Introduo

Nas aulas tericas, foram transmitidos os conceitos essenciais sobre os diversos

tipos de metabolismo autotrfico (fotossntese e quimiossntese) e heterotrfico. O
experimento Coluna de Winogradsky foi montada antes de termos as aulas tericas,
com o fim de ficar em repouso para posterior anlise.
Objetivo
Observar a coluna de Winogradsky, analisando sua estratificao, os tipos e o
metabolismo dos organismos que vive em cada uma das camadas.
A coluna imita o fundo de um lago ou rio, por exemplo, ambientes de grande
importncia para nossa rea de estudo e onde h o gradiente de oxignio e enxofre e
o desenvolvimento dos organismos analisados.
Mtodos
Para montagem da coluna
Recolhemos folhas secas nas proximidades do Instituo oceanogrfico, as
picamos e misturamos com uma amostra de solo do lago da Biologia. Junto a esse
lodo foi adicionado um sal e ovo como fontes de enxofre.
O material foi colocado at cerca de 2/3 da coluna e pressionado para impedir o
armazenamento de gs O2.
Por fim, completamos com gua o um tero restante, fechamos a coluna e esta
ficou exposta ao sol por cerca de 5 semanas
Anlise da coluna

Aps as 5 semanas, a
coluna
havia
se
estratificado
de
modo
semelhante ao esquema
ao
lado.
Recolhemos
amostras das diferentes
camadas utilizando uma
pipeta
de
Pasteur
e
colocando
o
material
obtido em lminas e
lamnulas para anlise no
microscpio.
Foram
retiradas
no
total
4
amostras:
Da
zona
aerbia superior, da zona
aerbia inferior e 2 da
zona
anaerbia

bactrias
verdes
e
bactrias prpuras.

Resultados experimentais
Observao: as fotos so semelhantes ao que observamos no laboratrio, mas
no foram tiradas por ns.
- Zona aerbia (em contato com ar): Algas e cianobactrias

- Zona microaerfila

Bactrias prpura

As bactrias sulfurosas prpuras tem tipicamente clulas grandes e depositam

Visualizao das
grnulos de enxofre dentro delas (Ex. Thiocapsa)
bactrias verdes e
purpuras do enxofre
na coluna

Thiocapsa roseopersicina
- Zona microaerfila bactrias verdes

Chlorobium limicola

Prosthecochloris aestuarii Pelodictyon clathratiforme

As bactrias sulfurosas verdes so clulas menores e tipicamente depositam o

enxofre externamente. Acima, alguns exemplos.
- Zona anaerbia
Possivel notar a existncia de bactrias redutoras do enxofre, como as
Desulfovibrio sp.

Discusso e anlise
A estratificao foi possvel pois a celulose adicionada na forma de folhas
picadas promove o crescimento microbiano, sendo estas bactrias
quimiorganotrficas, eliminando o oxignio do sedimento e da coluna dgua.
Somente uma fina camada no topo permanece com oxignio, criando portanto um
gradiente do mesmo.
O oposto acontece com o enxofre, que ser usado por bactrias redutoras de
enxofre, como as do gnero Desulfovbrio, que utilizam produtos da fermentao da
celulose e enxofre produzindo grande quantidade de cido sulfdrico. Parte deste
pode reagir com qualquer ferro no sedimento produzindo sulfito ferroso, que preto,
o que explica a coloraes escura da base da colunazona anaerbia). H tambm
formao de bolhas de metano e cido, que puderam ser visualizadas. Entretanto,
um pouco do enxofre difunde para cima da coluna e pode ser utilizado por outros
microrganismos, criando um gradiente de enxofre no sentido oposto ao do oxignio.
Exatamente acima da camada com terra encontram-se bactrias
quimiolitotrficas, isto , que oxidam compostos inorgnicos afim de obterem
energia. Estas bactrias utilizam tambm o cido sulfdrico que produzido na
camada abaixo.
Na zona microaerfila, a difuso do H 2S permite o crescimento de bactrias
fotossintetizantes. Essas bactrias podem ser notadas como duas bandas coloridas
na parte superior do sedimento, so as bactrias sulfurosas verdes e prpuras. Essas
bactrias obtm energia da luz e produzem seus materiais celulares a partir do CO 2
(Eq 1), como as plantas (Eq 2). Contudo, h uma diferena essencial: elas no

produzem O2 durante a fotossntese porque no utilizam a gua como redutora, e

sim H2S.
6CO2 + 12H2S > C6H12O6 + 6H2O + 12S
(equao geral realizada bactrias verdes e prpuras do enxofre)
Em geral,as bactrias purpuras ficam mais prximas do topo da coluna pois
conseguem tolerar maior concetrao de oxignio.
Por fim, h a zona aerbia, onde a concetrao de oxignio grande, uma
camada aquosa onde se concentram algas e cianobactrias, que so organismos
autotrficos fotossintetizantes.
Aps cerca de 3 meses desde a montagem da coluna, foi possivel perceber na
ultima visualizao as camadas citadas acima. Na parte inferior da coluna existia um
seo de colorao escura, onde se encontravam as bactrias responsveis pela
degradao da celulose e as redutores de enxofre, juntamente com as
quimiolitotrficas. Acima desta regio, foi possivel perceber uma grande rea onde
se encontravam as bactrias prpuras e as verdes do enxofre. Ao contrrio do
esperado, no entanto, no observamos uma completa estratificao dessas
bactrias, e sim uma mistura das mesma, estando sem a ordenao bandada
esperada no experimento. Mesmo assim, foi possvel perceber a presena de ambas
as comunidades, mesmo que de modo um tanto espalhado pelo frasco. Por ltimo,
observamos na camadas superior um regio extremamente liquida, isto , sem a
presena de sedimentos em suspenso, em que encontramos seres aerbios fo
tossintetizantes, como cianobactrias, alm de protozoarios, alguns dos quais
puderam ser observados durante a microscopia
da coluna.

Transio da zona anaerbia para a

aqutica microaerfila iluminada

Zona aqutica

microaerfila iluminada

Transio da zona aqutica microaerfila iluminada para a zona

aerbia superior

Coluna de Winogradsky

Coluna de Winogradsky

Docente: Profa. Dra. Vivian Helena Pellizari

Alunas: Beatriz Mattiuzzo e Estela de Almeida Monteiro