicação em um ambiente altamente

Manuel Antuch,*[a, f] Yasser Matos-Peralta,[a] Dayma Llanes,[a] Frank Echevarría,[b]

Joelis Rodríguez-Hernández,[c] Milenen Hernández Marin,[d] Alicia M. Díaz-García,[a] e Leslie
Reguera*[a, e]

Neste trabalho, relatamos a síntese e caracterização de um análogo

bimetálico do azul da Prússia contendo Co e Mn como metais de esfera
externa (CoMnHCF). O material era uma solução sólida e sua caracterização
revelou uma composição química de Co2,05Mn0,95[Fe(CN)6]2 ·12H2O. A
eletroquímica deste novo material mostrou a existência de duas ondas redox

exibindo cinética quase reversível, conforme expresso pela maior separação

de pico a pico ao aumentar a taxa de varredura potencial. Curiosamente, o
sólido CoMnHCF exibiu alta atividade eletrocatalítica para a oxidação do
peróxido de hidrogênio, representando assim um atraente scaffold para a
construção de

1. Introdução

Concentrações elevadas de colesterol estão relacionadas a inúmeras

doenças,[1,2] o que justifica a necessidade de desenvolver continuamente
métodos para a análise dessa biomolécula. A determinação do colesterol é
rotineiramente realizada espectrofotometricamente,[3-6] mas a implementação
do colesterol eletroquímico biosen

[a] Dr. M. Antuch, Y. Matos-Peralta, D. Llanes, Prof. Dr. AM Díaz-García, Prof.

Dr. L. Reguera Universidade de Havana, Faculdade de Química Zapata
y G, 10400, La Havana , Cuba E-mail: manuantcubi@yahoo.com
lesliereguera2005@gmail.com

[b] Instituto
Politécnico Nacional F. Echevarría
Centro de Pesquisa em Ciência Aplicada e
Tecnologia Avançada, U. Legaria, Cidade do México, México
[c] Dr. J. Rodríguez-Hernández Centro de Pesquisa em Química
Artigos

biossensores. Como prova de conceito, a colesterol oxidase foi imobilizada

na superfície do eletrodo usando um método sol-gel, e os voltamogramas
cíclicos foram registrados em concentrações crescentes de colesterol. O
biossensor mostrou uma detecção
limite de ção de 30 ÿM e duas faixas lineares com excelente sensibilidade de
385 mAcm 2M 1 entre 50 e 150 ÿM, emAcm
uma sensibilidade adequada
2M 1 entre 150 e 1 mM.de 80

Até onde sabemos, esta é a primeira aplicação de biossensor de um

hexacianometalato bimetálico pré-sintetizado, explorando assim seu potencial
como catalisador de eletrooxidação de H2O2 .

