ARTIGO
Síndrome de Edwards -
Trissomia 18 e técnicas de
diagnóstico
Recebido: 1 de março de 2024
Aceite: 7 de março de 2024
Publicado online: 17 de março de 2024
Abstract
Aneuploidies, and trisomies in particular,
represent the most common genetic
aberrations observed in human genetics
today. Techniques such as DNA
sequencing, PCR, electrophoresis, etc.
have emerged to explore the presence of
trisomies in populations.
In the case of trisomy 18 (Edwards'
syndrome), and in all cases that are
baby or perinatal burials, the
aforementioned techniques are used.
Edwards' syndrome is the second most
common autosomal trisomy observed at
birth and is a disease characterized by a
wide clinical picture and a very poor
prognosis. There are descriptions of more
than 130 different anomalies, which can
involve practically all organs and systems.
21172@alunos.aescas.net
Rafael Gonçalves 12o ano de escolaridade,
Curso Científico-Humanístico de
Ciências e Tecnologias, Agrupamento de
Escolas de Águas Santas, Maia
21172@alunos.aescas.net
Resumo
As aneuploidias, e em particular as
trissomias, representam as aberrações
genéticas mais comuns observadas na
genética humana atual. Para explorar a
presença de trissomias em populações foi
necessário um avanço na tecnologia,
surgindo técnicas como o sequenciamento
do DNA, PCR, eletroforese, etc.
No caso de trissomia 18 (síndrome de
Edwards), e em todos os casos que estão
presentes enterros de bebés ou perinatais
efetuam-se as técnicas mencionadas
anteriormente.
A síndrome de Edwards é a segunda
trissomia autossómica mais
frequentemente observada ao nascimento ,
é uma doença caracterizada por um quadro
clínico alargado e um prognóstico muito
reservado. Existem descrições de mais de
130 anomalias diferentes, que podem
envolver praticamente todos os órgãos e
sistemas.
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Introdução

O anaphase lag é caracterizado pela

Mutações cromossómicas
ocorrência de erros durante a sua
As anomalias podem ser classificadas
migração cromossómica. Neste caso, os
como numéricas ou estruturais. Uma
cromossomas não se associam às fibras
mutação numérica, altera o número de
do fuso acromático comprometendo a
cromossomas, enquanto uma mutação
sua migração. Como resultado do atraso
estrutural altera a estrutura dos
ou inexistência da migração, durante a
cromossomas. (do Seixo, et al., 2018)
anáfase I ou II, o cromossoma afetado
não é incluido no núcleo
Mutações numéricas
recém-formado, ficando ausente numa
As mutação numéricas são a principal
das células-filha. Contrariamente ao que
causa de abortamento e malformações
acontece na não-disjunção, nestes casos
congénitas em humanos.
são produzidos gâmetas com perda de
Aproximadamente 35%-45% dos
cromossomas ou gâmetas normais
abortamentos, 4% dos nados-mortos e
(Angell et al., 1994, Kaiser‐Rogers, 2017).
0,3% dos nados-vivos tem cariótipos
com anomalias cromossómicas
numéricas (Hassold et al., 1996). A
elevada frequência destas anomalias
aliada à alta taxa de mortalidade tornam
imperativo o estudo destas alterações.
As anomalias numéricas podem ser
divididas em dois grupos: euploidias e
aneuploidias. A etiologia deste tipo de
anomalias é extremamente variável e
está principalmente associada a erros
durante a divisão celular, resultando na
segregação anormal dos cromossomas.
(Benn and Hsu, 2004, Hassold and Hunt,
2001, Khandekar et al., 2012).
A segregação anormal poderá ocorrer Fig.1-. (a) A não-disjunção durante a meiose I origina
gâmetas dissómicos e nulissómicos que após fertilização
por dois mecanismos: não-disjunção ou com gâmetas normais, vão originar zigotos trissómicos
anaphase lag. A não-disjunção pode (2n+1) e monossómios (2n-1), (b) a não-disjunção durante
a meiose II origina dois gâmetas normais, um nulissómico
ocorrer durante a meiose I (Figura 1a) ou e um dissómico, que após fertilização podem originar
meiose II (Figura 1b). Durante a meiose zigotos trissómicos, monossómicos ou células diplódes
normais e (c) a não-disjunção mitótica origina duas linhas
I, a não-disjunção dos cromossomas
celulares (trissómica e monossómica). Adaptado de Pierce
homólogos resulta numa migração (2009).
anormal, havendo distribuição desigual
dos cromossomas pelas células-filhas. Quando os erros de segregação ocorrem
Desta forma, uma célula vai albergar durante a meiose nas células gaméticas,
ambos cromossomas homólogos e a o zigoto resultante da fecundação, e
outra ficará desprovida de qualquer todas as células que derivam deste, vão
cópia. Se o erro na disjunção ocorrer partilhar a mesma(s) anomalia(s)
durante a meiose II, os cromatídeos cromossómica(s). Se a má segregação
irmãos não são separados, originando ocorrer durante a mitose pode
uma célula com um cromossoma extra e originar-se um mosaico (Figura 1c).
outra com menos um cromossoma Quanto mais cedo ocorrer o erro
(Kaiser‐Rogers, 2017, Angell et al., 1994). mitótico maior será a extensão do
mosaicismo (Kaiser‐Rogers, 2017).

