UNIVERSIDADE DA AMAZONIA

FACULDADE DE FARMACIA – BACHARELADO

DISCIPLINA BIOLOGIA MOLECULAR
TURMA: 4NNB

Tais Ariane Dantas Lopes – 04044696

TÉCNICA DE PHAGE DISPLAY

ANANINDEUA-PA
06/12/2021
 O conceito de exposição em fagos, foi introduzido, de forma pioneira, por
George P. Smith, em 1985. Desde que foi descrita, a técnica conhecida por
Phage Display tem sido bastante utilizada dentro da Biologia Molecular. Essa
técnica é utilizada para selecionar os peptídeos, proteínas ou anticorpos in vitro,
a partir de um bacteriófago filamentosos. A metodologia dessa técnica está
baseada a inserção de genes que são capazes de codificar uma grande
variedade de proteínas no de bacteriófagos.

Os bacteriófagos, ou fagos, utilizados no procedimento são os fagos

filamentosos, que pertencem ao gênero Inovirus. Eles são vírus capazes de
infectar enterobactérias, como a Escherichia coli. O fago mais utilizado na
técnica de Phage Design, é o M13, o uso desse tipo de vírus se justifica por
induzir as células a produzir e secretar partículas virais, sem a destruição celular,
gerando assim um maior número de fagos (biblioteca de fagos).

A biblioteca de fagos passa por uma seleção de afinidade, em um

processo chamado de biopannig, que consiste na apresentação da biblioteca as
moléculas-alvo. Nesse processo, a molécula-alvo fica imobilizada em um suporte
sólido (placa de ELISA, placa de imunoensaio, membrana, microesfera, entre
outros). Uma vez apresentados, os fagos que possuem uma forte ligação, ficam
retidos, entretanto os fagos não-aderentes são retirados por sucessivas
lavagens. Os fagos que se ligam fortemente com a molécula, são recuperados
por eluição. Nessa etapa, geralmente são utilizados tampões ácidos ou de
elevada força iônica, sendo capaz de deixar instável as interações entre
proteínas.

A próxima etapa consiste na amplificação dos fagos que sofreram eluição.

Essa amplificação ocorre por meio do cultivo bacteriano. Os fagos são titulados,
e são adicionados (input) e recuperados (output), sendo realizados também
imunoensaios. É necessário realizar em torno de três a cinco ciclos para obter
um quantitativo ideal de output com fagos capazes de expor moléculas com
elevada afinidade pelo alvo-ligante. Por fim, os clones de peptídeos resultantes
desse quantitativos, podem ser sequenciados e analisados, tanto quanto a sua
sensibilidade quanto a sua afinidade. Quando os clones estão na sua forma
solúvel, sem estar fundida a um fago, são destinas a diversas aplicações.

A técnica de Phage Display tem um grande potencial na

biotecnologia, sendo utilizada principalmente na obtenção definir uma proteína
que é reconhecida por um anticorpo, identificar de possíveis regiões de ligação
de receptores bioquímicos, mapeamento do exterior celular e de tecidos,
obtenção de medicamentos, vacinas e inibidores enzimáticos, testes de
imunogenicidade. Apesar de ser uma técnica que tem uma alta afinidade e
especificidade, e ter uma maior facilidade de caracterização, o Phage Display,
possui algumas desvantagens, como um maior custo de produção,
reconhecimento de um só epítopo de um antígeno.

REFERÊNCIAS

NOLL, M. A. Obtenção de anticorpos e peptídeos recombinantes

através de Phage Display para aplicação em imunodiagnóstico.
Dissertação (Mestrado em Processos Biotecnológicos) – Departamento
de engenharia de bioprocessos e biotecnologia, Universidade Federal do
Paraná, p. 138, 2011.

ALMEIDA, G. R. et al. Phage Display e sua aplicação em medicina

veterinária. Enciclopédia biosfera, Centro Científico Conhecer - Goiânia,
v.11 n.22; p. 2015.

SEGUER, J. Peptídeos sintéticos para diagnóstico e imunoprofilaxia

da leishmaniose tegumentar americana. Tese (Pós – graduação em
microbiologia, parasitologia e patologia) – Universidade Federal do
Paraná, p. 186, 2014.