sors é de suma importância para avançar em direção à portabilidade do

dispositivo com a vantagem adicional de monitoramento em tempo real e
adequação para miniaturização. Comumente, a biossensoriamento do
colesterol é realizada com o auxílio da colesterol oxidase imobilizada em um
eletrodo adequado.[7,8] A colesterol oxidase é
capaz de oxidar o colesterol e produzir peróxido de hidrogênio ao mesmo
tempo. Tanto o evento de reconhecimento quanto a oxidação bioquímica do
colesterol devem ser transduzidos em
um sinal elétrico, que é obtido pela inclusão de um eletrocatalisador de
peróxido de hidrogênio adequado na interface. Hoje em dia, existem vários
compostos inorgânicos que demonstraram ter bom desempenho na
eletrooxidação de H2O2 e, portanto, foram incorporados em vários
biossensores.[9–13] É importante notar que o H2O2 também pode ser
reduzido na superfície dos eletrodos,[14 ,15] que também pode ser usado
como reação de transdução em um biossensor.
Em geral, potenciais positivos aplicados favorecem a oxidação do H2O2 ,
enquanto potenciais negativos favorecem sua redução.[16]
Aplicada Saltillo, Coahuila, México [d] Dr. MH Marin Uma classe especial de análogos do azul da Prússia são aqueles que
44 Departamento de Biossensores, Imunoensaio Center Calle possuem dois metais na esfera de coordenação externa [17,18] (aqui
45 134 e Ave. 25, Reparto Cubanacán Municipality Playa, CP 11600,
referidos como azuis da Prússia bimetálicos ou mistos), para os quais uma
46 Havana, Cuba
variedade de aplicações importantes foi encontrada recentemente.
47
Análogos do azul da Prússia e seus compostos têm sido empregados em
48 [e] Prof. Dr. L. Reguera
Universidade de Havana várias aplicações, incluindo eletrocatálise e armazenamento de energia.[19–
49
Instituto de Ciência e Tecnologia de Materiais 24] Em particular, o azul da Prússia bimetálico tem sido empregado com
50 Havana, Cuba [f] Dr. M. Antuch Endereço atual: sucesso para armazenamento de hidrogênio[17,25] e em catálise heterogênea.
51 Equipe de Recherche et Innovation en Électrochimie
pour l'Énergie (ERIEE) [18] No entanto, até onde sabemos, este é o primeiro relato da aplicação de
52
um hexacianometalato de mistura de metais no desenvolvimento de um
53 Instituto de Química Molecular e Materiais de Orsay (ICMMO) biossensor eletroquímico.
54 UMR CNRS 8182, Paris-Sud University
55 Paris Saclay University, 91400 Orsay, França
Informações de suporte para este artigo estão disponíveis na WWW em https:// Aqui relatamos a síntese, caracterização e eletroquímica do
56
doi.org/10.1002/celc.201900190 CoxMny[Fe(CN)6]2 · zH2O (com x+y=3)
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solução sólida, que é um hexacianoferrato(III) bimetálico contendo Co2+
e Mn2+ na esfera de coordenação externa.
Doravante, este material sólido será referido como CoMnHCF. O estudo
inclui a dinâmica de transferência de carga por voltametria cíclica em
diferentes taxas de varredura, e as propriedades eletrocatalíticas na
eletrooxidação de H2O2 . Por fim, é ilustrada a aplicação deste material
em um biossensor de colesterol.

Materiais e métodos

Reagentes

A colesterol oxidase de Streptomyces foi obtida da Sorachim como um

pó liofilizado, com uma atividade de 21,9 U/mg, código COO 311. O
peróxido de hidrogênio foi obtido da Merck. Todos os outros reagentes
utilizados neste trabalho foram adquiridos da Sigma Aldrich.

Síntese e Caracterização

O sólido CoMnHCF foi sintetizado por coprecipitação química.

Resumidamente, uma solução aquosa de K3[Fe(CN)6] (90 mL, 0,05 M)
foi adicionada gota a gota (1 mL/min) a uma mistura de soluções em
excesso de Co2+ (150 mL, 0,05 M) e Mn2+ (150 mL, 0,05 M) sulfatos. O
precipitado obtido foi envelhecido por 2 dias no licor-mãe, depois
separado por centrifugação e lavado abundantemente com água
bidestilada até teste de sulfato negativo. Vale ressaltar que o excesso da
solução de mistura de metais em relação ao ânion complexo garante que
apenas uma fase seja formada. O espectro de IV foi registrado em um
espectrômetro Perkin-Elmer com o uso de refletância total atenuada
(ATR). O padrão de pó de XRD foi registrado à temperatura ambiente em
um difratômetro convencional D8 Advance da Bruker, operado em uma
geometria de Bragg-Brentano, no modo de alta resolução (HR), com
radiação monocromática CuKÿ1 . O refinamento estrutural foi realizado
usando o método Rietveld implementado no programa FullProf 2005.[26–
28]

A espectroscopia de fotoelétrons de raios X foi realizada em um

espectrômetro K-alpha+ com uma fonte monocromática de raios X Al Kÿ.
O sinal adventício de carbono 1 s em 284,8 eV foi usado como referência
para a correção de carga para todo o espectro[29,30] O espectro de
fluorescência de raios-X dispersivos de energia (EDXRF) foi registrado
com um equipamento S2 Ranger da Bruker. A estabilidade térmica e o
grau de hidratação do CoMnHCF foram avaliados a partir da análise
termogravimétrica (TG), realizada com uma termobalança TGA-Q5000
(da TA Instruments) operada no modo Hi-Res-Dynamic, sob fluxo de N2
na temperatura de 25 a 300°C gama, a uma taxa de aquecimento de 5°C/min.
Artigos

