Hydrogen Peroxide Detection Using Prussian Blue Modified 3D Pyrolytic Carbon Microelectrodes PDF

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Artigo de Pesquisa
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doi.org/10.1002/elan.202100387
Detecção de peróxido de hidrogênio usando microeletrodos

de carbono pirolítico 3D modificados com azul da Prússia
Sheida Esmail Tehrani,[a] Long Quang Nguyen,[a] Giulia Garelli,[a] Bettina M. Jensen,[b]
Tautgirdas Ruzgas,[c] Jenny Emnéus,[d] e Stephan Sylvest Keller[a]
Resumo: Um sensor de peróxido de hidrogênio amperométrico

altamente sensível à base de azul da Prússia foi desenvolvido
usando microeletrodos de carbono pirolítico 3D. Uma célula
eletroquímica de vários eletrodos impressa em 3D permitiu a
modificação simultânea do azul da Prússia altamente reprodutível
em vários eletrodos de carbono. O efeito do pré-tratamento com
plasma de oxigênio e tempo de deposição no eletro azul da Prússia
A detecção de peróxido de hidrogênio (H2O2) é altamente

relevante para a indústria alimentícia [1] e farmacêutica [2],
aplicações biomédicas [3], monitoramento ambiental [4,5],
síntese química [6] e produção de energia sustentável [7]. Em
processos biológicos, o H2O2 é gerado como uma molécula
intermediária [3] e como subproduto catalítico de um grande
número de reações mediadas por enzimas, incluindo a oxidação
da glicose [8], colesterol [9] e lactato [10]. Sendo uma espécie
reativa de oxigênio (ROS), a produção elevada de H2O2 no
corpo é uma indicação de estresse oxidativo levando a danos
celulares e teciduais, causando envelhecimento precoce [11],
diabetes [12], bem como Alzheimer, Parkinson [13] e cardio
doenças vasculares [14]. Portanto, o monitoramento altamente
sensível e em tempo real de H2O2 é de importância significativa
para aplicações clínicas e industriais.
Entre os métodos convencionais de detecção de H2O2 ,
incluindo titrimetria [15], fluorescência [16], espectrofotometria
[17], quimioluminescência [18], cromatografia [19] e eletroquímica
[19–21], este último é rápido e preciso para análises quantitativas
combinadas com potencial para miniaturização e fabricação de
baixo custo de sensores eletroquímicos. Como o H2O2 é uma
molécula eletroativa, passando por um processo de reação de
foi estudada a deposição. A resposta amperométrica de sensores
2D e 3D à adição de peróxido de hidrogênio em concentrações
ÿM e sub-ÿM em tampão fosfato foi investigada. Uma alta
sensibilidade comparável aos sistemas de injeção de fluxo e um
limite de detecção de 0,16 ÿM foi demonstrada com microeletrodos
de carbono pirolítico 3D em condição de batelada agitada
Palavras-chave: Azul da Prússia · sensor de peróxido de hidrogênio · amperometria · carbono pirolítico
1. Introdução
A fim de aumentar a cinética de transferência de elétrons e
diminuir o sobrepotencial necessário para a reação redox do
H2O2 , sensores eletroquímicos de H2O2 foram desenvolvidos
pela modificação de eletrodos com eletrocatalisadores
enzimáticos [2,22–24] e não enzimáticos [25–32]. A vantagem
de usar bioeletrocatalisadores não enzimáticos é sua altíssima
seletividade e boa sensibilidade para baixas concentrações de
H2O2. No entanto, os bioeletrocatalisadores são frequentemente
associados a altos custos, instabilidade, perda de atividade
catalítica e demorada preparação do sensor.
Portanto, esforços de pesquisa têm sido dedicados a projetar
eletrocatalisadores livres de enzimas eficientes com sítios ativos
abundantes que podem ser integrados com substratos
condutores adequados para maximizar a transferência de carga
na interface eletrodo/eletrólito [21,29, 30, 33]. Metais nobres [34]
como Au, Pt e Pd, e suas ligas [29] (ex.
AuAg, PtPd) na forma de nanoestruturas e nanopartículas,
óxidos metálicos (MnO2, TiO2) e complexos metálicos
[a] S. Esmail Tehrani, L. Quang Nguyen, G. Garelli, S. Sylvest

Keller Centro Nacional de Nano Fabricação e
Caracterização (DTU Nanolab), Universidade Técnica da Dinamarca,
Ørsteds Plads, Edifício 347, 2800 Kongens Lyngby, Dinamarca [ b] BM
dois elétrons em diferentes níveis de pH, sua oxidação ou
Jensen Allergy Clinic, Copenhagen University Hospital em Herlev Gentofte,
redução pode ser estudada quantitativamente em tempo real Gentofte Hospitalsvej 8, 2900 Hellerup, Dinamarca [c] T. Ruzgas Biofilms
por eletroanálise. Um sensor eletroquímico de H2O2 converte a Research Center for Biointerfaces, Department of Biomedical Science,
reação química em um sinal elétrico proporcional à quantidade Malmö University, Per Albin Hanssons väg 35, Forskaren Building , 21432
de H2O2 oxidado/reduzido na amostra. No entanto, a detecção Malmö, Suécia [d] J. Emnéus Departamento de Biotecnologia e Biomedicina
eletroquímica direta de H2O2 tem grandes impedimentos na (DTU Bioengenharia), Universidade Técnica da Dinamarca, Pro
duktionstorvet, Building 423, 2800 Kongens Lyngby, Dinamarca
maioria dos materiais de eletrodo. Devido à lenta cinética de
Informações de suporte para este artigo estão disponíveis na WWW em
transferência de elétrons, são necessários sobrepotenciais muito
https: //doi.org/10.1002/elan.202100387
altos para conduzir a reação, o que é um desafio na presença
de espécies interferentes geralmente presentes em amostras
biológicas.
www.electroanalysis.wiley-vch.de © 2021 Wiley-VCH GmbH Eletroanálise 2021, 33, 2516 – 2528 2516
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[35] (hexacianoferrato férrico, metaloftalocianinas), materiais orgânicos
e poliméricos, como corantes redox e polímeros condutores [36], bem
como nanomateriais à base de carbono [37,38] (nanotubos de carbono,
grafeno, carbono dopado) foram explorados como eletrocatalisadores
de H2O2 .
Entre os complexos metálicos, o azul da Prússia (PB), que é um
hexacianoferrato metálico, tem sido amplamente utilizado como
eletrocatalisador para detecção de H2O2 [39-45]. A forma reduzida de
PB, chamada de branco da Prússia (PW), catalisa a redução de H2O2
em sobrepotencial muito baixo [46]. A estrutura semelhante à zeólita do
PB permite apenas que a pequena molécula de H2O2 se difunda na
rede cristalina, onde é reduzida [47]. A combinação de baixo
sobrepotencial e exclusão de tamanho de moléculas interferentes
promoveu o PB como um eletrocatalisador altamente seletivo para
detecção de H2O2 .
Os eletrodos podem ser modificados com PB por eletrodeposição em
poucos segundos. O baixo custo e a facilidade de síntese do PB o
identificaram como um eletrocatalisador ideal para comercialização e
produção em massa de sensores [48-50].
Ao considerar a plataforma do transdutor eletroquímico, os eletrodos
funcionais 3D de vários materiais e estruturas poderiam potencialmente
[63]. Com a crescente popularidade das impressoras 3D e seus preços
em queda nos últimos anos, os cientistas exploraram diferentes designs
3D e materiais condutores imprimíveis para fabricação de sensores
[64,65] ou desenvolveram sistemas eletroquímicos impressos em 3D
para análise de fluxo e injeção em lote [66] , sensoriamento e
biosensoriamento [67], eletrossíntese [68], separação de água e
aplicações relacionadas à energia [63].
Com a célula eletroquímica impressa em 3D, a eletrodeposição de
PB foi otimizada para melhorar a cobertura da superfície, a superfície
eletroativa e a estabilidade do eletrocatalisador no eletrodo de carbono
pirolítico. Finalmente, a detecção amperométrica de H2O2 na faixa ÿM
e sub-ÿM foi investigada.
2. Materiais e métodos
2.1 Materiais
Ácido clorídrico (HCl) Reagente ACS 37% Sigma Aldrich, peróxido de

