1.

Desenhe o primer para parte do gene da hemoglobina humana:

1 ACATTTGCTT CTGACACAAC TGTGTTCACT AGCAACCTCA AACAGACACC ATGGTGCATC
61 TGACTCCTGA GGAGAAGTCT GCCGTTACTG CCCTGTGGGG CAAGGTGAAC GTGGATGAAG
121 TTGGTGGTGA GGCCCTGGGC AGGCTGCTGG TGGTCTACCC TTGGACCCAG AGGTTCTTTG
181 AGTCCTTTGG GGATCTGTCC ACTCCTGATG CTGTTATGGG CAACCCTAAG GTGAAGGCTC
241 ATGGCAAGAA AGTGCTCGGT GCCTTTAGTG ATGGCCTGGC TCACCTGGAC AACCTCAAGG
301 GCACCTTTGC CACACTGAGT GAGCTGCACT GTGACAAGCT GCACGTGGAT CCTGAGAACT
361 TCAGGCTCCT GGGCAACGTG CTGGTCTGTG TGCTGGCCCA TCACTTTGGC AAAGAATTCA
421 CCCCACCAGT GCAGGCTGCC TATCAGAAAG TGGTGGCTGG TGTGGCTAAT GCCCTGGCCC
481 ACAAGTATCA CTAAGCTCGC TTTCTTGCTG TCCAATTTCT ATTAAAGGTT CCTTTGTTCC
541 CTAAGTCCAA CTACTAAACT GGGGGATATT ATGAAGGGCC TTGAGCATCT GGATTCTGCC
601 TAATAAAAAA CATTTATTTT CATTGCAA

5´ ACATTTGCTT CTGACACAAC....... CATTTATTTT CATTGCAA 3´

3´TGTAAACGAA GACTGTGTTG........GTAAATAAAA GTAACGTT 5´

R: Primer Forward: 5´ ACATTTGCTTCTGACACAAC 3´

Primer Reverse: 5´TTGCAATGAAAATAAATG 3´

2. A sequência do cDNA do exercício anterior possui qual tamanho de sequência peptídica?

628 pb/3 x 110 = 23 KDa

3. O que significa cDNA?

É a sequência de DNA respectiva ao RNA que será traduzido em uma sequência peptídica no ribossomo. No
cDNA (DNA codificante) não possui íntrons.

4. Na técnica da PCR não existe uma sinalização para a DNA polimerase parar com a extensão da sequência do
DNA, porém, ao final da técnica, é possível verificar, pelo gel de eletroforese, apenas o fragmento de
interesse. Explique o motivo da amplificação apenas do que queremos.

Na PCR, os primers se ligam na extremidade 3´(final de cada fita do DNA). A polímerase, então, inicia uma
nova fita 5´ (início do gene de interesse), assim começando a polimerização apenas da sequência de
interesse (início). O fim, já é selecionado, pelos primers. Dessa forma só a sequencia de interesse é
amplificada.
 Imagem, Khan Academy

5. Por que o gel de eletroforese está associado com a PCR? Por que é necessário realizar a leitura do gel, sob
uma luz UV?

O gel de eletroforese é importante para visualizar o DNA amplificado. O luz UV é importante, pois o reagente
Bromento de Etídio, que se liga no DNA, brilha na excitação da Luz UV.

6. O mapeamento de restrição de um fragmento linear de DNA revela os seguintes sítios de

restrição EcoRI. Este segmento de DNA é cortado pela EcoRI, os fragmentos resultantes são
separados por eletroforese em gel e o gel é corado com brometo de etídio.

a. Desenhe uma imagem das bandas que aparecerão no gel.

b. E se ocorre uma mutação que altera o sítio 1 de EcoRI neste fragmento de DNA, qual será a
diferença do padrão de bandeamento no gel a partir do que você desenhou na parte a?
c. Se ocorrem mutações que alteram os sítios 1 e 2 de EcoRI neste fragmento de DNA, qual
será a diferença do padrão de bandeamento no gel a partir do que você desenhou na parte a?

7.
5´AATTGGCCGCGCTAAACCCGATT3`
Essa sequencia possui sítio para enzima Cof