o aprisionamento foi realizado por pequenas modificações de um método

sol-gel publicado.[31] Resumidamente, a solução precursora de sol-gel
foi preparada de fresco misturando 570 ÿL de etanol, 50 ÿL de ortossilicato
de tetraetila, 10 ÿL de brometo de cetil trimetilamônio (CTAB, 3,8%), 10
ÿL de solução tamponada com fosfato (PBS, pH = 7) e 60 ÿL de H2O
duplamente destilada. Primeiramente, 5 ÿL da enzima colesterol oxidase
(2 mg/mL) foram adicionados por drop-cast na superfície dos eletrodos
de GC/CoMnHCF/Nafion. Em seguida, os 5 ÿL da solução precursora sol-
gel foram depositados na superfície do eletrodo também por drop-casting.
O bioeletrodo foi então armazenado durante a noite em PBS (pH=7) a
4°C antes do uso. As soluções estoque de esteróides foram preparadas
seguindo um relatório anterior.[32] Por exemplo, preparou-se uma solução
de colesterol em propan-2-ol (0,302 g/L) e depois misturou-se com 3,85
mL de Triton X-100; depois o volume foi aumentado para 100 mL em
solução tampão fosfato (pH 7,0; 0,1 M).

Medições Eletroquímicas

Todas as medições eletroquímicas foram realizadas em uma configuração

de célula de três eletrodos, com placa de platina como contraeletrodo e
AgjAgCl (KCl saturado) como eletrodo de referência. Todas as soluções
foram preparadas com água bidestilada. A eletroquímica do sólido
CoMnHCF foi estudada em solução de Na2SO4 (0,1 M). O comportamento
do biossensor foi estudado em uma mistura de PBS pH=7 (0,1 M) e NaCl
(0,15 M).

2. Resultados e Discussão

2.1. Composição, Morfologia, Estrutura Cristalina e

Eletrônica do Ferricianeto Bimetálico Co2 + Mn2+

Os espectros de infravermelho dos ferricianetos poliméricos, na faixa de

1
4000 a 400 cm, são compostos
coordenadas pelas
e ligadas porbandas

presença
das moléculas
hidrogênio,

evidência
1
de uma
sólida, com distribuição aleatória tanto do Co quanto
inequívoca
formação
de água
e três bandas

que o Mn2+ e o Co2+ 2154 cm , respectivamente.[33] Os ferricianetos,

ÿ(CN) para o
1
, composto
em 2167 ebimetálico
2187 cm,éauma única banda
do Mn
dena

CN, em vez de uma mistura de ferricianetos de manganês e cobalto.

[34,35]
da
uma
do
referencial polimérico: ÿ(CN), ÿ(FeCN) e ÿ( Fe C). O CoMnHCF (Figura 1-
a) exibe uma banda ÿ(CN) única e estreita em uma frequência mais baixa

estrutura
solução
cristalina, ocupando a coordenação sítios na extremidade N do ligante

A frequência relativa mais baixa observada para a banda ÿ(CN)

quando dois metais diferentes são combinados na esfera de coordenação
externa pode ser associado ao aumento da densidade eletrônica no
orbital antiligante 2pÿ* ou no orbital 5ÿ do CN, que possui certo caráter
antiligante.[36]