hidrogênio (H2O2) 35% Alfa Aesar, cloreto de potássio (KCl) 99,5%
Merck Millipore, hexacianoferrato de potássio (II) tri-hidratado (K4Fe(CN)6
superar as limitações dos eletrodos de filme fino tradicionais. Propriedades ·3H2O)
excepcionais, como grande área de superfície eletroquimicamente ativa,
transporte de massa e difusão aprimorados, excelente acessibilidade a
locais ativos e cinética rápida na interface eletrodo/eletrólito podem
fornecer melhor sensibilidade em comparação com eletrodos 2D [51].
Eletrodos de carbono pirolítico 3D foram fabricados usando processos
de microfabricação baseados em salas limpas, permitindo excelente
capacidade de adaptação da geometria do eletrodo, configuração e
propriedades para uma aplicação específica [52]. Em vários estudos, foi
demonstrada maior sensibilidade para biossensor eletroquímico com
eletrodos de carbono pirolítico 3D [53-55].
Embora existam numerosos exemplos, onde PB foi eletrodepositado

em eletrodos de película fina de diferentes materiais, como ouro [56],
platina [56,57], vidro [58-60] e serigrafado [61, 62] carbono, há até o
momento, não houve nenhum relatório sobre o uso de carbono pirolítico
como material de eletrodo para o desenvolvimento de H2O2 baseado
em PB
sensores.
Aqui, apresentamos pela primeira vez um sensor de H2O2 simples
ultrassensível baseado em eletrodos de carbono pirolítico 3D modificados
por PB. Para isso, eletrodos micropilares 3D foram projetados e
Reagente ACS 98,5–102,0% Sigma Aldrich, hexacianoferrato de potássio
(III) (K3Fe(CN)6) Reagente ACSÿ
99,0% Sigma Aldrich, cloreto de ferro (III) hexahidratado (FeCl3 ·6H2O)
99,0–102,0% Millipore, fosfato de potássio monobásico (KH2PO4)ÿ99,0%
Sigma Aldrich, fosfato de potássio dibásico (K2HPO4) reagente
ACSÿ98% Sigma Aldrich, 0,01 Solução salina tamponada com fosfato M
(PBS) pH 7,4 (NaCl 0,138 M; KCl 0,0027 M em 1 L de H2O destilada)
Sigma Aldrich, 2-propanol (isopropanol) 70% em H2O foram todos
adquiridos da Sigma-Aldrich Denmark A/S. Todo o estoque as soluções
foram preparadas recentemente antes de cada experimento usando
água bidestilada, a menos que indicado de outra forma. Wafers de silício
polido de lado único de 6 polegadas foram adquiridos da Siegert Wafer,
resistência da série SU-8 2000 da Kayaku Advanced Materials e acetato
de propileno glicol metil éter (PGMEA) da micro resist technology GmbH,
Alemanha.
2.2 Fabricação de Eletrodo de Carbono Pirolítico
Chips de eletrodos com eletrodos de carbono pirolítico em configuração

2D e 3D foram projetados e fabricados para este estudo. O eléctrodo de
trabalho plano 2D (2DWE) tinha uma forma geométrica de um círculo
fabricados. com um diâmetro de 4 mm e uma área de superfície de 12,6 mm2 . O
A tecnologia de fabricação aditiva, também conhecida como eletrodo de trabalho 3D (3DWE) consistia
com uma em altura
284 micropilares
de 225 ÿm eadicionais
um
impressão 3D, foi implementada para criar uma célula eletroquímica diâmetro de 68 ÿm padronizados no topo do 2DWE, resultando em uma
adequada para os chips de eletrodo de carbono pirolítico. A impressão área de superfície geométrica total de 26,2 mm2 [55] .
3D permite a prototipagem rápida de estruturas complexas com uma
variedade de materiais e resoluções. O design 3D amigável e os
softwares de impressão permitem alterações rápidas de design e Os eletrodos de carbono pirolítico foram fabricados por fotolitografia
otimização do produto. Em comparação com as tecnologias tradicionais com o fotorresistente de epóxi negativo SU 8 seguido de pirólise
de fabricação industrial, como moldagem por injeção e fresagem, a conforme ilustrado na Figura 1. Primeiro, aproximadamente 6 mL de
impressão 3D é a técnica de fabricação mais econômica e acessível SU-8 2035 foram revestidos por rotação em um wafer de silício de 6
para fins de produção em pequena escala, principalmente devido ao polegadas com isolante de óxido de silício de 600 nm camada. O spin
baixo desperdício de matérias-primas coating foi realizado em um spin coater RCD8 (Karl-Süss, Alemanha)
com um ciclo de espalhamento em
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Fig. 1. Representação esquemática da fabricação de eletrodo de carbono pirolítico 3D; (A) resina fotossensível SU-8 revestida por spin em um wafer de
silício com uma camada isolante de óxido de silício; (B) base do eletrodo modelada em SU-8 pela 1ª exposição UV; (C) um spin de camada SU-8 mais
espessa revestida sobre a primeira camada; (D) micropilares modelados no SU-8 espesso pela 2ª exposição UV; (E) SU-8 não exposto removido durante o
desenvolvimento químico; (F) Carbono pirolítico 3D formado após 5 horas de pirólise a 1100 °C; (G) Chumbo de Pt e pad de contato modelado por deposição
de metal através de máscara de sombra; (H) a área do chip de silício, incluindo o chumbo Pt, exceto para o carbono pirolítico e a almofada de contato Pt
passivada por uma fina camada SU-8; (I) Vista superior dos chips de eletrodo após a padronização do carbono pirolítico (à esquerda), deposição da camada
de metal (meio) e padronização da camada de passivação (à direita).
1000 rpm por 10 s a uma aceleração de 200 rpms 1 e um
ciclo de desbaste a 5000 rpm por 120 s usando 1000 rpms 1,

resultando em um filme com espessura de 15 ÿm (Figura 1A).
O SU-8 foi cozido por 15 min a 50 °C em uma placa de
com uma rampa de temperatura de 2 °Cmin do solvente.

seguida, o design 2DWE foi padronizado no wafer revestido
com fotorresistente por exposição UV em um alinhador de
máscara MA6 de 365 nm (Karl-Süss, Alemanha) com uma
Em
10 horas a 50°C (Figura 1D). O fotorresiste SU-8 não
reticulado foi removido por desenvolvimento em PGMEA por
2x40 min (Figura 1E), seguido de enxágue e secagem com
IPA em atmosfera de N2 à temperatura ambiente. Após a
aquecimento programável (Harry Gestigkeit GmbH, Alemanha) secagem, as amostras foram expostas à inundação com a
1 remover 2
de 15 horas
mesma
a 90°C
dosefoiderealizada
4x250 . A
emetapa
mJcmdepara
cozimento
os eletrodos
2D e 3D para endurecer e secar as microestruturas SU-8.
Em seguida, as amostras SU-8 foram pirolisadas por 5 horas
a 1100 °C em atmosfera de N2 em um forno de alta
duro
dose total de exposição de 2x2502 mJcm (Figura 1B).

