4.

Explique el método de absorbancia ultravioleta UV, para determinar concentración de proteína

La concentración de proteína se puede medir directamente, mediante la absorbancia a 280 nm en

un espectrómetro UV. Tanto para cuantificar, como para calificar proteínas, se pueden usar técnicas
de medida directas e indirectas, siendo destacada

 Absorbancia a 280 nm

La mayor parte de las proteínas poseen un pico de absorción máxima a 280 nm. Los grupos
responsables de tal característica son los aminoácidos aromáticos (Tirosina y Triptofano). Las
proteínas poseen coeficientes de extinción molar (E280nm) que puede variar de acuerdo a su
composición aminoacídica entre 0,4-1,5.

Como aproximación se puede considerar que una unidad de absorbancia se corresponde con una
concentración (C) de 1mg/ml de proteinas:

Abs280nm *E280nm = C, si E280nm se considera = 1

Abs280nm ≡ 1 mg/ml

Si la solución de proteínas contiene DNA y/o RNA se introduce un error en la medición, dado que
estos absorben a 280 nm.

Es una técnica analítica que nos permite la determinación de la concentración de un compuesto en

solución la cual se basa en que las moléculas absorben la radiación electromagnéticas y estas a su
vez la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. El método es
espectocrospico porque se basa en la medida de la intensidad y la longitud de onda de la energía
radiante