44
Modificação do Eletrodo
45
46 Eletrodos de carbono vítreo (GC) foram totalmente polidos com alumina
de tamanho micrométrico e, em seguida, sonicados sequencialmente em Ambos os efeitos podem estar relacionados a distorções geométricas
47
água, acetona e água por 15 minutos em cada solvente. Para modificar na estrutura do composto bimetálico que podem favorecer a doação de
48
o GC com o CoMnHCF, preparou-se uma tinta dispersando 2,1 mg do ÿ do FeIII para a extremidade C do grupo CN, aumentando assim a
49 sólido em 1 mL de Nafion (solução polimérica de 5% em peso). Nestas população orbital 2pÿ* e/ou desfavorecendo a doação de ÿ pelo
50 condições, o sólido CoMnHCF não se dissolve, mas permanece como
extremidade N do CN para os metais externos, aumentando a densidade
51 uma dispersão fina. Para os estudos eletroquímicos do sólido CoMnHCF,
eletrônica no orbital 5ÿ do CN. A banda ÿ(FeC) para o CoMnHCF aparece
52 10 ÿL da dispersão CoMnHCF/Nafion foram colocados na superfície do
1
GC por drop-casting e deixados secar por 30 minutos em temperatura em 420 cm na mesma frequência que para o ferricianeto de
, menor
manganês
do e
53
ambiente, ao ar livre. Para a fabricação do biossensor, a quantidade de que para o ferricianeto de cobalto (em 432 cm), ou seja, a doação ÿ-back
54 CoMnHCF/Nafion adicionada à superfície do GC foi reduzida para 5 ÿL, 1
de FeIII para a extremidade C não é particularmente
composiçãofavorecida
mista, sugerindo
na
55 a fim de evitar rachaduras no filme durante o procedimento subsequente que a frequência relativamente menor para
56 de aprisionamento da enzima. a enzima
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Figura 1. a) espectro IR eb) espectro XPS de pesquisa de CoMnHCF.

A banda ÿ(CN) no CoMnHCF está principalmente relacionada com a

menor doação ÿ pela extremidade N do CN. A banda ÿ(FeCN) para o

de água também

3642 cm
,

1
1
CoMnHCF, em 592 cm apresenta

são observadas:
em 542
uma frequência
, correspondentes

ÿ(OH)

e ÿ(HOH) em 1608 cm
cm e
em
maior
para os que as bandas
ferricianetos
manganês e cobalto, respectivamente. As vibrações ÿ(OH) e ÿ(HOH)
1 1
544 cm para as moléculas

para metais da esfera externa, e ÿ(OH) em 3378

cm um ombro em 1653 cm para 1 a água
de

para a água coordenada

limitada
1
e ÿ(HOH) como
Artigos

Figura 2. a) Padrão de pó XRD, observado (vermelho), ajustado (preto) e sua

diferença (azul) para Co2,05Mn0,95[Fe(CN)6]2 ·12H2O. Inset: região do padrão de
ângulos mais altos. b) Lei de Vegard para determinação da estequiometria do metal
da esfera externa. Na expressão para o comprimento da cadeia M NC Fe CN M; a
letra M significa Co ou Mn. c) Análise térmica para determinar a quantidade de
água de hidratação.

esperado, a borda da célula – que corresponde ao comprimento da

cadeia (Mn ou Co)-NÿC Fe CÿN-(Mn ou Co) – está entre os valores
para ferricianetos de Mn e Co, 10,4882(9) e 10,2794(5 ), respectivamente.
[33] A borda da célula para essas fases cúbicas (manganês e
ferricianetos de cobalto e o composto bimetálico) e a razão atômica
dos metais Mn e Co no bimetálico
composto (determinado a partir do espectro EDFRX, Figura S1) foram
linearmente correlacionados de acordo com a Lei de Vegard[34,35,37]
(Figura 2b), que relaciona a constante da célula unitária com a
composição elementar de uma solução sólida. Isso constitui outra
evidência inequívoca do caráter de solução sólida do composto
bimetálico. Para a determinação da quantidade de moléculas de água
de hidratação, foi realizada uma análise termogravimétrica (Figura 2c).
O material desidrata de forma contínua desde a temperatura ambiente
até aproximadamente 140°C e é estável no seu anidro por, até 250°C.
A estequiometria dos metais no CoMnHCF, conforme determinado a
partir de XPS e EDXRF (Figura S1), juntamente com o grau de
hidratação derivado da análise de TG, confirmou ainda uma composição
química de Co2,05Mn0,95[Fe(CN)6]2 · 12H2O.