áreas expostas As
foram temperatura (PEO-04, ATV Technologies, Alemanha) (Figura
reticuladas em um pós-exposição (PEB) semelhante ao soft- 1F) [69]. As microestruturas do SU-8 encolhem durante o
bake (SB), mas com duração de 2 horas. Para o 3DWE, uma processo de pirólise, resultando em pilares de 225 x 1 ÿm de
etapa adicional de fotolitografia SU-8 foi realizada para definir altura com um diâmetro de 68 x 2 ÿm, enquanto a espessura
os micropilares. SU-8 2075 foi dispensado e revestido por do 2DWE foi reduzida para 2 ÿm.
centrifugação (500 rpm, 30 s, 50 rpms) seguido por um SB Após a obtenção do carbono pirolítico, as pontas de metal e as
1 1
por 6 horas a 50 °C (Figura e1C).
1000Umrpm, 60 s, 100
segundo rpm
spin-coating almofadas de contato de 150 nm Pt com uma camada de adesão
de SU-8 2075 foi realizado para obter a espessura final de de 15 nm Ti foram padronizadas por deposição de metal e-beam
aproximadamente 500 ÿm, seguido de um SB por 12 horas. através de uma máscara de sombra (Figura 1G). Finalmente, o
O padrão dos micropilares foi transferido por exposição UV chip de eletrodo completo, exceto o carbono pirolítico WE e as
com uma dose total de 4x250 mJcm usando o alinhador de almofadas de contato de metal, foram passivados por uma camada
máscara seguido de um PEB para SU-8 de 5 ÿm de espessura (Figura 1H). A camada de passivação
2
confina a área de detecção à superfície de carbono pirolítico e ao mesmo tempo
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protege o metal e o carbono da delaminação. A bolacha foi cortada
em 84 chips de eletrodos com uma dimensão de 10 × 16 mm.
2.3 Projeto e Impressão 3D de Células Eletroquímicas
Uma célula eletroquímica impressa em 3D foi usada para

eletrodeposição e caracterização de PB durante a preparação do
eletrodo. A célula eletroquímica permitiu a realização de experimentos
simultâneos em quatro eletrodos de carbono pirolítico e permitiu a
coleta de dados estatísticos de forma eficiente. Foi projetado usando
o software de design 3D Autodesk Fusion 360 e fabricado por
estereolitografia (SLA) usando uma impressora Formlabs3 SLA com
resina transparente. O pós-tratamento incluiu 2 vezes o enxágue dos
objetos impressos em isopropanol fresco por 60 minutos, seguido de
12 horas de imersão em água bidestilada e outras 12 horas de
secagem a 22 °C . O pós-processamento dos objetos impressos foi
concluído pela cura na câmara UV Form Cure a 60°C por 60 min.
A célula eletroquímica impressa em 3D era composta por uma

placa de base, um béquer e uma tampa como as três partes principais
que foram impressos separadamente, conforme mostra a Figura 2A H.
A placa de base contém quatro recortes de 10 mm × 16 mm × 0,6 mm,
onde quatro chips de eletrodo podem ser colocados (Figura 2A-B). 8
furos de parafuso com diâmetro de 2 mm foram incluídos na
circunferência para montar a parte do copo na base usando parafusos
e porcas de 2 mm × 20 mm.
As quatro aberturas circulares dispostas simetricamente no fundo do
béquer definiram quatro poços acima da área de detecção dos
eletrodos (Figura 2C-F). Os poços tinham diâmetro de 6,6 mm e
profundidade de 2,9 mm. No lado inferior do béquer, quatro trincheiras
estreitas contêm aberturas dos poços para acomodar quatro anéis de
borracha (preto) para selar a área de detecção do eletrodo (Figura
2D). O copo tinha um diâmetro interno de 35 mm e uma profundidade
de 37 mm. Um ímã com comprimento de 10–12 mm se encaixa na
área entre os quatro poços no fundo do béquer se for necessária
agitação magnética (Figura 2F). Foi projetada uma tampa com
aberturas para montagem de um contador externo (CE) e um eletrodo
de referência (RE) e para pipetagem de amostras (Figura 2G). A
montagem das três partes com o CE externo e RE é exibida em
Fig. 2. A) Base projetada com quatro entalhes para colocação de cavacos de eletrodos de carbono pirolítico; B) Base impressa em 3D com quatro
chips de eletrodos; C) lado inferior do béquer projetado com quatro aberturas; D) Béquer impresso em 3D com quatro o-rings de borracha para
vedação dos eletrodos; E) vista superior do béquer projetado; F) Béquer impresso em 3D montado na base com os eletrodos por meio de parafusos;
G) tampa projetada para inserção de CE e RE na célula; H) célula eletroquímica montada impressa em 3D com quatro chips de eletrodo conectados
ao potenciostato por micro crocodilos; I) desenho do inserto com duas aberturas para chip de eletrodo e CE planar e duas entradas redondas para
inserção de RE e pipetagem de amostras; J) Inserto impresso em 3D com eletrodos; K) vista superior do inserto com a cavidade; L) micro crocodilos
dentro da cavidade provendo conexão elétrica; M) inserto projetado para caber em um béquer de vidro de 5 mL; N) chip de eletrodo de carbono
pirolítico inserido no copo de vidro com o inserto; O) peça de pé destinada a estabilizar o pequeno copo de vidro durante as medições; P) uma
configuração eletroquímica montada para experimentos de detecção de H2O2 colocados em um agitador compacto e conectados ao potenciostato.
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Figura 2H. Os eletrodos de carbono pirolítico foram conectados ao
potenciostato por micro crocodilos.
Os experimentos reais de detecção de H2O2 foram realizados
com chips de eletrodo único em copos de vidro de 5 mL para
garantir medições independentes. Para imergir o chip do sensor na
solução dentro do copo de vidro, uma inserção foi projetada e
impressa em 3D conforme mostrado na Figura 2I–N. Ele tinha duas
aberturas de 1 mm × 10 mm para o chip do eletrodo de carbono
pirolítico e um Pt CE planar (Figura 2I J). As duas entradas redondas
com diâmetros de 5 mm e 6 mm foram dedicadas ao RE e à
pipetagem de amostras, respectivamente (Figura 2K–L). Micro
crocodilos dentro da cavidade forneciam a conexão entre os
eletrodos e o potenciostato. O inserto foi colocado no copo de vidro
(Figura 2M–N). Uma peça de pé (Figura 2O) foi impressa para
estabilizar o copo de vidro no agitador magnético. A célula
eletroquímica montada em um agitador magnético de tamanho
compacto (IKA) conectado ao potenciostato é retratada na Figura
2P. Múltiplos béqueres de vidro de 5 mL foram usados em paralelo
para medições simultâneas.
2.4 Pré-tratamento e Caracterização do Eletrodo
Os eletrodos de carbono pirolítico fabricados foram enxaguados

com isopropanol e água destilada e secos com gás nitrogênio
comprimido. Em seguida, os eletrodos foram tratados por plasma
de oxigênio em uma câmara de plasma Zepto (Diener Electronic
GmbH, Alemanha) utilizando 40% da potência correspondente a
120 W por 65 s a 0,6 mbar de pressão de oxigênio.
O desempenho eletroquímico dos eletrodos tratados com