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Técnicas
PCR
A reação em cadeia da polimerase
(PCR) é uma técnica de laboratório
usada para fazer muitas cópias (milhões
ou bilhões) de uma região específica do
DNA. Esta região do DNA pode ser
qualquer objeto de interesse do
pesquisador. Tipicamente, o objetivo da
PCR é fabricar quantidade suficiente da
região de interesse do DNA, de modo a
que esta possa ser analisada. Assim
como a replicação de DNA, a PCR requer
uma enzima DNA polimerase que faça
novas fitas de DNA usando as existentes
como moldes. A DNA polimerase
tipicamente usada na PCR é chamada de
Taq polimerase, uma bactéria
resistente ao calor da qual ela foi isolada
(Thermus aquaticus). T. aquaticus vive
em fontes termais e de água quente.A
sua DNA polimerase é bastante estável
ao calor e é mais ativa a DNA na direção 5' para 3'. Quando os
70ºC(temperatura em que as DNA
polimerases humanas ou de E. coli
seriam desfuncionais). Esta estabilidade
ao calor torna a Taq polimerase ideal
para PCRs. A alta temperatura é usada
repetidamente na PCR para desnaturar o
DNA molde, isto é, separar suas fitas.
Porém, a Taq polimerase apenas
consegue fabricar DNA quando lhe é
dado um primer (uma sequência curta
de nucleotídeos que fornece um ponto
Fig.2-Ilustração de uma PCR(sem a polimerase)
Adaptado de Khan 2004
de partida para a síntese de DNA.) que
geralmente possuem 20 nucleótidos de
comprimento. Dois primers são usados
para cada reação de PCR, são projetados
de modo a que englobem a região de
interesse (região que deve ser copiada).
Isto é, são dadas sequências que os farão
ligar a fitas opostas do DNA molde nas
extremidades da região a ser copiada. Os
primers ligam-se ao molde por bases
complementares.
Quando os primers são ligados ao
molde, eles podem ser estendidos pela
polimerase, e a região que está entre eles
será copiada.
Ambos os primers, quando ligados,
apontam "para dentro" – isto é, na
direção 5' para 3' rumo à região a ser
copiada. Como outras DNA polimerases,
a Taq polimerase só consegue sintetizar
primers são estendidos, a região que
está entre eles será, assim, copiada.
Fig.3-Ilustração de uma PCR(sem a polimerase)
Adaptado de Khan 2004
Fig.2-Ilustração de uma PCR. Adaptado de Khan
2004
Fig.3-Ilustração de uma PCR(com a polimerase)
Adaptado de Khan 2004
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Etapas (PCR)
Os principais ingredientes de uma
reação PCR são a Taq polimerase,
primers, DNA molde e nucleotídeos. Os
ingredientes são reunidos num tubo,
juntamente com cofatores de que a
enzima precisa, e passam por repetidos
ciclos de aquecimento e arrefecimento
que permitem que o DNA seja
sintetizado.
As etapas são:
1-Desnaturação(96ºC):Aquece
fortemente a reação para separar, ou
desnaturar, as fitas de DNA. Isto
proporciona um molde de fita simples
para a próxima etapa.
2-Ligação(55-65ºC):Arrefece a reação
para que os primers possam ligar-se às
suas sequências complementares no
DNA molde de fita simples.
3-Síntese(72ºC):Eleva a temperatura da
reação para que a Taq polimerase
estenda os primers, sintetizando novas
fitas de DNA.
Fig.4-Etapas da PCR. Adaptado de Khan 2004
Eletroforese
A Eletroforese em gel é uma técnica
usada para separar fragmentos de DNA
(ou outras macromoléculas, como o RNA
e proteínas) com base no tamanho e
carga.
A eletroforese envolve a passagem de
uma corrente através de um gel
contendo as moléculas de interesse. Em
função de seu tamanho e carga, as
moléculas vão se mover através do gel
em diferentes direções ou em diferentes
velocidades, o que permite que sejam
separadas umas das outras. Geles para
separação de DNA são muitas vezes
feitos a partir de um polissacarídeo
chamado agarose. Quando a agarose é
aquecida num tampão (água com alguns
sais) e deixada para arrefecer, forma um
gel sólido ligeiramente mole. No nível
molecular, o gel é uma matriz de
moléculas de agarose que são mantidas
unidas por ligações de hidrogénio e
formam micro poros.
Antes das amostras de DNA serem
adicionadas, o gel deve ser colocado
numa caixa de gel. Uma extremidade da
caixa é ligada a um polo positivo,
enquanto a outra extremidade é ligada a
um polo negativo. O corpo principal da
caixa, onde o gel é colocado, é
preenchido com uma solução tampão
contendo sal que pode conduzir a
corrente. A voltagem típica para o gel de
agarose e o DNA correr é na faixa de
80-120 V. A extremidade do gel com os
poços está voltada para o polo negativo.
A extremidade sem poços (para a qual os
fragmentos de DNA vão migrar) está
voltada para o polo positivo.
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Uma vez que o gel esteja na caixa, cada
uma das amostras de DNA que queremos
examinar (por exemplo, cada reação de
PCR) é cuidadosamente transferida para
um dos poços. Um poço é reservado
para uma escada de DNA, um padrão de
referência que contém fragmentos de
DNA de comprimentos conhecidos. As
escadas de DNA comerciais vêm em
diferentes intervalos de tamanho, então
podemos escolher uma que tenha boa
"cobertura" para a faixa de tamanho
esperada dos nossos fragmentos. A
seguir, a caixa é ligada e a corrente
começa a fluir
através do gel. As moléculas de DNA têm
carga negativa devido aos grupos
fosfato assim elas começam a mover-se
através do gel, para o polo positivo, os
pedaços mais curtos de DNA vão
mover-se através dos poros da matriz de
gel mais rapidamente que os mais
longos. Após o gel ter corrido por algum
tempo, os pedaços mais curtos de DNA
vão estar mais próximos do polo
positivo do gel, enquanto os mais longos
vão permanecer próximos aos poços.
~5000pb = 1-2µm
Fig.7-Visualização dos fragmentos de DNA.
Adaptado de Khan 2004
Síndrome de Edwards
A síndrome de Edwards é uma trissomia
autossómica que afeta 1/8000
nados-vivos, sendo que a incidência
aumenta com a idade materna. Cerca de
90% dos fetos morrem nos primeiros 6
meses de gestação e a sobrevivência
pós-natal é extremamente baixa. A
grande maioria dos casos de síndrome
de Edwards tem um cariótipo 47, XX, +18
ou 47,XY, +18 (Figura.8) e muito
raramente são detetados sob a forma de
mosaico. Devido ao elevado grau de
letalidade o risco de recorrência é
extremamente baixo, aproximadamente
1% (Luthardt and Keitges, 2001).
Pacientes com este síndrome
apresentam diversas dismorfias faciais,
atraso no desenvolvimento, problemas
cardíacos e renais bem como outras
malformações congénitas (Luthardt and
Keitges, 2001)
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Técnicas aplicadas à Síndrome informativo. Quando houver três bandas