por hidrogênio A morfologia do composto foi avaliada por Microscopia Eletrônica

44
moléculas às coordenadas. de Varredura (Figura S2), onde foi observada forma cúbica com
45
O sólido CoMnHCF foi posteriormente caracterizado por tamanho de partícula variando de 250 nm a 1 ÿm.
46
espectroscopia XPS e sua composição química foi avaliada de forma Essa forma nanocúbica é típica em análogos do azul da Prússia.[19,22–
47
inequívoca (Figura 1b). A composição atômica da esfera de 24,38]
48
coordenação externa é relevante para este estudo, e foi inicialmente
49
estimada por XPS, resultando em Co2,05Mn0,95[Fe (CN)6]2 ·12H2O.
50
2.2. Eletroquímica do Sólido CoMnHCF e Eletrooxidação
51
A Figura 2a mostra os padrões de pó XRD experimentais e de H2O2
52
calculados para o sólido CoMnHCF. Uma única fase cúbica ( Fm3ÿmÞ
53
com uma borda de célula a = 10,350(1) Å e volume da célula 1108,8 Os eletrodos de carbono vítreo modificados com o sólido CoMnHCF
54
(2) Å3 foi identificada (Tabela S1). Uma vez que este sólido exibiram duas ondas redox bem definidas em 0,46 V (referido como
55
corresponde a uma única fase em vez de duas fases cúbicas de Mn e sinal 1) e 0,83 V (referido como sinal 2). Esses pares redox têm sido
56
Co ferricianetos, seu caráter de solução sólida foi confirmado. amplamente atribuídos à intercalação de
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íons alcalinos (Na+ neste caso) da solução após a absorção de um elétron.[14,15] O
sólido CoMnHCF tem três átomos redox-ativos; ou seja, Co, Mn e Fe. Os pares

Co3þjCo2þ e Mn3þjMn2þredox aparecem em um potencial muito semelhante e, portanto,

não podem ser diferenciados;[22,39–42] portanto, estes constituem o sinal 1 na Figura 3-
a. Por outro lado, o sinal eletroquímico 2 é devido ao par redox Fe3þjFe2þ .[22,39–42]

As equações químicas para esses processos redox podem ser escritas. Para as
equações químicas aqui escritas, adotamos a notação tradicional onde o estado de
oxidação da camada externa

Os metais de alta rotação da esfera são expressos em algarismos arábicos, enquanto o

estado de oxidação do metal de baixa rotação da esfera interna é representado em
algarismos romanos.[43]

(1):

Na5Co2þ
x
Por exemplo, a reação envolvendo o par Co3þjCo2þ é representada na Equação

Mn2þ FeIIðCNÞ6 ½ ÿ2 ¼ Na5 xCo3þx Mn2þ

Y

FeIIðCNÞ6 ½ ÿ2 þ xNaþ þ xe

Para Mn3þjMn2þ [Eq. (2)]:

Y
ð1Þ
Y

FeIIðCNÞ6 ½ ÿ2 þ yNaþ þ ye
Artigos

Na5Co2þx Mn2þ FeIIðCNÞ6 ½ ÿ2 ¼ Na5 yCo2þ x Mn3þ

Assim, a reação global para o sinal 1 é dada por

Equação (3):

Na5Co2þx Mn2þ FeIIðCNÞ6 ½

Y ÿ2 ¼ Na5 x yCo3þ x

FeIIðCNÞ6 ½ ÿ2 þ ðx þ yÞðNaþ þ e Þ
Y

Mn3þ
Y

Da mesma forma, para o sinal 2; ou seja, o par redox Fe3þjFe2þ , o

equação química é dada pela Equação (4):

Na2Co3þx Mn3þ FeIIðCNÞ6 ½ ÿ2 ¼ Co3þ

Y

FeIIIðCNÞ6 ½ ÿ2 þ 2Naþ þ 2e
x Mn3þ Y

Nas Equações (1) a (4), x ¼ 2:05 e y ¼ 0:95 e, claro, x þ y ¼ 3. Água

de hidratação e contra-íons aniônicos não foram incluídos para simplificar.

Insights mais profundos sobre essas reações eletroquímicas foram obtidos

estudando os respectivos voltamogramas cíclicos em diferentes taxas de varredura
(Figura 3a). De fato, a dependência linear das correntes de pico versus taxa de varredura
indica que as espécies redox estavam ligadas à superfície e, portanto, a resposta
eletroquímica não foi controlada pela difusão (Figura 3b). A Figura 3a mostra

adicionalmente que as posições dos picos anódico e catódico se separam com o

aumento da taxa de varredura, permitindo assim a determinação da constante de taxa
padrão ðk0Þ e do coeficiente de transferência de Butler-Volmer (ÿ), de acordo com o
método de Laviron para nDEp > 200 mV[44] [Eq. (5)]:

ln k0 ð Þ ¼ alnð1 aÞ þ ð1 aÞlnðaÞ

ln
RT

nFn ÿ ÿ to1 aÞ
nF
RT DEp

onde k0 é a constante de taxa padrão para transferência de elétrons, a representa o

coeficiente de transferência de Butler-Volmer, n representa o número de elétrons
trocados (de acordo com a eq. 3, para o sinal 1 n ¼ 3; da mesma forma, seguindo a
equação 4, n ¼ 2 para o sinal 2), v é a taxa de varredura e DEp é a separação pico a

pico.
ð2Þ

ð3Þ

ð4Þ

ð5Þ

No geral, cada sinal redox exibiu uma cinética eletroquímica quase reversível. O
processo redox associado aos pares CoIIIjCoII e MnIIIjMnII apresentou uma constante

de velocidade k0= 0,63 s e ÿ=0,08. Da mesma forma, o segundo sinal redox associado
1
ao par redox FeIIIjFeII exibiu
constantes umapara
de taxa constante de taxade
transferência deelétrons
k0=0,82estão
s e ÿ=0,12. Ambas as
em excelente
44
acordo com outros eletrodos baseados em azul da Prússia relatados na literatura.[45-50]
45 1

46
47
48 Uma vez que as principais características eletroquímicas do sólido
49
foram estabelecidas, buscamos estudar sua atividade eletrocatalítica frente à
50
eletrooxidação do peróxido de hidrogênio. A Figura 3f mostra a evolução dos
51
voltamogramas cíclicos com a adição de quantidades crescentes de H2O2, enquanto a
52
Figura S4 ilustra o gráfico de calibração correspondente. De fato, há um aumento óbvio
53
nas correntes de oxidação dependendo da concentração de peróxido de hidrogênio.
54
Curiosamente, a presença de H2O2 modifica a forma do CV de modo que a frente e para
55 Figura 3. a) Voltamograma cíclico do sólido CoMnHCF em diferentes taxas de
varredura; b, c) corrente de pico vs. taxa de varredura; d, e) potencial de pico vs. trás
56 logaritmo da taxa de varredura; f) eletrooxidação do peróxido de hidrogênio.
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varreduras se cruzam (Figura 3f, inserção). Tal característica já foi
observada antes em voltametria cíclica para o eletrocatalítico [51,52]
oxidação de várias espécies, incluindo não apenas H2O2, masmas

2.3. Biodetecção de Colesterol e Estudo de Interferência

Colesterol þ O2
Cholest 4 em 3 þ H2O2
Colesterol oxidase
ÿÿÿÿÿÿÿÿÿ!

O peróxido de hidrogênio é então detectado na superfície do

eletrodo de acordo com a Equação (7):
no eletrodo
2MIII þ H2O2 ÿÿÿÿÿÿ!O2 þ 2Hþ þ 2MII

Onde M representa um sítio metálico ativo na superfície de

também
metanol.[53,54] Assim, tanto o aumento da corrente anódica quanto a
forma do cíclico voltamogramas confirmam a capacidade desse material
de eletrocatalisar a oxidação do H2O2.

A atividade eletrocatalítica do CoMnHCF frente à eletro oxidação do

H2O2 torna este material atraente para ser usado como scaffold em
um biossensor. Como prova de conceito, selecionamos a colesterol
oxidase, uma vez que esta enzima realiza a oxidação do grupo hidroxila
do colesterol a uma cetona e simultaneamente produz H2O2 [Eq. (6)]:

o eletrodo. Observe que o processo MIII þ e ¼ MII representado na eq.

7 é uma representação simplificada de qualquer uma das equações 3
e 4. Uma inspeção do voltamograma cíclico da Figura 3-f (inserção)
mostra que a corrente eletrocatalítica começa em potenciais em torno
de 0,3 V (onde a oxidação dos pares redox Co3þjCo2þ e Mn3þjMn2þ
começa ) e se estende até 1,2 V (onde o Fe3þjFe2þ está ativo); o que
significa que todos os centros metálicos provavelmente têm uma
participação combinada na oxidação do peróxido de hidrogênio.