plasma foi caracterizado por voltametria cíclica em 10 mM
K3Fe(CN)6/K4Fe(CN)6 em PBS pH 7,4 com potencial entre 0,8/+0,8
V a uma taxa de varredura de 50 mVs. Eletrodos com voltamogramas
cíclicos1sensores.
reprodutíveis
Um foram identificados
potenciostato Multi para a preparação
PalmSens4 de para
foi usado
executar quatro medições eletroquímicas simultâneas. O software
MultiTrace 4.3 foi empregado para a aquisição dos dados. O
tratamento dos dados e a análise estatística foram feitos usando
Excel e OriginPro 2018. Para cada WE, um eletrodo externo Ag/
AgCl em 3 M KCl foi usado como RE, e um chip de silício revestido
com 15 nm Ti e 150 nm Pt em ambos os lados com um área de
superfície imersa total de aproximadamente 200 mm2 foi usada
como CE.
verde/azul após aproximadamente 5 horas porque o K3Fe (CN)6
se degradou em solução ácida. Portanto, os quatro componentes
foram preparados separadamente em água destilada e misturados
na concentração desejada imediatamente antes da eletrodeposição.
A solução de crescimento foi agitada com um ímã durante a primeira
etapa para aumentar a deposição de PB. Na segunda etapa, o filme
PB eletrodepositado foi ativado em uma solução eletrolítica contendo
HCl 0,1 M e KCl 0,1 M por varredura do potencial entre 0,4 e 0,1 V
(começando em 0,4 V) vs. Ag/AgCl a uma taxa de varredura de 50
mVs por 25 ciclos. Como terceiro passo, os eletrodos foram
cuidadosamente lavados com 1
a HCl 0,1por
100°C M e1 ohora
filme
em
convecção. Em seguida, os eletrodos modificados foram
deum
PBforno
foi recozido
condicionados a 6 mV vs. Ag/AgCl por 600 s seguidos de 25 ciclos

entre +0,4/ 0,1 V a 50 mVs em tampão fosfato contendo 0,05 M
K2HPO4/KH2PO4 e 0,1 M KCl com pH ajustado para 5,5 usando
HCl. 1
2.6 Caracterização do Azul da Prússia
Microscopia eletrônica de varredura (SEM Supra, Zeiss, Alemanha)

de
foi usada para inspecionar a integridade dos micropilares fabricados

e do filme de PB depositado na superfície dos eletrodos de carbono
pirolítico. A qualidade eletroquímica do filme de PB após
eletrodeposição foi caracterizada por voltametria cíclica em tampão
fosfato contendo 0,1 M KCl (pH 5,5) na janela de potencial entre
0,1/+0,4 V a uma taxa de varredura de 50 mVs onde a oxidação e
redução do PW /PB ocorre.
usando a seguinte equação [56]:
G¼
Q
nFA
onde Q é a carga obtida pela integração da corrente de pico

1
A cobertura da superfície de PB G no carbono pirolítico foi calculada
catódica Ic dos voltamogramas cíclicos das reações redox PB/PW

(carga consumida para redução de PB), n é o número de elétrons
por célula unitária envolvidos na reação redox que é igual a 4 para
PB/ PW (equação 2) [71], F é a constante de Faraday e A é a área
geométrica do eletrodo. Ao integrar o Ic, o fundo (a corrente
capacitiva) foi subtraído.
(1)
2.5 Eletrodeposição de Azul da Prússia

ðPBÞ KFeIII4 ½FeIIðCNÞ6ÿ3:25 þ 4e þ 4 Kþ $
A modificação da superfície do eletrodo de carbono pirolítico 2D e (2)
3D com PB compreendeu cinco etapas [70], todas realizadas na ðPWÞ K5FeII 4½FeIIðCNÞ6ÿ3:25
célula eletroquímica impressa em 3D em quatro eletrodos
simultaneamente. Na primeira etapa, o PB foi eletrodepositado no Além disso, a espessura t do filme PB foi calculada usando a
carbono pirolítico em uma solução recém-preparada consistindo de equação abaixo [72-74]:
2,5 mM K3Fe(CN)6, 2,5 mM FeCl3, 0,1 M HCl e 0,1 M KCl,
aplicando um potencial constante de 444 mV vs. Ag/AgCl para t ¼ G l 30NA (3)
diferentes tempos de eletrodeposição de 40, 60, 80 e 100 s.
Observou-se que se os componentes da solução de crescimento onde NA é o número de Avogadro e l0 ¼ 1:02 nm é o comprimento
PB fossem misturados e armazenados antes do uso, a cor mudava da célula unitária PB [75]. Finalmente, para detecção de H2O2
de amarelo escuro para
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os eletrodos, que tinham voltamogramas cíclicos reprodutíveis
para reações redox PB/PW foram selecionados.
2.7 Detecção de Peróxido de Hidrogênio
Tampão de fosfato contendo 0,05 M K2HPO4/KH2PO4 e 0,1

M KCl com pH ajustado para 5,5 usando HCl foi usado para
registrar a linha de base. As amostras foram preparadas
diluindo H2O2 (35%) usando o mesmo tampão. As soluções
foram preparadas frescas em vidros escuros e mantidas em
gelo (4 °C) durante os experimentos por no máximo 1 hora
para evitar a degradação do H2O2 devido à luz e temperatura.
A amperometria com um potencial aplicado de 0 V,
determinada a partir dos voltamos gramas cíclicos da reação
redox PB/PW em tampão fosfato pH 5,5 contendo 0,1 M KCl,
foi usada para avaliar a resposta dos sensores de carbono
pirolítico modificado PB 2D e 3D para adição sucessiva de
H2O2 resultando em concentrações de 0,1 a 10 ÿM. Os
experimentos de detecção de H2O2 foram realizados no
copo de vidro de 5 mL com a inserção para imersão do
sensor, bem como o RE e CE em 3 mL de volume inicial de
solução tampão.
A configuração eletroquímica montada foi colocada em um
agitador magnético compacto. A solução de medição foi
agitada durante todo o experimento usando um pequeno ímã
(2 mm × 5 mm). Para cada concentração de analito, a
resposta de corrente média de pelo menos três sensores foi
registrada, os desvios padrão correspondentes foram
calculados e os valores foram usados para construir as
curvas de calibração para sensores 2D e 3D. Para isso, a
resposta atual de cada sensor individual a concentrações
crescentes de H2O2 foi corrigida para a linha de base. Para
cada tipo de sensor, uma equação linear, cuja inclinação
indicava a sensibilidade do sensor, foi ajustada aos pontos
de dados na faixa dinâmica. O limite de detecção (LOD) para
cada tipo de sensor foi calculado por:
LOD ¼
b
3 ÿ SD
(4)
onde SD é o desvio padrão da resposta atual para a menor
concentração de analito e b é a inclinação da regressão
linear y=a
3 Resultados e discussão
+ bx.
3.1 Pré-tratamento e Caracterização do Eletrodo
A transferência de elétrons no eletrodo depende da

condutividade do material do eletrodo e da área de superfície
ativa. Qualquer fonte de contaminação física ou química no
eletrodo influencia negativamente a transferência de elétrons.
Além disso, a energia de superfície e a carga influenciam a
molhabilidade do eletrodo e o transporte de massa das
espécies eletroativas para a superfície do eletrodo. A Figura
3A mostra voltamogramas cíclicos representativos de
eletrodos de carbono pirolítico microfabricados em K3Fe(CN)6/
K4Fe(CN)6 10 mM em PBS pH 7,4 registrados a uma taxa
de varredura de 501plasma
mVs. Antes
de O2do, pré-tratamento comcíclicos
os voltamogramas
dos eletrodos de carbono pirolítico eram planos e nenhum
pico foi observado. Após o pré-tratamento dos eletrodos com
plasma de O2 , os voltamogramas cíclicos para os eletrodos
2D e 3D mostraram picos de oxidação e redução claramente
distinguíveis para o par redox. Mendez-Linan et al. investigou
o efeito de vários tratamentos de plasma nas propriedades
de superfície do carbono pirolítico [76,77]. O plasma de O2
gera uma superfície de carbono altamente ativada, seguida
pela formação de grupos álcool, carbonila e carboxila devido
a reações de oxidação entre os radicais da superfície e os
íons ativos de oxigênio. Isso resulta em maior energia de
superfície e melhor molhabilidade da superfície do carbono.
Além disso, o plasma de O2 remove com eficiência potenciais
contaminantes da superfície do carbono pirolítico. O potencial
formal para a reação redox de K3Fe(CN)6/K4Fe(CN)6 é de
cerca de 230 mV vs. eletrodo de referência Ag/AgCl. As
Figuras 3B e C comparam a corrente de pico anódica Ia e a
separação de potencial de pico ÿEp para carbono pirolítico
2D e 3D, respectivamente. Os eletrodos de carbono pirolítico
3D produzem uma corrente de pico anódica de Ia3D = 480 a
25 ÿA, enquanto o valor para os eletrodos 2D é Ia2D = 260 a
30 ÿA. O aumento observado dos valores atuais com
aproximadamente um fator 2
Fig. 3. A) Voltamogramas cíclicos de eletrodos de carbono pirolítico 2D e 3D tratados com plasma de O2 em K3Fe(CN)6/K4Fe(CN)6 10
1
mM em PBS pH 7,4 obtidos a uma taxa de varredura de 50 mVs; comparação potencial
de B)decorrente
pico ÿEpdepara
picoeletrodos
anódica Ia
deecarbono
C) separação
pirolítico
de2D e
3D (n = 10)
Artigo de Pesquisa
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12
entre os eletrodos 2D e 3D se correlaciona bem com o aumento
correspondente da área de superfície do eletrodo devido à
adição dos 284 micropilares. A Figura 3C mostra que a
separação de potencial de pico médio também aumenta de 200
mV para os eletrodos 2D para cerca de 360 mV para a
configuração 3D. Isso pode ser atribuído a defeitos de tamanho
micro na superfície do eletrodo 3D ou à resistência interna dos
micropilares de carbono.
3.2 Eletrodeposição de Azul da Prússia
A mistura estável de ferricianeto de potássio K3Fe (CN)6 e

