CCC aulas práticas

TP1
Técnicas de
citogenética
convencional

Sandra Torres 2018/19

Sandra Torres 2018/19
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 TP2
Cariótipos

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 Translocação Robertsoniana
Ocorre quando os braços longos de quaisquer dois cromossomas
acrocêntricos se unem, produzindo um cromossoma único,
metacêntrico ou submetacêntrico.

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 Síndrome do triplo X
Disjunção na meiose materna com erros.

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Trissomia 21
Causa mais prevalente de atraso
mental de causa genética.
Face caraterística.
EMV elevada.
Cromossoma 21 a mais é
normalmente de origem materna.
Variação com a idade materna.

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Translocação recíproca
Entre cromossomas não
homólogos (neste caso, 5 e 16).

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Duplicação
Segmento cromossómico extra,
resultando também em
desequilíbrio.
Pode ser originada por crossing
over desigual ou segregação
anormal.

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Cromossoma marcador extra

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Deleção
Perda de um segmento
cromossómico resultando em
desequilíbrio.
Pode ser terminal (uma ponta) ou
intersticial (perda de um
segmento inteiro)

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Inversão
Duas quebras e inversão de
segmentos internos a essa região.
Pericêntricas quando um dos
pontos de quebra é no braço
curto e no outro longo (envolve o
centrómero).  com maior risco
de um filho com
malformações/alterações no
fenótipo
Paracêntricas quando os pontos
de quebra são ambos no curto ou
ambos no longo.  sempre
inviáveis

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Excesso de cromatina no braço curto
do cromossoma 22

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Os cromossomos são tratados com
solução de hidróxido de bário e
corados com Giemsa. Com este
método, são coradas regiões
específicas em que o cromossoma
apresenta DNA altamente repetitivo,
como nas regiões dos centrômeros e
em outras regiões cromossômicas
(ex: braço longo do Y e telômeros),
correspondendo à heterocromatina
constitutiva, motivo de sua
denominação.

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TP4
Mitose

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 Na zona média do fuso anafásico até se
Prófase Pró metáfase Cinetocóro Centrossoma
concentrar no corpo médio Microtúbulos

Citocinese

Metáfase Cromossomas
(verde)
Cinetocóro
Telófase (branco = vermelho +
verde + azul)

Anáfase Metáfase

Fim da Anáfase
Cinetocóro
Microtúbulos
(vermelho)

CLASP 1 (verde)–
liga-se ao polo
positivo dos
cromossomas não
ligados
Citocinese Microtúbulos Metáfase Centrossomas
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(vermelhos – mas está amarelo devido à sobreposição com o verde)
TP4
Filamentos
intermediários
(vermelho)

Cinetocoro DNA
(amarelo) (cromossomas - azul)

Centrossomas
(magenta)
Microtúbulos
(verde)

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 Cromatina em
massas
longitudinais que
vão constituir os
cromossomas

Nucléolos (n)
ainda não
desapareceram

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CÉLULA HeLa humanas
Estrutura de um
cinetocóro e respetivos
microtúbulos numa
célula em pro metáfase

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 Centrossomas

CÉLULA HeLa em cultura

Metáfase
Formação da placa
metafásica na região
equatorial da célula e
presença dos
microtúbulos que
constituem o fuso
mitótico.
Presença de 2
centrossomas, 1 em
cada polo do fuso.

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 Centríolos
perpendiculares

Matriz pericentriolar
CÉLULA HeLa em cultura eletronodenso (gama
Maior ampliação de 1 tubulina) 
centrossoma formado importante para
por 2 centríolos polimerização dos
centrómeros

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 Núcleo em anáfase
Cromossomas
constituídos por um só
cromatídeo estão muito
próximos dos polos da
célula em divisão.
Movimento dos
cromossomas é mediado
pela ação dos
microtúbulos que
formam o fuso mitótico.

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Fim da Telófase/ Citocinese

Anel contrátil de
actina
Célula HeLa em cultura
Descondensação da
cromatina e reconstituição do
invólucro nuclear.
Início da clivagem do
citoplasma devido à
contração do anel de
actina/miosina, resultando
no corpo médio.

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 Citocinese

Anel contrátil de actina

Célula HeLa em cultura
Maior ampliação do corpo
médio durante a citocinese.
Notar a alta densidade de
microtúbulos interpolares
antiparalelos e a presença do
corpo estaminal = corpo de
Flemming bastante
eletronodenso.