Para fins de comparação, também foi fabricado um biossensor

sem o sólido CoMnHCF, provando que a superfície de carbono vítreo
per se não é adequada para um biossensor baseado na detecção de
H2O2 (ver Figura S3). Isso demonstra que a presença do
eletrocatalisador é necessária para o funcionamento do biossensor.
Quando o sólido CoMnHCF foi incorporado ao biossensor, pode-se
observar um claro aumento na corrente medida com a adição
ð6Þ

ð7Þ
Azul da Prússia NP[a] 0–15000
ZnONP [a]
Si/Ag ZnO NT[b]
NiO

CoMnHCF
0,001–0,5
1–13000
67–600
ZnO NR[c] 1–45000 Pt/polidopamina
35,3–500 C3N4H+/polipirrol 20–5000
0,04–0,22
Au NP[a]

50–150
150–1000
Artigos

Tabela 1. Breve comparação entre as principais características analíticas de diferentes

biossensores de colesterol relatados na literatura. O elemento sensor é a colesterol oxidase
em todos os casos.

Faixa linear do eletrodo modificado [ÿM] LOD

[ÿM]

publicados (Tabela 1), mostram que o LOD do nosso sistema não é

Sensibilidade
[mAcm 2M 1 ]

200 2,1 0,00037

23,7 0,005 79,4
20 7,8 0,05 10,0
10,5
14,3 8 645 34,6
385 80

30
45,96

[a] NP: nanopartículas. [b] NT: nanotubos. [c] NR: nanobastões.

Estes resultados, colocados na perspetiva de dados previamente

um recorde; no entanto, valores de LOD ultrabaixos não são necessários

no interesse da análise prática, uma vez que o limite de concentração
de colesterol aconselhável no sangue humano está entre 5,17 e 6,18
mM,[55,56] que é um pouco maior que a faixa operacional linear de
nosso biossensor (Figura 4b). Vale a pena destacar a excelente
sensibilidade relatada para o nosso biossensor, em contraste com
outros sistemas que têm LOD muito baixo, mas sensibilidade inferior
(consulte a Tabela 1 para uma comparação sucinta).
Para demonstrar que a seletividade da enzima para o colesterol
não foi afetada pelo processo de imobilização, o sistema catalítico
também foi estudado na presença de possíveis espécies interferentes.
Para isso, foram escolhidos outros compostos esteróides que
apresentam semelhanças estruturais com o colesterol, com foco nos
esteróides que também apresentam um grupo hidroxila ÿ-orientado no
C-3 do esqueleto esteróide (como o colesterol), mas com cadeias
laterais diferentes. Conforme mostrado na Figura 4c, estigmasterol e
diosgenina foram escolhidos para este fim e os três esteroides foram
adicionados à célula em sequência.
Conforme ilustrado na Figura 4f, a adição de colesterol provocou
um aumento na corrente medida, mas nem o estigmasterol nem a
diosgenina (concentração de esteróides = 100 ÿM) causaram um
aumento do sinal analítico. Isso indica claramente que a enzima
manteve sua seletividade e que o biossensor é capaz de produzir uma
resposta apenas para o colesterol, apesar da coexistência em solução
com outros esteróides semelhantes.
Ref.

[7]
[9]
[10]
[12]
[57]
[58]
[59]
[60]