FeCl3 tem uma cor amarelada. Se um potencial de cerca de
400 mV vs. Ag/AgCl for aplicado para reduzir o Fe3+ de FeCl3
para Fe2+, cristais de PB são formados na presença de
3 . O PB ou férrico ideal
ferricianeto [Fe (CN)6] ferrocianeto (FeIII 4[FeII(CN)6] 3) célula
unitária cúbica contém átomos de ferro de baixo spin (Fe2+)
coordenados ao carbono e átomos de ferro de alto spin (Fe3+)
coordenados ao nitrogênio (Figura 4A). A estrutura cristalina do
PB possui sítios intersticiais e vacâncias onde os contracátions
e outras moléculas pequenas, como oxigênio e água, podem
ser intercalados.
O PB com e sem íons de potássio (K+) na estrutura cristalina
tem sido comumente definido como a forma solúvel e insolúvel,
respectivamente [45,75]. Na célula unitária PB insolúvel, um
quarto dos sítios de ferrocianeto (FeII(CN)6) estão vagos e
14-16 moléculas de água ocupam os sítios vazios de nitrogênio
do ferrocianeto e as vacâncias intersticiais [75], enquanto na
unidade PB solúvel célula, íons K+
ocupar metade das vagas. A síntese de filme de PB puramente
insolúvel na presença da menor quantidade de íons K+ é
impossível [75]. Além disso, a atividade eletroquímica do filme
PB é aumentada na presença de íons K+ , porque a transferência
de elétrons está fortemente acoplada aos movimentos dos íons
K+ para dentro e para fora do filme PB, que mantêm a
eletroneutralidade do filme durante o redox. processos [78]. O
PW, que é a forma reduzida do PB (Figura 4A), possui atividade
eletrocatalítica para redução de H2O2 em baixo sobrepotencial.
Na célula unitária PW, Fe3+ são substituídos por Fe2+. A
redução da célula unitária do cristal PB para PW é um processo
de quatro elétrons que envolve a absorção de íons K+ por cada
elétron transferido para o filme [71]. Portanto, é essencial obter
a eletrodeposição predominante de cristais de PB
eletroquimicamente ativos da forma solúvel nos eletrodos de
carbono pirolítico.
Neste estudo, o primeiro passo foi a eletrodeposição de

filmes de cristais de PB no carbono pirolítico WE a um potencial
de 444 mV vs. Ag/AgCl para tempos de deposição variáveis. A
presença excessiva de íons K+ na solução de crescimento de
PB deve aumentar a eletrodeposição da forma solúvel.
Além disso, a acidez da solução de crescimento (pH 1-2) é
necessária para evitar a hidrólise de íons férricos e evitar que
os íons hidroxila substituam as pontes de cianeto ocupando as
valências dos átomos de ferro, resultando em filmes de PB
irregulares e instáveis [39]. Experimentos preliminares indicaram
que a colocação horizontal dos eletrodos na célula eletroquímica
impressa em 3D melhorou o eletro PB
Fig. 4. A) Célula unitária PB formada durante a eletrodeposição e a reação redox PB/PW envolvendo quatro íons K+ por interconversão de
célula unitária; B) Voltamogramas cíclicos do filme de PB eletrodepositado nos eletrodos de carbono pirolítico 3D; C) voltamogramas cíclicos
de filmes de PB em eletrodos de carbono pirolítico 3D obtidos em 0,05 M K2HPO4/KH2PO4 contendo 0,1 M KCl em pH 5,5 e uma taxa de
varredura de 50 mVs após 40, 1 60, 80 e 100 segundos de eletrodeposição seguida de ativação, recozimento e estabilização; D)
PB corrente de pico anódica Ia em função do tempo de eletrodeposição para eletrodos 2D e 3D; E) Cobertura superficial estimada do PB ÿ
em carbono pirolítico 2D e 3D em função do tempo de eletrodeposição; F) separação de potencial de pico ÿEp em função do tempo de
eletrodeposição para carbono pirolítico 2D e 3D (n=4).
Artigo de Pesquisa
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12
deposição em comparação com eletrodos individuais imersos
verticalmente em um béquer (informação de suporte S1). Na segunda
etapa da modificação do eletrodo, o filme de PB eletrodepositado foi
ativado para aumentar ainda mais a formação da forma solúvel do
cristal de PB na superfície do eletrodo. Para a ativação do PB, os
íons K+ são essenciais para a compensação de carga durante a
redução do PB para PW e provavelmente para substituir as moléculas
de água na estrutura cristalina. Um aumento gradual nos picos redox
dos voltamogramas cíclicos à medida que o número de ciclos
aumentou de 1 a 25 foi indicativo de um filme de PB totalmente
adsorvido e estável nos eletrodos de carbono pirolítico (informação
de suporte S2). Em comparação, picos redox em declínio e
voltamogramas cíclicos achatados indicaram instabilidade do filme
sintetizado. Esta observação foi considerada como um critério para
identificar sensores de alta qualidade para experimentos posteriores.
Em seguida, as moléculas de água residuais foram evaporadas e o
filme sólido de PB nos eletrodos foi recozido em um forno a 100 °C
por 1 hora. Antes do recozimento do filme, os eletrodos foram
enxaguados suavemente para evitar a cristalização do KCl
remanescente da solução nos eletrodos durante a evaporação das
moléculas de água do filme sintetizado (informações de suporte S3).
Vários estudos [59,70, 79] sugerem o uso de água para enxaguar os
eletrodos modificados com PB antes da secagem. No entanto, flocos
azuis delaminaram da superfície do eletrodo quando o carbono
pirolítico modificado com PB foi enxaguado suavemente com água.
Pelo contrário, a lavagem com HCl 0,1 M com a mesma acidez da
solução de crescimento PB não levou à dessorção do filme da
superfície. Uma razão pode ser a grande diferença de pH entre a
água e o filme de PB recém-crescido, que está em um estado de
transição entre a forma líquida e sólida e ainda não totalmente
adsorvido à superfície do carbono. Finalmente, o condicionamento e
a estabilização do filme de PB recozido em tampão fosfato contendo
excesso de K+ (0,1 M KCl) a pH 5,5 foram conduzidos para melhorar
sua vida útil e qualidade [70].
3.3 Caracterização do Azul da Prússia
A Figura 4B mostra um voltamograma cíclico do filme PB estabilizado