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 Prófase – massas de cromatina a
condensar em todo o núcleo

Pró metáse – desaparecimento do

invólucro nuclear e do nucléolo; os
ANÁFASE
cromossomas aparecem
individualizados

Metáfase – muito “despenteadas” na

cebola; cromossomas localizam-se na
placa equatorial

Anáfase – sob a forma de cromatídeos;

situam-se nos polos da célula

Telófase – reaparecem os nucléolos

junto dos organizadores núcleolares e
reorganiza-se o invólucro.

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TP5
Meiose

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 1ª DIVISÃO 1) PROFASE I

1 2 3

• Início da meiose • Reconhecimento de cromossomas • Mais importante

• DNA dividido mas cromossomas homólogos começando estes a • Espessamento dos cromossomas com
homólogos ainda finos, em novelo, sem emparelhar total emparelhamento dos homólogos
grande organização • Formação do complexo sinaptonémico • Crossing over, troca de informação
• Regiões mais condensadas – cromómeros essencial para o crossing over genética entre 2 homólogos através
• Quebra da cadeia dupla do DNA com dos pontos de quiasma
formação de regiões de cadeia simples
DIPLÓTENO DIACENESE
• Desaparecimento do complexo sinaptonémico excepto nos pontos de • Etapa de espessamento e encurtamento máximo dos cromossomas na
4 quiasma
5
prófase
• Um par de cromossomas homólogos = bivalentes  constituído por
uma tétrada cromatídea = díada cromossómica

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 Após dissociação do involucro nuclear os cromossomas espessos distribuem-se na placa equatorial
2) METAFASE I com os centrómeros orientados para os polos. Os cromossomas homólogos estão ainda unidos pelos
pontos de quiasma.

Homólogos separam-se; dois cromatídeos de cada cromossoma comportam-se como uma unidade
3) ANAFASE I funcional, ligados através das regiões centroméricas.

Cada célula filha contém metade do nº de cromossomas das células mãe sendo cada cromossoma
4) TELOFASE I duplo, ao contrário da mitose.

Idêntica à mitose; ocorre separação dos 2 cromatídeos de cada cromossoma; no final há núcleos
2ª DIVISÃO com n cromatídeos cada.

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Espermatozoides de rato; Testículo
• Tubos semiíferos
• Periferia – núcleos em diferentes fases da
meiose
• Parte apical – espermátide com acrossoma
justanuclear em forma de crescente
• Espermatozóides – cauda filamentar dirigida
para o centro do tubo, núcleo basófilo,
ovalado ou em bastonete e acrossoma
adjacente

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Ovócitos de cobaia de X; Ovário
• Ovócitos preenchem o órgão em toda a sua
extensão
• Tamanhos variados estando os maiores
rodeados por camadas de células pequenas
com núcleo redondo

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 Célula que
acabou a
segunda
divisão da
Ovócito de rato meiose
com
espermatozoides
à volta
FISH para
cromossomas X,
Y, 13, 18 e 21 do
espermatozoide
Avaliação da
segregação
anormal de
cromossomas
Cromossomas no durante o
interior de desenvolvimento
núcleos de dos
células no espermatozoides
processo de
espermatogénese

Pesquisa de
cromossomas por
FISH
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NÚCLEOS DE OVÓCITOS
DE X. HELLERI EM
ZIGOTENO
• Cromossomas homólogos
começam a ficar
emparelhados
• Alguns cromossomas
apresentam a ponta
tipicamente encostada ao
invólucro nuclear

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NÚCLEOS DE
OVÓCITOS EM
PAQUÍTENO
• Cromossomas
homólogos alinhados
pelo complexo
sinaptonémico que é
composto por 2
componentes laterias
unidos a um
elemento central por
filamentos
transversais
• CSN – estrutura
proteica
• Filamentos
transversais –contêm
DNA

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ESPERMATOZOIDE DE
RATO
• N’ – núcleo muito denso
• Ac’ – capuz cefálico com
acrossoma – na parte ant
do núcleo – contém
enzimas que ajudam a
penetração no óvulo
durante a fecundação
• Ce – colo – papel
importante dos centríolos
na sua formação  C –
centríolo distal forma o
axonema microtubular
• Peça intermédia – com as
suas mitocôndrias na qual
o flagelo apresenta a
estrutura habitual (9 pares
de microtúbulos
periféricos e um par
central)
• FS – bainha fibrosa
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