Este trabalho

sequencial de colesterol (Figura 4a e b). O biossensor mostrou um

44
limite de detecção de 30 ÿM e duas faixas lineares bem definidas. Em A interferência pode ser causada por outras espécies eletroativas
45
concentrações inferiores a 150 ÿM, o biossensor exibiu uma alta presentes em amostras naturais. A Figura S5 mostra ensaios de
46
sensibilidade de 385 mAcm 2M 1 e uma sensibilidade menor, mas interferência realizados com ácido ascórbico, cisteína, glicose e ácido
47
adequada, de , úrico (concentração de todos os interferentes 50 ÿM). O biossensor
48 2 1
80 mAcm M em concentrações superiores a 150 ÿM. Portanto, apresentou notável tolerância ao ácido ascórbico, cisteína e glicose,
49
nosso biossensor funciona melhor em concentrações mais baixas. mas exibiu resposta ao ácido úrico. Conforme relatado recentemente,
50
Nosso transdutor bimetálico fornece um sensor de colesterol muito [45] a interferência às vezes é inevitável durante certas análises e a
51
melhor em comparação com o PB (entrada 1 na Tabela 1). De fato, PB literatura é rica em exemplos em que a interferência positiva é relatada
52
sozinho dá uma sensibilidade de 2,1 mAcm detecção
2M 1 e um(LOD)
limitede
de200 ÿM, para as quatro espécies mencionadas acima,[6] ou para algumas delas,
53
em contraste aberto com nossos sistemas bimetálicos que mostram [60] enquanto a interferência negativa pode ocorrer também.[48] Assim,
54
uma sensibilidade de 385 mAcm 2M 1 e um LOD de 30 ÿM. nosso sistema apresenta uma tolerância aceitável a uma variedade de
55
produtos químicos coexistentes em solução.
56
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Figura 4. a) Voltamogramas cíclicos do biossensor em concentrações crescentes de colesterol. b) Gráfico de calibração mostrando as duas faixas lineares para este
biossensor. c) Comparação das estruturas químicas das moléculas empregadas para o estudo de interferência. d) Voltamogramas cíclicos para adição sequencial de
esteroides descritos no item (c). e) Ampliação da parte anódica dos voltamogramas cíclicos de (d). f) Gráfico de calibração para adição sequencial dos esteróides descritos
no item (c); cada ponto neste gráfico representa a adição da substância representada na abcissa.

3. Conclusões

Nesta contribuição descrevemos a síntese e caracterização de um novo análogo

do azul da Prússia, apresentando Co e Mn na esfera de coordenação externa. O
material foi caracterizado por várias técnicas, o que permitiu concluir que o
material era uma solução sólida com uma composição química precisa de
Co2,05Mn0,95[Fe(CN)6]2. ·12H2O. Análogos bimetálicos do azul da Prússia são
pouco frequentes na literatura e, portanto, objetivamos explorar seu comportamento
esteróides. Este trabalho fornece uma aplicação bioeletrocatalítica interessante
para este análogo bimetálico do azul da Prússia, que é um material de baixo
custo e fácil de sintetizar.

Conflito de interesses

Os autores declaram não haver conflito de interesses.

44
eletroquímico por voltametria cíclica, mostrando duas ondas quase reversíveis,
45
associadas à intercalação sequencial de íons Na+ da solução. As propriedades
46 Palavras-chave: biossensores · colesterol · hexacianoferrato misto · peróxido de
eletrocatalíticas deste material frente à oxidação do peróxido de hidrogênio foram
47 hidrogênio · eletrocatálise
comprovadas, convertendo assim este novo material em uma plataforma atraente
48
para sensoriamento bioeletroquímico. Um biossensor de prova de conceito foi
49
então fabricado com CoMnHCF e colesterol oxidase. O biossensor exibiu dois [1] A. Socorro García, I. De la Fuente Hermosín, JJ Baztán, Eur. Geriatria.
50
Com. 2015, 6, 442–446.
51 [2] JJA Ferguson, E. Stojanovski, L. MacDonald-Wicks, ML Garg, Metabolism
52 2018, 82, 22–35.
53 [3] NR Nirala, PS Saxena, A. Srivastava, Spectrochim. Acta – Parte A Mol.
faixas lineares com alta sensibilidade, abrangendo as concentrações de interesse Biomol. Spectrosc. 2018, 190, 506–512.
54 [4] TC Huang, V. Wefler, A. Raftery, Anal. Chem. 1963, 35, 1757–1758.
para aplicações práticas. Além disso, tal dispositivo apresentou uma resposta
55 [5] D. Glick, BF Fell, KE Sjølin, Anal. Chem. 1964, 36, 1119–1121.
rápida, reversível e seletiva ao colesterol, mesmo na presença de outras [6] NR Nirala, S. Abraham, V. Kumar, A. Bansal, A. Srivastava, PS Saxena, Sens.
56
substâncias estruturalmente semelhantes. Atuadores B 2015, 218, 42–50.
57

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Manuscrito recebido: 30 de janeiro de 2019

Manuscrito revisado recebido: 18 de fevereiro de 2019
Manuscrito aceito online: 18 de fevereiro de 2019

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