eletrodepositado no eletrodo de carbono pirolítico 3D. O voltamograma
cíclico foi obtido em tampão K2HPO4/KH2PO4 0,05 M contendo KCl
0,1 M em pH 5,5 e velocidade de varredura de 50 mVs. Em 0,1 V vs.
1
Ag/ AgCl, PB é totalmente reduzido a PW, enquanto
acima de em potenciais
0,4 V, o PB é
indicando a adsorção crescente do eletrocatalisador na superfície do
eletrodo (informação de suporte S4).
Os gráficos de barra na Figura 4D exibem a corrente de pico
anódica extraída de sensores 2D e 3D modificados para 40, 60, 80 e
100 segundos. Os valores médios de corrente foram obtidos a partir
de pelo menos quatro voltam mogramas cíclicos estabilizados para
cada tipo de eletrodo e tempo de deposição de PB.
A modificação simultânea de PB de vários eletrodos de carbono
pirolítico na célula eletroquímica impressa em 3D foi altamente
reprodutível, resultando em sensores idênticos. Para ambos os tipos
de eletrodos de carbono pirolítico, a corrente de pico anódico
aumentou com o aumento do tempo de eletrodeposição à medida
que mais PB foi adsorvido.
Independentemente do tempo de deposição, os eletrodos de
carbono 3D produziram correntes maiores que as contrapartes 2D
devido à maior área de superfície dos eletrodos disponíveis para
adsorção de PB. A Figura 4E mostra a cobertura de superfície
calculada para cada tipo de eletrodo e tempo de deposição de PB
variável. A cobertura superficial dos eletrodos aumentou com o
aumento do tempo de eletrodeposição devido à formação de uma
camada de PB mais completa.
Embora esta tendência seja semelhante para eletrodos 2D e 3D, a
estimativa de cobertura de superfície de PB em eletrodos 3D para
diferentes tempos de deposição é ligeiramente maior do que nas
contrapartes 2D. Pode-se especular que as estruturas de carbono 3D
facilitam a adsorção e adesão do PB em comparação com superfícies
de carbono completamente planas. Os valores médios estimados da
espessura do filme eletroquimicamente ativo para os eletrodos 2D
após 40 e 60 s de eletrodeposição foram 0,67 a 0,03 nm e 0,76 a
0,12 nm, respectivamente. Para os eletrodos 3D, esses valores foram
0,77 a 0,02 nm e 1,0 a 0,11 nm. A espessura do filme ativo
atingiu 1,1 a 0,09 nm nos eletrodos 2D e 1,3 a 0,15 nm nos eletrodos

3D após 80 s de eletrodeposição, o que confirma a formação de uma
camada contínua de PB. À medida que o tempo de eletrodeposição
foi aumentado para 100 s, a espessura do filme atingiu 1,41 × 0,05
nm nos eletrodos 2D e 1,48 × 0,11 nm nos eletrodos 3D. O
comprimento da célula unitária PB é l0 ¼ 1:02 nm, indicando que
uma monocamada completa foi formada para um tempo de deposição
de 80 s ou mais.
Em correlação com o aumento das correntes de pico anódicas e
catódicas, maiores separações de potencial de pico ÿEp foram
observadas com o aumento do tempo de eletrodeposição de PB
(Figura 4F). Para os sensores 2D, o maior valor de ÿEp medido para
tempo de deposição de 100 s foi em torno de 90 mV, enquanto para
oxidado a verde de Berlim. os sensores 3D, o ÿEp atingiu um valor de aproximadamente 170
mV. Valores maiores de ÿEp são indicativos de aumento da resistência
Independentemente do tipo de eletrodo e do tempo de eletrodeposição, capacitiva e diminuição da taxa de transferência de elétrons através
o potencial formal para a reação redox do PB/PW no carbono pirolítico da superfície modificada do eletrodo. Karyakin et ai. descobriram que
foi de aproximadamente 200 mV. o término do crescimento de PB em um estágio inicial de nucleação
A Figura 4C representa voltamogramas cíclicos de filmes de PB resultou na formação de nanoestruturas de PB semelhantes a ilhas,
formados em eletrodos de carbono pirolítico 3D após 40, 60, 80 e em vez de um filme contínuo, fornecendo uma grande superfície
100 segundos de eletrodeposição seguido de ativação, recozimento eletrocataliticamente ativa, onde as moléculas de H2O2 podem se
e estabilização. Os dois picos são atribuídos à oxidação e redução difundir e ser reduzidas [39,80-82]. Para eletrodos de carbono
do filme PB/PW adsorvido. Um tempo de eletrodeposição mais longo pirolítico modificados com PB, o aumento de ÿEp para tempos de
resultou claramente em correntes de pico anódicas e catódicas mais deposição prolongados pode ser atribuído à formação de um filme de
altas PB mais contínuo e condensado com propriedades semi-isolantes
Artigo de Pesquisa
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cobrindo gradualmente os poros no material do eletrodo de carbono
e diminuindo a cinética de transferência de elétrons na superfície.
Para os experimentos de detecção de H2O2 , um tempo de deposição
de 80 s foi selecionado como um compromisso entre o aumento das
correntes de pico redox e o aumento da separação de potencial de
pico.
Além da caracterização eletroquímica dos eletrodos modificados
com PB, MEV foi usado para confirmar a adsorção de PB no carbono
pirolítico. A Figura 5A–C mostra os eletrodos de carbono pirolítico 3D
com os micropilares antes da deposição de PB. A rugosidade
intrínseca e a porosidade do carbono pirolítico nu são insignificantes
depositado com sucesso na superfície superior e nas paredes laterais

dos micropilares de carbono pirolítico 3D cobrindo toda a superfície
do eletrodo de maneira conforme.
A estrutura cristalina do PB é claramente visível, resultando em
rugosidade nanométrica. Em alguns casos, rachaduras foram
observadas no filme de PB após o recozimento e estabilização nos
eletrodos 2D e 3D (Figura 5E-F). As trincas ficaram ainda mais
visíveis quando o tempo de deposição foi aumentado para 100 s. Isso
foi atribuído ao estresse intrínseco no filme de PB devido à formação
de cristais e ao estresse extrínseco devido às etapas de recozimento
térmico. Huang e outros. [83] otimizaram a deposição de PB em
eletrodos de ouro nanoporosos e relataram rachaduras aparecendo
na camada de PB e eventualmente delaminação de filmes de PB
mais espessos crescidos com tempo de deposição aumentado.
A desvantagem de tempos de deposição mais curtos (40 a 60

segundos) foi que PB insuficiente foi formado no carbono pirolítico,
enquanto os desafios associados a tempos de deposição mais longos
(100 segundos e acima) foram rachaduras no filme,
aumento da instabilidade, perda da atividade catalítica e diminuição
da reprodutibilidade. Este foi outro fator importante levado em
consideração ao selecionar o tempo de deposição ideal para outros
experimentos de detecção de H2O2 .
Durante o processo de otimização, observou-se que fatores como
i) limpeza e umidade da superfície do eletrodo, ii) a posição dos
eletrodos na solução de crescimento, iii) uma mistura uniforme das
moléculas precursoras durante a eletrodeposição e iv) a O frescor da
solução de crescimento foi prejudicial para a eletrodeposição bem-
sucedida e reprodutível de filmes de PB. Outra observação importante
foi que a secagem da superfície do eletrodo de carbono com nitrogênio
em escala micrométrica (Figura 5A-B) e apenas em escala nanométrica após a caracterização inicial e antes da eletrodeposição era
alguns poros podem ser identificados na superfície do eletrodo (Figura imprescindível para obter filmes de PB estáveis. Para identificar
5C).
A Figura 5D–F mostra a superfície do eletrodo micropilar