A PCR é globalmente utilizada na com a mesma intensidade (1:1:1) ou (2:1)
deteção de aneuploidias. Esta técnica é significa que há a presença de um
capaz de amplificar curtas regiões com cromossoma extra (Fig.9). Dessa maneira
sequências repetidas de DNA altamente é possível detetar por este método a
polimórficas, chamadas short tandem trissomia 18 (Síndrome de Edwards) ;
repeats (STR), em até 48 horas. com este método também é possível
short tandem repeats ou microssatélites detetar aneuploidias dos cromossomos
são sequências de unidades repetidas de sexuais X e Y.
até 6 pares de base em repetições
consecutivas de até 150 pares de base.
Esses polimorfismos possivelmente
foram originados por um mecanismo de
"retro deslizamento" de uma fita 18 filha
sobre a fita molde durante o processo de
replicação do DNA, de modo que a
mesma sequência foi duplicada. Estudos
de hibridização in situ localizaram os
microssatélites em regiões específicas
dos cromossomas. Boa parte localiza-se
próximo aos centrómeros, porém
também podem ser encontradas nas
extremidades cromossómicas
(telómeros) (LODISH et al., 2005). Os
STR encontrados nos cromossomas 18, X
e Y são amplificados, num único ensaio
de PCR , por primers marcados com
fluorocromos capazes de se hibridizar a Fig.9 - Representação gráfica do eletroferograma
adaptado de FAAS et al., 2011.
cadeia de DNA molde no início (5’ ou
foward) e no fim (3’ ou reverse) do Discussão
fragmento de DNA a ser amplificado. Visto estes aspetos, é iminente o
Após a amplificação os produtos da PCR conhecimento mundial destas técnicas
são submetidos a eletroforese capilar em para o combate contra estes problemas
analisador automático gerando bandas inevitáveis. Por isso, são importantes as
de diferentes cores e tamanhos, disciplinas da biologia ou outras
representadas por picos, quando lidas disciplinas associadas a esta área.
por um software apropriado. Este
Conclusão
padrão refletirá o status genético da
Ainda há muito por conhecer acerca de
amostra. Para uma amostra normal
mutações, tanto genéticas como
diplóide, são observadas duas bandas de
cromossómicas, pelo que é necessário
mesma intensidade representadas por
estudantes a formar-se nesta área,
dois picos de tamanhos iguais na razão
porque quantos mais cientistas e
1:1 representativas dos dois alelos
investigadores um laboratório tem, mais
respetivos ao cromossoma estudado;
conhecimento se adquire.
para uma amostra homozigótica, ambos
os alelos terão o mesmo tamanho
representado somente por um pico não

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