modificada com PB com um tempo de deposição de 80 s. O PB foi
eventuais variações e defeitos nos filmes de PB depositados e garantir
uma alta qualidade do sensor, todos os eletrodos de PB modificados
foram sistematicamente caracterizados com voltametria cíclica antes
dos experimentos de detecção de H2O2 .
3.4 Detecção de Peróxido de Hidrogênio
Para a detecção de H2O2 , os sensores preparados com deposição

de PB de 80 s foram testados individualmente em quatro béqueres
de vidro separados (consulte as informações de suporte S5).
Experimentos preliminares demonstraram que o desempenho dos
sensores diminuiu significativamente se as medições de H2O2 fossem
realizadas continuamente por um período prolongado.
Da mesma forma, medições repetitivas realizadas após as etapas
intermediárias de lavagem resultaram na deterioração das
propriedades do eletrodo (consulte as informações de suporte S6).
Infelizmente, as limitações de estabilidade são um problema bem
conhecido para detecção eletroquímica com PB [39,74, 84]. No caso
específico da detecção de H2O2 , o oxigênio na solução, os íons
hidroxila e o próprio analito levam gradativamente à degradação do
PB. Portanto, cada sensor foi usado apenas uma vez imediatamente.
Fig. 5. A–B) Eletrodo de carbono pirolítico 3D nu com micropilares; C) visão aproximada da superfície nua do carbono pirolítico; D–F) superfície
do micropilar modificada com filme de azul da Prússia depositado por 80 s.
Artigo de Pesquisa
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12
imediatamente após o preparo e com duração máxima de 30 min.
Uma primeira série de experimentos foi realizada na faixa de

concentração de H2O2 de 1 a 10 ÿm . Uma resposta
amperométrica típica de eletrodos de carbono 2D e 3D
modificados por PB para concentrações de ÿM de H2O2 é apresentada
A resposta de corrente dos sensores 3D foi consideravelmente
maior que a dos sensores 2D devido à maior área de superfície
dos eletrodos. As curvas de calibração correspondentes de
ambos os tipos de sensores são plotadas na Figura 6B
demonstrando uma boa linearidade na faixa de ÿM (R2=0,98
para os sensores 3D e R2=0,99 para os sensores 2D).
A sensibilidade dos sensores 3D foi de 0,2 ÿAÿM e a
sensibilidade dos sensores 2D foi de 0,1 ÿAÿM se
correlaciona bem com uma área de superfície de eletrodo
aproximadamente duas vezes maior para os eletrodos
micropilares 3D em comparação com a configuração 2D. As
com base nas densidades de corrente foram 763

respectivamente.
1 cm 2 comOs valores quase idênticos após
mAM
1 cm
a
1 enquanto
, 1. este
e 796 ,
2 mAM
normalização
a área do eletrodo confirmaram que toda a
superfície coberta pelo PB contribuiu igualmente para os sinais
registrados. O limite de detecção (LOD) calculado a partir da
regressão linear dos sensores 2D e 3D na faixa de concentração
ÿM foi de 0,46 ÿM e 0,72 ÿM, respectivamente
positivamente. O LOD ligeiramente inferior para os eletrodos de
carbono 2D foi devido a desvios padrão maiores para as
medições com os sensores 3D. O desvio na corrente medida
aumentando gradualmente para injeções contínuas na Figura 6A
pode ser atribuído ao início da desativação e degradação de PB
na Figura
discutidas
solução.
6A. entre outros devido à presença do analito na
acima,
Em uma segunda série de experimentos, a detecção de

H2O2 na faixa de concentração sub-ÿM foi investigada. Nesta
faixa, apenas os sensores 3D responderam à adição sucessiva
de H2O2 conforme ilustrado na Figura 6C. Os resultados da
detecção de H2O2 na faixa sub-ÿM com sensores 2D foram
inconclusivos. Uma curva de calibração na faixa de concentração
sub-ÿM para os sensores 3D é apresentada na Figura 6D,
mostrando uma boa linearidade com 98% de confiança. A
sensibilidade foi de 0,3 ÿAÿM,1,que
determinado
foi semelhante
para os
aosensores
nos experimentos anteriores com concentrações de ÿM. A
valor
sensibilidades correspondentes para eletrodos 3D e 2D calculadas sensibilidade correspondente com base na densidade de corrente
foi de 1145 mAM. O LOD calculado com base na regressão1 cm
ajustada aos pontos de dados obtidos para os sensores 3D na
faixa de concentração de analito sub ÿM foi de 0,16 ÿM. Isso é
comparável com os LODs mais baixos no buffer que foram
relatados para sensores à base de carbono usando exclusivamente
PB como eletrocatalisador de redução de H2O2 sem post adicional
3D
linear.
2
Fig. 6. A) Resposta de corrente amperométrica de eletrodos de carbono pirolítico modificado PB 2D e 3D à adição sucessiva de H2O2 na faixa de
concentração de ÿM; B) curvas de calibração corrigidas da linha de base de sensores 2D e 3D (n=3) na faixa de ÿM; C) resposta de corrente
amperométrica do eletrodo de carbono pirolítico modificado por PB 3D para concentrações sub ÿM de H2O2 em comparação com os sensores
2D; D) curva de calibração de sensores 3D (n=7) na faixa de concentrações sub-ÿM
Artigo de Pesquisa
1
12
etapas do tratamento (ver Tabela 1 e [45]). De acordo com Karyakin
et al., o desempenho analítico dos eletrodos modificados com PB
depende muito das condições hidrodinâmicas nas quais os sensores
são testados [39,81,85].
Os sistemas de análise de injeção de fluxo equipados com uma
célula de fluxo são conhecidos por fornecer as condições
hidrodinâmicas mais estáveis e a maior sensibilidade à medida que
a camada de difusão de Nernst é empurrada para seu limite mais
baixo pela força do jato [81]. Eletrodos de disco de carbono vítreo
modificados por PB (diâmetro de 1,5 mm) no sistema de análise de
injeção de fluxo exibiram uma sensibilidade de 1 cm 2
600 mA M em[86].
fosfato
Teoricamente, a sensibilidade máxima possível limitada pelo
transporte de massa de H2O2 nos eletrodos em um sistema de
análise por injeção em fluxo é de 1000mA M [87] . 1 cm 2
Neste estudo, alcançamos uma sensibilidade comparável para

sensores 2D e 3D em uma configuração de lote agitado, enquanto
os limites de detecção provavelmente poderiam ser melhorados
usando sistemas de análise de injeção de fluxo.
4 Conclusão e Perspectivas Futuras

Apresentamos pela primeira vez um sensor de H2O2 baseado em
Eletrodos de carbono pirolítico 3D foram fabricados usando

tampão
azul da Prússia usando carbono pirolítico como material de eletrodo.
fotolitografia e pirólise. Os processos otimizados de microfabricação

em salas limpas permitem um excelente controle das dimensões das
estruturas 3D com alta reprodutibilidade. A única modificação feita
no carbono pirolítico foi o tratamento com plasma de oxigênio e a
eletrodeposição de PB. Uma célula eletroquímica impressa em 3D
foi projetada e fabricada permitindo modificação de eletrodo
altamente reprodutível com PB em modo de lote em quatro
chips de microeletrodos em paralelo. Enquanto numerosos

pesquisadores combinaram PB com uma modificação adicional,
negro de fumo
sobre carbono
serigrafado
grafeno
impresso em 3D
Amperometria de
injeção de fluxo
amperometria de
injeção em lote
0,2–1000
1–700
(ÿM)
0,01
0,56
por exemplo, com composto de grafeno [83] ou nanopartículas de
metal [91,92] para aumentar a sensibilidade, fomos capazes de
alcançar uma sensibilidade comparável e LOD tão pequeno quanto
0,16 ÿM com eletrodos de carbono pirolítico 3D modificados por PB
sem qualquer modificação adicional do eletrodo. A alta sensibilidade
foi atribuída às microestruturas 3D, que forneceram uma área de
superfície de eletrodo eletrocatalítico maior do que os eletrodos 2D
planos. Considerando a sensibilidade do sensor e a simplicidade da
preparação do sensor em comparação com muitos procedimentos
sofisticados de síntese de eletrocatalisadores, a combinação de
eletrodos de carbono pirolítico 3D e PB é recomendada quando é
necessária alta atividade eletrocatalítica e rápido desenvolvimento
do sensor de H2O2 em modo de lote .
No entanto, a instabilidade inerente do PB especialmente em pH

neutro, que é um problema bem conhecido, persistiu também no
carbono pirolítico quando os sensores foram usados repetidamente.
Uma perda de atividade eletrocatalítica de cerca de 17% em pH 5,5
à temperatura ambiente foi observada dentro de 1 hora de operação
contínua do sensor em solução tampão (informações de suporte
Figura S7). Portanto, o sensor apresentado na configuração atual
não é adequado para medições contínuas ou repetidas, mas sim
para análise de ponto único. No futuro, este desafio pode ser
enfrentado usando, por exemplo, polímeros condutores como
camada protetora ou por co-síntese de taxas de hexacianofer não
ferrosos [93]. Para que os sensores sejam usados em uma matriz
complexa, como um meio celular, o desempenho analítico, incluindo
a sensibilidade, a reprodutibilidade e o LOD, deve ser avaliado.
Tabela 1. Comparação de sensores de H2O2 baseados em carbono recentemente desenvolvidos usando exclusivamente azul da Prússia sem modificações
adicionais. *Para fins de comparação, os valores de sensibilidade foram recalculados pelo autor usando os dados fornecidos nos artigos de referência.
Sensor
Material
Modo de medição Faixa linear (ÿM) LOD Sensibilidade
(mAM
660
57.3
1 cm
2
)
Amostra
Tampão fosfato 0,05 M pH 7,4

contendo KCl 0,1 M Solução
tampão fosfato 0,1 M pH 7,4
contendo KCl 0,1 M Solução
KCl 1 M
Ref.
[61]
[88]
Carbono serigrafado i) Amperometria de estado

estacionário (gota aquosa) ii)
Amperometria de injeção de fluxo i) 5–320 >1,5 i) 19* ii) 2*
periódico (vapor) ii) 40–320 0,11 [62]
grafeno Amperometria de injeção 1–700 87* PBS 0,1 M/KCl 0,1 M, [89]
impresso em 3D em lote agitado pH=7,4 KCl 0,1 M em
diamante dopado Amperometria de 140 tampão fosfato 0,05 M,
com boro injeção de fluxo 330 pH=6,0 [90]
Tela impressa
Grafite
Carbono pirolítico Tampão fosfato contendo KCl 0,1 Este estudo
2D Lote agitado 1–8 0,46 796 M, pH=5,5
3D amperometria 0,3–8 0,16 1145
Artigo de Pesquisa
1
12
Agradecimentos
Este projeto de pesquisa foi cofinanciado pelo Centro de

Tecnologia em Saúde de Copenhague (CACHET), Fundação LEO
e Centro Nacional de Nanofabricação e Caracterização (DTU
Nanolab). Os autores agradecem aos institutos mencionados pelo
apoio financeiro.
Agradecimentos também a Patama Pholprasit, especialista em
processos da DTU Nanolab, por sua gentil ajuda com a obtenção
de imagens SEM na figura 5. A generosa ajuda de Jesper Yue Pan
com a impressão 3D também é muito reconhecida.
Declaração de Disponibilidade de Dados
Os dados relacionados a este estudo serão publicados em um

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411. Publicado online em 12 de outubro de 2021

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Detecção de peróxido de hidrogênio usando microeletrodos

Resumo: Um sensor de peróxido de hidrogênio amperométrico

A detecção de peróxido de hidrogênio (H2O2) é altamente

Palavras-chave: Azul da Prússia · sensor de peróxido de hidrogênio · amperometria · carbono pirolítico

[a] S. Esmail Tehrani, L. Quang Nguyen, G. Garelli, S. Sylvest

Ácido clorídrico (HCl) Reagente ACS 37% Sigma Aldrich, peróxido de

Embora existam numerosos exemplos, onde PB foi eletrodepositado

2.2 Fabricação de Eletrodo de Carbono Pirolítico

Chips de eletrodos com eletrodos de carbono pirolítico em configuração

1000 rpm por 10 s a uma aceleração de 200 rpms 1 e um

ciclo de desbaste a 5000 rpm por 120 s usando 1000 rpms 1,

com uma rampa de temperatura de 2 °Cmin do solvente.

dose total de exposição de 2x2502 mJcm (Figura 1B).

2.3 Projeto e Impressão 3D de Células Eletroquímicas

Uma célula eletroquímica impressa em 3D foi usada para

A célula eletroquímica impressa em 3D era composta por uma

2.4 Pré-tratamento e Caracterização do Eletrodo

Os eletrodos de carbono pirolítico fabricados foram enxaguados

O desempenho eletroquímico dos eletrodos tratados com

condicionados a 6 mV vs. Ag/AgCl por 600 s seguidos de 25 ciclos

2.6 Caracterização do Azul da Prússia

Microscopia eletrônica de varredura (SEM Supra, Zeiss, Alemanha)

foi usada para inspecionar a integridade dos micropilares fabricados

usando a seguinte equação [56]:

onde Q é a carga obtida pela integração da corrente de pico

A cobertura da superfície de PB G no carbono pirolítico foi calculada

catódica Ic dos voltamogramas cíclicos das reações redox PB/PW

2.5 Eletrodeposição de Azul da Prússia

2.7 Detecção de Peróxido de Hidrogênio

Tampão de fosfato contendo 0,05 M K2HPO4/KH2PO4 e 0,1

3.1 Pré-tratamento e Caracterização do Eletrodo

A transferência de elétrons no eletrodo depende da

3.2 Eletrodeposição de Azul da Prússia

A mistura estável de ferricianeto de potássio K3Fe (CN)6 e

Neste estudo, o primeiro passo foi a eletrodeposição de

3.3 Caracterização do Azul da Prússia

A Figura 4B mostra um voltamograma cíclico do filme PB estabilizado

atingiu 1,1 a 0,09 nm nos eletrodos 2D e 1,3 a 0,15 nm nos eletrodos

depositado com sucesso na superfície superior e nas paredes laterais

A desvantagem de tempos de deposição mais curtos (40 a 60

A Figura 5D–F mostra a superfície do eletrodo micropilar

3.4 Detecção de Peróxido de Hidrogênio

Para a detecção de H2O2 , os sensores preparados com deposição

Uma primeira série de experimentos foi realizada na faixa de

com base nas densidades de corrente foram 763

Em uma segunda série de experimentos, a detecção de

Neste estudo, alcançamos uma sensibilidade comparável para

4 Conclusão e Perspectivas Futuras

Eletrodos de carbono pirolítico 3D foram fabricados usando

azul da Prússia usando carbono pirolítico como material de eletrodo.

fotolitografia e pirólise. Os processos otimizados de microfabricação

chips de microeletrodos em paralelo. Enquanto numerosos

No entanto, a instabilidade inerente do PB especialmente em pH

Tampão fosfato 0,05 M pH 7,4

Carbono serigrafado i) Amperometria de estado

Este projeto de pesquisa foi cofinanciado pelo Centro de

Declaração de Disponibilidade de Dados

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[7] MC Ho, VZ Ong, TY Wu, Renewable Sustainable Energy Rev. 2019,

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[35] NR De Tacconi, K. Rajeshwar, RO Lezna, Chem. Mate.